Средство, обладающее нейропротекторной активностью Российский патент 2023 года по МПК A61K31/498 A61P25/00 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средств, обладающих нейропротекторной активностью.

Известны средства, обладающие нейропротекторной активностью: постсинаптические антагонисты глутамата (препараты магния); пре- и постсинаптические ингибиторы глутамата (метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин); блокаторы кальциевых каналов (нимодипин); антиоксиданты (витамин Е, оксиметилэтилпиридина сукцинат, мельдоний, тиоктовая кислота); ноотропы (пирацетам, цитиколин) [1, 2, 3, 4, 5, 6]. Известны средства пептидной природы, обладающие нейропротекторной активностью: церебролизин, цитохром С, коэнзим Q [7, 8, 9, 10], 4-6%-ный водный раствор гептапептида Met-GLu-HisPhe-Pro-GLy-Pro [11]; аминокислота глицин, иммобилизованная на частицах детонационного наноалмаза размером 2-10 нм [12]. Известны комплексные средства, обладающие нейропротекторной активностью: генетический материал, состоящий из гена сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF, гена глиального нейротрофического фактора GDNF и гена нейрональной молекулы адгезии NCAM [13]. Целесообразность применения большинства средств доказана в экспериментальных условиях. Клинических доказательств эффективности у подавляющего большинства нейропротекторных препаратов нет [14, 15, 16, 17]. Это обусловливает актуальность поиска новых нейропротекторных средств.

Задачей изобретения является расширение арсенала средств, обладающих нейропротекторной активностью.

Поставленная задача решается применением триптантрин-6-оксима в качестве нейропротекторного средств.

Применение триптантрин-6-оксима в качестве нейропротекторного средства в литературе не описано.

Принципиально новым в предполагаемом изобретении является то, что в качестве нейропротекторного средства используется триптантрин-6-оксим.

Данный вид активности соединения явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники.

Триптантрин-6-оксим можно использовать при лечении широко распространенных и социально значимых заболеваний сердечно-сосудистой и центральной нервной системы.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Новые свойства триптантрин-6-оксима были обнаружены благодаря экспериментальным исследованиям.

Эксперименты по изучению нейропротектрной активности триптантрин-6-оксима проводили на крысах Вистар.

Эксперименты по изучению нейропротекторной активности триптантрин-6-оксима проведены на 21 крысе самце сток Вистар массой 250-280 г (ложнооперированные крысы - n=5, группа контроля - n=8, опытная группа - n=8). Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Крысы находились в стандартных пластиковых клетках фирмы VELAZ на подстилке из мелкой древесной стружки по пять особей в клетке в открытом режиме. Температура воздуха в виварии 20-23°С, влажность - не более 50%, объем воздухообмена (вытяжка : приток) - 8:10, световой режим (день : ночь) - 1:1. Кормление животных осуществлялось в соответствии с регламентирующими документами на содержание животных [18].

Нейропротекторный эффект триптантрин-6-оксима исследовали на модели фокальной ишемии/реперфузии головного мозга (ФИРГМ). Модель ФИРГМ воспроизводили по методу Zea Longa et al. [19]. Для проведения анестезии пропофолом животным имплантировали катетер в правую бедренную вену, используя для этого кратковременную анестезию диэтиловым эфиром. Пропофол вводили внутривенно в дозе 10 мг/кг/час. В операционный период и в течение эксперимента поддерживали ректальную температуру животных в диапазоне 37±0,5°С с использованием Homeothermic Blanket Control Unit (Harvard Apparatus, USA). ФИРГМ создавали с использованием филамента Doccol Corporation (USA). Для создания модели ФИРГМ у животного отпрепаровывали левую общую, внутреннюю и наружную сонные артерии. Перевязывали дистальный конец левой наружной сонной артерии и через нее во внутреннюю сонную артерию вводили филамент для окклюзии средней мозговой артерии. Окклюзия продолжалась 1 ч, затем филамент извлекали, перевязывали наружную сонную артерию и возобновляли кровоток по левой внутренней сонной артерии. После ушивания операционной раны и выхода из наркоза животных возвращали в клетки со свободным доступом к воде и пище. В группе ложнооперированных животных проводилось аналогичное оперативное вмешательство, но без введения филамента.

Для исследования нейропротекторных свойств триптантрин-6-оксима оценивали размер очага некроза после ФИРГМ. В конце эксперимента крыс подвергали эвтаназии в СО₂-камере, мозг извлекали, замораживали при температуре -12°С в течение 2-3 часов, после чего с помощью гистологических ножей, собранных в блок с промежутком 1,3 мм, разрезали мозг на серию фронтальных срезов. После оттаивания при комнатной температуре срезы мозга погружали в чашки Петри с 0,5% раствором красителя 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид (Sigma-Aldrich) и инкубировали при 37°С в течение 15-20 минут, после чего проводили фиксацию в 10% формалине в течение 15 минут, помещали на предметное стекло, сканировали на HP Scanjet 3770 (Hewlett-Packard, Китай) с использованием программного обеспечения «Директор НР» v. 43.1.6.000 при разрешении 600 dpi и сохраняли в формате *.tiff. Изображения обрабатывали с использованием программы «Adobe Photoshop 6.0». На срезах подсчитывали площадь очага некроза (не окрашенная красителем) и общую площадь среза в пикселях. Площадь очага некроза выражали в % от общей площади срезов.

Крысам опытной группы (n=8) внутрибрюшинно вводили триптантрин-6-оксим в дозе 12,5 мг/кг. В качестве растворителя для триптантрин-6-оксима использовали 0,9% раствор NaCl с TWIN 80 в объеме 2 мл. Введения проводили на 30 мин ишемии, на 1-е и 2-е сутки после моделирования ФИРГМ один раз в сутки. Крысам контрольной группы и ложнооперированным животным внутрибрюшинно вводили растворитель - 0,9% раствор NaCl с TWIN 80 в объеме 2 мл по той же схеме.

Для статистической обработки данных использовали пакет программного обеспечения «Statistica 6.0». Рассчитывали среднее значение, стандартную ошибку. Достоверность различий (р<0,05) между сериями определяли с помощью U-теста Манна-Уитни, t-критерия Стьюдента и точного критерия Фишера.

Результаты исследований нейропротекторной активности триптантрин-6-оксима представлены в примерах 1-3 и таблице.

Пример 1. В группе ложнооперированных животных не выявлено зоны некроза мозговой ткани (табл.: Ложнооперированные).

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с группой ложнооперированных животных; ⁺ - р<0,05 по сравнению с контрольной группой.

Пример 2. В контрольной группе через 48 ч после моделирования ФИРГМ у всех животных формировался крупноочаговый инфаркт мозга. Площадь очага некроза составила 21,1±1,8% от общей площади срезов (табл.: Контроль).

Таким образом, моделирование ФИРГМ у крыс контрольной группы приводило через 48 ч к формированию у животных крупноочагового инфаркта мозга.

Пример 3. В опытной группе у животных с внутрибрюшинным введением триптантрин-6-оксима в дозе 12,5 мг/кг площадь очага инфаркта мозга составила 11,1±2,7% от общей площади срезов, что было достоверно ниже (на 47%) показателя контрольной группы (табл.: Триптантрин-6-оксим).

Таким образом, триптантрин-6-оксим при внутрибрюшинном введении крысам в дозе 12,5 мг/кг проявил выраженные нейропротекторные свойства, что выражалось в достоверном снижении площади некроза в головном мозге.

Источники информации

1. ГОСТ Р 52600.5-2008 Протокол ведения больных. Инсульт / под. ред. Стояновской О.А. - М.: Стандартинформ, 2009. - С. 20.

2. Сергеев Д.В., Домашенко М.А., Пирадов М.А. Фармакологическая нейропротекция при ишемическом инсульте в реальных клинических условиях // Жур. неврологии и психиатрии. - 2017. - №4. - С. 86-91.

3. Никонов В.В., Савицкая И.Б., Бутко Л.В. Результаты лечения острого ишемического инсульта в первые часы заболевания // Медицина неотложных состояний. - 2013. -Т. 52, №5. - С. 20-25.

4. Спасенников Б.А. Применение мексидола в терапии церебрального инсульта // NovaInfo.Ru. - 2017. - Т. 2, №58. - С. 401-416.

5. Парфенов В.А. Цитиколин в лечении инсульта и сосудистых когнитивных нарушений // Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. - 2009. - №3-4 - С. 69-75.

6. The Role of Citicoline in Neuroprotection and Neurorepair in Ischemic Stroke // Brain Sci. - 2013. - Vol. 3, №3. - P. 1395-1414.

7. Савустьяненко A.B. Эффекты Церебролизина и их значение // Междунар. неврол. журн. - 2013. - Т. 56, №2. - С. 155-160.

8. Белоусова М.А., Токарева О.Г., Городецкая Е.А. и др. Нейропротективная эффективность внутривенного введения убихинона на модели необратимой ишемии головного мозга у крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2016. - Т. 161, №2 - С. 205-207.

9. Янишевский С.Н., Цыган Н.В., Голохвастов С.Ю. и др. Современные стратегии защиты при гипоксически-ишемическом повреждении головного мозга // Журн. неврол. и психиатрии. - 2017. - №12, Вып. 2. - С. 78-86.

10. Лесиовская Е.Е. Антигипоксанты прямого действия - перспективные нейропротекторы // Terra medica. - 2012. - №4. - С. 49-57.

11. Цукурова Л.А., Бароян К.М., Торгашова А.Н. Исследование эффективности и безопасности нейропротектора «Семакс 1%» у пациентов с ишемическим инсультом различной степени тяжести // Практическая медицина. - 2013. - Т. 66, №1. - С. 242-244.

12. Леонидов Н.Б., Яковлев Р.Ю., Ракита Д.Р. и др. Средство, обладающее противоинсультным действием, и способ его получения // Патент RU 2521404. - Бюл. «Изобретения. Полезные модели». - 2014. - №18.

13. Исламов P.P., Соколов М.Е., Баширов Ф.В. и др. Средство для сдерживания гибели нейронов при ишемическом инсульте головного мозга, способ клеточно-опосредованной генной терапии ишемического инсульта средством сдерживания гибели нейронов при ишемическом инсульте головного мозга и способ превентивной генной терапии для предупреждения гибели нейронов средством сдерживания гибели нейронов при ишемическом инсульте головного мозга // Заявка на изобретение 2017142047. - Бюл. «Изобретения. Полезные модели». - 2018. - №02.

14. Savitz S.I., Fisher М. Future of neuroprotection for acute stroke: In the aftermath of the SAINT trials // Ann. Neurol. - 2007. - Vol. 61. - P. 396-402.

15. Chavez J.C., Hurko O., Barone F.C., Feuerstein G.Z. Pharmacologic interventions for stroke: Looking beyond the thrombolysis time window into the penumbra with biomarkers, not a stopwatch // Stroke. - 2009. - Vol. 40. - e558-e563.

16. Liu S., Levine S. The continued promise of neuroprotection for acute stroke treatment // J. Exp. Stroke Transl. Med. - 2008. - Vol. 1, №1 - P. 1-8.

17. Пирадов M.A., Танашян M.M., Домашенко M.A., Сергеев Д.В., Максимова М.Ю. Нейропротекция при цереброваскулярных заболеваниях: поиск жизни на Марсе или перспективное направление лечения? Часть 1. Острые нарушения мозгового кровообращения // Анналы клинической и экспериментальной неврологии. - 2015. - №1. - С. 41-50.

18. Каркищенко Н.Н., Грачев С.В. Лабораторные животные - М., 2003. - С. 129-134.

19. Zea Longa E.L, Weinstein P.R., Carlson S., Cummins R. Reversible middle cerebral artery occlusion without cranirctomy in rats // Stroke. - 1989. - Vol. 20. - P. 84-91.

Изобретение относится к применению триптантрин-6-оксима в качестве средства, обладающего нейропротекторной активностью. Технический результат – эффективная нейропротекторная активность, проявляемая триптантрин-6-оксимом. Изобретение расширяет арсенал средств, обладающих нейропротекторной активностью. 1 табл., 3 пр.

Применение триптантрин-6-оксима в качестве средства, обладающего нейропротекторной активностью.