КОМБИНАЦИЯ ПРОБИОТИКОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВ Российский патент 2023 года по МПК A61K35/745 A23K10/16 A61P37/08 A61P17/00 

Настоящее изобретение относится к комбинации для лечения или профилактики аллергических расстройств, в том числе пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости, и к композициям и способам, для которых используется данная комбинация.

Аллергические реакции относятся к наиболее распространенным проблемам со здоровьем, влияющим на жизнь пациентов всех возрастов. Аллергические заболевания в настоящее время признаны Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) эпидемическими. В течение последних десятилетий распространенность аллергических реакций стремительно увеличилась. По оценкам, на данный момент аллергией страдает более трети мирового населения, поскольку ее считают новой эпидемией промышленно развитых стран. Причины неуклонного роста аллергических заболеваний до сих пор полностью не изучены. Основным фактором является генетический фон хозяина, и продемонстрирована связь недавно открытых генов с респираторными аллергиями/бронхиальной астмой и кожной симптоматикой. Важную роль в высокой распространенности и более высокой степени аллергических проявлений, по-видимому, также играют экологические факторы, такие как образ жизни, загрязнение окружающей среды, уменьшение размера семьи и снижение микробной стимуляции иммунной системы на раннем этапе жизни вследствие улучшения гигиенической обстановки.

Решающее значение и наибольший интерес представляет аллергическая сенсибилизация в детском возрасте, особенно в раннем детстве и особенно к пищевым аллергенам, поскольку было продемонстрировано, что развитие «аллергического фенотипа» или «атопии» способствует последующей сенсибилизации к другим аллергенам. Таким образом, аллергии в детском возрасте могут быть первой стадией аллергического каскада, приводящего к множественным аллергиям в дальнейшей жизни. Этот процесс обычно называют «атопическим маршем». Например, дети со стойкой пищевой гиперчувствительностью на ранних этапах жизни имеют значительно повышенный риск развития аллергического ринита (сенной лихорадки) или бронхиальной астмы позднее в детстве. Дети с более легкими формами пищевой гиперчувствительности также имеют повышенный риск развития респираторных аллергий, но в меньшей степени, чем дети со стойкой пищевой гиперчувствительностью. Таким образом, снижение степени тяжести пищевой гиперчувствительности может являться решающим фактором для замедления «атопического марша». В этом контексте важнейшее значение имеет лечение случаев аллергии и предупреждение аллергии в детстве и младенчестве.

Иммунная система младенцев активно развивается на протяжении первых нескольких лет жизни. Воздействие на аллергические реакции, их предупреждение, избегание, лечение, уменьшение или модуляция у таких пациентов младшего возраста может влиять на их аллергический профиль не только в краткосрочной перспективе, но и долгосрочно в дальнейшей жизни.

Предупреждение аллергий можно осуществлять на разных уровнях.

«Первичная профилактика» представляет собой эффект предупреждения или снижения риска чувствительности пациентов к аллергенам, который характеризуется отсутствием или понижением концентраций аллерген-специфических антител IgE. Предупреждение или снижение сенсибилизации приведет к отсутствию или уменьшению аллергических симптомов при воздействии того же аллергена. Посредством модуляции механизма чувствительности пациента к одному аллергену или к одной группе аллергенов (первичная профилактика) также можно модулировать последующий аллергический ответ.

«Вторичная профилактика» представляет собой эффект модуляции симптомов аллергий, т.е. возникновения или интенсивности аллергической реакции у пациента, уже сенсибилизированного к одному или нескольким аллергенам, когда пациент подвергается повторному воздействию указанного (-ых) аллергена (-ов). Модуляция возникновения или интенсивности аллергических симптомов (вторичная профилактика) сводит к минимуму дискомфорт, связанный с аллергиями.

Принимая во внимание разные концепции предупреждения аллергии, можно предположить, что в силу присущих им механизмов действия некоторые соединения могут действовать только на одном или на обоих этих специфических уровнях предупреждения. Например, некоторые из них могут только снижать чувствительность к специфическому аллергену (первичная профилактика), тогда как другие соединения могут оказывать влияние только на вторичную профилактику и уменьшать степень тяжести аллергических реакций. Другие соединения могут влиять как на чувствительность, так и на симптомы, и поэтому они эффективно содействуют первичной и вторичной профилактике.

Пищевые аллергены входят в число первых аллергенов, с которыми сталкиваются дети грудного возраста в раннем периоде своей жизни: обычно дети грудного возраста, не получающие исключительно грудное вскармливание, сталкиваются с белками коровьего молока. Молочные белки действительно являются одной из наиболее часто встречающихся причин пищевой аллергии у детей грудного возраста, далее следуют белки яйца и пшеницы. В общем у детей грудного и младшего возраста пищевые аллергии могут проявляться кожными (сыпь, экзема и т.п.) и желудочно-кишечными (колики в животе; боль, особенно в животе; рвота) симптомами. Пищевые аллергии являются наиболее распространенным триггером тяжелых аллергических реакций, которые могут приводить к возникновению угрожающей жизни анафилаксии. Дальнейшая сенсибилизация и случаи аллергий также могут возникать, когда ребенок грудного/младшего возраста получает новый продукт, такой как зерновые, овощи, фрукты, орехи или рыба, а также контактирует с взвешенными в воздухе аллергенами, такими как пыльца, домашние пылевые клещи и перхоть животных. Взрослые главным образом страдают контактной и респираторной аллергиями. Последние данные ВОЗ [Clark, M. J. and. Million, R. P (2009) Allergic rhinitis: market evolution, Nature Reviews, Drug Discovery, 8, p.271–272] указывают на то, что до 30–40% мирового населения страдает какой-либо формой респираторной аллергии.

Животные, в особенности мелкие животные, такие как домашние животные, и в особенности животные-компаньоны, такие как собаки и кошки, также могут страдать пищевыми аллергиями и пищевой непереносимостью, а также реакциями на аллергены окружающей среды. Как правило, они имеют симптомы, сходные с человеческими, например, желудочно-кишечные расстройства, такие как диарея, рвота и дискомфорт в брюшной полости, а также дерматит или зуд. У небольших животных, в частности собак, наиболее частой причиной хронической диареи является пищевая энтеропатия (пищевая энтеропатия или пищевая диарея).

Для лечения астмы, аллергического ринита и других аллергических реакций применяли иммунотерапию. Иммунотерапия может уменьшать клинические симптомы и вызывать толерантность к аллергенам посредством модуляции иммунного ответа. Тем не менее, эффективность иммунотерапии, такой как десенсибилизация, при пищевых аллергических реакциях непостоянна, а при респираторных аллергических реакциях еще меньше. Более того, иммунотерапия может вызывать серьезные системные реакции при использовании в лечении пищевой аллергии, такой как аллергия на орехи.

Для лечения пищевых аллергических реакций применяли исключающие рационы, новые белковые рационы (например, мясо из нетипичных животных источников), гидролизованные рационы питания и пищевую провокацию, но способы лечения, включающие специальные рационы питания, могут быть сложно осуществимы на практике, особенно для долгосрочного применения, и не решают основную проблему. Кроме того, контролировать питание кошки, выходящей на улицу, с помощью исключающей или другой специальной диеты сложно или совершенно невозможно. Оценка результатов пищевой провокации у животного может занимать значительное время, быть трудоемкой, требовать ветеринарного наблюдения, и не всегда осуществима на практике.

Таким образом, по-прежнему сохраняется потребность в разработке новых стратегий лечения или предупреждения аллергий, аллергических реакций и/или симптомов у младенцев, детей и взрослых, а также у животных, в частности у животных-компаньонов (домашних животных), которые также могут страдать пищевыми, ингаляционными или контактными видами аллергии.

Желудочно-кишечная микробиота, целостность кишечного барьера и иммунная система

Симбиотические желудочно-кишечные микроорганизмы являются наиболее ранним и наиболее значимым стимулом для развития ассоциированной с кишечником лимфоидной ткани и связанной с ней иммунной системы.

Эпидемиологические исследования дали убедительные доказательства того, что условия жизни «западного типа», например сниженное употребление ферментированной пищи, применение значительных количеств антибиотиков и других лекарственных средств и улучшение гигиены, связаны с ростом аллергических заболеваний. Это связано с так называемой «гигиенической гипотезой», которая предполагает, что недостаток микробных стимулов в раннем периоде детства является основным фактором, влияющим на распространенность аллергических заболеваний. Эпидемиологические исследования действительно продемонстрировали связь между развитием аллергических заболеваний и нарушением желудочно-кишечной микробиоты. Эпидемологические данные показывают, что дети с атопией имеют кишечную флору, отличную от кишечной флоры у детей без атопии.

Такие изменения в кишечной флоре также могут оказывать отрицательное влияние на целостность кишечного барьера. Нарушение барьерной функции, называемое «синдромом повышенной кишечной проницаемости», давно считается предрасполагающим фактором при заболеваниях желудочно-кишечного тракта (Heyman, M. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 17:1279–1285; Odenwald M,. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology, (2017), (14), 9–21). Таким образом, изменения целостности/функции кишечного барьера имеют множество последствий, способствующих появлению многочисленных заболеваний в зависимости от других совпадений и совокупности генетических и эпигенетических факторов. Пациенты с пищевой аллергией часто демонстрируют повышенную проницаемость кишечника, которая коррелирует с тяжестью клинических симптомов (Ventura, M.T et al. 2006. Dig. Dis. Sci. 38:732–736). Доклинические исследования на животных дали дополнительные подкрепляющие доказательства, подтверждающие роль в нарушении барьерной функции кишечника и повышенной проницаемости кишечника, что предрасполагает к сенсибилизации к веществам, попадающим в пищеварительный тракт, и последующему развитию пищевой аллергии. Кроме того, изменения проницаемости кишечника, вызванные западной диетой, способствуют сенсибилизации к пищевому аллергену и клиническим симптомам аллергии у мышей в ответ на пищевые антигены (Hussain M. et al. J. Allergy Clin. Immunol. (2019). Пробиотики представляют собой одну из попыток улучшения/повышения целостности и/или функции кишечного барьера (Ewashatk JB et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008 Nov;295(5):G1025-34). Таким образом, повышение целостности кишечного барьера путем добавления пробиотиков может предотвращать сенсибилизацию к пероральным аллергенам у подверженных риску субъектов. (Tulyeu J, Microorganisms. 2019 Oct 16;7(10).

Помимо установленной роли барьерной функции кишечника в сенсибилизации к аллергену, неконтролируемые иммунные реакции на пищевые антигены или антигены окружающей среды способствуют развитию иммуноопосредованных аллергических расстройств 2 типа. Культуры или смеси пробиотиков обладают хорошо известными иммуномодулирующими свойствами, способными предупреждать или ослаблять аллергические реакции: : например, в WO2006697949 описана смесь пробиотиков, которая может снизить риск развития аллергий, связанных с альбумином и глобулинами пшеничной муки (целиакия).

Роль противовоспалительных цитокинов в аллергических заболеваниях и непереносимостях

Регуляторные Т-клетки (Treg) имеют решающее значение для индукции толерантности. Считается, что многие хронические воспалительные заболевания, такие как псориаз, аллергии и воспалительное заболевание кишечника, развиваются вследствие нарушения толерантности. Было показано, что неспособность индуцировать активность клеток Treg приводит к нарушению ответов клеток Th2 и развитию аллергического заболевания. В предотвращении и разрешении аллергических реакций играет роль ряд противовоспалительных цитокинов, таких как ИЛ-10. Клетки Treg опосредуют их супрессивную активность, inter alia, посредством секреции противовоспалительных цитокинов, таких как ИЛ-10. ИЛ-10 представляет собой мощный ингибитор функции моноцитов/макрофагов, подавляющий продукцию провоспалительных цитокинов антигенпредставляющими клетками и Т-клетками. ИЛ-10 оказывает сильное противовоспалительное действие. Сообщалось о недостаточной выработке ИЛ-10 альвеолярными макрофагами при атопической астме. Более того, дефицит ИЛ-10 обнаружен при псориазе, аллергическом контактном дерматите, воспалительном заболевании кишечника и других воспалительных заболеваниях. Также было показано, что ИЛ-10 ингибирует вызванное аллергеном воспаление дыхательных путей в животных моделях астмы, и сообщалось о недостаточной выработке ИЛ-10 у больных атопической астмой. В Hadis, U., et al (Immunity (2011), 34(2), 237-246 показано, что у мышей с дефицитом хемокинового (мотив C-X30C) рецептора 1 (CX3CR1) по существу снижена выработка ИЛ-10 в кишечных макрофагах, причем у мышей не наблюдается толерантности при пероральном введении в модели аллергической диареи.

В Tiemessen, M.M, et al., J. Allergy Clin. Immunol. (2004), 113(5), 932-939 обнаружили выработку ИЛ-10 и активацию специфичных для коровьего молока клонов Т-клеток у субъектов без аллергии в сравнении с субъектами с непереносимостью коровьего молока, что указывает на ключевую роль ИЛ-10 в аллергии/непереносимости коровьего молока.

Макрофаги представляют собой тканевые фагоцитарные клетки, происходящие из моноцитов, которые играют важную роль при врожденном иммунном ответе. Их активируют микробные компоненты, и после активации они сами могут секретировать как провоспалительные, так и противовоспалительные цитокины. He, F. и др. ("Stimulation of the Secretion of Pro-Inflammatory Cytokines by Bifidobacterium Strains" - Microbiol. Immunol. (2002), 46(11), 781–785) исследовали способность различных штаммов бифидобактерий влиять на продукцию макрофагальных цитокинов. Они обнаружили, что бифидобактерии у взрослых людей, например Bifidobacterium adolescentis и Bifidobacterium longum, индуцировали существенно больше секреции провоспалительных цитокинов, чем бифидобактерии у младенцев, например Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve и Bifidobacterium infantis. Дополнительно было отмечено, что B. adolescentis, в частности, не стимулирует продукцию противовоспалительного цитокина ИЛ-10. Они пришли к выводу, что бифидобактерии у взрослых людей могут быть более эффективными при амплификации воспалительного ответа, но менее способными к его угнетению. Однако в последнее время попытки определить наиболее перспективные противовоспалительные штаммы пробиотиков для терапевтического применения показали, что таксономическая классификация пробиотика в целом не является надежным прогностическим фактором, например, для противовоспалительных свойств конкретного штамма пробиотика.

Изложение сущности изобретения

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что комбинация двух штаммов пробиотиков, содержащая Bifidobacterium longum и Bifidobacterium lactis, в частности Bifidobacterium longum ATCC CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446, необязательно с Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, может предупреждать индуцированную воспалением проницаемость кишечного барьера и увеличивает выработку или экспрессию противовоспалительных цитокинов, таких как ИЛ-10. Таким образом, комбинации пробиотиков в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве эффективной терапии для лечения или предупреждения аллергических расстройств и/или пищевой непереносимости.

Комбинации пробиотиков по настоящему изобретению можно применять в композициях для лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости.

В настоящем изобретении предложено следующее:

Способ лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости, включающий введение описанной в настоящем документе комбинации пробиотиков субъекту, например, субъекту, страдающему таким расстройством или непереносимостью или восприимчивому к нему.

Комбинация пробиотиков для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости, причем комбинация пробиотиков содержит Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446.

Комбинация пробиотиков может дополнительно содержать Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в настоящем документе, посредством усиления кишечного барьера и повышения целостности кишечного барьера и, более предпочтительно, посредством предупреждения индуцированной воспалением проницаемости кишечного барьера для ограничения сенсибилизации к аллергенам.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в настоящем документе, причем аллергическое расстройство или пищевая непереносимость модулируются противовоспалительными цитокинами, при этом аллергическое расстройство предпочтительно модулируется ИЛ-10; или при этом аллергическое расстройство модулируется регуляторными Т-клетками.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в настоящем документе, причем аллергическое расстройство или пищевая непереносимость модулируются дисбалансом полезных бактерий, таких как бифидобактерии лактобациллы; или при этом аллергическое расстройство или пищевая непереносимость модулируются окислительным стрессом или воспалительными маркерами, такими как C-реактивный белок (СРБ).

Комбинация пробиотиков, описанная в настоящем документе, для снижения или подавления выработки или экспрессии цитокинов Th2, таких как (без ограничения) ИЛ-4 и ИЛ-5, при аллергическом расстройстве и/или пищевой непереносимости; для повышения выработки или экспрессии противовоспалительного цитокина при аллергическом расстройстве и/или пищевой непереносимости, причем противовоспалительный цитокин предпочтительно представляет собой ИЛ-10 и, более предпочтительно, для регуляции соотношений концентраций цитокинов Th1 и Th2 при аллергическом расстройстве и/или пищевой непереносимости; для увеличения популяции полезных бактерий, таких как бифидобактерии и лактобациллы, в кишечнике при аллергическим расстройстве и/или пищевой непереносимости для снижения окислительного стресса или маркеров воспаления, таких как CРБ, при аллергическом расстройстве и/или пищевой непереносимости; для поддержания или стимуляции заживления тканей или для усиления кишечного барьера при аллергическом заболевании и/или пищевой непереносимости; для модулирования регуляторных Т-клеток и/или регуляторных В-клеток при аллергическом расстройстве и/или пищевой непереносимости, предпочтительно для стимулирования активации регуляторных Т-клеток.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в настоящем документе, причем аллергическое расстройство представляет собой пищевую аллергию, респираторную аллергию и кожную аллергию.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в настоящем документе, причем аллергическое расстройство представляет собой ринит, астму, дерматит, атопический дерматит, контактный дерматит, экзему, атопическую экзему, крапивницу, псориаз, эозинофильный эзофагит или эозинофильное/ассоциированное с мастоцитами желудочно-кишечное заболевание.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в настоящем документе, причем аллергеновый триггер при аллергическом расстройстве выбран из одного или более из пищевого аллергена, пылевого клеща, пыльцы, плесени или спор плесени, пыльцы сорняков, пыльцы деревьев, пыльцы трав, блох, шерсти домашних животных или прочих животных, перьев или перхоти домашних животных.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в настоящем документе, причем аллергеновый триггер при аллергическом расстройстве или пищевой непереносимости представляет собой пищевой аллерген, причем предпочтительно пищевой аллерген выбран из ореха, лесного ореха, арахиса, рыбы, моллюсков, ракообразных, молока, яйца, сои, клейковины, зерновых, пшеницы, овса, ячменя, ржи, сельдерея, кукурузы, люпина, сульфитов, кунжута, горчицы, риса, домашней птицы и мяса.

Композиция пробиотиков для применения в соответствии с описанием в данном документе, которая повышает концентрацию или экспрессию противовоспалительного цитокина, и при этом более предпочтительно противовоспалительный цитокин представляет собой ИЛ-10.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в данном документе, в которой субъект представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека или животное-компаньона, причем предпочтительно субъект представляет собой младенца, ребенка, подростка или взрослого человека, собаку, щенка, кошку или котенка.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в данном документе, причем каждый пробиотик в комбинации пробиотиков вводят субъекту в количестве 10⁸–10¹² КОЕ в сутки.

Комбинация пробиотиков для применения в соответствии с описанием в данном документе, которую вводят в форме композиции. Композиция может быть выбрана из группы, состоящей из фармацевтического состава, ветеринарного состава, питательного состава, состава для зондового кормления, пищевой добавки, функционального пищевого продукта, питьевого продукта и продукта для домашних животных.

Композиция, содержащая комбинацию пробиотиков, как описано в настоящем документе, причем комбинация пробиотиков содержит Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446, для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства или для лечения или предупреждения пищевой непереносимости. Указанная комбинация пробиотиков может дополнительно содержать Bifidobacterium longum ATCC BAA-999. Композиция может содержать каждый пробиотик в комбинации пробиотиков в количестве 10⁸–10¹² КОЕ в сутки. Композиция может быть выбрана из группы, состоящей из: фармацевтического состава, ветеринарного состава, питательного состава, состава для зондового кормления, пищевой добавки, функционального пищевого продукта, питьевого продукта и продукта для домашних животных.

Комбинация пробиотиков для применения в производстве композиции для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости, причем комбинация пробиотиков содержит Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446. Указанная комбинация пробиотиков может дополнительно содержать Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

Способ лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости у субъекта, включающий стадию введения указанному субъекту комбинации пробиотиков, причем комбинация пробиотиков представляет собой Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446. Комбинация пробиотиков может дополнительно содержать Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

Описание фигур

Фиг. 1. Продукция цитокинов (ИЛ-10) в мононуклеарных клетках периферической крови, стимулированная различными штаммами пробиотиков и комбинациями.

Фиг. 2. Предупреждение индуцированной воспалением проницаемости кишечного барьера за счет различных штаммов и комбинаций пробиотиков.

Подробное описание изобретения

В настоящем документе используются следующие термины и определения:

В настоящем документе термины «содержащий», «содержит» и «состоящий из» являются синонимами терминов «включающий в себя» или «включает в себя»; или «заключающий в себе» или «заключает в себе», и они являются включающими, или неограничивающими, и не исключают дополнительных неприведенных членов, элементов или стадий. Термины «содержащий», «содержит» и «состоит из» также включают в себя термин «состоящий из».

Термин «младенец» означает ребенка в возрасте до 12 месяцев.

Термин «детская смесь» относится к продукту питания, предназначенному для сбалансированного питания младенцев в случае отсутствия грудного вскармливания в течение первых четырех-шести месяцев жизни, или продукту питания младенцев и в качестве дополнения к другим продуктам питания в возрасте до 12 месяцев. Как правило, термин относится к продукту питания, предназначенному для сбалансированного питания младенцев в отсутствие грудного вскармливания в течение первых четырех-шести месяцев жизни.

«Пробиотик» представляет собой препарат из клеток микроорганизмов или компоненты клеток микроорганизмов, которые оказывают положительное воздействие на здоровье или состояние организма хозяина.

Термин «ребенок» относится к человеку в возрасте более 12 месяцев, но менее 10 лет.

Термин «подросток» относится к человеку в возрасте 10–19 лет (на основании определения Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ)).

Термин «взрослый» относится к человеку в возрасте 20 лет или старше.

Термин «щенок» относится к собаке, которой менее 12 месяцев.

Термин «котенок» относится к кошке, которой менее 12 месяцев.

Если не указано иное, термин «КОЕ» относится к колониеобразующим единицам и измеряется в расчете на массу сухого вещества.

Термин Bifidobacterium longum (B. longum) CNCM I-2618 используется взаимозаменяемо с Bifidobacterium longum (B. longum) NCC2705.

Термин Bifidobacterium lactis (B. lactis) CNCM I-3446 используется взаимозаменяемо с Bifidobacterium lactis (B. lactis) NCC2818.

Термин Bifidobacterium longum (B. longum) ATCC BAA-999 используется взаимозаменяемо с Bifidobacterium longum (B. longum) NCC3001.

Выражение «усиление кишечного барьера» может включать в себя одно или несколько из следующего:

– Более эффективная репарация барьера, например (без ограничений) восстановление целостности желудочно-кишечного барьера, например репарация разорванного барьера, снижение проницаемости после воспалительной провокации слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта и репарация слизистой оболочки.

– Улучшенная матурация барьера, например (без ограничений) матурация и/или развитие барьера у младенца, ребенка, подростка, взрослого, собаки, щенка, кошки или котенка.

– Улучшенная структура барьера, например (без ограничений) укрепление желудочно-кишечного барьера, целостность желудочно-кишечного барьера, структура с плотным соединением клеток и целостность эпителиальной выстилки кишечника.

– Улучшенная барьерная функция, например повышение сопротивления желудочно-кишечного барьера, снижение проницаемости желудочно-кишечного барьера, например снижение проникновения аллергенов из просветных областей в слизистую оболочку, например уменьшение переноса токсичных соединений из просветных областей в слизистую оболочку и уменьшение восприимчивости к заболеванию.

– Улучшенная защита барьера, например (без ограничений) предупреждение нарушения функции барьера, предупреждение проницаемости барьера, защита структуры с плотным соединением клеток, защита целостности эпителиальной выстилки кишечника.

Термины B. longum CNCM I-2618, B. longum CNCM I-2618 и B. longum ATCC BAA-999, как предполагается, включают в себя бактерию, части бактерии и/или питательную среду, ферментированную бактерией.

Каждую из B. longum CNCM I-2618, B. longum CNCM I-2618 и B. longum ATCC BAA-999 можно использовать как живую бактерию, а также как инактивированные неразмножающиеся виды бактерий. Термин «неразмножающийся» означает, что жизнеспособные клетки и/или колониеобразующие единицы не могут быть обнаружены классическими способами посева. Такие классические способы посева кратко представлены в книге по микробиологии: James Monroe Jay, Martin J. Loessner, David A. Golden. 2005. Modern food microbiology. 7th edition, Springer Science, New York, N. Y. 790 p. Как правило, отсутствие жизнеспособных клеток можно показать следующим образом: отсутствие видимых колоний на чашках с агаром или отсутствие мутности в жидкой питательной среде после посева разных концентраций препаратов бактерий («неразмножающиеся» образцы) и инкубации в соответствующих условиях (в аэробной и/или анаэробной атмосфере в течение по меньшей мере 24 ч.).

Предпочтительно, чтобы по меньшей мере часть B. longum CNCM I-2618, B. longum CNCM I-2618 и (при наличии) B. longum ATCC BAA-999 были живыми в комбинации или композиции и предпочтительно живыми попадали в кишечник. Таким образом, они могут сохраняться в кишечнике и быть метаболически активными. Это может повысить их эффективность. Они также могут быть эффективными при взаимодействии с комменсальными бактериями и/или организмом-хозяином. Например, для специальных стерильных пищевых продуктов или лекарственных средств может быть предпочтительно, чтобы B. longum CNCM I-2618, B. longum CNCM I-2618 и (при наличии) B. longum ATCC BAA-999 присутствовали в комбинации или композиции в неразмножающейся форме. Таким образом, в одном варианте осуществления настоящего изобретения по меньшей мере часть B. longum CNCM I-2618, B. longum CNCM I-2618 и (при наличии) B. longum ATCC BAA-999 являются неразмножающимися в комбинации или композиции.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлена комбинация пробиотиков для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости, причем комбинация пробиотиков содержит Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446. Необязательно комбинация пробиотиков может дополнительно содержать Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для применения с целью повышения выработки или экспрессии противовоспалительного цитокина (предпочтительно ИЛ-10) или для регуляции соотношений концентраций противоспалительного цитокина в сыворотке, например, ИЛ-10.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для применения с целью модуляции регуляторных Т-клеток.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости посредством увеличения популяции полезных бактерий, таких как бифидобактерии и лактобациллы, в кишечнике.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости посредством снижения окислительного стресса или воспалительных маркеров, таких как CРБ.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости посредством поддержания или способствования заживлению тканей или повышения целостности и/или усиления функции кишечного барьера.

Комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, предпочтительно предназначена для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости, предпочтительно аллергическое расстройство или пищевая непереносимость модулируются противовоспалительными цитокинами, например ИЛ-10. Аллергическое расстройство или пищевая непереносимость могут представлять собой расстройство, которое может модулироваться ИЛ-10 и/или дифференциацией регуляторных Т-клеток.

В любом аспекте или варианте осуществления настоящего изобретения аллергическое расстройство и/или пищевая непереносимость могут модулироваться дисбалансом полезных бактерий, таких как бифидобактерии и лактобациллы, и/или могут модулироваться окислительным стрессом или воспалительными маркерами, такими как CРБ.

В настоящем изобретении дополнительно предложена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости. Аллергическое расстройство может представлять собой пищевую аллергию, респираторную аллергию или кожную аллергию. Примеры конкретных аллергических расстройств могут представлять собой ринит, астму, дерматит, атопический дерматит, контактный дерматит, экзему, атопическую экзему, крапивницу, псориаз, эозинофильный эзофагит или эозинофильное/мастоклеточно-ассоциированное желудочно-кишечное заболевание.

Комбинация пробиотиков по любому аспекту или варианту осуществления настоящего изобретения может быть предназначена для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства, причем аллергеновым триггером является аллерген окружающей среды, предпочтительно выбранный из одного или более из пылевого клеща, пыльцы, плесени или спор плесени, сорняка, пыльцы дерева, пыльцы травы, блох, шерсти домашних животных, перхоти домашних животных.

Лечение или предупреждение аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости с использованием комбинации пробиотиков по настоящему изобретению предпочтительно включает повышение выработки или экспрессии противовоспалительного цитокина (предпочтительно ИЛ-10).

Субъект, подлежащий лечению, предпочтительно представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека или животное-компаньона (домашнее животное), причем субъект предпочтительно представляет собой ребенка, младенца, подростка или взрослого человека, собаку, щенка, кошку или котенка.

В другом варианте осуществления комбинация пробиотиков предназначена для применения в лечении или предупреждении пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости, причем аллергеновый триггер аллергического расстройства или пищевой непереносимости предпочтительно выбран из ореха, лесного ореха, арахиса, рыбы, моллюсков, ракообразных, молока, яиц, сои, клейковины, зерновых, пшеницы, овса, ячменя, ржи, сельдерея, кукурузы, люпина, сульфитов, кунжута, горчицы, риса, птицы и мяса. В данном варианте осуществления лечение или предупреждение пищевой аллергии или пищевой непереносимости предпочтительно осуществляют у людей.

В альтернативном варианте осуществления комбинация пробиотиков для применения в соответствии с любым аспектом или вариантом осуществления настоящего изобретения предназначена для применения в лечении или предупреждении пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости у животных-компаньонов (домашних животных), предпочтительно собаки или кошки, и более предпочтительно у собаки, у которой аллергеновый триггер аллергического расстройства или непереносимости выбран из мяса, такого как баранина, говядина, птица, свинина; рыбы; ракообразных; кукурузы, риса; пшеницы; картофеля; молока и яиц.

В настоящем изобретении дополнительно предложена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для лечения пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости у кошек или собак.Комбинация пробиотиков предпочтительно имеет форму композиции, более предпочтительно корма для домашних животных (в частности, сухого корма для домашних животных), или питательной добавки для домашних животных, или ветеринарной композиции (в частности, таблетки, капсулы или сухого порошка).

В другом варианте осуществления субъект, подлежащий лечению, представляет собой собаку, щенка, кошку или котенка. В настоящем изобретении дополнительно предложена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для лечения или предупреждения пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости у животного-компаньона, предпочтительно собаки или кошки. Комбинация пробиотиков предпочтительно имеет форму композиции, более предпочтительно корма для домашних животных, питательной добавки для домашних животных или ветеринарной композиции.

В еще одном варианте осуществления субъект, подлежащий лечению, представляет собой ребенка, младенца, подростка или взрослого человека. Таким образом, в настоящем изобретении дополнительно предложена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для лечения или предупреждения пищевой аллергии или пищевой непереносимости у данных субъектов. Комбинация пробиотиков предпочтительно имеет форму композиции, более предпочтительно пищевого продукта, питательной добавки или фармацевтической композиции (в частности, таблетки, капсулы, гранул или сухого порошка).

В любом варианте осуществления настоящего изобретения комбинация пробиотиков может содержать B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 в качестве единственных бактерий-пробиотиков. Комбинация пробиотиков предпочтительно имеет форму композиции, более предпочтительно пищевого продукта, питательной добавки либо фармацевтической или ветеринарной композиции.

В любом варианте осуществления настоящего изобретения комбинация пробиотиков может содержать B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999. В альтернативном варианте осуществления комбинация пробиотиков в соответствии с любым вариантом осуществления настоящего изобретения может содержать B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999 в качестве единственных бактерий-пробиотиков. Комбинация пробиотиков предпочтительно имеет форму композиции, более предпочтительно пищевого продукта, питательной добавки либо фармацевтической или ветеринарной композиции.

Комбинация пробиотиков может иметь форму композиции, описанной в любом варианте осуществления, в котором композиция содержит B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 в качестве единственных бактерий-пробиотиков.Композиция пробиотиков предпочтительно имеет форму пищевого продукта, питательной добавки либо фармацевтической или ветеринарной композиции.

Комбинация пробиотиков может иметь форму композиции, описанной в любом варианте осуществления, в котором композиция содержит B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999 в качестве единственных бактерий-пробиотиков. В альтернативном варианте осуществления комбинация пробиотиков может иметь форму композиции, описанной в любом варианте осуществления, в котором композиция содержит B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999 в качестве единственных бактерий-пробиотиков. Композиция пробиотиков предпочтительно имеет форму пищевого продукта, питательной добавки либо фармацевтической или ветеринарной композиции.

Можно применять любую подходящую дозу комбинации пробиотиков. Предпочтительно в любом варианте осуществления настоящего изобретения комбинация пробиотиков содержит B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержит B. longum ATCC BAA-999, причем каждый пробиотик вводят субъекту в количестве 10⁷–10¹² КОЕ в сутки.

Хотя пробиотические компоненты комбинации можно применять без дополнительной обработки, комбинацию пробиотиков в соответствии с любым вариантом осуществления настоящего изобретения предпочтительно вводят в форме композиции. Подходящие композиции содержат B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно включают в себя B. longum ATCC BAA-999 в форме фармацевтического или ветеринарного состава, содержащего один или более фармацевтически или ветеринарно приемлемых эксципиентов, питательный состав (например, включающий в себя пищевую добавку), состав для зондового кормления, пищевую добавку, функциональный пищевой продукт, питьевой продукт и продукт для домашних животных (например, корм для домашних животных или пищевую добавку для домашних животных).

Фармацевтический или ветеринарный состав может иметь форму таблетки, капсулы, гранул или порошка.

В соответствии с любым вариантом осуществления настоящего изобретения композиция может содержать количество каждого пробиотика, равное 10⁷–10¹² КОЕ в сутки. Данное количество может представлять собой либо стандартную дозу, либо распределенным на несколько доз.

Также предложена комбинация пробиотиков, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, для применения в производстве композиции для применения в лечении или предупреждении аллергического расстройства, например пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости.

В настоящем изобретении дополнительно предложен способ лечения или предупреждения аллергического расстройства, например, пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости у субъекта, включающий стадию введения указанному субъекту комбинации пробиотиков, причем комбинация пробиотиков содержит B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержит B. longum ATCC BAA-999.

Комбинация пробиотиков настоящего изобретения, содержащая B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 и необязательно дополнительно содержащая B. longum ATCC BAA-999, может быть предложена для одновременного или последовательного введения каждого из пробиотиков. В альтернативном варианте осуществления комбинация пробиотиков может представлять собой состав в виде единой композиции.

Комбинацию пробиотиков, содержащую Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-2446 и необязательно необязательно дополнительно содержащую B. longum ATCC BAA-999, можно вводить в виде композиции (например, капсулы, таблетки, гранул или порошка), содержащей, например, 10⁷–10¹² колониеобразующих единиц (КОЕ) каждого пробиотического компонента, или можно включать в питательную композицию, такую как диетически полноценная смесь (например, детская смесь или продукт клинического питания), молочный продукт, порошкообразный напиток, сухой суповой концентрат, диетическая добавка, заменитель пищи, питательный батончик, зерновые, кондитерское изделие или сухой корм для домашних животных.

В одном варианте осуществления комбинация может иметь форму единой капсулы, содержащей как B. longum CNCM I-2618, так и B. lactis CNCM I-2446, или единой капсулы, содержащей B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-2446 и B. longum ATCC BAA-999.

В альтернативном варианте осуществления комбинация может быть предложена в виде отдельных капсул, содержащих B. longum CNCM I-2618 в одной капсуле и B. lactis CNCM I-2446 в другой капсуле, для одновременного или последовательного введения; или комбинация может быть предложена в виде отдельных капсул, содержащих B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-2446 и B. longum ATCC BAA-999, в качестве отдельных капсул для одновременного или последовательного введения.

При включении в питательную композицию каждая из B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446, и необязательно B. longum ATCC BAA-999 может присутствовать в композиции в количестве, эквивалентном 5 x 10⁴–10¹⁹ КОЕ/г (масса в сухом состоянии). Данные выражения количества учитывают возможности использования живых, инактивированных или мертвых бактерий, или даже бактерий, присутствующих в виде фрагментов, таких как ДНК или материал клеточных стенок, либо в виде метаболитов. Иными словами, количество бактерий выражается в колониеобразующей способности этого количества бактерий, которая проявлялась бы, если бы все бактерии были живыми, независимо от того, являются ли они фактически живыми, инактивированными или мертвыми, фрагментированными или представляющими собой смесь в любом или всех этих состояниях. Предпочтительно каждая из B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999 (при наличии) присутствует в количестве, эквивалентном 5 х 10⁴–10⁹, более предпочтительно 10⁷–10⁹ КОЕ/ г сухой композиции.

В вариантах осуществления настоящего изобретения, в которых комбинация пробиотиков дополнительно содержит B. longum ATCC BAA-999, B. longum ATCC BAA-999 может присутствовать либо в той же композиции, либо в отдельной композиции для одновременного или последовательного введения. Например, в вышеописанных капсулах B. longum ATCC BAA-999 можно заключить в капсулы с B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446, причем каждая капсула содержит 10^{7 –} 10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ) каждого штамма. Аналогично композицию, содержащую B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999, можно включить в питательную композицию, такую как диетически полноценная смесь (например, детская смесь или продукт клинического питания), молочный продукт, порошкообразный напиток, сухой суповой концентрат, пищевую добавку, заменитель пищи, питательный батончик, зерновые, кондитерское изделие или сухой корм для домашних животных.

Каждую из B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 можно культивировать любым подходящим способом и готовить для инкапсуляции или добавления к питательной композиции, например путем сушки сублимацией или распылительной сушки. В альтернативном варианте осуществления их можно приобрести уже готовыми, в подходящей форме для добавления в пищевые продукты.

ATCC BAA-999 доступна в продаже и может быть получена от компании Morinaga Milk Industry Co. Ltd., Япония, под товарным знаком BB536. Ее можно культивировать любым подходящим способом и готовить для инкапсуляции или добавления к питательной композиции, например путем сушки сублимацией или распылительной сушки. В альтернативном варианте осуществления ее можно приобрести уже готовую, в подходящей форме для добавления в пищевые продукты.

Диетически полноценная смесь для применения в настоящем изобретении может содержать источник белка, предпочтительно пищевой белок, такой как животный белок (например, молочный, мясной или яичный белок), растительный белок (например, соевый, пшеничный, рисовый или гороховый белок); смеси свободных аминокислот; или их комбинации. Особенно предпочтительными являются молочные белки, такие как казеин и сывороточный белок, и соевые белки. Композиция может также содержать источник углеводов и источник жира.

Если смесь включает в себя источник жира, он предпочтительно обеспечивает от 5% до 55% энергетической ценности смеси; например, от 20% до 50% энергетической ценности. Липиды, составляющие источник жиров, могут представлять собой любой подходящий жир или смесь жиров. Особенно подходят растительные жиры, такие как соевое масло, пальмовое масло, кокосовое масло, сафлоровое масло, подсолнечное масло, кукурузное масло, масло канолы и лецитины. При желании также можно добавлять животные жиры, такие как молочный жир.

Если смесь включает в себя источник углеводов, он предпочтительно обеспечивает от 40% до 80% энергетической ценности смеси. Можно применять любой подходящий углевод, например сахарозу, лактозу, глюкозу, фруктозу, сухой кукурузный сироп, мальтодекстрины и их смеси. При желании также можно добавлять пищевое волокно. Пищевое волокно может происходить из любого подходящего источника, включая, например, сою, горох, овес, пектин, гуаровую камедь, аравийскую камедь, фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды, сиалиллактозу и олигосахариды, полученные из молока животных. В питательную смесь можно включать подходящие витамины и минеральные вещества в количестве, соответствующем руководящим указаниям.

Композиции настоящего изобретения могут дополнительно включать пребиотик. Пребиотики, как правило, не перевариваются в том смысле, что они не расщепляются и не всасываются в желудке или тонком кишечнике и, таким образом, остаются в нативном виде при переходе в толстый кишечник, в котором их селективно ферментируют полезные бактерии. Примеры пребиотиков включают в себя конкретные олигосахариды, такие как фруктоолигосахариды (FOS), инулин, ксилоолигосахариды (XOS), полидекстроза или любая их смесь. В конкретном варианте осуществления пребиотики могут представлять собой фруктоолигосахариды и/или инулин. Примером является комбинация 70% короткоцепочечных фруктоолигосахаридов и 30% инулина, зарегистрированная компанией Nestlé под товарным знаком «Prebio 1».

При желании в питательную смесь можно включать один или более пищевых эмульгаторов; например сложные эфиры диацетилвинной кислоты и моно- и диглицеридов, лецитин и моно- или диглицериды. Аналогично можно включать подходящие соли и стабилизаторы.

Диетически полноценную смесь можно приготовить любым подходящим способом. Например, источник белка, источник углеводов и источник жира можно смешивать вместе в соответствующих пропорциях. В случае использования в смесь можно включать эмульгаторы. На данной стадии можно добавлять витамины и минеральные вещества, но обычно их добавляют позднее во избежание термического разложения. Перед смешиванием в источнике жира можно растворять любые липофильные витамины, эмульгаторы и т.п. Затем можно домешивать воду, предпочтительно очищенную обратным осмосом, с образованием жидкой смеси.

После этого жидкую смесь можно подвергать термической обработке для снижения бактериальных нагрузок. Например, жидкую смесь можно быстро нагревать до температуры в диапазоне от приблизительно 80°C до приблизительно 110°C в течение от приблизительно 3 секунд до приблизительно 5 минут. Это можно осуществлять путем нагнетания пара или с помощью теплообменника; например пластинчатого теплообменника или трубчатого теплообменника.

Затем жидкую смесь можно охлаждать до температуры в диапазоне от приблизительно 60°C до приблизительно 85°C; например, путем резкого охлаждения. После этого жидкую смесь можно гомогенизировать; например, в две стадии под давлением от приблизительно 10 МПа до приблизительно 30 МПа на первой стадии и от приблизительно 2 МПа до приблизительно 10 МПа на второй стадии. Затем гомогенизированную смесь можно дополнительно охлаждать для добавления любых термочувствительных компонентов; таких как витамины и минеральные вещества. На данной стадии для удобства стандартизируют уровень рН и содержание твердых веществ в гомогенизированной смеси.

Гомогенизированную смесь можно затем переносить в подходящий сушильный аппарат, такой как распылительная сушилка или сублимационная сушилка, и превращать в порошок. Влагосодержание порошка должно составлять менее около 5 мас.%. B. longum CNCM I-2618, и/или B. lactis CNCM I-3446, и/или B. longum ATCC BAA-999 можно добавлять к порошку в желаемом количестве путем сухого смешивания.

Сухой корм для домашних животных для применения в настоящем изобретении может включать в себя любой один или более из источника углеводов, источника белка и источника липидов.

Можно использовать любой подходящий источник углеводов. Предпочтительно источник углеводов предоставляют в виде зерновых, муки или крахмалов. Например, источником углеводов может быть рисовая, ячменная, сорговая, просяная, овсяная, кукурузная мука или пшеничная мука. Также можно использовать простые сахара, такие как сахароза, глюкоза и кукурузные сиропы. Количество углеводов, обеспечиваемое источником углеводов, можно выбирать по желанию. Например, корм для домашних животных может содержать до приблизительно 60 мас.% углевода.

Подходящие источники белка можно выбирать из любого подходящего источника животного или растительного белка; например мышечное или скелетное мясо, мясо-костная мука, куриная мука, рыбная мука, молочные белки, кукурузная клейковина, пшеничная клейковина, соевая мука, концентраты соевого белка, изоляты соевого белка, яичные белки, молочная сыворотка, казеин, клейковина и т.п. Для пожилых животных предпочтительно, чтобы источник белка содержал высококачественный животный белок. Количество белка, обеспечиваемое источником белка, можно выбирать по желанию. Например, корм для домашних животных может содержать от приблизительно 12 мас.% до приблизительно 70 мас.% белка в пересчете на сухое вещество.

Корм для домашних животных может содержать источник жира. Можно использовать любой подходящий источник жира. Предпочтительно источником жира является источник животного жира, такой как твердый жир. Также можно применять растительные масла, такие как кукурузное масло, подсолнечное масло, сафлоровое масло, рапсовое масло, соевое масло, оливковое масло и другие масла с высоким содержанием мононенасыщенных и полиненасыщенных жирных кислот. Дополнительно к незаменимым жирным кислотам (линолевой и альфа-линолевой кислоте) источник жира может включать в себя длинноцепочечные жирные кислоты. Приемлемые длинноцепочечные жирные кислоты включают в себя гамма-линолевую кислоту, стеаридоновую кислоту, арахидоновую кислоту, эйкозапентановую кислоту и докозагексановую кислоту. Рыбьи жиры являются подходящим источником эйкозапентановых кислот и докозагексановой кислоты. Масло бораго, масло семян черной смородины и масло первоцвета вечернего являются подходящими источниками гамма-линолевой кислоты. Рапсовое масло, соевое масло, льняное масло и масло грецкого ореха являются подходящими источниками альфа-линоленовой кислоты. Сафлоровые масла, подсолнечные масла, кукурузные масла и соевые масла являются подходящими источниками линолевой кислоты. Оливковое масло, рапсовое масло (канола), подсолнечное масло с высоким содержанием олеиновой кислоты, сафлоровое масло, арахисовое масло и масло рисовых отрубей являются подходящими источниками мононенасыщенных жирных кислот. Количество жира, обеспечиваемое источником жира, можно выбирать по желанию. Например, корм для домашних животных может содержать от приблизительно 5 мас.% до приблизительно 40 мас.% жира в пересчете на сухое вещество. Предпочтительно корм для домашних животных содержит относительно небольшое количество жира.

Выбор источников углеводов, белка и липидов не имеет особого значения, и их выбирают на основании потребности животного в питании, вкусовых предпочтений и типа производимого продукта. Дополнительно в корм для домашних животных по желанию можно также включать различные другие ингредиенты, например сахар, соль, специи, приправы, витамины, минеральные вещества, вкусоароматические вещества, камеди и пробиотические микроорганизмы.

Для пожилых домашних животных корм для домашних животных предпочтительно содержит пропорционально меньше жира, чем корма для домашних животных, предназначенные для более молодых домашних животных. Дополнительно источники крахмала могут включать в себя одно или более из овса, риса, ячменя, пшеницы и кукурузы.

Корм для домашних животных можно получить путем варочной экструзии, хотя можно использовать запекание и другие подходящие способы. В случае варочной экструзии корм для домашних животных обычно предлагают в форме гранул. Пробиотические компоненты могут предпочтительно наносить на сухой корм для домашних животных или помещать в него. Подходящий способ описан в заявке на европейский патент № 0862863.

Комбинацию пробиотиков по настоящему изобретению и ее композиции можно применять для лечения, контроля или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости у субъектов, имеющих аллергическое расстройство или пищевую непереносимость, или у субъектов, восприимчивых к аллергическому расстройству или пищевой непереносимости (например, у субъектов, имеющих в анамнезе атопию).

Как правило, композиция может быть выбрана из группы, состоящей из пищевой композиции, композиции корма для домашних животных, диетической добавки, нутрицевтика, питательной смеси, напитка и/или лекарственной композиции.

Примерами пищевых композиций, которые применимы к настоящему изобретению, являются йогурты, молоко, ароматизированное молоко, мороженое, готовые к употреблению десерты, порошки для ресуспендирования, например молоком или водой, шоколадные молочные напитки, солодовые напитки, готовые к употреблению блюда, быстрорастворимые блюда или напитки для людей либо пищевые композиции, представляющие собой полноценный или частичный рацион, предназначенный для домашних животных или сельскохозяйственного скота. Следовательно, в одном варианте осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением представляет собой пищевой продукт, предназначенный для людей, домашних животных или сельскохозяйственного скота, и предпочтительно для людей и домашних животных. В предпочтительном варианте осуществления композиция представляет собой пищевой продукт или диетическую добавку, предназначенную для людей (младенца, ребенка, подростка или взрослого) или животных-компаньонов (домашних животных) (предпочтительно собаки, щенка, кошки или котенка).

Композиция настоящего изобретения может дополнительно содержать защитные гидроколлоиды (такие как камеди, белки, модифицированные крахмалы), связующие вещества, пленкообразующиие агенты, инкапсулирующий (-ие) агент (-ы) / материал (-ы), материалы стенок/оболочек, соединения матриц, покрытия, эмульгаторы, поверхностно-активные вещества, солюбилизирующие вещества (масла, жиры, воски, лецитины и т.п.), адсорбенты, носители, наполнители, вспомогательные соединения, диспергирующие агенты, смачивающие агенты, технологические добавки (растворители), антислеживающие агенты, маскирующие вкус агенты, утяжеляющие агенты, желирующие агенты, гелеобразующие агенты, антиоксиданты и противомикробные вещества. Композиция также может содержать традиционные фармацевтические добавки и вспомогательные вещества, эксципиенты и разбавители, включая, без ограничений, воду, желатин любого происхождения, растительные камеди, лигнинсульфонат, тальк, сахара, крахмал, аравийскую камедь, растительные масла, полиалкиленгликоли, ароматизирующие агенты, консерванты, стабилизаторы, эмульгирующие агенты, буферы, смазывающие вещества, красители, смачивающие агенты, наполнители и т.п. Во всех случаях такие дополнительные компоненты выбирают с учетом их пригодности для целевого потребителя.

Композиция может представлять собой диетически полноценную смесь. Композиция в соответствии с настоящим изобретением может включать в себя источник белка.

Можно использовать любой подходящий пищевой белок, например животные белки (такие как молочные белки, мясные белки и яичные белки); растительные белки (такие как соевый белок, пшеничный белок, рисовый белок и гороховый белок); смеси свободных аминокислот; или их комбинации.

Белки могут быть нативными или гидролизованными, либо они могут представлять собой смесь нативных и гидролизованных белков. Может быть желательно вводить частично гидролизованные белки (степень гидролиза от 2 до 20%), например людям и/или животным, подверженным риску развития аллергии на коровье молоко.

Кроме того, источники предварительно гидролизованного белка обычно легче расщепляются и абсорбируются поврежденным желудочно-кишечным трактом.

При необходимости использования гидролизованных белков процесс гидролиза можно проводить по желанию и способом, известным в данной области. Может быть желательно вводить частично гидролизованные белки (степень гидролиза от 2 до 20%).

Например, гидролизат белка молочной сыворотки можно приготовить ферментативным гидролизом фракции молочной сыворотки за один или более этапов. Если фракция молочной сыворотки, применяемая в качестве исходного материала, по существу, не содержит лактозы, установлено, что в процессе гидролиза блокировка лизина белка проявляется в гораздо меньшей степени. Это позволяет снизить степень блокировки лизина с около 15 мас.% общего лизина до менее около 10 мас.% лизина; например около 7 мас.% лизина, что значительно улучшает питательное качество источника белка.

Композиция может также содержать источник углеводов и источник жира. Если композиция включает источник жира, источник жира предпочтительно обеспечивает от 5% до 40% энергетической ценности композиции; например, от 20% до 30% энергетической ценности. Подходящий профиль жира можно получить с использованием смеси масла канолы, кукурузного масла и подсолнечного масла с высоким содержанием олеиновой кислоты.

В композицию можно добавлять источник углевода.

Источник углеводов предпочтительно обеспечивает от 40% до 80% энергетической ценности композиции. Можно применять любой подходящий углевод, например сахарозу, лактозу, глюкозу, фруктозу, сухой кукурузный сироп, мальтодекстрины и их смеси. При желании также можно добавлять пищевое волокно. Пищевое волокно проходит через тонкий кишечник не расщепленное ферментами и выполняет функцию натурального наполнителя и слабительного средства. Пищевое волокно может быть растворимым или нерастворимым, и обычно предпочтительной является смесь двух типов. Подходящие источники пищевого волокна включают в себя сою, горох, овес, пектин, гуаровую камедь, частично гидролизованную гуаровую камедь, аравийскую камедь, фруктоолигосахариды, кислые олигосахариды, галактоолигосахариды, сиалиллактозу и олигосахариды, полученные из молока животных. Предпочтительная смесь волокон представляет собой смесь инулина и фруктоолигосахаридов с более короткой цепочкой. В случае присутствия волокна предпочтительно, чтобы содержание волокна составляло от 2 до 40 г/л композиции при потреблении, более предпочтительно от 4 до 10 г/л.

Композиция может также содержать минеральные вещества и микроэлементы, такие как следовые элементы и витамины, в соответствии с рекомендациями государственных органов, такими как рекомендуемые нормы потребления (RDA) США. Например, композиция может содержать один или более из следующих микроэлементов на суточную дозу в указанных диапазонах: от 300 до 500 мг кальция, от 50 до 100 мг магния, от 150 до 250 мг фосфора, от 5 до 20 мг железа, от 1 до 7 мг цинка, от 0,1 до 0,3 мг меди, от 50 до 200 мкг йода, от 5 до 15 мкг селена, от 1000 до 3000 мкг бета-каротина, от 10 до 80 мг витамина С, от 1 до 2 мг витамина В1, от 0,5 до 1,5 мг витамина В6, от 0,5 до 2 мг витамина В2, от 5 до 18 мг ниацина, от 0,5 до 2,0 мкг витамина B12, от 100 до 800 мкг фолиевой кислоты, от 30 до 70 мкг биотина, от 1 до 5 мкг витамина D, от 3 до 10 мкг витамина Е.

При желании в композицию можно включать один или более пищевых эмульгаторов; например сложные эфиры диацетилвинной кислоты и моно- и диглицеридов, лецитин и моно- и диглицериды. Аналогично можно включать подходящие соли и стабилизаторы.

Композиция может быть предназначена для перорального и/или энтерального введения; например в форме порошка для разбавления с молоком или водой.

Композиции вводят в количестве, достаточном для по меньшей мере частичного лечения или подавления симптомов аллергического расстройства или пищевой непереносимости и их осложнений. Количество, достаточное для достижения этой цели, определяют как «терапевтически эффективную дозу». Количества, эффективные для этой цели, будут зависеть от ряда факторов, известных специалистам в данной области, например от тяжести заболевания и веса, и общего состояния пациента.

В профилактических сферах применения композиции в соответствии с настоящим изобретением вводят пациенту, склонному или иным образом подверженному риску конкретного заболевания, в количестве, достаточном для того, чтобы по меньшей мере частично снизить риск развития заболевания. Такое количество определяется как «профилактически эффективная доза». Аналогичным образом точные количества зависят от ряда специфичных для пациента факторов, таких как состояние здоровья и вес пациента.

Как правило, каждую из B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и (при наличии) B. longum ATCC BAA-999 вводят в терапевтически эффективной дозе и/или в профилактически эффективной дозе.

Если B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и (при наличии) B. longum ATCC BAA-999 присутствуют в жизнеспособной форме, теоретически она является эффективной в любой концентрации, учитывая тот факт, что эти бактерии могут колонизировать кишечник и размножаться. Для композиций настоящего изобретения обычно предпочтительно, чтобы суточная доза композиции содержала 10⁴–10¹² КОЕ каждого из пробиотических агентов. Конкретная подходящая суточная доза каждого из пробиотиков составляет от 10⁸ до 10¹² КОЕ.

В случае инактивированных и/или неразмножающихся B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и (при наличии) B. longum ATCC BAA-999 обычно предпочтительно, чтобы композиция настоящего изобретения содержала 10²–10¹² неразмножающихся клеток Bifidobacterium longum ATCC BAA-999 на грамм массы композиции в сухом состоянии. Конкретная подходящая доза каждого из пробиотиков составляет от 10³ до 10¹² неразмножающихся клеток, более предпочтительно от 10⁵ до 10⁸ неразмножающихся клеток на грамм массы композиции в сухом состоянии.

Очевидно, что неразмножающиеся микроорганизмы не образуют колоний, следовательно, термин «клетки» следует понимать как количество неразмножающихся микроорганизмов, которое получено из указанного количества размножающихся бактериальных клеток. К ним относятся инактивированные, нежизнеспособные, мертвые микроорганизмы или микроорганизмы, присутствующие в виде фрагментов, таких как ДНК или материалы клеточных стенок.

Композиция настоящего изобретения может быть представлена в форме порошка, имеющего активность воды менее 0,2, например в диапазоне 0,19–0,05, предпочтительно менее 0,15.

Композиция может представлять собой порошок длительного хранения. Низкая активность воды обеспечивает такую стабильность при хранении и гарантирует, что пробиотические микроорганизмы останутся жизнеспособными даже после длительного хранения.

Активность воды, или a_w, — это мера энергетического состояния воды в системе. Она определяется как давление пара воды, разделенное на давление пара чистой воды при той же температуре; поэтому чистая дистиллированная вода имеет активность воды, точно равную единице.

Дополнительно или в альтернативном варианте осуществления пробиотический микроорганизм B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и (при наличии) B. longum ATCC BAA-999 могут быть предложены в инкапсулированной форме.

Было обнаружено, что инкапсуляция бактерий имеет терапевтические и технические преимущества. Инкапсуляция повышает выживаемость бактерий и, таким образом, количество живых бактерий, которые поступают в кишечник. Кроме того, бактерии высвобождаются постепенно, обеспечивая длительное воздействие бактерий на здоровье субъекта. Бактерии могут быть микроинкапсулированы, например как описано в публикации FR2443247 (Société des Produits Nestlé), включенной в настоящий документ путем ссылки. Вкратце бактерии можно подвергать сушке сублимацией или распылительной сушке и включать в гель.

Настоящее изобретение будет дополнительно описано со ссылкой на приведенный ниже пример.

Пример

Получение бактерий.

За день до анализа три выбранных бактериальных штамма из коллекции культур Nestlé, NCC 3001, 2818 и 2705, культивировали в 10 мл среды MRS с добавлением цистеина в течение 16 ч. при 37°C в анаэробных условиях.

Бактериальные культуры центрифугировали при 5000 об./мин в течение 5 мин (комнатная температура). Бактериальный осадок суспендировали в холодном фосфатно-солевом буфере (PBS) (10 мл). Оптическую плотность каждой бактериальной культуры измеряли при 600 нм. Было задано, чтобы отрегулированные бактериальные препараты в культуральной среде RPMI имели 5 x 10⁶ КОЕ/мл и 1 x 10⁷ КОЕ/мл согласно проведенному до исследования подсчету колониеобразующих единиц на селективной агаровой среде, который подтвердил соответствие ОП и КОЕ.

Получение мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC).

PBMC, выделенные от трех здоровых доноров, промывали один раз в PBS. После центрифугирования при весе 500 г в течение 5 минут клеточный осадок суспендировали в 2 мл RPMI + 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Клетки подсчитывали и регулировали препараты для получения 2 x 10⁶ клеток/мл.

Стимуляция PBMC бактериями.

PBMC высевали в 12-луночный культуральный планшет (500 μл), затем добавляли бактериальные препараты (500 μл). Совместные культуры инкубировали в течение 24 ч при 37°C в атмосфере 10% CO₂.

Для анализов на цитокины супернатанты центрифугировали в течение 5 минут при весе 500 г и переносили в новую пробирку. Образцы хранили при -20°C до проведения оценки. Цитокин ИЛ-10 измеряли посредством твердофазного ИФА (ИЛ-10 ELISA, R&D Systems, Миннесота).

Оценка проницаемости кишечного барьера

Клетки Caco-2 и HT-29-MTX сокультивировали в 12-луночных культуральных планшетах на полистироловых фильтрующих вставках в соотношении 3 : 1. После дифференцировки (14 дней) совместные культуры преинкубировали с бактериальными препаратами (5 x 10⁶) в течение 24 ч перед базолатеральной стимуляцией с ФНОα (0,6 нг/мл) и ИФНγ (2,5 нг/мл) для изменения целостности барьера (контроль). Трансэпителиальное электрическое сопротивление (ТЭЭС) измеряли через 16 ч, чтобы количественно оценить индуцированные воспалением изменения проницаемости барьера, представленные в виде процентного увеличения ТЭЭС по сравнению с контролями, обработанными ФНОα/ИФНγ.

Результаты показаны на фиг. 1 и фиг. 2. Как четко показано на фиг. 1, неожиданно было обнаружено, что комбинация B. longum CNCM I-2618 и B. lactis по настоящему изобретению эффективна для увеличения выработки противовоспалительного цитокина ИЛ-10 (фиг. 1).

На фиг. 1 дополнительно показан неожиданный синергетический эффект в увеличении продукции противовоспалительного цитокина ИЛ-10 при использовании тройной комбинации B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999 настоящего изобретения.

Как четко показано на фиг. 2 и в соответствии с настоящим изобретением, неожиданно было обнаружено, что B. longum CNCM I-2618 и B. lactis CNCM I-3446 эффективны для предупреждения индуцированной воспалением проницаемости барьера по сравнению с отдельными штаммами или комбинациями двух штаммов. Тройная комбинация B. longum CNCM I-2618, B. lactis CNCM I-3446 и B. longum ATCC BAA-999 в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения также демонстрирует способность предупреждать индуцированное воспалением нарушение барьера (фиг. 2), хотя и в меньшей степени.

Группа изобретений относится к лечению или профилактике пищевой аллергии и/или пищевой непереносимости. Раскрыт корм для домашних животных, включающий комбинацию пробиотиков для лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости у животных компаньонов, где корм для домашних животных содержит гранулированный корм и комбинацию пробиотиков, нанесенную на корм или помещенную в него, причем комбинация пробиотиков содержит Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446. Также предложены применение комбинации указанных пробиотиков в производстве корма для домашнего животного и способ лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости у животного-компаньона. Комбинация указанных пробиотиков увеличивает продукцию противовоспалительного цитокина ИЛ-10 и эффективна для предупреждения индуцированной воспалением проницаемости кишечного барьера. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 пр.

1. Корм для домашних животных, включающий комбинацию пробиотиков для лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости у животных компаньонов, где корм для домашних животных содержит гранулированный корм и комбинацию пробиотиков, нанесенную на корм или помещенную в него, причем комбинация пробиотиков содержит Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446.

2. Корм для домашних животных по п. 1, где комбинация пробиотиков дополнительно содержит Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

3. Корм для домашних животных по п. 1 или 2, где аллергическое расстройство и/или пищевая непереносимость модулируются противовоспалительными цитокинами, при этом аллергическое расстройство или пищевая непереносимость предпочтительно модулируется ИЛ-10; или при этом аллергическое расстройство или пищевая непереносимость модулируется регуляторными Т-клетками.

4. Корм для домашних животных по любому из пп. 1-3, где аллергическое расстройство и/или пищевая непереносимость модулируются дисбалансом полезных бактерий, таких как бифидобактерии и лактобациллы, и/или при этом аллергическое расстройство модулируется окислительным стрессом или воспалительными маркерами, такими как С-реактивный белок (СРБ).

5. Корм для домашних животных по любому предшествующему пункту, где аллергическое расстройство представляет собой пищевую аллергию, респираторную аллергию или кожную аллергию.

6. Корм для домашних животных по любому предшествующему пункту, где аллергическое расстройство представляет собой: ринит, астму, дерматит, атопический дерматит, контактный дерматит, экзему, атопическую экзему, крапивницу, псориаз, эозинофильный эзофагит или эозинофильное заболевание желудочно-кишечного тракта.

7. Корм для домашних животных по любому предшествующему пункту, где комбинация пробиотиков повышает концентрацию или экспрессию противовоспалительного цитокина, и при этом более предпочтительно противовоспалительный цитокин представляет собой ИЛ-10.

8. Корм для домашних животных по любому предшествующему пункту, где комбинация пробиотиков действует путем усиление кишечного барьера и повышение целостности кишечного барьера у животного компаньона, потребляющего комбинацию пробиотиков, например, посредством предупреждения индуцированной воспалением проницаемости кишечного барьера у животного компаньона, принимающего комбинацию, для ограничения сенсибилизации к аллергену.

9. Корм для домашних животных по п. 8, где усиление кишечного барьера выбрано из группы, состоящей из: предупреждения нарушения функции индуцированного воспалением кишечного барьера, снижения проницаемости кишечника, улучшения барьерной функции, усиления/защиты кишечного барьера и их комбинаций.

10. Корм для домашних животных по любому предшествующему пункту, где животным-компаньоном предпочтительно является собака, щенок, кошка или котенок.

11. Корм для домашних животных по любому предшествующему пункту, где каждый пробиотик в комбинации пробиотиков вводят животному-компаньону в количестве 10⁸-10¹² КОЕ в сутки.

12. Корм для домашних животных по п. 10, где композиция выбрана из группы: фармацевтический состав, ветеринарный состав, питательный состав, состав для зондового питания, диетическая добавка, функциональный продукт и питьевой продукт.

13. Применение комбинации пробиотиков в производстве корма для домашнего животного для лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости у животных-компаньонов, где корм для домашних животных содержит гранулированный корм и комбинацию пробиотиков, нанесенную на корм или помещенную в него, причем указанная комбинация пробиотиков содержит Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446.

14. Применение по п. 13, где комбинация пробиотиков дополнительно содержит Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

15. Способ лечения или предупреждения аллергического расстройства и/или пищевой непереносимости у животного-компаньона, включающий стадию введения указанному животному-компаньону комбинации пробиотиков в составе корма для домашних животных, где корм для домашних животных содержит гранулированный корм и комбинацию пробиотиков, нанесенную на корм или помещенную в него, причем комбинация пробиотиков представляет собой Bifidobacterium longum CNCM I-2618 и Bifidobacterium lactis CNCM I-3446.

16. Способ по п. 15, в котором комбинация пробиотиков дополнительно содержит Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.