ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим один или более экстрактов и/или соединений, обладающих ретинолоподобной активностью и свойствами, и способам применения этих композиций для лечения глаз.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

«Сухой глаз представляет собой многофакторное заболевание глазной поверхности, которое характеризуется потерей гомеостаза слезной пленки и сопровождается глазными симптомами, при которых нестабильность и гиперосмолярность слезной пленки, воспаление и повреждение глазной поверхности, а также нейросенсорные аномалии играют этиологическую роль». Craig, J.P. et al. TFOS DEWS II definition and classification report. Ocul Surf. 2017; 15: 276-283. Синдром сухого глаза может быть результатом аномального или недостаточного образования слезной жидкости и дефицита секреции муцина (т.е. сухого кератоконъюнктивита). Симптомы синдрома сухого глаза могут проявляться в результате различных основных расстройств, таких как аутоиммунные заболевания, поражающие слезные (т.е. продуцирующие слезы) железы, такие как ревматоидный артрит, синдром Шегрена, системная красная волчанка, системный склероз и саркоидоз. Синдром сухого глаза также может возникнуть после хирургического вмешательства на глазах, такого как операция методом Lasik®. По оценкам, в США синдромом сухого глаза страдает более 13 миллионов человек.

Независимо от лежащих в основе патологических состояний синдром сухого глаза обычно включает быстрое разрушение предглазной слезной пленки, что приводит к дегидратации открытой внешней поверхности. Нормальное образование слезной жидкости необходимо для сохранения увлажненности роговицы и конъюнктивы, что в свою очередь помогает предотвратить изъязвление, а также сохранить прозрачность роговицы. Кроме того, слезы облегчают движение века по поверхности глаза (например, моргание) и удаление из глаза инородных веществ. Слезная жидкость также обычно содержит лизоцим, который помогает предотвратить инфекции глаза. Синдром сухого глаза может вызывать как легкий дискомфорт, так и сильную боль в глазах. Когда это происходит в течение продолжительных периодов времени, может возникать размытое зрение, зернистость и/или ощущение жжения и зуда. Если заболевание остается без лечения, оно также может привести к язвам роговицы и/или рубцеванию.

Симптомы синдрома сухого глаза включают боль или усталость глаз, усиленное моргание и воспаленные глаза. Кроме того, бактерии могут проникать через царапины и вызывать инфекцию, и в случае, если царапина достаточно глубока, она может даже повлиять на зрение. Помимо напряжения глаз причины сухости глаз включают синдром Шегрена, синдром Стивенса-Джонсона, ожоги и травмы глаз, а также побочные эффекты гипотензивных препаратов, транквилизаторов, глазных капель для лечения глаукомы и прочих подобных препаратов.

Глазные капли являются эффективным способом лечения синдрома сухого глаза. Такие глазные капли обычно содержат активные вещества для лечения синдрома сухого глаза, широко распространенным активным веществом в таких каплях является гиалуроновая кислота. Гиалуроновая кислота является макромолекулярным веществом биологического происхождения, обладает чрезвычайно высоким водоудерживанием и характерными свойствами, такими как высокая вязкоупругость, хорошие загущающие характеристики и высокая способность к нитеобразованию, и ее используют в качестве увлажнителя в средствах для местного применения при лечении различных видов кожных проблем и т.п. В случае синдрома сухого глаза, вызванного синдромом Шегрена, при котором сухость наблюдается во всем организме, эффективно применяют глазные капли, содержащие гиалуроновую кислоту. Однако при введении в виде глазных капель гиалуроновая кислота имеет относительно короткое время пребывания на роговице, поэтому влияние глазных капель с гиалуроновой кислотой длится всего около 2-3 часов, что означает, что пациент должен чаще использовать капли (например, от 5 до 10 раз в день).

Гиалуроновая кислота (ГК) вырабатывается эпителиальными клетками роговицы глаза. Примечательно, что значительно более высокие концентрации гиалуроновой кислоты были обнаружены в роговицах молодых людей (по сравнению с людьми старшего возраста). (См. Pacella, E., Pascella, F., De Paolis, G., et al. Glycosaminoglycans in the human cornea: age-related changes. Ophthalmol. Eye Dis. 7:1-5, 2015).

Гиалуроновую кислоту также можно использовать для обычного заживления ран, и она необходима для поддержания общего здоровья глаз.

Таким образом, существует потребность в офтальмологической фармацевтической композиции, которая бы стимулировала и/или улучшала выработку и/или высвобождение гиалуроновой кислоты из роговицы или в роговицу.

Авторы настоящего изобретения обнаружили соединения и/или экстракты, обладающие ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, которые могут индуцировать, стимулировать и/или улучшить продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу.

Соответственно, один аспект настоящего изобретения относится к композициям, содержащим безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу.

Другой аспект настоящего изобретения относится к композициям, содержащим безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, причем композиции можно вводить пациентам с концентрацией гиалуроновой кислоты в слезной жидкости менее 10 (или около 10) нанограмм, необязательно менее 15 (или около 15) нанограмм, необязательно менее 20 (или около 20) нанограмм или необязательно менее 25 (или около 25) нанограмм на миллиграмм белков таким образом, что концентрация гиалуроновой кислоты в их слезной жидкости превышает или становится равной 10 (или около 10), необязательно превышает или становится равной 15 (или около 15), необязательно превышает или становится равной 20 (или около 20), необязательно превышает или становится равной 25 (или около 25) нанограмм, необязательно превышает или становится равной 30 (или около 30), необязательно превышает или становится равной 35 (или около 35), необязательно превышает или становится равной 40 (или около 40) или необязательно превышает или становится равной 45 (или около 45) или более нанограмм на миллиграмм белков до 100 (или около 100), необязательно 90 (или около 90), необязательно 80 (или около 80), необязательно 70 (или около 70) или необязательно 60 (или около 60) нанограмм на миллиграмм белков.

В некоторых вариантах осуществления вышеописанную концентрацию гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента, обусловленную соединениями и/или экстрактами, имеющими ретинолоподобные свойства и/или полезные эффекты, поддерживают в течение периода до по меньшей мере около 2 часов, необязательно около 4 часов, необязательно около 6 часов, необязательно около 8 часов, необязательно около 10 часов, необязательно около 12 часов или необязательно от около 12 до около 24 часов.

Концентрации гиалуроновой кислоты, подробно описанные выше, определяют с помощью метода Дрейфуса (описанного ниже в определениях).

Другой аспект настоящего изобретения относится к композициям, содержащим безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для лечения синдрома сухого глаза.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам профилактики и/или лечения (например, уменьшения) симптомов нарушений глаз, связанных с синдромом сухого глаза и/или возникающих в результате снижения или низкого уровня продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, путем введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, имеющих ретинолоподобные свойства и/или полезные эффекты.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам стимулирования заживления или повышения скорости заживления ран в и/или на поверхности глаза (например, не относящиеся к синдрому сухого глаза травмы глаза, послеоперационные хирургические или неспецифические раны) пациента путем введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, или источников экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, например, для повышения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, в некоторых вариантах осуществления помимо концентрации гиалуроновой кислоты, вырабатываемой таким пациентом без введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами).

ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к композициям для лечения глаз, содержащим:

i) безопасное и эффективное количество соединения и/или экстракта, обладающего ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для применения при лечении глаз, выбранного из одного или более из растительных экстрактов, или источников экстрактов, растений рода Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella; бактериальных экстрактов, или источников экстрактов, бактерий рода Actinomyces; и соединений формулы (I):

где

пунктирными линиями показана простая или двойная связь; необязательно одна из пунктирных линий представляет двойную связь;

R₁ представляет собой H, углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода;

R₂ представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно метиловую (-CH₃) или метильную (= CH₂) группу; углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно от 1 до 10 атомов углерода; необязательно 6 атомов углерода; необязательно ароматическую группу, необязательно фенильную группу; необязательно 2-метил-проп-1,3-диен; и

ii) офтальмологически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение относится к способам профилактики или лечения симптомов, связанных с сухим глазом (необязательно у пациента, нуждающегося в таком профилактике и лечении), включающим стадию введения композиции, содержащей:

i) безопасное и эффективное количество соединения и/или экстракта, обладающего ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для применения при лечении синдрома сухого глаза, выбранного из одного или более из растительных экстрактов, или источников экстрактов, растений рода Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella; бактериальных экстрактов, или источников экстрактов, бактерий рода Actinomyces; и соединений формулы (I):

где

пунктирными линиями показана простая или двойная связь; необязательно одна из пунктирных линий представляет двойную связь;

R₁ представляет собой H, углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода;

R₂ представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно метильную (-CH₃) или метиленовую (= CH₂) группу; углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно от 1 до 10 атомов углерода; необязательно 6 атомов углерода; необязательно ароматическую группу, необязательно фенильную группу; необязательно 2-метил-проп-1,3-диен; и

ii) офтальмологически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение относится к способам лечения пациентов со сниженным или низким уровнем продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, включающим стадию местного введения в глаз пациента композиции, содержащей:

i) безопасное и эффективное количество соединения и/или экстракта, обладающего ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для применения при лечении синдрома сухого глаза, выбранного из одного или более из растительных экстрактов, или источников экстрактов, растений рода Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella; бактериальных экстрактов, или источников экстрактов, бактерий рода Actinomyces; и соединений формулы (I):

где

пунктирными линиями показана простая или двойная связь; необязательно одна из пунктирных линий представляет двойную связь;

R₁ представляет собой H, углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода;

R₂ представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно метильную (-CH₃) или метиленовую (=CH₂) группу; углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно от 1 до 10 атомов углерода; необязательно 6 атомов углерода; необязательно ароматическую группу, необязательно фенильную группу; необязательно 2-метил-проп-1,3-диен; и

ii) необязательно офтальмологически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение относится к способам профилактики или лечения симптомов синдромов сухого глаза, включающим стадию местного введения пациенту (необязательно пациенту, нуждающемуся в такой профилактике или уменьшении симптомов сухого глаза) композиции, содержащей:

i) безопасное и эффективное количество соединения и/или экстракта, обладающего ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для применения при лечении синдрома сухого глаза, выбранного из одного или более из растительных экстрактов, или источников экстрактов, растений рода Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella; бактериальных экстрактов, или источников экстрактов, бактерий рода Actinomyces; и соединений формулы (I):

где

пунктирными линиями показана простая или двойная связь; необязательно одна из пунктирных линий представляет двойную связь;

R₁ представляет собой H, углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода;

R₂ представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно метильную (-CH₃) или метиленовую (=CH₂) группу; углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно от 1 до 10 атомов углерода; необязательно 6 атомов углерода; необязательно ароматическую группу, необязательно фенильную группу; необязательно 2-метил-проп-1,3-диен; и

ii) необязательно офтальмологически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение относится к способам стимулирования заживления или повышения скорости заживления ран в и/или на поверхности глаза пациента (необязательно при потребности пациента в таком лечении глазных ран) путем введения композиций (т. е. композиций, которые повышают продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, в некоторых вариантах осуществления помимо концентрации гиалуроновой кислоты, вырабатываемой таким пациентом без (или в отсутствии) введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами), содержащих:

i) безопасное и эффективное количество соединения и/или экстракта, обладающего ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для применения при лечении синдрома сухого глаза, выбранного из одного или более из растительных экстрактов, или источников экстрактов, растений рода Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella; бактериальных экстрактов, или источников экстрактов, бактерий рода Actinomyces; и соединений формулы (I):

где

пунктирными линиями показана простая или двойная связь; предпочтительно одна из пунктирных линий представляет двойную связь;

R₁ представляет собой H, углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода;

R₂ представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; предпочтительно метильную(-CH₃) или метиленовую (=CH₂) группу;

a представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; предпочтительно от 1 до 10 атомов углерода; более предпочтительно 6 атомов углерода; предпочтительно ароматическую группу, предпочтительно фенильную группу; предпочтительно 2-метил-проп-1,3-диен;

ii) необязательно офтальмологически приемлемый носитель.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На Фиг. 1 представлены столбиковые диаграммы, на которых показана экспрессия гена HAS3, индуцированная экстрактом лимонной осины, в клетках эпителия роговицы.

На Фиг. 2 представлены столбиковые диаграммы, на которых показана секреция ГК, индуцированная экстрактом лимонной осины, в клетках эпителия роговицы.

На Фиг. 3 представлены столбиковые диаграммы, на которых показана экспрессия гена HAS3, индуцированная экстрактом лимонной осины, в клетках эпителия роговицы.

На Фиг. 4 представлены столбиковые диаграммы, на которых показана секреция ГК, индуцированная экстрактом лимонной осины, в клетках эпителия роговицы.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Считается, что в соответствии с описанием, представленным в настоящем документе, специалист в данной области сможет использовать это изобретение в самом полном объеме. Следующие специфические варианты осуществления можно рассматривать лишь в качестве иллюстративных примеров, которые ни в коей мере не ограничивают остальную часть настоящего описания.

Композиции настоящего изобретения могут содержать, состоять из или состоять по существу из элементов, стадий и ограничений изобретения, описанных в настоящем документе, а также любых из дополнительных или необязательных ингредиентов, компонентов или ограничений, описанных в настоящем документе.

В настоящем документе термин «содержащий» (и его грамматические разновидности) применяется в широком смысле в значении «имеющий» или «включающий в себя», а не в узком смысле в значении «состоящий только из». В настоящем документе считается, что формы единственного числа охватывают как множественное, так и единственное число.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют общепринятое значение, понятное любому специалисту в области, к которой относится изобретение. Кроме того, все публикации, заявки на патенты, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем документе, включены в настоящий документ в полном объеме путем ссылки в той мере, в которой они не противоречат настоящему описанию. В настоящем документе все процентные значения приведены по массе от общей композиции, если не указано иное.

Используемый в настоящем документе термин «роговица» или «роговичный» включает в себя и/или относится к прозрачной передней части глаза, которая покрывает радужную оболочку, зрачок и переднюю камеру, при этом слои данной прозрачной передней части включают в себя слой эпителия роговицы (содержащий клетки эпителия роговицы), боуменову мембрану (также известную как передняя ограничивающая мембрана), строму роговицы (также собственное вещество), десцеметовую мембрану (также заднюю пограничную мембрану) и эндотелий роговицы (простой сквамозный или низкокубический монослой клеток, богатых митохондриями, толщина которого составляет около 5 мкм).

В настоящем документе фраза «сниженный или низкий уровень продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу» означает концентрацию гиалуроновой кислоты, которая меньше концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости нормального (т. е. здорового) человека или в некоторых вариантах осуществления менее 25 (или около 25) нанограмм на миллиграмм белков, как определено способом, описанным в Dreyfuss JL, Regatieri CV, Coelho B, et al. Altered hyaluronic acid content in tear fluid of patients with adenoviral conjunctivitis. An Acad Bras Cienc. 2015;87(1):455-462. Этот способ (метод Дрейфуса) воспроизводится ниже.

Отбор проб

Для отбора слезной жидкости полоски Ширмера помещали на височную сторону каждого глаза под веком на 5 минут без применения местных анестетиков. Полоски высушивали при комнатной температуре и хранили при -20°C до анализа.

Подготовка пробы слезной жидкости

Слезные соединения элюировали с полосок Ширмера с использованием 100 мкл дистиллированной воды и проводили анализ содержания гиалуроновой кислоты и белка.

Измерение гиалуроновой кислоты

Содержание гиалуроновой кислоты в слезной жидкости определяли с помощью неизотопного флуороанализа (см. Martins Jr, Passerotti CC, Maciel RM, Sampaio Lo, Dietrich CP и Nader HB. 2003.) Practical determination of hyaluronan by a new noncompetitive fluorescence-based assay on serum of normal and cirrhotic patients. Anal Biochem 319: 65-72.) Элюированные слезные жидкости и стандартные концентрации гиалуроновой кислоты (Sigma, г. Сент-Луис, штат Миссури) добавляли в 96-луночные планшеты (FluoNUNC Maxisorp Microtiterplates, г. Роскилле, Дания), предварительно покрытые связывающим гиалуроновую кислоту белком. Затем планшеты последовательно инкубировали с биотинилированным белком, связывающим гиалуроновую кислоту, и меченным европием стрептавидином (Amershan, г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси). После этого европий, остающийся в твердой фазе, высвобождали усиливающим раствором и измеряли флуоресценцию с использованием флуориметра с временным разрешением (Perkin-Elmer Life Sciences-Wallac Oy, г. Турку, Финляндия). Данные (отсчеты/с) обрабатывали автоматически с помощью программного обеспечения MultiCalc (Perkin-Elmer Life Sciences-Wallac Oy) и значения выражали в нг/мг белка.

• Анализ белков

Общую концентрацию белка слезной жидкости определяли с помощью колориметрического аналитического набора в соответствии с инструкциями производителя (набор для анализа белка компании Bio-Rad, г. Геркулес, штат Калифорния). Профиль белка анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, как описано ранее (см. Laemmli UK. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227: 680-685.). Вкратце, 10 мкг белка из проб слезной жидкости наносили на 3-20% линейный градиентный полиакриламидный гель в восстановительных условиях. После электрофореза гели окрашивали кумасси синим (Bio-Rad, г. Геркулес, штат Калифорния). Каждую белковую полосу количественно определяли денситометрией с помощью программного обеспечения ImageJ версии 10.2 для Mac (U.S. National Institutes of Health, г. Бетесда, штат Мэриленд, США). Результаты выражены в произвольных денситометрических единицах (ADU).

В настоящем документе композиция, «по существу не содержащая» ингредиента, означает композицию, содержащую около 2% или менее данного ингредиента по массе в расчете на общую массу композиции. Предпочтительно композиция, по существу не содержащая ингредиента, содержит около 1% или менее, более предпочтительно около 0,5% или менее, более предпочтительно около 0,1% или менее, более предпочтительно около 0,05% или менее, более предпочтительно около 0,01% или менее ингредиента по массе в расчете на общую массу композиции. В определенных более предпочтительных вариантах осуществления композиция, по существу не содержащая ингредиента, не содержит ингредиента, т.е. данный ингредиент отсутствует в композиции.

В настоящем документе термин «офтальмологически приемлемый» означает, что ингредиенты, к которым относится термин, приемлемы для применения в контакте с тканями (например, мягкими тканями глаза или окологлазничными кожными тканями) без побочных эффектов в виде неспецифической токсичности, несовместимости, нестабильности, раздражения, аллергической реакции и т.п. Как будет понятно любому специалисту в данной области, офтальмологически приемлемые соли представляют собой кислые/анионные или щелочные/катионные соли.

Использующийся в настоящем документе термин «безопасное и эффективное количество» означает количество описанного экстракта, соединения или композиции, достаточное для индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из одного или более слоев роговицы и/или в один или более слой роговицы, но достаточно низкое для предотвращения серьезных побочных эффектов. Безопасное и эффективное количество соединения, экстракта или композиции будет меняться в зависимости, например, от возраста, состояния здоровья конечного потребителя и воздействия на него условий окружающей среды, длительности и характера лечения, конкретного применяемого экстракта, ингредиента или композиции, конкретного используемого фармацевтически приемлемого носителя и тому подобных факторов.

Термин «ретинолоподобные свойства и/или полезные эффекты» означает свойства и/или полезные эффекты, вызванные ретинолом.

В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение, описанное в настоящем документе, может быть реализовано на практике в условиях отсутствия любого соединения или элемента (или группы соединений или элементов), на которые нет конкретных указаний в настоящем документе.

В целом в настоящем документе применяются правила номенклатуры Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) в соответствии со следующими определениями терминов.

Термин «C1-8 алкил», используемый самостоятельно или как часть замещающей группы, относится к насыщенному алифатическому разветвленно- или линейноцепочечному одновалентному углеводородному радикалу, имеющему 1-8 атомов углерода. Например, «C1-8 алкил» конкретно включает в себя радикалы метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, трет-бутил, 1-бутил, 1-пентил, 2-пентил, 3-пентил, 1-гексил, 2-гексил, 3-гексил, 1-гептил, 2-гептил, 3-гептил, 1-октил, 2-октил, 3-октил и т.п. Указанный термин может также относиться к соответствующему алкилдиильному радикалу. Алкильный и алкилдиильный радикалы могут присоединяться к основной молекуле посредством концевого атома углерода или посредством атома углерода внутри цепи. Подобным образом к алкильному или алкилдиильному радикалу может быть присоединено любое число переменных заместителей, допустимое имеющимися валентностями.

Термин «C_1-4 алкил», используемый самостоятельно или как часть замещающей группы, относится к насыщенной алифатической разветвленно- или линейноцепочечной одновалентной углеводородной радикальной или алкилдиильной связующей группе, имеющей установленное число атомов углерода, причем радикал получен путем удаления одного атома водорода от атома углерода, а алкилдиильная связующая группа получена путем удаления одного атома водорода из каждого из двух атомов углерода в цепи. Термин «C_1-4 алкил» относится к радикалу, имеющему 1-4 атома углерода в линейной или разветвленной конфигурации. Например, «C_1-4 алкил» конкретно включает в себя радикалы метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, трет-бутил, 1-бутил и т.п. Алкильный и алкилдиильный радикалы могут присоединяться к основной молекуле посредством концевого атома углерода или посредством атома углерода внутри цепи. Подобным образом к алкильному или алкилдиильному радикалу может быть присоединено любое число переменных заместителей, допустимое имеющимися валентностями.

Термин «C_2-4 алкенил» относится к алкенильному радикалу, имеющему 2-4 атома углерода. Например, конкретно включает в себя радикалы этенил, пропенил, аллил (2-пропенил), бутенил и т.п. Как описано выше, алкенильный радикал может быть аналогичным образом присоединен к основной молекуле и дополнительно замещен там, где указано.

Термин «галоген» как таковой или в комбинации с другими терминами означает атом галогена, такой как фтор, хлор, бром или иод.

Термин «замещенный» относится к основной молекуле, в которой один или более атомов водорода были замещены количеством заместителей, допустимым имеющимися валентностями. Замещение не ограничено основной молекулой, но также может происходить в замещающем радикале, при этом радикал превращается в связующую группу.

Термин «независимо выбранный» относится к двум или более заместителям, которые могут быть выбраны из группы переменных заместителей, причем выбранные заместители могут быть одинаковыми или разными.

Термин «зависимо выбранный» относится к одному или более переменным заместителям, которые заданы в указанной комбинации для замены в основной молекуле (например, переменные, которые относятся к группам заместителей, приведенным в табличном списке соединений).

Приемлемые соли, полученные с использованием неорганических оснований, включают в себя, например, соли натрия или калия и т.п. Приемлемые соли, полученные с использованием органических оснований, включают в себя, например, соли, образованные при взаимодействии с первичными, вторичными или третичными аминами и т.п.

Соединения/экстракты, обладающие ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами

Настоящее изобретение включает соединения и/или экстракты, обладающие ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, для применения при лечении синдрома сухого глаза, включая выбранные из группы, состоящей из одного или более из растительных экстрактов, или источников экстрактов, растений рода Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella; бактериальных экстрактов, или источников экстрактов, бактерий рода Actinomyces; и соединений формулы (I):

где

пунктирными линиями показана простая или двойная связь; необязательно одна из пунктирных линий представляет двойную связь;

R₁ представляет собой H, углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода;

R₂ представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно метильную (-CH₃) или метиленовую (=CH₂) функциональную группу; углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно от 1 до 10 атомов углерода; необязательно 6 атомов углерода; необязательно ароматическую функциональную группу, необязательно фенильную функциональную группу; необязательно 2-метил-проп-1,3-диен.

Растительный(-ые) экстракт(-ы) Acronychia , Licaria, Calendula и/или Trigonella

В определенных вариантах осуществления соединения/экстракты, обладающие ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, представляют собой или содержат экстракты, или источники экстрактов, растений Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella. Экстракты Acronychia, Licaria, Calendula или Trigonella, или источники таких экстрактов, получают из растений рода Acronychia, Licaria, Calendula или Trigonella.

Растения рода Acronychia, из которых получают экстракты, используемые в настоящем изобретении, включают в себя, например, Acronychia aberrans, Acronychia acidula (другое название - лимонная осина), Acronychia acronychioides, Acronychia acuminate, Acronychia baeuerlenii, Acronychia chooreechillum, Acronychia crassipetala, Acronychia eungellensis, Acronychia imperforate, Acronychia laevis, Acronychia laurifolia, Acronychia littoralis, Acronychia oblongifolia, Acronychia octandra, Acronychia parviflora, Acronychia pauciflora, Acronychia pedunculata, Acronychia pubescens, Acronychia species (Batavia Downs), Acronychia suberosa, Acronychia vestita, Acronychia wilcoxiana и комбинации двух или более из них. В одном варианте осуществления экстракт, используемый в настоящем изобретении, был получен из Acronychia acidula.

Растения рода Licaria, из которых получают экстракты, используемые в настоящем изобретении, включают, например, Licaria vernicosa, Licaria brittoniana, Licaria canella, Licaria cubensis, Licaria velutina и Licaria triandra, а также комбинации двух или более из них. Существует около 40 видов рода Licaria, которые являются эндемичными для Центральной и Южной Америки. В одном варианте осуществления экстракт, используемый в настоящем изобретении, получен из Licaria vernicosa.

Существует около 15-20 видов рода Calendula, которые были обнаружены в Юго-Западной Азии, Западной Европе, Макаронезии и Средиземноморье. Растения рода Calendula, из которых получают экстракты, применимые к настоящему изобретению, включают, например, Calendula arvensis (полевые ноготки); Calendula maderensis (мадейрские ноготки); и Calendula officinalis (лекарственные ноготки) и комбинации двух или более из них. В одном варианте осуществления экстракт, используемый в настоящем изобретении, получен из Calendula officinalis.

Растения рода Trigonella включают 36 известных видов рода Trigonella, из которого получают экстракты, применимые в настоящем изобретении, включая, например, Trigonella foenum-graecum, Trigonella balansae, Trigonella corniculata, Trigonella maritima, Trigonella spicata, Trigonella caerulea, Trigonella occulta, Trigonella polycerata, Trigonella Calliceras, Trigonella Cretica и комбинации двух или более из них. Trigonella foenum-graecum, или пажитник, является наиболее известным представителем рода Trigonella. В одном варианте осуществления экстракт, используемый в настоящем изобретении, получен из Trigonella foenum-graecum.

В некоторых вариантах осуществления экстракт, используемый в настоящем изобретении, представляет собой смесь экстрактов, полученных из растений рода Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella.

Экстракты Licaria vernicosa, используемые в настоящем изобретении, можно приобрести в Baruch S. Blumerg Institute, г. Дойлстаун, штат Пенсильвания (ранее известном как IVHR). В некоторых вариантах осуществления один экстракт получают из древесной части растения (E2), а второй экстракт получают из корней растения (E3). В номенклатуре коллекции IHVR два экстракта помечены как IHVR_40256_G10=X-005348-001E002 и как IHVR_40256_E10=X-005346-001M002 соответственно. Древесные части и корни Licaria vernicosa (Mez) Kosterm. можно приобрести в Гайане. 504,3 г высушенного измельченного древесного растительного материала можно экстрагировать достаточным количеством метанола, который можно высушивать в вакууме с получением 10,54 г экстракта метанола-сырца (E2) для X-005348-001E002. 403,8 г материала высушенного измельченного корня можно экстрагировать достаточным количеством метанола, который можно высушивать в вакууме с получением 18,11 г метанола-сырца (E3) для X-005346-001M002.

В некоторых вариантах осуществления экстракты Acronychia и/или Licaria, используемые в настоящем изобретении, содержат соединения, имеющие формулу II:

где:

R₁ выбран из группы, состоящей из C₁-C₂₀ алкила, C₂-C₂₀ алкенила, C₂-C₂₀ алкинила и C₃-C₈ циклоалкила или арила;

R₂ выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, C₁-C₆ алкила, C₂-C₆ алкенила, C₂-C₆ алкинила, C₃-C₈ циклоалкила или арила, -OC₁-C₆ алкила, -OC₂ -C₆ алкенила, -OC₂-C₆ алкинила, -OC₃-C₈ циклоалкила или арила, тиола, -SC₁-C₆ алкила, -SC₂-C₆ алкенила, -SC₂-C₆ алкинила, -SC₃-C₈ циклоалкила или арила, -NR₄C₁-C₆ алкила, -NR₄C₂-C₆ алкенила, -NR₄C₂-C₆ алкинила и -NR₄C₃-C₈ циклоалкила или арила;

R₃ выбран из -CO₂H, -CO₂R₄ или изостерического эквивалента карбоксильной группы, где R₄ представляет собой C₁-C₆ алкил, C₂-C₆ алкенил, C₃-C₈ циклоалкил или арил; и

Y представляет собой -(CH₂-CH₂)-, -(CH ═ H)- или -(C ═ C)-;

или его офтальмологически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления экстракты Acronychia и/или Licaria, используемые в настоящем изобретении, содержат соединения, имеющие формулу II:

где:

R₁ выбран из группы, состоящей из C₅-C₁₆ алкила, C₅-C₁₆ алкенила и C₅-C₁₆ алкинила, более предпочтительно C₅-C₁₆ алкенила, включая, например, фарнезил;

R₂ выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, -OC₁-C₆ алкила, -OC₂-C₆ алкенила, -OC₂-C₆ алкинила, -OC₃-C₈ циклоалкила, более предпочтительно - водорода, гидроксила, -OC₁-C₆ алкила, еще более предпочтительно - водорода или -OC₁-C₃ алкила;

R₃ выбран из -CO₂H, -CO₂R₄, где R₄ представляет собой C₁-C₆ алкил или изостерический эквивалент карбоксильной группы; и

Y представляет собой -(CH₂-CH₂)- или -(CH ═ CH)-;

или его офтальмологически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно из соединений формулы II присутствует в экстракте Acronychia и/или Licaria в концентрации от не менее 1% (или около 1%) до около 20% или в необязательно от около 7% (или около 7%) до около 10% (или около 10%) по массе экстракта Acronychia и/или Licaria.

В некоторых вариантах осуществления соединения формулы II, используемые в настоящем изобретении, находятся в форме кислоты или алкилэфира, выбранного из (или выбранного из группы, состоящей из) 3-(4-фарнезилоксифенил)-пропионовой кислоты, 3-(4-фарнезилокси-3-гидроксифенил)-пропионовой кислоты, 3-(4-фарнезилокси-3-метоксифенил)-пропионовой кислоты, их алкиловых эфиров, в частности, их сложных этиловых эфиров, и комбинации двух или более из них.

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы II, используемое в настоящем изобретении, представляет собой 3-(4-фарнезилоксифенил)-пропионовую кислоту и/или ее этиловый эфир.

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы II, используемое в настоящем изобретении, представляет собой 3-(4-фарнезилокси-3-гидроксифенил)-пропионовую кислоту и/или ее этиловый эфир.

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы II, используемое в настоящем изобретении, представляет собой 3-(4-фарнезилокси-3-метоксифенил)-пропионовую кислоту и/или ее этиловый эфир.

Соединения и экстракты, полученные из видов Acronychia, описаны в патенте США № 9,220,928, содержание которого полностью включено в настоящий документ путем ссылки.

В некоторых вариантах осуществления 3-(4-фарнезилоксифенил)-пропионовая кислота и/или ее этиловый эфир присутствуют в экстракте Acronychia и/или Licaria в концентрации не менее 1% (или около 1%) до около 20% или необязательно от около 7% (или около 7%) до около 10% (или около 10%) масс. экстракта Acronychia и/или Licaria.

Любой из множества экстрактов Acronychia и/или Licaria можно использовать для вариантов осуществления, в которых способ включает нанесение такого экстракта. Экстракт может быть получен из любой части растения, такой как, например, плоды, семена, кора, листья, цветы, корни и древесина.

В некоторых вариантах осуществления экстракт получают из плодов растения. Приемлемые экстракты плодов, семян, коры, листьев, цветов, корней и древесины Acronychia или Licaria можно получить с использованием стандартных способов, включая, без ограничений, прямое экстрагирование материала из биомассы путем измельчения, мацерации, прессования, отжимания, сминания, центрифугирования, и/или таких способов, как холодная перколяция, перемешивание/дистилляция, микроволновое экстрагирование, экстрагирование газообразным CO₂ при надкритическом/субкритическом сжатии в присутствии или отсутствии полярных модификаторов, экстрагирование растворителем под давлением, ускоренное экстрагирование растворителем, экстрагирование горячей водой при повышенном или нормальном давлении, экстрагирование горячей водой при повышенном давлении в присутствии поверхностно-активного вещества, масляное экстрагирование, мембранное экстрагирование, экстрагирование Сокслета, дистилляция/экстрагирование «золотого пальца», и/или способов, описанных, например, в патентах США №№ 7442391, 7473435 и 7537791, выданных компании Integrated Botanical Technologies, LLC, включенных в настоящий документ путем ссылки, и т.п., либо с использованием других способов, таких как экстрагирование растворителем и т.п. В способах, включающих экстрагирование растворителем, можно применять любой из различных растворителей, включая полярные растворители, неполярные растворители или комбинации двух или более из них.

Приемлемые полярные растворители включают полярные неорганические растворители, такие как вода и т.п., полярные органические растворители, такие как спирты и соответствующие органические кислоты, например, C₁-C₈ спирты, включая метанол, этанол, пропанол, бутанол и т.п., а также органические кислоты, включая уксусную кислоту, муравьиную кислоту, пропановую кислоту и т.п., полиолы и гликоли, включая C₁-C₈ полиолы/гликоли и т.п., а также комбинации двух или более из них. Приемлемые неполярные растворители включают неполярные органические растворители, такие как алканы, включая C₁-C₈ алканы, циклоалканы, включая C₁-C₈ циклоалканы, алкилэфиры, включая C₁-C₈ алкилэфиры, петролейные эфиры, кетоны, включая C₁-C₈ кетоны, метиленхлорид, этилацетат, ксилол, толуол, хлороформ, растительное масло, минеральное масло и т.п. В другом варианте осуществления экстрагирование можно провести с применением неполярных растворителей, описанных выше, или путем сверхкритического жидкостного экстрагирования в присутствии или при отсутствии полярного модификатора, такого как C₁-C₈ спирты, вода, C₁-C₈ полиолы/гликоли или C₁-C₈ органические кислоты.

В одном варианте осуществления экстракт содержит экстракт Acronychia acidula. В другом варианте осуществления экстракт изобретения содержит комбинацию полярного и неполярного экстрактов из плодов Acronychia acidula. В другом варианте осуществления экстракт изобретения содержит спиртовые или гликолевые экстракты плодов Acronychia acidula.

В одном варианте осуществления экстракт содержит экстракт Licaria vernicosa. В другом варианте осуществления экстракт изобретения содержит комбинацию полярного и неполярного экстрактов из древесины Licaria vernicosa или корня Licaria vernicosa. В другом варианте осуществления экстракт изобретения содержит спиртовые экстракты древесины Licaria vernicosa или корня Licaria vernicosa.

В другом варианте осуществления экстракт изобретения содержит полярный экстракт, полученный экстрагированием из плодов Acronychia acidula, древесины Licaria vernicosa или корня Licaria vernicosa с применением полярного растворителя, содержащего воду, C₁-C₈ спирты, C₁-C₈ полиолы, C₁-C₈ гликоли и комбинации двух или более из них. В некоторых вариантах осуществления экстракт экстрагируют с применением одного или более C₁-C₄ спиртов, C₁-C₄ полиолов и/или C₁-C₄ гликолей. В некоторых вариантах осуществления экстракт готовят с применением растворителя, содержащего метанол, этанол или их комбинацию при наличии или отсутствии воды. В другом варианте осуществления экстракт представляет собой полярный экстракт, полученный из плодов Acronychia acidula с использованием комбинации спирта и воды. В еще одном варианте осуществления экстракт представляет собой полярный экстракт, полученный из измельченной древесины Licaria vernicosa или измельченного корня Licaria vernicosa с помощью метанола.

В еще одном варианте осуществления экстракт содержит неполярный экстракт, полученный экстрагированием из плодов Acronychia acidula, древесины Licaria vernicosa или корня Licaria vernicosa с применением неполярного растворителя, содержащего один или более C₁-C₈ алканов, C₁-C₈ циклоалканов, C₁-C₈ алкиловых эфиров, C₁-C₈ алкиловых эфиров и/или хлороформа, более предпочтительно - один или более C₁-C₈ алканов, C₁-C₈ алкиловых эфиров и/или хлороформа. В еще одном варианте осуществления неполярный экстракт получают из плодов Acronychia acidula, древесины Licaria vernicosa или корня Licaria vernicosa с применением гексанов, этилацетата, хлороформа или смесей двух или более из них. В еще одном варианте осуществления неполярный экстракт получают из плодов Acronychia acidula с использованием этилацетата.

В одном варианте осуществления экстракт содержит экстракт Calendula officinalis. В другом варианте осуществления экстракт настоящего изобретения содержит комбинацию полярного и неполярного экстрактов лепестков Calendula officinalis. В другом варианте осуществления экстракт настоящего изобретения содержит неполярный экстракт лепестков Calendula officinalis.

В одном варианте осуществления экстракт содержит экстракт Trigonella foenum-graecum. В другом варианте осуществления экстракт изобретения содержит комбинацию полярного и неполярного экстрактов листьев Trigonella folium. В другом варианте осуществления экстракт изобретения содержит неполярный экстракт листьев Trigonella foenum-graecum.

В еще одном варианте осуществления экстракт Calendula и/или Trigonella представляет собой неполярный экстракт, полученный с применением неполярного растворителя, содержащего один или более C₁-C₈ алканов, C₁-C₈ циклоалканов, C₁-C₈ простых алкиловых эфиров, C₁-C₈ сложных алкиловых эфиров и/или хлороформ, более предпочтительно один или более C₁-C₈ алканов, C₁-C₈ сложных алкиловых эфиров и/или хлороформ.

В еще одном варианте осуществления экстракт Calendula и/или Trigonella представляет собой неполярный экстракт, полученный с применением гексанов, этилацетата, хлороформа или смесей двух или более из них. В еще одном варианте осуществления экстракт представляет собой неполярный экстракт, полученный с применением этилацетата.

В одном варианте осуществления растительные экстракты можно получить экстракцией культур клеток различных растений, включая культуры клеток родов Acronychia, Licaria, Calendula или Trigonella. Культуры клеток, которые экстрагируют для получения растительных экстрактов для применения в настоящем изобретении, могут иметь любую форму, включая культуры клеток в виде суспензий и т.п.

Экстракты Calendula officinalis и Trigonella foenum-graecum можно приобрести у компании Caithness Biotechnologies Ltd, Великобритания (http://www.caithnessbiotechnologies.com/). Эти экстракты являются частью библиотеки продуктов природного происхождения Phytotitre Natural Product Library, общедоступной для приобретения. Альтернативно экстракты можно получить с применением способа приготовления, описанного Caithness Biotechnologies Ltd., как неполярные, и их можно приготовить из смеси метанола и метиленхлорида. Для получения подробного описания см. веб-страницу http://caithnessbiotechnologies.com/contact.html. Как правило, при экстрагировании предварительно взвешенную высушенную порошкообразную биомассу суспендируют и перемешивают в смеси метанол/метиленхлорид (1 : 1) в течение ночи при температуре окружающей среды. Затем суспензию фильтруют, фильтрат высушивают при пониженном давлении до остатка, не содержащего растворителей.

В некоторых вариантах осуществления экстракт Acronychia, Licaria, Calendula и/или Trigonella присутствует в композициях настоящего изобретения в количестве от около 0,001% до около 10%, необязательно от около 0,001% до около 5% или необязательно от около 0,01% до около 1% масс. композиции.

Экстракт(-ы) бактерий рода Actinomyces , обладающие ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами

В некоторых вариантах осуществления соединения/экстракты, демонстрирующие ретинолоподобные свойства и/или полезные эффекты, представляют собой или содержат экстракт(-ы) бактерий рода Actinomyces. Бактерии рода Actinomyces включают в себя множество полностью охарактеризованных видов, а также плохо охарактеризованные, например, один вид, собранный из США и помеченный как вид A5640. Пробу данных бактерий собирали, выращивали в культуре и превращали в экстракт. Экстракт является частью коллекции натуральных продуктов, теперь подконтрольного институту Baruch S. Blumerg Institute, г. Дойлстаун, штат Пенсильвания (ранее известного как IHVR). В номенклатуре коллекции IHVR экстракт помечен как IHVR_39565_F7.

В одном варианте осуществления экстракт, используемый в настоящем изобретении, получен из вида Actinomyces, способного образовывать химический состав, аналогичный полученному с помощью экстракта A5640. В другом варианте осуществления бактерии собирают в США, и штамм идентичен ранее выделенным видам A5640.

В некоторых вариантах осуществления экстракт Actinomyces содержится в композиции настоящего изобретения в количестве от около 0,001% до около 10%, необязательно от около 0,001% до около 5% или необязательно от около 0,01% до около 1% масс. композиции.

Соединение(-я) формулы (I), обладающее(-ие) ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами.

В некоторых вариантах осуществления соединения/экстракты, обладающие ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, представляют собой или содержат соединения формулы (I):

где

пунктирными линиями показана простая или двойная связь; необязательно одна из пунктирных линий представляет двойную связь;

R₁ представляет собой H, углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода;

R₂ представляет собой углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно метильную (-CH₃) или метиленовую (=CH₂) функциональную группу; углеродную цепь, линейную, циклическую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, содержащую от 1 до 20 атомов углерода; необязательно от 1 до 10 атомов углерода; необязательно 6 атомов углерода; необязательно ароматическую функциональную группу, необязательно фенильную функциональную группу; предпочтительно 2-метил-проп-1,3-диен.

В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I) включают в себя соответствующие соли таких ионов металлов, как, без ограничений, Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca²⁺ или Mg^{2 +}.

В некоторых вариантах осуществления соединения формулы I представляют собой:

(2E,4E,6E)-7-(1,1,2,2,3,3-гексаметил-2,3-дигидро-1H-инден-5-ил)-3-метилокта-2,4,6-триеновую кислоту

или

4-(1-(1,1,2,2,3,3-гексаметил-2,3-дигидро-1H-инден-5-ил)винил)бензойную кислоту и в каждом случае их производные, проявляющие ретиноидоподобную активность. Данные соединения далее упоминаются в примерах 8 и 9 как соединение 1 и соединение 2 соответственно.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I, таким как (2E,4E,6E)-7-(1,1,2,2,3,3-гексаметил-2,3-дигидро-1H-инден-5-ил)-3-метилокта-2,4,6-триеновая кислота и 4-(1-(1,1,2,2,3,3-гексаметил-2,3-дигидро-1H-инден-5-ил)винил)бензойная кислота и их производные, которые демонстрируют ретиноидоподобную активность, и их смесям.

Кроме того, могут быть использованы смеси любых из перечисленных выше соединений/экстрактов/источников экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами.

Соединения и экстракты формулы I описаны в публикации патента США 2019/0091122, полностью включенного в настоящий документ путем ссылки.

В некоторых вариантах осуществления соединение(-я) формулы I присутствует(-ют) в композиции настоящего изобретения в количестве от около 0,0001% до около 20%, необязательно от около 0,001% до около 10%, необязательно от около 0,01% до около 5% или необязательно от около 0,2 до около 2% масс. композиции. В некоторых вариантах осуществления соединение(-я) формулы I содержится(-атся) в композиции настоящего изобретения в количестве от около 0,0001% до около 1%, необязательно от около 0,001% до около 1% или необязательно от около 0,01% до около 1% масс. композиции.

Композиции Авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединения и/или экстракты, обладающие ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами, могут стимулировать и/или улучшать доставку/выделение гиалуроновой кислоты из клеток эпителия роговицы.

Усилитель проницаемости

В определенных вариантах осуществления композиции настоящего изобретения необязательно содержат усилитель проницаемости.

Приемлемые усилители проницаемости включают в себя (их выбирают из группы, состоящей из), по отдельности либо в комбинации, поверхностно-активные вещества, такие как сапонины, полиоксиэтилен, простые эфиры полиоксиэтилена жирных кислот, такие как простой полиоксиэтилен 4-, 9-, 10- и 23-лауриловый эфир, простой полиоксиэтилен 10- и 20-цетиловый эфир, простой полиоксиэтилен 10- и 20-стеариловый эфир, сорбитанмоноолеат, сорбитанмонолаурат, полиоксиэтиленмонолаурат, полиоксиэтиленсорбитаны, такие как полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, декаметоний, бромид декаметония и бромид додецилтриметиламмония; хелаторы, такие как природные поликислоты (например, лимонная кислота), фосфатные соли (например, пирофосфат динатрия), фосфонаты, бисфосфонаты (например, этидроновая кислота), аминокарбоновые кислоты (например, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) и динатрий ЭДТА) и этилендиамин-N, N’-диянтарная кислота (EDDS)); желчные кислоты и соли, такие как холевая кислота, дезоксихолевая кислота, гликохолевая кислота, гликодезоксихолевая кислота, таурохолевая кислота, тауродезоксихолевая кислота, холат натрия, гликохолат натрия, гликохолат, дезоксихолат натрия, таурохолат натрия, гликодезоксихолат натрия, тауродезоксихолат натрия, хенодезоксихолевая кислота и урсодезоксихолевая кислота; производные фузидовой кислоты, глицирризиновую кислоту и глицирризинат аммония с сапонин-ЭДТА, фузидовую кислоту, простой полиоксиэтилен 9-лауриловый эфир, простой полиоксиэтилен 20-стеариловый эфир, гликохолат или смеси любых из вышеперечисленных веществ.

Концентрация вводимого усилителя проницаемости должна соответствовать минимальному количеству, необходимому для достаточного увеличения абсорбции соединения и/или экстракта через слизистую оболочку или другие защитные мембраны глаза. По существу в композициях настоящего изобретения можно использовать концентрации в диапазоне от 0,01% (или около 0,01%), необязательно от 0,05% (или около 0,05%), необязательно от 0,1% (или около 0,1%), необязательно от 0,15% (или около 0,15%), необязательно от 0,2% (или около 0,2%), необязательно от 0,25% (или около 0,25%) до 2% (или около 2%), необязательно до 2,5% (или около 2,5%), необязательно до 3% (или около 3%), необязательно до 3,5%, (или около 3,5%), необязательно до 4% (или около 4%), необязательно до 4,5% (или около 4,5%), необязательно до 5% (или около 5%), необязательно до 5,5% (или около 5,5%), необязательно до 6% (или около 6%), необязательно до 6,5% (или около 6,5%), необязательно до 7% (или около 7%), необязательно до 7,5% (или около 7,5%), необязательно до 8% (или около 8%), необязательно до 8,5% (или около 8,5%), необязательно до 9% (или около 9%), необязательно до 9,5% (или около 9,5%), необязательно до 10% (или около 10%), необязательно до 10,5% (или около 10,5%), необязательно до 11% (или около 11%), необязательно до 11,5% (или около 11,5%), необязательно до 12% (или около 12%), необязательно до 12,5% (или около 12,5%), необязательно до 13% (или около 13%), необязательно до 13,5% (или около 13,5%), необязательно до 14% (или около 14%), необязательно до 14,5% (или около 14,5%), необязательно до 15% (или около 15%), необязательно до 15,5% (или около 15,5%), необязательно до 16% (или около 16%), необязательно до 16,5% (или около 16,5%), необязательно до 17% (или около 17%), необязательно до 17,5% (или около 17,5%), необязательно до 18% (или около 18%), необязательно до 18,5% (или около 18,5%), необязательно до 19% (или около 19%), необязательно до 19,5% (или около 19,5%), необязательно до 20% (или около 20%) от общей массы композиции (масс./об.).

Офтальмологически приемлемый носитель

Композиции настоящего изобретения также содержат водный носитель, носитель в виде эмульсии типа «масло в воде» или эмульсии типа «вода в масле». Носитель является офтальмологически приемлемым. Используемые носители типа «масло в воде» и «вода в масле» можно найти в публикации патента США № 20030165545A1 и патентах США №№ 9480645, 8828412 и 8496976, каждый из которых полностью включен в настоящий документ путем ссылки.

Офтальмологически приемлемый носитель (или композиции настоящего изобретения) может необязательно содержать один или более дополнительных эксципиентов и/или один или более дополнительных активных ингредиентов. Примеры таких необязательных компонентов описаны ниже.

Эксципиенты, которые обычно используют в офтальмических композициях, включают, без ограничений, мягчительные, успокоительные, тонические, консервирующие, хелатирующие, буферные агенты (отличные от органических кислот по настоящему изобретению и дополняющие их) и поверхностно-активные вещества. Другие эксципиенты содержат солюбилизирующие, стабилизирующие, способствующие повышению комфорта агенты, полимеры, мягчители, регуляторы рН (отличные от органических кислот настоящего изобретения и дополняющие их) и/или смазывающие средства. В композициях настоящего изобретения можно применять любые из множества эксципиентов, включая воду, смеси воды и растворителей, смешивающихся с водой, таких как растительные масла или минеральные масла, содержащие от 0,5% до 5% нетоксичных водорастворимых полимеров, натуральные продукты, такие как агар и гуммиарабик, производные крахмала, такие как ацетат крахмала и гидроксипропилкрахмал, а также другие синтетические продукты, такие как поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поливинилметиловый эфир, полиэтиленоксид, а предпочтительно поперечно-сшитая полиакриловая кислота, и их смеси.

Мягчительные или успокоительные средства, применяемые в вариантах осуществления настоящего изобретения, включают в себя, без ограничений, производные целлюлозы (такие как гидроксиэтилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гипромеллоза или их смеси), гиалуроновую кислоту, экстракт семян тамаринда, глицерин, поливинилпирролидон, полиэтиленоксид, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль и полиакриловую кислоту и их смесей. В некоторых вариантах осуществления одно или более веществ из гиалуроновой кислоты, пропиленгликоля, экстракта семян тамаринда, глицерина и/или полиэтиленгликоля 400 представляют собой мягчительные или успокоительные средства. В некоторых вариантах осуществления мягчительное и успокоительное средство выбирают из гиалуроновой кислоты, экстракта семян тамаринда или их смесей.

Композиции настоящего изобретения офтальмологически приемлемы для закапывания в глаза пациента. Термин «водный» типично обозначает водный состав, в котором эксципиентом служит вода, по массе > около 50%, более предпочтительно > около 75% и особенно > около 90%. В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения по существу не содержат соединений, раздражающих глаза. В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения по существу не содержат свободных жирных кислот и C₁-C₄ спиртов. В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретению содержат менее 40% (или около 40%), необязательно менее 35% (или около 35%), необязательно менее 30% (или около 30%), необязательно менее 25% (или около 25%); необязательно менее 20% (или около 20%), необязательно менее 15% (или около 15%), необязательно менее 10% (или около 10%) или необязательно менее 5% (или около 5%) неспиртового, органического эксципиента или растворителя от общей массы композиции. Эти капли могут выдаваться из ампулы с одной дозой, которая предпочтительно может быть стерильной, и тогда бактериостатические компоненты в составе оказываются излишними. Альтернативно капли могут выдаваться из многодозового флакона, который может предпочтительно содержать устройство, извлекающее любой консервант из композиции по мере ее выдачи, и такие устройства известны в данной области.

В определенных вариантах осуществления используют композиции настоящего изобретения изотонического или слабо гипотонического типа, чтобы преодолеть любую гипертоничность слез, вызванную обезвоживанием и/или заболеванием. Для этого может потребоваться регулятор тоничности, чтобы довести уровень осмоляльности состава до или около 210-320 миллиосмолей на килограмм (мОсм/кг). Композиции настоящего изобретения по существу обладают осмоляльностью, относящейся по существу к диапазону 220-320 мОсм/кг, или необязательно обладают осмоляльностью, относящейся к диапазону 235-300 мОсм/кг. Состав офтальмических композиций будет по существу соответствовать составу стерильных водных растворов.

Осмоляльность композиций настоящего изобретения можно регулировать регуляторами тоничности до значения, совместимого с предполагаемым применением композиций. Например, осмоляльность композиции можно регулировать для аппроксимации осмотического давления нормальной слезной жидкости, что эквивалентно около 0,9 масс./об.% хлорида натрия в воде. Примеры приемлемых регуляторов тоничности включают, без ограничений, хлорид натрия, калия, кальция и магния; декстрозу; глицерин; пропиленгликоль; маннит; сорбит и т.п., а также их смеси. В одном варианте осуществления для регулирования тоничности композиции используется комбинация хлорида натрия и хлорида калия.

Композиции настоящего изобретения можно также использовать для нанесения фармацевтически активных соединений. Такие соединения включают, без ограничений, лекарства от глаукомы, болеутоляющие, противовоспалительные и противоаллергические лекарственные средства, а также противомикробные. Более конкретные примеры фармацевтически активных соединений включают бетаксолол, тимолол, пилокарпин, ингибиторы карбоангидразы и простагландины; дофаминэргические антагонисты; послеоперационные антигипертонические агенты, такие как пара-аминоклонидин (апраклонидин); противоинфекционные средства, такие как ципрофлоксацин, моксифлоксацин и тобрамицин; нестероидные и стероидные противовоспалительные средства, такие как напроксен, диклофенак, непафенак, супрофен, кеторолак, тетрагидрокортизол и дексаметазон; лекарства от сухости глаз, такие как ингибиторы PDE4; и противоаллергические лекарственные средства, такие как ингибиторы H1/H4, ингибиторы H4, олопатадин или их смеси.

Предполагается также, что концентрации ингредиентов, входящих в составы настоящего изобретения, могут изменяться. Специалисту среднего уровня в данной области будет понятно, что концентрации могут изменяться в зависимости от добавления, замены и/или изъятия ингредиентов в данном составе.

В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения могут иметь pH, совместимый с предполагаемым применением, и часто в диапазоне от 4 (или около 4) до 10 (или около 10), необязательно от 6 (или около 6) до 8 (или около 8), необязательно от 6,5 (или около 6,5) до 7,5 (или около 7,5) или необязательно от 6,8 (или около 6,8) до 7,2 (или около 7,2).

В некоторых вариантах осуществления можно использовать различные традиционные буферные растворы, такие как фосфат, борат, цитрат, ацетат, гистидин, трис, бис-трис и т.п., а также их смеси. Боратные буферные растворы включают борную кислоту и ее соли, такие как борат натрия или калия. Можно также использовать тетраборат калия или метаборат калия, которые продуцируют борную кислоту или соль борной кислоты в растворе. Кроме того, можно использовать гидратированные соли, такие как декагидрат бората натрия. Фосфатные буферы включают фосфорную кислоту и ее соли; например, M₂HPO₄ и MH₂PO4, где M представляет собой щелочной металл, такой как натрий и калий. Можно также применять гидраты солей. В одном варианте осуществления настоящего изобретения в качестве буферных растворов используют Na₂HPO₄⋅7H₂O и NaH₂PO₂⋅H₂O. Термин «фосфат» также включает в себя соединения, которые образуют фосфорную кислоту или соль фосфорной кислоты в растворе. Кроме того, в указанных выше буферных растворах также можно использовать органические противоионы. Концентрация буферного раствора по существу варьируется от около 0,01 до 2,5 масс./об.% и более предпочтительно варьируется от около 0,05 до около 0,5 масс./об.%.

В некоторых вариантах осуществления вязкость композиций настоящего изобретения находится в диапазоне от около 1 до около 500 сПз, необязательно от около 10 до около 200 сПз или необязательно от около 10 до около 100 сПз при измерении на реометре AR 2000 TA Instruments. Реометр AR 2000 TA Instruments необходимо использовать с методом испытания текучести AR2000 программного обеспечения TA Rheological Advantage с геометрией стальных пластин 40 мм; диапазоны вязкости должны быть получены путем измерения потока в стационарном состоянии с контролируемой скоростью сдвига от 0 с^-¹ до 200 с^-¹.

В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения используют в качестве и в форме раствора для закапывания в глаз, раствора для промывания глаз, раствора для смазывания и/или увлажнения контактных линз, раствора для распыления, орошения или любого другого способа введения композиции в глаз.

Композиции настоящего изобретения также можно использовать в качестве и в форме упаковочных растворов для контактных линз. В некоторых вариантах осуществления в качестве упаковочных растворов композиции настоящего изобретения могут быть герметизированы в блистерную упаковку, а также пригодны для стерилизации.

Примеры блистерных упаковок и способов стерилизации описаны в следующих источниках, которые полностью включены в настоящий документ путем ссылки; патенты США №№ D435,966; 4,691,820; 5,467,868; 5,704,468; 5,823,327; 6,050,398, 5,696,686; 6,018,931; 5,577,367; и 5,488,815. Эта часть производственного процесса представляет собой другой способ обработки офтальмологических изделий противоаллергическим веществом, а именно добавление противоаллергических веществ к раствору перед запечатыванием упаковки с последующей стерилизацией упаковки. Данный способ является предпочтительным способом обработки офтальмологических изделий противоаллергическими веществами.

Стерилизацию можно проводить при разных температурах и в течение разных периодов времени. Предпочтительные условия стерилизации находятся в диапазоне от около 100 ºC в течение около 8 часов до около 150 ºC в течение около 0,5 минут. Предпочтительные условия стерилизации находятся в диапазоне от около 115 °C в течение около 2,5 часа до около 130 ºC в течение около 5,0 минут. Предпочтительные условия стерилизации составляют около 124 ºC в течение около 18 минут.

При использовании в качестве упаковочных растворов композиции настоящего изобретения могут быть водными. Типичные упаковочные растворы, без ограничений, включают в себя физиологические растворы, другие буферные растворы и деионизированную воду. В некоторых вариантах осуществления упаковочный раствор представляет собой водный раствор в деиоинизированной воде или физиологическом растворе, содержащий соли, включая, без ограничений, хлорид натрия, борат натрия, фосфат натрия, гидрофосфат натрия, дигидрофосфат натрия или соответствующие им калиевые соли. Эти ингредиенты, как правило, объединяют с образованием буферных растворов, включающих кислоту и сопряженное основание, так что добавление кислот и оснований приводит лишь к относительно небольшому изменению pH. В некоторых вариантах осуществления pH упаковочного раствора соответствует описанному выше. Буферные растворы могут дополнительно включать в себя 2-(N-морфолино)этансульфоновую кислоту (MES), гидроксид натрия, 2,2-бис(гидроксиметил)-2,2',2"-нитрилотриэтанол, n-трис(гидроксиметил)метил-2-аминоэтансульфоновую кислоту, лимонную кислоту, цитрат натрия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, уксусную кислоту, ацетат натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту и т.п., а также их комбинации. Предпочтительно, чтобы раствор представлял собой боратный или фосфатный буферный солевой раствор или деионизированную воду. Конкретно предпочтительный раствор должен содержать около 500-18 500 м. д. бората натрия, наиболее предпочтительно около 1000 м. д. бората натрия.

Если какие-либо ингредиенты, входящие в состав упаковочных растворов, подвергают окислительному разложению, могут быть добавлены агенты, стабилизирующие упаковочные растворы, содержащие такие ингредиенты. К таким «стабилизаторам окисления» относятся, без ограничений, хелатирующие средства, такие как ЭДТА, Dequest, десферал, кремнезем, производные хитина, такие как хитозан, целлюлоза и ее производные, а также N, N, N',N', N", N" -гекса(2-пиридил)-1,3,5-трис(аминометил)бензол, а также некоторые макроциклические лиганды, такие как краун-эфиры, лигандсодержащие узлы и катенаны. См. David A. Leigh et al. Angew. Chem Int. Ed., 2001, 40, No. 8, pgs. 1538-1542, а также Jean-Claude Chambron et al. Pure & Appl. Chem., 1990, Vol. 62, No. 6, pgs. 1027-1034. Стабилизаторами, предотвращающими окисление, могут являться и другие вещества, которые ингибируют окисление, например, вещества из группы, состоящей из 2,2’,2’’,6,6’,6’’-гекса-(1,1-диметил)4,4’,4’’-[(2,4,6-триметил-1,3,5-бензтриил)-трисметилен]-трифенол (Irganox 1330), 1,3,5трис[3,5-ди(1,1-диметилэтил)4-гидроксибензил]-1H,3H,5H-1,3,5-триазин-2,4,6-триона, пентаэритритил тетракис-[3-[3,5-ди(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]-пропионата], октадецил-3-[3,5-ди(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]-пропионата, трис[2,4-ди(1,1-диметилэтил)-фенил]-фосфита, 2,2’-ди(октадециклокси)-5,5’-спироби(1,3,2-диоксафосфорина), диоктадецил дисульфида, дидодецил-3,3’-тиодипропионата, диоктадецил-3,3’-тиодипропионата, бутилгидрокситолуена, этилен бис[3,3-ди[3-(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]бутирата] и смесей этих веществ. Предпочтительными стабилизаторами окисления являются диэтилентриаминпентауксусная кислота (DTPA) или соли DTPA, такие как CaNa3DTPA, ZnNa3DTPA и Ca2DTPA. См. заявку на патент США № 60/783,557, поданную 17 марта 2006 г., озаглавленную Methods for Stabilizing Oxidatively Unstable Pharmaceutical Compositions, и соответствующую ему безусловную заявку, которые полностью включены в настоящий документ путем ссылки. В некоторых вариантах осуществления концентрация стабилизаторов окисления в растворе составляет от около 2,5 мкмоль/л до около 5000 мкмоль/л, необязательно от около 20 мкмоль/л до около 1000 мкмоль/л, необязательно от около 100 мкмоль/л до около 1000 мкмоль/л или необязательно от около 100 мкмоль/л до около 500 мкмоль/л.

В конкретных вариантах осуществления композиции настоящего изобретения составляют для введения с любой частотой введения, включая один раз в неделю, один раз в пять дней, один раз в три дня, один раз в два дня, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день, шесть раз в день, восемь раз в день, каждый час или с большей частотой. Такую частоту дозирования поддерживают также в течение периода времени разной длительности в зависимости от терапевтических потребностей пациента. Длительность конкретного терапевтического режима может варьироваться от режима с однократным дозированием до режима, длящегося несколько месяцев или лет. Специалисту среднего уровня в данной области будет знакомо определение терапевтического режима по конкретным показаниям.

Композиция и продукты, содержащие такие композиции данного изобретения, можно получать с применением методики, хорошо известной специалисту средней квалификации в данной области.

ПРИМЕРЫ

Любые композиции настоящего изобретения, описанные в примерах ниже, иллюстрируют конкретные варианты осуществления композиций настоящего изобретения, но не ограничиваются ими. Другие модификации могут быть выполнены специалистом в данной области без отступления от сущности и объема данного изобретения.

В примерах использовали следующие способы испытания.

Пример 1

Экстракт лимонной осины (Acronychia acidula) при местном нанесении демонстрировал повышение индукции экспрессии гена HAS3 в эпикорнеальных тканях человека с трехмерной структурой.

Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой приобретали у компании MatTek Company (г. Ашленд, штат Массачусетс, США). После получения эпикорнеальных тканей человека с трехмерной структурой их инкубировали в среде для анализа MatTek в течение ночи в соответствии с инструкциями производителя. Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой разделяли на две экспериментальные группы по меньшей мере по три ткани в каждой группе. Раствор экстракта лимонной осины (0,1% масс./об. экстракта в несущей среде, содержащей полипропиленгликоль/этанол 30/70 (об./об.)) местно наносили на эпикорнеальные ткани человека в одной из экспериментальных групп. Эпикорнеальные ткани в обеих экспериментальных группах инкубировали в течение двух дней. Через два дня анализировали экспрессию генов синтазы гиалуроновой кислоты 3 (HAS3). HAS3 - фермент, участвующий в синтезе гиалуроновой кислоты. Использовавшийся экстракт лимонной осины поставлялся компанией Southern Cross Botanicals (Нокроу Nsw, Австралия). После двух дней инкубирования эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой разрезали пополам, половину ткани лизировали в 350 мкл лизирующего буфера, состоящего из 100 частей буфера RLT (набор RNeasy Mini ’ Kit, Qiagen, г. Валенсия, штат Калифорния), на одну часть 2-меркаптоэтанола. Из растворов экстрагировали РНК с помощью мининабора RNeasy (QIAGEN, г. Валенсия, штат Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя и РНК элюировали в 25 мкл воды, не содержащей РНКаз.

Обратную транскрипцию (RT) выполняли с применением набора для обратной транскрипции высокой производительности Biosystems (ThermoFisher Scientific, г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Наборы для анализа экспрессии генов, продаваемые под торговым названием TAQMAN для синтазы гиалуроновой кислоты 3 (HAS3), полипептида A (РНК) II полимеразы (РНК) (POLR2A) и мастер-микс приобретали в ThermoFisher Scientific (г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Анализ кПЦР проводили с использованием мастер-микса TaqMan® (ThermoFisher Scientific, г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси) и выполняли на системе ПЦР в реальном времени, реализуемой на рынке под торговым названием QUANTSTUDIO 7 Flex System (ThermoFisher Scientific, г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Экспрессию гена HAS3 нормировали к экспрессии конститутивного гена человеческой РНК POLR2A. Кратные изменения рассчитывали по сравнению с необработанным контролем (UT) и двусторонним t-критерием Стьюдента для двух проб (Microsoft Office Excel 2007; Microsoft, г. Редмонд, штат Вашингтон, США). Результаты показаны на Фиг. 1.

Пример 2

Экстракт лимонной осины при местном нанесении показал повышение биологической активности гиалуроновой кислоты в эпикорнеальных тканях человека с трехмерной структурой.

Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой приобретали у компании MatTek Company (г. Ашленд, штат Массачусетс, США). После получения эпикорнеальных тканей человека с трехмерной структурой их инкубировали в среде для анализа MatTek в течение ночи в соответствии с инструкциями производителя. Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой разделяли на две экспериментальные группы по меньшей мере по три ткани в каждой группе. Раствор экстракта лимонной осины (0,1% масс./об. экстракта в несущей среде, содержащей полипропиленгликоль/этанол 30/70 (об./об.)) местно наносили на эпикорнеальные ткани человека в одной из экспериментальных групп. Эпикорнеальные ткани в обеих экспериментальных группах инкубировали в течение двух дней. Через два дня культуральную среду собирали для измерения секреции гиалуроновой кислоты (ГК) с помощью набора реагентов для твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) (K-1200, Echelon, г. Солт-Лейк-Сити, штат Юта, США) в соответствии с протоколом производителя. Экстракт лимонной осины, использованный в данном примере 2, аналогичен экстракту лимонной осины, использованному в примере 1. Для оценки активности колориметрическое изменение измеряли при 405 нм с помощью микропланшетного фотометра (SpectraMax M2E, Molecular Devices, г. Саннивейл, штат Калифорния, США). В данном анализе используют метод конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа, поэтому существует обратная корреляция между концентрацией ГК в пробе и колориметрическим изменением. Была построена стандартная кривая с концентрацией ГК по оси X и поглощением по оси Y с указанием на соответствующую концентрацию ГК. Результаты показаны на Фиг. 2.

Пример 3

Экстракт лимонной осины показал повышение экспрессии гена HAS3 в эпикорнеальных тканях человека с трехмерной структурой при обработке в среде.

Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой приобретали у компании MatTek Company (г. Ашленд, штат Массачусетс, США). После получения эпикорнеальных тканей человека с трехмерной структурой их инкубировали в среде для анализа MatTek в течение ночи в соответствии с инструкциями производителя. Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой разделили на четыре экспериментальные группы по меньшей мере по три ткани в каждой группе. Экстракт лимонной осины добавляли соответственно в культуральную среду (m), содержащую эпикорнеальные ткани человека (t) из трех экспериментальных групп, для получения концентраций среды 0,0001%, 0,001% или 0,01% (масс./об.) соответственно. Эпикорнеальные ткани во всех четырех экспериментальных группах инкубировали в течение двух дней. Экстракт лимонной осины, использованный в данном примере 3, поставлявшийся компанией Southern Cross Botanicals (Нокроу Nsw, Австралия), экстрагировали с применением процесса экстракции, отличного от процесса экстракции, использованного в примере 1. После двух дней инкубации анализировали экспрессию генов синтазы гиалуроновой кислоты 3 (HAS3), как описано ниже. Эпикорнеальные ткани человека разрезали пополам, половину ткани лизировали в 350 мкл лизирующего буфера, состоящего из 100 частей буфера RLT (набор RNeasy Mini Qiagen, г. Валенсия, штат Калифорния), на одну часть 2-меркаптоэтанола. Из растворов экстрагировали РНК с помощью мининабора RNeasy (QIAGEN, г. Валенсия, штат Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя и РНК элюировали в 25 мкл воды, не содержащей РНКаз.

Обратную транскрипцию (RT) выполняли с применением набора для обратной транскрипции высокой производительности Biosystems (ThermoFisher Scientific, г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Наборы для анализа экспрессии генов, продаваемые под торговым названием TAQMAN для синтазы гиалуроновой кислоты 3 (HAS3), полипептида A (РНК) II полимеразы (РНК) (POLR2A) и мастер-микс приобретали в ThermoFisher Scientific (г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Анализ кПЦР проводили с использованием мастер-микса TaqMan® (ThermoFisher Scientific, г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси) и выполняли на системе ПЦР в реальном времени, реализуемой на рынке под торговым названием QUANTSTUDIO 7 Flex System (ThermoFisher Scientific, г. Бриджуотер, штат Нью-Джерси). Экспрессию гена HAS3 нормировали к экспрессии конститутивного гена человеческой РНК POLR2A. Кратные изменения рассчитывали по сравнению с необработанным контролем (UT) и двусторонним t-критерием Стьюдента для двух проб (Microsoft Office Excel 2007; Microsoft, г. Редмонд, штат Вашингтон, США). Результаты показаны на Фиг. 3.

Пример 4

Экстракт лимонной осины показал повышение биологической активности гиалуроновой кислоты в эпикорнеальных тканях человека с трехмерной структурой при обработке в среде.

Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой приобретали у компании MatTek Company (г. Ашленд, штат Массачусетс, США). После получения эпикорнеальных тканей человека с трехмерной структурой их инкубировали в среде для анализа MatTek в течение ночи в соответствии с инструкциями производителя. Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой разделили на четыре экспериментальные группы по меньшей мере по три ткани в каждой группе. Экстракт лимонной осины добавляли соответственно в культуральную среду (m), содержащую эпикорнеальные ткани человека (t) из трех экспериментальных групп, для получения концентраций среды 0,0001%, 0,001% или 0,01% (масс./об.) соответственно. Эпикорнеальные ткани во всех четырех экспериментальных группах инкубировали в течение двух дней. Экстракт лимонной осины, использованный в данном примере 4, аналогичен экстракту лимонной осины, использованному в примере 3. Через два дня культуральную среду собирали для измерения секреции гиалуроновой кислоты (ГК) с помощью набора реагентов для твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) (K-1200, Echelon, г. Солт-Лейк-Сити, штат Юта, США) в соответствии с протоколом производителя. Для оценки активности колориметрическое изменение измеряли с помощью микропланшетного фотометра (SpectraMax M2E, Molecular Devices, г. Саннивейл, штат Калифорния, США). В данном анализе используют метод конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа, поэтому существует обратная корреляция между концентрацией ГК в пробе и колориметрическим изменением. Была построена стандартная кривая с концентрацией ГК по оси X и поглощением по оси Y с указанием на соответствующую концентрацию ГК. Результаты показаны на Фиг. 4.

Пример 5

Можно приготовить растворы, содержащие одно или более соединений и/или экстрактов, обладающих ретинолоподобными свойствами и/или полезными эффектами настоящего изобретения, как показано в примерах 5-7.

В таблице 1 представлены компоненты таких составов (как показано в составах 5A-5D), которые можно включить в состав в соответствии с приведенным ниже описанием с помощью традиционной технологии смешивания.

Таблица 1

5A
Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз 5B
Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз 5C
Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз (в случае контактных линз) 5D
Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз (в случае контактных линз) ИНГРЕДИЕНТ % масс./ масс. Количество на одну партию (грамм) % масс./
масс. Количество на одну партию (грамм) % масс./
масс. Количество на одну партию (грамм) % масс./
масс. Количество на одну партию (грамм) Гиалуронат натрия 0,20 2,0 0,30 3,0 0,15 1,5 0,15 1,5 Экстракт лимонной осины 0,10 1,0 0,01 0,10 0,10 1,0 0,01 0,10 Полисорбат 80 1,0 10,0 0,2 2,0 1,0 10,0 0,2 2,0 Полисорбат 20 5,0 50,0 1,0 10,0 2,0 20,0 1,0 10,0 Полиэтилен- гликоль 400 0,25 2,5 0,25 2,5 0 0 0 0 Борная кислота 0,60 6,0 0,60 6,0 0,60 6,0 0,60 6,0 Борат натрия 0,05 0,50 0,05 0,50 0,05 0,50 0,05 0,50 Хлорид натрия* Хлорид калия 0,10 1,0 0,10 1,0 0,10 1,0 0,10 1,0 Дигидрат хлорида кальция 0,006 0,06 0,006 0,06 0,006 0,06 0,006 0,06 Хлорид магния 0,006 0,06 0,006 0,06 0,006 0,06 0,006 0,06 Дигидрат хлорита натрия 0,014 0,14 0,014 0,14 0,014 0,14 0,014 0,14 Поликватерний-42 (33%-й водный раствор) 0,0015 0,015 0,0015 0,015 0,0015 0,015 0,0015 0,015 Дигидрат хлорита натрия 0,014 0,14 0,014 0,14 0,014 0,14 0,014 0,14 1н раствор гидроксида натрия** 1н раствор хлористоводо- родной кислоты** Очищенная вода*** Итого 100,00% 1000,0 г 100,00% 1000,0 г 100,00% 1000,00 г 100,00% 1000,00 г

* можно довести до тоничности 280-290 мОсм/кг;

** можно довести до pH 7,2;

*** необязательно в достаточном количестве до 100% масс./масс.

Для примеров 5A-5D: гиалуронат натрия может поставлять CONTIPRO A.S. (Г. ДОЛНИ ДОБРУЧ, ЧЕШСКАЯ РЕСПУБЛИКА).

Для примеров 5A-5D: экстракт лимонной осины (экстракт плодов Abacross™ Acronychia) может поставлять SOUTHERN CROBOTANICALS (НОКРОУ NSW, АВСТРАЛИЯ).

Для примеров 5A-5D: полисорбат 20 может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: полисорбат 80 может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5B: полиэтиленгликоль 400 может поставлять Clariant Produkte (Г. БУРГКИРХЕН, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: борную кислоту может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: борат натрия может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: хлорид натрия может поставлять Caldic (Г. ДЮССЕЛЬДОРФ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: хлорид калия может поставлять компания Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: дигидрат хлорида кальция может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: хлорид магния может поставлять KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 5A-5D: поликватерний-42 (33%-й водный раствор) может поставлять DSM BIOMEDICAL (Г. БЕРКЛИ, ШТАТ КАЛИФОРНИЯ, США)

Для примеров 5A-5D: дигидрат хлорита натрия может поставлять Oxychem (Г. УИЧИТО, ШТАТ КАНЗАС, США)

Для примеров 5A-5D: 1н гидроксид натрия может поставлять VWR (Г. РАДНЕР, ШТАТ ПЕНСИЛЬВАНИЯ, США).

Для примеров 5A-5D: 1н хлористоводородную кислоту может поставлять VWR (Г. РАДНЕР, ШТАТ ПЕНСИЛЬВАНИЯ, США).

Раствор 5A может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 10 г полисорбата 80 и 50 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.

3. К указанному выше раствору добавляют 1,0 г экстракта лимонной осины. Раствор помешивают до растворения экстракта лимонной осины.

4. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 микрон и возвращают в лабораторный стакан объемом 1500 мл.

5. К раствору со стадии 4 добавляют 2,0 грамм гиалуроната натрия. Раствор помешивают до полного растворения гиалуроната натрия.

6. Затем последовательно добавляют следующие ингредиенты, позволяя каждому полностью раствориться до добавления следующего: 2,5 грамм полиэтиленгликоля-400, 6,0 грамм борной кислоты, 0,05 грамм бората натрия, 1,0 грамм хлорида калия, 0,06 грамм дигидрата хлорида кальция, 0,06 грамм хлорида магния и 0,0015 грамм поликватерния-42 (водного).

7. Продолжая перемешивание, добавляют 0,14 грамм дигидрата хлорита натрия и помешивают до растворения.

8. Тоничность состава определяют и доводят до 280 мОсм/кг хлоридом натрия.

9. pH состава доводят до 7,2 с помощью 1н гидроксида натрия и/или 1н хлористоводородной кислоты.

10. Раствор доводят до массы 1000,0 грамм добавлением очищенной воды по USP и перемешивают 10 минут до полностью однородного состояния.

11. Раствор фильтруют через 0,22-микронный фильтр.

Раствор 5B может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 2 г полисорбата 80 и 10 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.

3. К указанному выше раствору добавляют 0,1 г экстракта лимонной осины. Раствор помешивают до растворения экстракта лимонной осины.

4. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 микрон и возвращают в лабораторный стакан объемом 1500 мл.

5. К раствору со стадии 4 добавляют 3,0 грамм гиалуроната натрия. Раствор помешивают до полного растворения гиалуроната натрия.

6. Затем последовательно добавляют следующие ингредиенты, позволяя каждому полностью раствориться до добавления следующего: 2,5 грамм полиэтиленгликоля-400, 6,0 грамм борной кислоты, 0,05 грамм бората натрия, 1,0 грамм хлорида калия, 0,06 грамм дигидрата хлорида кальция, 0,06 грамм хлорида магния и 0,0015 грамм поликватерния-42 (водного).

7. Продолжая перемешивание, добавляют 0,14 грамм дигидрата хлорита натрия и помешивают до растворения.

8. Тоничность состава определяют и доводят до 280 мОсм/кг хлоридом натрия.

9. pH состава доводят до 7,2 с помощью 1н гидроксида натрия и/или 1н хлористоводородной кислоты.

10. Раствор доводят до массы 1000,0 грамм добавлением очищенной воды по USP и перемешивают 10 минут до полностью однородного состояния.

11. Раствор фильтруют через 0,22-микронный фильтр.

Раствор 5C может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 10 г полисорбата 80 и 20 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.

3. К указанному выше раствору добавляют 1,0 г экстракта лимонной осины. Раствор помешивают до растворения экстракта лимонной осины.

4. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 микрон и возвращают в лабораторный стакан объемом 1500 мл.

5. К раствору со стадии 4 добавляют 1,5 грамм гиалуроната натрия. Раствор помешивают до полного растворения гиалуроната натрия.

6. Затем последовательно добавляют следующие ингредиенты, позволяя каждому полностью раствориться до добавления следующего: 6,0 грамм борной кислоты, 0,05 грамм бората натрия, 1,0 грамм хлорида калия, 0,06 грамм дигидрата хлорида кальция, 0,06 грамм хлорида магния и 0,0015 грамм поликватерния-42 (водного).

7. Продолжая перемешивание, добавляют 0,14 грамм дигидрата хлорита натрия и помешивают до растворения.

8. Тоничность состава определяют и доводят до 280 мОсм/кг хлоридом натрия.

9. pH состава доводят до 7,2 с помощью 1н гидроксида натрия и/или 1н хлористоводородной кислоты.

10. Раствор доводят до массы 1000,0 грамм добавлением очищенной воды по USP и перемешивают 10 минут до полностью однородного состояния.

11. Раствор фильтруют через 0,22-микронный фильтр.

Раствор 5D может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 2 г полисорбата 10 и 50 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.