СТАБИЛЬНЫЕ КОМПОЗИЦИИ ИММУНОКОНЪЮГАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ АНТИТЕЛО К CD79b Российский патент 2023 года по МПК A61K39/395 A61K47/12 A61K47/22 A61K47/26 A61K47/68 A61P35/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] В данной заявке заявляется приоритет по предварительной заявке США с серийным номером 62/657185, поданной 13 апреля 2018 г., которая полностью включена в данный документ посредством ссылки.

ПРЕДСТАВЛЕНИЕ СПИСКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ В ТЕКСТОВОМ ФАЙЛЕ В ASCII-ФОРМАТЕ

[0002] Содержание следующего представления в текстовом файле ASCII полностью включено в данный документ посредством ссылки: машиночитаемая форма (CRF) Списка последовательностей (имя файла: 146392044340SEQLIST.TXT, дата записи: 9 апреля 2019 г., размер: 12 КБ).

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0003] В данном изобретении предлагаются стабильные фармацевтические композиции, содержащие иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, и поверхностно-активное вещество. В данном изобретении также предлагаются способы применения таких композиций для лечения злокачественных новообразований.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0004] Внутривенное (в/в) введение с применением инфузионных пакетов является наиболее распространенным способом доставки биопрепаратов в коммерческих условиях. Для поддержки доставки и совместимости биопрепарата, такого как иммуноконъюгат, при в/в введении, необходимо разработать подходящую терапевтическую композицию, которая сохраняет стабильность после разведения в инфузионном пакете, во время транспортировки и на протяжении всего курса приема (Bardin, С. et al. Annales pharmaceutiques francaises 69 (2011) 221-231).

[0005] Одна из проблем введения биопрепаратов, особенно с применением инфузионных пакетов для в/в введения, состоит в том, что материалы конструкции и раствор для инфузий могут создавать дестабилизирующую среду для терапевтического белка. Кроме того, белок также сталкивается с межфазными напряжениями в пакете для в/в введения. Адсорбция белка на границах раздела твердое вещество-жидкость и воздух-вода может вызывать денатурацию белка на поверхности, приводящую к агрегации белка (Shieh, I., et al. Mol Pharm. 12 (2015): 3184-93; Sreedhara, A., et al. Pharm. Sci. 101 (2012): 21-30). Еще больше усложняя в/в введение, встряхивание инфузионных пакетов вызывает постоянную регенерацию поверхности раздела воздух-жидкость, что приводит к повторяющимся повреждениям белка с течением времени. Агрегация, вызванная либо дестабилизирующими условиями раствора пакета для в/в введения, либо межфазным стрессом, может значительно и отрицательно повлиять на качество продукта, эффективность и иммуногенность биопрепарата.

[0006] Вредное действие в/в введения на биопрепараты можно частично облегчить за счет применения поверхностно-активных веществ при разработке композиции. Для защиты и стабилизации молекулы от межфазного стресса воздух-вода в белковых препаратах обычно применяются неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбат-20 (ПС20) или полисорбат-80 (ПС80) (Kerwin, ВА. J. Pharm. Sci. 97 (2008) 2924-2935). Поверхностно-активные вещества могут защищать лекарственное средство (ЛС) от повреждений, вызванных поверхностью, за счет конкуренции с белком на границах раздела воздух-вода и твердое вещество-вода (Kerwin, ВА. J. Pharm. Sci. 97 (2008) 2924-2935). Кроме того, поверхностно-активные вещества также снижают поверхностное натяжение системы (Cleland, JL., et al. Critical reviews in therapeutic drug carrier systems 10 (1993) 307-377). Однако критический недостаток применения неионогенного поверхностно-активного вещества в концентрации, подходящей для доставки в пакетах для в/в введения, заключается в том, что пролонгированное воздействие биопрепарата на поверхностно-активное вещество может привести к окислению определенных аминокислотных остатков, тем самым снижая терапевтическую эффективность. Lam X, et al., Pharm Res. (2011) 28:2543-2555.

[0007] Важно отметить, что до в/в введения биопрепараты также должны обладать длительным стабильным сроком хранения в условиях хранения, не включая структуру и активность терапевтического белка. Жидкие композиции конъюгатов антитело-лекарственное средство/препарат (КАЛП), в которых применяется линкер, например, могут быть чувствительны к кислотно-катализируемому гидролизу линкера во время хранения. Такая нестабильность может вызвать преждевременное высвобождение лекарственного средства при в/в введении пациенту, отрицательно влияя на фармакокинетику и безопасность биопрепарата.

[0008] Таким образом, существует потребность в разработке стабильной фармацевтической композиции, которая была бы как стабильной для в/в введения, так и обладала длительным сроком хранения в условиях хранения. Данное изобретение удовлетворяет эту потребность и предлагает другие связанные с этим преимущества.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0009] В одном аспекте, в данном изобретении предлагается фармацевтическая композиция, содержащая иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, и поверхностно-активное вещество, причем концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере 0,06% масс./об. (например, 0,6 мг/мл), и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит

(а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1);

(b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и

(с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4);

(b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5).

[0010] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет от около 5 мг/мл до около 60 мг/мл, от около 10 мг/мл до около 50 мг/мл, от около 10 мг/мл до около 40 мг/мл, от около 10 мг/мл до около 30 мг/мл или от около 10 мг/мл до около 20 мг/мл.

[0011] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет от около 10 мг/мл до около 20 мг/мл. В одном варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет около 10 мг/мл. В другом варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет около 20 мг/мл.

[0012] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет от 5 мг/мл до 60 мг/мл, от 10 мг/мл до 50 мг/мл, от 10 мг/мл до 40 мг/мл, от 10 мг/мл до 30 мг/мл или от 10 мг/мл до 20 мг/мл.

[0013] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет от 10 мг/мл до 20 мг/мл. В одном варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет 10 мг/мл. В другом варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет 20 мг/мл.

[0014] В некоторых вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества составляет от около 0,06% масс./об. (т.е. 0,6 мг/мл) до около 0,12% масс./об. (т.е. 1,2 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере около 0,06% масс./об. (т.е. 0,6 мг/мл). В другом варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере около 0,12% масс./об. (т.е. 1,2 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере 0,06% масс./об. В другом варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере 0,12% масс./об. В некоторых вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,06% масс./об. В другом варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,12% масс./об.

[0015] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет около 10 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества составляет около 0,06% масс./об. (т.е. 0,6 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет около 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере около 0,12% масс./об. В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет около 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества составляет около 0,12% масс./об. (т.е. 1,2 мг/мл).

[0016] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет 10 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,06% масс./об. (т.е. 0,6 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере 0,12% масс./об. В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,12% масс./об.

[0017] В некоторых вариантах реализации согласно (или применительно к) любому из приведенных выше вариантов реализации фармацевтическая композиция представляет собой жидкую фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция стабильна по меньшей мере в течение около любого из 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при 30°С или по меньшей мере в течение около 24, 48 или 72 часов при хранении при 2-8°С.

[0018] В некоторых вариантах реализации данного изобретения, поверхностно-активное вещество в данном документе является неионогенным. В иллюстративном варианте реализации, поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (ПС20), полисорбата 80 (ПС80), полоксамера 188 (П188), N-октил-β-D глюкопиранозида (ОГ) и их комбинации. В конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой ПС20. В еще одном конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой ПС80.

[0019] В некоторых вариантах реализации данного изобретения, композиция дополнительно содержит буферный агент. В некоторых вариантах реализации, буферный агент представляет собой гистидиновый буфер. В некоторых вариантах реализации, буферный агент представляет собой сукцинатный буфер. В некоторых вариантах реализации, сукцинатный буфер представляет собой натрий-сукцинатный буфер. В некоторых вариантах реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет от около 10 мМ до около 200 мМ. В некоторых вариантах реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет от 10 мМ до 200 мМ. В одном варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет около 10 мМ. В другом варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет 10 мМ.

[0020] В некоторых вариантах реализации, композиция в соответствии с данным изобретением имеет рН от около 5,0 до около 6,0. В конкретных вариантах реализации буфер имеет рН около 5,0, около 5,1, около 5,2, около 5,3, около 5,4, около 5,5, около 5,6, около 5,7, около 5,8, около 5,9 или около 6,0. В одном варианте реализации композиция в соответствии с данным изобретением имеет рН около 5,3. В некоторых вариантах реализации, композиция в соответствии с данным изобретением имеет рН от 5,0 до 6,0. В конкретных вариантах реализации буфер имеет рН 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 или 6,0. В одном варианте реализации композиция в соответствии с данным изобретением имеет рН 5,3.

[0021] В некоторых вариантах реализации данного изобретения, композиция дополнительно содержит сахар. В некоторых вариантах реализации, концентрация сахара составляет от около 100 мМ до около 260 мМ. В некоторых вариантах реализации, концентрация сахара составляет от 100 мМ до 260 мМ. В некоторых вариантах реализации, сахар выбран из группы, состоящей из сахарозы, маннита, сорбита, глицерина, декстрана 40 и трегалозы.

[0022] В конкретном варианте реализации, сахар представляет собой сахарозу. В одном варианте реализации данного изобретения, концентрация сахарозы составляет около 120 мМ. В другом варианте реализации, концентрация сахарозы составляет 120 мМ.

[0023] В некоторых вариантах реализации, композиция в соответствии с данным изобретением лиофилизирована (например, в виде лиофилизированной массы). В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0024] В одном аспекте в данном изобретении предлагается фармацевтическая композиция, полученная с помощью лиофилизации жидкой композиции, содержащей 20 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в 10 мМ натрий-сукцинатном буфере, 0,12% масс./об. полисорбата 20 и 120 мМ сахарозы, причем жидкая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5).

[0025] В некоторых вариантах реализации данного изобретения, антитело к CD79b содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации данного изобретения, тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

[0026] Также в данном документе представлена фармацевтическая композиция, полученная путем лиофилизации жидкой композиции, содержащей 20 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в 10 мМ натрий-сукцинатном буфере, 0,12% масс./об. полисорбата 20 и 120 мМ сахарозы, причем жидкая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 2 до около 5 (например, около 3,5). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированную массу.

[0027] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция в соответствии с данным изобретением стабильна около 60 месяцев при 5°С±3°С в защищенном от света месте. В определенном варианте реализации, фармацевтическая композиция в соответствии с данным изобретением стабильна около 48 месяцев при 5°С±3°С в защищенном от света месте.

[0028] В некоторых вариантах реализации, стабильность фармацевтической композиции в соответствии с данным изобретением измеряют с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Э-ВЭЖХ). В одном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 95,0, измеренный с помощью Э-ВЭЖХ.

[0029] В некоторых вариантах реализации, стабильность фармацевтической композиции в соответствии с данным изобретением измеряется с помощью визуализационно-контролируемого капиллярного изоэлектрического фокусирования (вкИЭФ). В одном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 58,0, кислотную область (% площади) не более 32,0 и основную область (% площади) не более 12,0, измеренные с помощью вкИЭФ.

[0030] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую композицию в соответствии с данным изобретением восстанавливают стерильной водой для инъекций (СВДИ). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую композицию восстанавливают в около 7,2 мл СВДИ. В некоторых вариантах реализации, восстановленная композиция стабильна в течение по меньшей мере 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при около 30°С. В некоторых вариантах реализации, восстановленная композиция стабильна в течение по меньшей мере 24, 48 или 72 часов при хранении при от около 2°С до около 8°С. В некоторых вариантах реализации, восстановленная композиция может быть дополнительно разбавлена изотоническим буфером в пакете для внутривенного (в/в) введения. В некоторых вариантах реализации, конечный объем разбавленной композиции в пакете для в/в введения составляет от около 50 мл до около 100 мл. В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата в пакете для в/в введения составляет от около 0,72 мг до около 2,7 мг.

[0031] Также, в данном документе представлена фармацевтическая композиция, полученная путем лиофилизации жидкой композиции, содержащей 20 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в 10 мМ натрий-сукцинатном буфере, 0,12% масс./об. полисорбата 20 и 120 мМ сахарозы, причем жидкая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 2 до около 5 (например, около 3,5).

[0032] Предлагается жидкая композиция (например, для внутривенного введения), содержащая а) от около 0,72 до около 2,7 мг/мл полатузумаба ведотина; b) от около 0,36 мМ до около 1,35 мМ сукцината натрия; с) от около 0,51 мМ до около 16,24 мМ сахарозы; d) от около 0,0432 мг/мл до около 0,162 мг/мл полисорбата 20, при этом рН жидкой композиции составляет от около 5 до около 5,7. Также, предлагается жидкая композиция (например, для внутривенного введения), содержащая а) около 0,72 мг/мл полатузумаба ведотина; b) около 0,36 мМ сукцината натрия; с) около 0,51 мМ сахарозы; d) около 0,0432 мг/мл полисорбата 20, при этом рН жидкой композиции составляет от около 5,1 до около 5,4. Также, предлагается жидкая композиция (например, для внутривенного введения), содержащая а) около 2,7 мг/мл полатузумаба ведотина; b) около 1,35 мМ сукцината натрия; с) около 16,24 мМ сахарозы; d) около 0,162 мг/мл полисорбата 20, при этом рН жидкой композиции составляет от около 5,1 до около 5,4. В некоторых вариантах реализации, объем жидкой композиции составляет от около 50 мл до около 100 мл. В некоторых вариантах реализации, объем жидкой композиции составляет 50 мл. В некоторых вариантах реализации, объем жидкой композиции составляет 100 мл. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция содержится в пакете для внутривенного (в/в) введения. В некоторых вариантах реализации, поверхности пакета для в/в введения, которые контактируют с жидкой композицией, состоят из поливинилхлорида (ПВХ), полиолефина (ПО), полиэтилена (ПЭ) или полипропилена (ПП).

[0033] В одном аспекте, данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, содержащую иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, поверхностно-активное вещество, сукцинатный буфер и сахар, причем фармацевтическая композиция при восстановлении в воде образует жидкую фармацевтическую композицию, содержащую иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, в концентрации от около 10 мг/кг до около 20 мг/мл, поверхностно-активное вещество в концентрации по меньшей мере 0,06% масс./об. (то есть, 0,6 мг/мл), сукцинатный буфер в концентрации от около 10 мМ до около 200 мМ и сахар в концентрации от около 100 мМ до около 260 мМ, при этом жидкая фармацевтическая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5). В некоторых вариантах реализации, антитело к CD79b содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации, тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и при этом легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

[0034] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую композицию восстанавливают в СВДИ, а затем разбавляют буфером в пакете для в/в введения. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую композицию восстанавливают в СВДИ, а затем разбавляют изотоническим буфером в пакете для в/в введения. В одном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества при разбавлении в пакете для в/в введения составляет по меньшей мере 0,003% масс./об. В одном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества при разбавлении в пакете для в/в введения составляет по меньшей мере 0,004% масс./об. В некоторых вариантах реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20. В некоторых вариантах реализации, сахар представляет собой сахарозу. В конкретном варианте реализации, концентрация сахарозы составляет 120 мМ. В некоторых вариантах реализации, сукцинатный буфер представляет собой натрий-сукцинатный буфер. В конкретном варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет 10 мМ. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция после восстановления стабильна в течение по меньшей мере 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при около 30°С. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция после восстановления стабильна в течение по меньшей мере 24, 48 или 72 часов при хранении при от около 2°С до около 8°С.

[0035] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция при восстановлении в воде стабильна до около 1 суток, до около 2 суток или до около 3 суток при 30°С. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция при восстановлении в воде стабильна до около 1 суток, до около 2 суток, до около 3 суток, до около 4 суток, до около 5 суток, до около 6 суток или до около 7 суток при 5°С±3°С. В определенных вариантах реализации, стабильность композиции измеряется с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Э-ВЭЖХ). В конкретном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 95,0, измеренный с помощью Э-ВЭЖХ.

[0036] В определенных вариантах реализации, стабильность композиции измеряется с помощью визуализационно-контролируемого капиллярного изоэлектрического фокусирования (вкИЭФ). В конкретном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 58,0, кислотную область (% площади) не более 32,0 и основную область (% площади) не более 12,0, измеренные с помощью вкИЭФ.

[0037] В некоторых вариантах реализации описанная в данном документе фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе (например, в стеклянном флаконе на 20 мл). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированную фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет собой жидкую фармацевтическую композицию.

[0038] В одном аспекте данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, полученную способом, включающим стадии: (а) лиофилизации жидкой композиции, содержащей 20 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в 10 мМ натрий-сукцинатном буфере, 0,12% масс./об. полисорбата 20 и 120 мМ сахарозы, причем жидкая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 2 до около 5, для получения лиофилизированной композиции; (b) восстановления лиофилизированной композиции около 7,2 мл стерильной воды для инъекций (СВДИ) для получения восстановленной композиции; и (с) разбавления восстановленной композиции изотоническим буфером в пакете для внутривенного введения (в/в) для получения фармацевтической композиции, при этом конечный объем фармацевтической композиции в пакете для в/в введения составляет около 100 мл, и при этом конечная концентрация иммуноконъюгата в фармацевтической композиции составляет около 0,72 мг/мл или около 2,7 мг/мл.

[0039] В одном аспекте данное изобретение предлагает жидкую композицию, содержащую иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, поверхностно-активное вещество, сукцинатный буфер и сахар, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, находится в концентрации от около 10 мг/мл до около 20 мг/мл, поверхностно-активное вещество находится в концентрации по меньшей мере 0,06% масс./об. (то есть 0,6 мг/мл), сукцинатный буфер находится в концентрации от около 10 мМ до около 200 мМ, и сахар находится в концентрации от около 100 до около 260 мМ, при этом жидкая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5). В некоторых вариантах реализации, антитело к CD79b содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации, тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и при этом легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

[0040] В некоторых вариантах реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20. В некоторых вариантах реализации, сахар представляет собой сахарозу. В конкретном варианте реализации, концентрация сахарозы составляет 120 мМ. В некоторых вариантах реализации, сукцинатный буфер представляет собой натрий-сукцинатный буфер. В конкретном варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет 10 мМ.

[0041] В некоторых вариантах реализации, жидкую композицию в соответствии с данным изобретением разбавляют изотоническим буфером. В примерном варианте реализации, жидкая композиция в соответствии с данным изобретением, растворенная в изотоническом буфере, находится в пакете для в/в введения. В некоторых вариантах реализации, изотонический буфер представляет собой 0,9% раствор хлорида натрия, 0,45% раствор хлорида натрия или 5% раствор декстрозы.

[0042] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, представленная в данном документе, растворенная в 0,9% растворе хлорида натрия, стабильна (по любому одному или более критериям, описанным в другом месте в данном документе) после разбавления в течение по меньшей мере около 24 часов при 2-8°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, представленная в данном документе, растворенная в 0,9% растворе хлорида натрия, стабильна (по любому одному или более критериям, описанным в другом месте в данном документе) после разбавления в течение около до 4 часов при температуре от 9°С до 25°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, представленная в данном документе, растворенная в 0,45% растворе хлорида натрия, стабильна (по любому одному или более критериям, описанными в другом месте в данном документе) после разбавления в течение по меньшей мере около 24 часов при 2°С-8°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, представленная в данном документе, растворенная в 0,45% растворе хлорида натрия, стабильна (по любому одному или более критериям, описанным в другом месте в данном документе) после разбавления в течение около 4 часов при температуре от 9°С до 25°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, представленная в данном документе, растворенная в 5% растворе декстрозы, стабильна (по любому одному или более критериям, описанными в другом месте в данном документе) после разбавления в течение по меньшей мере около 48 часов при 2°С-8°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, представленная в данном документе, растворенная в 5% растворе декстрозы, стабильна (по любому одному или более критериям, описанными в другом месте в данном документе) после разбавления в течение около 8 часов при температуре от 9°С до 25°С.

[0043] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, растворенная в изотоническом буфере, находится в пакете для в/в введения. В некоторых вариантах реализации, поверхности пакета для в/в введения, которые контактируют с композицией, которая растворена в изотоническом буфере, состоят из поливинилхлорида (ПВХ), полиолефина (ПО), полиэтилена (ПЭ) или полипропилена (ПП).

[0044] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция в соответствии с данным изобретением, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, стабильна до от около 6 до около 8 часов при 30°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция в соответствии с данным изобретением, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, стабильна около 24 часов при 25°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция в соответствии с данным изобретением, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, стабильна до около 72 часов при 5°С±3°С. В некоторых вариантах реализации, изотонический буфер представляет собой физиологический раствор. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция стабильна в течение по меньшей мере 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при около 30°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция стабильна в течение по меньшей мере 24, 48 или 72 часов при хранении при около от около 2°С до около 8°С.

[0045] Также предлагается лиофилизированная фармацевтическая композиция, содержащая около 150 мг иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, около 9,0 мг полисорбата 20, около 8,88 мг янтарной кислоты, около 4,08 мг гидроксида натрия и около 309 мг сахарозы, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и при этом легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 2 до около 5 (например, около 3,5). В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция (например, лиофилизированная масса) содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0046] Кроме того, предлагается лиофилизированная фармацевтическая композиция, содержащая около 150 мг полатузумаба ведотина, около 9,0 мг полисорбата 20, около 8,88 мг янтарной кислоты, около 4,08 мг гидроксида натрия и около 309 мг сахарозы. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция (например, лиофилизированная масса) содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0047] Также, предлагается лиофилизированная фармацевтическая композиция, содержащая около 140 мг иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, около 8,4 мг полисорбата 20, около 8,27 мг янтарной кислоты, около 3,80 мг гидроксида натрия и около 288 мг сахарозы, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где b представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и при этом легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 2 до около 5 (например, около 3,5). В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция (например, лиофилизированная масса) содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0048] Кроме того, предлагается лиофилизированная фармацевтическая композиция, содержащая около 140 мг полатузумаба ведотина, около 8,4 мг полисорбата 20, около 8,27 мг янтарной кислоты, около 3,80 мг гидроксида натрия и около 288 мг сахарозы. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция (например, лиофилизированная масса) содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0049] Также, предлагается лиофилизированная фармацевтическая композиция, содержащая около 30 мг иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, около 1,8 мг полисорбата 20, около 1,77 мг янтарной кислоты, около 0,816 гидроксида натрия и около 61,8 мг сахарозы, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и при этом легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 2 до около 5 (например, около 3,5). В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция представляет собой лиофилизированную массу. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция (например, лиофилизированная масса) содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0050] Кроме того, предлагается лиофилизированная фармацевтическая композиция, содержащая около 30 мг полатузумаба ведотина, около 1,8 мг полисорбата 20, около 1,77 мг янтарной кислоты, около 0,816 мг гидроксида натрия и около 61,8 мг сахарозы. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная композиция (например, лиофилизированная масса) содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0051] В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, представляет собой лиофилизированную массу. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция по любому из вариантов реализации данного документа стабильна в течение по меньшей мере 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54 или 60 месяцев при хранении при температуре от около 2°С до около 8°С.

[0052] Предлагается фармацевтическая композиция, содержащая а) 5-60 мг/мл полатузумаба ведотина; b) 10-200 мМ сукцината натрия; с) 100-260 мМ сахарозы; и d) 0,06-0,12% полисорбата 20, причем рН жидкой композиции составляет от 5 до 6. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция содержит а) 10-55 мг/мл полатузумаба ведотина;

b) 10-100 мМ сукцината натрия; с) 150-260 мМ сахарозы; и d) 0,08-0,12% масс./об. полисорбата 20, при этом рН жидкой композиции составляет от 5,1 до 5,6. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция содержит а) 15-40 мг/мл полатузумаба ведотина; b) 10-50 мМ сукцината натрия;

c) 200-260 мМ сахарозы; и d) 0,1-0,12% масс./об. полисорбата 20, при этом рН жидкой композиции составляет от 5,2 до 5,4. В некоторых вариантах реализации, жидкую композицию получают восстановлением лиофилизированной композиции (такой, как лиофилизированная масса). В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0053] Также, предлагается жидкая фармацевтическая композиция, содержащая а) 20 мг/мл полатузумаба ведотина; b) 10 мМ сукцината натрия; с) 120 мМ сахарозы; и d) 0,12% масс./об. полисорбата 20, при этом рН жидкой композиции составляет около 5,3. В некоторых вариантах реализации, жидкую композицию получают восстановлением лиофилизированной композиции (такой, как лиофилизированная масса). В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0054] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция по любому из вариантов реализации, представленных в данном документе, стабильна в течение по меньшей мере 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при около 30°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция по любому из вариантов реализации, представленных в данном документе, стабильна в течение по меньшей мере 24, 48 или 72 часов при хранении от около 2°С до около 8°С. В некоторых вариантах реализации, жидкую композицию получают восстановлением лиофилизированной композиции (например, лиофилизированной массы). В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция содержится во флаконе, например, в стеклянном флаконе на 20 мл.

[0055] В некоторых вариантах реализации, восстановленная фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, стабильна после 72 часов хранения при 2°С-8°С. В некоторых вариантах реализации, восстановленная фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, стабильна после 24 часов хранения при 30°С при воздействии окружающего света. В некоторых вариантах реализации, восстановленная фармацевтическая композиция содержит 20 мг/мл полатузумаба ведотина в 10 мМ сукцинате, 120 мМ сахарозы и 1,2 мг/мл полисорбата 20, при этом рН составляет 5,3. В некоторых вариантах реализации, сродство полатузумаба ведотина к его мишени (т.е. CD79b) или к биологической активности полатузумаба ведотина.

[0056] В одном аспекте данное изобретение предлагает способ лечения пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту фармацевтической композиции или жидкой композиции, описанной в данном документе. Также, предлагается применение фармацевтической композиции или жидкой композиции, описанной в данном документе, для производства лекарственного средства для лечения пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах реализации, предлагается фармацевтическая композиция или жидкая композиция, описанная в данном документе, для применения при лечении пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом. Также предлагается фармацевтическая композиция или жидкая композиция, описанная в данном документе, для применения в способе лечения пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом.

[0057] В одном варианте реализации изобретения, пролиферативное расстройство представляет собой злокачественное новообразование. В иллюстративном варианте реализации злокачественное новообразование представляет собой нарушение пролиферации В-клеток. В конкретных вариантах реализации нарушение пролиферации В-клеток выбрано из группы, состоящей из: лимфомы, миеломы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДВКЛ), рецидивирующих/рефрактерных форм ДВКЛ, агрессивной НХЛ, индолентной лимфомы, фолликулярной лимфомы (ФЛ), рецидивирующей агрессивной НХЛ, рецидивирующей индолентной НХЛ, рецидивирующей НХЛ, рефрактерной НХЛ, рефрактерной индолентной НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и мантийноклеточной лимфомы.

[0058] В одном варианте реализации данного изобретения, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой неходжкинскую лимфому (НХЛ). В одном варианте реализации данного изобретения, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВКЛ). В одном варианте реализации данного изобретения, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой рецидивирующую/рефрактерную ДВКЛ. В некоторых вариантах реализации данного изобретения, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой рецидивирующую/рефрактерную ДВКЛ. В другом варианте реализации данного изобретения, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой рецидивирующую НХЛ или рефрактерную НХЛ. В еще одном варианте реализации данного изобретения, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой фолликулярную лимфому (ФЛ).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0059] На Фиг. 1 представлено увеличение количества высокомолекулярных соединений (ВМС) после 22 часов статического хранения при 30°С с фиксированной концентрацией ПС20 ([ПС20]) в пакетах трех различных размеров для внутривенного (в/в) введения.

[0060] На Фиг. 2 представлено увеличение количества ВМС после 2 часов перемешивания (100 об/мин) при 30°С с фиксированной концентрацией ПС20 ([ПС20]) в трех разных размерах пакетов для в/в введения.

[0061] На Фиг. 3 проиллюстрировано влияние температуры на физическую стабильность анти-CD79b-vc-MMAE в пакетах для в/в введения с физиологическим раствором при различных концентрациях ПС20 ([ПС20]).

[0062] На Фиг. 4 проиллюстрировано влияние типа поверхностно-активного вещества и инфузионной жидкости при статическом хранении при 30°С в течение 22 часов.

[0063] На Фиг. 5А проиллюстрировано влияние температуры 2-8°С на стабильность анти-CD79b-vc-MMAE при перемешивании. На Фиг. 5В проиллюстрировано влияние температуры 25°С на стабильность анти-CD79b-vc-ММАЕ при перемешивании. На Фиг. 5С проиллюстрировано влияние температуры 30°С на стабильность анти-CD79b-vc-MMAE при перемешивании.

[0064] На Фиг. 6 проиллюстрирована физическая стабильность анти-CD79b-vc-MMAE с применением модели перемешивания 1.

[0065] На Фиг. 7 проиллюстрирована физическая стабильность анти-CD79b-vc-MMAE с применением модели перемешивания 2.

[0066] На Фиг. 8 проиллюстрирована реакция гидролиза тиосукцинимида для стабилизации иммуноконъюгата и предотвращения элиминирования. Элиминирование малеимида можно предотвратить гидролизом тиосукцинимидных связей, присутствующих в иммуноконъюгате.

[0067] На Фиг. 9 проиллюстрировано влияние рН на образование варианта кислотного заряда при 30°С в трех различных временных точках: 2 недели, 4 недели и 8 недель.

[0068] На Фиг. 10 проиллюстрировано влияние рН на образование варианта основного заряда при 30°С в трех различных временных точках: 2 недели, 4 недели и 8 недель.

[0069] На Фиг. 11 проиллюстрировано влияние рН на образование ВМС при 30°С в трех различных временных точках: 2 недели, 4 недели и 8 недель.

[0070] На Фиг. 12 проиллюстрировано влияние рН и буферных видов на низкомолекулярные соединения (НМС), подвергнутые стрессу при 30°С в течение 4 недель.

[0071] На Фиг. 13 проиллюстрирована стабильность лиофилизированных композиций при 30°С, измеренная с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ).

[0072] На Фиг. 14 проиллюстрирована стабильность лиофилизированных композиций при 30°С, измеренная с помощью визуализационно-контролируемого капиллярного изоэлектрического фокусирования (вкИЭФв).

[0073] На Фиг. 15А-15С проиллюстрирован внешний вид лиофилизированной массы с различным соотношением белка к сахарозе. Фиг. 15А представляет 10 мг/мл анти-CD79b-vc-MMAE и 260 мМ сахарозы. Фиг. 15В представляет 10 мг/мл анти-CD79b-vc-MMAE и 180 мМ сахарозы. Фиг. 15С представляет 10 мг/мл анти-CD79b-vc-MMAE и 120 мМ сахарозы.

[0074] На Фиг. 16А-16В проиллюстрирован внешний вид лиофилизированной массы с различным соотношением белка к сахарозе. Фиг. 16А представляет 10 мг/мл анти-CD79b-vc-MMAE и 260 мМ сахарозы. Фиг. 16В представляет 20 мг/мл анти-CD79b-vc-MMAE и 120 мМ сахарозы.

[0075] На Фиг. 17 проиллюстрирована стабильность лиофилизированного лекарственного средства анти-CD79b-vc-MMAE, подвергнутого стрессу при 2-8°С, 25°С и 40°С, для измерения вариантов ВМС с помощью ЭХ.

[0076] На Фиг. 18 проиллюстрирована стабильность лиофилизированного лекарственного средства анти-CD79b-vc-MMAE, подвергнутого стрессу при 2-8°С, 25°С и 40°С, для измерения вариантов ВМС с помощью вкИЭФ.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0077] В данном изобретении представлены стабильные фармацевтические композиции, содержащие иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, и поверхностно-активное вещество. В данном изобретении также представлены способы применения таких композиций для лечения злокачественного новообразования.

I. Определения

[0078] Следует понимать, что данное описание не ограничивается конкретными композициями или биологическими системами, которые, конечно, могут варьироваться. Также следует понимать, что применяемая в данном документе терминология предназначена только для описания конкретных вариантов реализации и не предназначена для ограничения. В контексте данного описания и прилагаемой формулы изобретения, формы единственного числа в контексте данного документа включают и формы множественного числа, если содержание явно не предписывает иное. Таким образом, например, ссылка на «молекулу» необязательно включает комбинацию двух или более таких молекул и т.п.

[0079] Термин «около», используемый в данном документе, относится к обычному диапазону ошибок для соответствующего значения и хорошо известный специалисту в данной области техники. В данном документе применение «около» по отношению к величине или параметру включает (и описывает) варианты реализации, которые относятся непосредственно к этой величине или параметру.

[0080] Следует понимать, что аспекты и варианты реализации данного изобретения, описанные в данном документе, включают «включающий», «состоящий» и «состоящий по существу из» аспектов и вариантов реализации данного изобретения.

[0081] Термин «иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b» относится к конъюгату антитело к CB79b-лекарственное средство/препарат (КАЛП). В контексте данного документа иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, содержит антитело или его фрагмент, способные связывать CD79b, линкер и молекулу лекарственного средства. Термин «линкер», в контексте данного документа, относится к 6-малеимидокапроил-валин-цитруллин-п-аминобензилоксикарбонилу (MC-val-cit-PAB).

[0082] Термин «антитело» применяется в наиболее широком смысле и конкретно охватывает, например, отдельные моноклональные антитела к CD79b (включая, без ограничения, агонистические, антагонистические, нейтрализующие антитела, полноразмерные или интактные моноклональные антитела), композиции антител к CD79b с полиэпитопной специфичностью, поликлональные антитела, поливалентные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела, если они проявляют желаемую биологическую активность), образованные по меньшей мере из двух интактных антител, одноцепочечные антитела к CD79b и фрагменты антител к CD79b (см. ниже), включая Fab, Fab', F(ab')2 и Fv-фрагменты, диатела, однодоменные антитела (sdAb), при условии, что они проявляют желаемую биологическую или иммунологическую активность. Термин «иммуноглобулин» (Ig) и «антитело» применяется в данном документе взаимозаменяемо. Антитело может быть химерным, антителом человека, гуманизированным и/или антителом с созревшей аффинностью.

[0083] Термин «антитело к CD79b» или «антитело, связывающееся с CD79b» относится к антителу, которое способно к связыванию CD79b с достаточной аффинностью, так что антитело является подходящим в качестве диагностического и/или терапевтического средства при нацеливании на CD79b. Предпочтительно, степень связывания антитела к CD79b с неродственным, не являющимся CD79b белком, составляет менее около 10% от связывания антитела с CD79b при измерении, например, радиоиммунным анализом (РИА). В некоторых вариантах реализации, антитело, которое связывается с CD79b, имеет константу диссоциации (Kd) ≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ или ≤0,1 нМ. В определенных вариантах реализации изобретения, антитело к CD79b связывается с эпитопом CD79b, который является консервативным среди CD79b от разных видов.

[0084] Основной элемент антитела из 4-цепей представляет собой гетеротетрамерный гликопротеин, состоящий из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (Н) цепей (антитело IgM состоит из 5 основных гетеротетрамерных единиц вместе с дополнительным полипептидом, называемым J-цепью, и следовательно, содержат 10 антигенсвязывающих участков, в то время как секретируемые антитела IgA могут полимеризоваться с образованием поливалентных систем, содержащих 2-5 основных элементов из 4-цепей вместе с J-цепью). В случае IgG элемент из 4-цепей, как правило, имеет молекулярную массу около 150000 дальтон. Каждая L-цепь связана с Н-цепью одной ковалентной дисульфидной связью, в то время как две Н-цепи связаны друг с другом одной или более дисульфидными связями в зависимости от изотипа Н-цепи. Каждая Н и L цепь также имеет расположенные с равными интервалами межцепочечные дисульфидные мостики. Каждая Н-цепь имеет на N-конце вариабельный домен (VH), за которым следуют три константных домена (СН) для каждой из цепей α и γ и четыре домена СН для изотипов ji и е. Каждая L-цепь имеет на N-конце вариабельный домен (VL), за которым следует константный домен (CL) на другом конце. VL выровнен с VH, a CL выровнен с первым константным доменом тяжелой цепи (СН1). Считается, что конкретные аминокислотные остатки образуют поверхность контакта между вариабельными доменами легкой и тяжелой цепи. Образование пары VH и VL формирует единый антигенсвязывающий участок. Для получения информации о структуре и свойствах различных классов антител см., например, Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6.

[0085] L-цепь любого вида позвоночных может быть отнесена к одному из двух четко различающихся типов, называемых каппа и лямбда, на основе аминокислотных последовательностей их константных доменов. В зависимости от аминокислотных последовательностей константного домена их тяжелых цепей (СН), иммуноглобулины можно отнести к различных классам или изотипам. Существует пять классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, имеющих тяжелые цепи, обозначаемые α, β, ε, γ и μ соответственно. Классы γ и α далее подразделяются на подклассы на основе относительно небольших различий в последовательности СН и функции, например, у человека экспрессируются следующие подклассы: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl и IgA2.

[0086] «Вариабельная область» или «вариабельный домен» антитела относится к аминоконцевым доменам тяжелой или легкой цепи антитела. Вариабельный домен тяжелой цепи может быть обозначен как «VH». Вариабельный домен легкой цепи может быть обозначен как «VL». Эти домены обычно являются наиболее вариабельными частями антитела и содержат антигенсвязывающие участки.

[0087] Термин «вариабельный» относится к тому факту, что последовательности определенных сегментов вариабельных доменов значительно отличаются среди антител. V-домен опосредует связывание антигена и определяет специфичность конкретного антитела в отношении его конкретного антигена. Однако вариабельность не является равномерной на протяжении участка вариабельных доменов из 110 аминокислот. Вместо этого V-участки состоят из относительно инвариантных участков, называемых каркасными областями (FR), состоящими из 15-30 аминокислот, разделенных более короткими участками высокой вариабельности, называемыми «гипервариабельными областями», длина которых составляет 9-12 аминокислот. Каждый вариабельный домен нативных легких и тяжелых цепей содержит четыре FR-области, преимущественно принимающих конфигурацию β-слоев, соединенных тремя гипервариабельными участками, которые формируют петли, объединяющие структуру β-слоев, и, в некоторых случаях, формирующие ее часть. Гипервариабельные области в каждой цепи расположены вместе в непосредственной близости от FR и, совместно с гипервариабельными областями другой цепи, участвуют в формировании антигенсвязывающего участка антител (см. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Константные домены не вовлечены непосредственно в связывание антитела с антигеном, но они проявляют различные эффекторные функции, такие как участие антитела в антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC, АЗКЦ).

[0088] «Интактное» антитело представляет собой антитело, которое содержит антигенсвязывающий участок, а также CL и по меньшей мере константные домены тяжелой цепи, CH1, СН2 и СН3. Константные домены могут представлять собой константные домены с нативной последовательностью (например, константные домены человека с нативной последовательностью) или их вариантом аминокислотной последовательности. Предпочтительно, интактное антитело выполняет одну или более эффекторных функций.

[0089] «Голое антитело» для целей настоящего раскрытия представляет собой антитело, которое не конъюгировано с фрагментом лекарственного средства или радиоактивной меткой.

[0090] «Фрагменты антител» содержат часть интактного антитела, предпочтительно антигенсвязывающую или вариабельную область интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают Fab, Fab', F(ab')2 и Fv-фрагменты; диатела; линейные антитела (см., например, патент США №5641870, пример 2, Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]); одноцепочечные молекулы антител; и полиспецифические антитела, образованные фрагментами антител. В одном варианте реализации, фрагмент антитела содержит антигенсвязывающий участок интактного антитела и, таким образом, сохраняет способность связывать антиген.

[0091] Расщепление антител папаином приводит к образованию двух идентичных антигенсвязывающих фрагментов, называемых «Fab»-фрагментами, и остаточного «Fc»-фрагмента, название которого отражает его способность легко кристаллизоваться. Fab-фрагмент состоит из целой L-цепи вместе с доменом вариабельного участка Н-цепи (VH), и первым константным доменом одной тяжелой цепи (СН1). Каждый Fab-фрагмент является одновалентным в отношении связывания антигена, т.е. он обладает одним антигенсвязывающий участком. Обработка антитела пепсином приводит к одному крупному F(ab')2-фрагменту, который приблизительно соответствует двум связанным дисульфидом Fab-фрагментам, имеющим двухвалентную антигенсвязывающую активность, и, кроме того, способен к перекрестному связыванию антигена. Fab'-фрагменты отличаются от Fab-фрагментов добавлением нескольких остатков на карбоксильном конце CH1-домена, содержащие один или более остатков цистеина из шарнирной области антитела. Fab'-SH представляет собой в данном документе обозначение для Fab', в котором остаток(ки) цистеина константных доменов обладает свободной тиольной группой. F(ab')2-фрагменты антитела первоначально были получены в качестве пар Fab'-фрагментов, которые обладают шарнирными цистеинами между ними. Кроме того, известны другие варианты химического сопряжения фрагментов антител.

[0092] Fc-фрагмент содержит карбокси-концевые части обеих Н-цепей, удерживаемые вместе дисульфидами. Эффекторные функции антител определяются последовательностями Fc-участка, который также является частью, распознаваемой Fc-рецепторами (FcR), встречающимися на определенных типах клеток.

[0093] «Fv» представляет собой минимальный фрагмент антитела, содержащий полный антиген-распознающий и антигенсвязывающий сайт. Этот фрагмент состоит из димера, состоящего из одного вариабельного домена тяжелой цепи и одного вариабельного домена легкой цепи, связанных прочной нековалентной связью. В одноцепочечных типах Fv (scFv) один вариабельный домен тяжелой цепи и один вариабельный домен легкой цепи могут быть ковалентно связаны подвижным пептидным линкером таким образом, что легкая и тяжелая цепи могут образовывать «димерную» структуру, аналогичную структуре двухцепочечных типов Fv. Сворачивание этих двух доменов образует шесть гипервариабельных петель (3 петли в каждой из Н- и L-цепи), которые предоставляют аминокислотные остатки для связывания антигена и обеспечивают специфичность связывания антигена антителом. Однако, даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только три HVR, специфичных по отношению к антигену) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и с более низкой аффинностью, чем целый участок связывания.

[0094] «Одноцепочечные Fv», также сокращаемые как «sFv» или «scFv», представляют собой фрагменты антител, которые содержат VH и VL-домены антитела, соединенные в единую полипептидную цепь. Предпочтительно, полипептид sFv также необязательно содержит полипептидный линкер между VH и VL-доменами, которые обеспечивают возможность формирования sFv структуры, требуемой для связывания антигена. Для обзора фрагментов sFv, см., Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); Borrebaeck 1995, ниже.

[0095] Термин «диатела» относится к фрагментам антител, содержащим два антигенсвязывающих участка, причем указанные фрагменты содержат вариабельный домен тяжелой цепи (VH), связанный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) той же полипептидной цепи (VH-VL). Небольшие фрагменты антител получают конструированием sFv-фрагментов (см. предыдущий абзац) с короткими линкерами (приблизительно 5-10 остатков) между VH- и VL-доменами, так что обеспечивается межцепочечное, но не внутрицепочечное, образование пар V-доменов, что приводит к двухвалентному фрагменту, т.е. фрагменту, обладающему двумя антигенсвязывающими участками. Диатела могут быть двухвалентными или биспецифическими. Биспецифические диатела представляют собой гетеродимеры из двух «пересекающихся» sFv-фрагментов, в которых VH- и VL-домены двух антител находятся на различных полипептидных цепях. Диатела описаны более подробно, например, в ЕР 404097; WO 93/11161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); and Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993). Триатела и тетратела также описаны в Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003).

[0096] Термин «моноклональное антитело», в контексте данного документа, относится к антителу из совокупности по существу однородных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие совокупность, являются идентичными, за исключением возможных мутаций, например, встречающихся в природе мутаций, которые могут быть представлены в небольших количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены против одного антигенного участка. Более того, в противоположность препаратам поликлональных антител, которые включают различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. В дополнение к их специфичности, препараты моноклонального антитела являются преимущественными в том, что их можно синтезировать без примесей других антител. Определение «моноклональный» не подразумевает того, что антитело должно быть получено каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, предназначенные для применения в соответствии с данным изобретением, могут быть получены способом гибридом, впервые описанным Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), или они могут быть получены способами рекомбинантных ДНК бактериальных, эукариотических клетках, а также в клетках животных и растений (см., например, патент США №4816567). «Моноклональные антитела» также могут быть получены из фаговых библиотек антител с применением способов, описанных, например, в Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991).

[0097] Моноклональные антитела в данном документе конкретно включают «химерные» антитела, в которых участок тяжелой и/или легкой цепи идентичен или гомологичен соответствующим последовательностям в антителах, полученных из конкретного вида или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антител, в то время как оставшаяся часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, полученных из другого вида или принадлежащих другому классу или подклассу антител, а также фрагменты таких антител, при условии, что они проявляют требуемую биологическую активность (см. патент США No 4816567; и Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 81:6851-6855 (1984)). Представляющие интерес в рамках данной заявки химерные антитела включают «приматизированные» антитела, содержащие антигенсвязывающие последовательности вариабельного домена не относящегося к человеку примата (например, старосветской мартышки, обезьяны и т.д.) и последовательности константного домена человека.

[0098] «Гуманизированные» формы антител нечеловеческого происхождения (например, грызунов) представляют собой химерные антитела, содержащие минимальную последовательность, полученную из антитела нечеловеческого происхождения. В основном, гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека (реципиентное антитело), в которых остатки из гипервариабельной области реципиента заменены остатками из гипервариабельной области видов, не относящихся к человеку (донорное антитело), таких как мышь, крыса, кролик или не относящиеся к человеку приматы, которые обладают требуемой антительной специфичностью, аффинностью и емкостью. В некоторых случаях остатки каркасной области (FR) иммуноглобулина человека заменяют соответствующими остатками, не являющиеся человеческими. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, не встречающиеся в реципиентном антителе или донорном антителе. Эти модификации проводят для дополнительного улучшения параметров антитела. Как правило, гуманизированное антитело содержит по существу все по меньшей мере из одного, и, как правило, из двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют гипервариабельным петлям иммуноглобулина, не являющегося человеческим, и все или по существу все FR-области представляют собой FR-области из последовательности иммуноглобулина человека. Также гуманизированное антитело необязательно содержит по меньшей мере участок константного домена (Fc) иммуноглобулина, как правило, константного домена иммуноглобулина человека. Для более подробной информации см. Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op.Struct. Biol. 2:593-596 (1992). Также см. следующие обзорные статьи и ссылки, цитированные в них: Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol., 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech., 5:428-433 (1994).

[0099] «Антитело человека» представляет собой антитело, обладающее аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности антитела, продуцируемой у человека и/или полученной с применением любых способов получения антител человека, описанных в данном документе. Это определение антитела человека, в частности, не включает гуманизированное антитело, содержащее антигенсвязывающие остатки не человека. Антитела человека могут быть получены с применением различных способов, известных в данной области техники, включая библиотеки фагового дисплея. Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). Также для получения моноклональных антител человека доступны способы, описанные в Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p.77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991). Также см. van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001). Антитела человека можно получить путем введения антигена трансгенному животному, модифицированному для продукции таких антител в ответ на нагрузку антигеном, но имеющему поврежденные эндогенные локусы, например, иммунизированным ксеномышам (см., например, патенты США №6075181 и 6150584 в отношении технологии XENOMOUSETM). Также см., например, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006), в отношении антител человека, полученных технологией В-клеточных гибридом человека.

[0100] Термин «гипервариабельная область», «HVR» или «HV» в контексте данного документа, относится к областям вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными по последовательности и/или образуют структурно определенные петли. Обычно антитела включают шесть гипервариабельных областей: три в VH (H1, Н2, Н3) и три в VL (LI, L2, L3). Используют несколько способов обозначения гипервариабельных областей, и они включены в данное описание. Определяющие комплементарность области (CDR) по Кабату, основаны на вариабельности последовательностей и применяются наиболее часто Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Чотиа вместо этого ссылается на расположение структурных петель (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Конец петли CDR-H1 no Чотиа, при нумерации с применением правила нумерации по Кабату, варьирует между Н32 и Н34 в зависимости от длины петли (это происходит из-за того, что схема нумерации Кабату помещает вставки у Н35А и Н35В; если ни 35А, ни 35В, не присутствуют, петля кончается у 32; если присутствует только 35А, петля кончается у 33; если присутствуют и 35А и 35В, тогда петля кончается у 34). Гипервариабельные области AbM представляют собой компромисс между CDR по Кабату и структурными петлями по Чотиа, и они применяются в программном обеспечении моделирования антител Oxford Molecular's AbM. «Контактные» гипервариабельные участки основаны на анализе доступных комплексных кристаллических структур. Остатки из каждого из указанных гипервариабельных участков отмечены далее.

[0101] Гипервариабельные участки могут включать следующие «удлиненные гипервариабельные участки»: 24-36 или 24-34 (L1), 46-56 или 50-56 (L2), и 89-97 (L3) в VL и 26-35 В (H1), 50-65, 47-65 или 49-65 (Н2), и 93-102, 94-102 или 95-102 (Н3) в VH. Остатки вариабельных доменов пронумерованы согласно Kabat et al., выше для каждого из этих определений.

[0102] «Каркасные» остатки или «FR» являются остатками вариабельных доменов, не относящихся к остаткам гипервариабельной области, как определено в данном документе.

[0103] Термины «нумерация остатка вариабельного домена по Кабату» или «нумерация аминокислотного положения по Кабату», и их варианты, относятся к системе нумерации, которую используют для вариабельных доменов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи в совокупности антител из Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991). С применением этой системы нумерации, истинная линейная аминокислотная последовательность может содержать меньшее количество или дополнительное количество аминокислот, что соответствует укорочению FR или CDR вариабельного домена или встраиванию в них. Например, вариабельный домен тяжелой цепи может включать одну вставку представляющей интерес аминокислоты (остаток 52а по Кабату) после остатка 52 в Н2 и встроенные остатки (например, остатки 82а, 82b, и 82с, и т.д. по Кабату) после остатка 82 FR тяжелой цепи. Нумерацию остатков по Кабату можно определить для конкретного антитела путем выравнивания по участкам гомологии последовательности антитела со «стандартной» последовательностью с нумерацией по Кабату.

[0104] Систему нумерации Кабата обычно используют при указании на остаток в вариабельном домене (приблизительно остатки 1-107 легкой цепи и остатки 1-113 тяжелой цепи) (например, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). «Систему нумерации EU» или «индекс EU» обычно используют при указании на остаток в константной области тяжелой цепи иммуноглобулина (например, индекс EU, указанный в Kabat et al., выше). «Индекс EU по Кабату» относится к нумерации остатков антитела IgG1 человека EU. Если в данном документе нет иных указаний, указания на номера остатков в вариабельных доменах антител означают нумерацию остатков в соответствии с системой нумерации Кабату. Если в данном документе нет иных указаний, ссылки на номера остатков в константном домене антител означают нумерацию остатков в соответствии с системой нумерации EU (например, см. предварительную заявку США №60/640323, Фигуры для нумерации ЕС).

[0105] Антитело, полученное «созреванием аффинности» представляет собой антитело с одним или более изменениями в одном или более его HVR, которые приводят к повышению аффинности антитела к антигену, по сравнению с исходным антителом, которое не имеет этого изменения(ий). Предпочтительные антитела, полученные «созреванием аффинности», имеют наномолярную или даже пикомолярную аффинность к антигену-мишени. Антитела, полученные созреванием аффинности, получают способами, известными в данной области техники. В Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992) описано созревание аффинности способом «перетасовки» VH- и VL доменов. Случайный мутагенез HVR и/или каркасных остатков описан: Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); and Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992).

[0106] Термин «аффинность связывания» обычно относится к силе всех суммарных нековалентных взаимодействий между отдельным участком связывания молекулы (например, антитела) и его связывающим партнером (например, антигеном). Если нет иных указаний, в контексте данного документа, «аффинность связывания» относится к присущей аффинности связывания, которая отражает взаимодействие 1:1 между членами связывающейся пары (например, антителом и антигеном). Аффинность молекулы X к ее партнеру Y можно обычно представить константой диссоциации (Kd). Аффинность можно измерять обычными способами, известными в данной области техники, включая способы, описанные в данном документе. Низкоаффинные антитела обычно связывают антиген медленно, и имеют тенденцию к легкой диссоциации, тогда как высокоаффинные антитела обычно связывают антиген быстрее и имеют тенденцию оставаться дольше в связанном состоянии. В данной области техники известны различные способы измерения аффинности связывания, причем любой из них может быть применен для целей данного изобретения. Конкретные иллюстративные варианты реализации описаны далее.

[0107] Выражение «или лучше», в случае, если оно применяется в данном документе, при указании на аффинность связывания, относится к более сильному связыванию между молекулой и ее связывающим партнером. «Или лучше», в случае, если оно применяется в данном документе, относится к более сильному связыванию, характеризующемуся более низким числовым значением Kd. Например, в случае антитела, аффинность которого к антигену составляет «,6 нМ или лучше», аффинность антитела к антигену составляет <, 6 нМ, то есть, 59 нМ, ,58 нМ, ,57 нМ и т.д., или любую величину, которая меньше чем, 6 нМ.

[0108] В одном варианте реализации «Kd» или «величину Kd» в соответствии с данным изобретением измеряют с помощью анализа связывания меченного радиоактивной меткой антигена (РИА), проводимого с Fab-версией представляющего интерес антитела и его антигеном, как описано в следующем анализе, в котором измеряют аффинность связывания Fab с антигеном в растворе путем уравновешивания Fab минимальной концентрацией (125I)-меченного антигена в присутствии серии титров немеченного антигена, с последующей фиксацией связанного антигена на планшете, покрытом антителом к Fab (Chen, et al. (1999) J. Mol Biol 293:865-881). Для установления условий анализа, на микропланшеты для титрования (Dynex) наносят в течение ночи 5 мкг/мл фиксирующего антитела к Fab (Cappel Labs) в 50 мМ растворе карбоната натрия (рН 9,6), а затем блокируют с применением 2% (масс./об.) бычьего сывороточного альбумина в ФСБ в течение от двух до пяти часов при комнатной температуре (приблизительно 23°С). В не адсорбирующем планшете (Nunc #269620) смешивают 100 пМ или 26 пМ [125I]-антигена с серийными разведениями представляющего интерес Fab (например, в соответствии с антителом к VEGF Fab-12, в Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599). Затем представляющий интерес Fab инкубировали в течение ночи; однако, инкубацию можно продолжать в течение более длительного периода (например, около 65 часов), чтобы убедиться в том, что равновесие достигнуто. После этого смеси переносили на фиксирующий планшет для инкубации при комнатной температуре (например, в течение 1 часа). Затем раствор удаляли и планшет промывали восемь раз 0,1% Tween-20 в ФСБ. После того, как планшеты высохнут, добавляют 150 мкл/лунка сцинтиллятора (MicroScint-20; Packard), и проводят подсчет в планшетах с применением счетчика гамма-импульсов TOPCOUNT™ (Packard) в течение десяти минут. Концентрации каждого из Fab, которые обеспечивают связывание, меньшее или равное 20% от максимального связывания, выбирают для применения в конкурентных анализах связывания.

[0109] В соответствии с другим вариантом «Kd» или «величину Kd» измеряют с применением анализа способом поверхностного плазмонного резонанса, применяя BIAcoreTM-2000 или BIAcoreTM-3000 (BIAcore, Inc., Пискатауэй, Нью-Джерси) при 25°С с чипами СМ5 с иммобилизованным на них антигеном при ~10 единицах ответа (ОЕ). В кратком изложении, биосенсорные чипы из карбоксиметилированного декстрана (СМ5, BIAcore Inc.) активируют гидрохлоридом N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разбавляют 10 мМ ацетатом натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед инъекцией со скоростью потока 5 мкл/минута для достижения приблизительно 10 единиц ответа (ОЕ) связанного белка. После инъекции антигена вводят 1 М этаноламин для блокирования не вступивших в реакцию групп. Для определения показателей кинетики, двукратные серийные разведения Fab (от 0,78 нМ до 500 нМ) вводят в ФСБ с 0,05% Tween 20 (PBST) при 25°С со скоростью потока приблизительно 25 мкл/мин. Константу ассоциации (коп) и константу диссоциации ((koff) вычисляют с применением простой модели связывания Ленгмюра «один к одному» (BIAcore Evaluation Software версии 3.2) посредством одновременного приведения в соответствие сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (Kd) вычисляют как соотношение koff/kon. См., например, Chen, Y., et al. (1999) J. Mol Biol 293:865-881. Если константа ассоциации антитела превышает 106 М-1 с-1 в анализе способом поверхностного плазмонного резонанса, указанным выше, тогда константу ассоциации можно определять с применением способа тушения флуоресценции, в котором измеряют повышение или снижение интенсивности испускания флуоресценции (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, полоса пропускания 16 нм) при 25°С 20 нМ антитела к антигену (форма Fab) в ФСБ, рН 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена при измерении в спектрофотометре, таком как спектрофотометр с останавливаемой струей (Aviv Instruments) или спектрофотометр SLM-Aminco серии 8000 (Thermo Spectronic) с перемешиваемой кюветой.

[0110] «Скорость связывания» или «скорость ассоциации», или «скорость соединения», или «коп» согласно данному изобретению также можно определять с помощью указанного способа поверхностного плазмонного резонанса, описанного выше, с применением BIAcoreTM-2000 или BIAcoreTM-3000 (BIAcore, Inc., Пискатауэй, Нью-Джерси), как описано выше.

[0111] Выражение «по существу сходный» или «по существу такой же», в контексте данного документа, обозначает достаточно высокую степень сходства между двумя числовыми значениями (как правило, одно связано с антителом согласно данного изобретения, а другое связано с эталонным/сравнительным антителом), так что специалист в данной области техники может считать различие между двумя значениями небольшим или не имеющим биологической, и/или статистической значимости в контексте биологического признака, измеряемого указанными значениями (например, значениями Kd). Различие между указанными двумя значениями предпочтительно составляет менее чем около 50%, предпочтительно менее чем около 40%, предпочтительно менее чем около 30%, предпочтительно менее чем около 20%, предпочтительно менее чем около 10% в качестве функции от значения для эталонного/сравнительного антитела.

[0112] Выражение «значимо сниженный» или «значимо отличающийся», в контексте данного документа, обозначает значимую высокую степень отличия между двумя числовыми значениями (как правило, одно связано с антителом согласно данного изобретения, а другое связано с эталонным/сравнительным антителом), так что специалист в данной области техники может считать различие между двумя значениями статистически значимым в контексте биологического признака, измеряемого указанными значениями (например, значениями Kd, ответом НАМА). Различие между указанными двумя значениями предпочтительно составляет более чем около 10%, предпочтительно более чем около 20%, предпочтительно более чем около 30%, предпочтительно более чем около 40%, предпочтительно более чем около 50% в качестве функции от значения для эталонного/сравнительного антитела.

[0113] В целях данного документа «акцепторная каркасная область человека» представляет собой каркасную область, содержащую аминокислотную последовательность каркасной области VL или VH, образованной каркасной областью иммуноглобулина человека или консенсусной последовательностью каркасной области человека. Акцепторная каркасная область человека, «образованная» каркасной областью иммуноглобулина человека или консенсусной последовательностью каркасной области человека может содержать саму их аминокислотную последовательность, или она может содержать существовавшие ранее изменения в аминокислотных последовательностях. Там, где присутствуют существовавшие ранее аминокислотные изменения, предпочтительно, чтобы присутствовало не более 5 и, предпочтительно, 4 или менее, или 3 или менее, существовавших ранее аминокислотных изменений. Там, где присутствуют существовавшие ранее аминокислотные изменения в VH, предпочтительно, чтобы указанные изменения существовали только в трех, двух или одном из положений 71Н, 73Н и 78Н; например, аминокислотные остатки в указанных положениях могут представлять собой 71А, 73Т и/или 78А. В одном варианте реализации, акцепторная каркасная область VL человека идентична по последовательности каркасной области VL иммуноглобулина человека или консенсусной последовательности каркасной области человека.

[0114] «Консенсусная последовательность каркасной области человека» представляет собой каркасную область, которая представляет собой наиболее часто встречающиеся аминокислотные остатки при выборе каркасных последовательностей VL или VH иммуноглобулина человека. Обычно выбор последовательностей VL или VH иммуноглобулина человека осуществляют из подгруппы последовательностей вариабельных доменов. Обычно подгруппа последовательностей представляет собой подгруппу согласно Kabat et al. В одном варианте реализации, для VL, подгруппа представляет собой подгруппу каппа I по Kabat et al. В одном варианте реализации, для VH, подгруппа представляет собой подгруппу III по Kabat et al.

[0115] «Консенсусная каркасная область VH подгруппы III» включает консенсусную последовательность, образованную аминокислотными последовательностями вариабельных областей тяжелой цепи подгруппы III по Kabat et al. В одном варианте реализации аминокислотная последовательность консенсусной каркасной области VH подгруппы III включает по меньшей мере часть или все из каждой из следующих последовательностей:

[0116] «Консенсусная каркасная область VL подгруппы I» включает консенсусную последовательность, образованную аминокислотными последовательностями вариабельных областей легкой цепи каппа подгруппы I по Kabat et al. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность консенсусной каркасной области VL подгруппы I включает по меньшей мере часть или все из каждой из следующих последовательностей:

[0117] «Немодифицированная каркасная область человека» представляет собой каркасную область человека, которая имеет такую же аминокислотную последовательность, как и акцепторная каркасная область человека, например, она лишена замены (замен) аминокислоты человека на аминокислоту не человека в акцепторной каркасной области человека.

[0118] Иммуноконъюгат анти-CD79b или антитело, «которое связывает» CD79b, представляет собой такое антитело, которое связывает антиген CD79b с достаточной аффинностью, так что антитело является подходящим в качестве лекарственного средства для нацеливания его на клетку или ткань, экспрессирующие антиген, и которое не реагирует перекрестно с другими белками в значительной степени. В таких вариантах реализации степень связывания антитела с белком- «не мишенью» будет составлять менее 10% от связывания антитела с его специфическим белком-мишенью, как определяют в анализе сортировки активированных флуоресценцией клеток (FACS) или с помощью радиоиммунного осаждения (РИА). Что касается связывания антитела с молекулой-мишенью, термины «специфическое связывание» или «специфически связывается с» или является «специфичным к» конкретному полипептиду или эпитопу на конкретном полипептиде-мишени, означают связывание, которое на поддающемся измерению уровне отличается от неспецифического взаимодействия. Специфическое связывание можно измерить, например, путем определения связывания молекулы по сравнению со связыванием контрольной молекулы, которая обычно представляет собой молекулу со сходной структурой, которая не обладает активностью связывания. Например, специфическое связывание можно определить по конкуренции с контрольной молекулой, которая является сходной с мишенью, например, с избытком немеченой мишени. В этом случае на специфическое связывание указывает то, что связывание меченой мишени с зондом конкурентно ингибируется избытком немеченой мишени. Термины «специфическое связывание» или «специфически связывается с» или является «специфическим к» конкретному полипептиду или эпитопу на конкретной полипептиде-мишени, в контексте данного документа, может быть проиллюстрирован, например, молекулой, имеющей Kd для мишени по меньшей мере около 10-4 М, альтернативно по меньшей мере около 10-5 М, альтернативно по меньшей мере около 10-6 М, альтернативно по меньшей мере около 10-7 М, альтернативно по меньшей мере около 10-8 М, альтернативно по меньшей мере около 10-9 М, альтернативно по меньшей мере около 10-10 М, альтернативно по меньшей мере около 10-11 М, альтернативно по меньшей мере около 10-12 М, или более. В одном варианте реализации термин «специфическое связывание» относится к связыванию, при котором антитело связывается с эпитопом на полипептиде CD79b без существенного связывания с каким-либо другим полипептидом или эпитопомполипептида.

[0119] «Эффекторные функции» антитела относятся к таким видам биологической активности, которые являются свойственными Fc-области (Fc-области с нативной последовательностью или варианта Fc-участка по аминокислотной последовательности) антитела, и варьируют в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1q и комплемент-зависимую цитотоксичность; связывание Fc-рецептора; антителозависимую клеточно-опосредуемую цитотоксичность (ACDD, АЗКЦ); фагоцитоз; отрицательную регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора; BCR) и активацию В-клеток.

[0120] В данном документе термин «Fc-область» применяется для определения С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, включая Fc-области с нативной последовательностью и варианты Fc-областей. Хотя границы Fc-области тяжелой цепи иммуноглобулина могут варьироваться, Fc-область тяжелой цепи IgG человека обычно определяют как отрезок от аминокислотного остатка в положении Cys226, или от Pro230, до его карбоксильного-конца. С-концевой лизин (остаток 447 согласно системе нумерации ЕС) Fc-области может быть удален, например, в процессе получения или очистки антитела, или при рекомбинантном конструировании нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь антитела. Соответственно, композиция интактных антител может включать совокупности антител, во всех из которых удален остаток K447, совокупности антител, в которых не удален остаток K447, и совокупности антител, содержащие смесь антител, содержащих и не содержащих остаток K447.

[0121] «Функциональная область Fc» обладает «эффекторной функцией» Fc-области с нативной последовательностью. Примеры «эффекторных функций» включают связывание C1q; КЗЦ; связывание Fc-рецептора; АЗКЦ; фагоцитоз; отрицательную регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, рецептора В-клеток; BCR) и т.д. Такие эффекторные функции обычно требуют, чтобы Fc-область была объединена со связывающим доменом (например, вариабельным доменом антитела) и могут быть оценены, применяя различные анализы, как описано, например, в разделе «Определения» данного документа.

[0122] «Fc-область с нативной последовательностью» включает аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности Fc-области, встречающейся в природе. Fc-области человека с нативной последовательностью включают, без ограничения, т Fc-область IgG1 человека с нативной последовательностью (аллотипы не-А и А); Fc-область IgG2 человека с нативной последовательностью; Fc-область IgG3 человека с нативной последовательностью; и Fc-область IgG4 человека с нативной последовательностью, а также их встречающиеся в природе варианты.

[0123] «Вариант Fc-области» включает аминокислотную последовательность, которая отличается от Fc-области с нативной последовательностью тем, что содержит по меньшей мере одну модификацию аминокислоты, предпочтительно одну или более аминокислотную замену (замен). Предпочтительно, вариант Fc-область включает по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с Fc-областью с нативной последовательностью или с Fc-областью исходного полипептида, например, от около одной до около десяти аминокислотных замен, и предпочтительно от около одной до около пяти аминокислотных замен в Fc-области с нативной последовательностью или в Fc-области исходного полипептида. В данном документе вариант Fc-области предпочтительно обладает по меньшей мере около 80% гомологией с Fc-областью с нативной последовательностью и/или Fc-областью исходного полипептида, и наиболее предпочтительно он обладает по меньшей мере около 90% гомологией с ними, более предпочтительно он обладает по меньшей мере около 95% гомологией с ними.

[0124] «Антителозависимая клеточно-опосредуемая цитотоксичность» или «АЗКЦ» относится к форме цитотоксичности, при которой секретируемые Ig, связанные с Fc-рецепторами (FcR), находящимися на определенных цитотоксических клетках (например, естественных клетках-киллерах (NK), нейтрофилах и макрофагах), вызывают специфичное для этих цитотоксических эффекторных клеток связывание с несущей антиген клеткой-мишенью, а затем уничтожают клетки-мишени посредством цитотоксинов. Антитела являются «оружием» цитотоксических клеток и абсолютно необходимы для такого уничтожения. Основные клетки для осуществления АЗКЦ, NK-клетки, экспрессируют только FcγRIII, в то время как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках представлена в Таблице 3 на странице 464 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991). Для оценки активности представляющей интерес молекулы в отношении АЗКЦ, можно проводить анализ АЗКЦ in vitro, такой как анализ, описанный в патенте США №5500362 или 5821337. Подходящие для таких анализов эффекторные клетки включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) и естественные клетки-киллеры (NK). Альтернативно, или дополнительно, активность представляющей интерес молекулы в отношении АЗКЦ можно оценить in vivo, например, в модели на животных, такой как раскрыта в Clynes et al. (USA) 95:652-656 (1998).

[0125] Термины «Fc-рецептор» или «FcR» обозначают рецептор, который

связывается с Fc-областью антитела. Предпочтительным FcR является FcR человека с нативной последовательностью. Более того, предпочтительным FcR является FcR, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcγRI, FcγRII и FcγRIII, включая аллельные варианты и альтернативно-сплайсированные формы этих рецепторов. Рецепторы FcγRII включают FcγRIIA («активирующий рецептор») и FcγRIIB («ингибирующий рецептор»), которые обладают сходными аминокислотными последовательностями, отличающимися, главным образом, своими цитоплазматическими доменами. Активирующий рецептор FcγRIIA в своем цитоплазматическом домене содержит иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITAM). Ингибирующий рецептор FcγRIIB в своем цитоплазматическом домене содержит иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITIM). (см. обзор М. в Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). FcR описаны в Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); и de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). К термину «FcR» в данном документе относятся другие FcR, в том числе FcR, которые будут выявлены в будущем. Термин также включает неонатальный рецептор FcRn, который отвечает за перенос материнских IgG плоду (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)).

[0126] Связывание с FcRn человека in vivo и период полужизни в сыворотке для полипептидов с высокой аффинностью связывания FcRn человека можно анализировать, например, у трансгенных мышей или в трансфицированных клеточных линиях человека, экспрессирующих FcRn человека, или у приматов, которым вводят полипептиды с вариантом Fc-области. В WO 2000/42072 (Presta) описаны варианты антител с повышенным или сниженным связыванием с FcR. См. также, например, Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001).

[0127] «Эффекторные клетки человека» представляют собой лейкоциты, которые экспрессируют один или более FcR и выполняют эффекторные функции. Предпочтительно, клетки экспрессируют по меньшей мере FcγRIII и выполняют эффекторную функцию АЗКЦ. Примеры лейкоцитов человека, которые осуществляют АЗКЦ, включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), естественные клетки-киллеры (NK), моноциты, цитотоксические Т-клетки и нейтрофилы; при этом предпочтительными являются РВМС и NK-клетки. Эффекторные клетки могут быть выделены из природного источника, например, из крови.

[0128] «Комплемент-зависимая цитотоксичность» или «CDC, КЗЦ» относится к лизису клетки-мишени в присутствии комплемента. Активация классического пути комплемента начинается со связывания первого компонента системы комплемента (C1q) с антителами (соответствующего подкласса), связанными с распознаваемым им антигеном. Для оценки активации комплемента можно проводить анализ КЗЦ, например, как описано в Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996). Варианты полипептидов с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области (полипептиды с вариантной Fc-областью) и повышенной или сниженной способностью связывать C1q описаны, например, в патенте США №6194551 В1 и WO 1999/51642. См., также, например, Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

[0129] Термин «содержащее Fc-область антитело» относится к антителу, которое включает Fc-область. С-концевой лизин (остаток 447 в соответствии с системой нумерации EU) области Fc может быть удален, например, во время очистки антитела или путем рекомбинантного конструирования антитела, кодируемого нуклеиновой кислотой. Таким образом, композиция, содержащая содержащее Fc-область антитело, в соответствии с данным изобретением может включать антитело, содержащее K447, антитело, из которого полностью удален K447, или смесь антител, содержащих и не содержащих остаток K447.

[0130] Термины «маркер В-клеточной поверхности» или «антиген В-клеточной поверхности» в контексте данного документа обозначают антиген, экспрессируемый на поверхности В-клетки, на который может быть нацелен антагонист, который с ним связывается, включая, но не ограничиваясь ими, антитела к антигену В-клеточной поверхности или растворимую форму антигена В-клеточной поверхности, способные осуществлять антагонизм связывания лиганда с природным антигеном В-клетки. Примеры маркеров В-клеточной поверхности включают маркеры поверхности лейкоцитов CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 и CD86 (для описания см. The Leukocyte Antigen Facts Book, 2nd Edition. 1997, ed. Barclay et al. Academic Press, Harcourt Brace & Co., New York). Другие маркеры В-клеточной поверхности включают RP105, FcRH2, В-клетки CR2, CCR6, Р2Х5, HLA-DOB, CXCR5, FCER2, BR3, BAFF, BLyS, Btig, NAG14, SLGC16270, FcRH1, IRTA2, ATWD578, FcRH3, IRTA1, FcRH6, ВСМА и 239287. Представляющий особый интерес маркер В-клеточной поверхности экспрессируется предпочтительно на В-клетках, по сравнению с другими не В-клеточными тканями млекопитающих, и он может экспрессироваться как на предшественнике В-клеток, так и на зрелых В-клетках.

[0131] Термины «злокачественное образование» и «злокачественный»

относятся к физиологическому состоянию или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое, как правило, характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры злокачественных новообразований включают, но не ограничиваются ими, гемопоэтические злокачественные новообразования или связанные с кровью злокачественные новообразования, такие как лимфома, лейкоз, миелома или лимфоидные злокачественные новообразования, а также злокачественные новообразования селезенки и злокачественные новообразования лимфатических узлов, а также карциному, бластому и саркому. Более конкретные примеры злокачественные новообразования включают ассоциированные с В-клетками злокачественные опухоли, включая, например, высокодифференцированные, промежуточные и низкодифференцированные лимфомы (включая В-клеточные лимфомы, например, такие как В-клеточная лимфома ассоциированной со слизистой оболочкой лимфоидной ткани и неходжскинская лимфома (НХЛ), лимфома из клеток мантийной зоны, лимфома Беркитта, мелколимфоцитарная лимфома, лимфома маргинальной зоны, диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВКЛ), фолликулярная лимфома (ФЛ) и лимфома Ходжкина, и Т-клеточные лимфомы) и лейкозы (включая вторичный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), такой как В-клеточный лейкоз (CD5+ В лимфоцитов), миелоидный лейкоз, такой как острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, лимфоидный лейкоз, такой как острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) и миелодисплазия), и другие гематологические и/или ассоциированные с В клетками или Т-клетками злокачественные новообразования. Также включены злокачественные новообразования вспомогательных гемопоэтических клеток, включая полиморфноядерные лейкоциты, такие как базофилы, эозинофилы, нейтрофилы и моноциты, дендритные клетки, тромбоциты, эритроциты и естественные клетки-киллеры. Также включены злокачественные нарушения пролиферации В-клеток, выбранные из следующих: лимфомы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), агрессивной НХЛ, рецидивирующей агрессивной НХЛ, рецидивирующей индолентной НХЛ, рефрактерной НХЛ, рефрактерной индолентной НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ), ДВКЛ, рецидивирующей/рефрактерной ДВКЛ, ФЛ и мантийноклеточной лимфомы. Источники В-клеточных злокачественные новообразования включают следующие: В-клеточная лимфома маргинальной зоны происходит из В-клеток памяти в маргинальной зоне, фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная В-лимфома происходят из центроцитов в светлой зоне герминативных центров, хронический лимфоцитарный лейкоз и мелкоклеточный лимфоцитарный лейкоз происходят из B1-клеток (CD5+), лимфома из клеток мантийной зоны происходит из наивных В-клеток в мантийной зоне, и лимфома Беркитта происходит из центробластов в темной зоне герминативных центров. Ткани, которые включают гемопоэтические клетки, называемые в данном документе «тканями гемопоэтических клеток», включают тимус и костный мозг и периферические лимфоидные ткани, такие как селезенка, лимфатические узлы, лимфоидные ткани, ассоциированные со слизистой оболочкой, такие как ассоциированные с кишечником лимфоидные ткани, миндалевидные железы, пейеровы бляшки и аппендикс, и лимфоидные ткани, ассоциированные с другими слизистыми оболочками, например, с выстилкой бронхов. Другие конкретные примеры таких злокачественные новообразования включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, плоскоклеточную карциному легкого, злокачественную опухоль брюшины, печеночноклеточный рак, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстого кишечника, рак ободочной и прямой кишки, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки, рак печени, рак предстательной железы, рак женских наружных половых органов, рак щитовидной железы, карциному печени, лейкоз и другие лимфопролиферативные нарушения, и различные типы рака головы и шеи.

[0132] «В-клеточное злокачественное новообразование» или «нарушение пролиферации В-клеток» в данном документе включает неходжкинскую лимфому (НХЛ), в том числе низкодифференцированную/фолликулярную НХЛ, мелколимфоцитарную (МЛ) НХЛ, промежуточно-дифференцированную/фолликулярную НХЛ, промежуточно-дифференцированную диффузную НХЛ, высокодифференцированную иммунобластную НХЛ, высокодифференцированную лимфобластную НХЛ, высокодифференцированную мелкоклеточную НХЛ с нерасщепленными ядрами, НХЛ с массивным поражением, лимфому из клеток мантийной зоны, ассоциированную со СПИД лимфому, и макроглобулинемию Вальденстрема; неходжскинскую лимфому (НХЛ), ДВКЛ, рецидивирующую/рефрактерную ДВКЛ, лимфому Ходжкина с преобладанием лимфоцитов (НЛХЛП), мелколимфоцитарную лимфому (МЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), индолентную НХЛ, включая рецидивирующую вялотекущую НХЛ и рефрактерную к ритуксимабу индолентную НХЛ; лейкоз, в том числе острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), волосатоклеточный лейкоз, хронический миелобластный лейкоз; лимфому клеток мантийной зоны; и другие гематологические злокачественные новообразования. Такие злокачественные новообразования можно лечить антителами, направленными против маркеров В-клеточной поверхности, таких как CD79b. В данном документе предусматриваются, что такие заболевания можно лечить путем введения антитела, направленного на маркер В-клеточной поверхности, такого как CD79b, и оно включает введение неконъюгированного («голого») антитела или антитела, конъюгированного с цитотоксическим средством, как описано в данном документе. Также в данном документе предусматривается, что такие заболевания можно лечить комбинированной терапией, включающей антитело к CD79b или конъюгат антитела к CD79b с лекарственным средством согласно данному изобретению в сочетании с другим антителом или конъюгатом антитела и лекарственного средства, другим цитотоксическим средством, лучевой терапией или другим способом лечения, проводимым одновременно или последовательно. В иллюстративном способе лечения в соответствии с данным изобретением, антитело к CD79b в соответствии с данным изобретением вводят в сочетании с антителом к CD20, иммуноглобулином, или его связывающим CD20 фрагментом, либо вместе, либо последовательно. Антитело к CD20 может представлять собой «голое» антитело или конъюгат антитела и лекарственного средства. В одном из вариантов реализации комбинированной терапии, антитело к CD79b представляет собой антитело в соответствии с данным изобретением, а антитело к CD20 представляет собой Rituxan® (ритуксимаб).

[0133] Термин «неходжкинская лимфома» или «НХЛ», в контексте данного документа, относится к злокачественному новообразованию лимфатической системы, отличному от лимфомы Ходжкина. Лимфомы Ходжкина можно отличить от неходжкинских лимфом, главным образом, по наличию клеток Рид-Штернберга при лимфомах Ходжкина и отсутствию указанных клеток при неходжкинских лимфомах. Примеры неходжкинских лимфом, которые охватывает используемый в данном документе термин, включают любые лимфомы, которые специалист в данной области техники (например, онколог или патолог) может определить как неходжкинскую лимфому в соответствии с системами классификации, известными в данной области техники, такими как Пересмотренная европейско-американская классификация лимфом (REAL), как описано в Color Atlas of Clinical Hematology (3rd edition), A. Victor Hoffbrand and John E. Pettit (eds.) (Harcourt Publishers Ltd., 2000). См., в частности, фиг. 11.57, 11.58 и 11.59. Более конкретные примеры включают, но не ограничиваются ими, рецидивирующую или рефракторную НХЛ, пограничную низкодифференцированную НХЛ, НХЛ стадии III/IV, устойчивую к химиотерапии НХЛ, лимфобластный лейкоз и/или лимфому предшественников В-клеток, мелколимфоцитарную лимфому, В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз и/или пролимфоцитарный лейкоз, и/или мелколимфоцитарную лимфому, В-клеточную пролимфоцитарную лимфому, иммуноцитому и/или лимфоплазматическую лимфому, В-клеточную лимфому маргинальной зоны, лимфому маргинальной зоны селезенки, экстранодальную MALT-лимфому маргинальной зоны, узловую лимфому маргинальной зоны, волосатоклеточный лейкоз, плазмацитому и/или плазмаклеточную миелому, низкодифференцированную/фолликулярную лимфому, промежуточно-дифференцированную/фолликулярную НХЛ, лимфому из клеток мантийной зоны, лимфому центрального фолликула (фолликулярную), промежуточно-дифференцированную диффузную НХЛ, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, рецидивирующую/рефрактерную диффузную В-крупноклеточную лимфому, НХЛ с агрессивным течением (в том числе пограничную НХЛ с агрессивным течением и рецидивирующую НХЛ с агрессивным течением), НХЛ, рецидивировавшую после аутологичной трансплантации стволовых клеток или устойчивую к ней, первичную медиастинальную крупноклеточную В-клеточную лимфому, первичную эффузионную лимфому, высокодифференцированную иммунобластную НХЛ, высокодифференцированную лимфобластную НХЛ, высокодифференцированную мелкоклеточную НХЛ с нерасщепленными ядрами, НХЛ с массивным поражением, лимфому Беркитта, лимфобластный лейкоз и/или лимфому крупных гранулярных предшественников лимфоцитов (периферических), фунгоидный микоз и/или синдром Сезари, лимфомы кожных покровов (кожные), анапластическую крупноклеточную лимфому, ангиоцентричную лимфому.

[0134] «Нарушение» представляет собой любое состояние, при котором может быть полезным лечение соединением/молекулой или способом в соответствии с данным изобретением. Оно включает хронические и острые нарушения или заболевания, включая патологические состояния, которые предрасполагают млекопитающего к рассматриваемому нарушению. Неограничивающие примеры нарушений, подлежащих лечению в соответствии с данным изобретением, включают злокачественные состояния, такие как злокачественные и доброкачественные опухоли; не лейкозы и лимфоидные злокачественные опухоли; нейрональные, глиальные, астроглиальные, гипоталамические нарушения и нарушения других желез, макрофагальные, эпителиальные, стромальные и бластоцельные нарушения; и воспалительные, иммунологические и другие связанные с ангиогенезом нарушения. Кроме того, нарушения включают состояния, такие как В-клеточно-пролиферативные нарушения и/или В-клеточные опухоли, например, лимфому, неходжкинскую лимфому (НХЛ), агрессивную НХЛ, рецидивирующую агрессивную НХЛ, рецидивирующую вялотекущую НХЛ, рефракторную НХЛ, рефракторную индолентную НХЛ, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мелколимфоцитарную лимфому, лейкоз, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ) и мантийноклеточную лимфому.

[0135] Термины «клеточно-пролиферативное нарушение» и «пролиферативное нарушение» относятся к нарушениям, которые ассоциированы с аномальной, в некоторой степени, клеточной пролиферацией. В одном варианте реализации, клеточно-пролиферативное нарушение представляет собой злокачественное новообразование. В некоторых вариантах реализации данного изобретения рак представляет собой нарушение пролиферации В-клеток.

[0136] Термин «опухоль», в контексте данного документа, относится к любому неопластическому клеточному росту и пролиферации, как злокачественным, так и доброкачественным, и к любым предзлокачественным и злокачественным клеткам и тканям.

[0137] Термины «проведение лечения» или «лечение», или «смягчение течения» относится как к терапевтическим, так и к профилактическим или превентивным мерам, где целью является предотвратить или замедлить (уменьшить) намеченное патологическое состояние или нарушение. К числу тех, кто нуждается в лечении, относятся те, у кого уже имеется нарушение, а также те, кто имеет предрасположенность к нарушению, или те, у которых нарушение подлежит профилактике. Субъекта или млекопитающего успешно «лечат» от злокачественного новообразования, экспрессирующего полипептид CD79b, если после получения терапевтического количества антитела к CD79b с помощью способов в соответствии с данным изобретением, у пациента наблюдают заметное и/или поддающееся измерению снижение или отсутствие одного или более из следующих: снижение количества злокачественных клеток или отсутствие злокачественных клеток; снижение размера опухоли; ингибирование (т.е. замедление до некоторой степени и предпочтительно остановка) инфильтрации злокачественных клеток в периферические органы, включая распространение злокачественной опухоли в мягкую ткань и кость; ингибирование (т.е. замедление до некоторой степени и предпочтительно остановка) метастазирования опухолей; ингибирование, до некоторой степени, роста опухоли; и/или смягчение, до некоторой степени, одного или более симптомов, ассоциированных с конкретной злокачественной опухолью; снижение заболеваемости или смертности, и улучшение качества жизни. В зависимости от того, может ли антитело к CD79b предотвращать рост и/или уничтожать существующие злокачественные клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Снижение этих признаков или симптомов также может ощущаться пациентом.

[0138] Указанные выше параметры для оценки успешного лечения и улучшения заболевания легко определять общепринятыми способами, известными терапевту. Для терапии злокачественного новообразования, эффективность можно определять, например, посредством оценки времени до прогрессирования заболевания (ТТР) и/или определения скорости ответа (RR). Метастазирование можно определять посредством определения стадии заболевания и посредством сканирования костей, и тестов уровня кальция и других ферментов для определения распространения в кость. Также для поиска распространения в таз и лимфатические узлы в данной области можно получать СТ-изображения. Рентгенографию грудной клетки и измерение уровней ферментов печени известными способами используют для поиска метастазов в легких и печени, соответственно. Другие общепринятые способы мониторинга заболевания включают трансректальную ультразвуковую эхографию (TRUS) и трансректальную пункционную биопсию (TRNB).

[0139] Для рака мочевого пузыря, который представляет собой более локализованное злокачественное новообразование, способы определения прогрессирования заболевания включают цитологическую оценку мочи цистоскопией, мониторинг наличия крови в моче, визуализацию уротелиального тракта с помощью ультразвукового исследования или внутривенную пиелографию, компьютерную томографию (СТ) и магнитнорезонансную томографию (MRI). Наличие отдаленных метастазов можно оценивать посредством СТ живота, рентгенографии грудной клетки или радионуклидной визуализации скелета.

[0140] «Длительное» введение относится к введению средства(средств) постоянно в противоположность кратковременному режиму, чтобы поддерживать исходный терапевтический эффект (активность) в течение длительного периода времени. «Прерывающееся» введение представляет собой лечение, которое не проводится без прерывания, а вместо этого является циклическим.

[0141] «Индивид», «субъект» или «пациент» представляет собой позвоночное. В определенных вариантах реализации, позвоночное является млекопитающим. Млекопитающие включают, но не ограничиваются ими, сельскохозяйственных животных (таких как коровы), спортивных животных, домашних животных (таких как кошки, собаки и лошади), приматов, мышей и крыс. В определенных вариантах реализации, млекопитающим является человек.

[0142] Введение «в сочетании с» одним или более дополнительными лекарственными средствами включает одновременное (совместное) и последовательное введение в любом порядке.

[0143] Термин «носители», в контексте данного документа, включают фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы, которые являются нетоксичными для клетки или млекопитающего, подвергаемых их воздействию, в применяемых дозировках и концентрациях. Часто физиологически приемлемый носитель представляет собой водный рН-буферный раствор. Примеры физиологически приемлемых носителей включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту; низкомолекулярные (менее чем около 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; спирты Сахаров, такие как маннит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN®, полиэтиленгликоль (ПЭГ) или PLURONICS®.

[0144] Термин «фармацевтический состав» или «фармацевтическая композиция» относится к препарату иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, который имеет такую форму, чтобы обеспечить эффективность биологической активности активного ингредиента, и который не содержит дополнительных компонентов, которые являются неприемлемо токсичными для субъекта, которому состав будет введен. Такие композиции являются стерильными. «Фармацевтически приемлемые» вспомогательные вещества (носители, добавки) представляют собой вспомогательные вещества, которые могут быть разумно введены субъекту-млекопитающему для обеспечения эффективной дозы применяемого активного ингредиента.

[0145] «Стерильная» композиция является асептической, не содержит или практически не содержит живых микроорганизмов и их спор.

[0146] «Эффективное количество» иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, раскрытого в данном документе, представляет собой количество, достаточное для осуществления конкретной заявленной цели. «Эффективное количество» может быть определено эмпирически и общепринятыми способами, в зависимости от поставленной цели.

[0147] Термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, эффективному для «лечения» заболевания или нарушения у субъекта или млекопитающего. В случае злокачественного новообразования, терапевтически эффективное количество лекарственного средства может снижать количество клеток злокачественного новообразования; уменьшать размер опухоли; ингибировать (т.е. замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать) инфильтрацию клеток злокачественного новообразования в периферические органы; ингибировать (т.е. замедлять до некоторой степени и предпочтительно останавливать) метастазирование опухоли; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли; и/или смягчать до некоторой степени один или более симптомов, ассоциированных со злокачественной опухолью. См. определение «лечения» в данном документе. В зависимости от того, может ли лекарственное средство препятствовать росту и/или уничтожать существующие злокачественные клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим «Профилактически эффективное количество» относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого профилактического результата. Как правило, но не обязательно, поскольку профилактическую дозу используют у индивидов до заболевания или на его ранних стадиях, профилактически эффективное количество будет меньшим, чем терапевтически эффективное количество.

[0148] «Ингибирующее рост количество» иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, представляет собой количество, способное ингибировать рост клетки, особенно опухолевой, например, клетки злокачественного новообразования, либо in vitro, либо in vivo. «Ингибирующее рост количество» иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, для целей ингибирования неопластического клеточного роста можно определять эмпирически и общепринятыми способами.

[0149] «Цитотоксическое количество» иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, представляет собой количество, способное вызвать разрушение клетки, особенно опухолевой, например, клетки злокачественного новообразования, либо in vitro, либо in vivo. «Цитотоксическое количество» антитела к CD79b для целей ингибирования неопластического роста клеток можно определять эмпирически и общепринятыми способами.

[0150] «Экспрессирующая CD79b клетка» представляет собой клетку, которая экспрессирует эндогенный или трансфицированный полипептид CD79b либо на клеточной поверхности, либо в секретируемой форме. «Экспрессирующее CD79b злокачественное новообразование» представляет собой злокачественное новообразование, содержащую клетки, которые имеют полипептид CD79b, представленный на клеточной поверхности, или которые продуцируют и секретируют полипептид CD79b. «Экспрессирующее CD79b злокачественное новообразование» необязательно продуцирует достаточные уровни полипептида CD79b на поверхности его клеток, чтобы антитело к CD79b могло связаться с ним и оказывать терапевтический эффект в отношении злокачественного новообразования. В другом варианте реализации, «Экспрессирующее CD79b злокачественное новообразование» необязательно продуцирует и секретирует достаточные уровни полипептида CD79b, так чтобы антитело-антагонист к CD79b могло связываться с ним и иметь терапевтический эффект в отношении злокачественного новообразования. В отношении последнего, антагонист может представлять собой антисмысловой олигонуклеотид, который снижает, ингибирует или предотвращает продукцию и секрецию секретируемого полипептида CD79b опухолевыми клетками. Злокачественное новообразование, которое «сверхэкспрессирует» полипептид CD79b представляет собой злокачественное новообразование, которое имеет, или продуцирует и секретирует, значительно более высокие уровни полипептида CD79b на своей клеточной поверхности, по сравнению с доброкачественной клеткой ткани того же типа. Такая сверхэкспрессия может быть вызвана амплификацией гена или повышенной транскрипцией, или трансляцией. Сверхэкспрессия полипептида CD79b может быть определена в анализе для детекции или прогноза путем оценки повышенных уровней белка CD79b, присутствующего на поверхности клетки, или секретируемого клеткой (например, с помощью иммуногистохимического анализа с применением антител к CD79b, полученных против выделенного полипептида CD79b, который может быть получен с применением технологии рекомбинантных ДНК из выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид CD79b; анализа FACS и т.д.). Альтернативно или дополнительно, можно измерять уровни кодирующей полипептид CD79b нуклеиновой кислоты или мРНК в клетке, например, посредством флуоресцентной гибридизации in situ с применением зонда на основе нуклеиновой кислоты, соответствующего кодирующей CD79b нуклеиновой кислоте или комплементарной ей последовательности; (FISH; см. W098/45479, опубликованную в октябре 1998 года), Саузерн-блоттинг, Нозерн-блоттинг или способы полимеразной цепной реакции (ПЦР), такие как количественная ПЦР в реальном времени (кПЦР-РВ). Также можно исследовать сверхэкспрессию полипептида CD79b путем измерения отделяющегося от клетки антигена в биологической жидкости, такой как сыворотка, например, с применением анализов на основе антител (также см., например, патент США №4933294, выданный 12 июня 1990 года; W091/05264, опубликованную 18 апреля 1991 года; патент США 5401638, выданный 28 марта 1995 года; и Sias et al., J. Immunol. Methods 132:73-80 (1990)). Помимо указанных выше анализов, специалисту в данной области техники доступны различные анализы in vivo. Например, можно воздействовать на клетки в организме пациента антителом, которое необязательно является меченным поддающейся детекции меткой, например, радиоактивным изотопом, и можно оценивать связывание антитела с клетками пациента, например, путем внешнего сканирования на радиоактивность или путем анализа биопсии, взятой у пациента, на которого ранее воздействовали антителом.

[0151] Термин «цитотоксическое средство», в контексте данного документа, относится к веществу, которое ингибирует функционирование клеток, или препятствует ему, и/или вызывает разрушение клеток. Подразумевают, что термин включает токсины, такие как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, включая их фрагменты и/или варианты, способные оказывать пагубное воздействие на рост или пролиферацию клетки. В одном варианте реализации, цитотоксическое средство представляет собой монометилауристатин Е (ММАЕ).

[0152] Термин «лиофилизированная» композиция, в контексте данного документа, относится к жидкой композиции, которую подвергали лиофильной сушке в процессе лиофилизации, с получением «массы». В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная масса стабильна в условиях хранения (5°С±3°С и в защищенном от света месте) без значительных изменений структуры, цвета, внешнего вида или содержания влаги. В конкретном варианте реализации, лиофилизированная масса является гладкой без углублений в условиях хранения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения лиофилизированная композиция стабильна в течение около 60 месяцев. В некоторых вариантах реализации данного изобретения лиофилизированная композиция стабильна в течение около 48 месяцев.

[0153] «Стабильная» композиция» представляет собой композицию, в которой иммуноконъюгат в ней по существу сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность, и/или биологическую активность при хранении. Предпочтительно композиция по существу сохраняет свою физическую и химическую стабильность, а также свою биологическую активность при хранении. Срок хранения обычно выбирается в зависимости от предполагаемого срока годности препарата. В данной области техники доступны различные аналитические способы измерения стабильности белка, которые рассматриваются, например, в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) и Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993). Стабильность может быть измерена при выбранной температуре в течение выбранного периода времени. Стабильность можно оценить качественно и/или количественно множеством различных способов, включая оценку образования агрегатов (например, с помощью эксклюзионной хроматографии, путем измерения мутности и/или визуального контроля); путем оценки гетерогенности заряда с применением катионообменной хроматографии, визуализационно-контролируемого капиллярного изоэлектрического фокусирования (вкИЭФв) или капиллярно-зонального электрофореза; анализа амино-концевой или карбоксиконцевой последовательности; масс-спектрометрический анализ; ДНС-ПААГ анализ для сравнения восстановленных и интактных антител; анализ пептидной карты (например, триптический или LYS-C); оценка биологической активности или антигенсвязывающей функции антитела; и т.п.Нестабильность может включать одно или более из следующих: агрегация, дезамидирование (например, дезамидирование Asn), окисление (например, окисление Met), изомеризация (например, изомеризация Asp), клипирование/гидролиз/фрагментация (например, фрагментация шарнирной области), образование сукцинимида, неспаренный цистеин(ы), удлинение N-конца, процессинг С-конца, различия в гликозилировании и т.д.

[0154] Иммуноконъюгат «сохраняет свою физическую стабильность» в фармацевтической композиции, если он не проявляет признаков или проявляет очень мало признаков агрегации, преципитации и/или денатурации при визуальном исследовании цвета и/или прозрачности, или при измерении с помощью рассеяния УФ-света или эксклюзионной хроматографии.

[0155] Иммуноконъюгат «сохраняет свою химическую стабильность» в фармацевтической композиции, если химическая стабильность в данный момент времени такова, что Иммуноконъюгат все еще сохраняет свою биологическую активность, как определено ниже. Химическую стабильность можно оценить путем обнаружения и количественного определения химически измененных форм белковой части иммуноконъюгата (например, антитела). Химическое изменение может включать модификацию размера (например, клипирование), что может быть оценено, например, с помощью эксклюзионной хроматографии, ДНС-ПААГ и/или матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации/времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI/TOF MS). Другие типы химического изменения включают изменение заряда (например, происходящее в результате дезамидирования), которое можно оценить, например, с помощью ионообменной хроматографии или вкИЭФ. Дополнительно или альтернативно, химическая стабильность иммуноконъюгата может быть оценена путем обнаружения и количественного определения химически измененных форм лекарственного фрагмента иммуноконъюгата. Дополнительно или альтернативно, химическая стабильность иммуноконъюгата может быть оценена путем измерения соотношения лекарственное средство: антитело (СЛСА), например, с помощью хроматография с гидрофобным взаимодействием (ХГВ) для определения распределения СЛСА в композиции, содержащей иммуноконъюгат.

[0156] Антитело иммуноконъюгата «сохраняет свою биологическую активность» в фармацевтической композиции, если биологическая активность белковой части иммуноконъюгата (например, антитела, такого как антитело к CD79b) в данный момент времени составляет по меньшей мере около 60% (в пределах ошибок анализа) биологической активности, проявленной во время приготовления фармацевтической композиции, содержащей иммуноконъюгат, как определено в анализе (например, в анализе связывания антигена).

[0157] «Дезамидированное» моноклональное антитело в данном документе представляет собой антитело, в котором один или более его остатков аспарагина были дериватизированы, например, с аспарагиновой кислотой или изоаспарагиновой кислотой.

[0158] «Окисленное» моноклональное антитело в данном документе представляет собой антитело, в котором один или более остатков триптофана, и/или один или более его метионинов были окислены.

[0159] «Гликозилированное» моноклональное антитело в данном документе представляет собой антитело, в котором один или более остатков лизина гликированы.

[0160] Антитело, которое «чувствительно к дезамидированию», представляет собой антитело, содержащее один или более остатков, которые, как было обнаружено, склонны к дезамидированию.

[0161] Антитело, которое «чувствительно к окислению», представляет собой антитело, содержащее один или более остатков, которые, как было обнаружено, склонны к окислению.

[0162] Антитело, которое «подвержено агрегации», представляет собой антитело, которое, как было обнаружено, образует агрегаты с другой молекулой (молекулами) антитела, особенно при замораживании и/или встряхивании.

[0163] Антитело, которое «чувствительно к фрагментации», представляет собой антитело, которое, как было обнаружено, расщепляется на два или более фрагментов, например, в его шарнирной области.

[0164] Под «уменьшением дезамидирования, окисления, агрегации или фрагментации» подразумевается предотвращение или уменьшение степени дезамидирования, окисления, агрегации или фрагментации по сравнению с моноклональным антителом, входящим в другую композицию.

[0165] Входящее в состав композиции антитело предпочтительно является по существу чистым и желательно по существу гомогенным (например, свободным от загрязняющих белков и т.д.). «По существу чистое» антитело означает композицию, содержащую по меньшей мере около 90% по массе антитела, исходя из общей массы белков в композиции, предпочтительно, по меньшей мере около 95% по массе. «По существу гомогенное» антитело означает композицию, содержащую по меньшей мере около 99% по массе антитела в расчете на общую массу белков в композиции.

[0166] Под «изотоническим» подразумевается, что интересующая композиция имеет по существу такое же осмотическое давление, что и человеческая кровь. Изотонические композиции обычно имеют осмотическое давление от около 250 до 350 мОсм. Изотоничность может быть измерена, например, с помощью парофазного осмометра или осмометра по точке замерзания.

[0167] Термин «буферный агент», в контексте данного документа, относится к забуференному раствору, который сопротивляется изменениям рН под действием его компонентов кислотно-основного конъюгата. Неограничивающие примеры буферных агентов в данном документе включают гистидин, фосфат натрия и сукцинат натрия. Буферный агент в соответствии с данным документом предпочтительно имеет рН в диапазоне от около 4,5 до около 7,0, предпочтительно от около 5,0 до около 6,0. В одном варианте реализации, буферный агент имеет рН 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 или 6,0. В иллюстративном варианте реализации, буферный агент имеет рН 5,3. Например, сукцинат натрия является примером буферного агента, который будет регулировать рН в данном диапазоне.

[0168] Термин «поверхностно-активное вещество», в контексте данного документа, относится к поверхностно-активному средству, предпочтительно неионогенному поверхностно-активному веществу. Примеры поверхностно-активных веществ в данном документе включают полисорбат (например, полисорбат 20 и полисорбат 80); полоксамер (например, полоксамер 188);

Тритон; додецилсульфат натрия (ДСН); лаурелсульфат натрия; октилгликозид натрия; лаурил-, миристил-, линолеил- или стеарилсульфобетаин; лаурил-, миристил-, линолеил- или стеарилсаркозин; линолеил-, миристил- или цетилбетаин; лауроамидопропил-, кокамидопропил-, линолеамидопропил-, миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропилбетаин (например, лауроамидопропил); миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропилдиметиламин; метилкокоил- или метилолеилтаурат динатрия; и серия MONAQUATTM (Mona Industries, Inc., Патерсон, Нью-Джерси); полиэтилгликоль, полипропилгликоль и сополимеры этилена и пропиленгликоля (например, Pluronics, PF68 и т.д.); и т.п. В одном варианте реализации, поверхностно-активное вещество в данном документе представляет собой полисорбат 20. В другом варианте реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80.

[0169] Термин «сахар», в контексте данного документа, относится к растворимым углеводам. Неограничивающие примеры Сахаров включают глюкозу, фруктозу, сахарозу, трегалозу, аргинин, глицерин, пролин, декстран и сахароспирты, такие как глицерин, маннит и сорбитол.

II. Фармацевтические композиции

[0170] В одном аспекте, в данном изобретении предлагается фармацевтическая композиция, содержащая иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, и поверхностно-активное вещество, причем концентрация поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере 0,06% масс./об. (например, 0,6 мг/мл), и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5).

[0171] В некоторых вариантах реализации, композиция в соответствии с данным изобретением лиофилизирована. В некоторых вариантах реализации, раскрытая в данном документе композиция представляет собой восстановленную композицию, то есть композицию, которая была восстановлена из лиофилизированной массы. В некоторых вариантах реализации, предлагается стеклянный флакон на 20 мл (например, герметичный флакон), который содержит фармацевтическую композицию (например, лиофилизированную композицию или восстановленную композицию), описанную в данном документе.

А. Иммуноконъюгаты

[0172] Данное изобретение также относится к иммуноконъюгатам (взаимозаменяемо обозначаемым как «конъюгаты антитело-лекарственное средство» или «ADC»), содержащим антитело, конъюгированное с низкомолекулярным токсином, таким как монометилауристатин (ММАЕ) (синтетический аналог доластатина). Данное изобретение предлагает иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, формулы Ab - (L - D)p, где Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); L представляет собой линкер, содержащий 6-малеимидокапроил-валин-цитруллин-пара-аминобензилоксикарбонил (MC-val-cit-PAB); D представляет собой ММАЕ; и р представляет собой значение от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5); и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет структуру:

Иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, в соответствии с данным изобретением может относится к анти-CD79b-MC-val-cit-MMAE, анти-CD79b-MC-vc-MMAE или анти-CD79b-vc-MMAE. Полатузумаба ведотин является примером иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в соответствии с данным изобретением. Полатузумаба ведотин имеет регистрационный номер CAS 1313206-42-6, номер IUPHAR/BPS 8404 и номер KEGG D 10761. Термины «Полатузумаба ведотин», «DCDS4501A» и «RG7596» охватывают все соответствующие иммуноконъюгаты, которые отвечают требованиям, необходимым для получения разрешения на продажу идентичного или биоэквивалентного препарата в стране или на территории, выбранной из группы стран, состоящей из США, стран Европы и Японии.

[0173] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет от около 5 мг/мл до около 60 мг/мл, от около 10 мг/мл до около 50 мг/мл, от около 10 мг/мл до около 40 мг/мл, от около 10 мг/мл до около 30 мг/мл или от около 10 мг/мл до около 20 мг/мл. В некотором варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет около 5 мг/мл, около 6 мг/мл, около 7 мг/мл, около 8 мг/мл, около 9 мг/мл, около 10 мг/мл, около 11 мг/мл, около 12 мг/мл, около 13 мг/мл, около 14 мг/мл, около 15 мг/мл, около 16 мг/мл, около 17 мг/мл, около 18 мг/мл. мл, около 19 мг/мл, около 20 мг/мл, около 25 мг/мл, около 30 мг/мл, около 35 мг/мл, около 40 мг/мл, около 45 мг/мл, около 50 мг/мл, около 55 мг/мл или около 60 мг/мл.

[0174] В некоторых вариантах реализации любого из вариантов реализации, представленных в данном документе, «около» значение или параметр охватывает диапазон ошибок в любом из следующих значений: ±10%, ±9%, ±8%, ±7%, ±6%, ±5%, ±4%, ±3%, ±2% или ±1% от заявленного значения или параметра, включая любой диапазон между этими значениями.

[0175] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет от около 10 мг/мл до около 20 мг/мл. В иллюстративном варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет около 10 мг/мл. В другом иллюстративном варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет около 20 мг/мл.

[0176] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет от 5 мг/мл до 60 мг/мл, от 10 мг/мл до 50 мг/мл, от 10 мг/мл до 40 мг/мл, от 10 мг/мл до 30 мг/мл или от 10 мг/мл до 20 мг/мл. В конкретном варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет 5 мг/мл, 6 мг/мл, 7 мг/мл, 8 мг/мл, 9 мг/мл, мг/мл, 11 мг/мл, 12 мг/мл, 13 мг/мл, 14 мг/мл, 15 мг/мл, 16 мг/мл, 17 мг/мл, 18 мг/мл, 19 мг/мл, 20 мг/мл, 25 мг/мл, 30 мг/мл, 35 мг/мл, 40 мг/мл, 45 мг/мл, 50 мг/мл, 55 мг/мл или 60 мг/мл.

[0177] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет от 10 мг/мл до 20 мг/мл. В иллюстративном варианте реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет 10 мг/мл. В другом иллюстративном варианте реализации, иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, находится в фармацевтической композиции в концентрации 20 мг/мл.

[0178] Как предполагается в данном документе, иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет Формулу I, как проиллюстрировано ниже, где антитело к CD79b или его фрагмент (Ab) конъюгированы (т.е. ковалентно присоединены) с фрагментом лекарственного средства ММАЕ (D) через линкер (L).

[0179] В Формуле I, p представляет собой среднее количество фрагментов лекарственного средства на антитело, которое может варьировать, например, от около 1 до около 20 фрагментов лекарственного средства на антитело, и в определенных вариантах реализации от 1 до около 8 фрагментов лекарственного средства на антитело. Данное изобретение относится к композиции, содержащей смесь соединений антитело-лекарственное средство соединений Формулы I, где средняя нагрузка лекарственным средством на антитело составляет от около 2 до около 5 или от около 3 до около 4, например, 3,5.

1. Антитело к CD79b

[0180] Данное изобретение предлагает иммуноконъюгаты, содержащие антитело к CD79b или его функциональные фрагменты.

[0181] В одном аспекте данное изобретение предлагает антитело к CD79b, которое предпочтительно специфически связывается с CD79b. Необязательно, антитело представляет собой моноклональное антитело, фрагмент антитела, включая Fab, Fab', F(ab')2 и фрагмент Fv, диатело, однодоменное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, одноцепочечное антитело или антитело, которое конкурентно ингибирует связывание полипептидного антитела к CD79b с его соответствующим антигенным эпитопом. Антитела в соответствии с данным изобретением могут необязательно продуцироваться в клетках СНО или бактериальных клетках, и предпочтительно индуцировать гибель клетки, с которой они связываются.

[0182] Данное изобретение предлагает иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, включающий гуманизированное антитело к CD79b, где моновалентная аффинность антитела к CD79b (например, аффинность антитела в виде Fab-фрагмента к CD79b) по существу такая же, как моновалентная аффинность антитела мыши (например, аффинность антитела мыши как Fab-фрагмента к CD79b) или химерного антитела (например, аффинность химерного антитела как Fab-фрагмента к CD79b).

[0183] В одном варианте реализации, данное изобретение предлагает иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, включающий гуманизированное антитело к CD79b, в котором аффинность антитела в его бивалентной форме к CD79b (например, аффинность антитела в виде IgG к CD79b) составляет 0,3 нМ или лучше. В другом варианте реализации, данное изобретение предлагает гуманизированное антитело к CD79b, в котором аффинность антитела в его бивалентной форме к CD79b (например, аффинность антитела в виде IgG к CD79b) составляет 0,5 нМ. В дополнительном варианте реализации, данное изобретение предлагает гуманизированное антитело к CD79b, в котором аффинность антитела в его бивалентной форме к CD79b (например, аффинность антитела в виде IgG к CD79b) составляет 0,5 нМ +/- 0,1. В другом варианте реализации, данное изобретение предлагает гуманизированное антитело к CD79b, в котором аффинность антитела в его бивалентной форме к CD79b (например, аффинность антитела в виде IgG к CD79b) составляет от 0,3 нМ до 0,7 нМ. В другом варианте реализации, данное изобретение предлагает гуманизированное антитело к CD79b, в котором аффинность антитела в его бивалентной форме к CD79b (например, аффинность антитела в виде IgG к CD79b) составляет от 0,4 нМ до 0,6 нМ. В другом варианте реализации, данное изобретение предлагает гуманизированное антитело к CD79b, в котором аффинность антитела в его бивалентной форме к CD79b (например, аффинность антитела в виде IgG к CD79b) составляет от 0,5 нМ до 0,55 нМ.

[0184] Как хорошо известно в данной области, аффинность связывания лиганда с его рецептором можно определить с помощью любого из множества анализов и выразить с помощью различных количественных величин. Соответственно, в одном варианте реализации аффинность связывания выражается в виде значений Kd, и она отражает собственно аффинность связывания (например, с минимизированными эффектами авидности). Как правило, и предпочтительно, аффинность связывания измеряют in vitro, либо в бесклеточных условиях, либо в связанных с клетками условиях. Как описано более подробно в данном документе, кратность отличия аффинности связывания можно количественно определять в значениях отношения величины одновалентной аффинности связывания гуманизированного антитела (например, в Fab-форме) и величины одновалентной аффинности связывания эталонного/сравнительного антитела (например, в Fab-форме)(например, антитела мыши, имеющего донорные последовательности гипервариабельных областей), где величины аффинности связывания определяют в сходных условиях анализа. Таким образом, в одном варианте реализации, кратную разницу в аффинности связывания определяют как отношение значений Kd гуманизированного антитела в Fab-форме и указанного эталонного/сравнительного Fab-антитела. Например, в одном варианте реализации, если антитело в соответствии с данным изобретением (А) обладает аффинностью, которая в «3 раза ниже» аффинности эталонного антитела (М), тогда, если величина Kd для А составляет 3×, величина Kd для М составляет 1×, и отношение Kd А к Kd М составляет 3:1. Напротив, в одном варианте реализации, если антитело в соответствии с данным изобретением (С) обладает аффинностью, которая в «3 раза превышает» аффинность эталонного антитела (R), тогда, если величина Kd для С составляет 1×, величина Kd для R составляет 3×, и отношение Kd С к Kd R составляет 1:3. Для получения показателей аффинности связывания можно применять любой из множества анализов, известных в данной области техники, включая анализы, описанные в данном документе, в том числе, например, Biacore, радиоиммунный анализ (РИА) и ИФА.

[0185] Предлагаемое антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-Н3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6).

[0186] В некоторых вариантах реализации данного изобретения, антитело к CD79b содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPGKGLEWIGEILPG GGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRVPIRLDYW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 7)

и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность:

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPLTFGQGTKVEIK R(SEQ ID NO: 8).

[0187] В некоторых вариантах реализации, тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPGKGLEWIGEILPGGGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRVPIRLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 9)

и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность:

DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKPGKAPKLLIYAA SNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPLTFGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE SVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ IDNO: 10).

2. Линкер

[0188] Данное изобретение предлагает линкер, который содержит несколько компонентов, включая 6-малеимидокапроил («МС»), валин-цитруллин («val-cit» или «vc») и п-аминобензилоксикарбонил («РАВ»). Такие линкерные компоненты известны в данной области техники и кратко описаны ниже.

[0189] Линкер, в контексте данного документа, имеет Формулу II:

[0190] где А представляет собой удлиняющий элемент, и а представляет собой целое число от 0 до 1; W представляет собой аминокислотный элемент, и w представляет собой целое число от 0 до 12; Y представляет собой спейсерный элемент, и у равен 0, 1 или 2. «Удлиняющий элемент» связывает антитело с другим линкерным компонентом. Предоставленный в данном документе удлиняющий элемент, МС, представлен ниже (где волнистой линией указаны участки ковалентного присоединения к антителу):

[0191] Аминокислотный элемент позволяет расщепление линкера протеазой, тем самым облегчая высвобождение лекарственного средства из иммуноконъюгата под воздействием внутриклеточных протеаз, таких как лизосомальные ферменты. См., например, Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784. Аминокислотные элементы могут содержать аминокислотные остатки, которые встречаются в природе, а также минорные аминокислоты и не встречающиеся в природе аналоги аминокислот, такие как цитруллин. Аминокислотные элементы можно конструировать и оптимизировать в отношении их селективности для ферментативного расщепления конкретным ферментом, например, ассоциированной с опухолью протеазой, катепсином В, С и D, или протеазой плазмина. Представленный в данном документе аминокислотный элемент представляет собой дипептид валин-цитруллин (vc или val-cit).

[0192] Термин «спейсерный» элемент, в контексте данного документа, является самоотщепляющимся и связывает антитело с фрагментом лекарственного средства посредством удлиняющего элемента и аминокислотного элемента. «Самоотщепляющийся» спейсерный элемент позволяет высвобождение группы лекарственного средства без отдельной стадии гидролиза через амидную связь, и получают карбамат, метилкарбамат или карбонат между бензиловым спиртом и цитотоксическим средством. См., например, Hamann et al. (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103. Предоставленный в данном документе спейсерный элемент представляет собой п-аминобензилоксикарбонил (РАВ).

[0193] Линкерные компоненты, включая удлиняющие, спейсерные и аминокислотные элементы, могут быть синтезированы способами, известными в данной области техники, такими как способы, описанные в США 2005-0238649А1.

[0194] В соответствии с данным изобретением линкер представляет собой MC-val-cit-PAB, как продемонстрировано ниже.

3. Монометилауристатин (ММАЕ)

[0195] В соответствии с данным изобретением иммуноконъюгат содержит антитело к CD79b или его фрагмент, конъюгированные с ауристатином, синтетическим аналогом доластатина (патенты США №№5635483; 5780588).

Было показано, что доластатины и ауристатины нарушают динамику микротрубочек, гидролиз GTP и деление ядер и клеток (Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584) и обладают активностью против злокачественного новообразования (патент США №5663149) и противогрибковой активностью (Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). Группу лекарственного средства в виде доластатина или ауристатина можно связывать с антителом через N(амино)-конец или С(карбоксильный) -конец пептидной группы лекарственного средства (WO 02/088172). В соответствии с данным изобретением уристатин представляет собой синтетический незаряженный пентапептид монометилауристатина (ММАЕ), связанный с N-концом, как продемонстрировано ниже.

[0196] Иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, Формулы I, содержащий антитело к CD79b или его фрагмент, линкер и различные линкерные компоненты и ММАЕ, проиллюстрирован ниже со следующими сокращениями (где «Ab» представляет собой антитело к CD79b или его фрагмент; р равен от 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5), «Val-Cit» или «vc» представляет собой дипептид валин-цитруллин и «S» представляет собой атом серы.

[0197] Следует отметить, что в определенных описаниях структуры иммуноконъюгата, связанного через серу в данном документе, антитело представлено как «Ab-S», только для того, чтобы указать на признак наличия связи через серу, но не для того, чтобы указать на то, что конкретный атом серы несет несколько групп линкер-лекарственное средство. Левая скобка в следующих структурах также может быть помещена слева от атома серы, между Ab и S, что является эквивалентным описанием иммуноконъюгата в соответствии с данным изобретением, описанного в данном документе.

4. Нагрузка лекарственным средством

[0198] Нагрузка лекарственным средством представлена р, средним числом групп лекарственного средства на антитело в молекуле Формулы I. Нагрузка лекарственным средством может находиться в диапазоне от 1 до 20 групп лекарственного средства (D) на антитело. КАЛП Формулы I включают коллекции антител, конъюгированных с числом групп лекарственного средства в диапазоне от 1 до 20. Среднее число групп лекарственного средства на антитело в препаратах КАЛП после реакций конъюгации может быть охарактеризовано общепринятыми способами, такими как масс-спектрометрия, анализ ИФА и ВЭЖХ. Кроме того, также может быть определено количественное распределение КАЛП в значениях р. В некоторых случаях, разделение, очистку и характеристику гомогенного КАЛП, где р представляет собой определенное значение для КАЛП с другой нагрузкой лекарственным средством, можно проводить способами, такими как обращено-фазовая ВЭЖХ или электрофорез. Таким образом, фармацевтические композиции конъюгатов антитело-лекарственное средство Формулы I могут представлять собой гетерогенную смесь таких конъюгатов, в которых антитела связаны с 1, 2, 3, 4 или более группами лекарственного средства.

[0199] Для некоторых конъюгатов антитело-лекарственное средство р может быть ограничено количеством участков связывания на антителе. Например, в случае, если связывание осуществляется через тиольную группу цистеина, как в вариантах реализации, представленных в данном документе, антитело может иметь только одну или более тиольных групп цистеина, или оно может иметь только одну или более достаточно реакционноспособных тиольных групп, через которые может быть присоединен линкер. В некоторых вариантах реализации, более высокая нагрузка лекарственным средством, например, р > 5, может привести к агрегации, нерастворимости, токсичности или потере способности проникать в клетки определенных конъюгатов антитело-лекарственное средство. В некоторых вариантах реализации, нагрузка лекарственным средством для КАЛП в соответствии с данным изобретением находится в диапазоне от 1 до около 8; от около 2 до около 6; или от около 3 до около 5, или около 3,5. Действительно, было показано, что для определенных КАЛП оптимальное отношение групп лекарственного средства к антителу может составлять менее 8, и оно может составлять от около 2 до около 5. См. США 2005-0238649 А1.

[0200] В некоторых вариантах реализации, в ходе реакции конъюгации происходит конъюгация меньшего количества групп лекарственного средства, чем теоретическое количество. Антитело может содержать, например, остатки лизина, которые не вступают в контакт с промежуточным соединением лекарственное средство-линкер или линкерным реагентом, как рассмотрено ниже. Как правило, антитела не содержат множества свободных и реакционноспособных тиольных групп цистеина, которые могут быть связаны с группой лекарственного средства; действительно, большинство тиольных остатков цистеина в антителах существуют в качестве дисульфидных мостиков. В некоторых вариантах реализации, антитело можно восстанавливать восстановителем, таким как дитиотреитол (DTT) или трикарбонилэтилфосфин (ТСЕР), в частично или полностью восстанавливающих условиях, для получения реакционноспособных тиольных групп цистеина. В некоторых вариантах реализации, антитело подвергают денатурирующим условиям для выявления реакционноспособных нуклеофильных групп, таких как лизин или цистеин.

[0201] Нагрузку (отношение лекарственное средство/антитело) КАЛП можно контролировать различными способами, например, путем: (i) ограничение молярного избытка промежуточного соединения лекарственное средство-линкер или линкерного реагента относительно антитела, (ii) ограничения времени или температуры реакции конъюгации, и (iii) частичных или ограничивающих восстанавливающих условий для модификации тиольной группы цистеина.

[0202] Следует понимать, что когда более одной нуклеофильной группы вступает в контакт с промежуточным соединением лекарственное средство-линкер или линкерным реагентом, с последующей реакцией с реагентом лекарственного средства, тогда полученный продукт представляет собой смесь соединений КАЛП с одной или более распределенными группами лекарственного средства, связанными с антителом. Среднее число групп лекарственного средства на антитело в смеси можно вычислить с помощью двойного анализа ИФА с антителами, которые являются специфичными к антителу и специфичными к лекарственному средству. Отдельные молекулы КАЛП можно идентифицировать в смеси с помощью масс-спектрометрии и разделять посредством ВЭЖХ, например, хроматографии гидрофобного взаимодействия (см., например, McDonagh et al (2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., et al. "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., et al. "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004). В некоторых вариантах реализации, из смеси конъюгатов можно выделять гомогенный КАЛП с одним значением нагрузки путем электрофореза или хроматографии.

5. Примерные способы получения иммуноконъюгатов

[0203] КАЛП формулы I может быть получен несколькими способами с применением реакций, условий и реагентов органической химии, известных специалистам в данной области техники, включая: (1) приведение в контакт нуклеофильной группы антитела с двухвалентным линкерным реагентом с образованием Ab-L через ковалентную связь, с последующим приведением в контакт с группой лекарственного средства D; и (2) приведение в контакт нуклеофильной группы в группе лекарственного средства с двухвалентным линкерным реагентом, с образованием D-L, через ковалентную связь, с последующим приведением в контакт с нуклеофильной группой антитела. Иллюстративные способы получения КАЛП Формулы I с помощью последнего способа описаны в США 2005-0238649 Al, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

[0204] Нуклеофильные группы на антителах включают, но не ограничиваются ими: (i) N-концевые аминогруппы, (ii) аминогруппы боковых цепей, например, лизина, (iii) тиольные группы боковых цепей, например, цистеина, и (iv) гидроксильные или аминогруппы Сахаров, где антитело является гликозилированным. Амино, тиольная и гидроксильная группы являются нуклеофильными и способны вступать в контакт с образованием ковалентных связей с электрофильными группами на линкерных группах и линкерных реагентах, включая: (i) активные сложные эфиры, такие как сложные эфиры NHS, сложные эфиры HOBt, галогенформиаты и галогенангидриды; (ii) алкил и бензилгалогениды, такие как галогенацетамиды; (iii) альдегидны, кетоны, карбоксильные и малеимидные группы. Определенные антитела обладают поддающимися восстановлению дисульфидами между цепями, т.е. цистеиновыми мостиками. Реакционную способность антитела для конъюгации с линкерными реагентами можно обеспечивать посредством обработки восстановителем, таким как DTT (дитиотреитол) или трикарбонилэтилфосфин (ТСЕР), так чтобы антитело полностью или частично восстанавливалось. Каждый цистеиновый мостик, таким образом, может образовывать, теоретически, два реакционноспособных тиольных нуклеофила. Дополнительные нуклеофильные группы можно вносить в антитела посредством модификации остатков лизина, например, реакцией остатков лизина с 2-иминотиоланом (реагентом Трота), приводящей к превращению амина в тиол. Реакционно-способные тиольные группы можно вносить в антитело путем встраивания одного, двух, трех, четырех или более остатков цистеина (например, путем получения вариантов антител, содержащих один или более ненативных аминокислотных остатков цистеина).

[0205] Конъюгаты антитело-лекарственное средство в соответствии с данным изобретением также можно получать приведением в контакт электрофильной группы на антителе, такой как карбонильная группа альдегида или кетона, с нуклеофильной группой на линкерном реагенте или лекарственном средстве. Подходящие нуклеофильные группы на линкерном реагенте включают, но не ограничиваются ими, гидразид, оксим, амино, гидразин, тиосемикарбазон, гидразина карбоксилат и арилгидразид. В одном варианте реализации антитело модифицируют внесением электрофильных групп, которые способны вступать в контакт с нуклеофильными заместителями на линкерном реагенте или лекарственном средстве. В другом варианте реализации, сахара гликозилированных антител могут быть окислены, например, окисляющими реагентами на основе перйодатов, с образованием групп альдегидов или кетонов, которые могут вступать в контакт с аминогруппой линкерных реагентов или групп лекарственного средства. Полученные иминогруппы основания Шиффа могут образовывать стабильную связь, или их можно восстанавливать, например, боргидридными реагентами, с образованием стабильных связей через амин. В одном варианте реализации, реакция углеводной части гликозилированного антитела либо с галактозооксидазой, либо с метаперйодатом натрия, может приводить к карбонильным группам (группам альдегидов и кетонов) в антителе, которые могут вступать в реакции с соответствующими группами на лекарственном средстве (Hermanson, Bioconjugate Techniques). В другом варианте реализации, антитела, содержащие N-концевые остатки серина или треонина, могут вступать в контакт с метаперйодатом натрия, что приводит к образованию альдегида вместо первой аминокислоты (Geoghegan & Stroh (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146; US 5362852). Такой альдегид можно подвергать реакции с группой лекарственного средства или нуклеофилом линкера.

[0206] Нуклеофильные группы на группе лекарственного средства включают, но не ограничиваются ими: аминогруппу, тиольную, гидроксильную группы, группы гидразида, оксима, гидразина, тиосемикарбазона, гидразина карбоксилата и арилгидразида, способные вступать в контакт с образованием ковалентных связей с электрофильными группами на линкерных группах и линкерных реагентах, включающих: (i) активные сложные эфиры, такие как сложные эфиры NHS, сложные эфиры HOBt, галоформиаты и галогенангидриды; (ii) алкил- и бензилгалогениды, такие как галогенацетамиды; (iii) альдегиды, кетоны, карбоксильные и малеимидные группы.

[0207] Соединения в соответствии с данным изобретением полностью предусматривают, но не ограничиваются ими, КАЛП, полученные со следующими поперечно-сшивающими реагентами: BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, МРВН, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC и сульфо-SMPB, и SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые являются коммерчески доступными (например, от Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.А; см. страницы 467-498, 2003-2004 Applications Handbook and Catalog.

[0208] Иммуноконъюгаты, содержащие антитело и цитотоксическое средство, также могут быть получены с применением различных бифункциональных средств для присоединения белков, таких как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат НС1), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис(п-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(п-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как 2,6-диизоцианат толуола), и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицин может быть получен, как описано в Vitetta et al., Science 238:1098 (1987). Меченная углеродом-14 1-изотиоцианатобензил-3-метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (MX-DTPA) представляет собой типовой хелатирующий агент для конъюгации радионуклида с антителом. См. W094/11026.

В. Поверхностно-активное вещество

[0209] Данное изобретение предлагает композицию, содержащую иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, и поверхностно-активное вещество. В некоторых вариантах реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат (например, полисорбат 20 и полисорбат 80); полоксамер (например, полоксамер 188); N-октил-β-D глюкопиранозид (ОГ);

Тритон; додецилсульфат натрия (ДСН); лаурелсульфат натрия; октилгликозид натрия; лаурил-, миристил-, линолеил- или стеарилсульфобетаин; лаурил-, миристил-, линолеил- или стеарилсаркозин; линолеил-, миристил- или цетилбетаин; лауроамидопропил-, кокамидопропил-, линолеамидопропил-, миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропилбетаин (например, лауроамидопропил); миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропилдиметиламин; метилкокоил натрия или метилолеилтаурат динатрия; серия MONAQUATTM (Mona Industries, Inc., Патерсон, Нью-Джерси); полиэтилгликоль, полипропилгликоль, сополимер этилена и пропиленгликоля, такой как Pluronics или PF68; или любую их комбинацию.

[0210] В некоторых вариантах реализации, поверхностно-активное вещество является неионогенным. В некоторых типовых вариантах реализации, поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (ПС20), полисорбата 80 (ПС80), полоксамера 188 (П188), N-октил-β-D глюкопиранозида (ОГ) и их комбинации. В конкретном варианте реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой ПС20. В другом варианте реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой ПС80.

[0211] В определенных вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет по меньшей мере около 0,01% масс./об. (то есть, 0,1 мг/мл) и около 0,20% масс./об. (то есть, 2,0 мг/мл). В определенных вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет по меньшей мере около 0,01% масс./об. (то есть, 0,1 мг/мл), по меньшей мере около 0,02% масс./об. (то есть, 0,2 мг/мл), по меньшей мере около 0,03% масс./об. (то есть, 0,3 мг/мл), по меньшей мере около 0,04% масс./об. (то есть, 0,4 мг/мл), по меньшей мере около 0,05% масс./об. (то есть, 0,5 мг/мл), по меньшей мере около 0,06% масс./об. (то есть, 0,6 мг/мл), по меньшей мере около 0,07% масс./об. (то есть, 0,7 мг/мл), по меньшей мере около 0,08% масс./об. (то есть, 0,8 мг/мл), по меньшей мере около 0,09% масс./об. (то есть, 0,9 мг/мл), по меньшей мере около 0,10% масс./об. (то есть, 1 мг/мл), по меньшей мере около 0.11% масс./об. (то есть, 1,1 мг/мл), по меньшей мере около 0,12% масс./об. (то есть, 1,2 мг/мл), по меньшей мере около 0,13% масс./об. (то есть, 1,3 мг/мл), по меньшей мере около 0,14% масс./об. (то есть, 1,4 мг/мл), по меньшей мере около 0,15% масс./об. (то есть, 1.5 мг/мл), по меньшей мере около 0,16% масс./об. (то есть, 1,6 мг/мл), по меньшей мере около 0,17% масс./об. (то есть, 1,7 мг/мл), по меньшей мере около 0,18% масс./об. (то есть, 1,8 мг/мл), по меньшей мере около 0,19% масс./об. (то есть, 1,9 мг/мл) или по меньшей мере около 0,20% масс./об. (то есть, 2,0 мг/мл), включая любой диапазон между этими значениями. В конкретном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет по меньшей мере около 0,06% масс./об. (то есть, 0,6 мг/мл). В другом конкретном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет по меньшей мере около 0,12% масс./об. (то есть, 1,2 мг/мл). В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция представляет собой жидкую фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция стабильна по меньшей мере в течение около любого из 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при 30°С или по меньшей мере в течение около любого из 24, 48 или 72 часов при хранении при 2°С-8°С.

[0212] В определенных вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет по меньшей мере около 0,01% масс./об. (то есть, 0,1 мг/мл) и около 0,20% масс./об. (то есть, 2,0 мг/мл). В определенных вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в лиофилизированной фармацевтической композиции составляет по меньшей мере 0,01% масс./об., по меньшей мере 0,02% масс./об., по меньшей мере 0,03% масс./об., по меньшей мере 0,04% масс./об., по меньшей мере 0,05% масс./об., по меньшей мере 0,06% масс./об., по меньшей мере 0,07% масс./об., по меньшей мере 0,08% масс./об., по меньшей мере 0,09% масс./об., по меньшей мере 0,10% масс./об., по меньшей мере 0,11% масс./об., по меньшей мере 0,12% масс./об., по меньшей мере 0,13% масс./об., по меньшей мере 0,14% масс./об., по меньшей мере 0,15% масс./об., по меньшей мере 0,16% масс./об., по меньшей мере 0,17% масс./об., по меньшей мере 0,18% масс./об., по меньшей мере 0,19% масс./об. или по меньшей мере 0,20% масс./об., включая любой диапазон между этими значениями. В конкретном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в лиофилизированной фармацевтической композиции составляет по меньшей мере 0,06% масс./об. В другом конкретном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в лиофилизированной фармацевтической композиции составляет по меньшей мере 0,12% масс./об. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированную массу. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе.

[0213] В некоторых вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в жидкой фармацевтической композиции составляет по меньшей мере от около 0,1 до около 2,0 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в жидкой фармацевтической композиции составляет по меньшей мере любую около 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 или 2,0 мг/мл, включая любой диапазон между этими значениями. В конкретном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в жидкой фармацевтической композиции составляет по меньшей мере около 0, 6% мг/мл. В другом конкретном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в жидкой фармацевтической композиции составляет по меньшей мере 1,2 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, жидкую фармацевтическую композицию восстанавливают (например, восстанавливают с применением СВДИ) из лиофилизированной фармацевтической композиции (такой как лиофилизированная масса). В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция стабильна по меньшей мере в течение около любого из 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при 30°С или по меньшей мере в течение около любого из 24, 48 или 72 часов при хранении при 2°С-8°С.

[0214] В примерном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в лиофилизированной фармацевтической композиции составляет 0,06% масс./об. В другом варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в лиофилизированной фармацевтической композиции составляет 0,12% масс./об. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированную массу. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе.

[0215] В иллюстративном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в жидкой фармацевтической композиции составляет 0,6 мг/мл. В другом примерном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в жидкой фармацевтической композиции составляет 1,2 мг/мл. В некоторых вариантах реализации, жидкую фармацевтическую композицию восстанавливают (например, восстанавливают с применением СВДИ) из лиофилизированной композиции (такой, как лиофилизированной массы). В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция стабильна по меньшей мере в течение около любого из 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при 30°С или по меньшей мере в течение около через 24, 48 или 72 часа при хранении при 2-8°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция стабильна по меньшей мере в течение около любого из 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при 30°С или по меньшей мере в течение около любого из 24, 48 или 72 часа при хранении при 2°С-8°С.

[0216] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет 10 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества в фармацевтической композиции составляет по меньшей мере 0,06% масс./об. (то есть, 0,6 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, в фармацевтической композиции составляет 10 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет по меньшей мере 0,12% масс./об. (то есть, 0,12 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет собой восстановленную композицию (например, восстановленную с применением СВДИ из лиофилизированной композиции). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе. В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция стабильна по меньшей мере в течение около любого из 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при 30°С или по меньшей мере в течение около 24, 48 или 72 часов при хранении при 2-8°С.

[0217] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в фармацевтической композиции составляет 10 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет 0,06% масс./об. (то есть, 0,6 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в фармацевтической композиции составляет 10 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет 0,12% масс./об. (то есть, 1,2 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет собой восстановленную композицию (например, восстановленную с применением СВДИ из лиофилизированной композиции). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе.

[0218] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в фармацевтической композиции составляет 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет 0,06% масс./об. (то есть, 0,6 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в фармацевтической композиции составляет 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет 0,12% масс./об. (то есть, 0,12 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет собой восстановленную композицию (например, восстановленную с применением СВДИ из лиофилизированной композиции). В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция содержится в стеклянном флаконе.

[0219] В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в фармацевтической композиции составляет 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества (например, ПС20) в фармацевтической композиции составляет 0,06% масс./об. (то есть, 0,6 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в фармацевтической композиции составляет 20 мг/мл и концентрация поверхностно-активного вещества в фармацевтической композиции составляет 0,12% масс./об. (то есть, 1,2 мг/мл). В некоторых вариантах реализации, жидкая фармацевтическая композиция стабильна по меньшей мере в течение около любого из 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 часов при хранении при 30°С или по меньшей мере в течение около 24, 48 или 72 часов при хранении при 2-8°С.

[0220] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция представляет собой жидкую композицию, подходящую для внутривенного введения. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, подходящая для введения, содержит от около 0,0432 до около 0,162 мг/мл поверхностно-активного вещества (например, полисорбата 20). В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция содержит от около 0,72 мг/мл до около 2,7 мг/мл полатузумаба ведотина. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, подходящая для внутривенного введения, содержит около 0,72 мг/мл полатузумаба ведотина и около 0,0432 мг/мл полисорбата 20. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция, подходящая для внутривенного введения, содержит около 2,7 мг/мл полатузумаба ведотина и около 0,162 мг/мл полисорбата 20.

С.Буферный агент

[0221] Согласно настоящему раскрытию предложены фармацевтические композиции, которые включают буферный агент. Не ограничиваясь теорией, применение буфера поддерживает рН фармацевтической композиции во время производства, хранения и применения композиции. Неограничивающие примеры буферных агентов включают гистидин, сукцинат, сукцинат натрия, бикарбонат натрия, хлорид кальция, сульфат магния, мононатрийфосфат, динатрийфосфат, монокалийфосфат, дикалийфосфат, [трис(гидроксиметил)метиламино]пропансульфоновую кислоту (TAPS), 2 -(бис(2-гидроксиэтил)амино)уксусную кислоту (Bicine), 2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол (Трис), N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил))этил)глицин (Tricine), 3-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]-2-гидроксипропан-1-сульфоновую кислоту (TAPSO), 2- [4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]этансульфоновую кислоту (HEPES), 2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]этансульфоновую кислоту (TES), 1,4-пиперазиндиэтансульфоновую кислоту (PIPES), диметиларсиновую кислоту, 2-морфолин-4-илэтансульфоновую кислоту (MES) или фосфатно-солевой буфер (ФСБ). Другими подходящими буферными агентами могут быть уксусная кислота и ее соль, лимонная кислота и ее соль, борная кислота и ее соль, и фосфорная кислота и ее соль.

[0222] В примерных вариантах реализации, настоящего раскрытия буферный агент представляет собой гистидиновый буфер или сукцинатный буфер. В конкретном варианте реализации, сукцинатный буфер представляет собой натрий-сукцинатный буфер.

[0223] В некоторых вариантах реализации, буферный агент находится в концентрации от около 10 мМ до около 200 мМ. В конкретном варианте реализации, буферный агент находится в концентрации около 10 мМ, около 11 мМ, около 12 мМ, около 13 мМ, около 14 мМ, около 15 мМ, около 16 мМ, около 17 мМ, около 18 мМ, около 19 мМ, около 20 мМ, около 21 мМ, около 22 мМ, около 23 мМ, около 24 мМ, около 25 мМ, около 26 мМ, около 27 мМ, около 28 мМ, около 29 мМ, около 30 мМ, около 35 мМ, около 40 мМ, около 45 мМ, около 50 мМ, около 55 мМ, около 60 мМ, около 65 мМ, около 70 мМ, около 75 мМ, около 80 мМ, около 85 мМ, около 90 мМ, около 95 мМ, около 100 мМ, около 105 мМ, около 110 мМ, около 115 мМ, около 120 мМ, около 125 мМ, около 130 мМ, около 135 мМ, около 140 мМ, около 145 мМ, около 150 мМ, около 155 мМ, около 160 мМ, около 165 мМ, около 170 мМ, около 175 мМ, около 180 мМ, около 185 мМ, около 190 мМ, около 195 мМ или около 200 мМ.

[0224] В другом конкретном варианте реализации, буферный агент находится в концентрации 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ, 20 мМ, 21 мМ, 22 мМ, 23 мМ, 24 мМ, 25 мМ, 26 мМ, 27 мМ, 28 мМ, 29 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 55 мМ, 60 мМ, 65 мМ, 70 мМ, 75 мМ, 80 мМ, 85 мМ, 90 мМ, 95 мМ, 100 мМ, 105 мМ, 110 мМ, 115 мМ, 120 мМ, 125 мМ, 130 мМ, 135 мМ, 140 мМ, 145 мМ, 150 мМ, 155 мМ, 160 мМ, 165 мМ, 170 мМ, 175 мМ, 180 мМ, 185 мМ, около 190 мМ, 195 мМ или 200 мМ.

[0225] В примерном варианте реализации, настоящего раскрытия концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет от около 10 мМ до около 200 мМ. В одном варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет около 10 мМ. В другом варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет 10 мМ.

[0226] В некоторых вариантах реализации, композиция настоящего раскрытия имеет рН от около 5,0 до около 6,0. В конкретных вариантах реализации, буфер имеет рН около 5,0, около 5,1, около 5,2, около 5,3, около 5,4, около 5,5, около 5,6, около 5,7, около 5,8, около 5,9 или около 6,0. В других конкретных вариантах реализации, буфер имеет рН 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 или 6,0.

[0227] В одном примерном варианте реализации, композиция настоящего раскрытия имеет рН около 5,3. В другом примерном варианте реализации, композиция настоящего раскрытия имеет рН 5,3.

D. Сахар

[0228] В соответствии с настоящим раскрытием предлагаются фармацевтические композиции, содержащие сахар. Не желая быть связанными теорией, сахар функционирует, способствуя криозащите фармацевтической композиции, тем самым предотвращая агрегацию и поддерживая химическую и физическую стабильность фармацевтической композиции. В некоторых вариантах реализации, сахар представляет собой глюкозу, фруктозу, сахарозу, трегалозу, аргинин, глицерин, пролин, декстран, декстран 40, глицерин, маннит или сорбит.

[0229] В некоторых вариантах реализации, сахар выбран из группы, состоящей из сахарозы, маннита, сорбита, глицерина, декстрана 40 и трегалозы. В примерном варианте реализации, сахар представляет собой сахарозу.

[0230] В некоторых вариантах реализации, концентрация сахара составляет от около 50 мМ до около 300 мМ. В конкретном варианте реализации, концентрация буферного агента составляет около 50 мМ, около 60 мМ, около 70 мМ, около 80 мМ, около 90 мМ, около 100 мМ, около 110 мМ, около 120 мМ, около 130 мМ, около 140 мМ, около 150 мМ, около 160 мМ, около 170 мМ, около 180 мМ, около 190 мМ, около 200 мМ, около 210 мМ, около 220 мМ, около 230 мМ, около 240 мМ, около 250 мМ, около 260 мМ, около 270 мМ, около 280 мМ, около 290 мМ или около 300 мМ. В некоторых вариантах реализации, концентрация сахара составляет от около 100 мМ до около 260 мМ.

[0231] В некоторых вариантах реализации, концентрация сахара составляет от 50 мМ до 300 мМ. В конкретном варианте реализации, концентрация буферного агента составляет 50 мМ, 60 мМ, 70 мМ, 80 мМ, 90 мМ, мМ, 110 мМ, 120 мМ, 130 мМ, 140 мМ, 150 мМ, 160 мМ, 170 мМ, 180 мМ, 190 мМ, 200 мМ, 210 мМ, 220 мМ, 230 мМ, 240 мМ, 250 мМ, 260 мМ, 270 мМ, 280 мМ, 290 мМ или 300 мМ. В некоторых вариантах реализации; концентрация сахара составляет от 100 мМ до 260 мМ.

[0232] В примерном варианте реализации; концентрация сахарозы составляет около 120 мМ. В примерном варианте реализации, концентрация сахарозы составляет 120 мМ.

[0233] В другом аспекте настоящее раскрытие предлагает фармацевтическую композицию, полученную лиофилизацией жидкой композиции, содержащей 20 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в 10 мМ натрий-сукцинатном буфере, 0,12% масс./об. полисорбата 20 и 120 мМ сахарозы, причем жидкая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b имеет формулу:

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5).

[0234] В некоторых вариантах реализации, настоящего изобретения антитело к CD79b содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации, настоящего изобретения тяжелая цепь, содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкая цепь, содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

Е. Стабильность

[0235] В некоторых вариантах реализации, оценивается или измеряется физическая стабильность, химическая стабильность или биологическая активность фармацевтической композиции в жидком состоянии или лиофилизированной форме. Для оценки стабильности и биологической активности фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут применяться любые способы, известные в данной области техники и описанные в примерах в данном документе. Например, стабильность антитела в фармацевтической композиции можно измерить посредством, но не ограничиваясь ими, эксклюзионной хроматографией (ЭХ или Э-ВЭЖХ), визуализационно-контролируемого капиллярного изоэлектрического фокусирования (вкИЭФ), картирования пептидов, анализа механических частиц методом затемнения света в небольшом объеме (HIAC) и вариантами способов капиллярного электрофореза (КЭ), таких как додецилсульфат натрия-КЭ (КЭ-ДСН) и гликан-КЭ. В некоторых вариантах реализации, стабильная фармацевтическая композиция (или состав) представляет собой композицию, в которой иммуноконъюгат по существу сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность, и/или биологическую активность при хранении, например, хранении в течение определенного периода или продолжительности времени (например, часы, сутки, месяцы, годы и т.д.) при определенных условиях (таких как температура, относительная влажность, остаточная влажность, наличие или отсутствие света, после периода встряхивания и т.д.). В некоторых вариантах реализации, иммуноконъюгат, присутствующий в фармацевтической композиции, является биологически стабильным (например, сохраняет свою биологическую активность), если биологическая активность иммуноконъюгата (и/или фрагмента антитела иммуноконъюгата, такого как антитело к CD79b) в конкретный момент времени находится в пределах диапазона, принятого национальным или региональным регулирующим агентством для фармацевтических продуктов (например, Федеральным управлением лекарственных средств (FDA) США, Управлением терапевтических товаров (TGA) Австралии, Европейским агентством по лекарственным средствам (ЕМА) Европейского Союза, и т.п.). Например, биологическая активность иммуноконъюгата (такого как иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b) или фармацевтической композиции, содержащей такой иммуноконъюгат, может быть измерена по его способности связывать антиген (такой как способность антитела к CD79b к связыванию CD79b, например, CD79b человека). Для измерения аффинности связывания антител можно применять ряд анализов, известных в данной области техники, включая, помимо прочего, поверхностный плазменный резонанс (ППР), радиоиммуноанализ (РИА) и ИФА. Дополнительно или альтернативно, биологическая активность иммуноконъюгата (такого как иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b) измеряется по его способности к ингибированию роста клеток и/или клеточной пролиферации, например, in vitro или in vivo, или способности вызывать гибель клеток, включая запрограммированную гибель клеток (апоптоз), например, in vitro или in vivo. Дополнительные подробности, касающиеся анализов для измерения биологической активности антитела к CD79b или иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, представлены в патенте США №8088387, содержание которого полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.

[0236] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция настоящего раскрытия стабильна при -20°С в течение по меньшей мере около 6 месяцев, по меньшей мере около 8 месяцев, по меньшей мере около 10 месяцев, по меньшей мере около 12 месяцев, по меньшей мере около 14 месяцев, по меньшей мере около 16 месяцев, по меньшей мере около 18 месяцев, по меньшей мере около 20 месяцев, по меньшей мере около 21 месяца, по меньшей мере около 22 месяцев, по меньшей мере около 23 месяцев, по меньшей мере около 24 месяцев, по меньшей мере около 3 лет, по меньшей мере около 4 лет, или по меньшей мере около 5 лет в защищенном от света месте.

[0237] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция настоящего раскрытия стабильна при от 2°С до 8°С (например, 5°С±3°С) в течение по меньшей мере около 6 месяцев, по меньшей мере около 8 месяцев, по меньшей мере около 10 месяцев, по меньшей мере около 12 месяцев, по меньшей мере около 14 месяцев, по меньшей мере около 16 месяцев, по меньшей мере около 18 месяцев, по меньшей мере около 20 месяцев, по меньшей мере около 21 месяца, по меньшей мере около 22 месяцев, по меньшей мере около 23 месяцев, по меньшей мере около 24 месяцев, по меньшей мере около 3 лет, по меньшей мере около 4 лет, или по меньшей мере около 5 лет в защищенном от света месте.

[0238] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция настоящего раскрытия стабильна при от 25°С до 40°С в течение по меньшей мере около 30 минут, по меньшей мере около 60 минут, по меньшей мере около 2 часов, по меньшей мере около 4 часов, по меньшей мере около 6 часов, по меньшей мере около 8 часов, по меньшей мере около 10 часов, по меньшей мере около 12 часов, по меньшей мере около 14 часов, по меньшей мере около 16 часов, по меньшей мере около 18 часов, по меньшей мере около 20 часов, по меньшей мере около 22 часов, по меньшей мере около 1 суток, по меньшей мере около 2 суток, или по меньшей мере около 3 суток.

[0239] В одном примерном варианте реализации, композиция стабильна по меньшей мере около 48 месяцев при 5°С±3°С в защищенном от света месте. В другом примерном варианте реализации, композиция стабильна около 48 месяцев при 5°С±3°С в защищенном от света месте.

[0240] В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная форма (например, лиофилизат) фармацевтической композиции по настоящему изобретению может проверяться на стабильность. В некоторых вариантах реализации, в условиях хранения (5°С±3°С и в защищенном от света месте) лиофилизированная масса не демонстрирует каких-либо значительных изменений в структуре, цвете, внешнем виде или содержании влаги. В одном конкретном варианте лиофилизированная масса имеет содержание влаги менее 5% в условиях хранения. В другом конкретном варианте реализации, лиофилизированная масса является гладкой без углублений в условиях хранения. В некоторых вариантах реализации, настоящего изобретения лиофилизированная масса стабильна в течение по меньшей мере около 48 месяцев в условиях хранения.

[0241] В некоторых вариантах реализации, стабильность фармацевтической композиции по настоящему изобретению измеряют с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Э-ВЭЖХ). В примерном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 95,0, измеренный с помощью Э-ВЭЖХ.

[0242] В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция (например, масса), предложенная в настоящем документе, стабильна в течение по меньшей мере около 44 месяцев (например, около 30, 35, 40, 45, 50 или 55 месяцев) при хранении при температуре от около 2°С до около 8°С в диапазоне остаточного содержания влаги от около 0,3% (масс./масс.) до около 3,2% (масс./масс.), включая любой диапазон между этими значениями. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция (например, масса), предложенная в настоящем документе, стабильна в течение по меньшей мере около 7 месяцев (например, около в течение 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 8 или 10 месяцев) при хранении при около 25°С в диапазоне остаточного содержания влаги от около 0,3% (масс./масс.) до около 3,2% (масс./масс.), включая любой диапазон между этими значениями.

[0243] В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция (например, масса), предложенная в настоящем документе, стабильна при (а) концентрации белка от около 17 до около 23 мг/мл, (b) концентрации сукцината от около 7 до около 23 мМ, (с) концентрации сахарозы от около 90 до около 150 мМ, (d) концентрации полисорбата 20 от около 0,9 до около 1,5 мг/мл, и (е) рН от около 4,95 до около 5,65. В некоторых вариантах реализации, лиофилизированная фармацевтическая композиция (например, масса), содержащая любой один или более из (а) до (е), указанных выше, стабильна при температуре от около 2°С до около 8°С, в течение около по меньшей мере любого из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 28, 29 или 30 месяцев.

G. Композиции для внутривенного введения.

[0244] В настоящем раскрытии представлены фармацевтические композиции и жидкие композиции, подходящие для внутривенного (в/в) введения. Композиции, предназначенные для применения в/в in vivo, должны быть стерильными. Это легко достигается путем фильтрования через стерильные фильтрующие мембраны до или после приготовления фармацевтической композиции. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция настоящего раскрытия восстанавливается стерильной водой для инъекций (СВДИ). В некоторых вариантах реализации, восстановленную композицию дополнительно разводят в изотоническом буфере в пакете для внутривенного (в/в) введения.

[0245] В одном аспекте, настоящее раскрытие предлагает фармацевтическую композицию, содержащую иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, поверхностно-активное вещество, сукцинатный буфер и сахар, причем фармацевтическая композиция при восстановлении в воде образует жидкую фармацевтическую композицию, содержащую иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b в концентрации от около 10 мг/кг до около 20 мг/мл, поверхностно-активное вещество в концентрации по меньшей мере 0,06% масс./об. (то есть 0,6 мг/мл), сукцинатный буфер в концентрации от около 10 мМ до около 200 мМ и сахар в концентрации от около 100 мМ до около 260 мМ, при этом жидкая фармацевтическая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b имеет формулу:

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5).

[0246] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция восстанавливается (1:1 масса : объем) в СВДИ. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция, при восстановлении в воде, образует жидкую фармацевтическую композицию, содержащую 20 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b в 10 мМ натрий-сукцинатном буфере, 0,12% масс./об. полисорбата 20 и 120 мМ сахарозы, при этом жидкая фармацевтическая композиция имеет рН 5,3.

[0247] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция восстанавливается в СВДИ, а затем разбавляется изотоническим буфером в пакете для в/в введения, причем концентрация поверхностно-активного вещества при разбавлении в пакете для в/в введения составляет по меньшей мере 0,003% масс./об. В одном варианте реализации, концентрация поверхностно-активного вещества при разбавлении в пакете для в/в введения составляет по меньшей мере 0,004% масс./об. В примерном варианте реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20. В некоторых вариантах реализации, сахар представляет собой сахарозу. В конкретном варианте реализации, концентрация сахарозы составляет 120 мМ. В некоторых вариантах реализации, сукцинатный буфер представляет собой натрий-сукцинатный буфер. В конкретном примерном варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет 10 мМ.

[0248] В некоторых вариантах реализации, стабильность фармацевтической композиции настоящего раскрытия при восстановлении в воде измеряется по агрегации, рН, мутности, количеству видимых и/или невидимых частиц или количеству свободного (например, неконъюгированного) лекарственного средства. В некоторых вариантах реализации, для оценки стабильности можно применять УФ-спектрофотометрию, Э-ВЭЖХ, хроматографию гидрофобного взаимодействия (HIC), вкИЭФ или HIAC или их комбинацию. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция при восстановлении в воде имеет стабильность до около 1 суток, до около 2 суток или до около 3 суток при 30°С. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция при восстановлении в воде имеет стабильность до около 1 суток, до около 2 суток, до около 3 суток, до около 4 суток, до около 5 суток, до около 6 суток или до около 7 суток при 5°С ± 3°С.

[0249] В некоторых вариантах реализации, стабильность композиции, восстановленной в воде, измеряют с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Э-ВЭЖХ). В примерном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 95,0, измеренный с помощью Э-ВЭЖХ.

[0250] В некоторых конкретных вариантах реализации, композиция имеет количество ВМС (%) менее 4,0, как измерено с помощью Э-ВЭЖХ. В некоторых конкретных вариантах реализации, композиция имеет количество НМС (%) менее 1,0, как измерено с помощью Э-ВЭЖХ. В некоторых вариантах реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 95,0 и ВМС менее 4,0, как измерено с помощью Э-ВЭЖХ. В некоторых вариантах реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 95,0, ВМС (%) менее 4,0 и НМС (%) менее 1,0, как измерено с помощью Э-ВЭЖХ.

[0251] В некоторых вариантах реализации, стабильность композиции, восстановленной в воде, измеряют с помощью визуализационно-контролируемого капиллярного изоэлектрического фокусирования (вкИЭФ). В одном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 73,0, кислотную область (% площади) не более чем 25,5 и основную область (% площади) не более чем 10,0, как измерено с помощью вкИЭФ. В примерном варианте реализации, композиция имеет основной пик (% площади) по меньшей мере 58,0, кислотную область (% площади) не более чем 32,0 и основную область (% площади) не более чем 12,0, как измерено с помощью вкИЭФ.

[0252] В некоторых вариантах реализации, восстановленная фармацевтическая композиция, которая включает 20 мг/мл полатузумаба ведотин в 10 мМ сукцината, 120 мМ сахарозы, 1,2 мг/мл полисорбата 20, при рН 5,3 физико-химически стабильна после 72 часов хранения при температуре от около 2°С до около 8°С. В некоторых вариантах реализации, хранение восстановленный фармацевтической композиции в течение 72 часов при температуре в диапазоне от около 2°С до около 8°С не снижает биологическую активность полатузумаба ведотина. В некоторых вариантах реализации, восстановленная фармацевтическая композиция, которая включает 20 мг/мл полатузумаба ведотина в 10 мМ сукцината, 120 мМ сахарозы, 1,2 мг/мл полисорбата 20, при рН 5,3 физико-химически стабильна после 24 часов хранения при температуре 30°С с освещением окружающей среды. В некоторых вариантах реализации, хранение восстановленной фармацевтической композиции, в течение 24 часов при 30°С с воздействием освещения окружающей среды не снижает биологическую активность полатузумаба ведотина.

[0253] В одно аспекте, настоящее раскрытие предлагает жидкую

композицию, содержащую иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, поверхностно-активное вещество, сукцинатный буфер и сахар, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b находится в концентрации от около 10 мг / мл до около 20 мг / мл, поверхностно-активное вещество находится в концентрации по меньшей мере 0,06% масс./об. (то есть 0,6 мг/мл), сукцинатный буфер находится в концентрации от около 10 мМ до около 200 мМ, и сахар находится в концентрации от около 100 до около 260 мМ, при этом жидкая композиция имеет рН 5,3, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b имеет формулу:

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит (а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1); (b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и (с) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3); при этом тяжелая цепь содержит (а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4); (b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и (с) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6); Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и р равно от около 1 до около 8 (например, от около 2 до около 5, например, около 3,5).

[0254] В некоторых вариантах реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20. В некоторых вариантах реализации, сахар представляет собой сахарозу. В примерном варианте реализации, концентрация сахарозы составляет 120 мМ. В некоторых вариантах реализации, сукцинатный буфер представляет собой натрий-сукцинатный буфер. В конкретном примерном варианте реализации, концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет 10 мМ.

[0255] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия растворена в буфере. Буфер может быть, без ограничения, физиологическим раствором (0,9% масс./об. хлорида натрия), половинным солевым физиологическим раствором (0,45% масс./об. хлорида натрия), 5% масс./об. декстрозой, лактатным раствором Рингера или их комбинацией.

[0256] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия растворена в изотоническом буфере. В некоторых вариантах реализации, изотонический буфер может быть свежеприготовленным или содержаться в предварительно заполненном пакете для в/в. В некоторых вариантах реализации, изотонический буфер представляет собой физиологический раствор (0,9% хлорида натрия). В примерном варианте реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия, растворенная в изотоническом буфере, находится в пакете для в/в введения.

[0257] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, имеет рН от около 4,8 до около 5,8. В конкретных вариантах реализации, рН составляет около 4,8, около 4,9, около 5,0, около 5,1, около 5,2, около 5,3, около 5,4, около 5,5, около 5,6, около 5,7 или около 5,8. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, имеет рН около 5,3.

[0258] В некоторых вариантах реализации, стабильность жидкой композиции в пакете для в/в введения настоящего раскрытия измеряется по агрегации, рН, мутности, количеству видимых и/или невидимых частиц, или количеству свободного (например, неконъюгированного) лекарственного средства. В некоторых вариантах реализации, УФ-спектрофотометрия, Э-ВЭЖХ, хроматография гидрофобного взаимодействия (HIC), вкИЭФ или HIAC или их комбинация могут быть применены для оценки стабильности жидкой композиции в пакете для в/в введения.

[0259] В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция в пакете в/в настоящего раскрытия стабильна в статических условиях. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция в пакете в/в настоящего раскрытия стабильна в условиях встряхивания. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, стабильна до около 1 часа, до около 2 часов, до около 3 часов, до около 4 часов, до около 5 часов, до около 6 часов, до около 7 часов или до около 8 часов при 30°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, стабильна до около 8 часов, до около 9 часов, до около 10 часов, до около 12 часов, до около 14 часов, до около 16 часов, до около 18 часов, до около 20 часов, до около 22 часов или до около 24 часов при 25°С. В некоторых вариантах реализации, жидкая композиция настоящего раскрытия, растворенная в изотоническом буфере в пакете для в/в введения, стабильна до около 24 часов, до около 30 часов, до около 36 часов, до около 42 часов, до около 48 часов, до около 54 часов, до около 60 часов, до около 66 часов или до около 72 часов при 5°С ± 3°С. В некоторых вариантах реализации, изотонический буфер представляет собой физиологический раствор.

[0260] В некоторых вариантах реализации, восстановленный раствор или разбавленный раствор для инфузии, описанный в данном документе (например, разбавленный раствор для инфузии, содержащий иммуноконъюгат (например, полатузумаба ведотин)), является стерильным.

III. Способы лечения

[0261] Предполагается, что фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может быть применена для лечения различных пролиферативных расстройств, например, характеризующихся сверхэкспрессией опухолевого антигена. Примером пролиферативного расстройства является злокачественное новообразование. Примеры злокачественных новообразований включают, но не ограничиваются ими, гемопоэтические злокачественные новообразования или связанные с кровью злокачественные новообразования, такие как лимфома, лейкоз, миелома или лимфоидные злокачественные новообразования, а также злокачественные новообразования селезенки и злокачественные новообразования лимфатических узлов, а также карциному, бластому и саркому. Более конкретные примеры злокачественного новообразования включают нарушения пролиферации В-клеток, включая, например, лимфомы высокой, средней и низкой степени злокачественности (включая В-клеточные лимфомы, такие как, например, В-клеточная лимфома, ассоциированная со слизистой оболочкой, и неходжкинская лимфома (НХЛ), мантийно-клеточная лимфома, лимфома Беркитта, мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома, лимфома маргинальной зоны, диффузная В-крупноклеточная лимфома, фолликулярная лимфома, лимфома Ходжкина и Т-клеточные лимфомы) и лейкозы (включая вторичный лейкоз, хронический лейкоцитарный лейкоз (ХЛЛ), такой как В-клеточный лейкоз (CD5+ В-лимфоциты), миелоидный лейкоз, такой как острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, лимфоидный лейкоз, такой как острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) и миелодисплазия) и другие гематологические и/или ассоциированные с В-клетками или Т-клетками злокачественные новообразования. Также включены злокачественные новообразования вспомогательных гемопоэтических клеток, включая полиморфноядерные лейкоциты, такие как базофилы, эозинофилы, нейтрофилы и моноциты, дендритные клетки, тромбоциты, эритроциты и естественные клетки-киллеры. В некоторых вариантах реализации, пролиферативное расстройство настоящего раскрытия представляет собой рецидив злокачественного новообразования или рефрактерное злокачественное новообразование.

[0262] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может применяться для лечения рецидивирующего лейкоза или рецидивирующей лимфомы. В других конкретных вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция по настоящего раскрытия может применяться для лечения рефрактерного лейкоза или рефрактерной лимфомы.

[0263] В одном аспекте настоящее раскрытие обеспечивает способ лечения пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту фармацевтической композиции или жидкой композиции, описанной в данном документе.

[0264] В некоторых вариантах реализации, злокачественное новообразование представляет собой нарушение пролиферации В-клеток. В конкретных вариантах реализации, нарушение пролиферации В-клеток выбрано из группы, состоящей из: лимфомы, миеломы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДВКЛ), агрессивной НХЛ, индолентной лимфомы, фолликулярной лимфомы (ФЛ), рецидивирующей агрессивной НХЛ, рецидивирующей индолентной НХЛ, рецидивирующей НХЛ, рефрактерной НХЛ, рефрактерной индолентной НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и мантийноклеточной лимфомы.

[0265] В одном примерном варианте реализации, настоящего раскрытия нарушение пролиферации В-клеток представляет собой неходжкинскую лимфому (НХЛ). В одном примерном варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВКЛ). В одном конкретном варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой рецидивирующую диффузную В-клеточную лимфому (ДВКЛ). В другом конкретном варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой рефрактерную диффузную В-клеточную лимфому (ДВКЛ).

[0266] В одном примерном варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой рецидивирующую НХЛ или рефрактерную НХЛ. В еще одном примерном варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой фолликулярную лимфому.

[0267] Злокачественное новообразование может содержать клетки, экспрессирующие CD79b, так что иммуноконъюгаты, содержащие антитело к CD79b, настоящего раскрытия способны связываться с клетками злокачественного новообразования. Для определения экспрессии CD79b при злокачественном новообразовании доступны различные диагностические/прогностические анализы. В одном варианте реализации, сверхэкспрессия CD79b может быть проанализирована с помощью ИГХ. Залитые в парафин тканевые срезы из биопсии опухоли могут быть подвергнуты анализу ИГХ и соответствуют критериям интенсивности окрашивания белка CD79b в отношении степени окрашивания и того, какая доля исследованных опухолевых клеток присутствует в образце.

[0268] Для профилактики или лечения расстройства подходящая доза КАЛП будет зависеть от типа заболевания, подлежащего лечению, как определено выше, тяжести и течения заболевания, независимо от того, вводится ли молекула в профилактических или терапевтических целях, ранних терапий, истории болезни пациента и реакции на антитело, а также на усмотрение лечащего врача. Соединение удобно вводить пациенту однократно или в течение серии курсов лечения. В зависимости от типа и тяжести заболевания, начальная кандидатная дозировка соединения для введения пациенту может составлять от около 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, 0,1 мг/кг - 20 мг/кг), например, за одно или более отдельных введений или в виде непрерывной инфузии. Одна типичная суточная дозировка может находиться в диапазоне от около 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более, в зависимости от вышеупомянутых факторов. Примерная доза КАЛП, вводимая пациенту, находится в диапазоне от около 0,1 до около 10 мг/кг массы тела пациента. При повторном введении в течение нескольких суток или дольше, в зависимости от состояния, лечение продолжают до желаемого подавления симптомов заболевания.

[0269] Для лечения или предотвращения нарушение пролиферации фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия вводят посредством внутривенной инфузии. Доза, введенная посредством инфузии находится в диапазоне от около 1 мкг/м2 до около 10000 мкг/м2 на одну дозу, как правило, одна доза в неделю, всего одна, две, три или четыре дозы. Альтернативно, доза находится в диапазоне от около 1 мкг/м2 до около 1000 мкг/м2, от около 1 мкг/м2 до около 800 мкг/м2, от около 1 мкг/м2 до около 600 мкг/м2, от около 1 мкг/м2 до около 400 мкг/м2, от около 10 мкг/м2 до около 500 мкг/м2, от около 10 мкг/м2 до около 300 мкг/м2, от около 10 мкг/м2 до около 200 мкг/м2, и от около 1 мкг/м2 до около 200 мкг/м2. Дозу можно вводить один раз в сутки, один раз в неделю, несколько раз в неделю, но реже одного раза в сутки, несколько раз в месяц, но реже одного раза в сутки, несколько раз в месяц, но реже одного раза в неделю, один раз в месяц, или периодически для облегчения или уменьшения симптомов заболевания. Введение может продолжаться с любым из указанных интервалов до ремиссии опухоли или симптомов лимфомы, подлежащего лечению лейкоза. Введение может быть продолжено после достижения ремиссии или облегчения симптомов, если такая ремиссия или облегчение продлевается таким продолжительным введением.

[0270] Для определения экспрессии CD79b при злокачественном новообразовании доступны различные анализы для обнаружения. В одном варианте реализации, сверхэкспрессия полипептида CD79b может быть проанализирована иммуногистохимическим методом (ИГХ). Залитые в парафин срезы ткани из биопсии опухоли могут быть подвергнуты анализу ИГХ и соответствуют следующим критериям интенсивности окрашивания белка CD79b:

Оценка 0 - окрашивание не наблюдается или окрашивание мембран наблюдается менее чем в 10% опухолевых клеток.

Оценка 1+ - слабое/еле заметное окрашивание мембран обнаруживается более чем в 10% опухолевых клеток. Клетки окрашиваются только в части их мембраны.

Оценка 2+ - полное окрашивание мембраны от слабого до умеренного наблюдается более чем в 10% опухолевых клеток.

Оценка 3+ - полное окрашивание мембраны от умеренного до сильного наблюдается более чем в 10% опухолевых клеток.

[0271] Опухоли с оценкой 0 или 1+ для экспрессии полипептида CD79b могут быть охарактеризованы как не сверхэкспрессирующие CD79b, тогда как опухоли с оценками 2+ или 3+ могут быть охарактеризованы как сверхэкспрессирующие CD79b.

[0272] Альтернативно или дополнительно, FISH-анализы, такие как INFORM® (продается Ventana, Аризона) или PATHVISION® (Vysis, Иллинойс), могут быть выполнены на фиксированной формалином, залитой парафином опухолевой ткани для определения степени (если таковая имеется) сверхэкспрессии CD79b в опухоли.

[0273] CD79B избыточная экспрессия или амплификации могут быть оценены с применением in vivo анализа обнаружения, например, путем введения соединения (такого как антитело), которое связывает соединение для обнаружения и помечено детектируемой меткой (например, радиоактивный изотоп или флуоресцентная метка) и внешнего сканирования пациента для определения местоположения метки.

Комбинированные терапии

[0274] В настоящее время, в зависимости от стадии злокачественного новообразования, лечение злокачественного новообразования включает один или комбинацию следующих способов лечения: хирургическое вмешательство с удалением ткани злокачественного новообразования, лучевая терапия и химиотерапия. Терапия иммуноконъюгатами, содержащими антитело к CD79b, может быть особенно желательной для пожилых пациентов, которые плохо переносят токсичность и побочные эффекты химиотерапии, а также при метастатическом заболевании, когда лучевая терапия имеет ограниченную применимость. Иммуноконъюгаты, содержащие антитело к CD79b, нацеленные на опухоль, настоящего раскрытия полезны для облегчения злокачественного новообразования, экспрессирующего CD79b, при первоначальной диагностике заболевания или во время рецидива. Для терапевтического применения иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b можно применять отдельно или в комбинированной терапии, например, с гормонами, антиангиогенными средствами или радиоактивно меченными соединениями, или с хирургическим вмешательством, криотерапией и/или радиотерапией. Введение фармацевтической композиции или жидкой композиции настоящего раскрытия может осуществляться в сочетании с другими формами общепринятой терапии, либо последовательно, до или после традиционной терапии. Химиотерапевтические лекарственные средства, такие как TAXOTERE® (доцетаксел), TAXOL® (паклитаксел), эстрамустин и митоксантрон, применяются для лечения злокачественного новообразования, в частности, у пациентов с высоким риском. В настоящем способе настоящего раскрытия для лечения или облегчения злокачественного новообразования у пациента со злокачественным новообразованием можно вводить антитело к CD79b в сочетании с лечением одним или более предшествующими химиотерапевтическими агентами. В частности, рассматривается комбинированная терапия паклитакселом и модифицированными производными (см., например, ЕР 0600517). Фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия можно вводить с терапевтически эффективной дозой химиотерапевтического агента. В другом варианте фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия вводят в сочетании с химиотерапией для повышения активности и эффективности химиотерапевтического агента, например, паклитаксела. В Physicians' Desk Reference (PDR) описаны дозировки этих агентов, которые применяют для лечения различных видов злокачественного новообразования. Схема введения и дозировки этих вышеупомянутых химиотерапевтических лекарственных средств, которые являются терапевтически эффективными, будут зависеть от конкретного вида злокачественного новообразования, подлежащего лечению, степени заболевания и других факторов, знакомых врачу в данной области техники, и могут быть определены врачом.

[0275] В другом варианте реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может вводиться в комбинации с одним или более химиотерапевтическими агентами или агентами, ингибирующими рост, включая совместное введение коктейлей из различных химиотерапевтических агентов или другого цитотоксического агента(ов) или другого терапевтического средства(в), которое также подавляет рост опухоли. Химиотерапевтические агенты включают эстрамустинфосфат, преднимустин, цисплатин, 5-фторурацил, мелфалан, циклофосфамид, гидроксимочевину и гидроксиуреатаксаны (такие как паклитаксел и доксетаксел) и/или антрациклиновые антибиотики. Составы и схемы введения таких химиотерапевтических агентов можно применять согласно инструкциям изготовителя или согласно эмпирическому определению, выполненному специалистом в данной области техники. Кроме того, составы и схемы введения таких химиотерапевтических агентов описаны в "Chemotherapy Service," Ed., М.С. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1992). Фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может быть объединена с антигормональным соединением; например, антиэстрогеновым соединением, таким как тамоксифен; антипрогестероном, таким как онапристон (см. ЕР 616812); или антиандрогеном, таким как флутамид, в дозировках, известных для таких соединений. Если злокачественное новообразование, подлежащее лечению, представляет собой андрогеннезависимый рак, пациент может ранее подвергаться антиандрогенной терапии, и после того, как рак становится андрогеннезависимый, пациенту можно вводить фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего изобретения.

[0276] Иногда может быть полезным также одновременное введение пациенту кардиопротектора (для предотвращения или уменьшения дисфункции миокарда, связанной с терапией) или одного или более цитокинов. В дополнение к вышеуказанным терапевтическим схемам пациент может быть подвергнут хирургическому удалению клеток злокачественного новообразования и/или лучевой терапии (например, внешнее лучевое облучение или терапия радиоактивно меченным агентом, таким как антитело) до, одновременно или после введение фармацевтической композиции или жидкой композиции настоящего изобретения. Подходящие дозировки для любого из вышеуказанных совместно вводимых агентов являют собой таковые, которые применяются в настоящее время, и могут быть снижены за счет комбинированного действия (синергия) агента и антитела к CD79b.

[0277] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может быть введена пациенту в комбинации с эффективным количеством другого терапевтического агента. В одном варианте реализации, терапевтический агент выбран из группы, состоящей из антитела, химиотерапевтического агента, цитотоксического агента, антиангиогенного агента, иммунодепрессанта, пролекарства, цитокина, антагониста цитокинов, цитотоксической радиотерапии, кортикостероида, противораковой вакцины и средства, ингибирующего рост. В другом варианте реализации, терапевтический агент выбран из одного или более из следующих, тамоксифен, летрозол, экземестан, анастрозол, иринотекан, цетуксимаб, фулвестрант, винорелбин, эрлотиниб, бевацизумаб, винкристин, мезилат иматиниба, сорафениб, лапатиниб, трастузумаб, цисплатин, гемцитабин, метотрексат, винбластин, карбоплатин, паклитаксел, 5-фторурацил, доксорубицин, бортезомиб, мелфалан, преднизон, преднизолон и доцетаксел.

[0278] В некоторых вариантах реализации, терапевтический агент представляет собой антитело к CD20.

[0279] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия можно вводить в комбинации с эффективным количеством антитела к CD20 для лечения нарушения пролиферации В-клеток. В одном варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВКЛ). В другом варианте реализации, нарушение пролиферации представляет собой фолликулярную лимфому (FL). В некоторых вариантах реализации, антитело к CD20 представляет собой ритуксимаб.

[0280] В некоторых вариантах реализации, терапевтический агент представляет собой химиотерапевтический агент. В одном варианте реализации, химиотерапевтический агент включает один или более из следующего: циклофосфамид, гидроксидаунорубицин, винкристин и преднизон. В другом варианте реализации, химиотерапевтический агент включает циклофосфамид, доксорубицин и преднизон.

[0281] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может вводиться в комбинации с эффективным количеством антитела к CD20 и химиотерапевтический агентом. В одном варианте реализации, химиотерапевтический агент включает циклофосфамид, доксорубицин и преднизон.

[0282] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может вводиться в комбинации с эффективным количеством антитела к CD20 и химиотерапевтический агентом для лечения нарушения пролиферации В-клеток. В одном варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой неходжкинскую лимфому (НХЛ). В другом варианте реализации, нарушение пролиферации В-клеток представляет собой диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВКЛ). В конкретном варианте реализации, ДВКЛ представляет собой рецидивирующую/рефрактерную ДВКЛ. В другом варианте реализации, НХЛ представляет собой рецидивирующую НХЛ или рефрактерную НХЛ. В другом конкретном варианте реализации, нарушение пролиферации представляет собой фолликулярную лимфому (ФЛ). В другом варианте реализации, ФЛ представляет собой рецидивирующую/рефрактерный ФЛ. В некоторых вариантах реализации, антитело к CD20 представляет собой ритуксимаб.

[0283] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может быть объединена с антителом к CD20 (либо голым антителом, либо КАЛП). В одном варианте реализации, антитело к CD20 представляет собой ритуксимаб (Rituxan®) или его биоаналог. В некоторых вариантах реализации, антитело к CD20 представляет собой окрелизумаб (2Н7) (Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, Калифорния) или его биоаналог. В другом варианте реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может быть объединена с антителом к VEGF (например, Avastin®).

[0284] В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может быть объединена с алкилирующим агентом. В некоторых вариантах реализации, фармацевтическая композиция или жидкая композиция настоящего раскрытия может быть объединена с алкилирующим агентом и антителом к CD20 (либо голым антителом, либо КАЛП). В некоторых вариантах реализации, антитело к CD20 представляет собой ритуксимаб (Rituxan®) или его биоаналог.В некоторых вариантах реализации, алкилирующий агент представляет собой 4-[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-1-метилбензимидазол-2-ил]бутановую кислоту и ее соли. В некоторых вариантах реализации, алкилирующий агент представляет собой бендамустин.

[0285] Комбинированную терапию можно применять согласно одновременной или последовательной схеме введения. При последовательном введении комбинация может быть введена за два или более введений. Комбинированное введение включает совместное введение при применении раздельных составов или единого фармацевтического состава и последовательное введение в любом порядке, причем предпочтительно, чтобы существовал период времени, когда оба (или все) активные агенты одновременно проявляют свою биологическую активность.

[0286] Подходящие дозировки любого из вышеупомянутых совместно вводимых агентов соответствуют дозировкам, применяемым в настоящее время, и могут быть снижены за счет комбинированного действия (синергии) нового агента и других химиотерапевтических агентов или способов лечения.

[0287] Комбинированная терапия может обеспечить «синергию» и подтвердить «синергетический эффект», т.е. что эффект, достигаемый при совместном применении активных ингредиентов, превышает сумму эффектов, полученных с применением этих соединений по отдельности. Синергетический эффект можно получить, если активные ингредиенты: (1) совместно составляют и вводят или одновременно доставляют в составе комбинированного дозированного состава; (2) доставляют по очереди или параллельно в виде отдельных составов; или (3) посредством некоторых других схем введения. При поочередной доставке синергетический эффект можно получить, если соединения вводят или доставляют последовательно, например, посредством различных инъекций в отдельных шприцах. В целом во время поочередной терапии эффективную дозу каждого активного ингредиента вводят последовательно, т.е. друг за другом, тогда как при комбинированной терапии эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводят совместно.

IV. Готовые изделия и наборы

[0288] Другой вариант реализации, настоящего раскрытия представляет собой промышленное изделие, содержащее материалы, полезные для лечения, профилактики и/или диагностики нарушения пролиферации. В одном варианте реализации, готовое изделие содержит контейнер и этикетку или вкладыш в упаковку на нем или связанные с ним. Подходящие контейнеры включают, например, бутыли, флаконы, шприцы и т.д. Контейнеры можно сформировать из различных материалов, например, из стекла или пластика. Контейнер содержит композицию, эффективную для лечения, предупреждения и/или диагностики ракового состояния, и может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может представлять собой пакет с раствором для внутривенного введения или флакон, содержащий пробку, прокалываемую иглой для подкожной инъекции). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой иммуноконъюгат антитела к CD79b настоящего раскрытия. На этикетке или вкладыше в упаковку указано, что композицию применяют для лечения злокачественного новообразования. Этикетка или вкладыш в упаковку дополнительно будут содержать инструкции по введению композиции больному со злокачественным новообразованием. Альтернативно, готовое изделие может дополнительно содержать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как стерильная вода для инъекций (СВДИ), бактериостатическая вода для инъекций (БВДИ), фосфатно-солевой буферный раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Оно также может содержать другие материалы, необходимые с коммерческой и пользовательской точки зрения, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

[0289] В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой контейнер, такой как бутыль, флакон, шприц, который включает фармацевтическую композицию настоящего раскрытия. В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой контейнер, такой как бутыль, флакон, шприц, который включает лиофилизированную фармацевтическую композицию (например, массу) настоящего раскрытия. В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой контейнер, такой как бутыль, флакон, шприц, который включает восстановленную лиофилизированную фармацевтическую композицию настоящего раскрытия. В конкретном варианте реализации, готовое изделие представляет собой контейнер, который включает лиофилизированную фармацевтическую композицию, восстановленную стерильной водой для инъекций (СВДИ).

[0290] В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой пластиковый контейнер, который включает фармацевтическую композицию настоящего раскрытия. В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой стеклянный контейнер, который включает фармацевтическую композицию настоящего раскрытия.

[0291] В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой стеклянный флакон, который включает фармацевтическую композицию настоящего раскрытия. В конкретном варианте реализации, готовое изделие представляет собой стеклянный флакон, который включает лиофилизированную фармацевтическую композицию (такую как масса) настоящего раскрытия. В конкретном варианте реализации, изделие представляет собой стеклянный флакон, который включает восстановленную лиофилизированную фармацевтическую композицию (такую как масса) настоящего раскрытия. В конкретном варианте реализации, готовое изделие представляет собой стеклянный флакон, который включает лиофилизированную фармацевтическую композицию (например, массу), восстановленную стерильной водой для инъекций (СВДИ).

В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой пакет для внутривенного введения, содержащий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия. Пакет для внутривенного введения может состоять из материалов, включая, без ограничения, полиолефин (ПО), поливинилхлорид (ПВХ), этиленвинилацетат, полипропилен (ПП), полиэтилен (ПЭ), сложный сополиэфир эфир или их комбинацию. В некоторых вариантах реализации, пакет для внутривенного введения представляет собой пакет из полиолефина (ПО), пакет из полипропилена (ПП), пакет из полиэтилена (ПЭ) или пакет из поливинилхлорида (ПВХ).

[0292] В некоторых вариантах реализации, готовое изделие, содержащее фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия, может иметь объем, составляющий по меньшей мере около 5 миллилитров (мл), по меньшей мере около 10 мл, по меньшей мере около 15 мл, по меньшей мере около 20 мл, по меньшей мере около 25 мл, по меньшей мере около 30 мл, по меньшей мере около 35 мл, по меньшей мере около 40 мл, по меньшей мере около 45 мл, по меньшей мере около 50 мл, по меньшей мере около 55 мл, по меньшей мере около 60 мл, по меньшей мере около 65 мл, по меньшей мере около 70 мл, по меньшей мере около 75 мл, по меньшей мере около 80 мл, по меньшей мере около 85 мл, по меньшей мере около 90 мл, по меньшей мере около 95 мл, по меньшей мере около 100 мл, по меньшей мере около 105 мл, по меньшей мере около 110 мл, по меньшей мере около 115 мл, по меньшей мере около 120 мл, по меньшей мере около 125 мл, по меньшей мере около 130 мл, по меньшей мере около 135 мл, по меньшей мере около 140 мл, по меньшей мере около 145 мл, по меньшей мере около 150 мл, по меньшей мере около 155 мл, по меньшей мере около 160 мл, по меньшей мере около 165 мл, по меньшей мере около 170 мл, по меньшей мере около 175 мл, по меньшей мере около 180 мл, по меньшей мере около 185 мл, по меньшей мере около 190 мл, по меньшей мере около 195 мл или по меньшей мере около 200 мл. В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой пакет из 110, который может вмещать объем по меньшей мере около 25 мл, по меньшей мере около 50 мл или по меньшей мере около 100 мл. В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой пакет из ПВХ, который может вмещать объем по меньшей мере около 25 мл, по меньшей мере около 50 мл или по меньшей мере около 100 мл.

[0293] В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой пакет для внутривенного введения, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия и буфер. В конкретном варианте реализации, буфер может быть физиологическим раствором, половинным физиологическим раствором, 5% масс./об. декстрозой, лактатным раствором Рингера или их комбинацией. В одном варианте реализации, готовое изделие представляет собой пакет для внутривенного введения, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия, растворенную в половинном физиологическом растворе.

[0294] В некоторых вариантах реализации, готовое изделие представляет собой пакет для внутривенного введения, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия и изотонический буфер. В одном варианте реализации, готовое изделие представляет собой пакет для внутривенного введения, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия, растворенную в физиологическом растворе.

[0295] В одном примерном варианте реализации, готовое изделие представляет собой пакет из ПВХ, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия и физиологический раствор, который может вместить объем по меньшей мере около 100 мл. В другом иллюстративном варианте реализации, готовое изделие представляет собой мешок из ПВХ, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия и физиологический раствор, который может вместить объем около 100 мл.

[0296] В другом иллюстративном варианте реализации, готовое изделие представляет собой пакет из ПО, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию настоящего раскрытия и физиологический раствор, который может вместить объем по меньшей мере около 100 мл. В еще одном примерном варианте реализации, готовое изделие представляет собой пакет из ПО, включающий фармацевтическую композицию или жидкую композицию по настоящего раскрытия и половинный физиологический раствор, который может вместить объем по меньшей мере около 100 мл.

[0297] В любом из вариантов реализации, данного изобретения стабильная фармацевтическая или жидкая фармацевтическая композиция может храниться в контейнере, таком как бутыль, флакон, шприц или пакет для внутривенного (в/в) введения.

[0298] Также предлагают наборы, которые можно применять для различных целей, например, для анализов уничтожения экспрессирующих CD79b клеток. Готовое изделие содержит контейнер и этикетку или вкладыш в упаковку на нем или связанные с ним. Контейнер содержит композицию, содержащую по меньшей мере один иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b настоящего раскрытия. Могут быть включены дополнительные контейнеры, которые содержат, например, разбавители, поверхностно-активные вещества, буферы, контрольные антитела. Этикетка или вкладыш в упаковку могут содержать описание композиции, а также инструкции по предполагаемому применению.

[0299] Следующее описание представлено, чтобы дать возможность специалисту в данной области техники создавать и применять различные варианты реализации. Описание конкретных устройств, способов и приложений приводится только в качестве примеров. Различные модификации описанных в данном документе примеров будут очевидны для специалистов в данной области техники, и общие принципы, определенные в данном документе, могут быть применены к другим примерам и приложениям, не выходя за рамки сущности и объема различных вариантов реализации. Таким образом, различные варианты реализации, не предназначены для ограничения описанными и показанными примерами, но должны соответствовать объему, соответствующему формуле изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Исследования поверхностно-активного вещества для иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b

[0300] Композиция, которую первоначально применяли для ранней фазы клинических испытаний у пациентов анти-CD79b-vc-MMAE, представляла собой жидкую композицию, содержащую гистидинацетатный буфер с 0,02% полисорбата 20, который доставлялся пациентам через шприцевой насос для внутривенного введения. Чтобы разработать коммерческую композицию лекарственного препарата, были протестированы различные неионные поверхностно-активные вещества в различных концентрациях, чтобы определить, могут ли они защитить и стабилизировать анти-CD79b-vc-MMAE от агрегации при разбавлении в пакете для в/в введения, который может быть путем доставки к пациентам в коммерческих условиях. В частности, стабильность анти-CD79b-vc-MMAE оценивалась как в (а) статических условиях в пакете для в/в введения, так и в (b) условиях межфазного стресса воздух-вода, вызванного кратковременным перемешиванием в пакете для в/в введения.

Анти-CD79b-vc-MMAE

[0301] Анти-CD79b-vc-MMAE разводили в 20 мМ гистидинацетате, рН 5,5. Буфер 20 мМ гистидинацетата с рН 5,5 получали добавлением 3,11 г гистидина и 1,03 мл ледяной уксусной кислоты в 800 мл свежей сверхчистой воды. Измеренный рН составил 5,5±0,1. Полученный раствор доводили до 1 л, используя свежую сверхчистую воду, фильтровали через ПЭС фильтр 0,22 мкМ и хранили при 2-8°С. Концентрации анти-CD79b-vc-MMAE были протестированы как (i) 10 мг/мл, так и (ii) 20 мг/мл путем разбавления фильтрованным буфером до 10 мг/мл или 20 мг/мл, если требуется. Разбавленный материал хранили при 2 8°С в защищенном от света месте.

Поверхностно-активное вещество

[0302] Были протестированы следующие поверхностно-активные вещества: (i) полисорбат 20 (ПС20), чистоты USP, NF, производимый Croda; (ii) полисорбат 80 (ПС80), чистоты USP, NF, производимый Croda; (iii) полоксамер (П188), чистоты USP, NF, содержащий 98 ч/млн бутилированного гидрокситоулуена, производимый Spectrum Chemicals; и (iv) N-октил-β-D глюкопиранозид (ОГ) С14Н2806, FW: 292,4, производимый Affymetrix, Anagrade. Композиции 10%, 1,0% и 0,5% исходного раствора ПС20 готовили следующим образом: в зависимости от целевой концентрации ПС20 в пакете использовался 10%, 1% или 0,5% исходный раствор ПС20 в сверхчистой воде. 10% исходный раствор ПС20 готовили путем добавления 10 г ПС20 в мерную колбу на 100 мл. Колбу наполняли 60 мл сверхчистой воды и затем перемешивали магнитной мешалкой, чтобы раствор хорошо перемешался. После того как пузырьки спали в течение 30 минут, колбу наполнили до 100 мл сверхчистой водой. Раствор переносили в светозащитный контейнер и хранили максимум 1 неделю при 2-8°С. Аналогичную процедуру использовали для приготовления 1,0% раствора ПС20 с применением 1,0 г ПС20 в 100 мл сверхчистой воды. Для приготовления 0,5% раствора ПС20 использовали разбавление 1:1 (об./об.) 1,0% исходного раствора ПС20.

[0303] Приготовление 0,5% ПС80 было следующим: Исходный 10% ПС20 получали добавлением 10 г ПС80 в мерную колбу на 100 мл. Колбу наполняли 50 мл сверхчистой воды и затем перемешивали магнитной мешалкой до тех пор, пока раствор не стал хорошо перемешанным. Раствору давали отстояться в течение 30 минут, чтобы пузырьки спали, а затем перемешивали. Затем объем раствора доводили до 100 мл, используя сверхчистую воду. Для получения 0,5% исходного раствора ПС80 0,5 мл 10% исходного раствора ПС80 доводили до 10 мл с помощью сверхчистой воды. Растворы переносили в светозащитный контейнер и хранили максимум 1 неделю при 2-8°С.

[0304] Приготовление 0,5% П188 было следующим: Исходный 10% П188 готовили путем добавления 10 г П188 в мерную колбу на 100 мл. Колбу наполняли 60 мл сверхчистой воды и затем перемешивали магнитной мешалкой до тех пор, пока раствор не стал хорошо перемешанным. Раствору давали отстояться в течение 30 минут, чтобы пузырьки спали, а затем перемешивали. Затем объем раствора доводили до 100 мл, используя сверхчистую воду. Для получения 0,5% исходного раствора П188 0,5 мл 10% исходного раствора П188 доводили до 10 мл с помощью сверхчистой воды. Растворы переносили в светозащитный контейнер и хранили максимум 1 неделю при 2-8°С.

А. Статические исследования пакетов для в/в:

[0305] Анти-CD79b-vc-MMAE разводили в пакетах для в/в. Чтобы имитировать рекомендованную процедуру приготовления в аптеке, из пакета для в/в был извлечен такой же объем физиологического раствора, как и общий объем добавляемого анти-CD79b-vc-MMAE и поверхностно-активного вещества. Поверхностно-активные вещества вводили в пакеты для в/в перед до введения композиции анти-CD79b-vc-MMAE в гистидиновом буфере, гарантируя, что анти-CD79b-vc-MMAE в виде пула ультрафильтрационной диафильтрации без поверхностно-активного вещества (UFDF) не подвергался воздействию физиологического раствора без какого-либо наличия поверхностно-активного вещества в пакете для в/в введения. Затем пакеты для в/в осторожно вращали, чтобы обеспечить полное перемешивание, избегая при этом сильного встряхивания и перемешивания в пакетах, содержащих анти-CD79b-vc-MMAE.

[0306] Приготовление анти-CD79b-vc-MMAE в физиологическом растворе, содержащемся в стеклянных флаконах: Различные количества физиологического раствора (0,9% хлорида натрия), поверхностно-активных веществ и иммуноконъюгата добавляли в стеклянный флакон Forma Vitrum объемом 15 см3 и закрывали пробкой Daikyo диаметром 20 мм. Позднее образцы инкубировали при определенных условиях исследования.

[0307] Сбор образцов: в ходе исследования образцы отбирали с помощью шприца BD Falcon объемом 1 см3 или 5 см3 в сочетании с иглой 18 G. Собранные образцы хранили в 10 см3 контейнерах из ПЭТГ (Nalgene).

[0308] Определение концентрации белка УФ-спектрофотометрическим сканированием: Концентрацию белка после разведения определяли для выбранных образцов с помощью спектрофотометра Agilent. Образцы, собранные из пакетов для в/в, разбавляли (при необходимости) объемно так, чтобы УФ-сигнал составлял от 0,1 до 1,0 ОЕ. Поглощение регистрировали при 279 нм и 320 нм. Определение концентрации по УФ рассчитывали с применением коэффициента экстинкции 1,40 (мг/мл)-1 см-1. Скорректированный А279 был получен путем вычитания А320 нм из А279 нм. Эта поправка учитывает мутность раствора и позволяет точно измерить концентрацию белка.

[0309] Мутность: Мутность образцов измеряли путем регистрации среднего УФ-поглощения в диапазоне 340 360 нм с применением кюветы с длиной пути 1 см в спектрофотометре Agilent. Образцом базовой линии для спектрофотометра была очищенная вода.

[0310] Видимые частицы: Присутствие каких-либо видимых частиц оценивали визуально на черно-белом фоне светового короба с образцами в 10 см3 контейнерах из ПЭТГ. Содержание растворимых агрегатов в качестве меры нестабильности белка определяли с помощью высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (Э-ВЭЖХ) на Agilent 1200/1280 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния), оснащенном детектором с диодной матрицей, установленным на 280 нм, и Tosoh Bioscience LLC (Монтгомеривилл, Пенсильвания) TSK-Gel G3000SWXL-эксклюзионной колонкой (300×7,8 мм, 5 мкм) при температуре окружающей среды. Образцы элюировали в течение 30 мин при изократической скорости потока 0,5 мл/мин, используя 0,2 М K3PO4, 0,25 М KCl, рН 6,2.

[0311] Высокоточный счетчик жидких частиц (HIAC): HIAC применялся для определения размера и подсчета частиц в растворе. Затемнение света применяли для количественной оценки видимых и/или невидимых частиц (SVP) с применением прибора HIAC (модель 9703+). Были собраны частицы следующих размеров: 1,6, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25 и 50 мкм.

Исследования стабильности в пакетах для в/в при статическом хранении:

[0312] Для исследования влияния поверхностно-активных веществ в пакетах для в/в первоначальное исследование проводилось как в статических условиях, так и в условиях перемешивания. Диапазон доз, протестированный в этих исследованиях для анти-CD79b-vc-MMAE, был разработан и выполнен в диапазоне от 1,8 мг/кг до 2,4 мг/кг. Предполагалось, что большинство пациентов весит от 40 до 120 кг. Исходя из этих предположений, общая доза на пакет для в/в варьировалась от 72 мг (низкая доза/низкий вес) до 288 мг (высокая доза/большой вес).

[0313] Фиг. 1-2 суммируют результаты для пакетов для в/в с фиксированной концентрацией ПС20 0,005% в пакете и конечной концентрацией анти-CD79b-vc-MMAE 0,65 мг/мл. Концентрация анти-CD79b-vc-MMAE в пакете для в/в введения была выбрана исходя из низкой дозы 1,8 мг/кг для пациента с самым низким весом - 40 кг, в пакете для в/в введения объемом 100 мл. Поскольку 100 мл пакеты для в/в переполнены на 10 мл, конечная концентрация в пакете для в/в введения была: (1,8 мг/кг × 40 кг)/110 мл = 0,65 мг/мл

[0314] В статических условиях хранения при 30°С в течение 22 часов не было значительных различий между типами пакетов для в/в в отношении физической стабильности анти-CD79b-vc-MMAE. Все пакеты показали увеличение (А) содержания высокомолекулярных соединений (ВМС) на 0,3% + 0,1%, измеренное с помощью ЭХ. Это продемонстрировало, что анти-CD79b-vc-ММАЕ был нестабильным при 30°С при разбавлении в 0,9% NaCl.

Поверхностно-активное вещество и скрининговые исследования при статическом хранении:

[0315] Для хорошо контролируемого и эффективного скрининга типа поверхностно-активного вещества и концентрации поверхностно-активного вещества необходимо было применять фиксированную концентрацию белка в пакете. Концентрация анти-CD79b-vc-MMAE в пакете 2,6 мг/мл была выбрана на основе максимально возможной дозы 2,4 мг/кг для тяжело весящего пациента массой 120 кг, вводимой в пакет на 100 мл, что является рекомендуемым размером пакета для клиники и который имеет 10% объем перелива, как видно из следующего расчета: (2,4 мг/кг × 120 кг)/110 мл = 2,6 мг/мл. Предполагалось, что самая высокая концентрация белка в пакете будет наихудшим случаем, поскольку более высокие объемные концентрации белка будут вызывать более быструю адсорбцию антитела на границе раздела воздух-вода, что приводит к более высоким уровням агрегации, опосредованной межфазной поверхностью.

Влияние температуры на стабильность при статическом хранении:

[0316] Обеспечение подходящих условий хранения для составного пакета для в/в важно для качества продукта терапевтического антитела, и это было оценено. Эта информация также требуется для подготовки руководств для аптеки и вкладышей в продукты, чтобы гарантировать правильное применение любых терапевтических антител. Различные уровни ПС20 в пакетах были испытаны при температурах 30°С, 25°С и 2-8°С. При 2-8°С, тестируемые уровни ПС20 в пакете (0,003%, 0,005% и 0,01%) не показали каких-либо существенных изменений в количестве ВМС после 22 часов статического хранения (Фиг. 3). Все изменения (% ВМС) составили <0,02%. При 25°С, и уровнях ПС20 0,005%, 0,01%, 0,015%, 0,025% и 0,030% в пакете, увеличение количества ~ 0,1% ВМС наблюдалось после 22 часов статического хранения (Фиг. 3). Увеличение количества ВМС при 30°С было намного больше, чем наблюдаемое при 25°С. При уровнях ПС20 0,004%, 0,015%, 0,02%, 0,025%, 0,05% и 0,1% в пакете после 22 часов статического хранения наблюдалось увеличение количества ВМС на 0,3+0,1% (Фиг. 3).

[0317] При всех температурах увеличение количества ВМС не зависело от концентрации ПС20 в пакете, что указывает на то, что агрегация в статических условиях не опосредована межфазным стрессом. Увеличение количества ВМС показало сильную корреляцию с температурой хранения. Эти результаты хорошо коррелируют с последующими исследованиями, проведенными Beckley, N. et al., Investigation into Temperature-Induced Aggregation of an Antibody Drug Conjugate. Bioconjugate Chemistry., 24, pp: 1674-1683 (2013), указывая, что образование ВМС в конъюгатах антитело-лекарственный препарат (КАЛП) при более высоких температурах объясняется повышенной чувствительностью третичной структуры к термическому стрессу, предположительно из-за наличия конъюгированных лекарственных препаратов в межцепочечных цистеинах, близких к домену СН2.

Тестирование смесей поверхностно-активных веществ:

[0318] Известно, что полоксамер 188 (П188) снижает образование ВМС в пакетах для в/в, но при перемешивании может наблюдаться значительное увеличение количества невидимых частиц (SVP). Напротив, ПС20 не увеличивал SVP. Для дальнейшего исследования этих различных результатов между двумя поверхностно-активными веществами была использована смесь ПС20 - П188 в равном соотношении по массе 1: 1, чтобы определить, может ли ПС20 предотвратить образование SVP, а П188 ограничить увеличение количества ВМС. Исследование проводилось в 25 мл пакетах для в/в с концентрацией анти-CD79b-vc-MMAE 2,6 мг/мл в пакете. В пересчете на массу добавляли равные количества ПС20 и П188, чтобы получить общую концентрацию поверхностно-активного вещества в пакете для в/в введения 0,05% или 0,1%. Увеличение в количестве ВМС 0,3-0,4% наблюдалась при статическом состоянии при температуре 30°С в течение 22 часов в Таблице 1 ниже.

[0319] Наблюдалось небольшое увеличение размеров частиц более 5 мкм, 10 мкм и 25 мкм. Когда в пакете для в/в введения использовалось 0,1% поверхностно-активного вещества, наблюдалось увеличение частиц размером 2 мкм. На основании результатов, смесь поверхностно-активных веществ не продемонстрировала существенной разницы по сравнению с отдельным ПС20.

[0320] В этом исследовании оценивали четыре различных поверхностно-активных вещества, включая ПС20, ПС80, П188 и октилглюкозид (ОГ). После инкубации при 30°С в течение 22 часов с 0,02% поверхностно-активного вещества и 2,6 мг/мл лекарственного продукта во флаконах, заполненных физиологическим раствором из пакетов из ПВХ, наблюдалось увеличение количества ВМС на 0,3-0,4%, демонстрируя, что агрегация также не зависела от типа используемого поверхностно-активного вещества (Фиг. 4).

Стабильность анти-CD79b-vc-MMAE при статическом хранении во флаконах:

[0321] Учитывая физическую нестабильность анти-CD79b-vc-MMAE в физиологическом растворе (0,9% NaCl) при статическом хранении в пакете для в/в введения, стабильность иммуноконъюгата в 5% декстрозе (D5W) и половинном физиологическом растворе (0,45% масс./об. NaCl) была протестирована во флаконах для оценки зависимости нестабильности иммуноконъюгата от ионной силы. Растворы, содержащие 0,02% ПС20, были приготовлены с фиксированной концентрацией анти-CD79b-vc-MMAE 2,6 мг/мл. Анти-CD79b-vc-MMAE продемонстрировал значительное улучшение физической стабильности как в половинном физиологическом растворе, так и в D5W (Фиг. 4). В растворе D5W не было изменений в количестве ВМС, в то время как в половинном физиологическом растворе количество ВМС увеличилось не более чем на 0,1% после 24 часов статического хранения при 30°С. Хотя препарат в D5W ограничивал агрегацию анти-CD79b-vc-MMAE, гликирование антитела в растворе D5W представляет собой известный риск (см. Fischer, S. et al., Glycation during Storage and Administration of Monoclonal Antibody Formulations. European J Pharma and Biopharm. vol. 70; pp. 42-50 (2008)). Таким образом, в/в доставка анти-CD79b-vc-MMAE с 5% -ными пакетами декстрозы не рассматривалась далее из-за возможности гликирования. Несмотря на то, что половинный физиологический раствор продемонстрировал значительное улучшение физической стабильности по сравнению с обычным физиологическим раствором, из-за низкой доступности готовых пакетов с половинным физиологическим раствором в глобальных клинических и коммерческих условиях, а также из-за неудобств и потенциальных рисков микробного загрязнения, связанных с приготовлением половинного физиологического раствора, применение половинного физиологического раствора для в/в инфузии анти-CD79b-vc-MMAE также не было предпочтительным.

Выводы исследований статической стабильности в пакетах для в/в и стеклянных флаконах:

[0322] Описанные выше исследования статической стабильности демонстрируют, что агрегация анти-CD79b-vc-MMAE обусловлена средой с высокой ионной силой, что указывает на то, что скорость агрегации в буфере для композиции значительно ниже, чем в физиологическом растворе.

В. Исследования перемешивания в пакетах для в/в:

[0323] Был проведен ряд исследований перемешивания в пакетах для в/в для поддержки транспортировки составных пакетов для в/в, содержащих анти-CD79b-vc-MMAE, в больнице или клинических условиях для введения дозы. Хотя транспортировка подготовленных пакетов для в/в, содержащих терапевтические белки, обычно не рекомендуется из-за риска агрегации, часто существует практическая необходимость в транспортировке пакетов для в/в в клинических условиях, особенно в удаленных местах с ограниченным доступом к аптекам. Следовательно, необходимо поддерживать минимальный объем транспортировки, а влияние на лекарственное средство из-за взбалтывания пакета для в/в необходимо оценивать во время разработки. Стресс в пакетах для в/в во время транспортировки может вызвать физическое разложение терапевтического антитела. Физическая деградация (т.е. агрегация и образование частиц) антитела, вероятно, опосредована адсорбцией на границе раздела воздух-жидкость в пакете для внутривенного введения, которая подвергается непрерывной регенерации во время перемешивания. В ходе исследований, представленных ниже, для исследований перемешивания в пакетах для в/в использовался эллиптический лабораторный шейкер MaxQ 4000 (длина орбиты 0,75 дюйма). Пакеты для в/в помещали в плоскость шейкера.

Влияние температуры на стабильность при перемешивании в пакетах для в/в:

[0324] Исследования влияния перемешивания были проведены с различными уровнями ПС20 в пакете при 2-8°С, 25°С и 30°С (Фиг. 5А - Фиг. 5С). Скорость увеличения количества ВМС была больше при 30°С, чем при 25°С, что было больше, чем при 2-8°С. Увеличение количества ВМС коррелировало с температурой во время перемешивания в пакете для в/в введения. Для пакетов, которые содержат концентрации ПС20 0,01%, 0,005% и 0,003% не было никакого увеличения в количестве ВМС при перемешивании в течение 2 часов при температуре 2-8°С (Фиг. 5А). При 30°С, увеличение количества ВМС зависело от концентрации ПС20 в пакете (Фиг. 5С). Было отмечено, что увеличение количества ВМС при перемешивании во всех концентрациях ПС20 как при 2-8°С (Фиг. 5А), так и при 25°С было не линейным (Фиг. 5В). Такое нелинейное поведение, вероятно, связано с отбором проб в разные моменты времени.

Влияние смеси поверхностно-активных веществ на стабильность при перемешивании в пакете для в/в введения:

[0325] Смесь ПС20 - П188 в равном соотношении по массе 1:1 использовали для определения, может ли ПС20 предотвратить образование SVP, и П188 ограничить увеличение количества ВМС при перемешивании. Исследование проводилось в 25 мл пакетах для в/в с концентрацией анти-CD79b-vc-MMAE 2,6 мг/мл в пакете. В пересчете на массу добавляли равные количества ПС20 и П188, чтобы получить общую концентрацию поверхностно-активного вещества в пакете для в/в введения 0,05% или 0,1%.

[0326] Когда 0,05% от общего количества поверхностно-активного вещества использовали в пакете для в/в введения, наблюдалось увеличение количества ВМС на 2,9% после перемешивания при 30°С в течение 2 часов (Таблица 2). Наблюдалась тенденция к увеличению размеров частиц более 5 мкм, 10 мкм и 25 мкм до 1 часа, а количество частиц превышало предел обнаружения (ПО) через 2 часа. Когда 0,1% от общего количества поверхностно-активного вещества использовали в пакете для в/в введения, наблюдалась тенденция к увеличению количества частиц всех размеров, но это было значительно ниже, чем в пакете с 0,05% поверхностно-активного вещества (Таблица 2). Увеличение количества ВМС также было ниже на около 2,8% после 2 часов перемешивания по сравнению с 0,05% общей концентрацией поверхностно-активного вещества в пакете для в/в введения. На основании этих результатов смесь поверхностно-активных веществ не показала разницы по сравнению с одним только ПС20.

Кратковременное перемешивание в пакете для в/в введения при 30°С:

[0327] Целью этого исследования было изучить транспортировку пакетов для в/в с разбавленным анти-CD79b-vc-MMAE в течение короткого времени в условиях окружающей среды и определить эффективную концентрацию ПС20 в композиции анти-CD79b-vc-MMAAE. В этом исследовании пакет подвергали кратковременному перемешиванию при 30°С в течение 30 минут. Это более короткое перемешивание при 30°С может перекрыть потенциальное перемешивание, которое разбавленный анти-CD79b-vc-MMAE может испытывать во время транспортировки в больнице или других учреждениях в условиях окружающей среды. Исследование проводилось с 0,001%, 0,002%, 0,003% и 0,005% ПС20, разбавленным в пакете для в/в введения и перемешанным при 30°С и 100 об/мин. Результаты приведены на Фиг. 6. Согласно результатам, при 0,005% ПС20 в пакете наблюдается увеличение <0,1%. В этих условиях для анти-CD79b-vc-MMAE существует прямая корреляция увеличения ВМС с концентрацией ПС20 в пакете для в/в введения. Основываясь на этом исследовании, для обеспечения физической стабильности разбавленных анти-CD79b-vc-MMAE в пакете для в/в введения минимальное количество ПС20 в пакете для в/в введения составляло от 0,003% до 0,005%, чтобы удерживать совокупные уровни ниже предела количественного определения.

Перемешивание при 2-8°С во время охлаждения пакета для в/в (без предварительного охлаждения пакетов):

[0328] Целью этого исследования было поддержать транспортировку составленных пакетов для в/в в более реалистичном сценарии. Обычно пакеты для в/в составляются фармацевтами и перевозятся в транспортных средствах, которые могут или не могут быть предварительно охлаждены. Перед началом этого эксперимента пакеты уравновешивали до 30°С, чтобы имитировать более высокие температуры окружающей среды, которые могут существовать в разных частях мира. Это гарантирует стабильность разбавленного композиции лекарственного препарата (КЛП), даже если пакеты не были предварительно охлаждены или транспортировались в контейнере, который не был предварительно охлажден. Исследование проводили с 2,6 мг/мл анти-CD79b-vc-ММАЕ с четырьмя различными уровнями ПС20 в 100 мл пакетах для в/в: 0,001%, 0,002%, 0,003% и 0,005%. Существует увеличение количества ВМС на <0,1% в пакетах для в/в с ≤0,002% ПС20. Основываясь на результатах этого исследования модели перемешивания, минимальное количество ПС20 в пакете для в/в введения составляло от 0,001% до 0,002%, чтобы удерживать совокупные уровни ниже предела количественного определения. Результаты приведены на Фиг. 7.

Выводы:

[0329] Конъюгаты антитело-лекарственный препарат (КАЛП) особенно более чувствительны к физиологическому раствору и буферам с высокой ионной силой, чем обычные неконъюгированные антитела (Adem, Y., et al. Bioconjugate Chemistry, 25 (2014) 656-664). Протестированные анти-CD79b-vc-MMAE продемонстрировали увеличение количества ВМС при разведении в 0,3% физиологическом растворе при 30°С в течение 22 часов при статическом хранении.

[0330] Основываясь на двух моделях перемешивания, анти-CD79b-vc-ММАЕ стабилен при содержании не менее 0,002% ПС20 в пакете для в/в введения во время перемешивания, вызванного кратковременной транспортировкой в течение 1 часа при 2-8°С. Для соответствия требованиям стабильности при перемешивании во время обращения, транспортировки и краткосрочного хранения конечная предлагаемая концентрация поверхностно-активного вещества в композиции анти-CD79b-vc-MMAE составляет 0,12%, что дает 0,004% в пакете для наименьшего ожидаемого веса пациента (40 кг) в сочетании с применением 100 мл пакета для в/в. Было показано, что этот уровень поверхностно-активного вещества защищает анти-CD79b-vc-MMAE в диапазоне доз от 1,8 мг/кг до 2,4 мг/кг. Следует отметить, что это количество поверхностно-активного вещества, в частности, ПС20, неожиданно высоко и противоречит здравому смыслу с точки зрения научной литературы, см., Kerwin ВА. Polysorbates 20 and 80 used in the Formulation of Protein Biotherapeutics: Structure and Degradation Pathways. Journal of Pharmaceutical Sciences. 2008;97(8):2924-2935. Это количество ПС20, используемое для лекарственного продукта анти-CD79b-vc-MMAE, также неожиданно выше по сравнению с другим иммуноконъюгатом, анти-CD22-vc-MMAE, для которого коммерческая композиция с 0,05% ПС20 была признан подходящей для разведения в пакетах для в/в (данные не показаны).

Пример 2: Снижение рисков окисления иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, и гидролиза линкера

[0331] Установление концентрации поверхностно-активного вещества, подходящей для доставки с помощью пакета для в/в, как описано в Примере 1, потенциально усугубляет проблему окисления анти-CD79b-vc-MMAE. Известно, что более высокие уровни полисорбата обычно связаны с более высокими уровнями пероксида из-за аутоокислительного разложения полисорбата. См., Lam ХМ, Yang JY, Cleland JL. Antioxidants for prevention of methionine oxidation in recombinant monoclonal antibody HER2. Journal of Pharmaceutical Sciences. 1997;86(11):1250-1255; Donbrow M, Azaz E, Pillersdorf A. Autoxidation of polysorbates. Journal of Pharmaceutical Sciences. 1978;67(12):1676-1681; Kerwin BA. Polysorbates 20 and 80 used in the Formulation of Protein Biotherapeutics: Structure and Degradation Pathways. Journal of Pharmaceutical Sciences. 2008;97(8):2924-2935.

[0332] Кроме того, известно, что окисление триптофана может происходить в присутствии ПС20. См., Lam X, et al., Site-Specific Tryptophan Oxidation Induced by Autocatalytic Reaction of Polysorbate 20 in Protein Formulation., Pharm Res. (2011) 28:2543-2555. Примечательно, что для антитела к CD79b, применяемые в настоящем раскрытии, в вариабельной тяжелой цепи HVR 1 присутствует триптофан: GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4). Склонность к окислению в стрессовых условиях ААРН (например, в течение 2 недель при 40°С, 6 месяцев при 25°С или 6 месяцев при 2-8°С) определяли с помощью масс-спектрометрического анализа триптических пептидов после составления анти-CD79b-vc-MMAE в ААРН. Подвергнутые стрессу анти-CD79b-vc-MMAE переваривали трипсином, и расщепленные пептиды подвергали ЖХ-МС/МС для определения процента окисления (данные не показаны). При картировании пептидов наблюдали 68% окисление триптофана HVR. Это привело к потере около 58% активности анти-CD79b-vc-MMAE (данные не показаны). Следовательно, необходимо было снизить риск окисления.

[0333] Дополнительные факторы, которые следует учитывать, включают, как управлять сукцинимидным гидролизом линкера иммуноконъюгата. В настоящем иммуноконъюгате к CD79b-vc-MMAE используется малеимид-содержащий лекарственное средство-линкер, конъюгированный с остатками цистеина антитела с образованием тиосукцинимидных связей. Известно, что такие тиосукцинимидные связи могут претерпевать две конкурирующие реакции в плазме пациента: (а) элиминирование малеимида, что приводит к нежелательной потере лекарственного средства из иммуноконъюгата; и (b) гидролиз тиосукцинимидного кольца с образованием производного янтарной кислоты, которое не может быть отщеплено. См., Фиг. 8 и Lyon, R., et al Self-Stabilizing ADCs: Conjugates Prepared with Maleimido Drug-Linkers that Catalyze their own Thiosuccinimide Ring Hydrolysis., Abstract No. 4333, American Association for Cancer Research (April 2013). Это важный критический атрибут качества (CQA), поскольку он потенциально влияет на фармакокинетику (ФК) и безопасность. Ранее было продемонстрировано, что исходная жидкая композиция, применяемая для ранней фазы клинических испытаний у пациентов, например, жидкая композиция в гистидинацетатном буфере при рН 5,5, продемонстрировала около 9% увеличение кислотности при рекомендуемых условиях хранения в течение 2 лет (данные не показаны).

[0334] В результате этих трех рисков: повышенный риск окисления из-за повышенных концентраций ПС20; повышенный риск окисления из-за окисления триптофана, что может привести к потере активности; и риск гидролиза линкера, который мог бы привести к потере лекарственного средства ММАЕ из иммуноконъюгата и привести к присутствию свободного лекарства в плазме пациента, была предложена лиофилизированная композиция для уменьшения этих рисков, что приведет к более длительному и более стабильному сроку хранения.

А. Исследование альтернативных видов буфера:

[0335] Чтобы инициировать разработку композиции для лиофилизированного продукта, были исследованы альтернативные виды буфера. В качестве буфера, примененного в композиции на ранней стадии клинической фазы, был гистидинацетатный буфер. Известно, что L-гистидин может окисляться с помощью самых разных механизмов, из которых наиболее распространенным наблюдаемым механизмом окисления является фотоокисление. См., Mason, В., et al Oxidation of Free L-histidine by tert-Butylhydroperoxide., Pharm Res. (2010) 27(3):447-456. Кроме того, ацетат может испаряться во время процесса лиофилизации, что приводит к изменению рН, которое может дестабилизировать иммуноконъюгат. Кроме того, наличие ацетата может рассматриваться как потенциальная опасность для процесса лиофилизации, так как ацетат легко воспламеняется. Поэтому были оценены альтернативные виды буферов. Протестировали три композиции как показано в

[0336] Стабильность лиофилизированных-оттаянных анти-CD79b-vc-ММАЕ фармацевтических композиций в Таблице 3 в одноразовых контейнерах ПЭТГ оценивалась в условиях стресса замораживания/оттаивания. Белковые композиции стерилизовали фильтрованием и заполняли контейнеры из ПЭТГ. Контейнеры помещали при -20°С на Т = 0 и 1 неделю. Контейнеры замораживали и оттаивали в общей сложности пять раз до комнатной температуры. Были проанализированы только Т = 0 и третий цикл замораживания-оттаивания. Результаты приведены в Таблице 4.

[0337] Результаты показывают, что никаких проблем не наблюдалось ни с одной из трех протестированных композиций. Следовательно, применение гистидина или сукцината будет приемлемой альтернативой гистидинацетату.

[0338] Затем проводили скрининг стабильности, проверяющий влияние рН на образование варианта заряда при 30°С. Используя те же три жидкие композиции, как и в Таблице 3, которые были подвержены стрессу при 30°С в трех различных временных точках 2 недели, 4 недели и 8 недель, распределение заряда варианта было оценено посредством анализатора iCE280 (ProteinSimple) с микроинжектором PrinCE и капиллярным картриджем с фторуглеродным покрытием размером 100 мкм × 5 см (ProteinSimple). Для удаления остатка лизина на С-конце тяжелой цепи добавляли карбоксипептидазу В (СрВ) к каждому образцу после стадии разбавления при соотношении фермента к субстрату 1:1000 (масс : масс). Кроме того, для удаления сиаловой кислоты добавляли сиалидазу А. После добавления СрВ и сиалидазы А образцы инкубировали при 37°С в течение 10 минут. Образцы инкубированной жидкой композиции смешивали с раствором амфолита, состоящим из смеси 700 мкл 1% метилцеллюлозы, 1218 мкл очищенной воды, 8 мкл фармалита 8-10,5, 55 мкл фармалита 5-8, 15 мкл pI маркера 5, 12, 4 мкл pI маркера 7,05. Образцы фокусировали, подавая потенциал 1500 В в течение 1 минуты, затем потенциал 3000 В в течение 5 минут с анолитом 80 мМ фосфорной кислоты и католитом 100 мМ гидроксида натрия, оба в 0,1% метилцеллюлозе. Изображение вариантов сфокусированного заряда было получено путем пропускания ультрафиолетового (УФ) света 280 нм через капилляр в линзу цифровой камеры устройства с зарядовой связью. Результаты показаны на Фиг. 9 и Фиг. 10, которые демонстрировали, что между рН 5,0 и 5,5, было меньше образования кислотных форм и немного больше, образования основных форм. Таким образом, оказывается, что компоненты буфера не оказывают заметного влияния на стабильность заряда.

В. Исследование влияния рН на стабильность:

[0339] Скрининговые испытания влияния рН на стабильность и на формирование вариантов размера 30°С проводились с применением тех же трех жидких композиций, как в Таблице 3, которые были подвержены стрессу при 30 °С в трех различных временных точках 2 недели, 4 недели и 8 недель. Распределение вариантов по размеру определяли с помощью эксклюзионной хроматографии по размеру (ЭХ) на ВЭЖХ Agilent Technologies серии 1200 (Санта-Клара, Калифорния) с применением 0,25 мМ хлорида калия, и подвижной фазы с рН 6,2. Затем образцы жидких композиций загружали на колонку Tosoh Bioscience TSKgel G3000SWXL (Южный Сан-Франциско, Калифорния). Образцы элюировали в течение 30 минут, используя скорость потока 0,5 мл/мин, и оптическую плотность контролировали при 280 нм. Результаты представлены в виде относительной площади пика от общей площади под кривой и представлены на Фиг. 11. Скрининг стабильности продемонстрировал, что между рН 5,0 и 5,5 наблюдалось меньшее количество высокомолекулярных соединений (ВМС) по сравнению с рН 6,0. Аналогичные количества низкомолекулярных соединений (НМС) наблюдались через 4 недели при 30°С. Через 8 недель наблюдались несколько более высокие значения НМС при 30°С. Поскольку снижение рН до 5,3, по-видимому, снижает образование как заряда, так и размера, был выбран рН 5,3.

[0340] На Фиг. 12 представлена хроматограмма, на которой тестируют два вида буфера: гистидин/гистидин-HCl при рН 5,5 и сукцинат натрия при трех различных рН: 5,0, 5,5 и 6,0. Гистидиновый буфер при рН 5,5 показал немного лучшую физическую стабильность в жидкости при 30°С, чем сукцинат натрия при любом испытанном рН (рН 5,0, 5,5 или 6,0). Однако, поскольку натрий-сукцинатный буфер демонстрировал приемлемую стабильность в жидкости, и с учетом потенциального риска окисления гистидина, был выбран натрий-сукцинатный буфер.

С. Тестирование лиофилизированных композиций:

[0341] Лиофилизированную композицию тестировали для снижения рисков, описанных выше. Общая схема для цикла лиофилизации представлена в Таблице 5.

[0342] Продолжительность цикла составляла около 78 часов или около 3 суток. Содержание влаги составляло от 0,5% до 0,7%.

[0343] Исследование по скринингу лиофилизации проводили при разных концентрациях анти-CD79B-VC-MMAE, двух различных видах буфера, различных рН и двух различных концентрациях поверхностно-активных веществ, как показано в Таблице 6.

[0344] Эти лиофилизированные композиции для испытаний хранили при 30°С до 2 месяцев как часть скринингового исследования.

[0345] Для количественного определения любых мономеров, разработанных для каждой тестируемой композиции (1) - (5) в качестве индикатора стабильности, был использован анализ ЭХ после восстановления каждой тестируемой композиции до 10 мг/мл или до 20 мг/мл, как описано выше. Фиг. 13 суммирует это исследование и демонстрирует, что в течение 2 месяцев теплового стресса при температуре 30°С, не было никаких изменений в процентах мономеров в любой из тестируемых композиций. Каждая лиофилизированная композиция (1) - (5) также была протестирован с помощью вкИЭФ, как описано выше, для определения процента основного пика после 2 месяцев теплового стресса при 30°С. Фиг.14 суммирует это исследование и демонстрирует, что в течение 2 месяцев теплового стресса при температуре 30°С, не было никаких изменений в процентах основного пика в любой из тестируемых композиций. В результате этих двух исследований было определено, что натрий-сукцинатный буфер в диапазоне рН от 5,0 до 6,0 приводил к приемлемой стабильности тестируемых лиофилизированных композиций.

D. Внешний вид лиофилизированной массы:

[0346] Важным аспектом лиофилизированных композиций является фактический внешний вид лиофилизированной массы, поскольку он является признаком качества продукта. Для лиофилизированной массы анти-CD79b-vc-ММАЕ тестировали как концентрацию иммуноконъюгата, так и концентрацию стабилизатора/тонизатора, чтобы изучить, как улучшить внешний вид лиофилизированной массы. На Фиг. 15А - Фиг. 15С изображены три лиофилизированных композиции с другим белком с тестируемым соотношением сахарозы. На дне лиофилизированной массы были видны углубления для всех трех испытанных уровней сахарозы, что не создавало идеального внешнего вида лиофилизированной массы. Тем не менее, в аналогичных условиях лиофилизации композиции с меньшим количеством сахарозы показывают меньшие углубления, а более низкие концентрации сахарозы приводят к более низкой влажности. Испытывали другую лиофилизированную композицию, в которой концентрация иммуноконъюгата была увеличена до 20 мг/мл, тогда как концентрация сахарозы была снижена до 120 мМ. На Фиг. 16А и Фиг. 16В представлено сравнение внешнего вида двух лиофилизированных масс. Концентрация иммуноконъюгата 20 мг/мл в комбинации с 120 мМ сахарозы продемонстрировала наиболее устойчивый и однородный внешний вид лиофилизированной массы. При проведении исследований устойчивости к тепловому стрессу в течение 4 недель при 40°С, 25°С и 5°С не было замечено никаких изменений в структуре, цвете или внешнем виде массы, а содержание влаги оставалось <5%.

E. Стабильность лиофилизированной композиции:

[0347] Лиофилизированная композиция лекарственного препарата: 20 мг/мл анти-CD79b-vc-MMAE, 120 мМ сахарозы, 0,12% ПС20 в 10 мМ сукцинате натрия при рН 5,3 тестировали на стабильность, измеренную по образованию растворимого агрегата или варианта заряда. Растворимые агрегаты измеряли с помощью ЭХ, как описано выше. На Фиг. 17 проиллюстрировано, что для лиофилизированного лекарственного продукта, наблюдалось меньше, чем увеличение на 0,1% в содержании растворимых агрегатов при 25°С и 2-8°С в течение 8 недель. При 40°С наблюдалось увеличение количества димерных агрегатов на около 0,1% в неделю, и скорость этой агрегации может зависеть от уровня влажности. Варианты заряда измеряли с помощью вкИЭФ, как описано выше. На Фиг. 18 проиллюстрировано, что для лиофилизированного лекарственного продукта, наблюдалась потеря около 5% в основном пике, и увеличение на 3,7% в кислотном варианте после 4 недель при 40°С. Не было никаких значительных изменений при 25°С и 2-8°С. В результате для лиофилизированного лекарственного продукта в стрессовых условиях при 25°С и 2-8°С изменений не наблюдалось.

[0348] Таблица 7 суммирует свойства для конечной композиции анти-CD79B-VC-MMAE полученные в результате многочисленных исследований, описанных в Примерах 1 и 2.

[0349] Как показано в Таблице 7 выше, композиция конечного коммерческого лекарственного продукта содержит 20 мг/мл лекарственного продукта, что увеличивает результаты соотношения белок-к-препарату в улучшенном внешнем виде массы, когда раствор лиофилизирован. 0,12% ПС20 (т.е. 1,2 мг/мл) защищает белок в композиции от межфазных напряжений, возникающих во время введения с применением пакетов для в/в и наборов для в/в инфузии. Значение рН 5,3 сводит к минимуму образование кислотных вариантов, получаемых за счет гидролиза сукцинимида. Композиция в Таблице 7 разработана для доставки 140 мг лекарственного продукта на флакон после восстановления в 7,2 мл СВДИ для поддержки клинической дозы 1,8 мг/кг.

Пример 3: Оценка устойчивости лекарственной субстанции и лекарственных препаратов анти-CD79b-vc-MMAE

[0350] Было установлено, что лекарственный продукт (см. Таблицу 7) в лиофилизированной композиции стабилен в течение по меньшей мере 44 месяца при 2°С - 8°С в диапазоне остаточной влажности от 0,3% (масс./масс.) до 3,2% (масс./масс), а также в течение по меньшей мере 7 месяцев при 25°С в диапазоне остаточной влажности от 0,3% (масс./масс.) до 3,2% (масс./масс).

[0351] Затем параметры композиции лиофилизированного лекарственного продукта варьировали и оценивали на предмет практически значимого влияния на стабильность лиофилизированного лекарственного продукта. Были протестированы пять параметров композиции (и диапазоны, в которых параметры варьировались): (а) концентрация белка (17-23 мг/мл), (b) концентрация сукцината (7-23 мМ), (с) концентрация сахарозы (90-150 мМ), (d) концентрация полисорбата 20 (0,9-1,5 мг/мл), и (е) рН (4,95-5,65). Не наблюдалось никакого практически значимого влияния на стабильность лиофилизированного лекарственного продукта после хранения при 2-8°С в течение периода до девяти месяцев. Основываясь на прогнозируемых моделями скоростях разложения, не ожидается практически значимого влияния на стабильность лиофилизированного лекарственного продукта после хранения при 2-8°С в течение как минимум 24 месяцев.

[0352] Восстановленный раствор лекарственного продукта (например, 20 мг/мл полатузумаба ведотина в 10 мМ сукцинате, 120 мМ сахарозы, 1,2 мг/мл полисорбата 20, при рН 5,3) оказался физико-химически стабильным после 72 часов хранения при 2°С - 8°С или после 24 часов хранения при 30°С с воздействием окружающего света. Не было обнаружено значительных изменений (например, статистически значимых изменений) в аффинности полатузумаба ведотина к его мишени (т.е. CD79b) или в биологической активности полатузумаба ведотина.

[0353] Хотя вышеизложенное изобретение было подробно описано посредством иллюстрации и примеров в целях ясности понимания, описания и примеры не следует воспринимать как ограничивающие объем данного изобретения. Раскрытие всех патентов и научной литературы, цитируемых в данном документе, в полном объеме и явным образом включено посредством ссылки.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110>Genentech, Inc.

<120> СТАБИЛЬНЫЕ КОМПОЗИЦИИ ИММУНОКОНЪЮГАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ АНТИТЕЛО К CD79B

<130> 14639-20443.40

<140> Не определен

<141> одновременно с

<150>US 62/657,185

<151> 2018-04-13

<160> 18

<170>FastSEQ для Windows версия 4.0

<210> 1

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 1

LysAlaSerGlnSerValAspTyrGluGlyAspSerPheLeuAsn

1 5 10 15

<210> 2

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 2

Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 3

GlnGlnSerAsnGluAspProLeuThr

1 5

<210> 4

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 4

GlyTyrThrPheSerSerTyrTrpIleGlu

1 5 10

<210> 5

<211> 18

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 5

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe

1 5 10 15

LysGly

<210> 6

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 6

ThrArgArgValProIleArgLeuAspTyr

1 5 10

<210> 7

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 8

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu

20 25 30

Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

<210> 9

<211> 446

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 10

<211> 218

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 10

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu

20 25 30

Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 11

<211> 25

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 12

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 12

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10

<210> 13

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 13

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 14

<211> 23

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 14

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 15

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 15

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 16

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 16

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

1 5 10

<210> 17

<211> 32

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 17

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 18

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 18

ArgPheThrIleSerArgAspAsnSerLysAsnThrLeuTyrLeuGln

1 5 10 15

MetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCys

20 25 30

<---

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины. 1 объект представляет собой стабильную жидкую композицию для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, содержащую иммуноконъюгат, буферный агент, сахар и поверхностно-активное вещество. 2-4 объекты – стабильную лиофилизированную композицию для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, содержащую иммуноконъюгат, полисорбат 20, янтарную кислоту, гидроксида натрия и сахарозу. 4-7 объекты – стабильную жидкую композицию для введения, в частности, внутривенного, иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b. 8-10 объекты – применение стабильной композиции в производстве лекарственного средства для лечения В-клеточного пролиферативного расстройства у пациента. Технический результат заключается в стабильности иммуноконъюгатов, содержащих антитело к CD79b. 10 н. и 27 з.п. ф-лы, 18 ил., 7 табл., 3 пр.

1. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, содержащая иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, буферный агент, сахар и поверхностно-активное вещество, причем

концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет от 5 мг/мл до 60 мг/мл;

концентрация буферного агента составляет от 10 мМ до 200 мМ; концентрация сахара составляет от 100 мМ до 260 мМ;

поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20 в концентрации по меньшей мере 1,2 мг/мл,

где рН жидкой композиции находится в диапазоне от 5,0 до 6,0,

и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

,

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом легкая цепь содержит

(а) последовательность HVR-L1 KASQSVDYEGDSFLN (SEQ ID NO: 1);

(b) последовательность HVR-L2 AASNLES (SEQ ID NO: 2); и

(c) последовательность HVR-L3 QQSNEDPLT (SEQ ID NO: 3);

при этом тяжелая цепь содержит

(а) последовательность HVR-H1 GYTFSSYWIE (SEQ ID NO: 4);

(b) последовательность HVR-H2 GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO: 5); и

(c) последовательность HVR-H3 TRRVPIRLDY (SEQ ID NO: 6);

Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и p имеет значение от 1 до 8.

2. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 1, отличающаяся тем, что концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет от 10 мг/мл до 20 мг/мл, необязательно концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет 20 мг/мл.

3. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что буферный агент представляет собой гистидиновый буфер или сукцинатный буфер, необязательно сукцинатный буфер представляет собой натрий-сукцинатный буфер.

4. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 3, отличающаяся тем, что концентрация натрий-сукцинатного буфера составляет 10 мМ.

5. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что жидкая композиция имеет pH, равный 5,3.

6. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что сахар выбран из группы, состоящей из: сахарозы, маннита, сорбита, глицерина, декстрана 40 и трегалозы, необязательно сахар представляет собой сахарозу.

7. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 6, отличающаяся тем, что концентрация сахара составляет 120 мМ.

8. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что концентрация полисорбата 20 составляет 1,2 мг/мл.

9. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что концентрация иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, составляет 20 мг/мл, буферный агент представляет собой натрий-сукцинатный буфер в концентрации 10 мМ, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20 в концентрации 1,2 мг/мл, и сахар представляет собой сахарозу в концентрации 120 мМ, при этом жидкая композиция имеет рН, равный 5,3.

10. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-9, отличающаяся тем, что жидкая композиция была восстановлена из лиофилизированной композиции.

11. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 10, отличающаяся тем, что жидкая композиция была восстановлена с применением стерильной воды для инъекций (СВДИ), необязательно жидкая композиция была восстановлена с применением 7,2 мл СВДИ.

12. Стабильная лиофилизированная композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, содержащая 150 мг иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, 9,0 мг полисорбата 20, 8,88 мг янтарной кислоты, 4,08 мг гидроксида натрия и 309 мг сахарозы, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

,

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 и легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10;

Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и p имеет значение от 2 до 5.

13. Стабильная лиофилизированная композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, содержащая 140 мг иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, 8,4 мг полисорбата 20, 8,27 мг янтарной кислоты, 3,80 мг гидроксида натрия и 288 мг сахарозы, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

,

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 и легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10;

Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и p имеет значение от 2 до 5.

14. Стабильная лиофилизированная композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, содержащая 30 мг иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, 1,8 мг полисорбата 20, 1,77 мг янтарной кислоты, 0,816 мг гидроксида натрия и 61,8 мг сахарозы, причем иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, имеет формулу:

,

где

Ab представляет собой антитело к CD79b, при этом антитело к CD79b содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 и легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10;

Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; и p имеет значение от 2 до 5.

15. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 10, 11, отличающаяся тем, что лиофилизированная композиция представляет собой лиофилизированную массу.

16. Стабильная лиофилизированная композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 12-14, отличающаяся тем, что лиофилизированная композиция представляет собой лиофилизированную массу.

17. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, полученная путем восстановления лиофилизированной композиции по любому из пп. 12-14 и 16.

18. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 17, отличающаяся тем, что лиофилизированная композиция восстановлена с применением стерильной воды для инъекций (СВДИ), необязательно лиофилизированная композиция восстановлена с применением 7,2 мл СВДИ.

19. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, содержащая

а) 0,72-2,7 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b;

b) 0,36 мМ-1,35 мМ сукцината натрия;

c) 0,51 мМ-16,24 мМ сахарозы;

d) 0,0432 мг/мл-0,162 мг/мл полисорбата 20,

при этом pH жидкой композиции составляет от 5 до 5,7, и при этом иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, представляет собой полатузумаба ведотин.

20. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 19, содержащая

a) 0,72 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b;

b) 0,36 мМ сукцината натрия;

c) 0,51 мМ сахарозы; и

d) 0,0432 мг/мл полисорбата 20,

при этом pH жидкой композиции составляет от 5,1 до 5,4, необязательно, pH жидкой композиции составляет 5,3.

21. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 19, содержащая

a) 2,7 мг/мл иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b;

b) 1,35 мМ сукцината натрия;

c) 16,24 мМ сахарозы; и

d) 0,162 мг/мл полисорбата 20,

при этом pH жидкой композиции составляет от 5,1 до 5,4, необязательно, pH жидкой композиции составляет 5,3.

22. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 19-21, отличающаяся тем, что соотношение иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, к полисорбату 20 в композиции составляет 0,72 мг/мл:0,0432 мг/мл.

23. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, полученная растворением жидкой композиции для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-11, 15 и 17, 18 в изотоническом буфере.

24. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по п. 23, отличающаяся тем, что концентрация поверхностно-активного вещества после разведения составляет по меньшей мере 0,004% масс./об.

25. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 19-24, отличающаяся тем, что объем жидкой композиции составляет 50-100 мл, необязательно объем жидкой композиции составляет 50 мл или 100 мл.

26. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 19-25, отличающаяся тем, что жидкая композиция находится в пакете для внутривенного (в/в) введения.

27. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-11 и 15, отличающаяся тем, что

а) антитело к CD79b содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или

b) тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, и легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10.

28. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 23-26, отличающаяся тем, что

а) антитело к CD79b содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или

b) тяжелая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, и легкая цепь антитела к CD79b содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10.

29. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-11, 15, 17, 18 и 27, отличающаяся тем, что p имеет значение от 2 до 5, необязательно p имеет значение около 3,5.

30. Стабильная жидкая композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-11, 15, 17, 18, 27 и 29, отличающаяся тем, что иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, представляет собой полатузумаба ведотин.

31. Стабильная лиофилизированная композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 12-14 и 16, отличающаяся тем, что p имеет значение около 3,5.

32. Стабильная лиофилизированная композиция для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 12-14, 16 и 31, отличающаяся тем, что иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, представляет собой полатузумаба ведотин.

33. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 23-26 и 28, отличающаяся тем, что p имеет значение от 2 до 5, необязательно p имеет значение около 3,5.

34. Стабильная жидкая композиция для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 23-26, 28 и 33, отличающаяся тем, что иммуноконъюгат, содержащий антитело к CD79b, представляет собой полатузумаба ведотин.

35. Применение стабильной жидкой композиции для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 1-11, 15, 17, 18, 27 и 29, 30 в производстве лекарственного средства для лечения В-клеточного пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, где нарушение пролиферации B-клеток выбрано из группы, состоящей из: лимфомы, миеломы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДBКЛ), рецидивирующих/рефрактерных форм диффузной B-крупноклеточной лимфомы, агрессивной НХЛ, индолентной лимфомы, фолликулярной лимфомы (ФЛ), рецидивирующей агрессивной НХЛ, рецидивирующей индолентной НХЛ, рецидивирующей НХЛ, рефрактерной НХЛ, рефрактерной индолентной НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и мантийноклеточной лимфомы.

36. Применение стабильной лиофилизированной композиции для введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 12-14, 16 и 31, 32 в производстве лекарственного средства для лечения В-клеточного пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, где нарушение пролиферации B-клеток выбрано из группы, состоящей из: лимфомы, миеломы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДBКЛ), рецидивирующих/рефрактерных форм диффузной B-крупноклеточной лимфомы, агрессивной НХЛ, индолентной лимфомы, фолликулярной лимфомы (ФЛ), рецидивирующей агрессивной НХЛ, рецидивирующей индолентной НХЛ, рецидивирующей НХЛ, рефрактерной НХЛ, рефрактерной индолентной НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и мантийноклеточной лимфомы.

37. Применение стабильной жидкой композиции для внутривенного введения иммуноконъюгата, содержащего антитело к CD79b, по любому из пп. 19-26, 28 и 33, 34 в производстве лекарственного средства для лечения В-клеточного пролиферативного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, где нарушение пролиферации B-клеток выбрано из группы, состоящей из: лимфомы, миеломы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДВКЛ), рецидивирующих/рефрактерных форм диффузной B-крупноклеточной лимфомы, агрессивной НХЛ, индолентной лимфомы, фолликулярной лимфомы (ФЛ), рецидивирующей агрессивной НХЛ, рецидивирующей индолентной НХЛ, рецидивирующей НХЛ, рефрактерной НХЛ, рефрактерной индолентной НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и мантийноклеточной лимфомы.