Комбинированное инсектоакарицидное средство для защиты мелких домашних животных от эктопаразитов Российский патент 2023 года по МПК A01N43/58 A01N25/02 A61P33/14 

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для защиты мелких домашних животных, в частности собак и кошек, от эктопаразитов.

Предлагается новое инсектоакарицидное средство в форме спот-он (капли на холку), содержащее комбинацию из, по меньшей мере, двух активных соединений, тебуфенпирада и этофенпрокса, представленных в эффективных концентрациях, и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. Новое инсектоакарицидное средство отличается широким спектром действия (клещи, блохи, власоеды, вши, мухи, комары и др.), высокой терапевтической активностью в отношении клещей, определяемой наличием нокдаун-эффекта, быстрым началом проявления и значительной продолжительностью акарицидного действия; обладает овицидным и ларвицидным эффектами, не связанными с дополнительным включением в состав препарата ювенильных гормонов, является безопасным для организма животного.

Введение

Домашние питомцы, среди которых особое место занимают собаки и кошки, делают жизнь своего хозяина ярче и лучше и воспринимаются как настоящие члены семьи, в связи с чем владельцы животных уделяют их здоровью и профилактике болезней пристальное внимание.

Постоянной проблемой для всех хозяев домашних животных является борьба с эктопаразитами.

Кошки и собаки часто бывают поражены одним или большим количеством видов паразитов, в число которых входят:

- блохи (Ctenocephalides spp., в частности, Ctenocephalides felis, Ctenocephalides canis),

- иксодовые клещи (Rhipicephalus spp., Ixodes spp., Dermacentor spp. и др.),

- прочие клещи (Demodex spp., Sarcoptes spp., Otodectes spp., и др.),

- вши (F. subrostratus, Lignonathus spp.и др.),

- власоеды (Trichodectes canis).

Кроме того, источником заражений и болезненных состояний животных, могут служить некоторые кровососущие насекомые:

- комары (Aedes spp., Culux spp., Anopheles spp. и др.) и

- мухи (Hematobia spp., Musca spp., Stomoxys spp., Dematobia spp., Coclyomia spp. и др.).

Клещи являются переносчиками патогенных факторов, способных затрагивать как животное, так и человека. Среди основных заболеваний, которые необходимо предотвратить, особо следует отметить боррелиоз, вызываемый Borellia burgdorferi, пироплазмоз, вызываемый Babesia sp., и реккетсиозы. Помимо этого, токсины, которые выделяют паразиты, вызывают у животных повреждение кожи, отеки и воспаление. Иногда заболевания, вызванные клещами, могут привести к летальному исходу.

Блохи, паразитирующие на собаках и кошках, распространены повсеместно. Животные, зараженные блохами, пребывают в состоянии стресса, так как укусы паразитов вызывают сильный кожный зуд. Расчесывание животными зудящих участков кожи приводит к появлению на этих местах ссадин и царапин, открывающих "ворота" инфекции. Кроме того, блохи являются переносчиками гельминта - Dipylidium caninum, который паразитирует и у животных, и у человека.

Вши питаются кровью и лимфой животных. Пораженная вшами кошка или собака чешется, нервничает, обычно у животного ухудшается качество шерстяного покрова, появляется перхоть и корки, возникают аллергические дерматиты. При большом количестве насекомых у слабых, больных, пожилых животных и детенышей может развиться анемия.

Комары, кроме раздражающего действия на животного, могут заразить питомца сердечными гельминтами - дирофиляриями; мухи, например, слепни и жигалки, кусают кошек и собак преимущественно на свободных от шерсти участках кожи (уши, нос), в результате чего, образуются болезненные раны, кожа воспаляется, чешется, выделяется сукровица, что еще больше привлекает мух, которые могут переносить такие опасные заболевания, как туляремия, сибирская язва, а также откладывают яйца на кожу и в рану, где затем развиваются личинки с образованием миаз.

Несмотря на то, что к настоящему времени на ветеринарном рынке представлено достаточно большое количество инсектоакарицидных средств для мелких домашних животных (МДЖ), борьба с эктопаразитами кошек и собак, по-прежнему, остается серьезной проблемой для их владельцев. Это в значительной мере связано с тем, что к настоящему времени многочисленные популяции клещей, а также блох и других эктопаразитов МДЖ выработали устойчивость к широкому кругу пестицидов, относящихся к достаточно давно применяемым для защиты животных классам, таким как фосфорорганические соединения, пиретроиды, фенилпиразолы и т.п.(https://luposan.com.ua/naibolee-polnyy-polnyy-obzor-protivokleshchevykh-sredstv-dlya-sobak.-chast-1-opisanie-insektoakaritsidov/), результатом чего является высокая вероятность пониженной активности этих ДВ в содержащих их препаратах.

Таким образом, создание новых высокоэффективных безопасных средств для защиты кошек и собак от эктопаразитов продолжает оставаться актуальной и практически важной задачей.

Уровень техники

В настоящее время в ветеринарии используется большое количество препаратов, одновременно проявляющих как инсектицидное, так и акарицидное действие. Как показала практика, наилучшие результаты в одновременной защите домашних животных от большого числа паразитирующих на них видов клещей и насекомых достигаются при применении препаратов комбинированного типа, в состав которых входят, по меньшей мере, два активных вещества, выгодно дополняющих и/или усиливающих свойства друг друга. В связи с этим, данный тип инсектоакарицидных средств продолжает представлять значительный интерес для ветеринарного сообщества.

В настоящее время многие отечественные и зарубежные фармацевтические компании ветеринарного профиля активно занимаются разработкой новых комбинированных составов для МДЖ, о чем свидетельствует достаточно большое число заявок и патентов, относящихся к данной области исследований. Анализ патентных документов, опубликованных за последнее десятилетие, показывает, что предлагаемые инсектоакарицидные композиции могут быть условно поделены на две основные группы.

Первой группой представленных к защите или защищенных патентами инсектоакарицидных составов для животных являются в основном разработки зарубежных компаний, где описываемые композиции в качестве основного компонента содержат новые группы соединений со свойствами пестицидов, объединяемые общей структурной формулой, которые при необходимости (обычно с целью повышения того или иного вида активности или расширения спектра действия) предлагается комбинировать с одним или несколькими представителями хорошо известных и широко применяемых сегодня классов пестицидов: пиретроидов (перметрин, циперметрин, этофенпрокс и др.), фенилпиразолов (фипронил, пирипрол и др.), регуляторов роста насекомых (S-метапрен, пирипроксифен), неоникотиноидов (нитенпирам, имидаклоприд, ацетамиприд, тиаметоксам и др.), спиносинов (спиносад, спинотерам и др.) (RU 2497815 С2, 10.11.2013; RU 2633061 С2, 11.10.2017; WO 2014086848 А1, 12.06.2014; ЕА 019955 В1, 30.07.2014 и др.)

Вторая группа запатентованных или предлагаемых к защите составов включает новые, оригинальные комбинации соединений, относящихся к хорошо известным классам пестицидов, во многих случаях не только дополняющих, но и усиливающих полезные свойства друг друга. В качестве примеров патентных документов, раскрывающих композиции этого типа, можно привести US 11134685, 05.10.2021 (фипронил+динотефуран); ЕР 2967039 А1, 20.01.2016 (имидаклоприд+перметрин); JP 2015-221776 А, 10.12.2015 (ацетамиприд+этофенпрокс) и др.

Отличительной особенностью всех составов второй группы является то, что они во многих случаях ограничиваются минимальным при комбинировании числом активных компонентов - двумя. С одной стороны, этот факт может рассматриваться как положительная характеристика композиции, поскольку создание многокомпонентных комбинаций ДВ не только приводит к удорожанию препарата, но и часто создает значительные трудности при его разработке и производстве в связи с тем, что включаемые в состав активные компоненты обычно обладают различными физико-химическими свойствами и при работе с ними требуются различные растворители, условия растворения и стабилизации и т.д., которые должны быть затем корректно совмещены в конечном продукте. С другой стороны, разработка 2х-компонентных составов существенно осложняется необходимостью выбора таких ДВ, которые обеспечивали бы препарату максимальное количество требуемых положительных характеристик.

Сегодня на ветеринарном рынке представлено большое количество коммерческих инсектоакарицидных препаратов для МДЖ, содержащих в качестве активного начала комбинацию, по меньшей мере, из двух действующих веществ, принадлежащих к различным классам пестицидов.

В контексте настоящего изобретения, предлагающего средство на основе комбинации тебуфенпирада и этофенпрокса, особый интерес представляют ветеринарные композиции, которые могут рассматриваться как аналоги предлагаемого средства.

В связи с этим, следует отметить, что тебуфенпирад (ТП), который в рамках настоящего изобретения является основным действующим веществом комбинации, представляет собой производное пиразола (пиразол-карбоксамид), в середине 90-х выпущенное на рынок для целей защиты зерновых культур и других растений от хищничества вредителей растений. ТП и сегодня широко используется в сельском хозяйстве, при этом особенно успешно - в борьбе с растительноядными клещами, паразитирующими на фруктовых деревьях, виноградной лозе, хмеле, дыне, хлопчатнике, многих овощных и декоративных культурах (http://www.cnshb.ru/akdil/00S4/base/RT/000843.shtm).

Однако до настоящего времени он не применялся в качестве ДВ коммерческих инсектоакарицидных препаратов для домашних животных. Более того, ни научно-техническая, ни патентная документация не содержит информации о проведении и результатах исследований терапевтической эффективности данного соединения на каком-либо из видов млекопитающих.

В отличие от тебуфенпирада, пиретроид этофенпрокс достаточно широко применяется в ветеринарной практике и входит в состав многих известных из уровня техники ИА- композиций, где он обычно представлен в комбинации с другими активными соединениями.

Этофенпрокс относится к 3 поколению пиретроидов, для большинства представителей которого характерны в целом более высокие, чем у предшественников из 1 и 2-го поколения уровни инсектицидной и особенно акарицидной активности. Несмотря на то, что в рамках данной группы пиретроидов этофенпрокс не относится к числу наиболее активных соединений, особенности его химической структуры (отсутствие в ней сложноэфирной группировки) определяют такое его свойство, как минимальный уровень токсичности для кошачьих, которым другие пиретроиды применяться не могут (https://dic.academic.ru/dic.nsf/ruwiki/203969), а также упрощение процесса синтеза и, соответственно, снижение стоимости продукта. Кроме того, в результате длительного применения в хозяйстве синтетических пиретроидов к большинству из них у паразитов, в частности, у многих видов клещей, развилась устойчивость, однако достоверных данных о формировании у клещей, паразитирующих на собаках и кошках, кросс-резистентности к ЭП в доступных источниках информации не приводится (Наиболее полный обзор противоклещевых средств для собак. Часть 1: описание инсектоакарицидов. https://bel-il.livejournal. сот/631, html).

Наиболее простыми по составу являются комбинации этофенпрокса с ювеноидами, применяемыми для усиления овицидного и ларвицидного эффектов данного пиретроида, а также композиции, содержащие в качестве ДВ этофенпрокс и неоникотиноид, усиливающий действие препарата в отношении блох. К числу известных коммерческих инсектоакарицидных препаратов, включающих указанные комбинации ЭП, относится, например, препарат Farnam Company, INC., (США) Adams Flea & Tick Spot для кошек, содержащий этофенпрокс в концентрации 40% и S-метопрен в концентрации 3,6% (https://www.drugs.com/vet/adams-flea-tick-spot-on-for-cats-under-5-lbs.html), а также инсектоакарицидное средство Неотерика Протекто 4 (Neoterica GmbH), которое в качестве действующего начала включает этофенпрокс, имидаклоприд, и ювеноид пирипроксифен. Препарат применяют как собакам, так и кошкам для борьбы с блохами, вшами и власоедами; для защиты от поражения иксодовыми и другими видами клещей, а также в целях защиты животных от нападения двукрылых кровососущих насекомых. Основным недостатком препарата является низкая эффективность действия в отношении иксодовых клещей, закрепившихся на теле животного, поскольку обработка в этих случаях предполагает нанесение препарата непосредственно на паразита и место его прикрепления к коже, а при необходимости- и последующее отделение его пинцетом, что осложняет борьбу с клещами при массовом нападении на животного. Кроме того, срок противоклещевого эффекта препарата применительно к иксодовым клещам составляет не более 30 суток (примерно 4 недели) (Инструкция по применению. https://veterinarka.ru/vetmedicaments/neoterika-protekto-4.htm)

Вопрос о повышении акарицидного эффекта комбинированного средства на основе этофенпрокса в отношении иксодовых клещей, находит свое решение в инсектоакарицидных средствах для МДЖ благодаря комбинированию пиретроида с инсектоакарицидными агентами, обладающими выраженным противоклещевым эффектом.

Примером такого подхода является препарат Рольф Клуб 3D (капли для кошек) (организация-разработчик: Neoterica GmbH, Германия; владелец регистрационного удостоверения - НПФ Экопром, Россия). Препарат оказывает контактное действие на половозрелых и неполовозрелых блох, на вшей, власоедов и клещей основных видов; обладает выраженным нокдаун-эффектом в отношении клещей и репеллентным действием на кровососущих летающих насекомых (Инструкция по применению. https://veterinarka.ru/vetmedicaments/rolf-klub-3d-kapli-dlya-koshek.html).

Модификация капель Рольф Клуб 3D для кошек, которая может рассматриваться как наиболее близкий аналог (прототип) настоящего изобретения, содержит в качестве действующих веществ этофенпрокс - 15% (150 мг/мл), фипронил - 9,8%) (98 мг/мл) и пирипроксифен - 2% (20 мг/мл), а также вспомогательные вещества.

Недостатком данного препарата является то, что он, в целом обладая высокой акарицидной активностью, не обеспечивает быстрого развития ее проявления (максимум активности в отношении иксодовых достигается только через 48 ч.), а также достаточно продолжительного сохранения противоклещевого эффекта, срок которого составляет не более 28-30 дней (около 4-х недель). Кроме того, необходимая эффективность действия на преимагинальные формы обеспечивается дополнительным введением в состав третьего компонента с овицидным и ларвицидным эффектом -пирипроксифена. (Инструкция по применению. https://veterinarka.ru/vetmedicaments/rolf-klub-3d-kapli-dlya-koshek.html;)

С учетом результатов анализа уровня техники, задачей настоящего изобретения стало создание нового, эффективного, безопасного и простого по составу и способу получения комбинированного препарата для защиты МДЖ от эктопаразитов, лишенного недостатков прототипа и в максимальной степени отвечающего высоким требованиям, предъявляемым к современным инсектоакарицидным средствам для животных.

Раскрытие изобретения

Решение поставленной задачи было достигнуто за счет разработки и применения новой комбинации ДВ, включающей минимальное количество активных ингредиентов, свойства и взаимодействие которых, однако, таковы, что обеспечивают максимально возможное количество эффектов, которыми должен обладать современный инсектоакарицидный препарат. Предлагаемое изобретение относится к комбинированному инсектоакарицидному средству для защиты МДЖ от эктопаразитов, которое представлено в удобной для применения форме спот-он и включает комбинацию, по меньшей мере, из двух ДВ, тебуфенпирада и этофенпрокса, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

Информация, относящаяся к вопросу о возможности рассмотрения тебуфенпирада в качестве кандидата на использование в ИА-составе для млекопитающих, ограничивается косвенными данными и носит декларативный характер.

Так, в уровне техники нами выявлены патенты-аналоги, выданные на основании международной заявки WO 2008/154466 от 18.12.2008, которыми предоставляется правовая охрана способу защиты млекопитающих от заражения эктопаразитами с применением пиримидифена (RU 2478286 С2, 10.04.2013; US 874787, 10.06.2014) и толфенпирада (4-хлор-3-этил-1-метил-К-[4-(п-толилокси)бензил)пиразол-5-карбоксамида) (RU 2596494 С2, 10.09.2016; ЕР 2166855, 25.04.2018), относящихся к группе пиразол-карбоксамидов. При этом в описании к указанной заявке приводится общий эксперимент по определению in vitro способности этих, а также ряда других представителей данного класса, включая тебуфенпирад, подавлять развитие личинок собачьего клеща А. americanum и яиц кошачьей блохи Ctenocephalides felis, в котором у пиразолкарбоксамидов была выявлена выраженная в разной степени ларвицидная активность. Однако следует отметить, что опыт с ТП, описанный в данной заявке, во-первых, проводился только в системе in vitro и, во-вторых - только на преимагинальных стадиях (яйцах блох и личинках клещей), а следовательно, не может служить веским основанием для вывода о достаточном уровне овицидной и ларвицидной эффективности данного соединения применительно к целевым животным (собакам, кошкам), а тем более, к проявлению такого эффекта у животных в отношении взрослых особей паразитов. И главное, что до проведения нами всестороннего исследования данного вещества, ни в вышеуказанных патентах, ни в других доступных литературных источниках каких-либо сведений о проведении испытаний тебуфенпирада на целевых животных, не позволяет сделать однозначного заключения о возможности применения данного соединения без ущерба для их здоровья, т.е. ответить на вопрос о безопасности ветеривГарного препарата на основе этого соединения.

Авторами настоящего изобретения была выполнена предварительная серия экспериментов, в рамках которой на монопрепарате ТП с концентрацией 75 мг/мл, примененном в дозе 0,1 мл/кг, были исследованы представляющие интерес свойства этого соединения, а именно наличие и скорость развития акарицидного действия на взрослые формы иксодовых клещей при обработке млекопитающего. Помимо того, что на кроликах было подтверждено наличие указанной активности и достаточно быстрое развитие ее проявления (24 ч.), впервые было показано, что ТП обладает явно выраженным нокдаун-эффектом в отношении иксодовых клещей, паразитирующих на животных.

Основываясь на вышеизложенной информации и предположениях, освещенных в предшествующем уровне техники, а также на результатах предварительных экспериментов по исследованию характеристик активности монопрепаратов ТП, авторы изобретения сочли целесообразным при разработке нового инсектоакарицидного средства использовать комбинацию ДВ, состоящую из тебуфенпирада и этофенпрокса, от объединения которых можно было ожидать, по меньшей мере, суммирования как известных, так и выявленных авторами, положительных эффектов для каждого из двух соединений в отдельности.

Как показали последующие всесторонние испытания различных составов, полученных на основе комбинации ТП+ЭП, проведенные авторами как in vitro, так и на кроликах, кошках и собаках (см. раздел Осуществление изобретения), в результате разработки и реализации настоящего изобретения получено новое инсектоакарицидное средство, которое обладает высокой терапевтической эффективностью в отношении широкого круга взрослых клещей и насекомых (блохи, вши, власоеды и др.), паразитирующих на МДЖ, и их преимагинальных форм; нокдаун-эффектом в отношении клещей и длительным сроком защиты от них кошек и собак. При этом состав по изобретению характеризуется более быстрым развитием акарицидного действия (24 ч.) и существенно большей его продолжительностью (не менее 6 недель) в сравнении с прототипом, исключает необходимость включения дополнительного (третьего) агента, применяемого в прототипе для усиления действия на преимагинальные формы паразитов, а также обладает достаточной эффективностью, обеспечивающей его успешное применение не только кошкам, но и собакам (технические результаты).

То, что предложенная комбинация ДВ состоит всего из двух компонентов, удешевляет препарат и упрощает его производство, но, при этом, свойства подобранных для комбинирования ингредиентов обеспечивает ему максимально возможную совокупность желательных для современного ИА-препарата качеств. Вместе с тем, при необходимости дополнительно усилить тот или иной конкретный количественный показатель предлагаемой комбинации в состав может быть включен дополнительный активный компонент или компоненты, обладающие соответствующей активностью, например, такие как неоникотиноиды или спиносины, обладающие скородействием на блох. Таким образом, композиция по изобретению может служить как самостоятельным инсектоакарицидным средством, так и базовой комбинацией для создания многокомпонентных препаратов на ее основе.

Осуществление изобретения.

Изобретение проиллюстрировано следующими примерами, которые дополнительно раскрывают изобретение, но не предназначены для ограничения объема и не должны толковаться как такое ограничение.

Практически разработка нового инсектоакарицидного препарата включала следующие этапы:

I) получение комбинаций по изобретению.

II) определение активности и нокдаун-эффекта в опытах in vitro

III) исследование инсектоакарицидного действия и нокдаун-эффекта комбинации ТП+ЭП на кроликах;

IV) титрация эффективных доз препарата на целевых животных;

V) клинические испытания эффективности препарата на целевых животных (кошках и собаках).

I. Получение комбинаций по изобретению.

Пример 1. Методика приготовления составов.

В химический стакан заданного объема загружали рассчитанное количество бензилового или изопропилового спирта или их смесь и моноэтилового эфира диэтиленгликоля (МЭД), перемешивали смесь на магнитной мешалке до полного растворения (примерно в течение 1 часа), затем к полученной смеси добавляли необходимые для получения нужной концентрации навески тебуфенпирада и этофенпрокса (в некоторых вариантах воплощения на этой стадии также добавляли навеску неоникотиноида). Полученную смесь нагревали примерно до 30±5° и перемешивали до полного растворения сухих веществ. Затем в прозрачный раствор вносили расчетное количество поливинилпирролидона К30 (ПВП-30) и продолжали перемешивание до получения прозрачной маслянистой жидкости. При последующем хранении в полученном жидком составе помутнения или выпадения осадка не наблюдалось. Стабильность каждого из ДВ в испытуемых составах (в присутствии всех использованных вспомогательных соединений) оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Исследование показало, что концентрации активных веществ в композиции были стабильны вплоть до 24 месяцев.

Количество вспомогательных компонентов может варьироваться в указанных в таблице 1 пределах, в зависимости от количества используемого в составе ДВ.

II. Изучение активности и нокдаун-эффекта в опытах in vitro.

Пример 2. Определение действия препарата на преимагиналъные стадии развития клещей in vitro.

Изучение овицидных свойств комбинированного средства проводили на яйцах клещей Sarcoptes canis, Otodectes cynotis и Ixodes spp. Для этого свежие кладки яиц клещей (по 40 яиц на каждый вариант) помещали в чашки Петри на фильтровальную бумагу, пропитанную комбинацией ТП+ЭП (100 мг/мл+100 мг/мл)+носитель (опыт) или дистиллированной водой (контроль). Затем чашки Петри помещали в термостат, инкубировали при температуре 27°С и вели наблюдение в течение 10 суток. По истечении указанного срока ни в одном из двух опытных вариантов вылупившихся за этот период личинок обнаружено не было, тогда как в контроле наблюдалось нормальное развитие личинок. Это служило доказательством наличия овицидного действия препарата, обеспечивающего 100%-ную гибель яиц клещей за время наблюдения.

Пример 3. Акарицидная активность комбинированного препарата в отношении клещей различных видов.

В эксперименте использовали взрослых клещей 4-х видов: Ixodes spp., Sarcoptes canis, Otodectes cynotis и Demodex spp. Выживаемость клещей каждого из видов испытывали, применяя комбинацию по изобретению с концентрациями 111+3^150+150 мг/мл (опытный образец); препарат Рольф Клуб 3D (образец сравнения) и дистиллированную воду (контрольный образец). Опыт проводили следующим образом. Фильтровальную бумагу в виде круга диаметром 10 см (на 1 см больше диаметра стандартной чашки Петри) размещали горизонтально на невпитывающей поверхности (стекло, керамическая плитка) и с помощью пипетки равномерно наносили на нее либо исследуемый комбинированный препарат, либо препарат сравнения, либо дистиллированную воду. После испарения испытуемых растворов фильтры помещали на дно чашек Петри так, чтобы края слегка загибались на стенки чашки. Продолжительность контакта клещей, которых брали в количестве 30 штук для каждого из испытуемых растворов, с бумагой составляло 10 мин. Учет результатов опыта проводили через 1 час, 2 часа, 6 часов, 12 часов и 24 часа. К живым относили особей, способных к передвижению, к категории «мертвые» - неподвижных клещей, не реагирующих на тепло руки и дыхание, а также слабоподвижных клещей с резкими нарушениями координации.

Согласно данным, представленным в таблице 4, исследуемое комбинированное средство демонстрирует in vitro высокую и быстро проявляющуюся акарицидную активность в отношении Ixodes spp., Sarcoptes canis и Otodectes cynotis, а также достоверный, но более медленно развивающийся эффект применительно к Demodex spp.

Пример 4. Эффективность комбинированного средства в ингибировании развития яиц блох.

Яйца блох для проведения эксперимента получали по известной методике от инфестированной самцами и самками Ctenocephalides felis белой лабораторной мыши, которую сразу после заражения помещали на черную бумагу, размещенную на дне трехлитрового сосуда (Методы лабораторных исследований и испытаний медико-профилактических дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности: Руководство. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010, 615 с. ). Из листа с отложенными яйцами вырезали фрагмен ты размером 5x5 см, на каждом посчитывали их число, после чего половину образцов обрабатывали 0,2 мл препарата с концентрациями ДВ(ТП+ЭП) 75 мг/мл и 75 мг/мл, соответственно, а другую половину - таким же объемом дистиллированной воды. После этого образцы инкубировали при температуре 27°С в течение 5 суток и посчитывали количество вылупившихся личинок. Эффективность обработки оценивали путем сравнения средней доли (от исходного числа яиц) личинок, вылупившихся в обработанных препаратом яйцекладках, со средней долей личинок, появившихся из контрольных образцов. Согласно результатам проведенного учета средняя доля личинок, выплодившихся в контрольных кладках составляла более 85%, тогда как после обработки инсектоакарицидным составом она не превышала 3%, что свидетельствует о высокой степени подавления данным препаратом процесса развития блох уже на стадии яиц.

Пример 5. Определение наличия нокдаун-эффекта у тебуфенпирада.

Наличие и скорость наступления нокдауна-эффекта изучали следующим образом. Готовили 2 теста: с составом, содержащим только ТП (см. таблицу 3) и контрольным составом, содержащем только вспомогательные вещества. На лентах из хлопчатобумажной ткани размером 10 х 70 см карандашом наносили отметки от 0 до 60 см, причем первую (нулевую) отметку делали на расстоянии 10 см от края. На участки лент, размещенных горизонтально на невпитывающей поверхности (стекло), от отметки 0 до отметки 10 (площадь обрабатываемого участка 100 см²), из пипетки равномерно наносили 1 мл средства (1 состав: ТП(75 мг/мл). Вторую ленту (контрольную) обрабатывали аналогично, используя только вспомогательные вещества из примера 1. Тестируемые ленты развешивали в лаборатории в одинаковых контролируемых условиях температуры, влажности и освещенности. Опыты с подготовленными лентами проводили в день их обработки. Для этого их закрепляли под углом 70 градусов и на 5 см ниже нулевой отметки на них по одному помещали живых клещей (не менее 30 особей), после чего наблюдали за передвижением клещей вверх по ткани, дополнительно стимулируя их пальцем, который наблюдатель держал на расстоянии 0,5 см от гипостома клеща. С помощью секундомера регистрировали время от момента пересечения клещом нижней черты обработанного участка до отпадения его с теста, что считали временем наступления состояния нокдауна (паралича паразита).

Наступление нокдауна у всех паразитов начиналось с дезориентации, когда клещ начинал двигаться в сторону, потом вниз и далее по кругу. Время от момента пересечения паразитами нижней черты участка, обработанного препаратами, до их отпадения составляло для монопрепарата с ТП с концентрацией 75 мг/мл составляло 6 минут, в контрольном составе нокдаун-эффекта не наблюдалось. Отпавших клещей переносили в чистую посуду и помещали в термостат при температуре 30°С и относительной влажности 90%. Проведенная через 1 ч проверка показала, что за это время большинство паразитов из опытных групп погибли, в то время как все клещи контрольной группы оставались живыми. Таким образом, можно заключить, что исследуемый состав с минимальной концентрацией ТП демонстрировал выраженный нокдаун-эффект.

III. Определение основных характеристик акарицидной активности комбинации ТП+ЭП на кроликах.

Животные.

В исследование были включены клинически здоровые белые кролики, массой 1800-2200 г в количестве 10 голов, прошедшие карантин в течение 7 дней. В ходе эксперимента животные содержались в виварии, в отдельных клетках при стандартном освещении и комнатной температуре, получали одинаковый рацион, который был сбалансирован по основным питательным веществам в соответствии с нормами кормления и имели свободный доступ к питьевой воде.

Пример 6. Определение акарицидного действия комбинированного состава.

В данном эксперименте применяли состав, содержащий ТП и ЭП в концентрациях, соответственно, 100 мг/мл и 100 мг/мл. Перед нанесением препарата у кролика на спине или боку выстригали шерсть с получением участка кожи площадью 10 см2, после чего не токсичным для кожи клеем прикрепляли пластиковый цилиндр, в который периодически помещали 30 голодных самок клещей.

Препарат наносили однократно в объеме 0,1 мл на 1 кг массы тела животного (доза каждого ДВ - 10 мг/кг), а подсадку клещей в цилиндр проводили на 0-й, 2-й, 7-й, 14-й, 21-й, 28-й, 35-й дни после обработки препаратом. После каждой подсадки клещей животных помещали на 48 часов в индивидуальные клетки. Учет результатов производился через 24 и 48 часов после каждого нанесения клещей. При этом через 24 часа оценивали жизнеспособность подсаженных клещей с определением их статуса (мертвый, живой, прикрепленный, не прикрепленный, напитавшийся, не напитавшийся), без их удаления. Через 48 часов цилиндр снимали и повторно определяли жизнеспособность клещей с последующим их удалением.

Анализируя полученные данные, представленные в таблице 5, можно сделать вывод о том, что исследуемый состав не только обладает высокой акарицидной активностью, но и демонстрируют быстрое наступление противоклещевого действия (в первые 24 часа), выраженность которого повышается с течением времени и сохраняется в течение не менее 5 недель после однократного нанесения исследуемой комбинации.

Пример 7. Исследование нокдаун-эффекта состава ТП+ЭП.

В данном эксперименте использовали состав, способ его нанесения животным и дозировки, а также сроки подсадки клещей, что и в примере 6. Сразу после обработки кроликов препаратом (0 день) на разные участки тела животного наносили клещей в количестве 10 штук и спустя 30 мин. посчитывали число отпавших с тела животного паразитов. Далее процедуру подсадки и подсчета парализованных и мертвых клещей проводили на 1, 2, 7, 14, 21 28, 35 и 42 дни после обработки.

В результате тестирования было установлено, что заявленный состав обладал нокдаун-эффектом и сохранял эту способность в течение, не менее 4 недель.

IV. Мониторинг эффективных доз на целевых животных

Пример 8. Титрация терапевтически эффективной дозы состава ТП+ЭП для защиты собак от блох.

Исследования проводились на 27 спонтанно инфестированных блохами беспородных собаках, без учета их возраста и пола. При отборе животных учитывалась степень их заражения, которая должна была находиться в интервале от 30 до 50 блох. Животные помещались в индивидуальные клетки и содержались под наблюдением в течение всего исследования при стандартном освещении и комнатной температуре, имели свободный доступ к питьевой воде и получали сухой корм премиум класса.

Перед началом эксперимента собак случайным образом делили на 5 групп: 4 опытных, по 6 животных в каждой, и контрольную, включавшую 3-х животных. Четыре опытные группы собак обрабатывались, соответственно, 4-мя составами ТП+ЭП с различными концентрациями ДВ (мг/мл): 75+75 (группа 1); 150+100(группа 2); 150+225(группа 3) и 150+300 (группа 4). Всех опытных собак перед обработкой взвешивали, поскольку с целью достижения у всех животных одной опытной группы одинаковой дозы ДВ (в мг/кг массы) объем наносимого средства определялся индивидуально для каждой собаки, исходя из расчета 0,1 мл на 1 кг веса животного. Контрольным животным наносился идентичный объем вспомогательного состава. До начала эксперимента и через 24 часа, 48 часов после обработки определяли наличие у животных блох и регистрировали число собак, полностью освободившихся от них.

Результаты исследования представлены в таблице 7.

Как следует из данных, представленных в таблице 7, в опытах на собаках, инфестированных блохами, были получены следующие результаты: наибольшую эффективность при применении в дозе 0,1 мл/кг продемонстрировал состав: ТП+ЭП с концентрациями 150 мг/мл+300 мг/мл.

Пример 9. Титрация терапевтически эффективной дозы состава ТП+ЭП+неоникотиноид (Ацетамиприд) для защиты кошек от блох при спонтанной инфестации.

Исследования проводились на 21 спонтанно инфестированных блохами беспородных кошках, без учета их возраста и пола. При отборе животных учитывалась степень их заражения: инфестированность одного животного составляла от примерно 30 до 40 блох. Животные помещались в индивидуальные клетки и содержались под наблюдением в течение всего исследования при стандартном освещении и комнатной температуре, имели свободный доступ к питьевой воде и получали сухой корм премиум класса. Перед началом эксперимента кошек случайным образом делили на 4 группы: 3 опытных, по 6 животных в каждой, и контрольную, включавшую 3-х животных. Три опытные группы кошек обрабатывались, соответственно, 3-мя составами ТП+ЭП+АА с различными концентрациями ДВ (мг/мл): 150+100+75 (группа 1); 150+150+100 (группа 2); 150+150+150 (группа 3). Контрольным животным (группа 4) наносился идентичный объем вспомогательного состава. До начала эксперимента, а также через 24 часа и 48 часов после обработки определяли наличие у животных блох и регистрировали число кошек, полностью освободившихся от них.

Результаты исследования представлены в таблице 8.

Как следует из данных, представленных в таблице 8, в опытах на кошках, инфестированных блохами, были получены следующие результаты: наибольшую эффективность при применении в дозе 0,1 мл/кг продемонстрировали 2 состава: ТП+ЭП+АА с концентрациями 150 мг/мл+150 мг/мл+100 мг/мл, 150 мг/мл+150 мг/мл+150 мг/мл.

По результатам исследований предпочтительным был признан состав ТП+ЭП+АА, обеспечивающий при нанесении его в объеме 0,1 мл/кг дозы ТП+ЭП+АА (с концентрациями 150 мг/мл+150 мг/мл+100 мг/мл соответственно), начинающий свое действие уже через 30 минут после нанесения и обеспечивающий 100%-ный эффект через 24 часа после обработки.

Пример 10. Титрация терапевтически эффективной дозы состава ТП+ЭП для защиты животных от клещей.

Исследования проводились на 27 спонтанно инфестированных клещами беспородных собаках, без учета их возраста и пола, которых выгуливали дважды в день в местности с высоким риском нападения иксодовых клещей в сезон их максимальной активности.

При отборе животных учитывалась степень их заражения, которая должна была находиться в интервале от 12 до 20 клещей. Животные помещались в индивидуальные клетки и содержались под наблюдением в течение всего исследования при стандартном освещении и комнатной температуре, имели свободный доступ к питьевой воде и получали сухой корм премиум класса.

Перед началом эксперимента собак случайным образом делили на 5 групп: 4 опытных, по 6 животных в каждой, и контрольную, включавшую 3-х животных. Четыре опытные группы собак обрабатывались, соответственно, 4-мя составами ТП+ЭП с различными концентрациями ДВ (мг/мл): 75+75 (группа 1); 150+100(группа 2); 150+150 (группа 3), 150+300 (группа 4). Всех опытных собак перед обработкой взвешивали, поскольку с целью достижения у всех животных одной опытной группы одинаковой дозы ДВ (в мг/кг массы) объем наносимого средства определялся индивидуально для каждой собаки, исходя из расчета 0,1 мл на 1 кг веса животного. Контрольным животным наносился идентичный объем вспомогательного состава. Через 24 часа и 48 часов, а также через 7 и 14 дней после обработки определяли наличие у животных клещей и регистрировали число собак, полностью освободившихся от них.

Результаты исследования представлены в таблице 9.

Как видно из таблицы 9, при титровании эффективных доз ДВ в экспериментах с собаками, зараженными клещами, наилучшие и при этом одинаковые показатели эффективности были получены при использовании в дозе 0,1 мл/кг двух составов: с концентрациями ДВ (ТП+ЭП), равными 150 мг/мл+150 мг/мл и 150 мг/мл+300 мг/мл.

С учетом полученных данных составы с концентрациями ТП+ЭП равными 150 мг/мл+150 мг/мл (а) и 150 мг/мл+300 мг/мл (в) были использованы при проведении всех последующих испытаний нового инсектоакарицидного средства на целевых животных.

V. Клинические исследования на целевых животных (собаках, кошках).

Все клинические исследования были проведены в условиях приюта бездомных животных "Дари добро" (г.Анапа, хутор Воскресенский, ул. Товарная 22) с июля по сентябрь 2022 г. в период наибольшей активности иксодовых клещей, исследование по блохам проводилось с августа по октябрь 2022.

В исследование не включались:

а) животные, больные инфекционными или хроническими незаразными болезнями;

б) животные, инфестированные иксодовыми клещами;

в) животные, свободные от блох;

в) животные моложе 4-х месяцев;

г) беременные и лактирующие самки;

д) животные с повышенной чувствительностью или непереносимостью компонентов композиций в анамнезе.

Условия содержания и уход за животными.

Собак содержали на открытом воздухе в групповых открытых вольерах. Кошек содержали на открытом воздухе в групповых открытых сетчатых вольерах с домиками для сна и отдыха. Кормление животных проводили 2 раза в сутки полнорационными промышленными кормами в соответствии с рекомендациями производителя. Поение ad libitum водопроводной водой.

Пример 11. Исследование продолжительности нокдаун-эффекта в отношении иксодовых клещей после обработки композициями на собаках и кошках.

Собаки. Оценку наличия и продолжительности нокдаун-эффекта в отношении иксодовых клещей после обработки композициями проводили на 15 беспородных клинически здоровых собаках разного пола с массой тела 12-29 кг, которым за 8 недель до начала исследования не применялись топикальные инсектоакарицидные препараты.

Кошки. Наличие и продолжительность нокдаун-эффекта в отношении иксодовых клещей после обработки композициями исследовали на 15 беспородных клинически здоровых кошках разного пола массой тела 2,5-4 кг, которым за 8 недель до начала исследования не применялись топикальные инсектоакарицидные препараты.

Животные как собаки, так и кошки были разделены с помощью однократного бесповторного метода в соответствии с массой тела на 3 группы, контрольную, опытную и группу сравнения, по 5 особей в каждой.

В контрольных группах как собак, так и кошек обработку проводили раствором вспомогательных веществ (см. пример 1).

В опытных группах собак обрабатывали составом тебуфенпирад (ТП) (150 мг/мл)+этофенпрокс (ЭП) (300 мг/мл)+вспомогательные вещества.

В опытных группах кошек обрабатывали составом тебуфенпирад (ТП) (150 мг/мл)+этофенпрокс (ЭП) (150 мг/мл)+вспомогательные вещества.

В группах сравнения - препаратом РольфКлуб 3 D (фипронил - 9,8%, этофенпрокс - 15%о, пирипроксифен - 2%>, а в качестве вспомогательных веществ изопропиловый спирт - 20%, диэтиленгликоля моноэтиловый эфир - 15%, твин-80 - 2%>, бутилгидроксианизол- 0,2%, бутилгидрокситолуол - 0,1%>, полиэтиленгликоль (ПЭГ 400) до 100%), принятым при создании настоящего изобретения за прототип.Схема исследования.

Голодных самок иксодовых клещей собирали непосредственно в день нанесения (с 9 до 11 часов утра), на открытых участках (полянах, лужайках, просеках) с растительности с помощью флага из марли и/или волокуши. Собранных клещей помещали в стеклянные пробирки с ватно-марлевой пробкой или пластиковые пробирки с завинчивающейся крышкой. На каждую пробирку наклеивали этикетку со сведениями о месте и времени сбора.

Животных каждой группы однократно обрабатывали соответствующей композицией в дозе 1 мл/10 кг массы тела, нанося ее на кожу в области основания черепа, шеи или между лопатками. Крупным собакам композицию наносили на кожу точечно в 3-4 места вдоль позвоночника. После этого в течение 48 ч собак не выгуливали за территорией приюта и вели за животными постоянное наблюдение: учитывали общее состояние, прием корма и воды. Исследование продолжительности нокдаун-эффекта проводилось еженедельно спустя 48 ч. после нанесения клеща.

На каждое животное в группе, предварительно седированное лекарственным препаратом для ветеринарного применения, содержащим тразодона сукцинат, наносили одну голодную самку иксодового клеща и с помощью таймера оценивали время от момента ее нанесения до отпадения с животного. Наличие нокдауна фиксировали, если для открепления клеща требовалось не более 5 минут.Нанесение новых клещей проводилось еженедельно после проведенной в начале эксперимента обработки.

Оценка длительности нокдаун-эффекта композиции ТП+ЭП после однократной обработки собак представлена в таблице 10.

Согласно данным, приведенным в таблице 10, состав по изобретению проявляет нокдаун-эффект у собак на протяжении не менее 3-х недель, в то время как композиция по прототипу в течение 2-х недель.

Оценка длительности нокдаун-эффекта композиции ТП+ЭП после однократной обработки кошек представлена в таблице 11.

Согласно данным, представленным в таблице 11 заявленная композиция проявляет нокдаун-эффект на протяжении 3-х недель, в то время как композиция по прототипу 2 недели.

Пример 12. Эффективность композиций для профилактики спонтанной инфестации иксодовыми клещами собак.

Схема исследования.

В испытания были включены 36 собак разного пола массой тела от 5 до 40 кг, которым за 8 недель до начала исследования не применялись топикальные инсектоакарицидные препараты.

Собаки были разделены с помощью однократного бесповторного метода в соответствии с массой тела на 3 группы: контрольную, опытную и одну группу сравнения, по 12 особей в каждой.

Контрольные группы обрабатывались раствором вспомогательных веществ (см. пример 1).

Опытная группа - составом тебуфенпирад (ТП) (150 мг/мл)+этофенпрокс (ЭП) (300 мг/мл)+вспомогательные вещества.

Группа сравнения - препаратом РольфКлуб 3D капли для кошек (прототип).

Животные выгуливались сотрудниками приюта утром и вечером на прилегающей к приюту территории, которая является биотопом иксодовых клещей с высоким риском их нападения в период максимальной активности эктопаразитов.

Животных каждой группы до совершения первого выгула обрабатывали однократно соответствующей композицией в дозе 1 мл/10 кг массы тела, нанося ее на кожу в области основания черепа, шеи или между лопатками. Оценку наличия иксодовых клещей на животных после обработки проводили еженедельно. Обнаружение хотя бы на одном животном присосавшегося иксодового клеща означало окончание защитного действия исследуемой композиции.

Оценка длительности акарицидной активности композиций после однократной обработки собак представлено в таблице 12.

На основании данных, представленных в таблице 12, можно сделать вывод о том, что испытуемый состав комбинированного инсектоакарицидного средства обладает длительностью защиты от иксодовых клещей не менее чем 6 недель при однократном применении, что дольше на 2 недели, чем препарат сравнения того же назначения.

Пример 13. Исследование эффективности составов по изобретению при лечении и профилактике спонтанной инфестации блохами собак и кошек.

По результатам отбора животных на основании указанных ранее критериев в эксперимент по изучению инсектицидной активности композиций по изобретению при лечении инфестации блохами собак было включено 24 беспородных клинически здоровых собаки разного пола, в возрасте старше 3-х месяцев, с массой тела 8-35 кг, спонтанно зараженных блохами. Оценка инсектицидной эффективности композиций для лечения инфестации блохами кошек проводилась на 56 беспородных клинически здоровых животных разного пола старше 3-х месяцев, с массой тела 1,5-4,0 кг, спонтанно зараженных блохами.

Факт зараженности животных блохами устанавливали по клинической картине, включавшей постоянные покусывания в области крестца, хвоста, почесывания в области лопаток и шеи. Степень инфестации определяли посредством визуального обнаружения и подсчета блох на участке поверхности кожи спины площадью 20 см2 методом вычесывания. Распределение животных на группы.

Собаки с помощью однократного бесповторного метода в соответствии с массой тела были разделены на 4 группы: контрольную, 2 опытные и группу сравнения, по 6 особей в каждой. Кошки тем же методом также были поделены на 4 аналогичные группы по 14 особей в каждой.

Масса тела животных учитывалась при дозировании композиций.

Животные контрольных групп, как собак, так и кошек обрабатывали только вспомогательными веществами из примера 1, в группах сравнения был применен препарат-прототип РольфКлуб 3D (капли для кошек); собаки опытной группы №1 обрабатывались составом по изобретению на основе базовой комбинации ТП (150 мг/мл)+ЭЩ300 мг/мл), кошки опытной группы №1 обрабатывались составом по изобретению на основе базовой комбинации ТП (150 мг/мл)+ЭП(150 мг/мл), а опытных групп №2 - трехкомпонентным ИА-составом, в который с целью повышения скорости начала действия на блох дополнительно был включен неоникотиноид -ацетамиприд в концентрации 100 мг/мл. Все композиции наносили на кожу в области основания черепа, шеи или между лопатками (крупным собакам точечно в 3-4 места вдоль позвоночника) в дозе 0,1 мл/1 кг массы тела животного. После обработки за животными велось постоянное наблюдение с регистрацией общего состояния, приема корма и воды, результатов осмотра кожного покрова. Оценку наличия блох на животных проводили через 24 и 48 часов после лечения, а дальше -через неделю. Обнаружение хотя бы на одном животном опытной группы больше одной блохи на участке поверхности кожи спины площадью 20 см² расценивалось как окончание защитного действия исследуемой композиции.

Результаты определения скорости начала и длительности инсектицидного действия состава на основе ТП+ЭП (группа №1), трехкомпонентной композиции ТП+ЭП+АА (группа №2) и препарата-прототипа после однократной обработки собак представлены в таблице 13.

В результате проведенного испытания установлено, что базовая композиция (№1) по изобретению полностью уничтожает блох более чем 80% собак уже через 24 часа, у 100%- через 48 часов после нанесения; продолжительность защитного действия от блох для данной композиции составляет до 60 дней после однократной обработки животных. Препарат-прототип РольфКлуб 3D также уничтожает 100%>блох на собаках через 48 ч после нанесения, а через 24 часа - 66,7%>, что меньше, чем под действием комбинации ТП+ЭП. Исследуемая нами в эксперименте продолжительность защитного действия препарата, проведенном на собаках, содержащихся в определенных условиях в приюте для бездомных животных "Дари добро" составила менее 4 нед. против до 60 дней в опытной группе №1. Очевидно, что дополнительное введение в состав по изобретению неоникотиноида (АА), как и ожидалось, несколько повышает скорость развития инсектицидной активности опытного средства (100%) через 24 часа), по сравнению с основной композицией по изобретению.

Оценка скорости начала действия и длительности инсектицидной эффективности состава после однократной обработки кошек представлена в таблице 13.

В результате проведенного испытания установлено, что базовая композиция (№1) по изобретению полностью уничтожает блох у более чем 80% кошек уже через 24 часа, у 100% через 48 часов после нанесения; продолжительность защитного действия от блох для данной композиции составляет до 60 дней после однократной обработки животных. Препарат-прототип РольфКлуб 3D также уничтожает 100%>блох на кошках через 48 ч после нанесения, а через 24 часа - 66,7%, что меньше, чем под действием комбинации ТП+ЭП. Исследуемая нами в эксперименте продолжительность защитного действия препарата, проведенном на кошках, содержащихся в определенных условиях в приюте для бездомных животных "Дари добро" составила менее 4 нед. против до 60 дней в опытной группе №1. Очевидно, что дополнительное введение в состав по изобретению неоникотиноида(АА), как и ожидалось, несколько повышает скорость развития инсектицидной активности опытного средства (100% через 24 часа), по сравнению с основной композицией по изобретению.

Пример 14. Акарицидная активность комбинированного препарата в отношении клещей О. cynotis.

В опыте использовали 9 спонтанно инфестированных О. cynotis беспородных кошек возрастом от 1 до 4 лет, весом от 2 до 4 кг, у которых, по результатам акарологического исследования соскобов с внутренней поверхности ушных раковин было подтверждено наличие живых отодектозных клещей. Под микроскопом при 10-ти кратном увеличении в одном поле зрения обнаружено от 7 до 9 экземпляров паразитов, а также наличие следующих клинических признаков заболевания: зуд в области ушей, беспокойство и периодическое трясение головой, расчесывание в области ушей, при визуальном осмотре на внутренней поверхности ушной раковины и кожных слоях наружного слухового прохода выявлены покраснение, темно-коричневые струпья, у двух из 9 животных выявлен неприятный запах из ушей.

Из отобранных животных случайным образом были сформированы 2 группы: опытная (6 кошек), в которой применялся испытуемый состав, и контрольная (3 кошки), животные которой далее не подвергались обработке никакими препаратами.

Кошек опытной группы однократно (день 0) обрабатывали исследуемым комбинированным средством ТП (150 мг/мл)+ЭП (150 мг/мл)+вспомогательные вещества в объеме, определяемом из расчета в дозе 0,1 мл на 1 кг веса животного, контрольная группа кошек обрабатывалась только вспомогательными веществами.

Эффективность комбинированного состава для уничтожения О. cynotis на животных оценивали через 7, 14, 28 и 42 дня после обработки. Эффективность лечения при осмотре подтверждалась отсутствием живых особей О. cynotis и признаков инвазии. Результаты обследования животных до и после применения комбинированного средства приведены в таблице 14.

На основании полученных в данном эксперименте результатов можно заключить, что однократное применение комбинированного средства по изобретению обеспечивает высокий уровень акарицидной активности в отношении взрослых особей клещей О. cynotis на целевых животных и позволяет уже через 2 недели полностью избавить их от эктопаразитов, а также в значительной степени нивелировать клинические проявления заболевания, такие как зуд, неприятный запах, а также сократить на 90% количество струпьев.

Пример 15. Активность комбинированного препарата в отношении власоедов.

Для опыта было отобрано 12 беспородных собак, весом от 2 до 20 кг. При визуальном осмотре и вычесывании животных установлено наличие власоедов, принадлежащих к виду Trichodectes canis в количестве более 50 особей. Животные, на момент осмотра, имели следующие клинические признаки поражения власоедами: постоянно и энергично чесались, имели тусклую и взъерошенную шерсть, в области морды, живота и основании хвоста просматривались залысины. Животные, случайным образом, были разделены на 2 группы: опытная (7 собак), в которой применялся испытуемый состав, и контрольная (5 собак), которые не подвергались обработке никакими препаратами.

Собак опытной группы однократно обрабатывали исследуемым комбинированным средством ТП (150 мг/мл)+ЭП (300 мг/мл)+вспомогательные вещества (см. табл. 2) в объеме, определяемом из расчета 0,1 мл/1 кг веса животного. В течение 3-5 суток у собак исчез зуд, в течение 21-28 дней началось восстановление шерстного и кожного покрова, при визуальном осмотре власоедов и продуктов их жизнедеятельности обнаружено не было, в то время как в контрольной группе никаких изменений не произошло.

На основании полученных в данном эксперименте результатов можно заключить, что однократное применение комбинированного средства по изобретению обеспечивает высокий уровень инсектицидной активности в отношении взрослых особей власоедов.

Следует отметить, что во всех опытах при применении целевым животным комбинированного средства, включающего в качестве ДВ комбинацию ТП и ЭП, на протяжении всего срока наблюдения, не было отмечено никаких побочных эффектов, осложнений или иных неблагоприятный воздействий препарата на организм животных (рвоты, судорог, угнетения, потери аппетита и т.д.). Все животные перенесли обработку без осложнений.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате реализации настоящего изобретения получено новое инсектоакарицидное средство в форме капель на холку для защиты мелких домашних животных от эктопаразитов, включающее комбинацию, по меньшей мере, из двух действующих веществ, тебуфенпирада и этофепрокса в качестве активного начала и фармацевтически приемлемые вспомогательные компоненты, где указанные активные вещества содержатся в концентрациях, достаточных для получения терапевтически эффективной дозы при однократном применении.

Средство по изобретению, включающее базовую комбинацию ТП+ЭП, обеспечивает при однократном применении 100% терапевтическую эффективность в отношении широкого спектра как взрослых эктопаразитов МДЖ (клещей, блох, вшей, власоедов и др.), так и преимагинальных стадий развития клещей и блох. Новый препарат характеризуется надежным защитным действием в отношении иксодовых клещей (6 недель против 4 нед. у прототипа), обладает более длительным по сравнению с прототипом нокдаун-эффектом (3 недели против 2-х недель) и ускоренным началом проявления акарицидной активности (24 часа против 48 ч. у препарата-прототипа). Предлагаемое средство демонстрирует и более продолжительное, чем ближайший аналог, инсектицидное действие против блох (до 60 дней против менее 4-х недель у препарата-прототипа), а при использовании в качестве дополнительного ДВ неоникотиноида, в частности ацетамиприда, -и ускоренное его развитие (скородействие).

Предлагаемая комбинация активных веществ ТП и ЭП в составе нового препарата демонстрирует:

а) высокую акарицидную активность в борьбе с иксодовыми клещами

б) достаточно высокий уровень собственной овицидной и ларвицидной активностей, что исключает необходимость введения в состав препарата дополнительного активного компонента против преимагинальных стадий развития клещей и блох, который представлен в прототипе.

За весь период испытаний комбинированного средства по изобретению у животных не наблюдалось возникновения каких-либо нежелательных побочных эффектов и осложнений, что свидетельствует о безопасности его применения.

Заявленная группа изобретений относится к области ветеринарии, а именно к инсектоакарицидному средству и к способу защиты мелких домашних животных от эктопаразитов. Инсектоакарицидное средство в форме капель на холку для защиты мелких домашних животных от эктопаразитов включает комбинацию по меньшей мере из двух действующих веществ, тебуфенпирада и этофенпрокса, в качестве активного начала и фармацевтически приемлемые вспомогательные компоненты, где указанные активные вещества содержатся в концентрациях, обеспечивающих терапевтически эффективную дозу при однократном применении. Способ защиты мелких домашних животных от эктопаразитов, предусматривающий однократное применение животному комбинированного инсектоакарицидного средства в эффективном количестве. Вышеописанная группа изобретений эффективно борется с эктопаразитами с использованием нового, эффективного, безопасного и простого по составу и способу получения комбинированного препарата для защиты мелких домашних животных. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 15 табл., 15 пр.

1. Инсектоакарицидное средство в форме капель на холку для защиты мелких домашних животных от эктопаразитов, включающее комбинацию по меньшей мере из двух действующих веществ, тебуфенпирада и этофенпрокса, в качестве активного начала и фармацевтически приемлемые вспомогательные компоненты, где указанные активные вещества содержатся в концентрациях, обеспечивающих терапевтически эффективную дозу при однократном применении.

2. Средство по п. 1, дополнительно содержащее неоникотиноид.

3. Средство по п. 2, в котором неоникотиноид представлен ацетамипридом.

4. Способ защиты мелких домашних животных от эктопаразитов, предусматривающий однократное применение животному комбинированного инсектоакарицидного средства по любому из пп. 1-3 в эффективном количестве.