ПРИМЕНЕНИЕ 1-(4-БРОМФЕНИЛ)-4,4,4-ТРИХЛОРБУТАН-1,3-ДИОНА В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОГРИБКОВОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ ASPERGILLUS FUMIGATUS И ASPERGILLUS NIGER Российский патент 2023 года по МПК C07C49/80 A61K31/12 A61P31/04 

Изобретение относится к области органической химии, к способу получения новых биологически активных веществ класса 1-замещенных 4,4,4-фихлорбутан-1,3-дионов (β-дикетоны), их таутомфам, а именно к 1-(4-бромфенил)-4,4,4-фихлорбутан-1,3-диону (1) и его таутомерам, общей формулы

обладающему противомикробной активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве противогрибкового средства.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 4,4,4-трихлор-1-(4-хлорфенил)бутан-1,3-дион (2), обладающий против о микробной активностью [Патенты RU 258236 С1 (2016); RU 2690009 С1 (2019)] формулы

Эталонами сравнения противомикробной эффективности выбран антибактериальный препарат диоксидин [Падейская Е.Н. Антибактериальный препарат диоксидин: особенности биологического действия и значение в терапии различных форм гнойной инфекции // Инфекции и антимикробная терапия. - 2001. - №. 5. - С. 105-155] и противогрибковый препарат флуконазол [Shilova I.B., Gus'kova Т.А., Glushkov R.G. Modern drugs for treating dermatomycosis // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2004. - T. 38. - №. 4. - C. 175-180.], который широко применяются в лечебной практике и является аналогами по действию. В качестве этанола сравнения противогрибковой активности служил известный в медицинской практике противогрибковый препарат флуконазол, производителя ООО «Озон», Самарская область, г. Жигулевск.

Задачей изобретения является поиск в ряду 1-замещенных 4,4,4-трихлорбутан-1,3-дионов веществ с выраженным противомикробной активностью

Поставленная задача достигается получением 1-(4-бромфенил)-4,4,4-трихлорбутан-1,3-диона, который обладает противомикробной активностью.

Заявляемое соединение (1) синтезируют взаимодействием 4-бром-1-(1,1-диэтокси)бензола и хлорангидридом трихлоруксусной кислоты в присутствии пиридина в среде безводного хлороформа, с последующим кислотным гидролизом:

Технический результат - расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Получение соединения (1). К охлажденному до 0°С раствору 0,13 моль 1-(4-бромфенил)-1,1-диметоксипропана и 0,26 моль пиридина в 40 мл абсолютного хлороформа добавляют при перемешивании раствор 0,26 моль хлорангидра трихлоруксусной кислоты в 30 мл абсолютного хлороформа. Реакционную смесь оставляли при перемешивании на 10-12 часов. По истечению времени добавляли 2М серной кислоты и перемешивали 2 часа при 80°С. Полученную смесь разделяли на делительной воронке, органической слой сушили сульфатом натрия. После удаления растворителя выпавший продукт перекристаллизовывали дважды из тек сана. Выход (86%). Т. пл. 69-71°С. (ИК спектр (ФСМ 1202, вазелиновое масло, v, см-1): 3422 (ОН), 1702, 1646, 1589, 1556 (O=С-С=С), Спектр ЯМР ¹Н, (BrukerAvance III HD (рабочая частота 400 MHz, CDCl₃), δ, м.д.): 6.7 с (1H, =СН), 7.6д (2Н, Ar), 7.8д (2Н, Ar), 14.2 уш. с (1H, ОН). ¹³С ЯМР (100 MHz, CDCl₃): 186.3, 179.4, 132.2, 131.3, 128.5, 128.3, 94.8, 89.7. Найдено, %: С 40.10, Н 2.00. C₁₀H₆C₁₄O₂. Вычислено, %: С 82.04, Н 2.02.

Полученное соединение (1) представляет собой бледно-желтое кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, ацетоне, практически не растворимое воде.

Пример 2. Фармакологическое исследование 1-(4-бромфенил)-4,4,4-трихлорбутан-1,3-дион на наличие противомикробной активности.

Противомикробные свойства заявленного соединения изучали на 8-и коллекционных условно-патогенных штаммах микроорганизмов: Staphylococcus aureus (штамм 906), Escherichia coli (штамм 1257), Salmonella enteriditis (АТСС 5765), Candida albicans, РКПГУ 1353/1277, Candida krusei, РКПГУ 1472/310, Candida glabrata, РКПГУ 1485/47; Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger.

Для исследования противомикробного действия использовали общепринятый метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде микрометодом [Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: И-во Медицина, 2005. - 832 с.].

Готовили исходные разведения тестируемых бактериальных культур в физиологическом растворе из суточной агаровой культуры по оптическому стандарту мутности (ОСО) на 5 ME с использованием денситометра. После ряда разведений конечная концентрация в опыте составляла 2.5×10⁵ клеток/мл. Дрожжевые грибы рода Candida выращивали в пробирках на скошенной агаризированной питательной среде Сабуро в условиях термостата, в течение 48 часов, плесневые грибы рода Aspergillus - 14 суток. После чего разводили в стерильном 0,9% физиологическом растворе, далее готовили микробную нагрузку по оптическому стандарту мутности (ОСО) на 5 ME с использованием денситометра, конечная концентрация клеток в опыте составляла 2.5×10⁵ спор/мл.

В лунках стерильного 96 луночного плоскодонного микропланшета готовили два параллельных ряда двукратных серийных разведений заявленного соединения в бульоне РПБ, Сабуро. В каждой лунке содержалось 150 мкл определенной концентрации испытуемого вещества и 150 мкл инокулята культуры. В последних рядах содержалась питательная среда и культура в равных объемах (контроль). Максимально испытанная концентрация соответствовала 100.0 мкг/мл, минимальная - 0.2 мкг/мл. Факт ингибирования (торможения роста) бактериальных и дрожжевых клеток в разведениях препарата отмечали после 24-х часового термостатирования при 37°С, посевы с плесневыми грибами выращивали в течение 2-х суток в термостате при температуре 28±1°С.

Результаты оценивали с помощью программного обеспечения Gen 5 спектрофотометра для микропланшет Epoch. Последняя лунка ряда с задержкой роста и показателями ОП равной оптической плотности контрольной лунки соответствует минимальной подавляющей концентрацией соединения.

Проведенные исследования показали (см. таблицу 1), что соединение I обладает высокой противомикробной активностью в отношении исследованных культур. Заявленное соединение ингибирует рост бактерий S. aureus и плесневых грибов A. fumigatus, A. niger в концентрации 3,12 мкг/мл, подавляет рост бактерии S. enteriditis и дрожжевых грибов С. albicans, С. krusei, С. glabrata в концентрации 6,25 мкг/мл, что активнее препаратов сравнения.

Исходя из выше изложенного следует, что соединение формулы (1) обладает высокой бактериостатичекой и фунгистатической активностью, в связи с чем может найти применение в фармакологии в качестве потенциального лекарственного средства с противомикробными свойствами.

Настоящее изобретение относится к применению 1-(4-бромфенил)-4,4,4-трихлорбутан-1,3-диона формулы

в качестве средства, обладающего противогрибковой активностью в отношении Aspergillus fumigatus и Aspergillus niger. Технический результат - расширение арсенала средств воздействия на живой организм. 1 табл., 2 пр.

Применение 1-(4-бромфенил)-4,4,4-трихлорбутан-1,3-диона формулы

в качестве средства, обладающего противогрибковой активностью в отношении Aspergillus fumigatus и Aspergillus niger.