СИСТЕМА РЕГУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ Российский патент 2024 года по МПК C12N15/113 

Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США №62/894 611, поданной 30 августа 2019 г., предварительной заявки на патент США №62/904 635, поданной 23 сентября 2019 г., и предварительной заявки на патент США №63/043 504, поданной 24 июня 2020 г., содержание каждой из которых включено в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.

Государственные лицензионные права

Данное изобретение было сделано при государственной поддержке по программе ЕВ013584, предоставленной Национальным институтом здоровья. Правительство имеет определенные права на данное изобретение.

Уровень техники

Конструкции на основе нуклеиновых кислот для модуляции экспрессии генов могут быть улучшены за счет повышения чувствительности и снижения утечки.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение признает открытие конструкций нуклеиновых кислот, связанных с регулируемой экспрессией генных продуктов. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предложены композиции и способы для регуляции экспрессии генов с помощью конструкций нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении признают полезность альтернативного сплайсинга в регуляции экспрессии генов в конструкции нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении признают полезность регулирования экспрессии генов с помощью лиганд-связывающих аптамеров.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предложена система для модуляции экспрессии генов, содержащая полиА аптамерный полинуклеотид, который содержит в направлении от 5' к 3': 5'-донорный сайт сплайсинга; сконструированный интрон; первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга; переключатель полиА, содержащий два или более лиганд-связывающих аптамеров с одним или более лиганд-связывающими карманами, и по меньшей мере один сигнал расщепления полиА в нем; второй 3'-акцепторный сайт сплайсинга; и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид.

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению содержит два лиганд-связывающих аптамера. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит три лиганд-связывающих аптамера. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит переключатель полиА, содержащий трехстороннее соединение. В некоторых вариантах осуществления трехстороннее соединение содержит соединение одного или более двухцепочечных стеблей РНК. В некоторых вариантах осуществления части трехстороннего соединения являются одноцепочечными. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечный стебель РНК содержит лиганд-связывающий аптамер. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая экспрессируемый полипептид, содержит 5'UTR.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предложен способ модуляции экспрессии генного продукта в клетке. Способ включает следующие стадии: введение в клетку системы, содержащей в направлении от 5' к 3': 5'-донорный сайт сплайсинга; сконструированный интрон; первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга; переключатель полиА, содержащий два или более лиганд-связывающих аптамеров с одним или более лиганд-связывающими карманами, и по меньшей мере один сигнал расщепления полиА в нем; второй 3'-акцепторный сайт сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления генный продукт, экспрессируемый описанными в данном документе способами, является экзогенным для клетки. В некоторых вариантах осуществления генный продукт, экспрессируемый описанными в данном документе способами, является эндогенным для клетки. В некоторых вариантах осуществления, способ по настоящему изобретению осуществляют в одной или более клетках индивида, лигандом является глюкоза, у индивида диабет, преддиабет или осложнения диабета, и/или экспрессируемым полинуклеотидом является инсулин. В некоторых вариантах осуществления, способ по настоящему изобретению осуществляют в одной или более клетках индивида, экспрессируемый полинуклеотид представляет собой терапевтический генный продукт, такой как гормон роста человека, фактор коагуляции X или дистрофии. В некоторых вариантах осуществления, способ по настоящему изобретению осуществляют в одной или более клетках индивида, лиганд представляет собой генный продукт биомаркера рака, а экспрессируемый полинуклеотид представляет собой суицидальный ген. В некоторых вариантах осуществления, способ по настоящему изобретению осуществляют на индивиде, экспрессируемый полинуклеотид представляет собой репортерный ген, а расположение и/или интенсивность экспрессии репортерного гена предоставляет информацию о пространственном распределении, временных колебаниях или и том, и другом, лиганда в одной или более клетках индивида. В некоторых вариантах осуществления, способ по настоящему изобретению осуществляют на индивиде, в ткани или клетке, в котором экспрессируемый полинуклеотид кодирует детектируемый генный продукт, и соответствующие индивид, ткань или клетка визуализируют.

Краткое описание графических материалов

На Фиг. 1А-1С представлены схемы аспектов полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе. На Фиг. 1А показан механизм «гибридного» переключателя, основанный на лиганд-индуцируемом альтернативном сплайсинге и расщеплении сигнала полиА. На Фиг. 1В показана конфигурация Y-образного переключателя полиА. Название различных частей Y-образной структуры подписано. На Фиг. С показана конфигурация репрезентативного Y-образного переключателя полиА Y196CAA.

На Фиг. 2А-2С показаны результаты дополнительных Y-образных структур, которые имеют другую конфигурацию и с другим расположением сигнала расщепления полиА. Сигнал полиА обозначен красной линией. Трехстороннее соединение обозначено рамкой. На Фиг. 2А и 2В показаны альтернативные Y-образные конфигурации с тремя аптамерами (аптамер А, В и С), по-разному расположенными вокруг трехстороннего соединения. На Фиг. 2С показаны три аптамера, наложенные друг на друга без трехстороннего соединения.

На Фиг. 3А-3С показаны результаты модификации количества сигналов расщепления полиА в описанном в данном документе полинуклеотиде аптамера полиА. На Фиг. 3А показаны 2 сигнала полиА (красная рамка), расположенные на двух разных стеблях. На Фиг. 3В показан только один сигнал полиА, частично скрытый в плече 1-2. На Фиг. 3С показаны 2 сигнала полиА (красная рамка), встроенные в плечо 1-2.

На Фиг. 4A-4L показаны результаты модификации трехстороннего соединения полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе. На Фиг. 4L показаны лучшие последовательности трехсторонних соединений.

На Фиг. 5 показаны результаты модификации сигнала полиА относительно местоположения трехстороннего соединения полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе.

На Фиг. 6А-6В показаны результаты модификации третьих двухцепочечных стеблей (обозначенных как плечи 3-1 и 3-2 на Фиг. 1 В) полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе. На Фиг. 6А показаны результаты модификации плеча 3-1. На Фиг. 6В показаны результаты модификации плеча 3-2.

На Фиг. 7А-7В показаны результаты модификации вторых двухцепочечных стеблей (обозначенных как плечи 2-1 и 2-2 на Фиг. 1В) полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе. На Фиг. 7А показаны результаты модификации плеча 2-2. На Фиг. 7В показаны результаты модификации плеча 2-1.

На Фиг. 8 показаны результаты модификации верхней части первого двухцепочечного стебля (обозначенного как плечо 1-2 на Фиг. 1В) полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе.

На Фиг. 9 показаны результаты модификации нижней части первого двухцепочечного стебля (обозначенного как плечо 1-1 на Фиг. 1В) полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе.

На Фиг. 10А-10В показаны результаты модификации ориентации аптамера описанного в настоящем документе полиА аптамерного полинуклеотида. На Фиг. 10А показаны результаты с обратной ориентацией аптамера В. На Фиг. 10В показаны результаты с обратной ориентацией аптамера А.

На Фиг. 11А-11В показан вклад каждого аптамера в описанный в настоящем документе полиА аптамерный полинуклеотид. На Фиг. 11А показан эффект инактивации каждого аптамера точечной мутацией от А до С (указано стрелкой). На Фиг. 11В показано влияние удаления аптамера А на индукцию.

На Фиг. 12A-12D показаны результаты модификации 5'UTR экспрессируемого полинуклеотида после полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе. На Фиг. 12А показаны результаты вставки повторов САА (подчеркнуты) в 5'UTR экспрессируемого полинуклеотида с использованием различных исходных конструкций. На Фиг. 12В показаны результаты тестирования новой последовательности 5'UTR с сильным 3' сайтом сплайсинга с использованием S56 в качестве В исходной конструкции. На Фиг. 12С показаны результаты вставки неструктурированной спейсерной последовательности в 5'UTR Y305 и Y300. На Фиг. 12D показано встраивание повторов САА перед 3' сайтом сплайсинга в 5'UTR.

На Фиг. 13А-13В показано значение последовательностей G-квадруплекса описанного в данном документе полиА аптамерного полинуклеотида. На Фиг. 13А показано влияние последовательности G-квадруплекса на индукцию с использованием Y196CAA в качестве исходной конструкции. На Фиг. 13В показаны результаты тестирования различных последовательностей G-квадруплекса для замены 4MAZ G-квадруплекса с использованием S56 в качестве исходной конструкции.

На Фиг. 14 показано подтверждение индуцированного тетрациклином альтернативного сплайсинга описанного в данном документе полиА аптамерного полинуклеотида. В отсутствие Тц, IVS2-сплайсированная РНК деградирует путем расщепления полиА (полоса 1 и 3). Присутствие Тц индуцирует альтернативный сплайсинг как в Y196CAA-2MAZ, так и в Y196CAA-4MAZ (полосы 2 и 4). Лиганд-индуцированный альтернативный сплайсинг гораздо более выражен в присутствии 4MAZ.

На Фиг. 15A-15G показаны результаты модификации первого 3'-акцепторного сайта сплайсинга полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе. На Фиг. 15А показаны результаты перемещения 3'-сайта сплайсинга IVS2 в плечо 1-1 Y196CAA-4MAZ. На Фиг. 15В показано, что первый 3' сайт сплайсинга сильно ингибируется при полном внедрении в плечо 1-1 рядом с аптамером А (красная стрелка), что приводит к очень низкой индукции. Уменьшение фиксирующего эффекта аптамера А путем удаления части его последовательности восстанавливает индукцию. На Фиг. 15С показаны результаты перемещения 3' сайта сплайсинга IVS (синяя рамка) вдоль плеча 1 S9m, а на Фиг. 15D показаны результаты размещения 3' сайта сплайсинга IVS в выпуклости плеча 1-2. На Фиг. 15Е показаны результаты изменения прогнозируемой силы сплайсинга путем мутации основания после 3' сайта сплайсинга IVS2. На Фиг. 15F показаны результаты перемещения 3' сайта сплайсинга мини-IVS2 дальше внутрь стебля или дальше от аптамера А в плече 1-1. На Фиг. 15G показана рандомизация трех оснований после первого 3' сайта сплайсинга (CAGNNN).

На Фиг. 16А-16С показаны результаты модификации второго 3'-акцепторного сайта сплайсинга полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе. На Фиг. 16А показаны результаты модификаций 5'UTR для изменения силы альтернативного 3'-сайта сплайсинга. На Фиг. 16В показаны результаты рандомизации трех оснований после «TAG» в 5'UTR (TAGNNN) для модуляции силы альтернативного 3' сайта сплайсинга для улучшения индукции. На Фиг. 16С показаны результаты включения лучших последовательностей TAGNNN, выбранных в результате рандомизации, в 5'UTR Y329.

На Фиг. 17А и В показаны результаты модификации размера сконструированного интрона описанного в данном документе полиА аптамерного полинуклеотида. На Фиг. 17А показаны результаты изменения размера и элементов сплайсинга интрона IVS2. На Фиг. 17В показаны результаты удаления повторов САА из конструкций (S159, S164 и S169) с более коротким сконструированным интроном.

На Фиг. 18А-18С показаны результаты включения расположенной выше открытой рамки считывания (μORF) в полиА аптамерный полинуклеотид, описанный в настоящем документе. На Фиг. 18А показаны схемы включения расположенной выше открытой рамки считывания в аптамер полиА. Вставленный расположенный выше стартовый кодон ATG обведен рамкой. На Фиг. 18В показаны результаты точной настройки последовательности 5'UTR конструкций с расположенной выше открытой рамкой считывания. На Фиг. 18С показан один репрезентативный гибридный переключатель с включенной расположенной выше открытой рамкой считывания.

На Фиг. 19А-19Е показана способность описанного в данном документе полиА аптамерного полинуклеотида контролировать экспрессию гена экспрессируемого полипептида в присутствии лиганда. На Фиг. 19А показаны характеристики репрезентативных конструкций серии S по сравнению с Y196CAA-4MAZ. На Фиг. 19В показана зависимость доза-ответ репрезентативных конструкций серии S по сравнению с Y196CAA-4MAZ, визуализированная с помощью микроскопии. На Фиг. 19С показаны характеристики Y300 и Y301. На Фиг. 19D показана зависимость доза-ответ Y362 и Y367, определенная с помощью анализов репортерного гена люциферазы. На Фиг. 19Е показана реакция Y362 и Y367 на 1 мкг/мл тетрациклина, определенная с помощью сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS) с использованием репортерного сигнала eGFP. «Кратная индукция» во всех результатах рассчитывается как соотношение экспрессии трансгена в присутствии и в отсутствие тетрациклина.

На Фиг. 20 показана способность описанного в данном документе полиА аптамерного полинуклеотида функционировать в качестве эндогенного переключателя для контроля экспрессии эндогенного гена в геноме.

На Фиг. 21 показана конфигурация Y-образного переключателя полиА, сочетающего изменения единичного основания в трех местах. Показанная в данном документе конструкция Y387 содержит все три изменения.

На Фиг. 22 показано, что комбинация трех изменений единичного основания значительно увеличивает индуцированную экспрессию экспрессируемого полипептида при низкой концентрации препарата. Четыре различные исходные конструкции (Y359, Y360, Y361, Y362C) использовали для демонстрации влияния изменений единичного основания на индукцию. Влияние этих изменений единичного основания на индукцию одинаково во всех четырех различных родительских конструкциях. На верхнем графике показана кратная индукция со стандартным отклонением. На нижнем графике показана кратная индукция для каждой конструкции.

На Фиг. 23А и 23В показана зависимость доза-ответ индукции экспрессии конструкций Y362 и Y386, содержащих Y-образный переключатель полиА, сочетающий изменения единичного основания в трех местах. На Фиг. 23А показано, что индукция тетрациклином достигает 50% от максимального уровня (ЕС₅₀) уже при 0,5-1 мкг/мл Тц, используя максимальное увеличение индукции в качестве эталона EC₁₀₀. На Фиг. 23 В показан аналогичный расчет с использованием максимального уровня экспрессии исходной конструкции (HDM-Люц, которая имеет аналогичную последовательность, но без Y-образной структуры) в качестве эталона EC₁₀₀. В этом случае ЕС₅₀ достигается с помощью тетрациклина всего от 0,5 до 1,2 мкг/мл.

Подробное описание некоторых вариантов осуществления

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предложены композиции и способы для регулируемой экспрессии генных продуктов. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы для регулируемой экспрессии генных продуктов содержат полиА аптамерный полинуклеотид. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит, помимо прочего, один или более донорных сайтов сплайсинга, один или более акцепторных сайтов сплайсинга, интрон; переключатель полиА; и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления переключатель полиА содержит по меньшей мере один лиганд-связывающий аптамер. В некоторых вариантах осуществления переключатель полиА содержит по меньшей мере один сигнал расщепления полиА. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит двухцепочечные стебли РНК.

Аптамер

Аптамеры - это короткие последовательности РНК, которые складываются подобно рецепторам и связываются со специфическими лигандами. Эффективные способы эволюции in vitro для создания аптамеров с высокой аффинностью к специфическим лигандам хорошо известны. Аффинность связывания аптамеров часто может достигать наномолярного диапазона, сравнимого с таковым у антител. В этом отношении аптамеры можно рассматривать как антитела, сделанные из РНК. От антитела аптамер отличает небольшой размер (часто менее 50 оснований) и модульная природа. Эти особенности позволяют аптамерам интегрироваться с другими структурами РНК и управлять ими без потери своей связывающей функции. Было продемонстрировано, что аптамеры могут трансформировать саморасщепляющиеся рибозимы РНК, чтобы они работали в зависимости от лиганда и функционировали как молекулярный переключатель в пробирках и клетках.

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит один или более двухцепочечных стеблей РНК. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечный стебель РНК представляет собой структуру нуклеиновой кислоты, образованную путем внутримолекулярного сопряжения оснований комплементарных нуклеиновых кислот, содержащихся в одном полинуклеотиде аптамера полиА. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечный стебель РНК может также называться «плечом». В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит один или более двухцепочечных стеблей РНК. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит два двухцепочечных стебля РНК. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит три двухцепочечных стебля РНК. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечный стебель РНК содержит лиганд-связывающий аптамер. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит два лиганд-связывающих аптамера. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит три лиганд-связывающих аптамера.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере два двухцепочечных стебля РНК соединены с образованием соединения. В некоторых вариантах осуществления соединение двухцепочечных стеблей РНК содержит одноцепочечный участок. В некоторых вариантах осуществления три стебля РНК встречаются с образованием трехстороннего соединения. В некоторых вариантах осуществления трехстороннее соединение содержит по меньшей мере один одноцепочечный участок. В некоторых вариантах осуществления трехстороннее соединение содержит один, два или три одноцепочечных участка.

В некоторых вариантах осуществления последовательность двухцепочечного стебля РНК выбрана из одного из следующих:

В некоторых вариантах осуществления одноцепочечный участок, образованный соединением двухцепочечных стеблей РНК, содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления одноцепочечный участок, образованный соединением двухцепочечных стеблей РНК, содержит одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать или более нуклеиновых кислот.В некоторых вариантах осуществления трехстороннее соединение содержит первый, второй и третий одноцепочечные участки. В некоторых вариантах осуществления первый одноцепочечный участок содержит по меньшей мере одно основание, выбранное из С и А. В некоторых вариантах осуществления второй одноцепочечный участок содержит по меньшей мере одно основание, выбранное из С и А.

В некоторых вариантах осуществления двуцепочечный стебель РНК имеет длину 30, 20, 10 или 5 пар оснований. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечный стебель РНК имеет длину от 5 до 30, от 10 до 30, от 20 до 30, от 5 до 10, от 5 до 20, от 5 до 30 или от 10 до 20 пар оснований. В некоторых вариантах осуществления двуцепочечный стебель РНК имеет длину до 30 пар оснований. В некоторых вариантах осуществления двуцепочечный стебель РНК имеет длину менее 30, 20 или 10 пар оснований.

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит один или более аптамеров. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит два аптамера. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит три аптамера.

В некоторых вариантах осуществления аптамер, включенный в полиА аптамерный полинуклеотид, описанный в настоящем документе, содержит по меньшей мере один одноцепочечный участок и по меньшей мере один аптамер двухцепочечного стебля РНК. В некоторых вариантах осуществления аптамер двухцепочечного стебля РНК содержит одноцепочечный участок. В некоторых вариантах осуществления аптамер РНК имеет двухцепочечный стебель РНК с последовательностью AATAAGATTACCGAAAGGCAATCTTATT (например, плечо 2-2). В некоторых вариантах осуществления аптамер РНК имеет двухцепочечный стебель РНК с последовательностью CCAGATCGAATTCGATCTGG (например, плечо 3-2). В

некоторых вариантах осуществления аптамер РНК имеет двухцепочечный стебель РНК длиной от 6 до 10; 7-11; 8-12; 9-13; 10-14 пар оснований в длину. Сигнал расщепления полиА

В соответствии с различными вариантами осуществления может быть использован любой из множества сигналов полиА (например, кодированных сигнальной последовательностью полиА). В качестве неограничивающего примера, сигнальные последовательности полиА, используемые в клетках млекопитающих, включают: AAUAAA, AUUAAA, AGUAAA, ACUAAA, UAUAAA, CAUAAA, GAUAAA, AAUAUA, AAUACA и AAUAGA. В некоторых вариантах осуществления переключатель полиА может включать две или более сигнальных последовательностей полиА (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более).

Полиаденилирование - это основополагающий механизм процессинга мРНК, который присутствует во всех клетках млекопитающих. Обычно сигналы полиА у млекопитающих находятся в 3' нетранслируемой области (UTR). В отличие от этого, в настоящем изобретении предложены композиции и способы, включающие сигнал расщепления полиА, присутствующий в конструкции экспрессии в другом месте, чем в 3' нетранслируемой области (UTR) экспрессируемого полинуклеотида, например, гена. Когда сигнал полиА искусственно создается в 5' UTR, где он обычно не встречается в клетках, эффективное расщепление сигнала полиА приводит к добавлению хвоста полиА в этом сайте. Это приводит к удалению и деградации второй половины мРНК, связанной с последовательностью трансгена, и, следовательно, к потере экспрессии гена. В некоторых вариантах осуществления сигнал полиА присутствует от сайта начала трансляции последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полинуклеотид (мРНК), кодирующий экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления сигнал полиА расположен в 5' UTR мРНК. В некоторых вариантах осуществления одноцепочечный участок трехстороннего соединения содержит весь сигнал расщепления полиА или его часть. В некоторых вариантах осуществления третий одноцепочечный участок трехстороннего соединения содержит весь сигнал расщепления полиА или его часть. В некоторых вариантах осуществления двуцепочечный стебель РНК содержит весь сигнал расщепления полиА или его часть. В некоторых вариантах осуществления третий двухцепочечный стебель РНК содержит весь сигнал расщепления полиА или его часть. В некоторых вариантах осуществления часть сигнала расщепления полиА, как используется в настоящем документе, включает один, два, три или четыре нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления сигнал расщепления полиА имеет последовательность AAUAAA. В некоторых вариантах осуществления сигнал расщепления полиА имеет последовательность AUUAAA, AGUAAA, ACUAAA, UAUAAA, CAUAAA, GAUAAA, AAUAUA, AAUACA, AAUAGA, AAAAAG или ACUAAA. В вариантах осуществления, когда в конструкции используют два или более сигналов полиА, сигналы полиА могут быть одинаковыми или разными. В конкретных вариантах осуществления экспрессируемый полинуклеотид способен транскрибироваться РНК-полимеразой II. В некоторых вариантах осуществления присутствие сигнала расщепления полиА в 5' UTR нацеливает вторую половину мРНК после сигнала полиА на деградацию, и эта способность используется в различных композициях и способах по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления присутствие сигнала расщепления полиА в 5' UTR приводит к расщеплению пре-мРНК/мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА. В некоторых вариантах осуществления расщепление пре-мРНК/мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, приводит к деградации второй половины пре-мРНК/мРНК. В некоторых вариантах осуществления расщепление пре-мРНК/мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, приводит к отсутствию экспрессии полипептида.

В конкретных вариантах осуществления сигнал расщепления полиА находится в пределах полиА аптамерного полинуклеотида, содержащего по меньшей мере один лиганд-связывающий аптамер, с которым может связываться один или более лигандов. В некоторых вариантах осуществления связывание лиганда с лиганд-связывающим аптамером определяет наличие или отсутствие сигнала расщепления полиА в пре-мРНК/мРНК после альтернативного сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления связывание лиганда с лиганд-связывающим аптамером определяет, расщепляется ли пре-мРНК/мРНК после альтернативного сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления связывание лиганда с лиганд-связывающим аптамером определяет, экспрессируется ли экспрессируемый полипептид после альтернативного сплайсинга или нет.

Сконструированный интрон

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит сконструированный интрон. В некоторых вариантах осуществления интрон содержит один или более сайтов сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления сайт сплайсинга представляет собой или содержит донорный сайт сплайсинга (например, содержащий последовательность GU). В некоторых вариантах осуществления сайт сплайсинга представляет собой или содержит акцепторный сайт сплайсинга (например, содержащий последовательность AG). В некоторых вариантах осуществления сайты сплайсинга в сконструированном интроне функционируют (например, в сочетании друг с другом и/или в сочетании с одним или более эндогенными сайтами сплайсинга) для выделения сконструированного интрона из полиА аптамерного полинуклеотида. В некоторых вариантах осуществления интрон предшествует 5'-донорному сайту сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит 5'-донорный сайт сплайсинга в области 5' сконструированного интрона. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга на 3' сконструированного интрона. В некоторых вариантах осуществления сконструированный интрон полиА аптамерного полинуклеотида, описанного в настоящем документе, содержит 5'-донорный сайт сплайсинга и первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит второй 3'-акцепторный сайт сплайсинга непосредственно на 5' последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид.

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит промотор на 5' донорного сайта сплайсинга. Примерные промоторы включают, например, CMV, E1F, VAV, TCRvbeta, MCSV, промотор SV40, промотор RSV и промотор PGK.

В некоторых вариантах осуществления в отсутствие лиганда, связанного с лиганд-связывающим аптамером, сплайсинг пре-мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, описанным в настоящем документе, происходит между 5'-донорный сайтом сплайсинга и первым 3'-акцепторным сайтом сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления сплайсинг между 5'-донорный сайтом сплайсинга и первым 3'-акцепторный сайтом сплайсинга пре-мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, описанным в настоящем документе, приводит к мРНК, содержащей сигнал расщепления полиА, предшествующий 5'UTR последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления присутствие сигнала расщепления полиА, предшествующего 5'UTR последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, приводит к расщеплению в сайте расщепления полиА и деградации последовательности, кодирующей экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления в присутствии лиганда, связанного с лиганд-связывающим аптамером, сплайсинг пре-мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, описанным в настоящем документе, происходит между 5'-донорный сайтом сплайсинга и вторым 3'-акцепторным сайтом сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления сплайсинг пре-мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, описанным в настоящем документе, между 5'-донорным сайтом сплайсинга и вторым 3'-акцепторным сайтом сплайсинга приводит к образованию мРНК, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления сплайсинг пре-мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, описанным в документе, между 5'-донорным сайтом сплайсинга и вторым 3'-акцепторным сайтом сплайсинга приводит к удалению сигнала расщепления полиА путем его сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления сплайсинг между 5'-донорный сайтом сплайсинга и вторым 3'-акцепторный сайтом сплайсинга пре-мРНК, кодируемой полинуклеотидом аптамера полиА, описанным в настоящем документе, приводит к экспрессии экспрессируемого полипептида.

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит два или более лиганд-связывающих аптамера. В некоторых вариантах осуществления каждый из двух или более лиганд-связывающих аптамеров связывает разный лиганд. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит два или более отдельных переключателей полиА. В некоторых вариантах осуществления первый переключатель полиА содержит первый аптамер, который связывает первый лиганд, а второй переключатель полиА содержит второй аптамер, который связывает второй лиганд. В некоторых вариантах осуществления первый и второй аптамеры неидентичны, и первый и второй лиганды неидентичны. В некоторых вариантах осуществления первый и второй аптамеры неидентичны, а первый и второй лиганды идентичны.

В некоторых вариантах осуществления сконструированный интрон представляет собой любую последовательность. В некоторых вариантах осуществления длина сконструированного интрона составляет приблизительно 100, 200, 300, 400 или 500 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления длина сконструированного интрона находится в диапазоне 100-200; 110-200; 120-200; 130-200; 140-200; 150-200; 160-200; 170-200 или 180-200 оснований. В некоторых вариантах осуществления длина сконструированного интрона составляет не более 100,110, 120, 130, 140, 150,160, 170, 180, 190, 200, 210, 220 оснований. В некоторых вариантах осуществления сконструированный интрон имеет следующую последовательность: GTGAGTCTTAAGCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTATCGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCATCTTCATACCTCTTATCTTCCTCTGCAG (SEQ ID NO.: 1)

В некоторых вариантах осуществления сконструированный интрон имеет следующую последовательность:

GTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGT

CATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCAT

TTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATAC

TTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACC

ATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATA

AATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTA

CAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTATGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGT

CCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCATGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAG (SEQ ID NO.: 49)

Как используется в настоящем документе, интрон может относиться как к последовательности ДНК, так и к соответствующей последовательности РНК. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит дополнительные последовательности для облегчения, регулирования или помощи в расщеплении сигнала полиА в полинуклеотиде аптамера полиА. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит богатую G-U область 5' от последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, и 3' от сигнала расщепления полиА. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит дополнительные последовательности для облегчения, регулирования или помощи сплайсинга в полинуклеотиде аптамера полиА. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит триплетную последовательность нуклеиновой кислоты, способную модулировать силу альтернативного сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления триплетная последовательность нуклеиновой кислоты находится на 3' относительно второго 3'-акцепторного сайта в 5'UTR. В некоторых вариантах осуществления триплетная последовательность нуклеиновой кислоты находится 3' от сконструированного интрона. В некоторых вариантах осуществления триплетная последовательность нуклеиновой кислоты содержит любые три нуклеотида. В некоторых вариантах осуществления триплетная последовательность нуклеиновой кислоты содержит TAG, ТСТ, ТТС, TTG, TGA, TGC, ТСС, АСА, ААС, АСС, AGC, AGG, ССТ, ССС, ТТТ, TGA, ТСТ, ТАС, САС или CAT.

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит богатую G-U область 5' от последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, и 3' от сигнала расщепления полиА. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит богатую G область 5' от последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, и 3' от богатой G-U области. В некоторых вариантах осуществления под богатой G областью в данной области техники понимают последовательность MAZ. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит один или более богатых G областей. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит одну или более последовательных богатых G областей. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит одну или более последовательностей MAZ. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит одну или более последовательных последовательностей MAZ. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит одну, две, три, четыре, пять, шесть последовательностей MAZ. Последовательные MAZ могут быть разделены одной или более спейсерными последовательностями. В некоторых вариантах осуществления последовательность богатой G области представляет собой AACGGGGGAGGGGGAGGAAAGGGGGAGGGGGAGGAAAGGGGGAGGGGGAGGAAAGGGGGAGGGGGA (SEQ ID NO.: 47).

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит один или более стартовых кодонов. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит один или более стартовых кодонов вне рамки. В некоторых вариантах осуществления стартовый кодон вне рамки находится вне рамки относительно кодирующей последовательности последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит по меньшей мере один стартовый кодон вне рамки. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит по меньшей мере один стартовый кодон вне рамки 3' от первого 3'-акцепторного сайта сплайсинга 3' от сконструированного интрона.

Экспрессируемый полипептид

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая экспрессируемый полипептид, содержит 5'UTR. В некоторых вариантах осуществления 5' UTR последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, содержит 3'-акцепторный сайт сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления 5' UTR последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, содержит точку ветвления и 3'-акцепторный сайт сплайсинга. Под точкой ветвления в данной области техники понимают нуклеотид или нуклеотиды, участвующие в инициации нуклеофильной атаки на 5'-донорный сайт сплайсинга. В некоторых вариантах осуществления 5' UTR последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид не содержит точки ветвления. В некоторых вариантах осуществления 5' UTR последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, содержит спейсерную последовательность. В некоторых вариантах осуществления спейсерная последовательность содержит по меньшей мере один повтор САА. В некоторых вариантах осуществления 5'UTR последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, имеет последовательность, состоящую из GCGGCCGCCTTAATTAACAGTGTTCACTAGAGCCAACAACAACAACAACAACAACAACAACAACGACACC (SEQ ID NO.: 48).

В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая экспрессируемый полипептид, рассматриваемый в настоящем изобретении, может быть любой последовательностью нуклеиновой кислоты или любым геном, кодирующим любой полипептид. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты кодирует некодирующую РНК. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая экспрессируемый полипептид, рассматриваемый в настоящем изобретении, может быть экзогенной нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая экспрессируемый полипептид, рассматриваемый в настоящем изобретении, может быть геном, эндогенным для субъекта, которому был введен полиА аптамерный полинуклеотид. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению вводят в область генома индивидуума, которая регулирует экспрессию интересующего гена. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению может быть использован для регуляции экспрессии генов, эндогенных для индивидуума. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая экспрессируемый полипептид полиА аптамерного полинуклеотида по настоящему изобретению, представляет собой эндогенную последовательность нуклеиновой кислоты.

В некоторых вариантах осуществления экспрессируемым полипептидом является инсулин. В некоторых вариантах осуществления экспрессируемым полипептидом является гормон роста человека. В некоторых вариантах осуществления экспрессируемый полипептид представляет собой фактор коагуляции X. В некоторых вариантах осуществления экспрессируемый полипептид представляет собой дистрофии. В некоторых вариантах осуществления экспрессируемым полипептидом является суицидальный белок. В некоторых вариантах осуществления суицидальный белок - это белок, который вызывает гибель клетки. Примеры суицидальных белков включают псевдокиназу, подобную домену киназы смешанного происхождения (MLKL), рецептор-взаимодействующая серин/треонин-протеинкиназу 3 (RIPK3), рецептор-взаимодействующая серин/треонин-протеинкиназу 1 (RIPK1), Fas-ассоциированный белок с доменом гибели (FADD), или гасдермин D (GSDMD), цистеин-аспарагиновые протеазы, цистеиновые аспартазы или цистеин-зависимые аспартат-направленные протеазы (CASPASE-1 или CASP-1), CASPASE-4, CASPASE-5, CASPASE-12, PYCARD/ASC (PYD- и CARD-домен, содержащий/Fas-ассоциированный белок с доменом гибели) или их варианты.

В некоторых вариантах осуществления экспрессируемым полипептидом является детектируемый генный продукт. В некоторых вариантах осуществления детектируемый генный продукт является репортером. В некоторых вариантах осуществления репортер представляет собой белок, способный генерировать детектируемый сигнал и/или обладающий способностью генерировать детектируемый сигнал (например, катализируя реакцию преобразования соединения в детектируемый продукт). Детектируемые сигналы могут включать, например, флуоресценцию или люминесценцию. Детектируемые сигналы, способы их обнаружения и способы их включения в реагенты (например, полипептиды, включающие репортерный белок) хорошо известны в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления любого из аспектов детектируемые сигналы могут включать сигналы, которые могут быть обнаружены спектроскопическими, фотохимическими, биохимическими, иммунохимическими, электромагнитными, радиохимическими или химическими средствами, такими как флуоресценция, хемифлуоресценция или хемилюминесценция, или любыми другими подходящими средствами. В некоторых вариантах осуществления любого из аспектов репортерный белок выбран из группы, состоящей из люциферазы, нанолюциферазы, бета-лактамазы, бета-галактозидазы, пероксидазы хрена, щелочной фосфатазы, каталазы, карбоновой ангидразы, зеленого флуоресцентного белка, красного флуоресцентного белка, голубого флуоресцентного белка, желтого флуоресцентного белка, трипсина, протеазы, пептида, который дополняет и активирует усеченный репортерный белок, киназы.

В некоторых вариантах осуществления активность или функция полиА аптамерного полинуклеотида по настоящему изобретению измеряют путем экспрессии экспрессируемого полипептида. В некоторых вариантах осуществления активность или функция полиА аптамерного полинуклеотида по настоящему изобретению измеряют с помощью кратной индукции. В некоторых вариантах осуществления кратная индукция рассчитывается как отношение экспрессируемого полипептида в присутствии лиганда и экспрессируемого полипептида в отсутствие лиганда. В некоторых вариантах осуществления кратная индукция рассчитывается как отношение экспрессируемого полипептида в присутствии аптамера и экспрессируемого полипептида в присутствии другого аптамера. В некоторых вариантах осуществления кратная индукция рассчитывается как отношение экспрессируемого полипептида в присутствии аптамера, включающего по меньшей мере один акцепторный сайт сплайса и один донорный сайт сплайсинга, и экспрессируемого полипептида в присутствии другого аптамера без сайтов сплайса. В некоторых вариантах осуществления кратная индукция рассчитывается как отношение экспрессии эндогенного гена до введения полиА аптамерного полинуклеотида и экспрессии эндогенного гена после введения полиА аптамерного полинуклеотида, регулирующего экспрессию того же эндогенного гена.

Лиганд

В соответствии с различными вариантами осуществления, лиганд может быть выбран таким образом, чтобы способствовать достижению желаемой конечной цели представленной системы. Соответственно, лиганд может быть или состоять из полипептида, нуклеиновой кислоты, низкомолекулярного вещества, препарата, метаболита или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления лиганд может быть или состоять из клеточного метаболита, аберрантного клеточного белка или белка, экспрессируемого патогенным организмом (например, вирусом, бактерией или грибком). Например, в некоторых вариантах осуществления лиганд может быть экзогенно вводимым низкомолекулярным веществом, так что дозировка и функционирование системы могут быть легко изменены по желанию в конкретном терапевтическом контексте. Например, в некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой тетрациклин или его производные. В некоторых вариантах осуществления лиганд может быть выбран таким образом, чтобы экспрессия экспрессируемого полипептида происходила в ответ на конкретное биологическое состояние (например, инфекцию, онкогенез, высокий или низкий уровень глюкозы), например, в качестве биосенсорной системы, которая может обнаруживать один или более внутриклеточные «сигнатуры» в клетке, ткани или субъекте. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления лиганд является эндогенным для субъекта (например, эндогенный белок). В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой неомицин или его производные. Например, в некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой теофиллин или его производные. В некоторых вариантах осуществления лигандом является глюкоза. Например в некоторых вариантах осуществления лигандом является биомаркер рака.

Векторы

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению может быть введен с помощью вектора. В некоторых вариантах осуществления вектор может быть вирусным вектором. Подходящие вирусные векторы включают, помимо прочего, лентивирусные векторы, ретровирусные векторы, альфавирусные, пикорнальные (например, полиомиелитные), вакцинальные, аденовирусные, адено-ассоциированные вирусные, герпесвирусные и вирусные векторы оспы птиц.

Примерные способы применения, включая лечение

В соответствии с настоящим изобретением полинуклеотиды аптамера полиА и/или системы, содержащие один или более полинуклеотидов аптамера полиА, могут быть использованы в любой из множества областей применения. Например, в некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению используется для лечения индивида, страдающего от заболевания, например, путем обеспечения контролируемой экспрессии терапевтического белка, кодируемого экспрессируемым полинуклеотидом. В некоторых вариантах осуществления заболевание - это недостаток определенного белка (белков), вызванный генетическим нарушением. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой диабет, преддиабет или осложнения после диабета. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой рак. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой мышечную дистрофию. В некоторых вариантах осуществления заболевание представляет собой наследственный дефицит фактора X. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению предложен в комбинации с другими способами лечения заболевания. В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению используется для индуцирования перепрограммирования клеток в плюрипотентные стволовые клетки (индуцированные плюрипотентные стволовые клетки или иПСК). В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид по настоящему изобретению вводят или назначают до, во время или после других способов лечения заболевания. В некоторых вариантах осуществления терапевтический белок может представлять собой или содержать инсулин, гормоны роста, дистрофии, альбумин, фактор IX, Oct4, Sox2, Klf4, сМус и любую их комбинацию.

В некоторых вариантах осуществления система, содержащая полиА аптамерный полинуклеотид, может быть использована для получения информации о том, эффективна ли терапия у конкретного субъекта. В некоторых вариантах осуществления, когда желательно определить, эффективна ли одна или более терапий у субъекта, система может быть использована у субъекта до начала терапии, например, для обнаружения наличия или отсутствия специфического индикаторного соединения для терапии, а затем после проведения терапии один или более раз система может быть использована у субъекта для обнаружения наличия или отсутствия специфического индикаторного соединения. В других вариантах осуществления система не используется для мониторинга терапии до тех пор, пока терапия не будет предоставлена субъекту один или более раз, например, для определения наличия или отсутствия конкретного соединения, которое указывает на эффективность терапии. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды аптамера полиА и/или системы, содержащие один или более полинуклеотидов аптамера полиА, могут быть использованы в качестве биосенсора. В соответствии с различными вариантами осуществления, представленные системы могут предоставлять пространственную и/или временную информацию относительно конкретной среды (например, внутриклеточной, внеклеточной и/или окружающей среды). Например, в некоторых вариантах осуществления система, содержащая по меньшей мере один полиА аптамерный полинуклеотид, может быть использована для обнаружения одной или более специфических молекулярных сигнатур у субъекта и для обеспечения получения желаемого экспрессируемого полипептида для достижения желаемого биологического состояния в ответ на присутствие молекулярной сигнатуры (сигнатур). В некоторых вариантах осуществления молекулярная сигнатура может представлять собой или включать: присутствие определенного эндогенного генного продукта (например, генного продукта/белка, связанного с заболеванием), присутствие токсина, присутствие экзогенного генного продукта, присутствие метаболита (например, метаболита загрязнителя окружающей среды) и любая их комбинация.

В некоторых вариантах осуществления полиА аптамерный полинуклеотид может включать одно или более репортерных молекул (например, репортерный генный продукт, например, репортер для визуализации). В некоторых вариантах осуществления экспрессируемый полинуклеотид, входящий в состав полиА аптамерного полинуклеотида, кодирует продукт репортерного гена (например, белок). В некоторых вариантах осуществления продукт репортерного гена может представлять собой или включать люциферазу, зеленый флуоресцентный белок, красный флуоресцентный белок, β-галактозидазу, инфракрасные флуоресцентные белки, флуоресцентные белки ближнего инфракрасного диапазона, опсин и любую их комбинацию.

В некоторых вариантах осуществления система, содержащая полиА аптамерный полинуклеотид, может кодировать как продукт репортерного гена, так и терапевтический генный продукт. В некоторых таких вариантах осуществления экспрессия продукта репортерного гена и терапевтического генного продукта может контролироваться одним и тем же аптамером. В некоторых таких вариантах осуществления экспрессия продукта репортерного гена и терапевтического генного продукта может контролироваться разными аптамерами.

ПРИМЕРЫ

В настоящих примерах описан высокочувствительный механизм регуляции генов, который использует возможности индуцируемого препаратом альтернативного сплайсинга для контроля расщепления полиА. На Фиг. 1 показаны некоторые варианты осуществления настоящего изобретения. Как показано на Фиг. 1А, когда сконструированный короткий интрон (мини-IVS2) и новый сигнал полиА (красным) искусственно создаются в 5'-UTR трансгена, эффективный сплайсинг интрона и расщепление сигнала полиА приводят к разрушению второй половины мРНК и, следовательно, потере экспрессии генов. Связывание специфического лиганда с аптамерами, сконструированными как часть Y-образного переключателя (зеленым), эффективно индуцирует альтернативный сплайсинг. Лиганд-индуцированный альтернативный сплайсинг приводит к удалению Y-образной структуры и искусственного сигнала полиА в 5' UTR. Это, в свою очередь, приводит к сохранению интактной мРНК и, следовательно, индуцированной экспрессии генов. Отмечают, что второй 3' сайт сплайсинга (3'сс) встроен в последовательность 5'UTR. Этот 3' сайт сплайсинга активируется только после связывания лиганда (например, тетрациклина, «Тц») с аптамерами. Последовательность 4MAZ рядом со структурой Y усиливает альтернативный сплайсинг при связывании лиганда.

На Фиг. 1В показан переключатель полиА, содержащий три аптамера, как описано в настоящем документе. Каждый аптамер расположен на одном плече Y-образной структуры РНК. Такая Y-образная конструкция имеет несколько важных преимуществ: Она включает 3 аптамера для управления сигналом полиА (пА), который стратегически расположен в центральном трехстороннем соединении. Таким образом, она использует объединенную силу эффектов связывания тетрациклина, генерируемых тремя разными аптамерами; Y-образная структура компактна и требует в целом более коротких последовательностей для включения 3 аптамеров; Y-образная структура предназначена для естественной сборки во время биосинтеза РНК. Три аптамера расположены в направлении вперед-вперед-назад, чтобы свести к минимуму вероятность альтернативной сборки между аптамерами. Кроме того, известно, что двухцепочечные стебли РНК длиной более 35 п. н. вызывают в клетках врожденный иммунный ответ. Поэтому все стебли в структуре Y сделаны значительно короче, чем 35 п. н., чтобы исключить врожденный иммунный ответ.

На Фиг. 1С представлен пример (Y196CAA) последовательности нуклеиновой кислоты переключателя полиА, как описано в настоящем документе. Было разработано и протестировано более 370 конструкций, чтобы всесторонне исследовать влияние каждого компонента Y-образной структуры. К ним относятся (1) длина каждого плеча, (2) последовательность каждого плеча, (3) петля каждого плеча, и (4) последовательность и размер центрального 3-стороннего соединения, где размещается сигнал полиА. Влияние модификаций этих компонентов описано далее в этих не ограничивающих примерах.

Пример 1: Модуляция сигнала расщепления полиА

Место нахождения

Были изготовлены конструкции для тестирования дополнительных Y-образных структур, имеющих другую конфигурацию и другое расположение сигнала расщепления полиА. Было создано четыре различных конструкции: В1-В4, где сигнал полиА (красным) помещен рядом с аптамером С и зажат 3-сторонним соединением (Фиг. 2А; показана конструкция В1). Они показали отсутствие или минимальную индукцию. Были изготовлены еще четыре конструкции с сигналом полиА вблизи 3-стороннего соединения: Т1-Т4 (Фиг. 2В). Они также показали минимальную или умеренную индукцию. На Фиг. 2С показан пример переключателя полиА, в котором 3 аптамера наложены друг на друга без 3-стороннего соединения. При такой конфигурации наблюдалась минимальная индукция. Для дополнительного тестирования используется конкретная Y-образная конфигурация, показанная на Фиг. 1В, в которой сигнал полиА расположен вблизи трехстороннего соединения. В этой конфигурации трехстороннее соединение изгибается с различной ориентацией, обеспечивая уникальную геометрию для фиксации сигнала полиА. Стабильность каждого плеча определяют двумя факторами: количеством пар оснований и составом пары оснований (например, G-C более стабильна, чем пара A-U или G-U).

Количество сигналов расщепления полиА Были проведены тесты для оценки оптимального количества сигналов полиА в Y-образной структуре. На Фиг. 3А показано тестирование трех структур из серии Y с 2-мя сигналами полиА, обозначенными красными рамками. Y1 показывает ~12-кратную индукцию, самую высокую среди этих трех конструкций. В этой группе большинство плеча 3-1 - это пары A-U или G-U, поэтому для достижения определенной устойчивости требуется более длинный стебель. Как показано на Фигурах, плечи конструкций, приведенных в качестве примера в настоящем документе, содержат двухцепочечные стебли нуклеиновых кислот. Более короткое плечо 3-1 дает более низкую индукцию. На Фиг. 3В показано влияние длины плечей. Y5 - Y9 имеют только один сигнал полиА (красная рамка) с переменной длиной плеча 3-1 (синяя рамка) и плеча 2-1 (зеленая рамка). Длина плеча 3-1 и плеча 2-1 укорачивается на 1 п. н. поэтапно от Y5 до Y9. Эта конфигурация с одним полиА приводит к лучшей индукции. На Фиг. 3С показано, что когда в плече 1-2 имеются 2 сигнала полиА (Y6mut) подряд, индукция снижается примерно наполовину. Y6mut: идентичен Y6, за исключением того, что 2 сигнала полиА (красная рамка) встроены в плечо 1-2. На основании этих результатов определяют оптимальное количество и положение сигнала полиА: одиночный сигнал полиА, частично встроенный в плечо 1-2 и в 3-стороннее соединение. Полученная конфигурация используется в качестве основы для дальнейшей оптимизации.

Пример 2: Оптимизация трехстороннего соединения

Изменение окружения трехстороннего соединения напрямую влияет на фиксацию сигнала полиА. Поэтому характеристики Y-образного переключателя очень чувствительны к любым изменениям в трехстороннем соединении. Для выявления лучших последовательностей были проведены обширные исследования мутаций/инсерций/делеций вокруг трехстороннего соединения. На Фиг. 4А показано, что мутация U-G в Y22 удваивает индукцию, предположительно потому, что эта мутация создает новую пару оснований G-U на плече 3-1, которая усиливает фиксацию сигнала полиА. На фиг. 4В приведены примеры, показывающие влияние различных последовательностей трехсторонних соединений на индукцию. На Фиг. 4С сравнивают конструкции, содержащие 3 основания и 1 основание в блоке 1 трехсторонних соединений. Y107 - Y110 являются производными Y79, который имеет 3 основания в блоке 1. Y107 - Y110 имеют только одно основание в блоке 1. Y107 работает аналогично Y79, что указывает на достаточность одного неспаренного основания в блоке 1. На Фиг. 4D показаны результаты вставки одного основания в блок 2 трехстороннего соединения, что приводит к едва заметным изменениям сборки в трехстороннем соединении. Результаты показывают, что наилучшей конфигурацией является одно неспаренное основание в блоке 2. Для конструкций на Фиг. 4Е единственное основание в блоке 1 и блоке 2 было рандомизировано. Было протестировано 16 комбинаций, и результаты показали, что Y127, Y130 и Y134 являются лучшими среди них по сравнению с исходным Y79, протестированным в тот же день. На Фиг. 4F показана дальнейшая оптимизация конструкций с использованием Y130 в качестве основы. Ни одна из протестированных модификаций не привела к значительному улучшению. На Фиг. 4G показаны дополнительные модификации, сделанные относительно Y143, которые привели к незначительному изменению индукции. На Фиг. 4Н показаны дополнительные модификации, сделанные относительно Y147. Y163 немного улучшает индукцию, a Y162 немного снижает индукцию по сравнению с Y147. На Фиг. 4l показаны дополнительные модификации, сделанные относительно Y163. Y177 улучшает индукцию, a Y178 снижает индукцию по сравнению с Y163. На Фиг. 4J показаны модификации, сделанные относительно Y152. Эти модификации приводят к значительному улучшению по сравнению с Y152. В частности, Y166 почти вдвое увеличивает индукцию. Y166 служит новой основой для дальнейшей оптимизации. На Фиг. 4K показаны дополнительные модификации, сделанные относительно Y166. Эти модификации приводят к значительному улучшению по сравнению с Y166. Они также служат новыми основами для оптимизации.

Y174, Y175, Y176 и Y177 (см. Фиг. 4L) являются одними из лучших последовательностей трехстороннего соединения. Все эти конструкции имеют одно основание С или А в блоке 1 и блоке 2. В этих конструкциях первые 3 основания сигнала полиА AAUAAA (красная рамка) открыты в кармане 3-стороннего соединения. Последние 2 основания сигнала полиА встраиваются в плечо 1-2.

Изменение положения сигнала полиА относительно кармана трехстороннего соединения может изменить способность к индукции (Фиг. 5). В Y135-Y140 внесены изменения относительно Y101, карман 3-стороннего соединения сдвинут вдоль сигнала полиА. В результате сигнал полиА встраивается глубже в плечо 1-2. Эти модификации приводят к снижению индукции. Y101mut, производное Y101, содержит перевернутую пару C-G в плече 2-1 (указано красной стрелкой), которая удаляет потенциальный 3' сайт сплайсинга. Конструкции Y141-Y159 основаны на Y101mut. Карман 3-стороннего соединения перемещается вдоль сигнала полиА. Результаты индукции при перемещении кармана 3-стороннего соединения вдоль сигнала полиА показаны в последней части Фиг. 5.

Пример 3: Двухцепочечные стебли

Конструкции полинуклеотидов аптамера полиА, как описано в настоящем документе, содержат двухцепочечные стебли нуклеиновых кислот (например, РНК). Такие двухцепочечные участки в настоящем изобретении также называются «плечами». Модификации длины, стабильности и нуклеотидного состава могут влиять на прочность и эффективность полиА аптамерного полинуклеотида.

Предыдущие результаты (с использованием конструкций Y1 - Y9, Фиг. 3) показали, что стабильность плеча 3-1 должна находиться в определенном диапазоне. Плече 3 - очень чувствительная область, поскольку она находится очень близко к сигналу полиА. Незначительные изменения в стабильности плеча 3 могут привести к существенным изменениям в фиксации сигнала полиА, что приводит к индукции. Взяв за основу Y35, мы внесли множество изменений для оптимизации плеча 3. На Фиг. 6А - 6В показано изменение индукции в зависимости от изменения плеча 3. На этих Фиг. исходная конструкция находится в правой части, а результаты модификации показаны в левой части. На Фиг. 6А показаны результаты модификации плеча 3-1. Конструкции Y43 - Y45 с уменьшающейся силой плеча 3-2 основаны на Y35; конструкции Y188C и Y189C с уменьшающейся силой плеча 3-2 основаны на Y175; конструкции Y188D и Y189D с уменьшающейся силой плеча 3-2 основаны на Y176. Конструкции Y219A-224Ac более слабой силой плеча 3-2 путем замены пары G-C на пару G-U в различных местах основаны на Y197. На Фиг. 6 В показаны результаты модификации плеча 3-2. Конструкции Y201- Y203 основаны на Y175. Конструкции Y216B-217B с более слабым плечом 3-2 основаны на Y208. Результаты показывают, что увеличение длины плеча 3-2 и изменение последовательности петель значительно снижают индукцию. Большинство этих модификаций значительно снижают индукцию, и ни одна из них не превосходит Y35. Таким образом, плечо 3 из Y35 представляет собой оптимальную последовательность плеча 3 для Y-образной структуры из числа протестированных. Некоторые другие исходные конструкции, используемые для модификации плеча 3, такие как Y175, Y197 и Y210, имеют одну и ту же последовательность плеча 3 Y35. Модификации двухцепочечных стеблей, которые являются плечом 2 (т.е. плечо 2-1 и плечо 2-2), изменяют стабильность плеча 2. Модификации включают изменения длины, последовательности, а также точечные мутации, которые создают несоответствия в стебле (Фиг. 7).

На Фиг. 7А показаны результаты модификации плеча 2-2. Конструкции Y48-Y53 основаны на Y35. На Фиг. 7В показаны результаты модификации плеча 2-1. Результаты этих модификаций показывают, что индукция менее чувствительна к изменениям в стабильности плеча 2 по сравнению с плечом 3. Предположительно это связано с тем, что плечо 2 не связано напрямую с сигналом полиА. Тем не менее, плечо 2 требует определенного уровня стабильности для достижения хорошей индукции. Нестабильность плеча 2 приводит к очень низкой индукции. Последовательности плеча 2, показанные в этих результатах, определены эмпирически. Некоторые из последовательностей плеча 2 уже находятся в оптимальном диапазоне стабильности и представляют собой почти оптимальные последовательности, которые приводят к очень эффективной индукции. Дальнейшее повышение стабильности либо увеличивает, либо уменьшает индукцию.

На Фиг. 8 показаны результаты различных модификаций плеча 1-2.

На Фиг. 9 показаны результаты различных модификаций плеча 1-1.

Пример 4: Ориентация аптамеров

Ориентация каждого из аптамеров относительно других аптамеров может влиять на функцию полиА аптамерного полинуклеотида. На Фиг. 10А показаны результаты конструкций Y54 - Y57, которые основаны на Y35, с измененной ориентацией аптамера В. Изменение ориентации аптамера В в значительной степени устраняет индукцию. На Фиг. 10В показаны результаты индукции конструкций Y240 - Y252, которые основаны на Y196CAA, с измененной ориентацией аптамера А. Изменение ориентации аптамера А полностью устраняет индукцию независимо от длины плеча 1-2.

Пример 5: Вклад каждого аптамера в индукцию

На Фиг. 11А показан вклад каждого аптамера Y-образной структуры в индукцию. Каждый аптамер Y-образной структуры может быть отключен мутацией от А до С (стрелки) в кармане связывания, которая устраняет связывание с его лигандом тетрациклином. NA: Аптамер А отключен; NB: Аптамер В отключен; NC: Аптамер С отключен; NAB: Аптамеры А и В отключены; NBC: Аптамеры В и С отключены; NAC: Аптамеры А и С отключены. Эти результаты показывают, что аптамер С вносит наиболее значительный вклад в конечную индукцию. За ним следует аптамер В, затем аптамер А. На Фиг. 11В показан эффект удаления аптамера А из Y-образной структуры. В блоках указана последовательность, удаленная для каждой конструкции. Удаление аптамера А сохраняет умеренную индукцию, хотя ее уровень значительно снижается по сравнению с исходным Y196CAA.

Пример 6: Модификации 5'UTR

На Фиг. 12А показано, что вставка повторов САА (подчеркнуты) в 5'UTR может изменять уровни индукции. Вставка повторов САА в Y196, Y208, Y209 и Y211 приводит к более высокой индукции. Вставка спейсерных последовательностей, содержащих повторы САА, в 5'UTR Y301 приводит к переменному эффекту на индукцию. Эти спейсерные последовательности лишь незначительно отличаются друг от друга, однако приводят к большим различиям в индукции, что указывает на то, что эта область очень чувствительна к изменениям. На Фиг. 12В показаны некоторые примеры тестирования новой последовательности 5'UTR с сильным 3' сайтом сплайсинга с использованием S56 в качестве исходной конструкции. На Фиг. 12С показаны результаты добавления внутренне неструктурированных последовательностей РНК в 5'UTR вблизи ATG начала трансляции без использования повторов САА. Эти конструкции основаны на Y300 и Y305. Из всех конструкций, основанных на Y300, лучшей является Y329. Хотя она не превосходит по производительности Y305, у нее есть преимущество в том, что она не использует повторы САА. На Фиг. 12D показано, что место вставки повторов САА также значительно влияет на индукцию.

Пример 7: Важность последовательности G-квадруплекса

Мы проверили влияние последовательности G-квадруплекса на индукцию. На Фиг. 13А показано, что 3MAZ или G-квадруплекс CD44 достигает аналогичного уровня индукции по сравнению с 2MAZ, используя Y196CAA в качестве исходного. Однако 4MAZ резко удвоил индукцию благодаря своей способности эффективно индуцировать альтернативный сплайсинг.На Фиг. 13В показаны результаты индукции, когда различные последовательности G-квадруплекса были протестированы для замены G-квадруплекса 4MAZ, используя конструкцию S56 в качестве исходной. В этих конструкциях 4MAZ заменяют следующим образом: один G-квадруплекс CD44 TGGTGGTGGAATGGT' (S177), два G-квадруплекса CD44 TGGTGGTGGAATGGTAAATGGTGGTGGAATGGT (S178) или четыре G-квадруплекса CD44 TGGTGGTGGAATGGTAAATGGTGGTGGAATGGTAAATGGTGGTGGAATGGTAAATGGTGGTGGAATGGT' (S179). Результаты показывают, что эффект 4MAZ является уникальным и не может быть заменен другими последовательностями G-квадруплекса. Последовательность 4MAZ обладает уникальными свойствами и является ключевым элементом гибридного переключателя, который требует как эффективного расщепления сигнала полиА, так и Тц-индуцированного альтернативного сплайсинга. На Фиг. 14 еще раз показана важность последовательности 4MAZ. ОТ-ПЦР выявила механизм препарат-индуцированного альтернативного сплайсинга. В отсутствие Тц, IVS2-сплайсированная РНК деградирует путем расщепления полиА (полоса 1 и 3). Присутствие Тц индуцирует альтернативный сплайсинг как в Y196CAA-2MAZ, так и в Y196CAA-4MAZ (полосы 2 и 4). Секвенирование по Сенгеру подтвердило, что полоса, индуцированная Тц (нижняя полоса), содержит ожидаемое соединение РНК альтернативного сплайсинга. Тц-индуцированный альтернативный сплайсинг гораздо более выражен в Y196CAA-4MAZ по сравнению с Y196CAA-2MAZ (полоса 4 по сравнению с полосой 2). При таком индуцированном альтернативном сплайсинге в присутствии Тц удаляется как сигнал полиА, так и Y-образная структура, и индукция экспрессии белка значительно возрастает.

Пример 8: Модулирование первого 3'-акцепторного сайта сплайса Для дальнейшей оптимизации механизма Тц-индуцированного альтернативного сплайсинга мы подробно исследовали влияние расположения 3' сайта сплайсинга IVS2 и окружающей последовательности/структуры. Модификации включают: встраивание сайта сплайсинга IVS23 в плечо 1; перемещение 3' сайта сплайсинга IVS2 ближе или дальше от сайта связывания аптамеров; помещение 3' сайта сплайсинга IVS2 в свободную петлю на плече 1; изменение длины или стабильности плеча 1, на котором находится 3' сайт сплайсинга IVS2; изменение силы сплайсинга 3' сайта сплайсинга IVS2. На Фиг. 15А показаны результаты постепенного перемещения 3' сайта сплайсинга IVS2 в плечо 1-1 Y196CAA-4MAZ (S1-S4). Также показано, что когда 3' сайт сплайсинга IVS2 мутирует от CAG до ССС (S5), индукция практически исчезает.На Фиг. 15В показано, что когда 3' сайт сплайсинга IVS полностью встроен в плечо 1-1 рядом с Тц-связывающим карманом аптамера А (красная стрелка; S9), этот сайт сплайсинга сильно ингибирован, что приводит к очень низкой индукции. Это указывает на то, что фиксация 3' сайта сплайсинга IVS2 аптамером не может быть слишком сильной. Кроме того, уменьшение фиксирующего эффекта аптамера А путем удаления части его последовательности (S9m) восстанавливает индукцию. Перемещение 3' сайта сплайсинга IVS вдоль плеча 1 S9m приводит к образованию S19, который короче и имеет схожие уровни индукции по сравнению с исходным S9m (Фиг. 15С). На Фиг. 15D показано влияние на индукцию, когда CAG 3' сайта сплайсинга IVS2 помещен в петлю плеча 1-2. S47 - S50 основаны на S19. При концентрации Тц 1 мкг/мл большинство из них дают более низкую индукцию. При 5 мкг/мл Тц они дают аналогичную или более высокую индукцию по сравнению с S19, за исключением S50. На Фиг. 15Е показаны результаты изменения прогнозируемой силы сплайсинга путем мутации основания после 3' сайта сплайсинга IVS2. Изменение силы 3' сайта сплайсинга IVS2 существенно не изменяет индукцию в конфигурациях на основе S9m и Y196CAA-4MAZ. На Фиг. 15F показаны результаты перемещения 3' сайта сплайсинга мини-IVS2 дальше внутрь стебля или дальше от него, что приводит к снижению индукции. На Фиг. 15G показан эффект рандомизации трех оснований после сад 3' сайта сплайсинга мини-IVS2 для выбора последовательностей с наивысшей производительностью. Эта группа конструкций (в частности, Y362, Y366 и Y367) продемонстрировала превосходную эффективность переключения, превзойдя показатели Y300 и Y301. Лучшие последовательности NNN, выявленные в результате тестирования: на основе Y344: Y359 (CAT), Y360 (ТТТ), Y361 (TGA), Y362 (ТСТ); на основе Y358: Y363 (CAT), Y366 (ТАС), Y367 (ТТТ).

Пример 9: Модулирование второго 3'-акцепторного сайта сплайса в 5'UTR Были проведены анализы для проверки эффекта модуляции силы второго 3' акцепторного сайта сплайсинга в 5'UTR. Последовательность 5'UTR Y196CAA-4MAZ, расположенная после 4MAZ и перед стартовым кодоном ATG, имеет следующую последовательность:

gcggccgccaacaacaacaacaacaacaacaacaacaacaacaacaacataacagtgttcactagcaacctcaaacagacaccATG. Добавление дополнительной точки ветвления (S10), ppt (S11) или мутации CAG в CCC (S12) или AAG (S13) привели к снижению индукции (Фиг. 16А). Чтобы активировать корректный 3' сайт сплайсинга (3' сайт сплайсинга IVS2) в отсутствие Тц и в присутствии Тц (второй альтернативный 3' сайт сплайсинга), мы использовали конструкции с короткими интронами в качестве отправной точки и применили подход рандомизации для выбора лучших трех оснований после TAG в 5'UTR (TAGNNN) для улучшения индукции (Фиг. 16В). Мы также вставили эти лучшие три основания (NNN) в 5'UTR Y329 для оценки эффективности (Фиг. 16С). Среди них Y344 показал наилучшие результаты.

Пример 10: Размер интрона

Мы проверили эффект сокращения общего размера гибридного переключателя путем уменьшения размера интрона IVS2. На Фиг. 17А показаны примерные последовательности интронов. Конструкции S164-S168 похожи на S159-S163, но имеют точку ветвления ТАСТААС, вставленную в том же месте перед 3' сайтом сплайсинга IVS2. В качестве примера показана последовательность интрона S164: GtgagtctatgccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagctaggcccttttgctaatcatCttcaTACTAACctcttatcttcctctgCAG. Конструкции S169-S173 аналогичны S159-S163, но имеют точку ветвления ТАСТААС и еще один 3' сайт сплайсинга CAG, вставленный в то же место перед 3' сайтом сплайсинга IVS2. В качестве примера показана последовательность интрона S169: GTgagtctatgccagctaccattctgcttttattttatggttgggataaggctggattattctgagtccaagcTACTAACttttcctgtgcttcttcagacctcttatcttcctctgCAG. Уменьшение размера интрона IVS2 с 476 оснований до 120-200 оснований значительно снизило индукцию (Фиг. 16В). Результаты по Y164-Y173, в которые добавлены различные элементы сплайсинга для обеспечения сплайсинга интрона IVS2, привели к еще более низкой индукции по сравнению с результатами без этих добавленных элементов. Это указывает на то, что укорачивание или добавление элементов в интрон IVS2 изменяет выбор активации 3' сайта сплайсинга в присутствии Тц. Ранее мы показали, что повторы САА изменяют силу сплайсинга 3' сайта сплайсинга в 5'UTR. Здесь повторы САА (красным цветом) должны быть удалены из S159, S164 и S169. По сравнению с S56, S192 (с интроном из 120 оснований) показал лучшую индукцию при 1 мкг/мл Тц, и такую же индукцию при 5 мкг/мл Тц. S192, который является более компактным из-за более короткого интрона, используется в качестве новой основы для дальнейшей модификации.

Пример 11: Добавление выше AUG, находящегося вне рамки (pORF) Для проверки влияния на трансляцию репортерного гена из IVS32-сплайсированного транскрипта в конструкцию S192 был введен выше AUG, находящийся вне рамки. Модификации включают: (1) замену ТАС на ATG сразу после 3' сайта сплайсинга IVS2 для создания нового стартового кодона (красная рамка), (2) замену соответствующего основания на другой стороне плеча 1 для сохранения сопряжения оснований в стебле, и (3) мутацию находящегося внутри рамки стоп-кодона tga в ада в плече 2-1 (красная стрелка), так что трансляция с этого нового ATG может производить достаточно длинный белок. См. Фиг. 18А.

Показана последовательность после 3' сайта сплайсинга CAG IVS2. Новый pORF подчеркнут:

ctgCAGATGttcctcgagatctggggaggtgaagaatacgaccacctaataagattaccgaaaggcaatcttattaaaacataccagatcttgagagggtgtttgtggcaaaacataccagatcgaattcgatctggggaggtgaagaatacgaccacctgctacaagtacctaataaaCATtagCGGaGaaacataccactgtgtgttggttttttgtgtgttaacgggggagggggaggaaagggggagggggaggaaagggggagggggaggaaagggggagggggagcggccgccataacagtgttcactagcaaccTcaaacagacaccATG. Этот подход значительно снижает утечку экспрессии из IVS2-сплайсированного транскрипта, поэтому значительно увеличивает индукцию, как показывает результат S206.

Эта конструкция была дополнительно оптимизирована путем точной настройки последовательности 5'UTR на основе S206 (Фиг. 18 В). Все эти конструкции демонстрируют очень хорошую индукцию. Эти конструкции более компактны за счет более короткого интрона и частично удаленного аптамера А. Они очень хорошо работают при концентрации Тц до 1 мкг/мл и достигают ~700-кратной индукции при концентрации 5 мкг/мл.

В итоге, в процессе оптимизации влияния Тц на выбор сплайсинга между 3' сайтом сплайсинга IVS2 и альтернативным 3' сайтом сплайсинга, мы обнаружили, что лучшим местом для размещения 3' сайта сплайсинга IVS2 является встраивание его внутрь плеча 1 структуры Y. Для того, чтобы разместить 3' сайт сплайсинга IVS2 в этом месте, аптамер А удаляют из структуры Y. Создание находящего выше вне рамки AUG (pORF), который устраняет трансляцию репортерного гена из IVS32-сплайсированного транскрипта, снижает утечку экспрессии. По сравнению с Y196CAA-4MAZ, S222 (Фиг. 17С) демонстрирует более высокую индукцию в сборке при более низкой концентрации препарата, более высокие уровни экспрессии генов, и, что, возможно, более важно, S222 обладает высокой чувствительностью к Тц и хорошо работает при низких концентрациях Тц.

Производительность конструкции

На Фиг. 19А показано сравнение производительности репрезентативных конструкций серии S относительно Y196CAA-4MAZ. На Фиг. 18 В показана доза-ответ экспрессии гибридных переключающих конструкций, визуализированная с помощью микроскопии. Чтобы избежать потенциальной иммуногенности, вызванной трансляцией белков находящихся выше открытых рамок считывания (μORF), мы создали еще один гибридный переключатель без pORF, стремящийся превзойти производительность S222. Для создания нового гибридного переключателя мы вернулись к конструкции Y196CAA-4MAZ, поскольку она имеет 3 аптамера по сравнению с 2 аптамерами в S222.

Для дальнейшего улучшения Y196CAA-4MAZ мы (1) использовали мини-интрон IVS2 с 120 основаниями, (2) оптимизировали 3' сайт сплайсинга последовательности мини IVS2, (3) оптимизировали последовательность 5'UTR, содержащую находящийся ниже альтернативный 3' сайт сплайсинга. Эти усилия привели к созданию группы конструкций, превосходящих S222 по производительности. Индукция тетрациклином настолько эффективна, что они вызывают экспрессию генов до 50% от максимального уровня (ЕС₅₀) при концентрации препарата от 0,5 до 1 мкг/мл. Такая концентрация тетрациклина может быть зачастую достигнута в сыворотке крови человека с помощью дозировки, одобренной FDA, и быть на порядок ниже той, которая была достигнута ранее с помощью любой технологии регуляции генов на основе РНК. На Фиг. 19С показано сравнение эффективности этих новых конструкций с S222. 5'UTR последовательность Y300: gcggccgcCataacagtgttcactagcaTccCcaaacagacaccATG. Y301: на основе Y300 с модифицированным 5'UTR gcggccTTaATtaacagtgttcactaggacaccATG.

На Фиг. 19D показана эффективность Y362 и Y367, определенная с помощью анализов люциферазы. На Фиг. 19Е показан ответ Y362 и Y367 на 1 мкг/мл тетрациклина, определенный с помощью сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS) с использованием репортерного сигнала eGFP. «Кратная индукция» во всех результатах рассчитывается как соотношение экспрессии трансгена в присутствии и в отсутствие тетрациклина.

Пример 12: Вставка рибосвитча в эндогенное расположение

Y-образный переключатель полиА в сочетании с CRISPR создает мощную технологическую платформу для контроля экспрессии любого эндогенного гена в геноме млекопитающих. На Фиг. 20 представлена схема применения CD133, мембранного белка стволовых клеток, для демонстрации принципа. Условная экспрессия гена эндогенного CD133 достигается путем вставки рибосвитча Y196 в 5'UTR CD133 с помощью CRISPR-Cas9 и матрицы репарации. На Фиг. 20А сверху: три гРНК (r1, r2 и r3) используют для определения мест расщепления CRISPR-Cas9 вблизи начала трансляции CD133. На Фиг. 20А снизу: для репарации используют матрицу репарации, содержащую промотор мини-ЦМВ, интрон IVS2 и рибосвитч Y196, фланкированные выше и ниже последовательностями, гомологичными CD133. На Фиг. 20В представлены схемы экспериментальных процедур. Рибосвитч Y196 сначала был вставлен в исходные CD133^- клетки с помощью CRISPR-Cas9. Затем успешно сконструированные клетки реагируют на Тц дозозависимым образом, чтобы включить экспрессию CD133. FITC-конъюгированное антитело против белка CD133 было использовано для маркировки и выделения клеток, отвечающих на Тц. На Фиг. 19С показано, что условная экспрессия эндогенного CD133 регулировалась Тц. Экспрессия CD133 в сконструированном клеточном клоне (в данном случае клетке 293Т) показала незначительную или нулевую утечку базового уровня. Экспрессия CD133 специфически индуцируется Тц, но не его аналогом Докси. ND: без лечения препаратом, Тц: Тетрациклин, Докси: Доксициклин. Клеточный клон обрабатывали препаратом или без него в течение 2 дней, а затем собирали для поточного анализа. По оси X показана интенсивность окрашивания антителами отдельных клеток. На Фиг. 20D показано, что, как и ожидалось, белок CD133, индуцированный Тц (как показано с помощью антитела FITC-анти CD133), был локализован на клеточной мембране, как и нормальный эндогенный белок CD133. Стабильный клеточный клон обрабатывали препаратом или без него в концентрации 2 мкг/мл в течение 2 дней, а затем собирали для поточного анализа с визуализацией (Amnis). Опять же, индукция явно характерна для Тц, но не для Докси.

Описанные данные представляют собой высокочувствительный механизм регуляции генов, который использует возможности индуцируемого препаратом альтернативного сплайсинга для контроля расщепления полиА. Разработанная комбинация создает чувствительный переключатель на основе РНК, которым можно управлять с помощью низкомолекулярных препаратов, и который обеспечивает жесткую регуляцию экспрессии генов в клетках млекопитающих. В отличие от других описанных способов, описанная в данном документе технология гибридного переключения демонстрирует экспрессию с очень низкой утечкой и эффективно включает экспрессию трансгена почти в 700 раз в клетках человека. Кроме того, индукция тетрациклином настолько эффективна, что индуцирует экспрессию генов до 50% от максимального уровня (ЕС₅₀) при концентрации препарата от 0,5 до 1 мкг/мл. Такая концентрация тетрациклина может быть зачастую достигнута в сыворотке крови человека с помощью дозировки, одобренной FDA, и быть на порядок ниже той, которая была достигнута ранее с помощью других технологий регуляции генов на основе РНК.

Таким образом, эта технология гибридного переключения предпочтительно безопасна для использования у пациентов-людей для контроля экспрессии терапевтического гена или трансгена. Таким образом, настоящее изобретение удовлетворяет давно назревавшую потребность в данной области техники в создании высокоэффективной и неиммуногенной технологии для регуляции представляющих интерес генов в клетках при концентрации препарата, безопасной для потребления человеком. Пример 13: Комбинация изменений единичного основания в трех местах Комбинацию изменений трех оснований в последовательности Y-образной структуры тестировали для определения кумулятивных эффектов на индукционные характеристики аптамера полиА. Три мутации, как показано на Фиг. 21, состоят из делеции «А» в плече 1-1; изменения «А» на «G», чтобы закрыть непарный разрыв в плече 2-2; и вставки «А» в 3-стороннем соединении, предшествующем сигналу полиА. Эти мутации были реализованы с использованием четырех разных исходных конструкций, которые имеют разные основания после интрона мини-IVS2. Всего было разработано 12 конструкций, описанных в таблице 1, для исследования кумулятивных эффектов.

На Фиг. 22 показано, что комбинация изменений трех единичных оснований значительно увеличивает индукцию при более низкой концентрации препарата. Кроме того, на Фиг. 23А и 23В показан анализ доза-эффекта для конструкций Y362 и Y387. Y362 и Y387 эффективно включают экспрессию трансгена в 650-700 раз в клетках 293Т при использовании всего лишь 1 мкг/мл тетрациклина. Для обеих конструкций индукция тетрациклином достигает 50% от максимального уровня (ЕС₅₀) уже при 0,5-1 мкг/мл Тц, используя максимальное увеличение индукции в качестве эталона ЕС₁₀₀ (Фиг. 23А). Расчеты с использованием максимального уровня экспрессии исходной конструкции (HDM-Люц, которая имеет аналогичную последовательность, но без Y-образной структуры) в качестве эталона ЕС₁₀₀ также показывают аналогичные значения ЕС₅₀ от 0,5 до 1,2 мкг/мл (Фиг. 23В). Y387 является особенно эффективной конструкцией, так как имеет значение ЕС₅₀, равное 0,5 мкг/мл, независимо от используемых эталонных значений ЕС₁₀₀

Пример 14:

Способы

Анализы, описанные на Фиг., прилагаемых к настоящему документу, выполняли следующим образом:

Анализ люциферазы

Клетки высевали в 96-луночные планшеты с плотностью 25000-30000 клеток/лунку. Через 24 часа инкубации каждую лунку трансфицировали 50 нг ДНК-векторов и инкубировали с культуральной средой, не содержащей тетрациклина или содержащей различные концентрации тетрациклина, в течение дополнительных 18 часов. Активность люциферазы измеряли в относительных световых единицах (RLU, англ.: relative light units) с помощью планшет-ридера Polarstar Omega (BMG Labtech, США). Для приготовления 36 мл буфера для анализа к 35 мл основного буфера (25 мМ трицина, 0,5 мМ ЭДТА-Na₂, 0,54 мМ Na-трифосфата, 16,3 мМ MgS04.7H₂O и 0,8% Тритон Х-100) добавляли 144 мкл 1 М ДТТ, 108 мкл 0,1 М АТФ, 252 мкл 0,1 М люциферина и 360 мкл 0,05 М КоА. После удаления клеточной среды в каждую лунку добавляли 40 мкл буфера для анализа и дважды считывали активность люциферазы с помощью планшет-ридера Polarstar Omega. «Кратная индукция» рассчитывается как соотношение экспрессии трансгена в присутствии и в отсутствие тетрациклина.

ОТ-ПЦР

Клетки, трансфицированные соответствующими конструкциями, выращивали в течение 18 часов при 37°С в среде в отсутствие или в присутствии тетрациклина. Тотальную РНК выделяли в соответствии с протоколом, поставляемым с набором для очистки РНК RiboPure™ (Ambion, Остин, Техас). Для ОТ-ПЦР ОТ проводили с использованием Superscript III (invitrogen, Карлсбад, Калифорния) в соответствии с протоколом производителя, а ПЦР проводили с использованием праймеров, нацеленных на начало транскрипта и репортерного гена.

Флуоресцентная микроскопия

Клетки высевали в 12-луночные планшеты с плотностью 1.2×10⁵ клеток/лунку. Через 24 часа инкубации каждую лунку трансфицировали 500 нг ДНК-векторов и инкубировали с культуральной средой, не содержащей тетрациклина или содержащей различные концентрации тетрациклина, в течение дополнительных 18 часов. Изображения получали на флуоресцентном микроскопе (Zeiss Axiovert 40CFL) при увеличении в 200 раз.

Пример 15: Типичные последовательности конструкций

Следующие последовательности являются дополнительными примерами вариантов осуществления компонентов описанной в данном документе системы.

Последовательности представлены в виде последовательностей ДНК, которые при транскрибировании компонентов образуют аптамеры РНК:

+1: начало транскрипции

Черный: 5' ведущая последовательность РНК

Подчеркнуто: интрон IVS2 или интрон мини-IVS2

Жирный шрифт: Y-образный переключатель полиА (с подчеркнутым 4MAZ) Курсив: 5'UTR

ATG: начало транскрипции выделено жирным шрифтом

Y196CAA-4MAZ

Y208

Y209

Y211

Y226

Y227

Y300

Y329

Y305

Y305D1

Y305D2

Y305D3

Y305D4

Y305D5

Y305D6

Y305D7

Y301

Y305D9

Y305D10

Y305D11

Y305D12

Y305D13

Y344

Y359

Y360

Y361

Y362

Y358

Y363

Y366

Y367

Y375

Y376

S206

S210

S211

S212

S213

S214

S215

S222

S223

S272

Y387

Y392

Y393

Y394

Y395

Y396

Y397

Эквиваленты

Специалистам в данной области станет понятно или они смогут установить, используя не более чем рутинные эксперименты, существование многочисленных эквивалентов конкретных вариантов реализации изобретения, описанных в данном документе. Объем данного изобретения не ограничивается приведенным выше описанием, а соответствует приведенной ниже формуле изобретения:

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> BAYLOR COLLEGE OF MEDICINE

<120> СИСТЕМА РЕГУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ

<130> 2011256-0323

<140> PCT/US2020/048561

<141> 28.08.2020

<150> 63/043504

<151> 24.06.2020

<150> 62/904635

<151> 23.09.2019

<150> 62/894611

<151> 30.08.2019

<160> 556

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 121

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 1

gtgagtctta agccagctac cattctgctt ttattttatc gttgggataa ggctggatta 60

ttctgagtcc aagctaggcc cttttgctaa tcatcttcat acctcttatc ttcctctgca 120

g 121

<210> 2

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 2

ggguguuugu ggc 13

<210> 3

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 3

cacgagaucu gg 12

<210> 4

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 4

gcguuuuaua cuu 13

<210> 5

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 5

cucugcagau guu 13

<210> 6

<211> 1057

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 6

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ggacccttga 120

tgttttcttt ccccttcttt tctatggtta agttcatgtc ataggaaggg gagaagtaac 180

agggtacaca tattgaccaa atcagggtaa ttttgcattt gtaattttaa aaaatgcttt 240

cttcttttaa tatacttttt tgtttatctt atttctaata ctttccctaa tctctttctt 300

tcagggcaat aatgatacaa tgtatcatgc ctctttgcac cattctaaag aataacagtg 360

ataatttctg ggttaaggca atagcaatat ttctgcatat aaatatttct gcatataaat 420

tgtaactgat gtaagaggtt tcatattgct aatagcagct acaatccagc taccattctg 480

cttttatttt atggttggga taaggctgga ttattctgag tccaagctag gcccttttgc 540

taatcatgtt catacctctt atcttcctcc cacagctcct gggcaacgtg ctggtctgtg 600

tgctggccca tcactttggc aaagaattgg ctagccacac acacaaatct ggggaggtga 660

agaatacgac cacctgcgtt ttatacttcc acgagatctg gggaggtgaa gaatacgacc 720

acctaataag attaccgaaa ggcaatctta ttaaaacata ccagatcttg tgagggtgtt 780

tgtggcaaaa cataccagat cgaattcgat ctggggaggt gaagaatacg accacctgct 840

acaagtacct aataaagtat aaagtgcaaa acataccaga tctgtgtgtt ggttttttgt 900

gtgttaacgg gggaggggga ggaaaggggg agggggagga aagggggagg gggaggaaag 960

ggggaggggg agcggccgcc aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac aacaacaaca 1020

taacagtgtt cactagcaac ctcaaacaga caccatg 1057

<210> 7

<211> 1047

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 7

tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc 60

ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ggacccttga tgttttcttt 120

ccccttcttt tctatggtta agttcatgtc ataggaaggg gagaagtaac agggtacaca 180

tattgaccaa atcagggtaa ttttgcattt gtaattttaa aaaatgcttt cttcttttaa 240

tatacttttt tgtttatctt atttctaata ctttccctaa tctctttctt tcagggcaat 300

aatgatacaa tgtatcatgc ctctttgcac cattctaaag aataacagtg ataatttctg 360

ggttaaggca atagcaatat ttctgcatat aaatatttct gcatataaat tgtaactgat 420

gtaagaggtt tcatattgct aatagcagct acaatccagc taccattctg cttttatttt 480

atggttggga taaggctgga ttattctgag tccaagctag gcccttttgc taatcatgtt 540

catacctctt atcttcctcc cacagctcct gggcaacgtg ctggtctgtg tgctggccca 600

tcactttggc aaagaattgg ctagccacac acacaaatct ggggaggtga agaatacgac 660

cacctgcgtt ttatacttcc gcgagatctg gggaggtgaa gaatacgacc acctaataag 720

attaccgaaa ggcaatctta ttaaaacata ccagatcttg cgagggtgtt tgtggcaaaa 780

cataccagat cgaattcgat ctggggaggt gaagaatacg accacctgct acaagtacct 840

aataaagtat aaagtgcaaa acataccaga tctgtgtgtt ggttttttgt gtgttaacgg 900

gggaggggga ggaaaggggg agggggagga aagggggagg gggaggaaag ggggaggggg 960

agcggccgcc aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac aacaacaaca taacagtgtt 1020

cactagcaac ctcaaacaga caccatg 1047

<210> 8

<211> 1058

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 8

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ggacccttga 120

tgttttcttt ccccttcttt tctatggtta agttcatgtc ataggaaggg gagaagtaac 180

agggtacaca tattgaccaa atcagggtaa ttttgcattt gtaattttaa aaaatgcttt 240

cttcttttaa tatacttttt tgtttatctt atttctaata ctttccctaa tctctttctt 300

tcagggcaat aatgatacaa tgtatcatgc ctctttgcac cattctaaag aataacagtg 360

ataatttctg ggttaaggca atagcaatat ttctgcatat aaatatttct gcatataaat 420

tgtaactgat gtaagaggtt tcatattgct aatagcagct acaatccagc taccattctg 480

cttttatttt atggttggga taaggctgga ttattctgag tccaagctag gcccttttgc 540

taatcatgtt catacctctt atcttcctcc cacagctcct gggcaacgtg ctggtctgtg 600

tgctggccca tcactttggc aaagaattgg ctagccacac acacaaatct ggggaggtga 660

agaatacgac cacctgcgtt ttatacttcc gcgagatctg gggaggtgaa gaatacgacc 720

acctaataag attaccgaaa ggcaatctta ttaaaacata ccagatcttg cgagggtgtt 780

tgtggcaaaa cataccagat cgaattcgat ctggggaggt gaagaatacg accacctgct 840

acaagtacct aaataaagta taaagtgcaa aacataccag atctgtgtgt tggttttttg 900

tgtgttaacg ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg aaagggggag ggggaggaaa 960

gggggagggg gagcggccgc caacaacaac aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac 1020

ataacagtgt tcactagcaa cctcaaacag acaccatg 1058

<210> 9

<211> 1058

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 9

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ggacccttga 120

tgttttcttt ccccttcttt tctatggtta agttcatgtc ataggaaggg gagaagtaac 180

agggtacaca tattgaccaa atcagggtaa ttttgcattt gtaattttaa aaaatgcttt 240

cttcttttaa tatacttttt tgtttatctt atttctaata ctttccctaa tctctttctt 300

tcagggcaat aatgatacaa tgtatcatgc ctctttgcac cattctaaag aataacagtg 360

ataatttctg ggttaaggca atagcaatat ttctgcatat aaatatttct gcatataaat 420

tgtaactgat gtaagaggtt tcatattgct aatagcagct acaatccagc taccattctg 480

cttttatttt atggttggga taaggctgga ttattctgag tccaagctag gcccttttgc 540

taatcatgtt catacctctt atcttcctcc cacagctcct gggcaacgtg ctggtctgtg 600

tgctggccca tcactttggc aaagaattgg ctagccacac acacaaatct ggggaggtga 660

agaatacgac cacctgcgtt ttatacttcc acgagatctg gggaggtgaa gaatacgacc 720

acctaataag attaccgaaa ggcaatctta ttaaaacata ccagatcttg tgagggtgtt 780

tgtggcaaaa cataccagat cgaattcgat ctggggaggt gaagaatacg accacctgct 840

acaagtacct aaataaagta taaagtgcaa aacataccag atctgtgtgt tggttttttg 900

tgtgttaacg ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg aaagggggag ggggaggaaa 960

gggggagggg gagcggccgc caacaacaac aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac 1020

ataacagtgt tcactagcaa cctcaaacag acaccatg 1058

<210> 10

<211> 1057

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 10

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ggacccttga 120

tgttttcttt ccccttcttt tctatggtta agttcatgtc ataggaaggg gagaagtaac 180

agggtacaca tattgaccaa atcagggtaa ttttgcattt gtaattttaa aaaatgcttt 240

cttcttttaa tatacttttt tgtttatctt atttctaata ctttccctaa tctctttctt 300

tcagggcaat aatgatacaa tgtatcatgc ctctttgcac cattctaaag aataacagtg 360

ataatttctg ggttaaggca atagcaatat ttctgcatat aaatatttct gcatataaat 420

tgtaactgat gtaagaggtt tcatattgct aatagcagct acaatccagc taccattctg 480

cttttatttt atggttggga taaggctgga ttattctgag tccaagctag gcccttttgc 540

taatcatgtt catacctctt atcttcctcc cacagctcct gggcaacgtg ctggtctgtg 600

tgctggccca tcactttggc aaagaattgg ctagccacac acacaaacct ggggaggtga 660

agaatacgac cacctgcgtt ttatacttcc acgagatctg gggaggtgaa gaatacgacc 720

acctaataag attaccgaaa ggcaatctta ttaaaacata ccagatcttg tgagggtgtt 780

tgtggcaaaa cataccagat cgaattcgat ctggggaggt gaagaatacg accacctgct 840

acaagtacct aataaagtat aaagtgcaaa acataccagg tctgtgtgtt ggttttttgt 900

gtgttaacgg gggaggggga ggaaaggggg agggggagga aagggggagg gggaggaaag 960

ggggaggggg agcggccgcc aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac aacaacaaca 1020

taacagtgtt cactagcaac ctcaaacaga caccatg 1057

<210> 11

<211> 1058

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 11

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ggacccttga 120

tgttttcttt ccccttcttt tctatggtta agttcatgtc ataggaaggg gagaagtaac 180

agggtacaca tattgaccaa atcagggtaa ttttgcattt gtaattttaa aaaatgcttt 240

cttcttttaa tatacttttt tgtttatctt atttctaata ctttccctaa tctctttctt 300

tcagggcaat aatgatacaa tgtatcatgc ctctttgcac cattctaaag aataacagtg 360

ataatttctg ggttaaggca atagcaatat ttctgcatat aaatatttct gcatataaat 420

tgtaactgat gtaagaggtt tcatattgct aatagcagct acaatccagc taccattctg 480

cttttatttt atggttggga taaggctgga ttattctgag tccaagctag gcccttttgc 540

taatcatgtt catacctctt atcttcctcc cacagctcct gggcaacgtg ctggtctgtg 600

tgctggccca tcactttggc aaagaattgg ctagccacac acacaaacct ggggaggtga 660

agaatacgac cacctgcgtt ttatacttcc acgagatctg gggaggtgaa gaatacgacc 720

acctaataag attaccgaaa ggcaatctta ttaaaacata ccagatcttg tgagggtgtt 780

tgtggcaaaa cataccagat cgaattcgat ctggggaggt gaagaatacg accacctgct 840

acaagtacct aaataaagta taaagtgcaa aacataccag gtctgtgtgt tggttttttg 900

tgtgttaacg ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg aaagggggag ggggaggaaa 960

gggggagggg gagcggccgc caacaacaac aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac 1020

ataacagtgt tcactagcaa cctcaaacag acaccatg 1058

<210> 12

<211> 603

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 12

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcatcccca aacagacacc 600

atg 603

<210> 13

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 13

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcatccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 14

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 14

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagcatc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 15

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 15

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagtagc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 16

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 16

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagacac aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 17

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 17

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagaacc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 18

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 18

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagtgcc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 19

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 19

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagttgc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 20

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 20

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagaccc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 21

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 21

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagcccc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 22

<211> 592

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 22

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccttaattaa cagtgttcac taggacacca tg 592

<210> 23

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 23

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagaggc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 24

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 24

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagtgac aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 25

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 25

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagtccc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 26

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 26

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagcctc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 27

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 27

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagtctc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 28

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 28

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 29

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 29

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag catacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 30

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 30

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tttacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 31

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 31

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tgaacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 32

<211> 613

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 32

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tctacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattacc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaataaa gtataaagtg caaaacatac cagatctgtg tgttggtttt 480

ttgtgtgtta acgggggagg gggaggaaag ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg 540

aaagggggag ggggagcggc cgccataaca gtgttcacta gcccccccca gaccatctac 600

caccgacacc atg 613

<210> 33

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 33

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag cacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagagcc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 34

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 34

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag catacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagagcc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 35

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 35

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tacacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagagcc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 36

<211> 629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 36

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tttacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccttaat taacagtgtt cactagagcc aacaacaaca 600

acaacaacaa caacaacaac gacaccatg 629

<210> 37

<211> 550

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 37

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccataacagt gttcactagc aacctcaaac 540

agacaccatg 550

<210> 38

<211> 550

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 38

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccataacagt gttcactagc aaccccaaac 540

agacaccatg 550

<210> 39

<211> 553

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 39

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccaccataac agtgttcact agcaacccca 540

aacagacacc atg 553

<210> 40

<211> 556

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 40

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccaccatgat aacagtgttc actagcaacc 540

ccaaacagac accatg 556

<210> 41

<211> 556

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 41

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccaccacgat aacagtgttc actagcaacc 540

ccaaacagac accatg 556

<210> 42

<211> 553

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 42

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccaccataac agtgttcact agcatcccca 540

aacagacacc atg 553

<210> 43

<211> 553

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 43

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccaccataac agtgttcacc agcatcccca 540

aacagacacc atg 553

<210> 44

<211> 550

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 44

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccataacagt gttcactagc atccccaaac 540

agacaccatg 550

<210> 45

<211> 550

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 45

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtctatg ccagctacca 120

ttctgctttt attttatggt tgggataagg ctggattatt ctgagtccaa gctaggccct 180

tttgctaatc atcttcatac ctcttatctt cctctgcaga tgttcctcga gatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct aataagatta ccgaaaggca atcttattaa aacataccag 300

atcttgagag ggtgtttgtg gcaaaacata ccagatcgaa ttcgatctgg ggaggtgaag 360

aatacgacca cctgctacaa gtacctaata aacattagcg gagaaacata ccactgtgtg 420

ttggtttttt gtgtgttaac gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 480

gggggaggaa agggggaggg ggagcggccg ccataacagt gttcaccagc atccccaaac 540

agacaccatg 550

<210> 46

<211> 551

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 46

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag attttccacg agatctgggg 240

aggtgaagaa tacgaccacc taataagatt accgaaaggc aatcttatta aaacatacca 300

gatcttgtga gggtgtttgt ggcaaaacat accagatcga attcgatctg gggaggtgaa 360

gaatacgacc acctgctaca agtacctaat aaaaattagc ggagaaacat accactgtgt 420

gttggttttt tgtgtgttaa cgggggaggg ggaggaaagg gggaggggga ggaaaggggg 480

agggggagga aagggggagg gggagcggcc gccataacag tgttcactag catccccaaa 540

cagacaccat g 551

<210> 47

<211> 66

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 47

aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag gaaaggggga 60

ggggga 66

<210> 48

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 48

gcggccgcct taattaacag tgttcactag agccaacaac aacaacaaca acaacaacaa 60

caacgacacc 70

<210> 49

<211> 476

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 49

gtgagtctat gggacccttg atgttttctt tccccttctt ttctatggtt aagttcatgt 60

cataggaagg ggagaagtaa cagggtacac atattgacca aatcagggta attttgcatt 120

tgtaatttta aaaaatgctt tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat 180

actttcccta atctctttct ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca 240

ccattctaaa gaataacagt gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata 300

taaatatttc tgcatataaa ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc 360

tacaatccag ctaccattct gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga 420

gtccaagcta ggcccttttg ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacag 476

<210> 50

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 50

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tctacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattgcc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 51

<211> 613

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 51

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag catacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattacc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaataaa gtataaagtg caaaacatac cagatctgtg tgttggtttt 480

ttgtgtgtta acgggggagg gggaggaaag ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg 540

aaagggggag ggggagcggc cgccataaca gtgttcacta gcccccccca gaccatctac 600

caccgacacc atg 613

<210> 52

<211> 613

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 52

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tttacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattacc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaataaa gtataaagtg caaaacatac cagatctgtg tgttggtttt 480

ttgtgtgtta acgggggagg gggaggaaag ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg 540

aaagggggag ggggagcggc cgccataaca gtgttcacta gcccccccca gaccatctac 600

caccgacacc atg 613

<210> 53

<211> 613

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 53

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tgaacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattacc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaataaa gtataaagtg caaaacatac cagatctgtg tgttggtttt 480

ttgtgtgtta acgggggagg gggaggaaag ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg 540

aaagggggag ggggagcggc cgccataaca gtgttcacta gcccccccca gaccatctac 600

caccgacacc atg 613

<210> 54

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 54

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag catacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattgcc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 55

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 55

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tttacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattgcc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 56

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 56

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tgaacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattgcc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 57

<211> 28

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 57

aataagatta ccgaaaggca atcttatt 28

<210> 58

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 58

ccagatcgaa ttcgatctgg 20

<210> 59

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 59

tggtggtgga atggt 15

<210> 60

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 60

tggtggtgga atggtaaatg gtggtggaat ggt 33

<210> 61

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 61

tggtggtgga atggtaaatg gtggtggaat ggtaaatggt ggtggaatgg taaatggtgg 60

tggaatggt 69

<210> 62

<211> 86

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 62

gcggccgcca acaacaacaa caacaacaac aacaacaaca acaacaacat aacagtgttc 60

actagcaacc tcaaacagac accatg 86

<210> 63

<211> 124

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 63

gtgagtctat gccagctacc attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat 60

tctgagtcca agctaggccc ttttgctaat catcttcata ctaacctctt atcttcctct 120

gcag 124

<210> 64

<211> 120

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 64

gtgagtctat gccagctacc attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat 60

tctgagtcca agctactaac ttttcctgtg cttcttcaga cctcttatct tcctctgcag 120

<210> 65

<211> 337

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 65

ctgcagatgt tcctcgagat ctggggaggt gaagaatacg accacctaat aagattaccg 60

aaaggcaatc ttattaaaac ataccagatc ttgagagggt gtttgtggca aaacatacca 120

gatcgaattc gatctgggga ggtgaagaat acgaccacct gctacaagta cctaataaac 180

attagcggag aaacatacca ctgtgtgttg gttttttgtg tgttaacggg ggagggggag 240

gaaaggggga gggggaggaa agggggaggg ggaggaaagg gggaggggga gcggccgcca 300

taacagtgtt cactagcaac ctcaaacaga caccatg 337

<210> 66

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 66

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc cccaaacaga caccatg 47

<210> 67

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 67

gcggccttaa ttaacagtgt tcactaggac accatg 36

<210> 68

<211> 614

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 68

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tctacacaca aatctgggga 240

ggtgaagaat acgaccacct gcgttttata cttccacgag atctggggag gtgaagaata 300

cgaccaccta ataagattac cgaaaggcaa tcttattaaa acataccaga tcttgtgagg 360

gtgtttgtgg caaaacatac cagatcgaat tcgatctggg gaggtgaaga atacgaccac 420

ctgctacaag tacctaataa agtataaagt gcaaaacata ccagatctgt gtgttggttt 480

tttgtgtgtt aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg ggagggggag 540

gaaaggggga gggggagcgg ccgccataac agtgttcact agcccccccc agaccatcta 600

ccaccgacac catg 614

<210> 69

<211> 628

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 69

tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg 60

atccagcctc ccctcgaagc tgatcctgag aacttcaggg tgagtcttaa gccagctacc 120

attctgcttt tattttatcg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 180

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag tttacacaca atctggggag 240

gtgaagaata cgaccacctg cgttttatac ttccacgaga tctggggagg tgaagaatac 300

gaccacctaa taagattacc gaaaggcaat cttattaaaa cataccagat cttgtgaggg 360

tgtttgtggc aaaacatacc agatcgaatt cgatctgggg aggtgaagaa tacgaccacc 420

tgctacaagt acctaataaa gtataaagtg caaaacatac cagatctgtg tgttggtttt 480

ttgtgtgtta acgggggagg gggaggaaag ggggaggggg aggaaagggg gagggggagg 540

aaagggggag ggggagcggc cgccttaatt aacagtgttc actagagcca acaacaacaa 600

caacaacaac aacaacaacg acaccatg 628

<210> 70

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 70

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuccacg 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaagauu accgaaaggc aaucuuauua 120

aaacauacca gaucuuguga ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 180

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca 240

uaccagaucu guguguuggu 260

<210> 71

<211> 47

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 71

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguu 47

<210> 72

<211> 78

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 72

aagugcaaaa cauaccagau cugugcgaaa gcacaaaucu ggggagguga agaauacgac 60

caccugcguu uuaggaca 78

<210> 73

<211> 100

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 73

uuuguuaaaa cauaccagau cgaauucgau cuggggaggu gaagaauacg accaccuaau 60

aaacuguaaa augcaaaaca uaccagaucu guguguuggu 100

<210> 74

<211> 56

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 74

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuu 56

<210> 75

<211> 79

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 75

cucaaaucug gggaggugaa gaauacgacc accugcagau ucgaaagaau cugcaaaaca 60

uaccagaucu gagucuaac 79

<210> 76

<211> 75

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 76

uauacuuugu uaaaacauac cagaucgaau ucgaucuggg gaggugaaga auacgaccac 60

cuaauaaagu auacg 75

<210> 77

<211> 40

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 77

aaaguauaaa gugcaaaaca uaccagaucu guguguuggu 40

<210> 78

<211> 34

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 78

uuuauacuuu guaaaacaua ccagagaucu gggg 34

<210> 79

<211> 49

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 79

accagaucuu uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua aaguauaaa 49

<210> 80

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 80

accaagaucu ggg 13

<210> 81

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 81

accagaucuu ggg 13

<210> 82

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 82

accagagauc uggg 14

<210> 83

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 83

accagaucuu ugggg 15

<210> 84

<211> 77

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 84

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuuguua 60

aaacauacca ggagauc 77

<210> 85

<211> 55

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 85

aggugaagaa uacgaccacc uaauaaauua ccgaaaggca aauuuauuaa aacau 55

<210> 86

<211> 79

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 86

ccagaucucc uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua aaguauaaag ugcaaaacau 60

accagaucug uguguuggu 79

<210> 87

<211> 72

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 87

cugcuuuguu aaaacauacc agaucgaauu cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc 60

uaauaaagcu aa 72

<210> 88

<211> 70

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 88

gccuuuguua aaacauacca gaucgaauuc gaucugggga ggugaagaau acgaccaccu 60

aauaaaggcu 70

<210> 89

<211> 258

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 89

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuuggac 60

aacucaaauc uggggaggug aagaauacga ccaccugcag auucgaaaga aucugcaaaa 120

cauaccagau cugaguugcu auacuuuguu aaaacauacc agaucgaauu cgaucugggg 180

aggugaagaa uacgaccacc uaauaaagua uagcuaauaa aguauaaagu gcaaaacaua 240

ccagaucugu guguuggu 258

<210> 90

<211> 119

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 90

acacacacaa aucuggggag gugaagaaua cgaccaccug cguuuuauac uuuggacaac 60

ucgaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcagauuc gaaagaaucu gcaaaacau 119

<210> 91

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 91

ccagaucgag uugcuauacu uggc 24

<210> 92

<211> 104

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 92

aaacauacca gaucgaauuc gaucugggga ggugaagaau acgaccaccu gcuaaguaua 60

gcuaauaaag uauaaagugc aaaacauacc agaucugugu guug 104

<210> 93

<211> 215

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 93

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauucuu uggacagcag 60

aucuggggag gugaagaaua cgaccaccug cagauucgaa agaaucugca aaacauacca 120

gaucugcugc uacuuuggca aaacauacca gaucgaauuc gaucugggga ggugaagaau 180

acgaccaccu gcuaaaguag cuaauaaaga auaaa 215

<210> 94

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 94

ugcaaaacau accagaucug ugugu 25

<210> 95

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 95

guaccuaaua aa 12

<210> 96

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 96

uuuggacaac a 11

<210> 97

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 97

uaccuaauaa a 11

<210> 98

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 98

uuuggacaac a 11

<210> 99

<211> 217

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 99

cacaaaucug gggaggugaa gaauacgacc accugcguuu uauacuuugg acaacaaaga 60

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccuaa uaaauugccg aaaggcaauu uauuaaaaca 120

uaccagaucu uugugggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga ucuggggagg 180

ugaagaauac gaccaccugc uacaaguacc uaauaaa 217

<210> 100

<211> 29

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 100

uauaaagugc aaaacauacc agaucugug 29

<210> 101

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 101

uuuggacaac a 11

<210> 102

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 102

uuuggacaac aa 12

<210> 103

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 103

uaccuaauaa a 11

<210> 104

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 104

uuggacaaca 10

<210> 105

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 105

cuuuggacaa caaa 14

<210> 106

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 106

cuuuguuggu gu 12

<210> 107

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 107

aguaccaaau aaag 14

<210> 108

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 108

uaccuaaaua aagu 14

<210> 109

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 109

cuuugugaca acaaa 15

<210> 110

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 110

uuuguuggug uu 12

<210> 111

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 111

aguaccuaaa uaaagu 16

<210> 112

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 112

cuuugugcag g 11

<210> 113

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 113

ccugcgggug 10

<210> 114

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 114

guaccuaaua aag 13

<210> 115

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 115

accuaauaaa 10

<210> 116

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 116

acuuugggca ggagau 16

<210> 117

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 117

gaucuccugc ggguguu 17

<210> 118

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 118

aaguaccuaa uaaagu 16

<210> 119

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 119

uaccuaauaa a 11

<210> 120

<211> 51

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 120

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauacuu u 51

<210> 121

<211> 203

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 121

gacagcagga gaucugggga ggugaagaau acgaccaccu aauaaauugc cgaaaggcaa 60

uuuauuaaaa cauaccagau cuccugcggg uguuuguggc aaaacauacc agaucgaauu 120

cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc ugcuacaagu accuaauaaa guauaaagug 180

caaaacauac cagaucugug ugu 203

<210> 122

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 122

uuuggacagc agg 13

<210> 123

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 123

uccugccggg 10

<210> 124

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 124

ccuaauaaag 10

<210> 125

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 125

uggacagcag ga 12

<210> 126

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 126

cuccugcggg gug 13

<210> 127

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 127

uaccuaauaa 10

<210> 128

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 128

uuuggacagc agg 13

<210> 129

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 129

ccugcugggu gu 12

<210> 130

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 130

aguaccuaau aaa 13

<210> 131

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 131

uuggacagca gg 12

<210> 132

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 132

ccugcagggu 10

<210> 133

<211> 255

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 133

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauacuu uggacagcag 60

gagaucuggg gaggugaaga auacgaccac cuaauaaauu gccgaaaggc aauuuauuaa 120

aacauaccag aucuccugcg gguguuugug gcaaaacaua ccagaucgaa uucgaucugg 180

ggaggugaag aauacgacca ccugcuacaa guaccuaaua aaguauaaag ugcaaaacau 240

accagaucug ugugu 255

<210> 134

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 134

uuggacagca gg 12

<210> 135

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 135

ccugcagggu 10

<210> 136

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 136

cuuucgcagg 10

<210> 137

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 137

ccugccgggu g 11

<210> 138

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 138

uaccuaaaua aagu 14

<210> 139

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 139

cuuugcgcag g 11

<210> 140

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 140

ccugccgggu 10

<210> 141

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 141

uaccuaaaua aagu 14

<210> 142

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 142

uauacuuucg caggag 16

<210> 143

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 143

cuccugccgg gug 13

<210> 144

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 144

guaccuaaua aaguaua 17

<210> 145

<211> 134

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 145

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauacuu ugcgcaggag 60

aucuggggag gugaagaaua cgaccaccua auaaauugcc gaaaggcaau uuauuaaaac 120

auaccagauc uccu 134

<210> 146

<211> 114

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 146

guguuugugg caaaacauac cagaucgaau ucgaucuggg gaggugaaga auacgaccac 60

cugcuacaag uaccuaauaa aguauaaagu gcaaaacaua ccagaucugu gugu 114

<210> 147

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 147

uacuuugaac acg 13

<210> 148

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 148

ucgugucggg u 11

<210> 149

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 149

uaccuaaaua aagua 15

<210> 150

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 150

uacuuuguaa cacgagau 18

<210> 151

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 151

gaucucgugu cggguguu 18

<210> 152

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 152

aguaccuaaa uaaagua 17

<210> 153

<211> 51

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 153

cacacaaauc uggggaggug aagaauacga ccaccugcgu uuuauacuuu g 51

<210> 154

<211> 84

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 154

uaacacgaga ucuggggagg ugaagaauac gaccaccuaa uaagauuacc gaaaggcaau 60

cuuauuaaaa cauaccagau cucg 84

<210> 155

<211> 115

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 155

guguuugugg caaaacauac cagaucgaau ucgaucuggg gaggugaaga auacgaccac 60

cugcuacaag uaccuaaaua aaguauaaag ugcaaaacau accagaucug ugugu 115

<210> 156

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 156

uacuuucaac acgag 15

<210> 157

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 157

cucgugucgg gugu 14

<210> 158

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 158

guaccuaaua aagua 15

<210> 159

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 159

uacuuugaac acga 14

<210> 160

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 160

cucgugucgg gu 12

<210> 161

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 161

uaccuaauaa aguau 15

<210> 162

<211> 51

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 162

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauacuu u 51

<210> 163

<211> 158

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 163

acgagaucug gggaggugaa gaauacgacc accuaauaag auuaccgaaa ggcaaucuua 60

uuaaaacaua ccagaucucg ugucgggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga 120

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccugc uacaagua 158

<210> 164

<211> 41

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 164

cuaauaaagu auaaagugca aaacauacca gaucugugug u 41

<210> 165

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 165

acuucacacg 10

<210> 166

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 166

cgugucgggu 10

<210> 167

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 167

uaccuaaaua aagu 14

<210> 168

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 168

uacuucacac gag 13

<210> 169

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 169

cucgugucgg gugu 14

<210> 170

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 170

guaccuaaua aagua 15

<210> 171

<211> 52

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 171

acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcguu uuauacuuuc aa 52

<210> 172

<211> 198

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 172

acgagaucug gggaggugaa gaauacgacc accuaauaag auuaccgaaa ggcaaucuua 60

uuaaaacaua ccagaucucg ugucgggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga 120

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccugc uacaaguacc uaauaaagua uaaagugcaa 180

aacauaccag aucugugu 198

<210> 173

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 173

cuuuccacga ga 12

<210> 174

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 174

ucucgugagg gug 13

<210> 175

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 175

guaccuaaua aag 13

<210> 176

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 176

uaccuaauaa a 11

<210> 177

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 177

uauacuuucc acgaga 16

<210> 178

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 178

ucucgugcug ggug 14

<210> 179

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 179

guaccuaaua aaguaua 17

<210> 180

<211> 137

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 180

cacacaaauc uggggaggug aagaauacga ccaccugcgu uuuauacuuu ccacgagauc 60

uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua agauuaccga aaggcaaucu uauuaaaaca 120

uaccagaucu cgugauu 137

<210> 181

<211> 77

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 181

gguguuugug gcaaaacaua ccagaucgaa uucgaucugg ggaggugaag aauacgacca 60

ccugcuacaa guaccua 77

<210> 182

<211> 36

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 182

uaaaguauaa agugcaaaac auaccagauc ugugug 36

<210> 183

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 183

uaccuaauaa agu 13

<210> 184

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 184

cuuuccacga g 11

<210> 185

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 185

cucgugaggg ug 12

<210> 186

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 186

uaccuaaaua aagu 14

<210> 187

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 187

uacuuccacg ag 12

<210> 188

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 188

cucgugaggg ugu 13

<210> 189

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 189

aguaccuaaa uaaagua 17

<210> 190

<211> 209

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 190

cacacaaauc uggggaggug aagaauacga ccaccugcgu uuuauacuuu ccacgagauc 60

uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua agauuaccga aaggcaaucu uauuaaaaca 120

uaccagaucu cgugagggug uuuguggcaa aacauaccag aucgaauucg aucuggggag 180

gugaagaaua cgaccaccug cuacaagua 209

<210> 191

<211> 41

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 191

cuaauaaagu auaaagugca aaacauacca gaucugugug u 41

<210> 192

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 192

uacuucacac gag 13

<210> 193

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 193

cucgugucgg gugu 14

<210> 194

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 194

guaccuaaua aagua 15

<210> 195

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 195

uacuuccacg ag 12

<210> 196

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 196

cucgugaggg ugu 13

<210> 197

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 197

aguaccuaaa uaaagua 17

<210> 198

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 198

cuuuccacga g 11

<210> 199

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 199

cucgugaggg ug 12

<210> 200

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 200

uaccuaaaua aagu 14

<210> 201

<211> 56

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 201

gcugccacac acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcguu uuauac 56

<210> 202

<211> 85

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 202

ccacgagauc uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua agauuaccga aaggcaaucu 60

uauuaaaaca uaccagaucu cguga 85

<210> 203

<211> 169

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 203

gguguuugug gcaaaacaua ccagaucgaa uucgaucugg ggaggugaag aauacgacca 60

ccugcuacaa guaccuaaua aaguauaaag ugcaaaacau accagaucug uguguugguu 120

uuuuguguga acgggggagg gggaggaaag ggggaggggg agcggccgc 169

<210> 204

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 204

uacuuuguua auuacaggag a 21

<210> 205

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 205

ucuccuaaug ggugu 15

<210> 206

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 206

uaccuaauaa agua 14

<210> 207

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 207

uuuguuaggu acaggagau 19

<210> 208

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 208

gaucuccuaa ugggugcuug 20

<210> 209

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 209

cuuuguuagu uacaggaga 19

<210> 210

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 210

ucuccuaaug ggugu 15

<210> 211

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 211

uaccuaauaa ag 12

<210> 212

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 212

uacuuuggac agcaggagau 20

<210> 213

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 213

gaucuccuaa ugggug 16

<210> 214

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 214

guaccuaaua aagua 15

<210> 215

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 215

acuuuggaca gcagga 16

<210> 216

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 216

cuccuaauug g 11

<210> 217

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 217

cuaauaaagu 10

<210> 218

<211> 254

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 218

acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcguu uuauacuuug gacaacagga 60

gaucugggga ggugaagaau acgaccaccu aauaagauua ccgaaaggca aucuuauuaa 120

aacauaccag aucuccugug gguguuugug gcaaaacaua ccagaucgaa uucgaucugg 180

ggaggugaag aauacgacca ccugcuacaa guaccuaaua aaguauaaag ugcaaaacau 240

accagaucug ugug 254

<210> 219

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 219

cuuuguuaac acga 14

<210> 220

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 220

ucgugucggg ugu 13

<210> 221

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 221

guaccuaaau aaag 14

<210> 222

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 222

cuuuguuaac acgag 15

<210> 223

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 223

ucucgugugg guguu 15

<210> 224

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 224

aaguaccuaa uaaagu 16

<210> 225

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 225

acuuuguuac ac 12

<210> 226

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 226

cgugugggug 10

<210> 227

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 227

uaccuaauaa agua 14

<210> 228

<211> 265

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 228

ccacacacac aaaucugggg aggugaagaa uacgaccacc ugcguuuuau acuuuggaca 60

acacgagauc uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua agauuaccga aaggcaaucu 120

uauuaaaaca uaccagaucu cgugugggug uuuguggcaa aacauaccag aucgaauucg 180

aucuggggag gugaagaaua cgaccaccug cuacaaguac cuaauaaagu auaaagugca 240

aaacauacca gaucugugug uuggu 265

<210> 229

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 229

uuuguuaaac ac 12

<210> 230

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 230

uaccuuaaua aag 13

<210> 231

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 231

cuuuguuaaa cacgag 16

<210> 232

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 232

cucgugucgg gug 13

<210> 233

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 233

guaccuauaa uaaag 15

<210> 234

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 234

acuuuguuac ac 12

<210> 235

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 235

ccuaauaaag u 11

<210> 236

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 236

uacuuuguaa cacgag 16

<210> 237

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 237

cucgugucgg gugu 14

<210> 238

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 238

guaccuaaua aagua 15

<210> 239

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 239

uacuuuguaa cacg 14

<210> 240

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 240

cgugucggug 10

<210> 241

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 241

guacuaauaa agua 14

<210> 242

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 242

acuuugucac 10

<210> 243

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 243

ccuaauaaag ua 12

<210> 244

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 244

cuuugaucac g 11

<210> 245

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 245

ucgugacugg ugu 13

<210> 246

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 246

uacuaauaaa gu 12

<210> 247

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 247

uacuuugauc acg 13

<210> 248

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 248

ucgugauugg gug 13

<210> 249

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 249

guaccuaaua aagua 15

<210> 250

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 250

auacuuucca cgag 14

<210> 251

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 251

cucgugauug g 11

<210> 252

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 252

ccuaauaaag uau 13

<210> 253

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 253

uauacuuucc acgag 15

<210> 254

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 254

ucucgugauu gguguu 16

<210> 255

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 255

aaguacuaau aaaguaua 18

<210> 256

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 256

auacuuucac acgaga 16

<210> 257

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 257

ucucguguau ugguguu 17

<210> 258

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 258

aaguacuaau aaaguaua 18

<210> 259

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 259

uauacuuuca cacgag 16

<210> 260

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 260

ucucguguau uguguu 16

<210> 261

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 261

aaguauaaua aaguaua 17

<210> 262

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 262

uauacuuaca cga 13

<210> 263

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 263

cucgugcauu gg 12

<210> 264

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 264

cuaauaaagu aua 13

<210> 265

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 265

uuuauacuua cacgagau 18

<210> 266

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 266

aguauaauaa aguauaaa 18

<210> 267

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 267

uuauacuuaa cacgagau 18

<210> 268

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 268

aucucguguc auuguguuu 19

<210> 269

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 269

aaguauaaua aaguauaa 18

<210> 270

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 270

uuauacuuaa cacgaga 17

<210> 271

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 271

aucucguguu auuguguu 18

<210> 272

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 272

aguauaauaa aguauaa 17

<210> 273

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 273

acuuuggaca acaaagau 18

<210> 274

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 274

gaucuuugug guguuug 17

<210> 275

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 275

acaaguacua auaaagu 17

<210> 276

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 276

cuuuggacaa caaagau 17

<210> 277

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 277

aucuuugugg uguuug 16

<210> 278

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 278

acaaguaccu aauaaag 17

<210> 279

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 279

guggguguuu guggca 16

<210> 280

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 280

gcuacaagua ucuaaua 17

<210> 281

<211> 151

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 281

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauacuu uggacaacaa 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaaauug ccgaaaggca auuuauuaaa 120

acauaccaga ucuuuguggg uguuuguggc a 151

<210> 282

<211> 101

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 282

aacauaccag aucgaauucg aucuggggag gugaagaaua cgaccaccug cuacaaguac 60

cuaauaaagu auaaagugca aaacauacca gaucugugug u 101

<210> 283

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 283

aggguguuug gcaa 14

<210> 284

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 284

gcuaaguacc u 11

<210> 285

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 285

gaggguguuu uggcaa 16

<210> 286

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 286

gcuaaaguac cu 12

<210> 287

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 287

gaggguguuu guggcaaa 18

<210> 288

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 288

gcuacaagua ccuaa 15

<210> 289

<211> 57

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 289

aaacauacca gaucgaggaa agaauucgau cuggggaggu gaagaauacg accaccu 57

<210> 290

<211> 62

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 290

gcaaaacaua ccagaucgag ugaaagaauu cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc 60

ug 62

<210> 291

<211> 65

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 291

ggcaaaacau accagaucga guugaaagaa uucgaucugg ggaggugaag aauacgacca 60

ccugc 65

<210> 292

<211> 174

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 292

acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcguu uuauacuucc acgagaucug 60

gggaggugaa gaauacgacc accuaauaag auuaccgaaa ggcaaucuua uuaaaacaua 120

ccagaucucg ugaggguguu uguggcaaaa cauaccagau cgaauucgau cugg 174

<210> 293

<211> 73

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 293

gaggugaaga auacgaccac cugcuacaag uaccuaauaa aguauaaagu gcaaaacaua 60

ccagaucugu gug 73

<210> 294

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 294

ggguguuugu ggcaa 15

<210> 295

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 295

gcuacaagua cuuaauaa 18

<210> 296

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 296

gaggguguuu gugguaaaac auacc 25

<210> 297

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 297

gcuacaagua ccu 13

<210> 298

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 298

aggguguuug uggcaaaaca 20

<210> 299

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 299

gcuacaagua ucuaau 16

<210> 300

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 300

guguuugugg caaaac 16

<210> 301

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 301

ccugcuauaa guaccuaau 19

<210> 302

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 302

ggguguuugu ggcaaaacau ac 22

<210> 303

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 303

accaccuguu auaaguaccu aa 22

<210> 304

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 304

gguguuugug gcaaaacaua cca 23

<210> 305

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 305

ccaccuguua caaguaccua aua 23

<210> 306

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 306

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuccgcg 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaagauu accgaaaggc aaucuuauua 120

aaacauacca gaucucgcga ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 180

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca 240

uaccagaucu guguguuggu 260

<210> 307

<211> 57

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 307

aaacauacca gaucgaggaa agaauucgau cuggggaggu gaagaauacg accaccu 57

<210> 308

<211> 62

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 308

gcaaaacaua ccagaucgag ugaaagaauu cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc 60

ug 62

<210> 309

<211> 65

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 309

ggcaaaacau accagaucga guugaaagaa uucgaucugg ggaggugaag aauacgacca 60

ccugc 65

<210> 310

<211> 174

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 310

acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcguu uuauacuucc acgagaucug 60

gggaggugaa gaauacgacc accuaauaag auuaccgaaa ggcaaucuua uuaaaacaua 120

ccagaucucg ugaggguguu uguggcaaaa cauaccagau cgaauucgau cugg 174

<210> 311

<211> 73

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 311

gaggugaaga auacgaccac cugcuacaag uaccuaauaa aguauaaagu gcaaaacaua 60

ccagaucugu gug 73

<210> 312

<211> 53

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 312

caaaacauac cagaucgaau ucgauuuggg gaggugaaga auacgaccac cug 53

<210> 313

<211> 53

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 313

ggcaaaacau accagcgaau ucgcugggga ggugaagaau acgaccaccu gcu 53

<210> 314

<211> 171

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 314

ccacacacac aaaucugggg aggugaagaa uacgaccacc ugcguuuuau acuuccgcga 60

gaucugggga ggugaagaau acgaccaccu aauaagauua ccgaaaggca aucuuauuaa 120

aacauaccag aucuugcgag gguguuugug gcaaaacaua ccagaucgaa u 171

<210> 315

<211> 87

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 315

cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc ugcuacaagu accuaauaaa guauaaagug 60

caaaacauac cagaucugug uguuggu 87

<210> 316

<211> 78

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 316

acaaagaucu ggggagguga agaauacgac caccuaauaa auuccgaaag gaauuuauua 60

aaacauacca gaucuuug 78

<210> 317

<211> 77

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 317

aaagaucugg ggaggugaag aauacgacca ccuaacgaau ugccgaaagg caauucguua 60

aaacauacca gaucuuu 77

<210> 318

<211> 72

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 318

aaagaucugg ggaggugaag aauacgacca ccuaauaaau ucgaaagaau uuauuaaaac 60

auaccagauc uu 72

<210> 319

<211> 247

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 319

cacaaaucug gggaggugaa gaauacgacc accugcguuu uauacuuugg acaacaaaga 60

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccuaa uaaauugccc aaaggcaauu uauuaaaaca 120

uaccagaucu uugugggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga ucuggggagg 180

ugaagaauac gaccaccugc uacaaguacc uaauaaagua uaaagugcaa aacauaccag 240

aucugug 247

<210> 320

<211> 69

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 320

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccuaa uaaaguugcc gaaaggcaac uuuauuaaaa 60

cauaccaga 69

<210> 321

<211> 71

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 321

aucuggggag gugaagaaua cgaccaccua auaagauugc cgaaaggcaa ucuuauuaaa 60

acauaccaga u 71

<210> 322

<211> 95

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 322

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuuggac 60

aacagaagau cuggggaggu gaagaauacg accac 95

<210> 323

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 323

uaauaaauug ccgaaaggca auuuauu 27

<210> 324

<211> 140

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 324

aaacauacca gaucuucugu ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 60

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca 120

uaccagaucu guguguuggu 140

<210> 325

<211> 68

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 325

aucuggggag gugaagaaua cgaccaccua auaaauugcc uucgggcaau uuauuaaaac 60

auaccaga 68

<210> 326

<211> 106

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 326

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuuggac 60

aacagaagau cuggggaggu gaagaauacg accaccuaau aaauug 106

<210> 327

<211> 150

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 327

caauuuauua aaacauacca gaucuucugu ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga 60

auucgaucug gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa 120

gugcaaaaca uaccagaucu guguguuggu 150

<210> 328

<211> 74

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 328

aucuggggag gugaagaaua cgaccaccua auaagagucu gccgaaaggc agacucuuau 60

uaaaacauac caga 74

<210> 329

<211> 67

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 329

cuggggaggu gaagaauacg accaccuaau aagauuaccg aaaggcaauc uuauuaaaac 60

auaccag 67

<210> 330

<211> 69

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 330

cuggggaggu gaagaauacg accaccuaau aagaguugcc gaaaggcaac ucuuauuaaa 60

acauaccag 69

<210> 331

<211> 91

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 331

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauacuu uggacagcag 60

gagaucuggg gaggugaaga auacgaccac c 91

<210> 332

<211> 163

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 332

aauaaauugc cgaaaggcaa uuuauuaaaa cauaccagau cuccugcggg uguuuguggc 60

aaaacauacc agaucgaauu cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc ugcuacaagu 120

accuaauaaa guauaaagug caaaacauac cagaucugug ugu 163

<210> 333

<211> 82

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 333

acaacaagau cuggggaggu gaagaauacg accaccuaau aaauugccga aaggcaauuu 60

auuaaaacau accagaucuu gu 82

<210> 334

<211> 82

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 334

aacgaagauc uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua aauugccgaa aggcaauuua 60

uuaaaacaua ccagaucuuc gu 82

<210> 335

<211> 83

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 335

acagaagauc uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua aauugccgaa aggcaauuua 60

uuaaaacaua ccagaucuuc ugu 83

<210> 336

<211> 247

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 336

cacaaaucug gggaggugaa gaauacgacc accugcguuu uauacuuugg acaacaaaga 60

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccuaa uaaauugccg aaaggcaauu uauuaaaaca 120

uaccagaucu uugugggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga ucuggggagg 180

ugaagaauac gaccaccugc uacaaguacc uaauaaagua uaaagugcaa aacauaccag 240

aucugug 247

<210> 337

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 337

gcagaagauc ugg 13

<210> 338

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 338

accagaucuu cugu 14

<210> 339

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 339

acaggcgauc ugg 13

<210> 340

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 340

ccagaucgcc ugu 13

<210> 341

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 341

acaggcgagc ugg 13

<210> 342

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 342

ccagcucgcc ugu 13

<210> 343

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 343

acaggagauc ugg 13

<210> 344

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 344

ccagaucucc ugu 13

<210> 345

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 345

acagacgauc ugg 13

<210> 346

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 346

ccagaucguc ugu 13

<210> 347

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 347

ccagaagauc ugg 13

<210> 348

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 348

ccagaucuuc ugg 13

<210> 349

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 349

gcagaagauc ugg 13

<210> 350

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 350

ccagaucuuc ugc 13

<210> 351

<211> 264

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 351

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuuggac 60

aacagaagau cuggggaggu gaagaauacg accaccuaau aaauugccga aaggcaauuu 120

auuaaaacau accagaucuu cugugggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga 180

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccugc uacaaguacc uaauaaagua uaaagugcaa 240

aacauaccag aucugugugu uggu 264

<210> 352

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 352

acagaacgag cugg 14

<210> 353

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 353

ccagaucuuc ucgu 14

<210> 354

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 354

aacgagaaga ucugg 15

<210> 355

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 355

ccagcucgcu cugu 14

<210> 356

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 356

acagagcgag cugg 14

<210> 357

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 357

acacgaagau cugg 14

<210> 358

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 358

ccagaucguu cugu 14

<210> 359

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 359

acagaacgau cugg 14

<210> 360

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 360

ccagcucgcg ucugu 15

<210> 361

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 361

acagacgcga gcugg 15

<210> 362

<211> 264

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 362

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuuggac 60

aacagaagau cuggggaggu gaagaauacg accaccuaau aaauugccga aaggcaauuu 120

auuaaaacau accagaucuu cugugggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga 180

ucuggggagg ugaagaauac gaccaccugc uacaaguacc uaauaaagua uaaagugcaa 240

aacauaccag aucugugugu uggu 264

<210> 363

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 363

gcgcuuuaua cccac 15

<210> 364

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 364

cuaaauaaag uauaaagugc aa 22

<210> 365

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 365

gcgcuuuaua cccacg 16

<210> 366

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 366

ccuaauaaag uauaaagugc aa 22

<210> 367

<211> 249

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 367

cacacaaauc uggggaggug aagaauacga ccaccugcgu uuuauacuuc cacgagaucu 60

ggggagguga agaauacgac caccuaauaa gauuaccgaa aggcaaucuu auuaaaacau 120

accagaucuc gugagggugu uuguggcaaa acauaccaga ucgaauucga ucuggggagg 180

ugaagaauac gaccaccugc uacaaguacc uaauaaagua uaaagugcaa aacauaccag 240

aucugugug 249

<210> 368

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 368

gcguuuuaua cuu 13

<210> 369

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 369

aaguauaaag ugu 13

<210> 370

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 370

gcguuuuaua uuuc 14

<210> 371

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 371

auaaaguaua aagugca 17

<210> 372

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 372

guguuuuaua cuuc 14

<210> 373

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 373

aaaguauaaa gugcaa 16

<210> 374

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 374

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuccacg 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaagauu accgaaaggc aaucuuauua 120

aaacauacca gaucuuguga ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 180

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca 240

uaccagaucu guguguuggu 260

<210> 375

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 375

aggguguuug uggcaaaa 18

<210> 376

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 376

cugccacaag caccuaauaa 20

<210> 377

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 377

ggguguuugu ggcaaaa 17

<210> 378

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 378

cugccacaag uaccuaau 18

<210> 379

<211> 82

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 379

cgagggugcu uguggcaaaa cauaccagau cgaauucgau cuggggaggu gaagaauacg 60

accaccugcu acaaguaccu aa 82

<210> 380

<211> 42

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 380

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cu 42

<210> 381

<211> 191

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 381

cguuuuauac uuccgcgaga ucuggggagg ugaagaauac gaccaccuaa uaagauuacc 60

gaaaggcaau cuuauuaaaa cauaccagau cucgcgaggg uguuuguggc aaaacauacc 120

agaucgaauu cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc ugcuacaagu accuaaauaa 180

aguauaaagu g 191

<210> 382

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 382

aaaacauacc agaucugugu guuggu 26

<210> 383

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 383

gcguuucaua cuucc 15

<210> 384

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 384

auaaaguaua aagugcaa 18

<210> 385

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 385

gcguuuuaua cuuc 14

<210> 386

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 386

uaaaguauaa agcgcaa 17

<210> 387

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 387

gcgcuuuaua cuucca 16

<210> 388

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 388

aauaaaguau aaagugc 17

<210> 389

<211> 238

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 389

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuccacg 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaagauu accgaaaggc aaucuuauua 120

aaacauacca gaucuuguga ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 180

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaa 238

<210> 390

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 390

auaccagauc uguguguugg u 21

<210> 391

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 391

gcguuuacuu c 11

<210> 392

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 392

aaaguaagug ca 12

<210> 393

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 393

gcguuauacu uc 12

<210> 394

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 394

aaaguauagu gca 13

<210> 395

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 395

gcguuuauac uu 12

<210> 396

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 396

uaaaguauaa gugca 15

<210> 397

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 397

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuccacg 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaagauu accgaaaggc aaucuuauua 120

aaacauacca gaucuuguga ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 180

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca 240

uaccagaucu guguguuggu 260

<210> 398

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 398

acacacaaac cuggg 15

<210> 399

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 399

accaggucug ugugu 15

<210> 400

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 400

cacacagacc ugg 13

<210> 401

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 401

ccaggucugu gug 13

<210> 402

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 402

acagaucugg g 11

<210> 403

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 403

ccagaucugu g 11

<210> 404

<211> 247

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 404

acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcguu uuauacuucc acgagaucug 60

gggaggugaa gaauacgacc accuaauaag auuaccgaaa ggcaaucuua uuaaaacaua 120

ccagaucucg ugaggguguu uguggcaaaa cauaccagau cgaauucgau cuggggaggu 180

gaagaauacg accaccugcu acaaguaccu aauaaaguau aaagugcaaa acauaccaga 240

ucugugu 247

<210> 405

<211> 258

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 405

gccacacaca caaaccuggg gagugaagaa uacgaccacc ugcguuuuau acuuccacga 60

gaucugggga ggugaagccu acgaccaccu aauaagauua ccgaaaggca aucuuauuaa 120

aacauaccag aucuugugag gguguuugug gcaaaacaua ccagaucgaa uucgaucugg 180

ggaggugaag aauacgacca ccugcuacaa guaccuaaua aaguauaaag ugaaaacaua 240

ccaggucugu guguuggu 258

<210> 406

<211> 82

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 406

aacaaagauc uggggaggug aagaauacga ccaccuaaua aauugccgaa aggcaauuua 60

uuaaaacaua ccagaucuuu gu 82

<210> 407

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 407

gcguuccuug u 11

<210> 408

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 408

aacaaggagu gcaa 14

<210> 409

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 409

gcguuccauu gu 12

<210> 410

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 410

aacaauggag ugca 14

<210> 411

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 411

gcguucuugu 10

<210> 412

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 412

aacaagagug caa 13

<210> 413

<211> 116

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 413

acacacaaau cuggggaggu gaagaauacg accaccugcg uuuuauacuu uggacaacaa 60

agagugcaaa acauaccaga gcgaaagcuc uggggaggug aagaauacga ccaccu 116

<210> 414

<211> 126

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 414

cguucuuugu ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug gggaggugaa 60

gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca uaccagaucu 120

gugugu 126

<210> 415

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 415

aaguauacaa guggg 15

<210> 416

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 416

accguuugua uacuuc 16

<210> 417

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 417

aaaguauaag ugg 13

<210> 418

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 418

accguuuaua cuuc 14

<210> 419

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 419

ucuugugagg gugu 14

<210> 420

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 420

aguaccuaau aaaguauaaa gu 22

<210> 421

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 421

caaaacauac cagauc 16

<210> 422

<211> 34

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 422

acaaaucugg ggaggugaag aauacgacca ccug 34

<210> 423

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 423

guuuuauacu uccacgaga 19

<210> 424

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 424

ccguuuugua uacuucc 17

<210> 425

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 425

uaaaguauac aaaguggg 18

<210> 426

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 426

auaccguaua cuu 13

<210> 427

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 427

uaaaguaugu ggg 13

<210> 428

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 428

ccguuauacu uc 12

<210> 429

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 429

uaaaguauag ugg 13

<210> 430

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 430

ucuggaaaac auaccgu 17

<210> 431

<211> 40

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 431

aguauaaagu ggggagguga agaauacgac caccuccaga 40

<210> 432

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 432

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuccacg 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaagauu accgaaaggc aaucuuauua 120

aaacauacca gaucuuguga ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 180

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca 240

uaccagaucu guguguuggu 260

<210> 433

<211> 260

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 433

gccacacaca caaaucuggg gaggugaaga auacgaccac cugcguuuua uacuuccacg 60

agaucugggg aggugaagaa uacgaccacc uaauaagauu accgaaaggc aaucuuauua 120

aaacauacca gaucuuguga ggguguuugu ggcaaaacau accagaucga auucgaucug 180

gggaggugaa gaauacgacc accugcuaca aguaccuaau aaaguauaaa gugcaaaaca 240

uaccagaucu guguguuggu 260

<210> 434

<211> 86

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 434

gcggccgcca acaacaacaa caacaacaac aacaacaaca acaacaacat aacagtgttc 60

actagcaacc tcaaacagac accatg 86

<210> 435

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 435

gcggccttaa ttaacagtgt tcactaggac aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac 60

gacaccatg 69

<210> 436

<211> 70

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 436

ggcgccttaa ttaacagtgt tcactaggta caacaacaac aacaacaaca acaacaacaa 60

cgacaccatg 70

<210> 437

<211> 72

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 437

gcggccgcct taattaacag tgttcactag gacaacaaca acaacaacaa caacaacaac 60

aacgacacca tg 72

<210> 438

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 438

gcggccgcct taattaacag tgttcactag catcaacaac aacaacaaca acaacaacaa 60

caacgacacc atg 73

<210> 439

<211> 135

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 439

gcggccgcca acaacaacaa caattcctgc tcctcttctg cccaggaaca cgcttgcctt 60

ccccaaggct tccagaagct ctgaggcagg aggcaccaag ttctacctca cgtttggagg 120

atcttgctag ctatg 135

<210> 440

<211> 136

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 440

gcggccgccc agcagatcca gtgcttcctg ctcctcttct gcccaggaac acgcttgcct 60

tccccaaggc ttccagaagc tctgaggcag gaggcaccaa gttctacctc acgtttggag 120

gatcttgcta gctatg 136

<210> 441

<211> 135

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 441

gcggccgcca acaacaacaa caattcctgc tcctcttctg ccctggaaca cgcttgcctt 60

ccccaaggct tccagaagct ctgaggcagg aggcaccaag ttctacctca cgtttggagg 120

atcttgctag ctatg 135

<210> 442

<211> 136

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 442

gcggccgccc agcagatcca gtgcttcctg ctcctcttct gccctggaac acgcttgcct 60

tccccaaggc ttccagaagc tctgaggcag gaggcaccaa gttctacctc acgtttggag 120

gatcttgcta gctatg 136

<210> 443

<211> 85

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 443

gcggccgcca acaacaacaa caacaacaac aacaacacgc ttgccttccc caagcttcca 60

caagcaacct caaacagaca ccatg 85

<210> 444

<211> 67

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 444

gcggccgcta ctaacaacac gcttgccttc cccaagcttc cacaagcaac ctcaaacaga 60

caccatg 67

<210> 445

<211> 85

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 445

gcggccgcgc ttcctgctcc tcttctgccc aggaacacgc ttgccttccc caagcttcca 60

caagcaacct caaacagaca ccatg 85

<210> 446

<211> 85

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 446

gcggccgcgc ttcctgctcc tcttctgccc tggaacacgc ttgccttccc caagcttcca 60

caagcaacct caaacagaca ccatg 85

<210> 447

<211> 85

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 447

gcggccgcta ctaacgctcc tcttctgccc tggaacacgc ttgccttccc caagcttcca 60

caagcaacct caaacagaca ccatg 85

<210> 448

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 448

ttaattaaca gtgttcacta gcatctaacc acttacatac catctaccac cgacaccatg 60

<210> 449

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 449

ttaattaaca gtgttcacta gcatctaacc acttacatac catctaccac cgccaccatg 60

<210> 450

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 450

ttaattaaca gtgttcacta gcatctaacc acttacatat tctgccgcct accatg 56

<210> 451

<211> 60

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 451

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc cccaacagac catctaccac cgacaccatg 60

<210> 452

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 452

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 453

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 453

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc ccctaccatc taccaccgac accatg 56

<210> 454

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 454

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc cccaacagac ttacatacca ttgacaccat 60

g 61

<210> 455

<211> 56

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 455

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc cccacttaca taccattgac accatg 56

<210> 456

<211> 84

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 456

gcggccgcct taattaacaa caacaacaac aacaacaaca acaacaacca gtgttcacta 60

gcatcgacac catgatcccc gggg 84

<210> 457

<211> 84

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 457

gcggccgccc aacaacaaca acaacaacaa caacaacaac ttaattaaca gtgttcacta 60

gcatcgacac catgatcccc gggg 84

<210> 458

<211> 61

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 458

gtgtgttggt tttttgtgtg aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gagcggccgc 60

c 61

<210> 459

<211> 74

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 459

gtgtgttggt tttttgtgtg gtggtggatt ggttaacggg ggagggggag gaaaggggga 60

gggggagcgg ccgc 74

<210> 460

<211> 76

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 460

gtgtgttggt tttttgtgtg aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gagtggtggt 60

ggattggtgc ggccgc 76

<210> 461

<211> 78

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 461

gtgtgttggt tttttgtgtg aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg 60

ggagggggag cggccgcc 78

<210> 462

<211> 95

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 462

gtgtgttggt tttttgtgtg aacgggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg 60

ggagggggag gaaaggggga gggggagcgg ccgcc 95

<210> 463

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 463

tggtggtgga atggt 15

<210> 464

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 464

tggtggtgga atggtaaatg gtggtggaat ggt 33

<210> 465

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 465

tggtggtgga atggtaaatg gtggtggaat ggtaaatggt ggtggaatgg taaatggtgg 60

tggaatggt 69

<210> 466

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 466

cacagaucug ggg 13

<210> 467

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 467

accagaucug ug 12

<210> 468

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 468

acagagaucu ggg 13

<210> 469

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 469

accagaucug ugug 14

<210> 470

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 470

cagacaaauc uggg 14

<210> 471

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 471

uaccagaucu gugug 15

<210> 472

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 472

cagcucacaa aucuggg 17

<210> 473

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 473

ccagaucugu guguug 16

<210> 474

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 474

cccacagcuc cugggcaacg ugc 23

<210> 475

<211> 182

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 475

ggucugugug cuggcccauc acuuuggcaa agaauuggcu agccacacac acaaaucugg 60

ggaggugaag aauacgacca ccugcaaaac auaccagauc uguguguugg uuuuuugugu 120

guuaacgggg gagggggagg aaagggggag ggggaggaaa gggggagggg gaggaaaggg 180

gg 182

<210> 476

<211> 35

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 476

cacacagugg ggaggugaag aauacgacca ccugc 35

<210> 477

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 477

caaaacauac cacugugug 19

<210> 478

<211> 41

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 478

agugcaaaac auaccacugu guguugguuu uuuguguguu a 41

<210> 479

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 479

ucacacagaa uacgaccacc ugcguu 26

<210> 480

<211> 35

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 480

uaccucuuau cuuccucugc aguuuuauac uucca 35

<210> 481

<211> 45

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 481

aauaaaguau aaagugcaaa acauaccacu guguguuggu uuuuu 45

<210> 482

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 482

agaauaagcg uuuuauacuu cca 23

<210> 483

<211> 53

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 483

uaauaaagua uaaagugcaa aacauaccac uguguguugg uuuuuugugu guu 53

<210> 484

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 484

aauagaaccu gcguuuuaua cuuccac 27

<210> 485

<211> 53

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 485

cuaauaaagu auaaagugca aaacauacca cuguguguug guuuuuugug ugu 53

<210> 486

<211> 259

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 486

uuccucacac agaauacgac caccugcguu uuauacuucc acgagaucug gggaggugaa 60

gaauacgacc accuaauaag auuaccgaaa ggcaaucuua uuaaaacaua ccagaucuug 120

ugaggguguu uguggcaaaa cauaccagau cgaauucgau cuggggaggu gaagaauacg 180

accaccugcu acaaguaccu aauaaaguau aaagugcaaa acauaccacu guguguuggu 240

uuuuugugug uuaacgggg 259

<210> 487

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 487

cuuuauacuu ccac 14

<210> 488

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 488

uaauaaagua uaaagugca 19

<210> 489

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 489

gcagaacuau acuuccac 18

<210> 490

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 490

cuaauaaagu auaaagugc 19

<210> 491

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 491

gcagaauuau acuucca 17

<210> 492

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 492

ccuaauaaag uauaaagugc 20

<210> 493

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 493

agauuuauac uuccac 16

<210> 494

<211> 249

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 494

uaccucuuau cuuccucugc aguuuuauac uuccacgaga ucuggggagg ugaagaauac 60

gaccaccuaa uaagauuacc gaaaggcaau cuuauuaaaa cauaccagau cuugugaggg 120

uguuuguggc aaaacauacc agaucgaauu cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc 180

ugcuacaagu accuaauaaa guauaaagug caaaacauac cacugugugu ugguuuuuug 240

uguguuaac 249

<210> 495

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 495

cacacagaat acg 13

<210> 496

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 496

cacacaggat acg 13

<210> 497

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 497

cacacagcat acg 13

<210> 498

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 498

cacacagatt acg 13

<210> 499

<211> 77

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 499

ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc catcactttg 60

gcaaagaatt ggctagc 77

<210> 500

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 500

ttatcttcct cacacagaat acgaccgtct gtgtgctggc ccatcacttt ggcaaagaat 60

tggctagc 68

<210> 501

<211> 68

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 501

ttatcttcct cacacagcat acgaccgtct gtgtgctggc ccatcacttt ggcaaagaat 60

tggctagc 68

<210> 502

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 502

ctgcagcaca caaatctggg ga 22

<210> 503

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 503

ctgcagtaca caaatctggg ga 22

<210> 504

<211> 48

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 504

ccucugcagc acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcg 48

<210> 505

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 505

ugcaaaacau accagaucug uguguugguu 30

<210> 506

<211> 48

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 506

ccucugcagu acacaaaucu ggggagguga agaauacgac caccugcg 48

<210> 507

<211> 32

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 507

gugcaaaaca uaccagaucu guguguuggu uu 32

<210> 508

<211> 52

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 508

ccucugcagc acacacacaa aucuggggag gugaagaaua cgaccaccug cg 52

<210> 509

<211> 44

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 509

ugcaaaacau accagaucug uguguugguu uuuugugugu uaac 44

<210> 510

<211> 40

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 510

ctgcagctcc tcacctacgc cacacacaca aatctgggga 40

<210> 511

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 511

ctgcaggcac acacacaaat ctgggga 27

<210> 512

<211> 28

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 512

ctgcagggca cacacacaaa tctgggga 28

<210> 513

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 513

ugcagggcac acacacaaau cugggg 26

<210> 514

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 514

accagaucug uguguug 17

<210> 515

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 515

cugcaggcac acacacaaau cugggg 26

<210> 516

<211> 38

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 516

auaccagauc uguguguugg uuuuuugugu guuaacgg 38

<210> 517

<211> 62

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 517

cugcagcucc ucaccuacgc cacacacaca aaucugggga ggugaagaau acgaccaccu 60

gc 62

<210> 518

<211> 45

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 518

gcaaaacaua ccagaucugu guguugguuu uuuguguguu aacgg 45

<210> 519

<211> 52

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 519

ccucugcagc acacacacaa aucuggggag gugaagaaua cgaccaccug cg 52

<210> 520

<211> 44

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 520

ugcaaaacau accagaucug uguguugguu uuuugugugu uaac 44

<210> 521

<211> 126

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<220>

<221> modified_base

<222> (121)..(123)

<223> a, c, t, g, unknown or other

<400> 521

gtgagtctat gccagctacc attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat 60

tctgagtcca agctaggccc ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag 120

nnnaca 126

<210> 522

<211> 52

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 522

caacaactac taacataaca gtgttcacta gcaacctcaa acagacacca tg 52

<210> 523

<211> 55

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 523

caacaactcc tgtgcttata acagtgttca ctagcaacct caaacagaca ccatg 55

<210> 524

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 524

caacaacata accctgttca ctagcaacct caaacagaca ccatg 45

<210> 525

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 525

caacaacata aaagtgttca ctagcaacct caaacagaca ccatg 45

<210> 526

<211> 73

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<220>

<221> modified_base

<222> (31)..(33)

<223> a, c, t, g, unknown or other

<400> 526

gcggccgcct taattaacag tgttcactag nnncaacaac aacaacaaca acaacaacaa 60

caacgacacc atg 73

<210> 527

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 527

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 528

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 528

gcggccgcca taacagtgtt cactagtagc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 529

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 529

gcggccgcca taacagtgtt cactagaacc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 530

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 530

gcggccgcca taacagtgtt cactagaccc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 531

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 531

gcggccgcca taacagtgtt cactagcccc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 532

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 532

gcggccgcca taacagtgtt cactagagcc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 533

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 533

gcggccgcca taacagtgtt cactagcctc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 534

<211> 58

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 534

gcggccgcca taacagtgtt cactagtctc ccccagacca tctaccaccg acaccatg 58

<210> 535

<211> 120

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 535

gtgagtctat gccagctacc attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat 60

tctgagtcca agctaggccc ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag 120

<210> 536

<211> 140

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 536

gtgagtctat gttgctaata gcagctacaa tccagctacc attctgcttt tattttatgg 60

ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc ttttgctaat catcttcata 120

cctcttatct tcctctgcag 140

<210> 537

<211> 160

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 537

gtgagtctat gctgatgtaa gaggtttcat attgctaata gcagctacaa tccagctacc 60

attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc 120

ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag 160

<210> 538

<211> 180

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 538

gtgagtctat gtttctgcat ataaattgta actgatgtaa gaggtttcat attgctaata 60

gcagctacaa tccagctacc attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat 120

tctgagtcca agctaggccc ttttgctaat catcttcata cctcttatct tcctctgcag 180

<210> 539

<211> 200

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 539

gtgagtctat gaatatttct gcatataaat atttctgcat ataaattgta actgatgtaa 60

gaggtttcat attgctaata gcagctacaa tccagctacc attctgcttt tattttatgg 120

ttgggataag gctggattat tctgagtcca agctaggccc ttttgctaat catcttcata 180

cctcttatct tcctctgcag 200

<210> 540

<211> 124

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 540

gtgagtctat gccagctacc attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat 60

tctgagtcca agctaggccc ttttgctaat catcttcata ctaacctctt atcttcctct 120

gcag 124

<210> 541

<211> 120

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 541

gtgagtctat gccagctacc attctgcttt tattttatgg ttgggataag gctggattat 60

tctgagtcca agctactaac ttttcctgtg cttcttcaga cctcttatct tcctctgcag 120

<210> 542

<211> 86

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 542

gcggccgcca acaacaacaa caacaacaac aacaacaaca acaacaacat aacagtgttc 60

actagcaacc tcaaacagac accatg 86

<210> 543

<211> 248

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 543

cuucauaccu cuuaucuucc ucugcagaug uuccucgaga ucuggggagg ugaagaauac 60

gaccaccuaa uaagauuacc gaaaggcaau cuuauuaaaa cauaccagau cuugagaggg 120

uguuuguggc aaaacauacc agaucgaauu cgaucugggg aggugaagaa uacgaccacc 180

ugcuacaagu accuaauaaa cauuagcgga gaaacauacc acuguguguu gguuuuuugu 240

guguuaac 248

<210> 544

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 544

gcggccgcca taacagtgtt cactagcaac ctcaaacaga caccatg 47

<210> 545

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 545

gcggccgcca ccatgataac agtgttcact agcaacctca aacagacacc atg 53

<210> 546

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 546

gcggccgcca taacagtgtt cactagcaac cccaaacaga caccatg 47

<210> 547

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 547

gcggccgcca ccataacagt gttcactagc aaccccaaac agacaccatg 50

<210> 548

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 548

gcggccgcca ccatgataac agtgttcact agcaacccca aacagacacc atg 53

<210> 549

<211> 53

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 549

gcggccgcca ccacgataac agtgttcact agcaacccca aacagacacc atg 53

<210> 550

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 550

gcggccgcca ccataacagt gttcactagc atccccaaac agacaccatg 50

<210> 551

<211> 50

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 551

gcggccgcca ccataacagt gttcaccagc atccccaaac agacaccatg 50

<210> 552

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 552

gcggccgcca taacagtgtt cactagcatc cccaaacaga caccatg 47

<210> 553

<211> 47

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 553

gcggccgcca taacagtgtt caccagcatc cccaaacaga caccatg 47

<210> 554

<211> 240

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 554

cucuuaucuu ccucugcaga uguuccucga gaucugggga ggugaagaau acgaccaccu 60

aauaagauua ccgaaaggca aucuuauuaa aacauaccag aucuugagag gguguuugug 120

gcaaaacaua ccagaucgaa uucgaucugg ggaggugaag aauacgacca ccugcuacaa 180

guaccuaaua aacauuagcg gagaaacaua ccacugugug uugguuuuuu guguguuaac 240

<210> 555

<211> 245

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полинуклеотид

<400> 555

cacaaucugg ggaggugaag aauacgacca ccugcguuuu auacuuccac gagaucuggg 60

gaggugaaga auacgaccac cuaauaagau ugccgaaagg caaucuuauu aaaacauacc 120

agaucuugug aggguguuug uggcaaaaca uaccagaucg aauucgaucu ggggagguga 180

agaauacgac caccugcuac aaguaccuaa auaaaguaua aagugcaaaa cauaccagau 240

cugug 245

<210> 556

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

олигонуклеотид

<400> 556

uggggaggug 10

<---

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к регуляции экспрессии генов. Изобретение раскрывает генетическую конструкцию, содержащую полиА аптамерный полинуклеотид, который содержит в направлении от 5' к 3': a) 5'-донорный сайт сплайсинга; b) сконструированный интрон; c) первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга; d) переключатель полиА, содержащий два или более лиганд-связывающих аптамеров с одним или более лиганд-связывающими карманами, и по меньшей мере один сигнал расщепления полиА в нем; e) второй 3'-акцепторный сайт сплайсинга; и f) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид. Конструкция согласно настоящему изобретению способна в значительной степени усиливать экспрессию гена-мишени и может быть применима при продукции белковых препаратов. 5 н. и 40 з.п. ф-лы, 23 ил., 1 табл., 15 пр.

1. Система для увеличения экспрессии генов, содержащая полиА аптамерный полинуклеотид, который содержит в направлении от 5' к 3':

a) 5'-донорный сайт сплайсинга;

b) сконструированный интрон;

c) первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга;

d) переключатель полиА, содержащий два или более лиганд-связывающих аптамеров с одним или более лиганд-связывающими карманами, и по меньшей мере один сигнал расщепления полиА в нем;

e) второй 3'-акцепторный сайт сплайсинга; и

f) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид.

2. Система по п. 1, в которой переключатель полиА содержит два лиганд-связывающих аптамера.

3. Система по п. 1, в которой переключатель полиА содержит три лиганд-связывающих аптамера.

4. Система по любому из пп. 1-3, в которой переключатель полиА содержит трехстороннее соединение.

5. Система по п. 4, в которой трехстороннее соединение содержит соединение первого, второго и третьего двухцепочечных стеблей РНК; и/или по меньшей мере один одноцепочечный участок.

6. Система по п. 5, в которой

первый двухцепочечный стебель РНК не содержит лиганд-связывающий аптамер; или

каждый из первого, второго и третьего двухцепочечного стебля РНК содержит лиганд-связывающий аптамер.

7. Система по п. 5, в которой трехстороннее соединение содержит первый, второй и третий одноцепочечный участок.

8. Система по п. 7, в которой

первый одноцепочечный участок расположен между первым двухцепочечным стеблем РНК и вторым двухцепочечным стеблем РНК; и/или

второй одноцепочечный участок расположен между вторым двухцепочечным стеблем РНК и третьим двухцепочечным стеблем РНК; и/или

третий одноцепочечный участок расположен между третьим двухцепочечным стеблем РНК и первым двухцепочечным стеблем РНК первого аптамера.

9. Система по любому из пп.1-8, в которой

первый аптамер и второй аптамер в ориентации 5'-3' находятся в одной и той же ориентации; и/или

третий аптамер в ориентации 5'-3' находится в противоположной ориентации относительно первого и второго аптамеров.

10. Система по любому из пп. 4-9, в которой один или более нуклеотидов сигнала расщепления полиА находятся в пределах трехстороннего соединения, третьего двухцепочечного стебля РНК, третьего одноцепочечного участка или первого двухцепочечного стебля РНК.

11. Система по п. 10, в которой

третий одноцепочечный участок содержит первые четыре основания сигнала расщепления полиА; или

первый двухцепочечный стебель РНК содержит последние два основания сигнала расщепления полиА; или

первый двухцепочечный стебель РНК содержит весь сигнал расщепления полиА.

12. Система по п. 1, в которой переключатель полиА содержит первый аптамер, второй аптамер, третий аптамер и трехстороннее соединение, и длина двухцепочечного стебля РНК между связывающим карманом третьего аптамера и трехсторонним соединением составляет от 10 до 15 пар оснований.

13. Система по п. 8, в которой

первый одноцепочечный участок содержит по меньшей мере одно основание, выбранное из C и A; и/или

второй одноцепочечный участок содержит по меньшей мере одно основание, выбранное из C и A.

14. Система по п. 4, в которой трехстороннее соединение содержит соединение первого двухцепочечного стебля РНК, второго двухцепочечного стебля РНК и третьего двухцепочечного стебля РНК, и при этом

последовательность первого двухцепочечного стебля РНК представляет собой SEQ ID NO: 4; и/или

последовательность первого двухцепочечного стебля РНК представляет собой SEQ ID NO: 5; и/или

последовательность второго двухцепочечного стебля РНК представляет собой SEQ ID NO: 3; и/или

последовательность третьего двухцепочечного стебля РНК представляет собой SEQ ID NO: 2.

15. Система по любому из пп. 1-14, в которой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая экспрессируемый полипептид, дополнительно содержит 5'UTR.

16. Система по п. 15, в которой

(а) 5'UTR дополнительно содержит:

повтор CAA; или

один или более 3'-акцепторных сайтов сплайсинга; или

(б) 5'UTR имеет последовательность SEQ ID NO: 48.

17. Система по любому из пп. 1-16, дополнительно содержащая:

богатую G-U область на 5’-конце последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, и сигнал расщепления полиА на 3’-конце; или

богатую G область на 5’-конце последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, и богатую G-U область на 3’-конце.

18. Система по любому из пп. 15-17, в которой 5'UTR дополнительно содержит один или более 3'-акцепторных сайтов сплайсинга, и за 3'-акцепторным сайтом сплайсинга следует триплетная последовательность нуклеиновой кислоты, которая модулирует силу альтернативного сплайсинга.

19. Система по п. 18, в которой триплет нуклеиновой кислоты расположен на 3'-конце относительно второго 3'-акцепторного сайта в 5'UTR и имеет последовательность, выбранную из следующих: TAG, TCT, TTC, TTG, TGA, TGC, TCC, ACA, AAC, ACC, AGC, AGG, CCT и CCC.

20. Система по любому из пп. 17-19, в которой богатая G область содержит последовательность 4 MAZ.

21. Система по любому из пп. 1-20, в которой

сконструированный интрон имеет последовательность длиной от 100 до 200 оснований; и/или

сконструированный интрон имеет последовательность SEQ ID NO: 1; и/или

за сконструированным интроном следует триплетная последовательность нуклеиновой кислоты, которая модулирует силу сплайсинга интрона.

22. Система по п. 21, в которой триплетная последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность, выбранную из: TTT, TGA, TCT, TAC, CAC и CAT.

23. Система по любому из пп. 1-22, в которой система содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6-56.

24. Система по п. 23, в которой система содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 13, 14, 28, 32, 33, 36, 38, 44, 46 и 50-56.

25. Вектор экспрессии, содержащий систему по любому из пп. 1-24.

26. Вектор по п. 25, отличающийся тем, что вектор представляет собой вирусный вектор.

27. Вектор по п. 26, отличающийся тем, что вектор выбран из аденовирусного вектора, лентивирусного вектора, аденоассоциированного вирусного вектора, полиовирусного вектора и ретровирусного вектора.

28. Способ увеличения экспрессии генного продукта в клетке, включающий введение в клетку системы, содержащей в направлении от 5' к 3':

a) 5'-донорный сайт сплайсинга

b) сконструированный интрон

c) первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга

d) переключатель полиА, содержащий два или более лиганд-связывающих аптамеров с одним или более лиганд-связывающими карманами, и по меньшей мере один сигнал расщепления полиА в нем;

e) второй 3'-акцепторный сайт сплайсинга; и

f) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид, который кодирует указанный генный продукт.

29. Способ по п. 28, в котором генный продукт является экзогенным для клетки.

30. Способ по п. 28, в котором генный продукт является эндогенным для клетки.

31. Способ по любому из пп. 27-29, в котором система содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую генный продукт непосредственно на 3'-конце акцепторного сайта сплайсинга e).

32. Способ по п. 30 или п.31, в котором способ не включает введение лиганда в клетку для ингибирования экспрессии эндогенного генного продукта.

33. Способ по любому из пп. 28-32, в котором система дополнительно содержит промотор на 5'-конце донорного сайта сплайсинга a).

34. Способ по п. 33, в котором промотор представляет собой промотор ЦМВ.

35. Способ по любому из пп.28-34, в котором способ осуществляют в одной или более клетках индивида, лигандом является глюкоза, индивид страдает от диабета, преддиабета или осложнений диабета, и/или экспрессируемым полинуклеотидом является инсулин.

36. Способ по любому из пп.28-34, в котором способ осуществляют в одной или более клетках индивида, лиганд представляет собой генный продукт биомаркера рака, а экспрессируемый полинуклеотид представляет собой суицидальный ген.

37. Способ по любому из пп.28-34, в котором способ осуществляют в организме индивида, экспрессируемый полинуклеотид представляет собой репортерный ген, а расположение и/или интенсивность экспрессии репортерного гена предоставляет информацию о пространственном распределении, временных колебаниях или и том, и другом, лиганда в одной или более клетках индивида.

38. Способ по любому из пп.28-34, в котором способ осуществляют в организме индивида, в ткани или клетке, в котором экспрессируемый полинуклеотид кодирует детектируемый генный продукт, и соответствующие индивид, ткань или клетку подвергают визуализации.

39. Способ по любому из пп. 28-34, в котором систему вводят индивиду, содержащему указанную клетку, перед терапией, во время терапии и/или после терапии.

40. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полиА аптамерный полинуклеотид, содержащая в направлении от 5' к 3':

a) 5'-донорный сайт сплайсинга;

b) сконструированный интрон;

c) первый 3'-акцепторный сайт сплайсинга;

d) переключатель полиА, содержащий два или более лиганд-связывающих аптамеров с одним или более лиганд-связывающими карманами, и по меньшей мере один сигнал расщепления полиА в нем;

e) второй 3'-акцепторный сайт сплайсинга; и

f) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую экспрессируемый полипептид.

41. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 40, где нуклеиновая кислота представляет собой ДНК.

42. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 40, где нуклеиновая кислота представляет собой РНК.

43. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп. 40-42.

44. Вектор по п. 43, где указанный вектор представляет собой вирусный вектор.

45. Вектор по п. 43 или п.44, где указанный вектор выбран из аденовирусного вектора, лентивирусного вектора, аденоассоциированного вирусного вектора, полиовирусного вектора и ретровирусного вектора.