Комплексная антипаразитарная композиция для собак Российский патент 2025 года по МПК A61K31/42 A61K31/365 A61K31/4985 A61K31/7048 A61K9/00 A61P33/10 A61P33/14 

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для лечения и защиты собак от эктопаразитов и эндопаразитов.

Предлагается композиция для наружного применения для собак в форме капель на холку, содержащая флураланер, отличающаяся тем, что содержит моксидектин, R-празиквантел, спинеторам и фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества, при следующем содержании компонентов, мг/мл:

флураланер 140-280 моксидектин 18-35 R-празиквантел 36-75 спинеторам 0,5-2,6 фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества до 1 мл

Композиция обладает широким спектром антипаразитарного действия. Не ограничиваясь приведенными примерами, композиция обладает активностью в отношении различных экто- и эндопаразитов, в частности, клещей, блох, власоедов, нематод, цестод и др. Композиция характеризуется высокой терапевтической активностью в отношении экто- и эндопаразитов, быстрым началом действия на эктопаразитов, в частности, на блох и клещей, значительной продолжительностью акарицидного и противоблошиного действия, обладает овицидным и ларвицидным действием, является безопасным для организма животного, удобна в применении.

Уровень техники

Собаки живут рядом с человеком уже несколько тысячелетий и воспринимаются как настоящие члены семьи.

Согласно последним исследованиям, в России на 2023 год популяция домашних животных достигла 74,8 млн особей, что на 11,3 млн (11%) больше, чем тремя годами ранее. В частности, численность собак в 2023 году составила 25,5 млн особей, что на 7% больше, чем в 2020 году. Россия сохраняет четвертое место в мире по количеству собак.

Владельцы собак уделяют пристальное внимание здоровью и профилактике болезней своих питомцев, тем более что некоторые заболевания четвероногих любимцев передаются и человеку. Для сохранения здоровья питомца, хозяева на постоянной основе ведут борьбу с экто- и эндопаразитозами.

Собаки чаще всего бывают поражены одним или несколькими видами экто- и эндопаразитов.

В число эктопаразитов входят:

- блохи (Ctenocephalides spp., в частности, Ctenocephalides canis),

- иксодовые клещи (Ixodes spp., Dermacentor spp. и др.),

- прочие клещи (Demodex spp., Sarcoptes spp., Otodectes spp., и др.),

- власоеды (Trichodectes canis) и др.

Кроме того, источником заражений и болезненных состояний животных, могут служить некоторые кровососущие насекомые:

- комары (Aedes spp., Culux spp., Anopheles spp. и др.);

- мухи (Hematobia spp., Musca spp., Stomoxys spp., Dematobia spp., Coclyomia spp.) и др.

Клещи являются переносчиками патогенных факторов, способных затрагивать как животное, так и человека. Среди основных заболеваний, которые необходимо предотвратить, особо следует отметить боррелиоз, вызываемый Borellia burgdorferi, пироплазмоз, вызываемый Babesia sp., и реккетсиозы. Помимо этого, токсины, которые выделяют данные паразиты, вызывают у животных повреждение кожи, отеки и воспаление. Нередко заболевания, вызванные клещами, приводят к летальному исходу.

Блохи, паразитирующие на собаках, распространены повсеместно. Животные, зараженные блохами, пребывают в состоянии стресса, так как укусы паразитов вызывают сильный кожный зуд. Расчесывание животными зудящих участков кожи приводит к появлению на этих местах ссадин и царапин, открывающих "ворота" инфекции. Кроме того, блохи являются переносчиками гельминта - Dipylidium caninum, который паразитирует и у животных, и у человека.

Комары, кроме раздражающего действия на животного, могут заразить питомца сердечными гельминтами - дирофиляриями; мухи, например, слепни и жигалки, кусают кошек и собак преимущественно на свободных от шерсти участках кожи (уши, нос), в результате чего, образуются болезненные раны, кожа воспаляется, чешется, выделяется сукровица, что еще больше привлекает мух, которые могут переносить такие опасные заболевания, как туляремия, сибирская язва, а также откладывают яйца на кожу и в рану, где затем развиваются личинки с образованием миаз.

К эндопаразитарным заболеваниями, которыми чаще всего болеют домашние питомцы, относят гельминтозы, в частности, такие как токсокароз, вызываемый гельминтами Toxocara canis, T. leoninae, дипилидиоз, вызываемый паразитом Dipylidium caninum, описторхоз, вызываемый паразитом Opisthorchis felineus и др. Риск заразиться гельминтозами у домашних питомцев чрезвычайно высок, вовремя же обработанное животное сводит риск такого заражения на нет.

Современные меры борьбы с экто- и эндопаразитами собак базируются на рациональном использовании эффективных комбинированных противопаразитарных препаратов. С учетом того, что во многих случаях у собак обнаруживают одновременное поражение несколькими паразитами, которые относятся к разным группам, а именно, паразитирующим насекомым, клещам, разным видам гельминтов, то предпочтительным специалистами признается одновременное использование в составе препаратов этого назначения нескольких активных субстанций, которые оказывают разнонаправленное действие на разных паразитов, что является приоритетным направлением при создании новых комплексных противопаразитарных препаратов, основным преимуществом которых является широкий спектр противопаразитарного действия, позволяющий использовать их для уничтожения большинства из наиболее часто встречающихся у собак видов экто- и эндопаразитов.

В настоящее время в ветеринарной практике используется большое количество препаратов, одновременно проявляющих как инсектицидное, акарицидное, так и антигельминтное действие. Как показала практика, наилучшие результаты в одновременной защите домашних животных от большого числа паразитирующих на них видов клещей и насекомых, а также гельминтов достигаются при применении комплексных препаратов данного типа, в состав которых входят несколько активных веществ, выгодно дополняющих и/или усиливающих свойства друг друга. В связи с этим, данный тип противопаразитарных средств продолжает представлять значительный интерес для ветеринарного сообщества.

Так на ветеринарном рынке представлен широкий спектр коммерческих противопаразитарных препаратов для собак, которые содержат активные вещества, принадлежащие к различным классам, действующим на клещей, насекомых, а также на различных гельминтов. Препараты могут включать два, три и более действующих веществ.

Спектр комплексных противопаразитарных препаратов местного (наружного) применения, используемых в российской и зарубежной ветеринарной практике, постоянно растет и пользуется популярностью как у ветеринарных врачей, так и у хозяев животных из-за своего чрезвычайного удобства.

Типичными представителем данной группы препаратов для собак является «Гельминтал С», в состав которого входит празиквантел и моксидектин. Данный препарат, согласно официальной инструкции, применяется с лечебной и профилактической целью при кишечных нематодозах, цестодозах, энтомозах, вызванных блохами и власоедами, демодекозе, отодектозе, нотоэдрозе и для профилактики дирофиляриоза, препараты с профилактической целью рекомендуется применять 1 раз в месяц.

Недостатком данного препарата является то, что он не обеспечивает быстрого уничтожения блох и клещей, а также не сохраняет достаточного продолжительного противоклещевого эффекта, кроме того, побочными явлениями при использовании данного препарата является кожный зуд, покраснение кожи, аллергии, в отдельных случаях, слабость и тремор.

Типичным представителем комплексного многокомпонентного противопаразитарного ветеринарного препарата для местного применения является капли для собак «Инспектор Квадро С». В 1 мл данного средства содержится 107 мг фипронила, 42,8 мг празиквантела, 21,4 мг пирипроксифена и 26,75 мг моксидектина, а также вспомогательные вещества: диэтиленгликоля моноэтиловый эфир (ДЭМЭ), N -метилпирролидон, бутилгидроксианизол, бутилгидрокситолуол. Препарат назначают собакам для лечения и профилактики энтомозов, демодекоза, отодектоза, саркоптоза, акарозов, вызываемых иксодовыми клещами, нематодозов желудочно-кишечного тракта, цестодозов, ассоциативных нематодо-цестодозных инвазий, а также в целях профилактики дирофиляриоза. Акарицидное действие препарата, согласно инструкции, проявляется через 12-24 ч, с профилактической целью препарат используют 1 раз в 4-6 недель.

Недостатком данного препарата является то, что он не обеспечивает быстрого уничтожения блох и клещей, а также не обладает продолжительным сроком сохранения противоклещевого и противоблошиного эффектов, кроме того, препарат относится к 3 классу опасности по ГОСТ, побочными явлениями при использовании данного препарата является кожный зуд, покраснение кожи, аллергии, в отдельных случаях, мышечная дрожь и рвота.

Известен раствор для наружного применения Адвокат®, 1 мл которого содержит имидаклоприд - 100 мг, моксидектин - 25 мг и вспомогательные вещества: спирт бензиловый, пропилен карбонат и бутилгидрокситолуол. Адвокат® назначают собакам для лечения и профилактики демодекоза, отодектоза, саркоптоза, энтомозов, нематодозов, кожной формы дирофиляриоза, профилактики сердечно-легочной формы дирофиляриоза, а также в комплексной терапии блошиного аллергического дерматита.

Недостатком препарата Адвокат® является то, что он не обеспечивает быстрого уничтожения блох и клещей, а также не обладают длительным противоблошиным и противоклещевым эффектом, не действует на цестод, кроме того, препарат относится к 3 классу опасности по ГОСТ, побочные эффекты при применении препарата являются покраснение кожи, зуд, эритема, рвота, в отдельных случаях, неврологические реакции.

Известен раствор для наружного применения «Празицид®-комплекс НЕО», 1 мл которого содержит в качестве действующих веществ празиквантел - 100 мг, ивермектин - 5 мг, фипронил - 100 мг; вспомогательные вещества: диметилсульфоксид, полиэтиленгликоль-400, отдушка «Blue River», бутилгидрокситолуол, бутилгидроксианизол и бензиловый спирт. Празицид®-комплекс НЕО назначают взрослым собакам и щенкам, начиная с 2-месячного возраста, для лечения и профилактики кишечных нематодозов, цестодозов, энтомозов, вызываемых блохами, вшами и власоедами; акарозов, вызываемых саркоптоидными, иксодовыми и демодекозными клещами, а также для профилактики дирофиляриоза, блохи и клещи уничтожаются по прошествии 24-48 ч.

Недостатком данного препарата является то, что он не обеспечивает быстрого уничтожения блох и клещей, а также не обеспечивает продолжительного сохранения противоблошиного и противоклещевого эффектов, кроме того, препарат относится к 3 классу опасности по ГОСТ, побочными проявлениями при его применении являются слезотечение, расширение зрачков, избыточное слюноотделение, атаксия, мышечная дрожь, тошнота, общая слабость и вялость животного, раздражения кожи.

Таким образом, вышеперечисленные лекарственные средства, применяемые для лечения и профилактики экто- и эндопаразитозов, обладают в той или иной степени выраженным отрицательным влиянием на организм животного, не обладают необходимым спектром действия в отношении широкого круга паразитов, уничтожение блох и клещей, в большинстве своем, происходит не быстро, по прошествии 24-48 ч, что может привести к заболеванию собаки, например, пироплазмозом (от клещей) или дипилидиозом (от блох), распространению паразитов в жилом помещении, что может способствовать заражению и других животных, проживающих на данной территории, а также людей, в частности, энцефалитом и боррелиозом через клещей. Многие из перечисленных препаратов не обладают нужной длительностью профилактического действия в отношении эктопаразитов, в то время как предлагаемая композиция обладает длительным профилактическим действием и не требует частого приема, что удобно и для владельца, и для животного.

Несмотря на то, что к настоящему времени на ветеринарном рынке представлено достаточно большое количество противопаразитарных средств для собак, включающих несколько разнонаправленно действующих активных веществ, борьба с экто- и эндопаразитами, по-прежнему, остается серьезной проблемой для владельцев.

Таким образом, создание высокоэффективных безопасных комплексных средств для защиты собак от паразитов, в частности от экто- и эндопаразитов быстрого действия продолжает оставаться актуальной и важной задачей, что также подтверждается многообразием патентных документов, посвященных разработке новых составов, предназначенных для этой цели. Анализ патентных документов, показывает, что предлагаемые противопаразитарные композиции могут быть условно поделены на две основные группы.

Первой группой представленных к защите или защищенных патентами противопаразитарных составов для животных являются в основном разработки зарубежных компаний, где описываемые композиции в качестве основного компонента содержат новые группы соединений со свойствами паразитицидов, объединяемые общей структурной формулой, которые при необходимости предлагается совмещать с одним или несколькими представителями хорошо известных и широко применяемых сегодня классов пестицидов: авермектинов (абамектин, ивермектин, эмамектин, селамектин и др.), изоксазолинов (сароланер, афоксоланер и др.), пиразинизохинолинов (празиквантел), пиретроидов (перметрин, пиретрин и др.), спиносинов (спиносад, спинеторам и др.) и др. (WO 2015100232 A2, 02.07.2015; RU 2633061 С2, 11.10.2017; WO 2014086848 А1, 12.06.2014; RU 2551354 C2, 20.05.2015 и др.).

Вторая группа предлагаемых к защите составов включает новые смеси соединений, относящихся к хорошо известным классам пестицидов, во многих случаях не только дополняющих, но и усиливающих полезные свойства друг друга. В качестве примеров патентных документов, раскрывающих композиции этого типа, можно привести RU 2782929 C1, 07.11.2022, RU 2657508 C1, 14.06.2018, EA 22068 B1, 30.10.2015, RU 2574887 C2,10.02.2016, US 2012255502 A, 11.10.201, и др.

Однако далеко не все из приведенных в патентных документах композиций исследованы в отношении их эффективности и безопасности, а исследованные варианты не всегда характеризуются необходимой скоростью и длительностью действия, эффективностью и безопасностью.

Несмотря на обилие препаратов, а также подаваемых заявок и полученных патентов потребность в составах, которые обеспечивали бы препарату максимальное количество требуемых положительных характеристик достаточно велика.

Наиболее близким аналогом для заявленного изобретения является противопаразитарный препарат для наружного применения «Бравекто® спот он», в 1 мл которого содержится 280 мг флураланера и вспомогательные компоненты: диметилацетамид, глюкофурол, диэтилтолуамид и ацетон. Препарат «Бравекто^® спот он» применяют для лечения и профилактики заражения клещами (Ixodes ricinus, Ixodes hexagonus, Ixodes scapularis, Dermacentor reticulatus, Haemaphysalis elliptica, Rhipicephalus sanguineus) и блохами (Ctenocephalides felis и Ctenocephalides canis) у собак, для предотвращения передачи Dipylidium caninum у собак, для лечения саркоптоза, вызванного Sarcoptes spp., для лечения отодектоза, вызванного Otodectes cynotis у собак и др. Инсектоакарицидное действие «Бравекто^® спот он» у собак сохраняется в течение 12 недель (https://www.msd-animal-health.ru/wp-content/uploads/sites/19/2021/03/Bravecto_Spot_On_23.12.2020_IN.pdf).

Недостатками «Бравекто^® спот он» является то, что он не обеспечивает быстрое действие на блох и клещей, защитный период от эктопаразитов, согласно инструкции, составляет всего 12 недель, препарат не активен в отношении эндопаразитов, в частности, цестод и нематод, при его применении зачастую возникают такие побочные эффекты как алопеция, шелушение кожи, зуд, одышка, рвота, диарея и др.

Предлагаемая к патентованию комплексная противопаразитарная композиция для собак для наружного применения в форме капель на холку, содержащая в качестве действующих веществ флураланер, спинеторам, моксидектин и R-празиквантел и фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества лишена вышеуказанных недостатков.

Настоящее изобретение обеспечивает быстрое уничтожение эктопаразитов, в частности, блох и клещей, длительное профилактическое действие в отношении заражения эктопаразитами, расширение спектра действия на цестод и нематод, отсутствие побочных эффектов, удобство применения, безопасность (4 класс опасности по ГОСТ) (технические результаты).

Раскрытие изобретения

Поставленная задача достижения быстрого, эффективного и безопасного противопаразитарного действия в отношении экто- и эндопаразитов собак решается путем создания комплексной композиции для наружного применения в форме капель на холку, содержащей в качестве действующих веществ флураланер, спинеторам, моксидектин и R-празиквантел и фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества.

Композиция по изобретению при одноразовом применении позволяет быстро уничтожить блох и клещей, в частности, препарат начинает действовать уже через 30 мин и уничтожает 90% блох через 2 ч,100% блох через 4 ч после начала их питания, уничтожает 100% прикрепленных клещей уже через 6 ч, оказывает длительное профилактическое действие в отношении заражения эктопаразитами до 28 недель, активна в отношении цестод и нематод, является безопасной для животных и не оказывает побочных эффектов на организм, является удобной в применении.

Действующие вещества ветеринарной композиции

Флураланер

Флураланер (4-[5-(3,5-дихлорфенил)-5-трифторметил-4,5-дигидроизоксазол-3-ил]-2-метил-N-[(2,2,2-трифторэтилкарбамоил) метил] бензамид) относится к классу соединений, известных как изоксазолины, обладает системным действием. Механизм действия флураланера основан на блокаде лигандзависимых хлоридных каналов (как ГАМК-рецепторов, так и глутаматных рецепторов), приводящей к подавлению нервной системы эктопаразитов, что приводит к их параличу и гибели. Ветеринарный препарат с действующим веществом флураланер выпускается под торговым названием «Бравекто» и представлен как в форме таблеток для собак, так и в форме капель для местного применения (спот он). Согласно инструкции по применению в 1 мл «Бравекто спот он» содержится 280 мг флураланера и вспомогательные вещества: диметилацетамид, гликофурол, диэтилтолуамид и ацетон, препарат применяется собакам в дозе 0,1 мл/1 кг веса собаки. Препарат начинает вызывать гибель блох на собаке через 8 ч после начала их питания, иксодовых клещей через 12 ч после их прикрепления, полное уничтожение эктопаразитов происходит за 24-48 ч. Для контроля заражения блохами и клещами рекомендуется применять препарат с интервалом 12 недель.

Следует отметить, что вышеуказанный препарат обладает рядом побочных эффектов, в частности, при нанесении препарата возникает эритема, зуд, алопеция, вялость судороги, анорексия, тошнота. Кроме того, данный препарат недостаточно быстро вызывает гибель блох и клещей и защищает животных до следующего применения до 3-х месяцев, более того, препарат не действует на гельминтов (класса нематод и цестод), которыми часто бывают поражены собаки.

Моксидектин

Моксидектин - действующее вещество класса милбемицинов группы макроциклических лактонов. Впервые его применили в качестве ветеринарного антипаразитарного средства в 1980 году. Моксидектин получен из химически модифицированного немадектина, продукта ферментации Streptomyces cyanogriseus noncyanogenus.

Моксидетин используется как в качестве монопрепарата для борьбы с паразитозами собак, так и в комбинации с другими представителями антипаразитарных действующих веществ. Типичным представителем монопрепарата с моксидектином является «Инспектор мини спот он», который, согласно инструкции по применению, является активным в отношении блох, вшей, власоедов, часоточных клещей, иксодовых клещей и нематод, защитное действие препарата от эктопаразитов и нематод при однократном применении составляет 30 дней. Комбинированные препараты для наружного применения, включающие моксидектин, широко представлены на российском рынке, так, например, известны такие препараты, как «Принокат®», «Адвокат®», которые в своем составе содержат моксидектин и имидаклоприд, препарат «Инсектал Комбо®», включающий моксидектин и фипронил и др.

Вышеуказанные препараты не являются абсолютно безопасными для собак, они относятся 3-му классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76. Так, при применении препарата «Принокат®» выявлено покраснение кожи, зуд, эритема, рвота, в некоторых случаях апатия, отсутствием аппетита, при использовании препарата «Адвокат®», у животных выявлен повышенный зуд, выпадение шерсти, признаки засаливания шерсти, покраснением в месте нанесения, рвота, в случае применения препарата «Инсектал Комбо®» также выявлено покраснение кожи, зуд, так же может наблюдаться угнетение животного, избыточное слюноотделение, мышечная дрожь, рвота.

R-празиквантел

R-празиквантел - один из двух оптических изомеров, составляющих рацемическую смесь празиквантела, в виде которой данное соединение представлено во всех известных на сегодняшний день антигельминтных препаратах.

Примерами комбинированных антигельминтиков, содержащих в своем составе чистый активный энантиомер празиквантела (R-празиквантел) и предназначенного для лечения кошек и собак, является суспензия «Празител® Особый» для лечения гельминтозов и препарат «Супрамил®», представленный в таблетированной форме и эмульсии для приема внутрь. Вышеуказанные препараты применяются только при нематодозных и цестодозных инвазиях, в отношении эктопаразитов данные препараты неактивны.

Комплексные противопаразитарные препараты в виде раствора для наружного применения для собак, которые включали бы в своем составе R-празиквантел в уровне техники не выявлены.

Спинеторам

Спинеторам является смесью двух полученных естественным брожением компонентов с активностью против широкого диапазона насекомых-вредителей, включая чешуекрылых, Noctuidae, Pyralidae и жесткокрылых. Спинеторам был разработан и реализуется на рынке США под торговой маркой Assurity™ как продукт местного действия для борьбы с блохами у кошек. Разрешение на применение Assurity было получено в ноябре 2010 года. Состав Assurity содержит, в % (мас./мас.): 39,6% спинеторама (420 мг/мл), примерно 54% бензилового спирта, примерно 0,1% бутилированного гидрокситолуола и примерно 0,1% лимонной кислоты. Также на международном рынке реализуется препарат для местного применения от блох для кошек Cheristin компании Elanco, в котором в качестве действующего вещества содержится спинеторам в количестве 11,2 мас. % (130 мг/мл), а в качестве вспомогательных компонентов бензиловый спирт 18 мас. % и пропилен карбонат 69 мас. % который обеспечивает избавление от блох, при этом 98-100% блох погибают по прошествии 12 ч, профилактическое действие препарата длится 6 недель.

Недостатками вышеуказанных препаратов является то, что они применяются только кошкам, уничтожение блох происходит только по прошествии 12 ч, кроме того, при применении данных препаратов присутствуют такие побочные эффекты как алопеция, покраснение, зуд и рвота. Коммерческих препаратов для собак в виде раствора для наружного применения, которые бы включали в своем составе спинеторам в комплексе с другими паразитицидами и обеспечивали неожиданные положительные эффекты в общедоступной литературе не выявлено.

Основываясь на результатах собственных экспериментов, авторы изобретения сочли целесообразным при разработке новой комплексной антипаразитарной композиции использовать смесь действующих веществ, состоящую из флураланера (ФЛ), моксидектина (МД), R-празиквантела (R-ПР) и спинеторама (СПТ), от объединения которых авторами были выявлены неожиданные положительные эффекты. Как показали последующие испытания композиций, содержащих ФЛ+МД+R-ПР+СПТ+ фармацевтические ветеринарные приемлемые вспомогательные вещества, проведенные авторами как in vitro, так и in vivo (см. раздел «Осуществление изобретения»), в результате разработки и реализации настоящего изобретения удалось получить комплексную антипаразитарную композицию, которая в заявленном диапазоне для действующих веществ, обладала высокой терапевтической эффективностью в отношении широкого круга экто- и эндопаразитов (клещи, блохи, власоеды и др., цестоды, нематоды), паразитирующих на собаках, быстрым уничтожением блох и клещей, длительным сроком защиты от эктопаразитов, характеризовалась отсутствием побочных эффектов, удобством применения и не являлась токсичной.

Стоит отметить, что в научно-технической и патентной литературе отсутствуют сведения, раскрывающие предлагаемую к защите комплексную антипаразитарную композицию, которая обладает рядом преимуществ по сравнению с препаратом-прототипом. Заявленная композиция по сравнению с прототипом («Бравекто спот») при одноразовом применении позволяет быстро уничтожить блох и клещей, в частности, начинает действовать уже через 30 мин и уничтожает 90% блох через 2 ч, 100% блох через 4 ч после начала их питания, уничтожает 100% прикрепленных клещей уже через 6 ч, оказывает длительное профилактическое действие в отношении заражения эктопаразитами до 28 недель, активна в отношении цестод и нематод, является безопасной для животных, не оказывает побочных эффектов на организм, удобна в применении и не токсична.

Осуществление изобретения

Изобретение проиллюстрировано примерами, которые дополнительно раскрывают изобретение, но не предназначены для ограничения объема и не должны толковаться как таковое ограничение.

Практически разработка комплексной антипаразитарной композиции включала следующие этапы:

- получение композиции по изобретению;

- изучение активности исследуемой композиции в опытах in vitro;

- изучение активности исследуемой композиции в опытах in vivo на кроликах;

- исследование терапевтической эффективности исследуемой композиции на собаках с подтверждением технических результатов;

- оценка безопасности и наличия побочных эффектов у собак.

I. Получение комплексной антипаразитарной композиции

Пример 1. Методика приготовления

В химический стакан заданного объема загружали рассчитанное количество бензилового спирта, моноэтилового эфира диэтиленгликоля (МЭД) и диметилсульфоксида (ДМСО), перемешивали смесь на магнитной мешалке до полного растворения (примерно в течение 1 ч), затем к полученной смеси, нагретой до 60-65 ºС добавляли необходимое количество флураланера, перемешивали 4 ч, затем добавляли заданное количества R-празиквантела, моксидектина и спинеторама и перемешивали до полного растворения сухих веществ, затем охлаждали до комнатной температуры. Далее в полученный прозрачный раствор вносили расчетное количество отдушки (например, Свежескошенная трава) и консерванта (например, БГТ - Бутилгидрокситолуол) и перемешивали до полного растворения последнего и получали раствор для наружного применения (капли на холку). При последующем хранении в полученном жидком составе помутнения или выпадения осадка не наблюдалось. Стабильность каждого из действующих веществ в испытуемых составах (в присутствии всех использованных вспомогательных веществ) оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Исследование показало, что активные веществ в композиции были стабильны не менее чем 27 месяцев.

Пример 2. Состав комплексной противопаразитарной композиции

Ингредиенты мг/мл Флураланер
R-празиквантел
Моксидектин
Спинеторам
Фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества 140-280
36-75
18-35
0,5-2,6
До 1 мл

Следует отметить, что при изготовлении комплексной противопаразитарной композиции могут быть использованы и другие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающиеся от использованных в примере 1, такие как, например, поверхностно-активные вещества, красители, антиоксиданты, стабилизаторы, обеспечивающие адгезию, эмульгаторы, сорастворители и т.д., известные в области технологии приготовления жидких лекарственных средств для местного применения.

В качестве растворителей могут быть использованы вода, спирт, гликоль, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, глицерин, бензиловый спирт, фенилэтиловый спирт, феноксиэтиловый спирт, этилацетат, бутилацетат, бензилбензоат, монометиловый эфир дипропиленгликоля, монобутиловый эфир диэтиленгликоля, ацетон, метилэтилкетон, ароматические и/или алифатические углеводороды, растительное или синтетическое масло, ДМФА, жидкий парафин, силикон, диметилацетамид, N-метилпирролидон или 2,2-диметил-4-оксиметилен-1,3-диоксолан и др.

В качестве носителя композиция может включать вещество, способствующее проникновению действующих веществ через кожу в кровоток, лимфу, жировую ткань и др., например, такими могут быть диметилсульфоксид, изопропилмиристат, алифатические сложные эфиры, триглицериды и жирные спирты и др.

Следует отметить, что действующие вещества в композиции могут быть использованы в любых количествах в пределах заявленного в формуле изобретения диапазона значений. Так, флураланер может быть использован в композиции в диапазоне 140-280 мг/мл, куда входят все числовые значения, подпадающие под данный диапазон, например, с шагом в 0,1 мг/мл, с шагом в 0,5 мг/мл, с шагом 1,0 мг/мл и др., например такие в мг/мл: 140,0; 141,0; 142,0; 143,0; 144,0; 145,0; 146,0; 147,0; 148,0; 149,0; 150,0; 151,0; 152,0; 153,0; 154,0; 155,0; 156,0; 157,0; 158,0; 159,0; 160,0; 161,0; 162,0; 163,0; 164,0; 165,0; 166,0; 167,0; 168,0; 169,0; 170,0; 171,0; 172,0; 173,0; 174,0; 175,0; 176,0; 177,0; 178,0; 179,0; 180,0; 181,0; 182,0; 183,0; 184,0; 185,0; 186,0; 187,0; 188,0; 189,0; 190,0; 191,0; 192,0; 193,0; 194,0; 195,0; 196,0; 197,0; 198,0; 199,0; 200,0; 201,0; 202,0; 203,0; 204,0; 205,0; 206,0; 207,0; 208,0; 209,0; 210,0; 211,0; 212,0; 213,0; 214,0; 215,0; 216,0; 217,0; 218,0; 219,0; 220,0; 221,0; 222,0; 223,0; 224,0; 225,0; 226,0; 227,0; 228,0; 229,0; 230,0; 231,0; 232,0; 233,0; 234,0; 235,0; 236,0; 237,0; 238,0; 239,0; 240,0; 241,0; 242,0; 243,0; 244,0; 245,0; 246,0; 247,0; 248,0; 249,0; 250,0; 251,0; 252,0; 253,0; 254,0; 255,0; 256,0; 257,0; 258,0; 259,0; 260,0; 261,0; 262,0; 263,0; 264,0; 265,0; 266,0; 267,0; 268,0; 269,0; 270,0; 271,0; 272,0; 273,0; 274,0; 275,0; 276,0; 277,0; 278,0; 279,0; 280,0), или же с шагом в 0,1 мг/мл (140,1;140,2… и т.д. и т. п. 279,9; 280,0) или с шагом в 0,5 мг/мл (140,5;141,0;141,5 и т.д. и т.п. до 280,0).

R-празиквантел: 36,0-75,0 мг/мл с шагом в 0,1 мг/мл, а именно, 36,1; 36,2; 36,3; 36,4; 36,5; 36,6; 36,7; 36,8; 36,9; 37,0; 37,1… и т.д. и т.п до 49,0; 49,1; 49,2; 49,3; 49,4; 49,5; 49,6; 49,7; 49,8; 49,9; 50,0; 50,1; 50,2; 50,3; 50,4; 50,5; 50,6; 50,7; 50,8; 50,9; 51,0… и т.д. и т.п до 75,0).

Моксидектин: 18-35 мг/мл с шагом в 0,1 мг/мл, а именно, 18,1; 18,2; 18,3; 18,4; 18,5; 18,6; 18,7; 18,8; 18,9; 19,0; 19,1; 19,2; 19,3; 19,4; 19,5; 19,6; 19,7; 19,8; 19,9; 20,0… и т.д. и т.п. до 30,0; 30,1; 30,2; 30,3; 30,4; 30,5; 30,6; 30,7; 30,8; 30,9; 31,0… и т.д. и т.п. до 35,0.

Спинеторам: 0,5-2,6 мг/мл с шагом в 0,01 мг/мл, а именно, 0,51; 0,52; 0,53; 0,54; 0,55; 0,56; 0,57; 0,58; 0,59; 0,6; 0,61; 0,62; 0,63; 0,64; 0,65; 0,66; 0,67; 0,68; 0,69; 0,7; 0,71; 0,72; 0,73; 0,74; 0,75; 0,76; 0,77; 0,78; 0,79; 0,8; 0,81; 0,82; 0,83; 0,84; 0,85; 0,86; 0,87; 0,88; 0,89; 0,9; 0,91; 0,92; 0,93; 0,94; 0,95; 0,96; 0,97; 0,98; 0,99; 1,0%; 1,01; 1,02; 1,03; 1,04; 1,05; 1,06; 1,07; 1,08; 1,09; 1,1… и т.д. и т.п. до 2,6.

II. Изучение активности исследуемой композиции в опытах in vitro.

Пример 3. Определение действия комплексной антипаразитарной композиции на преимагинальные стадии развития клещей in vitro

Изучение овицидных свойств исследуемых композиций проводили на яйцах клещей Sarcoptes canis, Otodectes cynotis и Ixodes spp. Для этого свежие кладки яиц клещей (по 40 яиц каждого вида) помещали в чашки Петри на фильтровальную бумагу, пропитанную композициями с различным содержанием действующих веществ, в эксперименте использовали три опытных образца:

Опытный образец 1

флураланер 140 мг/мл R-празиквантел 36 мг/мл моксидектин 18 мг/мл спинеторам 0,5 мг/мл фармацевтические приемлемые ветеринарные вспомогательные компоненты: бутилгидрокситолуол 0,1 мг/мл отдушка 2,0 мг/мл моноэтиловый эфир диэтиленгликоля, диметилсульфоксид, бензиловый спирт в весовом соотношении 4:1:1 до 1 мл

Опытный образец 2

флураланер 180 мг/мл R-празиквантел 49 мг/мл моксидектин 23 мг/мл спинеторам 1 мг/мл фармацевтические приемлемые ветеринарные вспомогательные компоненты: бутилгидрокситолуол 0,1 мг/мл отдушка 2,0 мг/мл моноэтиловый эфир диэтиленгликоля, диметилсульфоксид, бензиловый спирт в весовом соотношении 4:1:1 до 1 мл

Опытный образец 3

флураланер 280 мг/мл R-празиквантел 75 мг/мл моксидектин 35 мг/мл спинеторам 2,6 мг/мл фармацевтические приемлемые ветеринарные вспомогательные компоненты: бутилгидрокситолуол 0,1 мг/мл отдушка 2,0 мг/мл моноэтиловый эфир диэтиленгликоля, диметилсульфоксид, бензиловый спирт в весовом соотношении 4:1:1 до 1 мл

В качестве контроля была использована дистиллированная вода.

Чашки Петри помещали в термостат, инкубировали при температуре 27 °C и вели наблюдение в течение 10 суток. По истечении указанного срока ни в одном из трех экспериментах, в которых использовали опытные образцы 1-3 вылупившихся за этот период личинок обнаружено не было, тогда как в контроле наблюдалось нормальное развитие личинок. Это служило доказательством наличия овицидного действия у композиций, обеспечивающего 100%-ную гибель яиц клещей за время наблюдения.

Опытные образцы 1-3 далее использовались во всех дальнейших исследованиях, в том числе на кроликах и собаках.

Пример 4. Акарицидная активность комплексной антипаразитарной композиции в отношении клещей различных видов

В эксперименте использовали взрослых клещей 4 видов: Ixodes spp., Sarcoptes canis, Otodectes cynotis и Demodex spp. Выживаемость клещей каждого из видов испытывали, применяя композиции, раскрытые в примере 3 (опытные образцы 1-3), в качестве препарата сравнения использовали капли на холку «Бравекто® спот», в качестве контрольного образца дистиллированную воду.

Опыт проводили следующим образом. Фильтровальную бумагу в количестве 5 штук в виде круга диаметром 10 см (на 1 см больше диаметра стандартной чашки Петри) размещали горизонтально на невпитывающей поверхности керамической плитки и с помощью пипетки равномерно наносили на них по отдельности исследуемые комплексные антипаразитарные композиции (опытные образцы 1-3), препарат сравнения «Бравекто® спот он» (опытный образец 4) и дистиллированную воду. После испарения испытуемых растворов бумагу помещали на дно чашек Петри так, чтобы края слегка загибались на стенки чашки. Продолжительность контакта клещей, которых брали в количестве 30 штук для каждого из испытуемых растворов с бумагой, составляло 10 мин. Учет результатов опыта проводили через 1 ч, 2 ч, 6 ч, 12 ч и 24 ч. К живым относили особей, способных к передвижению, к категории «мертвые» - неподвижных клещей, не реагирующих на тепло руки и дыхание, а также слабоподвижных клещей с резкими нарушениями координации. Результаты эксперимента приведены в таблице 1.

Таблица 1. Акарицидная активность комплексной антипаразитарной композиции в отношении взрослых особей клещей различных видов

Вид клещей Состав Число погибших особей через 1 час 2 ч 6ч 12 ч 24ч Ixodes spp.
 
 
 
  Опытный
образец 1 3 14 30 30 30 Опытный 4 15 30 30 30 образец 2 Опытный
образец 3 6 16 30 30 30 Опытный
образец 4 0 0 0 1 29 Дистиллированная вода 0 0 0 0 0 Sarcoptes canis
 
 
 
  Опытный
образец 1 3 11 30 30 30 Опытный
образец 2 4 12 30 30 30 Опытный
образец 3 4 14 30 30 30 Опытный
образец 4 0 0 0 1 30 Дистиллированная вода 0 0 0 0 0 Otodectes cynotis
 
 
 
  Опытный
образец 1 5 9 30 30 30 Опытный
образец 2 6 10 30 30 30 Опытный
образец 3 6 11 30 30 30 Опытный
образец 4 0 0 0 0 30 Дистиллированная вода 0 0 0 0 0 Demodex spp.
 
 
 
  Опытный
образец 1 0 0 30 30 30 Опытный
образец 2 0 0 30 30 30 Опытный
образец 3 0 0 30 30 30 Опытный
образец 4 0 0 0 7 30 Дистиллированная вода 0 0 0 0 0

Согласно данным, представленным в таблице 1, исследуемые образцы 1-3 в отличие от образца 4, демонстрирует in vitro более высокую и быстро проявляющуюся акарицидную активность в отношении Ixodes spp., Sarcoptes canis, Otodectes cynotis и Demodex spp.

Пример 5. Эффективность композиций в ингибировании развития яиц блох

Яйца блох для проведения эксперимента получали по известной методике от инфестированной самцами и самками Ctenocephalides canis белой лабораторной мыши, которую сразу после заражения помещали на черную бумагу, размещенную на дне трехлитрового сосуда (Методы лабораторных исследований и испытаний медико-профилактических дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности: Руководство. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010, 615 с.). Из листа с отложенными яйцами вырезали фрагменты размером 5х5 см, на каждом посчитывали их число, после чего половину образцов обрабатывали исследуемыми образцами 1-3, состав которых раскрыт в примере 3, в качестве контроля использовалась дистиллированная вода. После обработки образцы инкубировали при температуре 27 ºС в течение 5 суток и посчитывали количество вылупившихся личинок. Эффективность обработки оценивали путем сравнения средней доли (от исходного числа яиц) личинок, вылупившихся в обработанных препаратом яйцекладках, со средней долей личинок, появившихся из контрольных образцов. Согласно результатам проведенного учета средняя доля личинок, выплодившихся в контроле была более 97%, тогда как после обработки образцами 1-3 она не превышала 0,5%, что свидетельствует о высокой степени подавления процесса развития блох уже на стадии яиц.

III. Изучение активности комплексной антипаразитарной композиции в опытах in vivo

Пример 6. Определение акарицидного действия комплексной антипаразитарной композиции на кроликах

Животные

В исследование были включены клинически здоровые белые кролики, массой 1800-2200 г в количестве 45 голов, прошедшие карантин в течение 7 дней. В ходе эксперимента животные содержались в виварии, в отдельных клетках при стандартном освещении и комнатной температуре, получали одинаковый рацион, который был сбалансирован по основным питательным веществам в соответствии с нормами кормления и имели свободный доступ к питьевой воде. Общая популяция кроликов была разделена на три группы по 15 голов в каждой.

В эксперименте применяли опытные образцы составов, описанные в примере 3 (опытные образцы 1-3) и препарат сравнения «Бравекто спот он» (опытный образец 4). Перед нанесением опытных композиций у кроликов на спине или боку выбривали шерсть с получением участка кожи площадью 10 см², после чего не токсичным для кожи клеем прикрепляли пластиковый цилиндр, в который помещали по 30 голодных самок иксодовых клещей. Препараты наносили на холку однократно в объеме 0,1 мл на 1 кг массы тела животного, подсадку клещей в цилиндр проводили на 0, 2, 7, 21, 56 и 90 дни после обработки исследуемыми образцами. После каждой подсадки клещей животных помещали на 48 ч в индивидуальные клетки. Учет результатов производился через 24 и 48 ч после каждой подсадки. При этом через 24 ч оценивали жизнеспособность подсаженных клещей с определением их статуса (мертвый, живой, прикрепленный, не прикрепленный, напитавшийся, не напитавшийся), без их удаления. Через 48 ч цилиндр снимали и повторно определяли жизнеспособность клещей с последующим их удалением. Результаты эксперимента раскрыты в таблице 2.

Таблица 2. Результаты определения акарицидной активности комплексной антипаразитарной композиции на кроликах

Дни подсчета погибших клещей 0 2 7 21 28 56 90 Время после подсадки клещей (часы) 24/48 24/48 24/48 24/48 24/48 24/48 24/48 % мертвых клещей (опытный образец 1) 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 % мертвых клещей (опытный образец 2) 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 % мертвых клещей (опытный образец 3) 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 % мертвых клещей (опытный образец 4) 88/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100 100/100

Анализируя полученные данные, представленные в таблице 2, можно сделать вывод о том, что исследуемые композиции (опытные образцы 1-3) обладают более высокой акарицидной активностью, чем образец 4.

IV. Изучение активности комплексной антипаразитарной композиции на целевых животных

Эктопаразитозы

Диагностика эктопаразитозов осуществлялась общепринятыми клинико-лабораторными методами. Диагноз на арахноэнтомозы ставился на основании обнаружения блох и иксодовых клещей на кожном покрове животного. Видовую принадлежность иксодовых клещей определяли по методике Померанцева В.И. 1954 г., блох и чесоточных клещей на основе справочника «Ветеринарная энтомология и арахноэнтомология» (Поляков В. А. и др., Москва, 1990).

Пример 7. Определением скорости наступления и продолжительности защитного действия комплексной антипаразитарной композиции у собак от блох

Исследования проводились на 50 спонтанно инфестированных блохами беспородных собак, без учета их возраста и пола. При отборе животных учитывалась степень их заражения, которая должна была находиться в интервале от 20 до 60 блох. Животные рассаживались группами по вольерам и содержались под наблюдением в течение всего исследования, имели свободный доступ к питьевой воде и получали два раза в день сухой корм премиум класса.

Перед началом эксперимента собак случайным образом делили на 5 групп по 10 животных в каждой. Первую группу собак обрабатывали опытным образцом 1; 2-ю группу собак - опытным образцом 2; 3-ю группу собак - опытным образцом 3; 4-ю группу собак опытным образцом 4 (препарат «Бравекто спот он» - прототип) и 5-ю группу собак - контролем, в качестве которого была использована дистиллированная вода. Всех собак перед обработкой взвешивали. Все исследуемые составы дозировались исходя из расчета 0,1 мл на 1 кг массы тела животного. Контрольным животным наносился идентичный объем дистиллированной воды. Результаты исследования по оценке скорости наступления терапевтического эффекта при спонтанной инфестации собак блохами показаны в таблице 3.

Таблица 3. Оценкой скорости наступления терапевтического эффекта при спонтанной инфестации собак блохами

Срок после
обработки, часы Контрольная группа
(дистиллированная вода) Группы Группа сравнения Количество блох, экз. % погибших блох Опытный образец 1 Опытный образец 2 Опытный образец 3 Опытный образец 4 Количество блох, экз. % погибших блох Количество блох, экз. % погибших блох Количество блох, экз. % погибших блох Количество блох, экз. % погибших блох 0 20-60* 0 20-60* 0 20-60* 0 20-60* 0 20-60 0 2 20-60 0 2-6 90 2-6 90 2-6 90 20-60 0 4 20-60 0 0 100 0 100 0 100 20-60 0 6 20-60 0 0 100 0 100 0 100 20-60 0 12 20-60 0 0 100 0 100 0 100 2-6 90 24 20-60 0 0 100 0 100 0 100 0 100 48 20-60 0 0 100 0 100 0 100 0 100

*- минимальное и максимальное количество блох на животном в группе

Как следует из данных, представленных в таблице 3, в опытах на собаках, инфестированных блохами, были получены следующие результаты: наибольшую эффективность при применении в дозе 0,1 мл/кг веса животного продемонстрировали опытные образцы 1-3, использовавшиеся в опытной группе 1, 2 и 3. В этих группах полное уничтожение эктопаразитов было достигнуто за 4 ч, при этом 90% блох погибло уже через 2 ч. В группе, где использовался опытный образец 4 (препарат-прототип) полное уничтожение эктопаразитов достигнуто через 24 ч. В группе контроля инсектицидный эффект отсутствовал.

Для оценки продолжительности защитного эффекта от блох использовались те же собаки, что и для эксперимента по оценке скорости наступления антиблошиного действия, за которыми продолжали наблюдать в течение 196 дней, при этом обработанные собаки контактировали с собаками, зараженными блохами на протяжении всего исследования. Результаты исследования по продолжительности эффекта представлены в таблице 4.

Таблица 4. Оценкой длительности защиты собак от блох

Срок после
обработки, дни Контрольная группа
(дистилл. вода) Группы Группа сравнения Кол-во блох, экз. Эффективность, % Опытный образец 1 Опытный образец 2 Опытный образец 3 Опытный образец 4 Кол-во блох, экз. Эффективность, % Кол-во блох, экз. Эффективность, % Кол-во блох, экз. Эффек
тивность, % Кол-во блох, экз. Эффективность, % 2 20-60* 0 0* 100 0* 100 0* 100 0* 100 7 + 0 0 100 0 100 0 100 0 100 21 + 0 0 100 0 100 0 100 0 100 35 + 0 0 100 0 100 0 100 0 100 55 + 0 0 100 0 100 0 100 0 100 90 + 0 0 100 0 100 0 100 0 100 150 + 0 0 100 0 100 0 100 + 0 196 + 0 0 100 0 100 0 100 + 0

% - доля животных, свободных от блох

+ количество блох увеличивается согласно их циклу развития

*- минимальное и максимальное количество блох на животном в группе

Как следует из данных, представленных в таблице 4 опытные образцы 1-3 обеспечивают защиту собак от блох в течение 28 недель. Препарат «Бравекто спот он», используемый в качестве препарата сравнения (прототип) обеспечил защиту в течение 90 дней.

Таким образом, из таблиц 3 и 4, явным образом, видны преимущества исследуемых образцов 1-3 перед прототипом (образец 4), а именно, более быстрое уничтожение блох (100% уничтожение через 4 ч против 12-24 ч у прототипа) и более длительный защитный эффект от блох (28 недель против 12 недель у прототипа).

Пример 8. Терапевтически эффективность исследуемых композиций для защиты собак от иксодовых клещей

Исследования проводились на 50 спонтанно инфестированных клещами беспородных собаках, без учета их возраста и пола, которые находились в содержании в лесистой местности у водоема с возможностью свободного выгула. Данная местность из года в год продолжает оставаться природным биотопом иксодовых клещей, нападению которых регулярно подвергаются местные домашние животные, в сезон их активности. В опыте участвовали собаки разных субпопуляций данной местности.

Степень заражения собак находилась в диапазоне от 10-20 клещей на одно животное. Все собаки имели свободный доступ к питьевой воде и получали сухой корм премиум класса.

Перед началом эксперимента собак случайным образом делили на 5 групп по 10 животных в каждой: 4 опытных и 1 контрольная, в которой животным применяли дистиллированную воду.

Три опытные группы собак обрабатывались составами, которые раскрыты в примере 3 (опытные образцы 1, 2 и 3), в четвертой группе применяли препарат «Бравекто спот он» согласно инструкции по его применению. Всех опытных собак перед обработкой взвешивали. Все составы применялся в дозе 0,1 мл на 1 кг веса животного. Контрольным животным наносился идентичный объем дистиллированной воды.

При оценке эффективности учитывались показатели скорости наступления акарицидного эффекта. Результаты исследования представлены в таблице 5.

Таблица 5. Терапевтически эффективность комплексной антипаразитарной композиций при спонтанной инфестации собак иксодовыми клещами

Срок после
обработки, часы Контрольная группа
(дистиллированная вода) Группы Группа сравнения количество клещей, экз. % погибших клещей опытный образец 1 опытный образец 2 опытный образец 3 опытный образец 4 количество клещей, экз. % погибших клещей количество клещей, экз. % погибших клещей количество клещей, экз. % погибших клещей количество клещей, экз. % погибших клещей 0 10-20* 0 10-20* 0 10-20* 0 10-20* 0 10-20* 0 2 10-20 0 5-10 50 5-10 50 5-10 50 10-20 0 4 10-20 0 1-2 90 1-2 90 1-2 90 10-20 0 6 10-20 0 0 100 0 100 0 100 10-20 0 12 10-20 0 0 100 0 100 0 100 10-20 0 24 10-20 0 0 100 0 100 0 100 0-1 90 48 10-20 0 0 100 0 100 0 100 0 100

Как видно из таблицы 5, наилучшие результаты были получены у опытных образцов 1-3, которые по скорости уничтожения клещей превзошли образец 4 («Бравекто спот он»), уничтожение 100% клещей с помощью опытных образцов 1-3 произошло через 6 ч после однократного нанесения на животное, в то время как у препарата прототипа уничтожение более 90% клещей произошло только через 24 ч.

Пример 9. Оценка продолжительности защитного акарицидного действия испытуемых композиций у собак

В исследовании принимали участие те же животные, что и в примере 8, за которыми по окончании предыдущего исследования, которое закончилось через 48 ч, продолжали наблюдать для оценки продолжительности защитного действия. Результаты исследования представлены в таблице 6.

Таблица 6. Оценка продолжительности защитного акарицидного действия комплексной антипаразитарной композиции у собак

Дни Эффективность Контрольная группа
(дистиллированная вода) Опытный образец 1 Опытный образец 2 Опытный образец 3 Опытный образец 4
(Бравекто спот он) 2 - 100% 100% 100% 100% 7 - 100% 100% 100% 100% 21 - 100% 100% 100% 100% 56 - 100% 100% 100% 100% 90 - 100% 100% 100% 95% 105 - 100% 100% 100% 5% 150 - 100% 100% 100% - 196 - 100% 100% 100% - 210 - 75% 75% 75% -

Как видно из таблицы 6, у опытных образцов 1-3 защитное действие длилось вплоть до 28 недель, в то время как защитное действие у образца 4 (препарат-прототип) длилось только около 13 недель, контрольный образец ожидаемо не оказывал никакого защитного действия.

Пример 10. Терапевтическая эффективность композиций против власоедов у собак

В испытании участвовали 50 беспородных собак, спонтанно инфестированных власоедами. Собаки были разделены на 5 групп, по 10 животных в каждой. В группах 1-3 были применены опытные образцы 1, 2 и 3, в группе 4 применяли препарат сравнения «Бравекто спот он», в 5 контрольной группе применялась дистиллированная вода. Собаки перед экспериментом взвешивали и применяли составы исходя из дозы 0,1 мл на 1 кг веса животного однократно в область холки, действие составов оценивали по количеству освободившихся от паразитов животных, через 2, 4, 6, 12 и 24 ч. Результаты эксперимента приведены в таблице 7.

Таблица 7. Результаты оценки эффективности комплексной антипаразитарной композиций против власоедов у собак

Группа
Голов
изначально % освободившихся от паразитов животных. Через
2 ч Через
4 ч Через
6 ч Через
12 ч Через
24 ч Опытный образец 1 10 50 98 100 100 100 Опытный образец 2 10 50 98 100 100 100 Опытный образец 3 10 50 98 100 100 100 Опытный образец 4
(«Бравекто спот он») 10 0 0 20 95 100 Опытный образец 5
(дистиллированная вода) 10 0 0 0 0 0

Как видно из таблицы 7, исследуемые образцы 1-3 является высокоэффективными в отношении власоедов у собак, позволяющие устранить власоедов у 98% собак уже через 4 ч, в то время как образец 4 (препарат - прототип) позволяет избавиться от власоедов у 95% собак только через 12 ч.

Гельминтозы

Пример 11. Оценка эффективности композиций для защиты собак от кишечных гельминтов Toxocara canis

Исследования проводились на беспородных собаках разных возрастов, пораженных Toxocara canis. Наличие глистной инвазии Toxocara canis определяли методом МакМастера. Видовую принадлежность яиц глистов определяли по паразитологическому атласу.

Из популяции собак приюта для бездомных животных отобрано 40 собак, у которых по результату копроовоскопического исследования обнаружены яйца Toxocara canis. Всех собак разделили на 4 группы по 10 голов в каждой, из которых три группы обрабатывалось опытными образцами 1, 2 и 3 (смотри пример 3), а четвертая группа, контрольная, была подвергнута обработке дистиллированной водой (опытный образец 4).

Все собаки до проведения обследования не получали антигельминтных препаратов в течение более, чем 30 дней.

Повторное копроовоскопическое исследование проводилось спустя 14 дней после обработки собак исследуемыми композициями.

Результаты терапевтической эффективности у животных экспериментальных групп приведены в таблице 8.

Таблица 8. Результаты терапевтической эффективности комплексной антипаразитарной композиции против Toxocara canis у собак

Группа Количество животных в опыте, гол. Освободилось от инвазии после обработки, гол. Среднее количество яиц гельминтов, шт. Эффективность, % до лечения после лечения Опытный образец 1 10 10 968,65±274,60 0 100,0 Опытный образец 2 10 10 1457±478,91 0 100,0 Опытный образец 3 10 10 874,71±247,24 0 100,0 Опытный образец 4 10 0 1023,23±145,36 1248,47±424,70 0,0

Как следует из данных таблицы 8, в результате обработки собак исследуемыми образцами, составы в группах 1-3 показали 100% эффект против Toxocara canis у собак, в то время как дистиллированная вода ожидаемо не оказала никакого эффекта.

Повторное копроовоскопическое исследование спустя 14 дней показало полное отсутствие паразитов у опытных животных, которым применяли опытные образцы 1, 2 и 3.

Пример 12. Оценка эффективности исследуемых композиций для защиты собак от микрофилярий Dirofilaria spp.

Исследования проводились на беспородных собаках разных возрастов, пораженных микрофиляриями Dirofilaria spp. Наличие инвазии Dirofilaria spp. подтверждали комплексно по результатам клинико-лабораторных исследований. Для определения наличия микрофилярий в крови использовали метод J.I. Knott. Для исключения наличия имаго дирофилярий в сердце использовали эхокардиографию и рентгенографию внутренних органов. В результате проведения обследования, взрослых дирофилярий в организме собак обнаружено не было. Видовую принадлежность микрофилярий устанавливали методом полимеразно-цепной реакции. В эксперимент было отобрано 40 собак, у которых в крови были обнаружены микрофилярии Dirofilaria spp.

Всех собак делили на 4 группы по 10 голов в каждой, три из которых обрабатывались опытными образцами 1, 2 и 3 (состав в примере 3), а четвертая группа, контрольная, была подвергнута обработке дистиллированной водой.

Все собаки до проведения обследования не получали антигельминтных препаратов в течение более, чем 30 дней.

Повторное исследование на микрофилярии проводилось спустя 28, 56 и 84 дня после обработки собак исследуемыми препаратами. Продолжительность наблюдения позволяет также определить продолжительность защитного действия препарата.

Результаты эффективности против микрофилярий Dirofilaria spp. у собак приведены в таблице 9.

Таблица 9. Результаты оценки эффективности комплексной антипаразитарной композиции против микрофилярий Dirofilaria spp. у собак

Группа Количество животных в опыте, гол. Освободилось от инвазии после обработки, гол. Среднее количество микрофиллярий, шт. Эффективность, % до лечения после лечения Опытный образец 1 10 10 20 0 100,0 Опытный образец 2 10 10 14 0 100,0 Опытный образец 3 10 10 17 0 100,0 Опытный образец 4 10 0 18 23 0,0

По данным таблицы 9 в результате обработки собак исследуемыми композициями в группах, где применялись опытные образцы 1,2 и 3 эффект против микрофилярий Dirofilaria spp. у собак составил 100%.

Повторное исследование на микрофилярии спустя 28, 56 и 84 дня показало полное отсутствие паразитов у опытных животных, которым применяли опытные образцы 1,2 и 3.

Пример 13. Оценка эффективности исследуемых образцов композиций для защиты собак от Ancylostoma caninum

Исследования проводились на беспородных собаках разных возрастов, пораженных Ancylostoma caninum. Наличие глистной инвазии Ancylostoma caninum определяли методом копроовоскопического исследования каловых масс по методу МакМастера.

Из популяции собак приюта для бездомных животных отобрано 40 собак, у которых по результату копроовоскопического исследования обнаружены яйца Ancylostoma caninum. Всех собак делили на 4 группы по 10 голов в каждой, из которых три группы обрабатывалось опытными образцами 1, 2 и 3 (пример 3), а четвертая группа, контрольная, была подвергнута обработке дистиллированной водой.

Все собаки до проведения обследования не получали антигельминтных препаратов в течение более, чем 30 дней.

Повторное копроовоскопическое исследование проводилось спустя 7 дней после обработки собак препаратами. Результаты эффективности применения испытуемых составов приведены в таблице 10.

Таблица 10. Оценка эффективности применения комплексной антипаразитарной композиции исследуемого препарата против Ancylostoma caninum у собак

Группа Количество животных в опыте, гол. Освободилось от инвазии после обработки, гол. Среднее количество яиц гельминтов, шт. Эффективность, % до лечения после лечения Опытный образец 1 10 10 874,44±123,14 0 100,0 Опытный образец 2 10 10 975,72±113,64 0 100,0 Опытный образец 3 10 10 832,34±156,81 0 100,0 Опытный образец 4 10 0 1047,76±159,36 917,35±201,48 0

Как следует из таблицы 10, опытные образцы, применяемые в группах 1-3 оказывают 100% эффективность против Ancylostoma caninum у собак.

Повторное копроовоскопическое исследование через 7 дней показало полное отсутствие паразитов у опытных животных, которым применяли опытные образцы 1,2 и 3.

Пример 14. Терапевтическая эффективность испытуемых образцов композиций для защиты собак от Mesocestoides lineatus

Исследования проводились на беспородных собаках разных возрастов, пораженных Mesocestoides lineatus. Наличие глистной инвазии Mesocestoides lineatus определяли методом копроовоскопического исследования каловых масс по методу МакМастера. Видовую принадлежность яиц глистов определяли по паразитологическому атласу.

Из популяции собак приюта для бездомных животных было отобрано 40 собак, у которых по результату копроовоскопического исследования обнаружены яйца Mesocestoides lineatus. Всех собак делили на 4 групп по 10 голов в каждой, из которых три группы обрабатывалось опытными образцами 1, 2 и 3 (пример 3), а четвертая группа, контрольная, была подвергнута обработке дистиллированной водой.

Все собаки до проведения обследования не получали антигельминтных препаратов в течение более, чем 30 дней.

Повторное копроовоскопическое исследование проводилось спустя 7 дней после обработки собак препаратами.

Результаты терапевтической эффективности против Mesocestoides lineatus у собак приведены в таблице 11.

Таблица 11. Оценка эффективности применения комплексной антипаразитарной композиции исследуемого препарата против Mesocestoides lineatus у собак

Группа Количество животных в опыте, гол. Освободилось от инвазии после обработки, гол. Среднее количество яиц гельминтов, шт. Эффективность, % до лечения после лечения Опытный образец 1 10 10 732,29±111,36 0 100,0 Опытный образец 2 10 10 1235,14±237,18 0 100,0 Опытный образец 3 10 10 1028,47±364,37 0 100,0 Опытный образец 4 10 0 1428,42±389,14 1430±249,31 0,0

Как видно из таблицы 11, опытные образцы 1, 2 и 3, применяемые в опытных группах 1-3 оказывает 100% эффективность против Mesocestoides lineatus у собак.

Повторное копроовоскопическое исследование через 7 дней показало полное отсутствие паразитов у опытных животных, которым применяли опытные образцы 1, 2 и 3.

Пример 15. Определение безопасности применения исследуемых составов собакам в виде капель на холку

Исследования проводились на 40 беспородных собаках, без учета их возраста и пола. Животные были осмотрены ветеринарным врачом, в результате осмотра было сделано заключение, что животные были здоровы. Все собаки имели свободный доступ к питьевой воде и получали сухой корм премиум класса.

Перед началом эксперимента собак случайным образом делили на 4 группы по 10 животных. Три группы обрабатывались опытными образцами 1, 2 и 3 (пример 3), четвертая препаратом сравнения «Бравекто спот он». Всех опытных собак перед обработкой взвешивали. Составы применялись в дозе 0,1 мл на 1 кг веса животного.

Нежелательные реакции учитывались по частоте встречаемости.

В группах, где были использованы опытные образцы 1-3 нежелательных реакций зарегистрировано не было. В группе 4, у одной собаки было зарегистрировано шелушение кожи в месте нанесения, так же у одной из собак из 4 группы было зафиксировано небольшая алопеция. При определении токсичности композиция по изобретению была отнесена к 4 классу опасности согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76).

Таким образом, составы по изобретению не вызывают никаких нежелательных явлений при их местном нанесении.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате реализации настоящего изобретения получена композиция для наружного применения для собак в форме капель на холку, обладающая комплексным антипаразитарным действием, содержащая флураланер, моксидектин, R-празиквантел, спинеторам и фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества, которая при однократном применении обеспечивает 100% терапевтическую эффективность в отношении широкого спектра как взрослых эктопаразитов кошек (клещей, блох, власоедов и др.), так и преимагинальных стадий развития клещей и блох, а также эндопаразитов собак (нематод, цестод).

Композиция характеризуется надежным защитным действием в отношении иксодовых клещей (28 недель против 12 недель у прототипа), ускоренной акарицидной активностью (6 ч против 24-48 ч у препарата-прототипа). Предлагаемая к защите композиция демонстрирует более продолжительное, чем ближайший аналог, инсектицидное действие против блох (до 28 недель против 12 недель у препарата-прототипа), а также ускоренное противоблошиное действие (за 4 ч гибнет 100% блох против 12-24 ч у препарата прототипа), расширение спектра действия на цестод и нематод за счет использования в составе R-празиквантела и моксидектина, причем композиция по изобретению проявляет противогельминтное действие даже при меньшем, чем обычно используется в ветеринарной практике количестве R-празиквантела и моксидектина, а ввиду того, что количество действующих веществ, а особенно спинеторама, применяемого согласно настоящему изобретению, в несколько раз ниже, чем в коммерчески доступных препаратах, то воздействие активных ингредиентов на окружающую среду снижено, композиция не обладает побочными эффектами, является безопасной при применении.

Изобретение относится к области ветеринарии и фармацевтики, а именно к композиции для наружного применения в форме капель на холку для собак, обладающей антипаразитарным действием, содержащей 140-280 мг/мл флураланера, 18-35 мг/мл моксидектина, 36-75 мг/мл R-празиквантела, 0,5-2,6 мг/мл спинеторама и фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества до 1 мл. Технический результат заключается в быстром уничтожении эктопаразитов, в частности блох и клещей, длительном профилактическом действии в отношении заражения эктопаразитами, расширении спектра действия на цестод и нематод, отсутствии побочных эффектов, удобстве применения, безопасности. 1 з.п. ф-лы, 11 табл., 15 пр.

1. Композиция для наружного применения для собак в форме капель на холку, обладающая противопаразитарным действием, содержащая флураланер, отличающаяся тем, что содержит моксидектин, R-празиквантел, спинеторам и фармацевтически приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества, при следующем содержании компонентов, мг/мл:

флураланер 140-280 моксидектин 18-35 R-празиквантел 36-75 спинеторам 0,5-2,6 фармацевтические приемлемые ветеринарные вспомогательные вещества до 1 мл

2. Композиция для наружного применения для собак в форме капель на холку по п. 1, обладающая инсектоакарицидным и противогельминтным действием.