СВЯЗЫВАЮЩИЕ ДОМЕНЫ АНТИТЕЛА К CD3 И СОДЕРЖАЩИЕ ИХ АНТИТЕЛА, А ТАКЖЕ СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2023 года по МПК C07K16/28 C07K16/30 C07K16/32 A61K39/395 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

[001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США №62/503315, поданной 8 мая 2017 года, полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.

Перечень последовательностей

[002] Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII и настоящим включен посредством ссылки во всей своей полноте. Указанная копия в формате ASCII, созданная 7 апреля 2017 года, имеет название 2009186-0189_SL.TXT и размер 2923505 байт.

Область техники изобретения

[003] Настоящее изобретение относится, среди прочего, к доменам, связывающим кластер дифференцировки 3 (CD3), и содержащим их антителам, в том числе к мультиспецифическим и биспецифическим антителам и их функциональным фрагментам, а также к способам и реагентам для их идентификации, выделения, получения и применения. Также представлены реагенты для идентификации, выделения, отбора, создания и определения характеристик доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител.

Предпосылки к созданию изобретения

[004] Все литературные источники, цитируемые в данном документе, в том числе без ограничения патенты, заявки на патент и непатентные литературные источники и публикации, ссылки на которые встречаются по всему данному документу, настоящим явным образом включены посредством ссылки во всей своей полноте для всех целей.

[005] Иммунная система организма служит в качестве защиты от инфекции, повреждения и рака. Две отдельные, но взаимосвязанные системы, системы гуморального и клеточного иммунитета, совместно осуществляют свои функции для защиты организма. Функционирование гуморальной системы опосредуется растворимыми факторами, называемыми антителами, которые нейтрализуют продукты, распознаваемые организмом как чужеродные. В отличие от этого, клеточная система включает клетки, такие как Т-клетки и макрофаги, которые удаляют и нейтрализуют чужеродные организмы.

[006] Активация Т-клеток важна для стимуляции иммунных ответов. T-клетки проявляют иммунологическую специфичность и управляют большинством клеточных иммунных ответов. Хотя Т-клетки не секретируют антитела, они необходимы для секреции антител B-лимфоцитами. Для активации Т-клеток требуется участие целого ряда молекул клеточной поверхности, таких как комплекс T-клеточного рецептора и молекулы CD4 или CD8. Антигенспецифический T-клеточный рецептор (TcR) состоит из связанного дисульфидными связями гетеродимера, мембранного гликопротеина с цепями альфа и бета (α и β) или гамма и дельта (γ и δ). TcR нековалентно связан с комплексом инвариантных белков, обозначаемых как CD3.

[007] TcR придает антигенную специфичность, а структуры CD3 передают сигналы активации в T-клетки. Комплекс CD3 содержит четыре субъединицы. Они могут представлять собой две дзета-субъединицы, одну эпсилон-субъединицу и либо гамма-, либо дельта-субъединицу. Связывание антигена приводит к перекрестному связыванию и активации комплекса TCR. Передача сигнала T-клеточным рецептором приводит к активации Т-клеток и продуцированию IL-2 и других цитокинов в сложном процессе.

[008] Лигандом TcR является комплекс молекула MHC-пептид на поверхности целевых клеток, таких как инфицированные вирусом клетки. После распознавания молекулы MHC-пептида на целевой клетке T-клетки могут оказывать цитотоксическое или апоптическое воздействие на целевую клетку. В частности, цитотоксические T-клетки (CD8-положительные T-клетки) могут проявлять благоприятные эффекты за счет непосредственного удаления инфицированных вирусом клеток. Этот сегмент клеточного иммунного ответа является особенно полезным и важен для борьбы с вирусными инфекциями и для устранения опухолевых клеток.

[009] Активация цитотоксической T-клетки может происходить за счет прямого связывания антигена CD3 без распознавания комплекса молекула MHC-пептид с помощью TcR. Данный альтернативный путь активации может обеспечиваться с помощью антител к CD3. Были разработаны не принадлежащие человеку моноклональные антитела к некоторым из цепей CD3 (субъединицам), например, мышиные антитела OKT3, SP34, UCHT1 или 64.1. (См., например, June, et al., J. Immunol. 136:3945-3952 (1986); Yang, et al., J. Immunol. 137:1097-1100 (1986); и Hayward, et al., Immunol. 64:87-92 (1988)). Другие антитела к CD3 раскрыты, например, в патентах США №№5585097; 5929212; 5968509; 6706265; 6750325; 7381803; 7728114. Биспецифические антитела со специфичностью связывания CD3 раскрыты, например, в патентах США №№7262276; 7635472 и 7862813.

[0010] Многие из этих антител к CD3 связываются с эпсилон-цепью, что ведет к появлению высокоактивированных T-клеток. Иммунотерапия рака с помощью стандартных моноклональных антител, как правило, не активирует T-лимфоциты в достаточной степени, чтобы вызывать значимую, нацеленную фармакологическую активность в отношении целевого клеточного типа или ткани.

[0011] Последние разработки и применение мультиспецифических антител, таких как биспецифические антитела (bsAb), для перенаправления эффекторных Т-клеток на целенаправленный цитолиз опухолевых клеток показали значительную перспективность как в доклинических, так и в клинических исследованиях (см., например, Topp et al, 2012, Blood 120:5185-87; Bargou et al, 2008, Science 321:974-77). Многие из биспецифических антител, разработанных на сегодняшний день, содержат первый связывающий сайт, специфичный в отношении CD3, предназначенный для рекрутинга и активации T-клеток, и второй связывающий сайт для антигена, ассоциированного с целевым заболеванием, такого как CD19 (Bassan, 2012, Blood 120:5094-95). Считается, что биспецифическое антитело приводит CD3+T-клетки в непосредственный контакт с клетками целевого заболевания и индуцирует клеточно-опосредованную цитотоксичность (Bassan, 2012). Сообщалось, что биспецифические антитела к CD3 X CD19 приводят к полной и устойчивой молекулярной ремиссии при очень низких концентрациях у примерно 70% взрослых пациентов с MRD+ALL (Topp et al, 2012, Blood 120:5185-87). Биспецифические антитела, распознающие глиомы и эпитоп CD3 на Т-клетках, были успешно использованы в лечении опухолей головного мозга у пациентов-людей (Nitta, et al. Lancet 1990; 355:368-371). Кроме того, для клинического исследования были получены биспецифические антитела к CD3 x CD20 были получены (US2015/0166661 и US2017/0202194), а также антитела к CD3 x CLL-1 (US2016/0368994).

[0012] bsAb, перенаправляющие лейкоциты, не ограничиваются воздействием на T-клетки. Биспецифические активаторы киллерных клеток (BiKE), содержащие scFv к антигену CD16 NK-клеток и опухолеассоциированному антигену (например, CD19, CD22, CD33), также показали сильную противоопухолевую активность (например, Miller, Hematology Soc Hematol Educ Program 2013:247-53). Другие альтернативы включают триспецифические активаторы киллерных клеток (TriKE), такие как антитела к CD16xCD19xCD22 (Miller, 2013; Gleason et al, 2012, Mol Cancer Ther 11:2674-84). BiKE к CD16xCD33 применяли для лечения AML и миелодиспластического синдрома (Miller, 2013; Wiernik et al, 2013, Clin Cancer Res 19:3844-55). BiTE к CD16 x CD33 приводил к сильному цитолизу опухолевых клеток и продуцированию цитокинов NK-клетками в случае рефрактерного AML. Ингибирование ADAM 17 усиливало ответ на BiKE к CD16 x CD33 (Miller, 2013). Сообщалось о других триспецифических трехвалентных конструкциях, например, направленных против CD16/CD19/HLA-DR (Schubert et al, 2012, mAb 4:45-56).

[0013] Известны многочисленные способы получения биспецифических антител (см., например, патент США №7405320). Биспецифические антитела можно получать с помощью способа получения квадрогибридом, который предусматривает слияние двух разных гибридом, каждая из которых продуцирует моноклональное антитело, распознающее свой антигенный сайт (Milstein and Cuello, Nature 1983; 305:537-540). Слитые гибридомы способны синтезировать две разные тяжелые цепи и две разные легкие цепи, которые могут связываться в произвольном порядке с образованием неоднородной популяции из 10 различных структур антитела, из которых только одна в количестве 1/8 от общего количества молекул антитела будет биспецифической и, следовательно, должна подвергаться дальнейшей очистке от остальных форм. Слитые гибридомы зачастую цитогенетически менее стабильны, чем исходные гибридомы, что делает более проблематичным получение продуцирующей линии клеток.

[0014] В другом способе получения биспецифических антител для химического соединения двух разных моноклональных антител применяются гетеробифункциональные сшивающие соединения, вследствие чего полученный гибридный конъюгат будет связываться с двумя разными мишенями (Staerz, et al. Nature 1985; 314:628-631; Perez, et al. Nature 1985; 316:354-356). Биспецифические антитела, полученные с помощью данного подхода, фактически являются гетероконъюгатами из двух молекул IgG, которые медленно диффундируют в ткани и быстро удаляются из кровотока. Биспецифические антитела также можно получать путем восстановления каждого из двух исходных моноклональных антител до соответствующих полумолекул, которые затем смешивают и обеспечивают их повторное окисление с получением гибридной структуры (Staerz and Bevan. Proc Natl Acad Sci USA 1986; 83: 1453-1457). Альтернативный подход включает химическую сшивку двух или трех отдельно очищенных фрагментов Fab' с применением соответствующих линкеров. Все эти химические способы неприемлемы для промышленной разработки из-за высокой стоимости производства, трудоемкости производственного процесса, масштабных стадий очистки, низких показателей выхода (<20%) и получения неоднородных продуктов.

[0015] Отдельные VH- и VL-домены антител, полученные с помощью технологии рекомбинантной ДНК, могут попарно связываться друг с другом с образованием димера (рекомбинантный Fv-фрагмент), обладающего способностью связывания (патент США №4642334). Однако такие молекулы, ассоциированные нековалентными связями, в физиологических условиях являются недостаточно стабильными для их практического применения. Когнатные VH- и VL-домены можно соединять с помощью пептидного линкера соответствующего состава и длины (как правило, состоящего из более 12 аминокислотных остатков) с образованием одноцепочечного Fv (scFv) со связывающей активностью. Способы изготовления мультивалентных и мультиспецифических средств на основе scFv посредством изменения длины линкера были раскрыты в патенте США №5844094, патенте США №5837242 и WO 98/44001. Типичными проблемами, которые зачастую были ассоциированы с получением мультивалентных и мультиспецифических средств на основе scFv, являются низкие уровни экспрессии, неоднородные продукты, нестабильность в растворе, приводящая образованию агрегатов, нестабильность в сыворотке крови и нарушенная аффинность.

[0016] Несколько биспецифических антител, целенаправленно воздействующих на CD3 и CD19, находятся на различных этапах разработки и/или были одобрены в качестве терапевтических средств. В конструкции, представляющей собой биспецифическое антитело на основе scFv, известной под названием BITE® (биспецифический активатор T-клеток), используется один полипептид, содержащий 2 антигенсвязывающие специфичности, каждую из которых обеспечивают когнатные VH и VL, последовательно связанные гибким линкером (см., например, Nagorsen et al, 2009, Leukemia & Lymphoma 50:886-91; Amann et al, 2009, J Immunother 32:453-64; Baeuerle and Reinhardt, 2009, Cancer Res 69:4941-44). В другом биспецифическом антителе под названием DART® (перенацеливающееся антитело с двойной аффинностью) используется конструкция диатела, стабилизированная дисульфидной связью (см., например, Moore et al., 2011, Blood 117:4542-51; Veri et al, 2010, Arthritis Rheum 62: 1933-43). Как BITE®, так и DART® проявляют быстрый клиренс из крови вследствие их небольшого размера (~55 кДа), что требует частого введения для поддержания терапевтических уровней биспецифических антител.

[0017] SCORPION Therapeutics (Introduction Biosolutions, Inc., Сиэтл, Вашингтон) представляет собой технологическую платформу, объединяющую два антигенсвязывающих домена в одноцепочечном белке. Один связывающий домен расположен на C-конце, а второй связывающий домен на N-конце эффекторного домена, основанного на Fc-участках иммуноглобулина.

[0018] Белки, подобные тетравалентным и биспецифическим антител, представляют собой DVD-Ig, которые сконструированы из двух моноклональных антител (Wu, C. et al., Nature Biotechnology, 25, p 1290-1297, 2007). Для разработки молекулы DVD-Ig V-домены из двух mAb последовательно сливают с помощью короткого линкера (TVAAP) (SEQ ID NO: 6714) с вариабельным доменом легкой цепи первого антитела (VL) на N-конце, а затем с VL и Ck других антител с образованием легкой цепи белка DVD-Ig. Аналогичным образом, вариабельные участки тяжелой (VH) цепи из двух mAb последовательно сливают с помощью короткого линкера (ASTKGP) (SEQ ID NO: 6715) с первым антителом на N-конце, а затем с другим антителом и константными доменами тяжелой цепи с образованием тяжелой цепи белка DVD-Ig (VH1/VL1). В конструкции DVD-Ig сохранены все константные домены легкой цепи и тяжелой цепи, поскольку они являются критически важными для образования полной IgG-подобной молекулы, связанной дисульфидной связью. Котрансфекция клеток млекопитающих с помощью векторов экспрессии, кодирующих легкую цепь и тяжелую цепь DVD-Ig, приводит к секреции одного вида IgG-подобных молекул с молекулярной массой, составляющей приблизительно 200 кДа. В данной молекуле теперь имеется четыре связывающих сайта, по 2 из каждого mAb.

[0019] Биспецифические антитела показали значительные преимущества по сравнению с моноспецифическими антителами для лечения и выявления рака. Широкое коммерческое применение биспецифических антител было затруднено отсутствием эффективных/недорогих способов получения, отсутствием стабильности биспецифических полипептидов и отсутствием длительного периода полужизни в человеке. За последние десятилетия было разработано огромное количество способов получения биспецифических моноклональных антител (BsMAB).

[0020] Однако, хотя в ходе ранних попыток обнаружения было выявлено множество антител-кандидатов, подходящих для клинического и терапевтического применения, которые демонстрировали превосходную избирательность и высокую эффективность в отношении многочисленных представляющих интерес мишеней, при этом для большей части этих антител в ходе дальнейшей разработки и мероприятий по оценке клинической эффективности впоследствии было обнаружено, что они страдают от нежелательных характеристик, таких как неизбирательность связывания, полиспецифическое связывание (также называемое во всем данном документе как «полиспецифичность»), нецелевое связывание; неспецифическое связывание; низкие уровни или профили экспрессии в эукариотических клетках-хозяевах, таких как клетки-хозяева, представляющие собой клетки млекопитающих, и дрожжевые клетки; неудовлетворительные химические и физические свойства, неудовлетворительная стабильность во время хранения (например, неудовлетворительная/низкая стабильность на протяжении «срока хранения»), неудовлетворительная (низкая) растворимость, неудовлетворительная (высокая) вязкость, склонность к образованию агрегатов и т.п; а также неудовлетворительные клинические и биофизические профили, такие как неудовлетворительные фармакокинетические профили, неудовлетворительные фармакодинамические профили, быстрая или неудовлетворительная скорость клиренса in vivo, короткий период полужизни в кровотоке и т.п; потребовавших тем самым прекращения дальнейшей терапевтической разработки таких антител-кандидатов. Кроме того, было отмечено, что антитела, полученные в прошлом с помощью технологий дисплея, представляют собой меньшинство из всех применяемых клинически и доступных на рынке антител, при этом, как считается многими, эта тенденция обусловлена, по меньшей мере отчасти, неизбирательностью связывания, неудовлетворительными PK-профилями и неудовлетворительными характеристиками CMC - недостатками, которые, как дополнительно предполагается, также в значительной степени обусловлены отсутствием подходящих средств и способов, с помощью которых можно выявлять не подлежащие разработке антитела и/или проводить отрицательный отбор при скрининге антител с использованием технологий дисплея (см., например, Meninger 2012; доступно по протоколу передачи гипертекста: proteins-congress.com/wordpress/wp-content/uploads/2012/01/Trends-in-Therapeutic-Monoclonal-Antibody-Discovery-Technology.pdf).

[0021] В данной области техники разработаны определенные методики и анализы для оценки многих из вышеупомянутых характеристик разрабатываемости для обнаруженных антител в контексте дальнейших действий по разработке («антитела после обнаружения»), такие как CIC, SIC, BVP-ELISA, TMA и другие анализы; однако такие анализы, как правило, не пригодны для их включения в высокопроизводительные платформы для раннего обнаружения полипептидов и антител, такие как платформы на основе дисплея антител. Кроме того, для оценки этих свойств, как правило, требуются количества белка от миллиграммов до граммов, таким образом зачастую налагается фактическое ограничение на целый ряд лидерных продуктов, которые, с прагматической точки зрения, можно рассматривать при разработке, и, следовательно, снижается вероятность успеха программы. Вследствие этого, значительные ресурсы зачастую тратятся на попытки усовершенствования лидерных продуктов-кандидатов с неудовлетворительными поведением с помощью небольшого числа запасных вариантов, доступных на более поздних стадиях разработки.

[0022] C учетом этого «узкого места» были предприняты значительные усилия для разработки анализов с более низкими требованиями к количеству материала и для внедрения оценок разрабатываемости в дальнейшие этапы процесса разработки (Esfandiary et al., 2013, Protein Eng Des Sel 26 (10): 663-670, 2013; Sathish et al., 2013, Nat Rev Drug Discov. 12(4):306-24). Целый ряд таких анализов направлен на прогнозирование растворимости антитела и свойств агрегации у идентифицированных лидерных антител-кандидатов. Хроматография самовзаимодействия (SIC) и хроматография перекрестного взаимодействия (CIC) представляют собой колоночные анализы с уровнем производительности от низкого до среднего, которые коррелируют с растворимостью антитела при относительно низкой концентрации и тем самым прогнозируют ее (Ahamed et al., 2005, J Biol Chem 280(37):32090-100; Jacobs et al., Pharm Res 27:65-71, 2010; Spencer et al., Mabs 4(3)319-325, 2012). Более длительное время удерживания в таких колонках для SIC или CIC позволяет предположить взаимодействие с антителами, связанными в колонке, и это коррелирует с низкой растворимостью (Jacobs et al., 2010). Sule и соавторы сообщали об анализе средней производительности с использованием наночастиц золота для прогнозирования растворимости при очень низкой концентрации и дополнительно расширили объем анализа, чтобы он был совместим со сложными средами для культивирования клеток (Sule et al., Biophys J 101(7):1749-1757, 2011; Mol Pharmaceutics 10(4):1322-1331, 2013).

[0023] Как упомянуто выше, полиспецифичность является крайне нежелательным свойством, которое связывали с неудовлетворительными фармакокинетическими параметрами антитела (Wu et al., J Mol Biol 368:652-665, 2007; et al., 2012, MAbs 4(6):753-760). В уровне техники сообщалось об определенных анализах полиспецифичности, которые служат заменителями средней производительности для иммуногистохимических анализов на широкой панели тканей. Wardemann и сотрудники сообщали о способе твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с применением LPS, инсулина, dsDNA и ssDNA для изучения полиреактивности у репертуаров природных антител в ходе созревания B-клеток (Wardemann et al., 2003, Science 301(5638):1374-7). Белковые биочипы, в которых разнообразный набор белков нанесен на матрицу для высокопроизводительных ELISA, являются другим типом инструмента скрининга. Сообщалось, что чип с ~400 различными белками человека от Protagen (Дортмунд, Германия) выгодно отличается при сравнении с анализом IHC окрашивания (Lueking et al., 2008, Bio Techniques 45(4):Pi-Pv), а также средства измерения нецелевого связывания одобренных для клинического использования ингибиторов TNF-альфа (Feyen et al., Anal Bioanal Chem 391:1713-1720, 2008). Относительно недавно Frese et al. сообщали об анализе в формате 384-луночного планшета, посредством которого измеряют полиреактивность в отношении 32 белков, названном «Определение профиля с использованием панели белков» или 3P (Frese et al., 2013, MAbs 5:2, 279-287). Используя данный анализ, авторы показали, что одобренные FDA терапевтические антитела показывают высокоспецифический профиль в отношении 32 тестовых белков, и их используют для скрининга кандидатов с использованием процесса фагового отбора. Для данных конкретных анализов определения профиля полиреактивности еще была установлена корреляция с проблемами, возникающими в ходе дальнейшей разработки, такими как растворимость, экспрессия и стабильность. О недавних достижениях в этой сфере сообщали et al. 2012 MAbs 4(6):753-760), где было показано, что ELISA с использованием бакуловирусной частицы (BVP) прогнозирует более быстрый in vivo клиренс антитела, опосредованный связью с нецелевой молекулой, тогда как традиционные биофизические свойства, такие как время удерживания при эксклюзионной хроматографии, время элюирования при хроматографии гидрофобного взаимодействия, заряд Fv и pI этого не показали (, et al., 2012 MAbs 4(6):753-760). В последнее время были раскрыты реагенты, способы и средства для оценки, прогнозирования, отбора и обогащения подлежащих разработке терапевтических антител и, в конечном итоге, для создания и получения разрабатываемых антител, например, из библиотек антител (см., например, WO 2014/179363).

[0024] Хотя подход с целенаправленным воздействием на CD3 показал значительный потенциал, общим побочным эффектом у определенных терапевтических средств для иммуностимуляции T-клеток является ассоциированное продуцирование цитокинов, зачастую приводящее к токсическому синдрому высвобождения цитокинов (CRS), также известному как цитокиновый шторм или цитокиновый криз. Поскольку связывающий домен антитела к CD3 из биспецифического антитела активирует все T-клетки, то осуществляется рекрутинг подгруппы CD4+ T-клеток с высоким продуцированием цитокинов. Более того, подгруппа CD4+ T-клеток включает регуляторные Т-клетки, рекрутинг и размножение которых потенциально могут приводить к иммуносупрессии и оказывать негативное воздействие на долгосрочную супрессию опухоли.

[0025] Клеточные пролиферативные нарушения, такие как рак, характеризуются неконтролируемым ростом субпопуляций клеток. Они являются лидирующей причиной смерти в развитых странах мира и второй из лидирующих причин смерти в развивающихся странах, при этом ежегодно диагностируют более 12 миллионов новых случаев рака и 7 миллионов смертей от рака. По оценкам Национального института рака более полумиллиона американцев умрут от рака в 2013 году, что составляет одну из каждых четырех смертей в стране. По мере роста популяции людей пожилого возраста в тоже время возрастает частота возникновения рака, поскольку после достижения семидесятилетнего возраста вероятность развития рака возрастает более чем в два раза. Таким образом, онкологическая помощь представляет собой значительную и постоянно возрастающую нагрузку на общество. Следовательно, существует потребность в обеспечении доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител (в том числе мультиспецифических антител), которые проявляют требуемые профили разрабатываемости и/или риска возникновения CRS, и являются безопасными и эффективными, например, при специфическом связывании с CD3, экспрессируемым на T-клетках, активации T-клеток, (пере)направлении активированных T-клеток на цитолиз целевых клеток и осуществлении этого с уменьшенным риском возникновения синдрома высвобождения цитокинов (также известного как цитокиновый шторм или цитокиновый криз).

Краткое описание изобретения

[0026] В данной работе была обнаружена большая серия доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител и они раскрыты на всем протяжении данного документе, а также раскрыты способы их получения и применения. Представители этой большой серии доменов, связывающих CD3, в совокупности проявляют широкий диапазон требуемых свойств, в том числе, например, широкий спектр значений аффинности в отношении CD3-эпсилон; перекрестную реактивность в отношении как CD3 человека («Hu CD3»), так и CD3 яванского макака («Cy CD3»); а также требуемые профили разрабатываемости и/или профили риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов (CRS), которые у многих доменов, связывающих CD3, раскрытых в данном документе, превосходят профили разрабатываемости у других антител к CD3 (например, I2C; SP34; 38E4; CAB21609_A01, CAB21609_B01, CAB21609_C01,CAB21609_D01, которые раскрыты в данном документе, а также в Yang et al., J Immunol, Vol 137, pages 1097-1100 (August 4, 1986); US 2014/008295 и WO 2015/095392).

[0027] Преимущественно домены, связывающие CD3, могут быть встроены в практически любой формат антител, в том числе форматы иммуноглобулинов (например, IgG, IgM, IgA, IgE и их изотипы) и мультиспецифические (в том числе биспецифические) форматы. Иллюстративные мультиспецифические форматы, которые предназначены для встраивания доменов, связывающих CD3, по настоящему изобретению включают, например, следующие: Fab-Fc-scFv («открывалка для бутылок») (XENCOR), Mab-scFv (XENCOR), Mab-Fv (XENCOR), двойной scFv (XENCOR), центральный Fv (XENCOR), центральный scFv (XENCOR), одноплечевой центральный scFv (XENCOR), Fab-Fab (XENCOR), Fab-Fv (XENCOR), mAb-Fv (XENCOR), mAb-Fab (XENCOR), DART (MACROGENICS), BiTE (Amgen/Micromet), KiTE, IgG с универсальной легкой цепью (Genentech), TandAb (Affimed), Cross-Mab (Roche), SEED (EMD Serono), BEAT (Glenmark), TrioMab (Trion Pharma/FresEnius Biotech), DuetMab (MedImmune), а также другие раскрытые, например, в WO 95/09917; WO 2008/119566; WO 2008/119567; WO2011/121110; WO 2010/037835; WO 2007/042261; WO 2007/110205; WO 2011/121110; WO 2012/055961; WO 2012/16067; WO 2016/086189; WO 2016/182751; WO 2015/006749; WO 2014/049003; WO 2013/177101; WO 2015/128509; US 7951917; US 2009/0252729; US 2014/0348839; US 7183076; Mazor et al., Mabs, Vol. 7, pages 377-389 (2015); Muda et al., Protein Engineering, Designe, & Selection, Vol. 24, pages 447-454 (2011); и Del Bano et al., Antibodies, Vol. 5, pages 1-23 (2016).

[0028] Поскольку домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению в совокупности обладают широким диапазоном значений аффинности в отношении CD3, экспрессируемого на клеточной поверхности, и широким диапазоном активации T-клеток и (пере)направленной активности уничтожения целевых клеток и, кроме того, подходят для фактически любого мультиспецифического (в том числе биспецифического) формата антител с любой представляющей интерес валентностью, антитела к CD3 по настоящему изобретению могут быть выбраны и встроены в терапевтические молекулы, сконструированные для целенаправленного воздействия практически на любой тип клеток, тип тканей и физиологический компартмент, и, таким образом, могут служить в качестве компонентов терапевтических молекул, разработанных для борьбы почти с любым типом заболевания или болезненным состоянием.

[0029] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, которые связываются с CD3 (например, CD3ε и/или CD3γ).

[0030] В определенных вариантах осуществления представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению, которые демонстрируют улучшенный профиль разрабатываемости по сравнению с другими доменами, связывающими CD3 (или содержащими их антителами). В определенных вариантах осуществления представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению, которые демонстрируют улучшенный профиль разрабатываемости по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, которые представлены в таблице 2.

[0031] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют критерий разрабатываемости, составляющий от приблизительно 0 MFI до приблизительно 500 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 200 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 150 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 100 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 50 MFI; от приблизительно 200 MFI до 500 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 200 MFI или от приблизительно 100 MFI до приблизительно 150 MFI.

[0032] В других вариантах осуществления фрагменты, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют нормализованный критерий разрабатываемости, составляющий от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,6; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,57; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,55; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,53; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,51; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,49; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,47; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,45; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,43; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,41; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,39; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,37; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,35; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,33; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,31; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,29; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,27; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,25; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,23; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,21; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,19; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,17; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,15; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,13; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,11; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,09; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,07 или от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,05.

[0033] В определенных вариантах осуществления профиль разрабатываемости и/или критерий разрабатываемости для фрагментов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению получают путем проведения анализа PSR; анализа SCP; AS-CINS; анализа BVP; ELISA; анализа DSF; анализа Tm; анализа HIC; анализа CIC или их комбинаций.

[0034] В других вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению вызывают сильную активацию Т-клеток или T-клеточный лизис, демонстрируя при этом сниженную предрасположенность к вызову продуцирования цитокинов до уровней, способных индуцировать синдром высвобождения цитокинов. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин, по которому измеряют уровни продуцирования цитокинов с целью оценки предрасположенности к вызову продуцирования цитокинов на уровнях, способных индуцировать синдром высвобождения цитокинов, выбран из группы, состоящей из интерлейкина 6 (IL-6); интерлейкина 12 (IL-12); фактора некроза опухолей альфа (TNFa); (TGFb); интерлейкина 2 (IL-2) и интерферона-гамма (IFNg).

[0035] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению вызывают активацию T-клеток или T-клеточный лизис, демонстрируя при этом сниженную предрасположенность к вызову продуцирования цитокинов до уровней, способных к индуцированию высвобождения цитокинов, по сравнению с уровнями, которые наблюдают при использовании одного или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин, по которому измеряют уровни продуцирования цитокинов с целью оценки предрасположенности к вызову продуцирования цитокинов на уровнях, способных индуцировать синдром высвобождения цитокинов, выбран из группы, состоящей из интерлейкина 6 (IL-6); интерлейкина 12 (IL-12); фактора некроза опухолей альфа (TNFa); (TGFb); интерлейкина 2 (IL-2) и интерферона-гамма (IFNg).

[0036] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют профиль риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов, который является показателем сниженного риска вызова синдрома высвобождения цитокинов (CRS). В других вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют профиль риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов, который является показателем сниженного риска вызывания синдрома высвобождения цитокинов (CRS) по сравнению с профилем риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов, оцениваемым для одного или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

[0037] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH3 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH3 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0038] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH2 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH2 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0039] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH1 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH1 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0040] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL3 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL3 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0041] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL2 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL2 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0042] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL1 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL1 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0043] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее тяжелую цепь (HC), которая на 100% идентична; по меньшей мере 99% идентична; по меньшей мере 98% идентична; по меньшей мере 97% идентична; по меньшей мере 96% идентична; по меньшей мере 95% идентична; по меньшей мере 94% идентична; по меньшей мере 93% идентична; по меньшей мере 92% идентична; по меньшей мере 91% идентична; по меньшей мере 90% идентична; по меньшей мере 89% идентична; по меньшей мере 88% идентична; по меньшей мере 87% идентична; по меньшей мере 86% идентична; по меньшей мере 85% идентична; по меньшей мере 84% идентична; по меньшей мере 83% идентична; по меньшей мере 82% идентична или по меньшей мере 80% идентична HC, выбранной из группы, состоящей из HC из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что HC не характеризуется 100% идентичностью с HC из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0044] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее легкую цепь (LC), которая на 100% идентична; по меньшей мере 99% идентична; по меньшей мере 98% идентична; по меньшей мере 97% идентична; по меньшей мере 96% идентична; по меньшей мере 95% идентична; по меньшей мере 94% идентична; по меньшей мере 93% идентична; по меньшей мере 92% идентична; по меньшей мере 91% идентична; по меньшей мере 90% идентична; по меньшей мере 89% идентична; по меньшей мере 88% идентична; по меньшей мере 87% идентична; по меньшей мере 86% идентична; по меньшей мере 85% идентична; по меньшей мере 84% идентична; по меньшей мере 83% идентична; по меньшей мере 82% идентична или по меньшей мере 80% идентична LC, выбранной из группы, состоящей из LC из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что LC не характеризуется 100% идентичностью с LC из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0045] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что ни CDRH3, CDRH2, ни CDRH1 не характеризуются 100% идентичностью с CDRH3, CDRH2 или CDRH1 соответственно из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0046] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что ни CDRL3, CDRL2, ни CHRL1 не характеризуются 100% идентичностью с CHRL3, CDRL2 или CDRL1 соответственно из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0047] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что ни CDRH3, CDRH2, CDRH1, CDRL3, CDHL2, ни CHRL1 не характеризуются 100% идентичностью с CHRH3, CDRH2, CDRH1, CDRL3, CDHL2 или CDRL1 соответственно из любых из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[0048] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-15512; ADI-15516 и ADI-16513, представленных в таблице 2.

[0049] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, изADI-18562; ADI-18564; ADI-18565; ADI-18566; ADI-18567; ADI-18568; ADI-18570; ADI-18571; ADI-18572; ADI-18573; ADI-18563; ADI-18569; ADI-18574; ADI-18575; ADI-18576; ADI-18578; ADI-18579; ADI-18580; ADI-18581; ADI-18582; ADI-18584; ADI-18585; ADI-18577; ADI-18583; ADI-18588; ADI-18589; ADI-18590; ADI-18591; ADI-18593; ADI-18594; ADI-18595; ADI-18596; ADI-18597; ADI-18592; ADI-18587; ADI-18586 и ADI-16606; представленных в таблице 2.

[0050] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-18576; ADI-20820; ADI-20578; ADI-20571; ADI-21097; ADI-20577; ADI-20576; ADI-20568; ADI-20582; ADI-20575; ADI-20567; ADI-20574; ADI-20573; ADI-20579; ADI-18565; ADI-20818; ADI-20587; ADI-20588; ADI-20589; ADI-20590; ADI-20594; ADI-20596; ADI-20599; ADI-20605; ADI-20607; ADI-20608 и ADI-20609; представленных в таблице 2.

[0051] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-16606; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-28708; ADI-28709; ADI-28710; ADI-21943; ADI-28711; ADI-28712; ADI-28713; ADI-28714; ADI-28715; ADI-21944; ADI-28716; ADI-21945; ADI-21946; ADI-28717; ADI-21947; ADI-28718; ADI-28719; ADI-28720; ADI-28721; ADI-28722; ADI-28723; ADI-28724; ADI-28725; ADI-28726; ADI-28727; ADI-28728; ADI-28729; ADI-28730; ADI-28731; ADI-28732; ADI-28733; ADI-28734; ADI-28735; ADI-28736; ADI-28737; ADI-28738; ADI-28739; ADI-28740; ADI-28741; ADI-28742; ADI-28743; ADI-21948; ADI-21949; ADI-28744; ADI-21950; ADI-28745; ADI-28746; ADI-28747; ADI-28748; ADI-21951; ADI-21952; ADI-28749; ADI-28750; ADI-28751; ADI-21953; ADI-28752; ADI-21954; ADI-28753; ADI-28754; ADI-28755; ADI-28756; ADI-28757; ADI-28758; ADI-28759; ADI-28760; ADI-28761; ADI-28762; ADI-28763; ADI-28764; ADI-28765; ADI-28766; ADI-28767; ADI-28768; ADI-21955; ADI-28769; ADI-28770; ADI-21956; ADI-28771; ADI-28772; ADI-28773; ADI-28774 и ADI-28775; представленных в таблице 2.

[0052] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из of ADI-21959; ADI-21963; ADI-21965; ADI-21967; ADI-21970; ADI-21971; ADI-21972; ADI-21973; ADI-21974; ADI-21975; ADI-21976; ADI-21977; ADI-21978; ADI-21979; ADI-21943; ADI-21944; ADI-21945; ADI-21946; ADI-21947; ADI-21948; ADI-21949; ADI-21950; ADI-21951; ADI-21952; ADI-21953; ADI-21954; ADI-21955; и ADI-21956; представленных в таблице 2.

[0053] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-21952; ADI-22523; ADI-24403; ADI-24404; ADI-24405; ADI-24407; ADI-24408; ADI-24409; ADI-24410; ADI-24411; ADI-24412; ADI-24413; ADI-24414; ADI-24415; ADI-24416; ADI-24417; ADI-24418; ADI-24434; ADI-24435; ADI-24436; ADI-24437; ADI-24438; ADI-24439; ADI-24440; ADI-24441; ADI-24442; ADI-24443; ADI-24444; ADI-24445; ADI-24446; ADI-24449; ADI-24388; ADI-24389; ADI-24390; ADI-24391; ADI-24392; ADI-24393; ADI-24394; ADI-24395; ADI-24396; ADI-24397; ADI-24398; ADI-24399; ADI-24400; ADI-24401; ADI-24402; ADI-24419; ADI-24420; ADI-24421; ADI-24422; ADI-24423; ADI-24424; ADI-24425; ADI-24426; ADI-24427; ADI-24428; ADI-24429; ADI-24430; ADI-24431; ADI-24432; ADI-24433; ADI-24447 и ADI-24448; представленных в таблице 2.

[0054] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-23652; ADI-23653; ADI-23654; ADI-23655; ADI-23656; ADI-23657; ADI-23658; ADI-23651; ADI-23644; ADI-23645; ADI-23646; ADI-23647; ADI-23648; ADI-23649; ADI-23650; ADI-23667; ADI-23668; ADI-23669; ADI-23670; ADI-23671; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23659; ADI-23660; ADI-23661; ADI-23663; ADI-23664; ADI-23639; ADI-23641; ADI-23642; ADI-23640; ADI-23643; ADI-21952; ADI-23633; ADI-23634; ADI-23635; ADI-23636; ADI-23637; ADI-23638; ADI-23632 и ADI-23629; представленных в таблице 2.

[0055] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26909; ADI-26910; ADI-26912; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26916; ADI-26917; ADI-26918; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26924; ADI-26925; ADI-26927; ADI-26928; ADI-26929; ADI-26930; ADI-26932; ADI-26933; ADI-26938; ADI-26939; ADI-26940; ADI-26941; ADI-26942; ADI-26943; ADI-26944; ADI-26945; ADI-26950; ADI-26954; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23664; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993; ADI-26994 и ADI-26995; представленных в таблице 2.

[0056] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из of ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26910; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26943; ADI-26954; ADI-21952; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26962; ADI-26978; ADI-26983 и ADI-26994; представленных в таблице 2.

[0057] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из ADI-15512; ADI-16513; ADI-15516; ADI-18565; ADI-18589; ADI-18585; ADI-18590; ADI-18576; ADI-20568; ADI-20580; ADI-21978; ADI-22523; ADI-25133 и ADI-26906.

[0058] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из ADI-16606; ADI-29601; ADI-29602; ADI-29603; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-21952; ADI-23633; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26961; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26967; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26970; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993 и ADI-26994.

[0059] В определенных вариантах осуществления или по отдельности, или в комбинации с другими вариантами осуществления по настоящему изобретению домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют сниженную предрасположенность к деградации по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

[0060] В определенных вариантах осуществления или по отдельности, или в комбинации с другими вариантами осуществления по настоящему изобретению домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют сниженный профиль риска возникновения CRS по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

[0061] В определенных вариантах осуществления или по отдельности, или в комбинации с другими вариантами осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела демонстрируют сниженную предрасположенность к деградации по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

[0062] В определенных вариантах осуществления и/или в комбинации с любым из вариантов осуществления, раскрытых на протяжении всего данного документа, представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, которые являются гуманизированными. В определенных вариантах осуществления такие домены, связывающие CD3, содержат CDR из таких других вариантов осуществления и дополнительно содержат акцепторный каркасный участок человека, например, каркасный участок иммуноглобулина человек или консенсусный каркасный участок человека.

[0063] В некоторых вариантах осуществления и/или в комбинации с любым из вариантов осуществления, раскрытых на протяжении всего данного документа, представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, содержащие VH, как и в любом из вариантов осуществления, представленных на протяжении всего данного документа, и VL, как и в любом из вариантов осуществления, представленных на протяжении всего данного документа, где одна или обе последовательности вариабельных доменов включают посттрансляционные модификации.

[0064] В дополнительном аспекте настоящего изобретения представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, которые связываются с теми же эпитопом, что и домены, связывающие CD3, представленные в других вариантах осуществления, раскрытых на протяжении всего данного документа.

[0065] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и/или содержащие их антитела характеризуются константой диссоциации (Kd) с CD3, составляющей ≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ, ≤0,1 нМ, ≤0,01 нМ или ≤0,001 нМ (например, 10^-8 M или меньше, например, от 10^-8 M до 10^-13 M, например, от 10^-9 M до 10^-13 M).

[0066] В дополнительном аспекте настоящего изобретения домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела предусматривают мультиспецифическое антитело. В дополнительном аспекте настоящего изобретения домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела предусматривают биспецифическое антитело.

[0067] В дополнительном аспекте настоящего изобретения домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела содержат по меньшей мере второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с целевым антигеном онкологического заболевания; целевым антигеном иммуноонкологического заболевания; целевым антигеном нейродегенеративного заболевания; целевым антигеном аутоиммунного нарушения; целевым антигеном инфекционного заболевания; целевым антигеном метаболического заболевания; целевым антигеном когнитивного нарушения; целевым антигеном гематоэнцефалического барьера или целевым антигеном заболевания крови.

[0068] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например биспецифическое антитело, где мультиспецифическое антитело содержит второй связывающий домен, характеризующийся специфичностью в отношении второго антигена, выбранного из группы, состоящей из 0772P (CA125, MUC16; № доступа в Genbank AF36148); адипофилина (перилипин-2, белок, связанный с дифференцировкой адипоцитов, ADRP, ADFP, MGC10598; эталонная последовательность в NCBI: NP-001113.2); AIM-2 (отсутствующий при меланоме-2, PYHIN4, интерферон-индуцируемый белок AIM2; эталонная последовательность в NCBI: NP-004824.1); ALDH1 A1 (представитель A1 семейства 1 альдегиддегидрогеназ, ALDH1, PUMB1, ретинальдегиддегидрогеназа-1, ALDC, ALDH-E1, ALHDII, RALDH 1, EC 1.2.1.36, ALDH11, HEL-9, HEL-S-53e, HEL12, RALDH1, ацетальдегиддегидрогеназа 1, альдегиддегидрогеназа 1, растворимая альдегиддегидрогеназа, печеночная цитозольная, ALDH класса 1, белок-12 просвета придатка яичка, белок-9 просвета придатка яичка, белок Li 53e, связывающий секрет семенной жидкости придатка яичка, ретинальдегидрогеназа 1, RaIDH1, представитель A1 семейства 1 альдегиддегидрогеназ, альдегиддегидрогеназа цитозольная, EC 1.2.1; эталонная последовательность в NCBI: NP-000680.2); альфа-актинина-4 (ACTN4, актинин альфа-4, FSGS1, фокально-сегментарный гломерулосклероз 1, немышечный альфа-актинин-4, белок, перекрестно связывающий F-актин, FSGS, АКТИНИН-4, изоформа актинина-альфа4, альфа-актинин-4; эталонная последовательность в NCBI: NP-004915.2); альфа-фетопротеина (AFP, HPAFP, FETA, альфа-1-фетопротеин, альфа-фетоглобулин, альфа-1-фетопротеин, альфа-фетоглобулин, HP; GenBank: AAB58754.1); амфирегулина (AREG, SDGF, фактор роста шванномы, фактор роста клеток прямой и ободочной кишки, AR, CRDGF; GenBank: AAA51781.1); ARTC1 (ART1, ADP-рибозилтрансфераза-1, моно(ADP-рибозил)трансфераза-1, ADP-рибозилтрансфераза C2- и C3-токсин-подобная-1, ART2, CD296, RT6, ADP-рибозилтрансфераза-2, GPI-связанная NAD(P)(+)-аргинин-ADP-рибозилтрансфераза-1, EC 2.4.2.31, антиген CD296; NP); ASLG659; ASPHD1 (аспартат-бетагидроксилазный домен содержащий 1, белок-1, содержащий аспартат-бета-гидроксилазный домен, EC 1.14.11.-, EC 1.14.11; GenBank: AAI44153.1); B7-H4 (VTCN1, ингибитор-1 активации T-клеток, содержащих домен V-набора, B7H4, представитель-1 суперсемейства B7, иммунный костимулирующий белок B7-H4, B7h.5, костимулирующая молекула B7x T-клеток, B7S1, B7X, VCTN1, H4, представитель семейства B7, PRO1291, представитель семейства B7, H4, костимулирующая молекула B7x T-клеток, ингибитор-1 активации T-клеток, содержащих домен V-набора, белок B7S1; GenBank: AAZ17406.1); BAFF-R (TNFRSF13C, суперсемейство рецепторов фактора некроза опухоли, представитель 13C, BAFFR, рецептор фактора активации B-клеток, рецептор BAFF, рецептор-3 BLyS, CVID4, BROMIX, CD268, рецептор фактора активации B-клеток, проликсин, представитель BR3 суперсемейство рецепторов фактора некроза опухоли, антиген CD268; эталонная последовательность в NCBI: NP-443177.1); BAGE-1; BCLX (L); слитого белка BCR-ABL (b3a2); бета-катенина (CTNNB1, катенин (кадгерин-ассоциированный белок), бета-1, 88 кДа, CTNNB, MRD19, катенин (кадгерин-ассоциированный белок), бета-1 (88 кДа), armadillo, катенин-бета-1; GenBank: CAA61107.1); BING-4 (WDR46, домен 46 с WD-повтором, C6orf11, BING4, белок BING4, содержащий WD-повтор, открытая рамка считывания-11 хромосомы 6, FP221, UTP7, белок-46, содержащий WD-повтор; NP); BMPR1 B (рецептор типа IB костного морфогенетического белка, № доступа в Genbank NM-00120; NP); B-RAF (бревикан (BCAN, BEHAB, № доступа в Genbank AF22905); бревикана (BCAN, протеогликан-7 хондроитинсульфата, гиалуронан-связывающий белок, содержащийся в большом количестве в головном мозге, BEHAB, CSPG7, протеогликан-бревикан, коровый белок бревикан, протеогликан хондроитинсульфат BEHAB; GenBank: AAH27971.1); CALCA (родственный кальцитонину полипептид-альфа, CALC1, кальцитонин-1, кальцитонин, CGRP альфа-типа, пептид I, родственный гену кальцитонина, CGRP-I, CGRP, CGRP1, CT, KC, кальцитонин/родственный кальцитонину полипептид-альфа, катакальцин; NP); CASP-5 (CASP5, каспаза 5, апоптоз-связанная цистеинпептидаза, каспаза 5, апоптоз-связанная цистеинпротеаза, протеаза ICH-3, протеаза TY, ICE(rel)-111, ICE(rel)III, ICEREL-III, ICH-3, каспаза-5, TY-протеаза, EC 3.4.22.58, ICH3, EC 3.4.22; NP); CASP-8; CD19 (предшественник изоформы 2 антигена CD19 CD19-B-лимфоцитов, B4, CVID3 [Homo sapiens], эталонная последовательность в NCBI: NP-001761.3); CD20 (антиген CD20 CD20-B-лимфоцитов, представитель 1 подсемейства A белков с 4 доменами, пронизывающими мембрану, B1, Bp35, CD20, CVID5, LEU-16, MS4A2, S7; эталонная последовательность в NCBI: NP-690605.1); CD21 (CD21 (CR2 (рецептор комплемента) или C3DR (C3d/рецептор вируса Эпштейна-Барр) или Hs.73792; № доступа в Genbank M2600); CD22 (B-изоформа B-клеточного рецептора CD22, BL-CAM, Lyb-8, LybB, SIGLEC-2, FLJ22814, № доступа в Genbank AK02646); CD22; CD33 (молекула CD33, антиген CD33 (Gp67), Ig-подобный лектин-3, связывающий сиаловую кислоту, связывающий сиаловую кислоту Ig-подобный лектин-3, SIGLEC3, gp67, SIGLEC-3, поверхностный антиген CD33 миелоидных клеток, p67, Siglec-3, антиген CD33; GenBank: AAH28152.1); CD45; CD70 (суперсемейство (лигандов) фактора некроза опухоли CD70, представитель 7; поверхностный антиген CD70; антиген Ki-24; лиганд CD27; CD27-L; представитель 7 суперсемейства лигандов фактора некроза опухоли; эталонная последовательность в NCBI для вида Homo sapiens: NP-001243.1); CD72 (CD72 (B-клеточный антиген дифференцировки CD72, Lyb-; 359 aa, μl: 8,66, MW: 40225, TM: 1 [P] ген, хромосома: 9p13.3, № доступа в Genbank NP-001773.); CD79a (CD79a (CD79A, CD79a, иммуноглобулин-ассоциированный альфа, специфический для B-клеток белок, который ковалентно взаимодействует с Ig-бета (CD79B) и образует комплекс на поверхности с молекулами IgM, передает сигнал, вовлеченный в дифференцировку B-клеток), μl: 4,84, MW: 25028 TM: 2 [P] ген, хромосома: 19q13.2, № доступа в Genbank NP-001774.1); CD79b (CD79b (CD79B, CD79b, IGb (иммуноглобулин-ассоциированный бета), B29, № доступа в Genbank NM-000626 или 1103867); Cdc27 (белок 27 цикла клеточного деления, D0S1430E, D17S978E, субъединица-3 комплекса стимуляции анафазы, субъединица-3 анафаза-стимулирующего комплекса, ANAPC3, APC3, CDC27Hs, H-NUC, гомолог CDC27, гомолог белка-27 цикла клеточного деления (S. cerevisiae), HNUC, NUC2, белок-3 анафаза-стимулирующего комплекса, гомолог белка-27 цикла клеточного деления, белок-27 цикла клеточного деления, гомолог Nuc2; GenBank: AAH11656.1); CDK4 (циклинзависимая киназа 4, протеинкиназа-4 клеточного деления, PSK-J3, EC 2.7.11.22, CMM3, EC 2.7.11; эталонная последовательность в NCBI: NP-000066.1); CDKN2A (ингибитор циклинзависимой киназы 2A, MLM, CDKN2, MTS1, ингибитор 2A циклинзависимой киназы (меланома, P16, ингибирует CDK4), ингибитор A циклинзависимой киназы-4, множественный онкосупрессор-1, CDK4I, MTS-1, CMM2, P16, ARF, INK4, INK4A, P14, P14ARF, P16-INK4A, P16INK4, P16INK4A, P19, P19ARF, TP16, ингибитор CDK4 P16-INK4, отрицательный бета-регулятор клеточного цикла, p14ARF, p16-INK4, p16-INK4a, p16INK4A, p19ARF; NP); CEA; CLL1 (CLL-1 (CLEC12A, MICL и DCAL, кодирует представителя суперсемейства лектинов C-типа/лектиноподобных доменов C-типа (CTL/CTLD). Представители данного семейства имеют общую белковую укладку и имеют различные функции, такие как клеточная адгезия, межклеточная передача сигнала, обмен гликопротеинов, и играют роль в воспалении и иммунном ответе. Белок, кодируемый данным геном, является отрицательным регулятором функции гранулоцитов и моноцитов. Для данного гена было описано несколько вариантов транскриптов, возникших в результате альтернативного сплайсинга, но природа полноразмерной последовательности некоторых из таких вариантов не была определена. Данный ген тесно связан с другими представителями суперсемейства CTL/CTLD в участке генного комплекса натуральных киллеров на хромосоме 12p13 (Drickamer K Curr. Opin. Struct. Biol. 9:585-90 [1999]; van Rhenen A, et al., Blood 110):2659-66 [2007]; Chen C H, et al. Blood 107:1459-67 [2006]; Marshall A S, et al. Eur. J. Immunol. 36:2159-69 [2006]; Bakker A B, et al Cancer Res. 64:8443-50 [2004]; Marshall A S, et al J. Biol. Chem. 279:14792-80. Было показано, что CLL-1 представляет собой трансмембранный рецептор II типа, содержащий одиночный лектиноподобный домен C-типа (который по прогнозам не связывает кальций или сахар), стеблевой участок, трансмембранный домен и короткий цитоплазматический хвост, содержащий мотив ITIM.); CLPP (протеолитическая субъединица казеинолитической митохондриальной матриксной пептидазы, эндопептидаза Clp, EC 3.4.21.92, PRLTS3, ATP-зависимая протеаза ClpAP (E. coli), гомолог ClpP (казеинолитическая протеаза, ATP-зависимая, протеолитическая субъединица, E. coli), казеинолитическая пептидаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы (E. coli), казеинолитическая протеаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы (E. coli), человек, протеолитическая субъединица, ATP-зависимая протеаза ClpAP, протеолитическая субъединица, человек, ATP-зависимая казеинолитическая пептидаза ClpP, протеолитическая субъединица, казеинолитическая пептидаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы, казеинолитическая протеаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы, предполагаемая протеолитическая субъединица ATP-зависимой протеазы Clp, митохондриальная; NP); COA-1; CPSF; CRIPTO (CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, фактор роста тератокарциномы, № доступа в Genbank NP-003203 или NM-00321); Cw6; CXCR5 (CXCR5 (рецептор-1 лимфомы Беркитта, сопряженный с G-белком рецептор, который активируется под действием хемокина CXCL13, функция которого заключается в миграции лимфоцитов и гуморальной защите, играет роль в инфекции HIV-2 и, возможно, в развитии СПИДа, лимфомы, миеломы и лейкоза); 372 aa, μl: 8,54, MW: 41959 TM: 7 [P] ген, хромосома: 11q23.3, № доступа в Genbank NP-001707.); CXORF61 (CXORF61- открытая рамка считывания 61 хромосомы X [Homo sapiens], эталонная последовательность в NCBI: NP-001017978.1); циклина D1 (CCND1, BCL1, PRAD1, D11S287E, белок-1 B-клеточной CLL/лимфомы, белок-1 B-клеточной лимфомы, онкоген BCL-1, онкоген PRAD1, циклин D1 (PRAD1: белок-1 аденоматоза паращитовидной железы), G1/S-специфический циклин D1, белок-1 аденоматоза паращитовидной железы, U21B31, G1/S-специфический циклин-D1, BCL-1; эталонная последовательность в NCBI: NP-444284.1); циклина-A1 (CCNA1, CT146, циклин A1; GenBank: AAH36346.1); слитого белка dek-can; DKK1 (ингибитор-1 сигнального пути Dickkopf WNT, SK, hDkk-1, гомолог-1 Dickkopf (Xenopus laevis), гомолог Dickkopf-1 (Xenopus laevis), DKK-1, гомолог Dickkopf-1, родственный Dickkopf белок-1, Dickkopf-1-подобный, Dickkopf-подобный белок-1, Dickkopf-родственный белок-1, Dickkopf-1, Dkk-1; GenBank: AAQ89364.1); DR1 (супрессор-1 транскрипции, TBP-связывающий (отрицательный кофактор-2), отрицательный кофактор-2-бета, фосфобелок, ассоциированный с TATA-связывающим белком, NC2, NC2-БЕТА, белок Dr1, NC2-бета, супрессор-1 транскрипции; эталонная последовательность в NCBI: NP-001929.1); DR13 (главный комплекс гистосовместимости, класс II, DR-бета-1, HLA-DR1B, DRw10, DW2.2/DR2.2, SS1, DRB1, HLA-DRB, HLA-антиген комплекса гистосовместимости класса II, цепь DR-1-бета, антиген DRB1 лейкоцитов человека, антиген DRB1 лимфоцитов, антиген MHC класса II, цепь бета-1 HLA-DR MHC класса II, гликопротеин клеточной поверхности HLA-DR-бета MHC класса II, HLA-DRw10-бета MHC класса II, DR-1, DR-12, DR-13, DR-14, DR-16, DR-4, DR-5, DR-7, DR-8, DR-9, DR1, DR12, DR13, DR14, DR16, DR4, DR5, DR7, DRB, DR9, DRw11, DRw8, HLA-DRB2, клон P2-бета-3, антиген DRB1*1 MHC класса II, антиген DRB1*10 MHC класса II, антиген DRB1*11 MHC класса II, антиген DRB1*12 MHC класса II, антиген DRB1*13 MHC класса II, антиген DRB1*14 MHC класса II, антиген DRB1*15 MHC класса II, антиген DRB1*16 MHC класса II, антиген DRB1*3 MHC класса II, антиген DRB1*4 MHC класса II, антиген DRB1*7 MHC класса II, антиген DRB1*8 MHC класса II, антиген DRB1*9 MHC класса II; NP); E16 (E16 (LAT1, SLC7A5, № доступа в Genbank NM-00348); EDAR (EDAR- предшественник представителя EDAR суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли, рецептор EDA-A1; гомолог downless; рецептор эктодиспластина-A; рецептор эктодермальной дисплазии; рецептор-1 ангидротического эктодиспластина, DL; ECTD10A; ECTD10B; ED1R; ED3; ED5; EDA-A1R; EDA1R; EDA3; HRM1 [Homo sapiens]; эталонная последовательность в NCBI: NP-071731.1); EFTUD2 (молекула-2, содержащая GTP-связывающий домен фактора элонгации Tu, белок-2, содержащий GTP-связывающий домен фактора элонгации Tu, hSNU114, гомолог SNU114, U5 SnRNP-специфический Белок, 116 кДа, MFDGA, KIAA0031, 116 кДа, U5 SnRNP-специфический белок, компонент малого ядерного рибонуклеопротеина U5 размером 116 кДа, MFDM, SNRNP116, Snrp116, Snu114, U5-116KD, SNRP116, U5-116 кДа; GenBank: AAH02360.1); EGFR (рецептор эпидермального фактора роста, ERBB, протоонкоген C-ErbB-1, рецепторная тирозин-протеинкиназа ErbB-1, ERBB1, HER1, EC 2.7.10.1, рецептор эпидермального фактора роста (гомолог вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц (V-Erb-B)), гомолог вирусного онкогена эритробластного лейкоза (V-Erb-B) (птиц), PlG61, гомолог вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц (V-Erb-B), белок-40 ингибирования клеточного роста, белок-61, индуцирующий пролиферацию клеток, mENA, EC 2.7.10; GenBank: AAH94761.1); EGFR-G719A; EGFR-G719C; EGFR-G719S; EGFR-L858R; EGFR-L861 Q; EGFR-57681; EGFR-T790M; фактора элонгации 2 (EEF2, фактор элонгации-2 эукариотической трансляции, EF2, полипептидил-TRNA-транслоказа, EF-2, SCA26, EEF-2; эталонная последовательность в NCBI: NP-001952.1); ENAH (hMena) (гомолог enabled (Drosophila), MENA, enabled млекопитающих, ENA, NDPP1, гомолог белка enabled; GenBank: AAH95481.1)-результаты только для «ENAH», а не «ENAH (hMena)»; EpCAM (молекула адгезии эпителиальных клеток, M4S1, MIC18, опухолеассоциированный трансдуктор кальциевого сигнала 1, TACSTD1, TROP1, аденокарцинома-ассоциированный антиген, гликопротеин Trop-1 клеточной поверхности, гликопротеин-314 клеток эпителия, главный гастроинтестинальный опухолеассоциированный белок GA733-2, EGP314, KSA, DIAR5, HNPCC8, антиген, идентифицированный с помощью моноклонального антитела AUA1, EGP-2, EGP40, ESA, KS1/4, MK-1, гликопротеин-2 эпителиальных клеток человека, компонент мембраны, хромосома 4, поверхностный маркер (гликопротеин 35 кДа), EGP, Ep-CAM, GA733-2, M1S2, антиген CD326, поверхностный антиген эпителиальных клеток, hEGP314, антиген KS 1/4, ACSTD1; GenBank: AAH14785.1); EphA3 (рецептор-A3 EPH, ETK1, ETK, TYRO4, HEK, Eph-подобная тирозинкиназа-1, рецептор ETK1 тирозин-протеинкиназы, EK4, EPH-подобная киназа 4, EC 2.7.10.1, EPHA3, HEK4, эфриновый рецептор-3 типа-A, человеческая эмбриональная киназа-1, TYRO4-протеинтирозинкиназа, hEK4, человеческая эмбриональная киназа, тирозин-протеинкиназа TYRO4, EC 2.7.10; GenBank: AAH63282.1); EphB2R; эпирегулина (EREG, ER, проэпирегулин; GenBank: AAI36405.1); ETBR (EDNRB, рецептор эндотелина типа B, HSCR2, HSCR, эндотелиновый рецептор неселективного типа, ET-B, ET-BR, ETRB, ABCDS, WS4A, ETB, рецептор эндотелина B; NP); слитый белок ETV6-AML1; EZH2 (энхансер гомолога-2 zeste (Drosophila), лизин-N-метилтрансфераза-6, ENX-1, KMT6, EC 2.1.1.43, EZH1, WVS, энхансер гомолога-2 zeste (Drosophila), ENX1, EZH2b, KMT6A, WVS2, гистон-лизин-N-метилтрансфераза EZH2, энхансер гомолога-2 zeste, EC 2.1.1; GenBank: AAH10858.1); FcRH1 (FCRL1, Fc-рецептор-подобный 1, FCRH1, гомолог-1 Fc-рецептора, FcR-подобный белок 1, белок-2, ассоциированный с транслокацией иммунных рецепторов, IFGP1, IRTA5, hIFGP1, белок-1 семейства IFGP, CD307a, Fc-рецептор-подобный белок-1, Fc-рецептор суперсемейства иммуноглобулинов, Gp42, FcRL1, антиген CD307a; GenBank: AAH33690.1); FcRH2 (FCRL2, Fc-рецептор-подобный-2, SPAP1, SH2-домен-содержащий фосфатазный якорный белок-1, гомолог-2 Fc-рецептора, FcR-подобный белок-2, белок-4, ассоциированный с транслокацией иммуноглобулиновых рецепторов, FCRH2, IFGP4, IRTA4, белок-4 семейства IFGP, SPAP1A, SPAP1B, SPAP1C, CD307b, Fc-рецептор-подобный белок-2, белок-4, ассоциированный с транслокацией иммунных рецепторов, Fc-рецептор суперсемейства иммуноглобулинов, Gp42, фосфатазный якорный белок-1, содержащий домен SH2, FcRL2, антиген CD307b; GenBank: AAQ88497.1); FcRH5 (FCRL5, Fc-рецептор-подобный 5, IRTA2, гомолог-5 Fc-рецептора, FcR-подобный белок-5, белок-2, ассоциированный с транслокацией иммунных рецепторов, BXMAS1, FCRH5, CD307, CD307e, PRO820, Fc-рецептор-подобный белок-5, белок-2, ассоциированный с транслокацией рецепторов суперсемейства иммуноглобулинов (IRTA2), FCRL5, антиген CD307e; GenBank: AAI01070.1); FLT3-ITD; FN1 (фибронектин-1, криоглобулин, FN, фактор, стимулирующий миграцию, CIG, FNZ, GFND2, LETS, ED-B, FINC, GFND, MSF, фибронектин; GenBank: AAI43764.1); G250 (MN, CAIX, карбоангидраза IX, карбодегидратаза, RCC-ассоциированный белок-G250, карбонат-дегидратаза IX, антиген MN мембрана, антиген G250, ассоциированный с почечноклеточной карциномой, CA-IX, P54/58N, pMW1, RCC-ассоциированный антиген-G250, карбоангидраза 9; NP);- прочие результаты для «G250», но не «G250/MN/CAIX»; GAGE-1,2,8; GAGE-3,4,5,6,7; GDNF-Ra1 (рецептор-альфа-1 семейства GDNF; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-альфа1; GFR-АЛЬФА-; U95847; BC014962; NM-145793, NM-005264); GEDA (№ доступа в Genbank: AY26076); GFRA1 - рецептора-альфа-1 семейства GDNF; GDNF-рецептора альфа-1; GDNFR-альфа-1; GFR-альфа-1; лиганда-1 RET; рецептора-1 TGF-бета-родственного нейротрофического фактора [Homo sapiens]; ProtKB/Swiss-Prot: P56159.2; глипикана-3 (GPC3, глипикан-3, SDYS, глипикан-протеогликан-3, белок кишечника OCI-5, GTR2-2, MXR7, SGBS1, DGSX, OCI-5. SGB, SGBS, гепарансульфатный протеогликан, секретируемый глипикан-3, OCI5; GenBank: AAH35972.1); GnTVf; gp100 (PMEL, белок премеланосом, SILV, D12S53E, PMEL17, SIL, белок Pmel-17 меланоцитов, антиген GP100, специфический для линии дифференцировки меланоцитов, меланома-ассоциированный антиген ME20, гомолог белка локуса silver, ME20-M, ME20M, P1, P100, silver (мышиный гомолог)-подобный, гомолог silver (мышиный), ME20, SI, белок меланоцитов Mel-17, белок меланоцитов PMEL, белок-17 матрикса меланосом, гомолог silver мыши; GenBank: AAC60634.1); GPC; GPNMB (гликопротеин (трансмембранный) Nmb, гликопротеин NMB, белок, подобный гликопротеину Nmb, остеоактивин, трансмембранный гликопротеин HGFIN, HGFIN, NMB, трансмембранный гликопротеин, трансмембранный гликопротеин NMB; GenBank: AAH32783.1); GPR172A (рецептор-172A, сопряженный с G-белком; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e); NP-078807.1; NM-024531.3); GPR19 (рецептор-19, сопряженный с G белком; Mm.478; NP-006134.1; NM-006143.2); GPR54 (рецептор KISS1; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR1; NP-115940.2; NM-032551.4); HAVCR1 (клеточный рецептор-1 для вируса гепатита A, представитель-1 семейства белков, содержащих домен T-клеточного иммуноглобулина и муцина, молекула-1 повреждения почки, KIM-1, KIM1, TIM, TIM-1, TIM1, TIMD-1, TIMD1, рецептор-1 с доменами T-клеточного иммуноглобулина и муцина, T-клеточный мембранный белок-1, HAVCR, HAVCR-1, белок-1 с доменом T-клеточного иммуноглобулина и доменом муцина, HAVcr-1, белок-1, содержащий домен T-клеточного иммуноглобулина и муцина; GenBank: AAH13325.1); HER2 (ERBB2, гомолог-2 вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц V-Erb-B2, NGL, NEU, гомолог онкогена нейро/глиобластомы, белок гена 19 метастатически пораженных лимфатических узлов, протоонкоген C-ErbB-2, протоонкоген Neu, рецептор клеточной поверхности тирозинкиназного типа HER2, MLN 19, p185erbB2, EC 2.7.10.1, гомолог-2 вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц V-Erb-B2 (гомолог онкогена нейро-/глиобластомы), CD340, HER-2, HER-2/neu, TKR1, белок C-Erb B2/Neu, герстатин, гомолог онкогена нейробластомы/глиобластомы, рецепторная тирозин-протеинкиназа ErbB-2, гомолог-2 вирусного онкогена эритробластного лейкоза V-Erb-B2, гомолог онкогена нейро-/глиобластомы, MLN19, антиген CD340, EC 2.7.10; NP); HER-2/neu-прочее из приведенного выше; HERV-K-MEL; HLA-DOB (бета-субъединица молекулы MHC класса II (антиген la), которая связывает пептиды и презентирует их CD4+ T-лимфоцитам); 273 aa, μl: 6,56, MW: 30820.TM: 1 [P] ген, хромосома: 6p21.3, № доступа в Genbank NP-002111); hsp70-2 (HSPA2, белок-2 теплового шока 70 кДа, 70 кДа белок-2 теплового шока, HSP70-3, 70 кДа белок-2, родственный белкам теплового шока, белок-2 теплового шока размером 70 кДа; GenBank: AAD21815.1); IDO1 (индоламин-2,3-диоксигеназа-1, IDO, INDO, индоламинпиррол-2,3-диоксигеназа, ID0-1, индоламинпиррол-2,3-диоксигеназа, индоламин-2,3-диоксигеназа, индол-2,3-диоксигеназа, EC 1.13.11.52; эталонная последовательность в NCBI: NP-002155.1); IGF2B3; IL13R-альфа2 (IL13RA2, рецептор интерлейкина 13, альфа 2, антиген-19 рака яичек, белок, связывающий интерлейкин-13, IL-13R-альфа-2, IL-13RA2, альфа-2 субъединица рецептора IL-13, альфа-2 субъединица IL-13R, CD213A2, CT19, IL-13R, IL13BP, интерлейкин-13-связывающий белок, альфа-2 цепь рецептора интерлейкина-13, альфа-2 субъединица рецептора интерлейкина-13, IL13R, антиген CD213a2; NP); IL20Rα; кишечной карбоксилэстеразы; IRTA2 (прочие из FcRH5); калликреин-4 (KLK4, калликреин-родственная пептидаза 4, PRSS17, EMSP1, сериновая протеиназа-1 матрицы эмали, калликреин-подобный белок 1, сериновая протеаза-17, KLK-L1, PSTS, AI2A1, калликреин-4 (простаза, матрица эмали, предстательная железа), ARM1, EMSP, андроген-контролируемый первичный транскрипт-1, сериновая протеаза-1 матрицы эмали, калликреин, калликреин-4, простаза, EC 3.4.21.-, простаза, EC 3.4.21; GenBank: AAX30051.1); KIF20A (представитель 20A семейства кинезинов, RAB6KIFL, RAB6-взаимодействующий, кинезин-подобный (Rab-кинезин-6), митотический a; LAGE-1; слитый белок LDLR-фукозилтрансфераза-AS; lengsin (LGSN, lengsin, белок хрусталика глаза с доменом глутаминсинтетазы, GLULD1, белок-1, содержащий домен глутамат-аммоний-лигазы, LGS, белок-1, содержащий домен глутамат-аммоний-лигазы (глутаминсинтетазы), белок-1, содержащий домен глутамат-аммоний-лигазы (глутаминсинтазы), белок, подобный глутаминсинтазе хрусталика глаза; GenBank: AAF61255.1); LGR5 (сопряженный с G-белком рецептор-5, содержащий богатый лейцином; GPR49, GPR6; NP-003658.1; NM-003667.2); LY64 (антиген-64 лимфоцитов (RP10, мембранный белок I типа из семейства с богатым лейцином повтором (LRR), контролирует активацию и апоптоз B-клеток, потеря функции ассоциирована с повышенной активностью заболевания у пациентов с системной красной волчанкой); 661 aa, μl: 6,20, MW: 74147 TM: 1 [P] ген, хромосома: 5q12, № доступа в Genbank NP-005573.); Ly6E (комплекс антигена-6 лимфоцитов, локус E; Ly67, RIG-E,SCA-2, TSA-; NP-002337.1; NM-002346.2); Ly6G6D (комплекс антигена-6 лимфоцитов, локус G6D; Ly6-D, MEGT; NP-067079.2; NM-021246.2); LY6K (комплекс антигена-6 лимфоцитов, локус K; LY6K; HSJ001348; FLJ3522; NP-059997.3; NM-017527.3); белок-1, содержащий домен LyPD1-LY6/PLAUR, PHTS [Homo sapiens], GenBank: AAH17318.1); MAGE-A1 (представитель 1 семейства A антигенов меланомы (управляет экспрессией антигена MZ2-E, MAGE1, белок-1 из семейства A антигенов меланомы, MAGEA1, антиген меланомы MAGE-1, меланома-ассоциированный антиген 1, меланома-ассоциированный антиген MZ2-E, антиген MZ2-E, антиген 1.1 рака яичек, CT1.1, антиген MAGE-1, представитель 1 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель 1 семейства 1 антигенов рака яичек, MAGE1A; эталонная последовательность в NCBI: NP-004979.3); MAGE-A10 (MAGEA10, белок-10 семейства A антигенов меланомы, MAGE10, антиген MAGE-10, меланома-ассоциированный антиген-10, антиген рака яичек 1.10, CT1.10, представитель-10 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-10 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-001238757.1); MAGE-A12 (MAGEA12, белок-12 семейства A антигенов меланомы, MAGE12, антиген рака яичек 1.12, CT1.12, антиген MAGE12F, представитель-12 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-12 семейства 1 антигенов рака яичек, меланома-ассоциированный антиген 12, антиген MAGE-12; эталонная последовательность в NCBI: NP-001159859.1); MAGE-A2 (MAGEA2, белок-2 семейства A антигенов меланомы, MAGE2, антиген рака яичек 1.2, CT1.2, MAGEA2A, антиген MAGE-2, представитель-2 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-2 семейства 1 антигенов рака яичек, антиген меланомы 2, меланома-ассоциированный антиген 2; эталонная последовательность в NCBI: NP-001269434.1); MAGE-A3 (MAGEA3, белок-3 семейства A антигенов меланомы, MAGE3, антиген MAGE-3, антиген MZ2-D, меланома-ассоциированный антиген 3, антиген рака яичек 1.3, CT1.3, представитель-3 семейства 1 антигенов рака яичек, HIPS, HYPD, MAGEA6, представитель-3 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-005353.1); MAGE-A4 (MAGEA4, белок-4 семейства A антигенов меланомы, MAGE4, меланома-ассоциированный антиген 4, антиген рака яичек 1.4, CT1.4, антиген MAGE-4, антиген MAGE-41, антиген MAGE-X2, MAGE4A, MAGE4B, представитель-4 семейства 1 антигенов рака яичек, MAGE-41, MAGE-X2, представитель-4 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-001011550.1); MAGE-A6 (MAGEA6, белок-6 семейства A антигенов меланомы, MAGE6, антиген MAGE-6, меланома-ассоциированный антиген 6, антиген рака яичек 1.6, CT1.6, антиген MAGE3B, представитель-6 семейства 1 антигенов рака яичек, белок-6 семейства A антигенов меланомы, MAGE-3b, MAGE3B, представитель-6 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-787064.1); MAGE-A9 (MAGEA9, белок-9 семейства A антигенов меланомы, MAGE9, антиген MAGE-9, меланома-ассоциированный антиген 9, антиген рака яичек 1.9, CT1.9, представитель-9 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-9 семейства 1 антигенов рака яичек, MAGEA9A; эталонная последовательность в NCBI: NP-005356.1); MAGE-C1 (MAGEC1, белок-1 семейства C антигенов меланомы, антиген рака яичек 7.1, CT7.1, антиген MAGE-C1, представитель-1 семейства 7 антигенов рака яичек, CT7, представитель-1 семейства 7 антигенов рака яичек, меланома-ассоциированный антиген C1; эталонная последовательность в NCBI: NP-005453.2); MAGE-C2 (MAGEC2, белок-2 семейства C антигенов меланомы, MAGEE1, антиген рака яичек 10, CT10, HCA587, белок-1 семейства E антигенов меланомы, специфический для рака яичек, антиген-587, ассоциированный с гепатоцеллюлярной карциномой, антиген MAGE-C2, антиген MAGE-E1, антиген-587 гепатоцеллюлярного рака, меланома-ассоциированный антиген C2; эталонная последовательность в NCBI: NP-057333.1); маммаглобин-A (SCGB2A2, представитель-2 семейства 2A секретоглобинов, MGB1, маммаглобин-1, UGB2, маммаглобин A, маммаглобин-A, маммаглобин-1, представитель-2 семейства 2A секретоглобинов; NP); MART2 (H HAT, ацилтрансфераза hedgehog, SKI1, антиген меланомы 2, распознаваемый T-клетками, белок-1 skinny hedgehog, Skn, антиген меланомы 2, распознаваемый T-клетками, протеин-цистеин-N-пальмитоилтрансфераза HHAT, EC 2.3.1.-; GenBank: AAH39071.1); M-CSF (CSF1, колониестимулирующий фактор-1 (макрофагальный), MCSF, CSF-1, ланимостим, макрофагальный колониестимулирующий фактор 1, Ланимостим; GenBank: AAH21117.1); MCSP (SMCP, богатый цистеином белок, ассоциированный с митохондриями сперматозоидов, MCS, селенобелок митохондриальной капсулы, HSMCSGEN1, богатый цистеином белок, ассоциированный с митохондриями сперматозоидов; эталонная последовательность в NCBI: NP-109588.2); XAGE-1b/GAGED2a; WT1 (белок-1 опухоли Вильмса, WAGR, GUD, WIT-2, WT33, амино-концевой домен EWS, NPHS4, последние три «цинковых пальца» ДНК-связывающего домена WT1, AWT1, белок опухоли Вильмса, EWS-WT1; GenBank: AAB33443.1); VEGF; тирозиназы (TYR; OCAIA; OCA1A; тирозиназа; SHEP; NP-000363.1; NM-000372.4; GenBank: AAB60319.1); TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, представитель-4 подсемейства M катионных каналов, действующих по механизму транзиторного рецепторного потенциала, № доступа в Genbank NM-01763); TRP2-INT2; TRP-2; TRP-1/gp75 (белок-1, родственный тирозиназе, оксидаза 5,6-дигидроксииндол-2-карбоновой кислоты, CAS2, CATB, TYRP, OCAS, каталаза B, b-БЕЛОК, гликопротеин 75, EC 1.14.18., антиген меланомы Gp75, TYRP1, TRP, TYRRP, TRP1, SHEP11, оксидаза DHICA, EC 1.14.18, GP75, EC 1.14.18.1; триозофосфатизомеразы (триозофосфатизомераза-1, TPID, триозо-фосфат-изомераза, HEL-S-49, TIM, секреторный белок придатка яичка Li 49, TPI, триозофосфатизомераза, EC 5.3.1.1); TRAG-3 (представитель-2 семейства CSAG, антиген рака яичек семейства 24, CSAG3B, представитель-2, представитель 3B семейства CSAG, представитель-2 семейства 24 антигена рака яичек, антиген рака яичек 24.2, белок хондросаркома-ассоциированного гена 2/3, белок гена 3, ассоциированного с устойчивостью к таксолу, белок, подобный белку хондросаркома-ассоциированного гена 2/3, CT24.2, ген 3, ассоциированный с устойчивостью к таксолу, TRAG-3, CSAG3A, TRAG3); TMEM46 (гомолог-2 shisa (Xenopus laevis); SHISA; NP-001007539.1; NM-001007538.1; TMEM118 (белок-2 ring finger, трансмембранный 2; RNFT2; FLJ1462; NP-001103373.1; NM-001109903.1); TMEFF1 (трансмембранный белок-1 с EGF-подобным и двумя фоллистатин-подобными доменами; томорегулин-; H7365; C9orf2; C9ORF2; U19878; X83961; NM-080655; NM-003692; TGF-бета-RII (TGFBR2, бета-рецептор II трансформирующего фактора роста (70/80 кДа), TGFбета-RII, MFS2, tбета-R-II, TGFR-2, рецептор TGF-бета типа IIB, рецептор типа II TGF-бета, рецептор TGF-бета типа-2, EC 2.7.11.30, рецептор трансформирующего фактора роста-бета типа IIC, AAT3, Tбета-R-II, бета-рецептор II трансформирующего фактора роста (70-80 кДа), рецептор типа II TGF-бета, FAA3, рецептор типа II трансформирующего фактора роста-бета, LDS1 B, HNPCC6, LDS2B, LDS2, RITC, EC 2.7.11, TAAD2); TENB2 (TMEFF2, томорегулин, TPEF, HPP1, TR, предполагаемый трансмембранный протеогликан, родственный семейству факторов роста EGF/херегулин и фоллистатину); 374 aa, № доступа в NCBI: AAD55776, AAF91397, AAG49451, RefSeq в NCBI: NP-057276; ген в NCBI: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; № доступа в Genbank AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436; TAG-2; TAG-1 (контактин-2 (аксональный), TAG-1, AXT, молекула клеточной адгезии аксонин-1, TAX, контактин-2 (временно экспрессируемый), TAXI, контактин-2, аксональный гликопротеин TAG-1, временно экспрессируемый аксональный гликопротеин, временный аксональный гликопротеин, аксонин-1, TAX-1, TAG1, FAMES; PRF: 444868); слитого белка SYT-SSX1 или -SSX2; сурвивина; STEAP2 (HGNC 8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, ген-1, ассоциированный с раком предстательной железы, белок-1, ассоциированный с предстательной железой, белок-2 шеститрансмембранного эпителиального антигена предстательной железы 2, шеститрансмембранный белок предстательной железы, № доступа в Genbank AF45513; STEAP1 (шеститрансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы, № доступа в Genbank. NM-01244); SSX-4; SSX-2 (SSX2, синовиальная саркома, X-хромосома точечный разрыв-2, X-хромосома точечный разрыв 2, SSX, X-хромосома точечный разрыв 2B, антиген рака яичек 5.2, X-хромосома-связанный белок-2, опухолевый антиген HOM-MEL-40, CT5.2, HD21, семейство 5 антигенов рака яичек, HOM-MEL-40, изоформа B, представитель-2 семейства 5 антигенов рака яичек, представитель 2a, белок SSX2, саркома, саркома, синовиальная, X-хромосома-связанный белок-2, синовиальная, синовиальная саркома, X-хромосома точечный разрыв 2B, синовиальная саркома, SSX2A); Sp17; SOX10 (SRY (участок определяющий пол Y-хромосомы)-бокс-10, мышиный, PCWH, DOM, WS4, WS2E, WS4C, доминантный мегаколон, мышиный, человеческий гомолог доминантного мегаколона, ген-10 SRY-связанного HMG-бокса, человеческий гомолог фактора транскрипции SOX-10; GenBank: CAG30470.1); SNRPD1 (малый ядерный нуклеопротеин D1, малый ядерный нуклеопротеин D1, полипептид 16 кДа, полипептид (16 кДа), SNRPD, HsT2456, Sm-D1, SMD1, аутоантиген Sm-D, псевдоген 16 кДа полипептида малого ядерного рибонуклеопротеина D1, коровый белок D1 SnRNP, малый ядерный рибонуклеопротеин Sm D1); SLC35D3 (семейство 35 переносчиков растворенных веществ, представитель D3, FRCL1, fringe connection-подобный белок-1, bA55K22.3, Frc, fringe-подобный 1, представитель D3 семейства 35 переносчиков растворенных веществ; NCBI GenBank: NC-000006.11 NC-018917.2 NT-025741.16); SIRT2 (сиртуин-2, NAD-зависимая деацетилаза сиртуин-2, SIRL2, белок-2 регулятор молчащей информации, гомолог-2 регуляторного белка SIR2, Sir2-родственный белок типа 2, SIR2-подобный белок-2, сиртуин типа 2, сиртуин-2 (гомолог белка-2 для регуляции молчащей информации типа спаривания) (S. cerevisiae), сиртуин-2, сиртуин-2 (белок-2 для регуляции молчащей информации типа спаривания, S. cerevisiae, гомолог), EC 3.5.1., SIR2; GenBank: AAK51133.1); Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, семафорин 5b Hlog, домен sema, семь тромбоспондиновых повторов (типа 1 and типа 1-подобных), трансмембранный домен™ и короткий цитоплазматический домен, (семафорин) 5B, № доступа в Genbank: AB04087; сецерина-1 (SCRN1, SES1, KIAA0193, сецерин-1; GenBank: EAL24458.1); SAGE (SAGE1, антиген-1 саркомы, антиген-14 рака яичек, CT14, предполагаемый опухолевый антиген; эталонная последовательность в NCBI: NP-061136.2); RU2AS (KAAG1, антиген-1, ассоциированный с почкой, RU2AS, белок гена антисмысловой RU2, почка-ассоциированный антиген-1; GenBank: AAF23613.1); RNF43-E3 (предшественник убиквитин-протеинлигазы RNF43 [Homo sapiens], RNF124; URCC; эталонная последовательность в NCBI: NP-060233.3; RhoC (RGS5 (регулятор-5 передачи сигнала с участием G-белка), MSTP032, регулятор-5 передачи сигнала с участием G-белка, MSTP092, MST092, MSTP106, MST106, MSTP129, MST129; GenBank: AAB84001.1); RET (протоонкоген ret; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE; NP-066124.1; NM-020975.4); RBAF600 (UBR4, компонент N-рекогнин-4 убиквитин-протеинлигазы E3, цинковый палец, UBR1 типа 1, ZUBR1, UBR4 E3-убиквитин-протеинлигазы, RBAF600, 600 кДа фактор, ассоциированный с белком ретинобластомы, белок-1 UBR1-цинковых пальцев, EC 6.3.2., N-рекогнин-4, KIAA0462, p600, EC 6.3.2, KIAA1307; GenBank: AAL83880.1); RAGE-1 (MOK, MOK-протеинкиназа, почечный опухолевый антиген, RAGE, MAPK/MAK/MRK перекрывающаяся киназа, почечный опухолевый антиген-1, антиген почечноклеточной карциномы, RAGE-1, EC 2.7.11.22, RAGE1; UniProtKB/Swiss-Prot: Q9UQ07.1); RAB38/NY-MEL-1 (RAB38, NY-MEL-1, RAB38, представитель семейства онкогенов RAS, антиген меланомы NY-MEL-1, Rab-родственный GTP-связывающий белок, Ras-родственный белок Rab-38, rrGTPbp; GenBank: AAH15808.1); PTPRK (DJ480J14.2.1 (протеин тирозинфосфатаза, рецепторного типа, K, R-PTP-KAPPA, протеин тирозинфосфатаза-каппа, протеин-тирозинфосфатаза-каппа), протеин-тирозинфосфатаза, рецепторного типа, K, протеин-тирозинфосфатаза-каппа, протеин-тирозинфосфатаза, рецепторного типа, каппа, R-PTP-каппа, тирозин-протеинфосфатаза-каппа рецепторного типа, EC 3.1.3.48, PTPK; GenBank: AAI44514.1); PSMA; PSCA hIg(2700050C12Rik, C530008016Rik, RIKEN кДНК 2700050C12, ген RIKEN кДНК 2700050C12, № доступа в Genbank: AY358628); PSCA (предшественник антигена стволовых клеток предстательной железы, № доступа в Genbank: AJ29743; PRDX5 (пероксиредоксин 5, EC 1.11.1.15, TPx типа VI, B166, антиоксидантный фермент B166, HEL-S-55, пятно 71 B при 2D-Page печеночной ткани, PMP20, пероксисомный антиоксидантный фермент, PRDX6, тиоредоксинпероксидаза PMP20, PRXV, AOEB166, секреторный белок Li 55 придатка яичка, корепрессор-1 Alu, пероксиредоксин-5, митохондриальный, пероксиредоксин V, prx-V, тиоредоксинредуктаза, Prx-V, ACR1, корепрессор Alu, PLP; GenBank: CAG33484.1); PRAME (преимущественно экспрессируемый антиген при меланоме, преимущественно экспрессируемый антиген меланомы, MAPE, 01P-4, OIPA, CT130, антиген-130 рака яичек, антиген меланомы, преимущественно экспрессируемый в опухолях, Opa-взаимодействующий белок-4, Opa- взаимодействующий белок 01P4; GenBank: CAG30435.1); слитый белок pml-RAR-альфа; PMEL17 (гомолог silver; SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL; ME20; gp10 BC001414; BT007202; M32295; M77348; NM-006928); PBF (ZNF395, белок-395 цинковых пальцев, PRF-1, регуляторный белок болезни Хантингтона, белок, связывающий регуляторный участок гена HD, участок-связывающий белок-2, белок-2, регуляторный фактор-1 папилломавируса, HD-регулирующий фактор-2, регуляторный фактор папилломавируса, PRF1, HDBP-2, Si-1-8-14, HDBP2, белок-2, связывающий регуляторный участок гена при болезни Хантингтона, HDRF-2, регуляторный фактор PRF-1 папилломавируса, PBF; GenBank: AAH01237.1); PAX5 (paired box 5, гомеозисный ген-5 из paired box, BSAP, белок paired box, Pax-5, специфический активатор линии дифференцировки B-клеток, ген-5 домена paired, ген-5 paired box (белок специфического активатора линии дифференцировки B-клеток), фактор транскрипции, специфический для B-клеток, ген-5 paired box (специфический активатор линии дифференцировки B-клеток); PAP (REG3A, белок-3 альфа из регенерирующих островков Лангерганса, INGAP, PAP-H, печеночно-кишечный панкреатический белок, PBBCGF, человеческий проостровковый пептид, REG-III, белок-1, ассоциированный с панкреатитом, Regi, Reg III-альфа, гепатокарцинома-кишечник-поджелудочная железа, белок III-альфа из регенерирующих островков Лангерганса, фактор роста бета-клеток поджелудочной железы, HIP, PAP-гомологичный белок, HIP/PAP, пролиферация-индуцирующий белок-34, PAP1, пролиферация-индуцирующий белок-42, REG-3-альфа, белок-3-альфа из регенерирующих островков Лангерганса, белок, ассоциированный с поджелудочной железой; GenBank: AAH36776.1); p53 (TP53, опухолевый белок P53, TPR53, P53, клеточный опухолевый антиген P53, антиген NY-CO-13, мутантный опухолевый белок-53, фосфопротеин P53, опухолевый супрессор P53, BCC7, связанный с трансформацией белок-53, LFS1, опухолевый белок-53, синдром Ли-Фраумени, опухоль супрессор P53); P2X5 (пуринергический рецептор P2X-5, функционирующий как лиганд-управляемый ионный канал, ионный канал, управляемый внеклеточным ATP, может быть вовлечен в синаптическую передачу и нейрогенез, дефицит может вносить вклад в патофизиологию идиопатической нестабильности детрузора); 422 aa, μl: 7,63, MW: 47206 TM: 1 [P] ген, хромосома: 17p13.3, № доступа в Genbank: NP-002552.); OGT (O-связанный N-ацетилглюкозамин(GlcNAc)-трансфераза, P110-субъединица O-GlcNAc-трансферазы, O-связанный N-ацетилглюкозамин(GlcNAc)-трансфераза (UDP-N-ацетилглюкозамин:полипептид-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза, 110 кДа субъединица UDP-N-ацетилглюкозамин-пептид-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, UDP-N-ацетилглюкозамин:полипептид-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза, уридиндифосфо-N-ацетилглюкозамин:полипептид-бета-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза, субъединица P110 O-GlcNAc-трансферазы, EC 2.4.1.255, 110 кДа субъединица O-связанный N-ацетилглюкозамин(GlcNAc)-трансферазы, EC 2.4.1, HRNT1, EC 2.4.1.186, O -GLCNAC; GenBank: AAH38180.1); OA1 (остеоартрит QTL 1, OASD; GenBank: CAA88742.1); NY-ESO-1/LAGE-2 (антиген рака яичек 1B, CTAG1 B, NY-ESO-1, LAGE-2, ESO1, CTAG1, CTAG, LAGE2B, антиген рака яичек 1, антиген аутоиммунного рака яичек NY-ESO-1, антиген рака 3, антиген рака яичек 6.1, белок-1 Нью-Йоркской плоскоклеточной карциномы пищевода, представитель 2 семейства L-антигенов, LAGE2, CT6.1, LAGE2A; GenBank: AAI30365.1); NY-BR-1 (ANKRD30A, домен анкиринового повтора 30A, антиген рака молочной железы NY-BR-1, серологически определенный антиген рака молочной железы NY-BR-1, белок 30A, содержащий домен анкиринового повтора; эталонная последовательность в NCBI: NP-443723.2); N-ras (NRAS, гомолог вирусного онкогена нейробластомы RAS (V-Ras), NRAS1, трансформирующий белок N-Ras, GTPаза NRas, ALPS4, часть-4 белка N-Ras, NS6, гомолог онкогена, HRAS1; GenBank: AAH05219.1); NFYC (ядерный транскрипционный фактор Y, гамма, HAP5, HSM, субъединица C ядерного транскрипционного фактора Y, трансактиватор HSM-1/2, субъединица C CCAAT-связывающегося фактора, NF-YC, субъединица-гамма транскрипционного CCAAT-связывающегося фактора, субъединица C белка, связывающего CAAT-бокс ДНК, большая субъединица 2A транскрипционного фактора гистона H1, CBFC, субъединица-гамма ядерного транскрипционного фактора Y, CBF-C, трансактиватор HSM-1, H1TF2A, транскрипционный фактор NF-Y, C-субъединица); нео-PAP (PAPOLG, поли(A)-полимераза-гамма, нео-поли(A)-полимераза, ядерная поли(A)-полимераза-гамма, полинуклеотид-аденилилтрансфераза-гамма, SRP РНК 3'-аденилирующий фермент/Pap2, PAP-гамма, Neo-PAP, SRP РНК 3'-аденилирующий фермент, PAP2, EC 2.7.7.19, PAPG; эталонная последовательность в NCBI: NP-075045.2); NCA (CEACAM6, № доступа в Genbank: M1872); Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, представитель 2 семейства 34 переносчиков растворимых веществ (натрий-фосфат), натрий-зависимый транспортер фосфата 3b типа II, № доступа в Genbank: NM-00642); миозина класса I; MUM-3; MUM-2 (TRAPPC1, белок-1 комплекса частицы направленного перемещения белка, BETS, гомолог BETS, MUM2, белок-2, убиквитарный при меланоме мутированный белок-2, белок-2 множественной миеломы, субъединица-1 комплекса частицы направленного перемещения белка; MUM-1f); муцина (MUC1, муцин 1, ассоциированный с клеточной поверхностью, PEMT, PUM, CA 15-3, MCKD1, ADMCKD, белок-1 медуллярно-кистозной болезни почек (аутосомная доминантная), ADMCKD1, муцин 1, трансмембранный, CD227, антиген DF3, ассоциированный с карциномой молочной железы, MAM6, раковый антиген 15-3, MCD, карцинома-ассоциированный муцин, MCKD, Krebs Von Den Lungen-6, MUC-1/SEC, муцин в моче, индуцированный арахисом, MUC1/ZD, опухолеассоциированный антиген мембраны эпителиальных клеток, антиген DF3, опухолеассоциированный муцин, эписиалин, EMA, антиген H23, H23AG, муцин-1, KL-6, опухолеассоциированный муцин эпителиальных клеток, MUC-1, эписиалин, PEM, антиген CD227; UniProtKB/Swiss-Prot: P15941.3); MUCSAC (муцин SAC, олигомерный белок, образующий слизь/гель, трахеобронхиальный муцин' MUC5, TBM, муцин-5, подтипы A и C, трахеобронхиальный/желудочный, leB, желудочный муцин, муцин SAC, олигомерный псевдоген, образующий слизь/гель, антиген группы крови Льюиса B, LeB, основной гликопротеин воздухоносных путей, MUC-SAC, муцин-5 подтипа AC, трахеобронхиальный); MUC1 (муцин 1, ассоциированный с клеточной поверхностью, PEMT, PUM, CA 15-3, MCKD1, ADMCKD, медуллярно-кистозная болезнь почек (аутосомная доминантная), ADMCKD1, муцин 1, трансмембранный, CD227, антиген DF3, ассоциированный с карциномой молочной железы, MAM6, раковый антиген 15-3, MCD, карцинома-ассоциированный муцин, MCKD, Krebs Von Den Lungen-6, MUC-1/SEC, муцин в моче, индуцированный арахисом, MUC-1/X, муцин полиморфных эпителиальных клеток, MUC1/ZD, опухолеассоциированный антиген мембран эпителиальных клеток, антиген DF3, опухолеассоциированный муцин, эписиалин, EMA, антиген h23, H23AG, муцин-1, KL-6, опухолеассоциированный муцин эпителиальных клеток, MUC-1, эписиалин, PEM, антиген CD227); MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315, № доступа в Genbank: NM-01776; изоформы-3 белка-4, ассоциированного с множественной лекарственной устойчивостью MRP4, MOAT-B; MOATB [Homo sapiens]; эталонная последовательность в NCBI: NP-001288758.1; MPF (MPF, MSLN, SMR, мегакариоцит-потенцирующий фактор, мезотелин, № доступа в Genbank: NM-00582); MMP-7 (MMP7, матрилизин, MPSL1, матрин, матриксная металлопротеиназа 7 (матрилизин, маточный), маточный матрилизин, матриксная металлопротеиназа-7, EC 3.4.24.23, протеаза Pump-1, Матрин, маточная металлопротеиназа, PUMP1, MMP-7, EC 3.4.24, PUMP-1; GenBank: AAC37543.1); MMP-2 (MMP2, матриксная металлопептидаза 2 (желатиназа A, 72 кДа желатиназа, 72 кДа коллагеназа типа IV), MONA, CLG4A, матриксная металлопротеиназа-2 (желатиназа A, 72 кДа желатиназа, 72 кДа коллагеназа типа IV), CLG4, 72 кДа желатиназа, 72 кДа коллагеназа типа IV), матриксная металлопротеиназа-2, MMP-II, 72 кДа желатиназа, коллагеназа типа IV-A, MMP-2, матриксная металлопротеиназа-II, TBE-1, желатиназа нейтрофилов, EC 3.4.24.24, EC 3.4.24; GenBank: AAH02576.1) и meloe.

[0069] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например биспецифическое антитело, где мультиспецифическое антитело содержит второй связывающий домен, характеризующийся специфичностью в отношении второго антигена, выбранного из группы, состоящей из 17-IA, 4-1BB, 4Dc, 6-кето-PGF1a, 8-изо-PGF2a, 8-оксо-dG, аденозинового рецептора A1, A33, ACE, ACE-2, активина, активина A, активина AB, активина B, активина C, активина RIA, активина RIA/ALK-2, активина RIB/ALK-4, активина RIIA, активина RUB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAM8, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, адресинов, aFGF, ALCAM, ALK, ALK-1, ALK-7, альфа-1-антитрипсина, антагониста альфа-V/бета-1, ANG, Ang, APAF-1, APE, APJ, APP, APRIL, AR, ARC, ART, артемина, антиидиотипа, аспарагиновой кислоты, предсердного натрийуретического фактора, интегрина av/b3, Ax1, b2M, B7-1, B7-2, B7-H, стимулятора B-лимфоцитов (BlyS), BACE, BACE-1, Bad, BAFF, BAFF-R, Bag-1, BAK, Bax, BCA-1, BCAM, Bel, BCMA, BDNF, b-ECGF, bFGF, BID, Bik, BIM, BLC, BL-CAM, BLK, BMP, BMP-2/BMP-2a, BMP-3/остеогенина, BMP-4/BMP-2b, BMP-5, BMP-6/Vgr-1, BMP-7 (OP-1), BMP-8 (BMP-8a, OP-2), BMPR, BMPR-IA (ALK-3), BMPR-IB (ALK-6), BRK-2, RPK-1, BMPR-II (BRK-3), разновидностей BMP, b-NGF, BOK, бомбезина, костного нейротрофического фактора, BPDE, BPDE-DNA, BTC, фактора комплемента 3 (C3), C3a, C4, C5, C5a, CIO, CA125, CAD-8, кальцитонина, cAMP, раково-эмбрионального антигена (CEA), карцинома-ассоцированного антигена, катепсина A, катепсина B, катепсина C/DPPI, катепсина D, катепсина E, катепсина H, катепсина L, катепсина O, катепсина S, катепсина V, катепсина X/Z/P, CBL, CCI, CCK2, CCL, CCL1, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9/10, CCR, CCR1, CCR10, CCR10, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CD1, CD2, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD27L, CD28, CD29, CD30, CD30L, CD32, CD33 (белки p67), CD34, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45, CD46, CD49a, CD52, CD54, CD55, CD56, CD61, CD64, CD66e, CD74, CD80 (B7-1), CD89, CD95, CD123, CD137, CD138, CD140a, CD146, CD147, CD148, CD152, CD164, CEACAM5, CFTR, cGMP, CINC, токсина Clostridium botulinum, токсина Clostridium perfringens, CKb8-1, CLC, CMV, CMV UL, CNTF, CNTN-1, COX, C-Ret, CRG-2, CT-1, CTACK, CTGF, CTLA-4, CX3CL1, CX3CR1, CXCL, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCR, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, цитокератинового опухолеассоциированного антигена, DAN, DCC, DcR3, DC-SIGN, фактора ускорения распада, дес(1-3)-IGF-1 (IGF-1 головного мозга), Dhh, дигоксина, DNAM-1, ДНКазы, Dpp, DPPIV/CD26, Dtk, ECAD, EDA, EDA-A1, EDA-A2, EDAR, EGF, EGFR (ErbB-1), EMA, EMMPRIN, EN A, рецептора эндотелина, энкефалиназы, eNOS, Eot, эотаксина-1, EpCAM, эфрина B2/EphB4, EPO, ERCC, E-селектина, ET-1, фактора IIa, фактора VII, фактора VIIIc, фактора IX, белка активации фибробластов (FAP), Fas, FcR1, FEN-1, ферритина, FGF, FGF-19, FGF-2, FGF3, FGF-8, FGFR, FGFR-3, фибрина, FL, FLIP, Flt-3, Flt-4, фолликулостимулирующего гормона, фракталкина, FZD1, FZD2, FZD3, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, FZD9, FZD10, G250, Gas 6, GCP-2, GCSF, GD2, GD3, GDF, GDF-1, GDF-3 (Vgr-2), GDF-5 (BMP-14, CDMP-1), GDF-6 (BMP-13, CDMP-2), GDF-7 (BMP-12, CDMP-3), GDF-8 (миостатин), GDF-9, GDF-15 (MIC-1), GDNF, GDNF, GFAP, GFRa-1, GFR-альфа1, GFR-альфа2, GFR-альфа3, GITR, глюкагона, Glut 4, гликопротеина IIb/IIIa (GP IIb/IIIa), GM-CSF, gp130, gp72, GRO, рилизинг-фактора гормона роста, гаптена (NP-cap или NIP-cap), HB-EGF, HCC, гликопротеина gB оболочки HCMV, гликопротеина gH оболочки HCMV, HCMV UL, гемопоэтического фактора роста (HGF), gp120 вируса гепатита B, гепараназы, Her2, Her2/neu (ErbB-2), Her3 (ErbB-3), Her4 (ErbB-4), гликопротеина gB вируса простого герпеса (HSV), гликопротеина gD HSV, HGFA, высокомолекулярного меланома-ассоциированного антигена (HMW-MAA), gp120 HIV, V3-петли gp 120 HIV IIIB, HLA, HLA-DR, HM1.24, HMFG PEM, HRG, Hrk, сердечного миозина человека, цитомегаловируса (HCMV) человека, гормона роста человека (HGH), HVEM, 1-309, IAP, ICAM, ICAM-1, ICAM-3, ICE, ICOS, IFNg, Ig, рецептора IgA, IgE, IGF, IGF-связывающих белков, IGF-1R, IGFBP, IGF-I, IGF-II, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-18R, IL-23, интерферона (INF)-альфа, INF-бета, INF-гамма, ингибина, iNOS, A-цепи инсулина, B-цепи инсулина, инсулиноподобного фактора роста 1, интегрина-альфа2, интегрина-альфа3, интегрина-альфа4, интегрина альфа4/бета1, интегрина, альфа4/бета7, интегрина-альфа5 (альфаV), интегрина-альфа5/бета1, интегрина альфа5/бета3, интегрина-альфа6, интегрина-бета1, интегрина-бета2, интерферона-гамма, IP-10, 1-TAC, JE, калликреина 2, калликреина 5, калликреина 6, калликреина 11, калликреина 12, калликреина 14, калликреина 15, калликреина L1, калликреина L2, калликреина L3, калликреина L4, KC, KDR, фактора роста кератиноцитов(КГF), ламинина 5, LAMP, LAP, LAP (TGF-1), латентного TGF-1, латентного TGF-1 bpl, LBP, LDGF, LECT2, Lefty, антигена Льюиса-Y, антигена, родственного антигену Льюиса-Y, LFA-1, LFA-3, Lfo, LIF, LIGHT, липопротеинов, LIX, LKN, Lptn, L-селектина, LT-a, LT-b, LTB4, LTBP-1, легочного сурфактанта, лютеинизирующего гормона, рецептора лимфотоксина-бета, Mac-1, MAdCAM, MAG, MAP2, MARC, MCAM, MCAM, MCK-2, MCP, M-CSF, MDC, Mer, металлопротеаз, рецептора MGDF, MGMT, MHC (HLA-DR), MIF, MIG, MIP, MIP-1-альфа, MK, MMAC1, MMP, MMP-1, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-2, MMP-24, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MPIF, Mpo, MSK, MSP, муцина (Muc1), MUC18, ингибирующего вещества Мюллера, Mug, MuSK, NAIP, NAP, NCAD, N-кадгерина, NCA 90, NCAM, NCAM, неприлизина, нейротрофина-3,-4 или -6, нейротурина, фактора роста нейронов (NGF), NGFR, NGF-бета, nNOS, NO, NOS, Npn, NRG-3, NT, NTN, OB, OGG1, OPG, OPN, OSM, OX40L, OX40R, p150, p95, PADPr, паратиреоидного гормона, PARC, PARP, PBR, PBSF, PCAD, P-кадгерина, PCNA, PDGF, PDGF, PDK-1, PECAM, PEM, PF4, PGE, PGF, PGI2, PGJ2, PIN, PLA2, плацентарной щелочной фосфатазы (PLAP), P1GF, PLP, PP14, проинсулина, прорелаксина, белка C, PS, PSA, PSCA, простатического специфического мембранного антигена (PSMA), PTEN, PTHrp, Ptk, PTN, R51, RANK, RANKL, RANTES, RANTES, A-цепи релаксина, B-цепи релаксина, ренина, F респираторно-синцитиального вируса (RSV), Fgp RSV, Ret, ревматоидных факторов, RLIP76, RPA2, RSK, S100, SCF/KL, SDF-1, серина, сывороточного альбумина, sFRP-3, Shh, SIGIRR, SK-1, SLAM, SLPI, SMAC, SMDF, SMOH, SOD, SPARC, Stat, STEAP, STEAP-II, TACE, TACI, TAG-72 (опухолеассоциированный гликопротеин-72), TARC, TCA-3, T-клеточных рецепторов (например, T-клеточного рецептора альфа/бета), TdT, TECK, TEM1, TEM5, TEM7, TEM8, ТРЕТ, PLAP-подобной щелочной фосфатазы яичек, TfR, TGF, TGF-альфа, TGF-бета, панспецифического TGF-бета, TGF-бета RI (ALK-5), TGF-бета RII, TGF-бета Rllb, TGF-бета RIII, TGF-бета1, TGF-бета2, TGF-бета3, TGF-бета4, TGF-бета5, тромбина, тимусного Ck-1, тиреостимулирующего гормона, Tie, TIMP, TIQ, тканевого фактора, TMEFF2, Tmpo, TMPRSS2, TNF, TNF-альфа, TNF-альфа/бета, TNF-бета2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF10A (TRAIL R1, Apo-2, DR4), TNFRSF10B (TRAIL R2, DR5, KILLER, TRICK-2A, TRICK-B), TNFRSF10C (TRAIL R3, DcR1, LIT, TRID), TNFRSF10D (TRAIL R4, DcR2, TRUNDD), TNFRSF11A (RANK, ODFR, TRANCE R), TNFRSF11B (OPG, OCIF, TR1), TNFRSF12 (TWEAK R, FN14), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFF R), TNFRSF14 (HVEM, ATAR, HveA, LIGHT R, TR2), TNFRSF16 (NGFR, p75NTR), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF18 (GITR, AITR), TNFRSF19 (TROY, TAJ, TRADE), TNFRSF19L (RELT), TNFRSFIA (TNF RI, CD120a, p55-60), TNFRSFIB (TNF RII, CD120b, p75-80), TNFRSF26 (TNFRH3), TNFRSF3 (LTbR, TNF RIII, TNFC R), TNFRSF4 (OX40, ACT35, TXGP1 R), TNFRSF5 (CD40, p50), TNFRSF6 (Fas, Apo-1, APT1, CD95), TNFRSF6B (DcR3, M68, TR6), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF9 (4-lBB, CD137, ILA), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF22 (DcTRAIL R2, TNFRH2), TNFRST23 (DcTRAIL R1, TNFRH1), TNFRSF25 (DR3, Apo-3, LARD, TR-3, TRAMP, WSL-1), TNFSF10 (TRAIL, лиганд Apo-2, TL2), TNFSF11 (TRANCE/RANK, лиганд ODF, лиганд OPG), TNFSF12 (TWEAK, лиганд Apo-3, лиганд DR3), TNFSF13 (APRIL, TALL2), TNFSF13B (BAFF, BLYS, TALL1, THANK, TNFSF20), TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM, LTg), TNFSF15 (TL1A/VEGI), TNFSF18 (лиганд GITR, лиганд AITR, TL6), TNFSFIA (TNF-a конектин, DIF, TNFSF2), TNFSF1B (TNF-b, LTa, TNFSF1), TNFSF3 (LTb, TNFC, p33), TNFSF4 (лиганд OX40, gp34, TXGP1), TNFSF5 (лиганд CD40, CD154, gp39, HIGM1, IMD3, TRAP), TNFSF6 (лиганд Fas, лиганд Apo-1, лиганд APT1), TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), TNFSF8 (лиганд CD30, CD153), TNFSF9 (лиганд 4-lBB, лиганд CD137), TP-1, t-PA, Tpo, TRAIL, TRAIL R, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRANCE, рецептора трансферрина, TRF, Trk, TROP-2, TSG, TSLP, опухолеассоциированного антигена CA 125, опухолеассоцированного антигена, экспрессирующего углевод, родственный антигену Льюса-Y, TWEAK, TXB2, Ung, uPAR, uPAR-1, урокиназы, VCAM, VCAM-1, VECAD, VE-кадгерина, VE-кадгерина-2, VEFGR-1 (flt-1), VEGF, VEGFR, VEGFR-3 (flt-4), VEGI, VIM, вирусных антигенов, VLA, VLA-1, VLA-4, интегрина VNR, фактора фон Виллебранда, WIF-1, WNT1, WNT2, WNT2B/13, WNT3, WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16, XCL1, XCL2, XCR1, XCR1, XEDAR, XIAP, XPD, CTLA4 (антиген-4 цитотоксических T-лимфоцитов), PD1 (белок-1 запрограммированной гибели клеток), PD-L1 (лиганд-1 белка запрограммированной гибели клеток), LAG-3 (ген-3 активации лимфоцитов), TIM-3 (белок-3, содержащий домены иммуноглобулина T-клеток и муцина), рецепторов для гормонов и факторов роста.

[0070] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например биспецифическое антитело, где мультиспецифическое антитело содержит второй связывающий домен, характеризующийся специфичностью в отношении второго антигена, выбранного из группы, состоящей из BCMA, CTLA4 (антиген-4 цитотоксических T-лимфоцитов), PD1 (белок-1 запрограммированной гибели клеток), PD-L1 (лиганд-1 белка запрограммированной гибели клеток), LAG-3 (ген-3 активации лимфоцитов), TIM-3, CD20, CD2, CD19, Her2, EGFR, EpCAM, FcyRIIIa (CD16), FcyRIIa (CD32a), FcyRIIb (CD32b), FcyRI (CD64), Toll-подобных рецепторов (TLR), TLR4, TLR9, цитокинов, IL-2, IL-5, IL-13, IL-6, IL-17, IL-12, IL-23, TNFa, TGFb, цитокиновых рецепторов, IL-2R, хемокинов, хемокиновых рецепторов, факторов роста, VEGF и HGF.

[0071] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению содержат по меньшей мере второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с антигеном, где указанное антитело предусматривает мультиспецифический формат, выбранный из группы, состоящей из Fab-Fc-scFv, «открывалки для бутылок», Mab-scFv, Mab-Fv, двойного scFv, центрального Fv, центрального scFv, одноплечевого центрального scFv, Fab-Fab, Fab-Fv, mAb-Fv, mAb-Fab, DART, BiTE, IgG с универсальной легкой цепью, TandAb, Cross-Mab, SEED, BEAT, TrioMab и DuetMab.

[0072] В определенных вариантах осуществления представлены выделенные последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению.

[0073] В определенных вариантах осуществления представлены векторы экспрессии, содержащие последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению.

[0074] В определенных вариантах осуществления представлены клетки-хозяева, трансфицированные, трансформированные или трансдуцированные последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующими домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению.

[0075] В определенных вариантах осуществления представлены клетки-хозяева, трансфицированные, трансформированные или трансдуцированные векторами, кодирующими домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению.

[0076] В определенных вариантах осуществления представлены фармацевтические композиции, содержащие одно или более из доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению.

[0077] В определенных вариантах осуществления представлены фармацевтические композиции, содержащие одно или более из доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению, и фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.

[0078] В определенных вариантах осуществления представлены фармацевтические композиции, содержащие одну или более нуклеиновых кислот, кодирующих одно или более из доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению.

[0079] В определенных вариантах осуществления представлены фармацевтические композиции, содержащие один или более векторов, кодирующих одно или более из доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению, и фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.

[0080] В определенных вариантах осуществления представлены способы лечения или замедления прогрессирования нарушения у нуждающегося в таком лечении млекопитающего, причем способы предусматривают введение одного или более из доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению, где в результате указанного введения нарушение ослабляется или уменьшается его тяжесть. В определенных вариантах осуществления представлены способы предупреждения или уменьшения риска развития нарушения у млекопитающего путем введения одного или более из доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению, где в результате указанного введения нарушение предупреждается. В определенных вариантах осуществления представлены способы лечения нарушения у нуждающегося в таком лечении млекопитающего, где нарушение представляет собой пролиферативное нарушение, онкологическое нарушение, иммуноонкологическое нарушение, неврологическое нарушение, нейродегенеративное нарушение или аутоиммунное нарушение, предусматривающие введение одного или более из доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению, где в результате указанного введения нарушение ослабляется или уменьшается его тяжесть. В определенных вариантах осуществления такие способы дополнительно предусматривают введение млекопитающему дополнительного терапевтического средства. В определенных вариантах осуществления таким млекопитающим является человек.

[0081] В определенных вариантах осуществления представлен гетеродимерный слитый белок на основе CD3, содержащий: первую полипептидную цепь, содержащую полипептид CD3-эпсилон, слитый с первым Fc-участком; и вторую полипептидную цепь, содержащую полипептид CD3-дельта, слитый со вторым Fc-участком. В определенных вариантах осуществления полипептид CD3-эпсилон содержит полипептид CD3-эпсилон человека, а полипептид CD3-дельта содержит полипептид CD3-дельта человека. В определенных вариантах осуществления полипептид CD3-эпсилон представляет собой полипептид CD3-эпсилон человека, а полипептид CD3-дельта представляет собой полипептид CD3-дельта человека. В определенных вариантах осуществления полипептид CD3-эпсилон содержит полипептид CD3-эпсилон яванского макака, а полипептид CD3-дельта содержит полипептид CD3-дельта яванского макака. В определенных вариантах осуществления полипептид CD3-эпсилон представляет собой полипептид CD3-эпсилон яванского макака, а полипептид CD3-дельта представляет собой полипептид CD3-дельта яванского макака. В определенных вариантах осуществления первый полипептид гетеродимерного слитого белка на основе CD3 содержит следующую аминокислотную последовательность: QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 6716); а вторая полипептидная цепь содержит следующую аминокислотную последовательность: FKIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMCQSCVELDGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 6717). В определенных вариантах осуществления первый полипептид гетеродимерного слитого белка на основе CD3 содержит следующую аминокислотную последовательность: QDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILTCSQHLGSEAQWQHNGKNKEDSGDRLFLPEFSEMEQSGYYVCYPRGSNPEDASHHLYLKARVCENCMEMDGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 6718); а вторая полипептидная цепь содержит следующую аминокислотную последовательность: FKIPVEELEDRVFVKCNTSVTWVEGTVGTLLTNNTRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESAVQVHYRMCQNCVELDPGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 6719). В определенных вариантах осуществления представлены пути применения таких гетеродимерных слитых белков на основе CD3 в идентификации, выделении, отборе, создании и/или определении характеристик доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител.

Подробное описание изобретения

[0082] Если не определено иное, то все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, которое обычно понятно рядовому специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Используемый в данном документе термин «приблизительно» при использовании в отношении конкретного указанного числового значения означает, что данное значение может отличаться от указанного значения не более чем на 1%. Например, используемое в данном документе выражение «приблизительно 100» включает 99 и 101 и все значения между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).

[0083] Следует понимать, что аспекты и варианты осуществления настоящего изобретения, описанного в данном документе, включают «содержащий», «состоящий» и «фактически состоящий из» аспектов и вариантов осуществления.

[0084] «Кластер дифференцировки 3» или «CD3» в целом относится к любому нативному CD3 из любого позвоночного, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди) и грызуны (например, мыши и крысы), если не указано иное, включая, например, цепи CD3ε, CD3γ, CD3α и CD3β. Данный термин охватывает «полноразмерный», непроцессированный CD3 (например, непроцессированный или немодифицированный CD3ε или CD3γ), а также любую форму CD3, которая возникает в результате процессинга в клетке. Данный термин также охватывает встречающиеся в природе варианты CD3, в том числе, например, сплайс-варианты или аллельные варианты. CD3 включает, например, белок CD3ε человека (№ эталонной последовательности в NCBI NP_000724), длина которого составляет 207 аминокислот, и белок CD3γ человека (№ эталонной последовательности в NCBI NP_000064), длина которого составляет 182 аминокислоты. Термин также относится к белку CD3-эпсилон либо человека, либо яванского макака, аминокислотная последовательность которого изображена, например, на фигуре 18 в данном документе. «CD3εN27» и «CD3εN13» означают соответственно 27 N-концевых аминокислот и 13 N-концевых аминокислот CD3, и они необязательно содержат химические модификации или с ними осуществлены конъюгации.

[0085] «Класс» антитела относится к типу константного домена или константного участка, которым обладает его тяжелая цепь. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, а также некоторые из них можно дополнительно разделить на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют разным классам иммуноглобулинов, соответственно называются α, δ, ε, γ и μ.

[0086] Используемый в данном документе термин «цитотоксическое средство» относится к веществу, которое ингибирует или предотвращает осуществление клеточной функции и/или приводит к гибели или разрушению клетки. Цитотоксические средства включают без ограничения радиоактивные изотопы (например, At²¹¹, I1³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹² и радиоактивные изотопы Lu); химиотерапевтические средства или лекарственные средства (например, метотрексат, адриамицин, алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин, этопозид), доксорубицин, мелфалан, митомицин C, хлорамбуцил, даунорубицин или другие интеркалирующие средства); ингибиторы роста; ферменты и их фрагменты, такие как нуклеолитические ферменты; антибиотики; токсины, такие как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, включая фрагменты и/или их варианты; а также различные противоопухолевые или противораковые средства, раскрытые в данном документе.

[0087] «Нарушение» относится к любому состоянию или заболеванию, лечение которых будет приводить к положительному результату, включая без ограничения хронические и острые нарушения или заболевания, в том числе такие патологические состояния, которые провоцируют рассматриваемое нарушение у млекопитающего.

[0088] Термины «клеточное пролиферативное нарушение» и «пролиферативное нарушение» относятся к нарушениям, которые ассоциированы с нарушенной до определенной степени пролиферацией клеток. В одном варианте осуществления клеточное пролиферативное нарушение предусматривает рак. В одном варианте осуществления клеточное пролиферативное нарушение предусматривает опухоль.

[0089] Термины «рак» и «раковое» относятся или описывают физиологическое состояние млекопитающих, которое, как правило, характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают без ограничения карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или злокачественные новообразования лимфоидной ткани. Более конкретные примеры таких видов рака включают без ограничения плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легкого, включая мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, желудочный рак или рак желудка, включая гастроинтестинальный рак и гастроинтестинальный стромальный рак, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, рак мочевыводящих путей, гепатому, рак молочной железы, рак толстого кишечника, рак прямой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки или почечный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, карциному анального канала, карциному полового члена, меланому, поверхностно распространяющуюся меланому, меланому типа злокачественного лентиго, виды акральной лентигинозной меланомы, виды узловатой меланомы, множественную миелому и B-клеточную лимфому (включая низкой степени злокачественности/фолликулярную неходжкинскую лимфому (NHL); мелкоклеточную лимфоцитарную (SL) NHL; промежуточной степени злокачественности/фолликулярную NHL; диффузную NHL промежуточной степени злокачественности; иммунобластную NHL высокой степени злокачественности; лимфобластную NHL высокой степени злокачественности; мелкоклеточную NHL с нерассеченными ядрами высокой степени злокачественности; генерализованную NHL; лимфому из клеток мантийной зоны; лимфому, ассоциированную со СПИДом; и макроглобулинемию Вальденстрема); хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL); острый лимфобластный лейкоз (ALL); волосатоклеточный лейкоз; хронический миелобластный лейкоз и посттрансплантационное лимфопролиферативное нарушение (PTLD), а также аномальную сосудистую пролиферацию, ассоциированную с факоматозами, отек (такой как ассоциированный с опухолями головного мозга), синдрома Мейгса, рак головного мозга, а также рак головы и шеи и ассоциированные с ними метастазы. В определенных вариантах осуществления виды рака, которые поддаются лечению антителами по настоящему изобретению, включают рак молочной железы, колоректальный рак, рак прямой кишки, немелкоклеточный рак легкого, глиобластому, неходжкинскую лимфому (NHL), почечно-клеточный рак, рак предстательной железы, рак печени, рак поджелудочной железы, саркому мягких тканей, саркому Капоши, карциноидную карциному, рак головы и шеи, рак яичника, мезотелиому и множественную миелому. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из мелкоклеточного рака легкого, глиобластомы, видов нейробластомы, меланомы, карциномы молочной железы, рака желудка, колоректального рака (CRC) и гепатоцеллюлярной карциномы. При этом в некоторых вариантах осуществления рак выбран из немелкоклеточного рака легкого, колоректального рака, глиобластомы и карциномы молочной железы, в том числе метастатических форм этих видов рака. В других вариантах осуществления рак выбран из класса видов зрелого B-клеточного рака за исключением лимфомы Ходжкина, но включая DLBCL B-клеточного типа из герминативного центра (GCB), активную DLBCL B-клеточного типа (ABC), фолликулярную лимфому (FL), лимфому из клеток мантийной зоны (MCL), острый миелоидный лейкоз (AML), хронический лимфоидный лейкоз (CLL), лимфому из клеток маргинальной зоны (MZL), мелкоклеточный лимфоцитарный лейкоз (SLL), лимфоплазмацитарную лимфому (LL), макроглобулинемию Вальденстрема (WM), лимфому центральной нервной системы (CNSL), лимфому Беркитта (BL), B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, лимфому из клеток маргинальной зоны селезенки, волосатоклеточный лейкоз, лимфому/лейкоз селезенки, неклассифицируемую диффузную B-мелкоклеточную лимфому из красной пульпы селезенки, вариант волосатоклеточного лейкоза, макроглобулинемию Вальденстрема, болезни тяжелых цепей, болезнь тяжелых цепей, болезнь тяжелой γ-цепи, болезнь тяжелой μ-цепи, плазмаклеточную миелому, солитарную плазмацитому кости, внекостную плазмацитому, экстранодальную лимфому из клеток маргинальной зоны лимфоидной ткани слизистых оболочек (MALT-лимфому), узловую лимфому из клеток маргинальной зоны, узловую лимфому из клеток маргинальной зоны у детей, фолликулярную лимфому у детей, первичную кожную лимфому из клеток фолликулярного центра, B-крупноклеточную лимфому, богатую Т-клетками/гистиоцитами, первичную DLBCL ЦНС, первичную кожную DLBCL, ножного типа, EBV-положительную DLBCL у лиц пожилого возраста, DLBCL, ассоциированную с хроническим воспалением, лимфоматоидный гранулематоз, первичную средостенную (тимическую) B-крупноклеточную лимфому, интраваскулярную B-крупноклеточную лимфому, ALK-положительную B-крупноклеточную лимфому, плазмобластную лимфому, B-крупноклеточную лимфому, возникающую при HHV8-ассоциированной многоочаговой болезни Кастлемана, первичную выпотную лимфому: B-клеточную лимфому, неклассифицируемую, занимающую промежуточное положение по признакам между диффузной В-крупноклеточной лимфомой и лимфомой Беркитта, и B-клеточную лимфому, неклассифицируемую, занимающую промежуточное положение по признакам между диффузной В-крупноклеточной лимфомой и классической лимфомой Ходжкина.

[0090] Используемый в данном документе термин «опухоль» относится к росту и пролиферации всех неопластических клеток, независимо от того, являются они злокачественными или доброкачественными, и ко всем предраковым и раковым клеткам и тканям. Термины «рак», «раковый», «клеточное пролиферативное нарушение», «пролиферативное нарушение» и «опухоль» не являются взаимоисключающими при упоминании в данном документе.

[0091] Используемый в данном документе термин «опухолевый антиген» можно понимать как антигены, которые представлены на опухолевых клетках. Данные антигены могут быть представлены на клеточной поверхности с помощью внеклеточной части, которая зачастую объединена с трансмембранной и цитоплазматической частью молекулы. Иногда такие антигены могут быть представлены только на опухолевых клетках, но никогда на нормальных клетках. Опухолевые антигены могут экспрессироваться исключительно на опухолевых клетках или могут представлять специфическую для опухоли мутацию по сравнению с нормальными клетками. В данном случае их называют опухоль-специфическими антигенами. Чаще всего опухолевые антигены представлены на опухолевых клетках и нормальных клетках, и они называются опухолеассоциированными антигенами. Данные опухолеассоциированные антигены могут сверхэкспрессироваться на опухолевых клетках по сравнению с нормальными клетками или быть доступными для связывания с антителами из-за менее плотной структуры опухолевой ткани по сравнению с нормальной тканью.

[0092] Термин «EC (ЕС)50» относится к «полумаксимальной эффективной концентрации», с помощью данного значения измеряют эффективность соединения (например, антитела, содержащего домен, связывающий CD3) для биологического или биохимического применения. Данный количественный показатель указывает на количество или концентрацию конкретного соединения или антитела, требуемые для того, чтобы вызвать указанный биологический процесс с полумаксимальным ответом.

[0093] «Эффекторные функции» относятся к тем видам биологической активности, которые связаны с Fc-участком антитела, который изменятся в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают связывание C1q и комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание Fc-рецептора; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; понижающую регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора) и активацию B-клеток.

[0094] «Эффективное количество» соединения, например, антитела к CD3 по настоящему изобретению или содержащей его композиции (например, фармацевтической композиции), представляет собой по меньшей мере минимальное количество, необходимое для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата, такого как измеримое улучшение или предупреждение конкретного нарушения (например, клеточного пролиферативного нарушения, например, рака). Эффективное количество в данном документе может варьироваться в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и вес пациента, а также способность антитела вызывать требуемый ответ у индивидуума. Эффективное количество также представляет собой то количество, при котором любые токсические или вредные эффекты, сопутствующие лечению, перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами. При профилактическом применении благоприятные или требуемые результаты включают такие результаты, как устранение или снижение риска, уменьшение тяжести или отсрочка проявления заболевания, включая биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы заболевания, его осложнений и промежуточных патологических фенотипов, присутствующих во время развития заболевания. При терапевтическом применении благоприятные или требуемые результаты включают клинические результаты, такие как уменьшение одного или более симптомов, возникших в результате заболевания, улучшение качества жизни страдающих от заболевания, уменьшение дозы других лекарственных средств, необходимых для лечения заболевания, усиление эффекта другого лекарственного препарата, например, посредством целенаправленного воздействия, замедление прогрессирования заболевания и/или продление выживания. В случае рака или опухоли эффективное количество лекарственного средства может оказывать эффект, заключающийся в уменьшении количества раковых клеток; уменьшении размера опухоли; ингибировании (т.е. замедлении до определенной степени или предпочтительно остановки) инфильтрации раковых клеток в периферические органы; ингибировании (т.е. замедлении до определенной степени и предпочтительно остановки) роста метастазов опухоли; ингибировании до определенной степени роста опухоли и/или облегчении до определенной степени одного или более симптомов, ассоциированных с нарушением. Эффективное количество можно вводить в виде одного или более введений. Для целей настоящего изобретения эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для проведения профилактического или терапевтического лечения либо напрямую, либо опосредованно. Как это трактуется в клиническом контексте, эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может достигаться или может не достигаться в сочетании с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, «эффективное количество» можно рассматривать в контексте введения одного или более терапевтических средств, а отдельное средство можно считать назначаемым в эффективном количестве, если в сочетании с одним или более другими средствами требуемый результат может достигаться или достигается.

[0095] Термин «Fc-участок» в данном документе используется для обозначения C-концевого участка тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит по меньшей мере часть константного участка. Термин включает нативные последовательности Fc-участков и варианты Fc-участков. В одном варианте осуществления Fc-участок тяжелой цепи IgG человека распространяется от Cys226 или от Pro230 до карбокси-конца тяжелой цепи. Однако C-концевой лизин (Lys447) Fc-участка может присутствовать или может не присутствовать. Если в данном документе не указано иное, то нумерация аминокислотных остатков в Fc-участке или константном участке соответствует системе нумерации EU, также называемой индексом EU, как описано в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991.

[0096] «Каркасный участок» или «FR» относится к остаткам вариабельного домена, отличным от остатков определяющего комплементарность участка (CDR). FR вариабельного домена обычно состоит из четырех FR-доменов: FR1, FR2, FR3 и FR4. Соответственно, в VH (или VL) последовательности CDR и FR обычно представлены в следующем порядке: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

[0097] Термины «полноразмерное антитело», «интактное антитело» и «цельное антитело» используются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения антитела, имеющего структуру, которая фактически аналогична структуре нативного антитела, или имеющего тяжелые цепи, которые содержат Fc-участок, определенный в данном документе.

[0098] «Средство, ингибирующее рост» при использовании в данном документе относится к соединению или композиции, которые ингибируют рост клетки либо in vitro, либо in vivo. В одном варианте осуществления средство, ингибирующее рост, представляет собой антитело, ингибирующее рост, которое предупреждает или снижает пролиферацию клетки, экспрессирующей антиген, с которым связывается антитело. В другом варианте осуществления средство, ингибирующее рост, может быть средством, которое значительно снижает процентную долю клеток в S-фазе. Примеры средств, ингибирующих рост, включают средства, которые блокируют прохождение по клеточному циклу (в точке, отличной от S-фазы), такие как средства, которые индуцируют остановку на G1-фазе и остановку на M-фазе. Классические блокаторы M-фазы включают алкалоиды барвинка (винкристин и винбластин), таксаны и ингибиторы топоизомеразы II, такие как доксорубицин, эпирубицин, даунорубицин, этопозид и блеомицин. Средства, которые останавливают рост на G1, также распространяют свое действие на S-фазу, например, средства, алкилирующие ДНК, такие как тамоксифен, преднизон, дакарбазин, мехлорэтамин, цисплатин, метотрексат, 5-фторурацил и ара-C. Дополнительную информацию можно найти в Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Глава 1, под названием “Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs” под авторством Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), например, стр. 13. Таксаны (паклитаксел и доцетаксел) представляют собой противораковые лекарственные средства, оба из которых получены из тисового дерева. Доцетаксел (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer), полученный из тиса европейского, представляет собой полусинтетический аналог паклитаксела (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb). Паклитаксел и доцетаксел активируют сборку микротрубочек из димеров тубулина и стабилизируют микротрубочки посредством предотвращения деполимеризации, что приводит к ингибированию митоза в клетках.

[0099] Выражение, которое включает антиген и термин «-положительный», такое как «HER2-положительный», означает, что заболевание, состояние или нарушение характеризуется, помимо прочего, более высокими чем нормальные уровнями антигена или мишени, на которые ссылаются. В определенных вариантах осуществления антиген или мишень содержат фрагмент, который экспрессируется или иным образом представлен на раковых клетках на более высоком уровне, чем на нормальных клетках.

[00100] Термины «клетка-хозяин», «линия клеток-хозяев» и «культура клеток-хозяев» используются взаимозаменяемо и относятся к клеткам, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают «трансформантов» и «трансформированные клетки», которые включают первичную трансформированную клетку и полученное от нее потомство без учета количества пассажей. Потомство может быть не полностью идентичным родительской клетке по составу нуклеиновой кислоты, а может содержать мутации. В данный документ также включается мутантное потомство, которое характеризуется такой же функцией или биологической активностью, в отношении которых подвергалась скринингу или отбору первоначально трансформированная клетка.

[00101] «Человеческое антитело» представляет собой антитело, которое имеет аминокислотную последовательность, которая соответствует аминокислотной последовательности антитела, продуцируемого человеком или клеткой человека, или получена из источника, отличного от человека, в котором используется репертуар человеческих антител или другие последовательности, кодирующие человеческие антитела. Это определение человеческого антитела, в частности, исключает гуманизированное антитело, содержащее антигенсвязывающие остатки, отличные от человеческих. Человеческие антитела можно получать с применением разных методик, известных из уровня техники, в том числе посредством библиотек фагового дисплея. Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). Также доступны способы получения моноклональных антител человека, описанные в Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol. 147(1):86-95 (1991). См. также van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001). Человеческие антитела можно получать путем введения антигена трансгенному животному, которое было модифицировано для продуцирования таких антител в ответ на провокацию антигеном, и у которого были инактивированы эндогенные локусы, например, иммунизированные ксеномыши (см., например, патенты США №№6075181 и 6150584 касательно технологии XENOMOUSE). См. также, например, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006) касательно человеческих антител, полученных с помощью технологии В-клеточной гибридомы человека. Термин «антитело человека», используемый в данном документе, предназначен для включения антител, имеющих вариабельные и константные участки, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Человеческие mAb по настоящему изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека (например, мутации, введенные в путем случайного или сайт-специфического мутагенеза in vitro или путем соматического мутирования in vivo), например, в CDR и, в частности, в CDR3. Однако используемый в данном документе термин «человеческое антитело» не предусматривает включение mAb, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии других видов млекопитающих (например, мыши), были привиты на последовательности FR человека.

[00102] «Консенсусный каркасный участок человека» представляет собой каркасный участок, в котором представлены наиболее часто встречающиеся аминокислотные остатки при отборе последовательностей каркасных участков VL или VH человека. В целом отбор последовательностей VL или VH иммуноглобулина человека осуществляется из подгруппы последовательностей вариабельного домена. Обычно эта подгруппа последовательностей представляет собой такую же подгруппу, как и в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda Md. (1991), vols. 1-3. В одном варианте осуществления, в случае VL, подгруппа представляет собой подгруппу каппа I, как и в Kabat et al., выше. В одном варианте осуществления, в случае VH, подгруппа представляет собой подгруппу III, как и в Kabat et al., выше.

[00103] «Гуманизированное антитело» относится к антителу, содержащему аминокислотные остатки из CDR, отличных от человеческих, и аминокислотные остатки из FR человека. В определенных вариантах осуществления гуманизированное антитело будет содержать фактически все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или фактически все (например, CDR) соответствуют таковым в антителе, отличном от человеческого, и все или фактически все из FR соответствуют таковым в антителе человека. Гуманизированное антитело необязательно может содержать по меньшей мере часть константного участка антитела, полученного из человеческого антитела. Гуманизированная форма антитела, например, антитела, отличного от человеческого, относится к антителу, которое подвергли гуманизации.

[00104] «Иммуноконъюгат» представляет собой антитело, конъюгированное с одной или более гетерологичными молекулами, включая без ограничения цитотоксическое средство.

[00105] «Субъект» или «индивидуум» представляют собой млекопитающее. Млекопитающие включают без ограничения одомашненных животных (например, коров, овец, кошек, собак и лошадей), приматов (например, людей и приматов, отличных от человека, таких как обезьяны), кроликов и грызунов (например, мышей и крыс). В определенных вариантах осуществления субъект или индивидуум являются человеком.

[00106] «Выделенное антитело» представляет собой антитело, которое было отделено от компонента его естественной среды. В некоторых вариантах осуществления антитело очищают до степени чистоты, составляющей более 95% или 99%, как определено, например, с помощью электрофореза (например, SDS-PAGE, изоэлектрического фокусирования (IEF), капиллярного электрофореза) или хроматографии (например, ионообменной или обращенно-фазовой HPLC). Обзор способов оценки чистоты антитела см., например, в Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007).

[00107] «Выделенная нуклеиновая кислота» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая была отделена от компонента ее естественной среды. Выделенная нуклеиновая кислота включает молекула нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, которые обычно содержат молекулу нуклеиновой кислоты, но молекула нуклеиновой кислоты присутствует внехромосомно или в хромосомной локализации, которая отличается от ее естественной хромосомной локализации.

[00108] Используемый в данном документе термин «моноклональное антитело» или «mAb» относится к антителу, полученному из группы фактически однородных антител, т.е. индивидуальных антител, составляющих группу антител, которые являются идентичными и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантов антител, например, содержащих встречающиеся в природе мутации или мутации, возникающие в ходе получения моноклонального антитела, при этом такие варианты обычно присутствуют в незначительных количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые, как правило, содержат разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело в препарате моноклональных антител направлено на одну детерминанту на антигене. Таким образом, определение «моноклональный» указывает на природу антитела, как полученного из фактически однородной группы антител, и оно не должно истолковываться, как требующее получения антитела посредством какого-либо конкретного способа. Например, моноклональные антитела, подлежащие применению в соответствии с настоящим изобретением, можно получать с помощью целого ряда методик, в том числе без ограничения способа гибридом, способов с использованием рекомбинантной ДНК, способов фагового дисплея и способов, в которых используются трансгенные животные, содержащие все или часть локусов иммуноглобулина человека, при этом такие способы и другие иллюстративные способы получения моноклональных антител описаны в данном документе.

[00109] Термин «фармацевтический состав» или «фармацевтическая композиция» относится к препарату, который находится в такой форме, чтобы обеспечивать биологическую активность содержащегося в нем активного ингредиента, такого как домены, связывающие CD3, по настоящему изобретению и содержащие их антитела, чтобы быть эффективным, и который не содержит дополнительных компонентов, которые являются недопустимо токсичными для субъекта, которому будут вводить состав.

[00110] «Фармацевтически приемлемый носитель» относится к ингредиенту в фармацевтическом составе, который не является активным ингредиентом и нетоксичен для субъекта. Фармацевтически приемлемый носитель включает без ограничения буфер, вспомогательное вещество, стабилизатор или консервант.

[00111] Выражение «терапевтически эффективное количество» означает количество, которое дает требуемый эффект, с целью получения которого его и вводят. Точное количество будет зависеть от цели лечения и будет установлено специалистом в данной области техники с применением известных методик (см., например, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).

[00112] Используемые в данном документе «иммунный ответ» или «иммунологический ответ» у субъекта относятся к развитию гуморального иммунного ответа, клеточного иммунного ответа или гуморального и клеточного иммунных ответов на антиген/иммуноген. «Гуморальный иммунный ответ» относится к ответу, который по меньшей мере частично опосредован антителами. «Клеточный иммунный ответ» представляет собой ответ, опосредованный Т-лимфоцитами или другими лейкоцитами, или и теми, и другими, и включает продуцирование цитокинов, хемокинов и аналогичных молекул, продуцируемых активированными T-клетками, лейкоцитами или и теми, и другими. Иммунные ответы можно определять с применением стандартных иммунологических анализов и анализов нейтрализации, которые известны в данной области техники.

[00113] Используемый в данном документе термин «иммуногенность» относится к способности белка или полипептида вызывать иммунный ответ, специфически направленный на бактерию или вирус, которые вызывают идентифицированное заболевание.

[00114] Используемое в данном документе «лечение» (и его грамматические варианты, такие как «лечить» или «осуществлять лечение») относятся к клиническому вмешательству в попытке изменить естественное течение заболевания у подлежащего лечения индивидуума, и его можно проводить либо для профилактики, либо во время клинического исследования. Требуемые эффекты лечения включают без ограничения предупреждение возникновения или рецидива заболевания, облегчение симптомов, снижение любых непосредственных или опосредованных патологических последствий заболевания, предотвращение метастазирования, снижение скорости прогрессирования заболевания, уменьшение тяжести или облегчение болезненного состояния, а также ремиссию или улучшение прогноза. В некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению применяют для замедления развития нарушения или заболевания или для уменьшения скорости прогрессирования нарушения или заболевания.

[00115] Используемое в данном документе «замедление прогрессирования» нарушения или заболевания означает задерживание, препятствование, уменьшение скорости, замедление, стабилизацию и/или отсрочивание развития заболевания или нарушения (например, клеточного пролиферативного нарушения, например, рака). Данное замедление может варьировать по времени в зависимости от анамнеза заболевания и/или индивидуума, подлежащего лечению. Специалисту в данной области техники очевидно, что достаточное или значительное замедление, в действительности, может охватывать предупреждение, в том смысле, что у индивидуума не развивается заболевание. Например, может замедляться развитие рака на последней стадии, как, например, метастазирование.

[00116] Под «снижением» или «ингибированием» подразумевается способность вызывать общее снижение, например, на 20% или более, 50% или более или 75%, 85%, 90%, 95% или более. В определенных вариантах осуществления снижение или ингибирование может относиться к эффекторной функции антитела, которая опосредуется Fc-участком антитела, при этом такие эффекторные функции, в частности, включают комплементзависимую цитотоксичность (CDC), антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и антителозависимый клеточный фагоцитоз (ADCP).

[00117] Используемые в данном документе термины «предупреждать», «осуществление предупреждения» и «предупреждение» относятся к предупреждению или подавлению развития или возникновения нарушения или заболевания.

[00118] Используемые в данном документе термины «уменьшение тяжести» и «облегчение» относятся к снижению или снижению тяжести состояния или любого из его симптомов.

[00119] В данном документе термин «антитело» используется в наиболее широком смысле и охватывает различные структуры антитела, в том числе без ограничения моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антитела при условии, что они проявляют требуемую активность связывания антигена. Что касается мультиспецифических антител, такие антитела содержат по меньшей мере два различных антигенсвязывающих домена, которые распознают и специфически связываются с по меньшей мере двумя различными антигенами. Что касается биспецифических антител, такие антитела содержат два различных антигенсвязывающих домена, которые распознают и специфически связываются с по меньшей мере двумя различными антигенами. «Различный антиген» или «различные антигены» могут относиться к различным и/или отдельным белкам, полипептидам или молекулам; а также к различным и/или отдельным эпитопам, при этом такие эпитопы могут содержаться в пределах одного белка, полипептида или другой молекулы. Если конкретно не указано иное, то используемый в данном документе термин «антитело» следует также понимать, как охватывающий в дополнение к вышесказанному молекулы антитела, содержащие две тяжелые цепи иммуноглобулина и две легкие цепи иммуноглобулина (т.e. «молекулы полного антитела»), а также их антигенсвязывающие фрагменты. Используемые в данном документе термины «антигенсвязывающая часть» антитела, «антигенсвязывающий фрагмент» антитела и т.п. включают любой встречающийся в природе, получаемый ферментативным путем, синтетический или полученный с помощью методик генной инженерии полипептид или гликопротеин, которые специфически связывают антиген с образованием комплекса.

[00120] «Антитело» и «антитела» также могут относиться к молекулам иммуноглобулина, состоящим из четырех полипептидных цепей, двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей, соединенных между собой дисульфидными связями (т.e. «молекулы полного антитела»), а также к их мультимерам (например, IgM) или к их антигенсвязывающим фрагментам. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка тяжелой цепи («VH») и константного участка тяжелой цепи (состоящего из доменов C_H1, C_H2 и C_H3). Каждая легкая цепь состоит из вариабельного участка легкой цепи («VL») и константного участка легкой цепи («CL»). Участки V_H и V_L можно дополнительно разделить на участки гипервариабельности, называемые участками, определяющими комплементарность (CDR), чередующиеся с более консервативными участками, называемыми каркасными участками (FR). Каждый V_H и V_L состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения FR антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) могут быть идентичны последовательностям зародышевой линии человека или могут быть модифицированы естественным или искусственным путем. Аминокислотная консенсусная последовательность может быть определена на основе анализа расположенных рядом друг с другом двух или более CDR. Соответственно, CDR в тяжелой цепи обозначаются как «CHRH1», «CDRH2» и «CDRH3» соответственно, а CDR в легкой цепи обозначаются как «CDRL1», «CDRL2» и «CDRL3».

[00121] «Фрагмент антитела» относится к отличной от интактного антитела молекуле, которая содержит часть интактного антитела, связывающей антиген, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антител включают без ограничения Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; диатела; линейные антитела; молекулы одноцепочечного антитела (например, scFv) и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.

[00122] Под «связывающим доменом» или «антигенсвязывающим доменом» подразумевают часть антитела, соединения или молекулы, которая специфически связывается с целевым эпитопом, антигеном, лигандом или рецептором. Связывающие домены включают без ограничения антитела (например, моноклональные, поликлональные, рекомбинантные, гуманизированные и химерные антитела), фрагменты антител или их части (например, Fab-фрагменты, Fab'₂, scFv-антитела, Fv-фрагменты, SMIP, доменные антитела, диатела, минититела, scFv-Fc, аффитела, нанотела и домены VH и/или VL антител), рецепторы, лиганды, аптамеры и другие молекулы, имеющие идентифицированного партнера по связыванию.

[00123] «Антитело с созревшей аффинностью» относится к антителу с одним или более изменениями в одном или более участках, определяющих комплементарность (CDR), по сравнению с исходным антителом, которое не обладает такими изменениями, при этом такие изменения приводят к улучшению аффинности антитела в отношении антигена. Также возможна замена одного или более остатков в CDR или удаление одного или более CDR. В научной литературе были описаны антитела, в которых можно оставить для связывания одним или два CDR. Padlan et al. (1995 FASEB J. 9:133-139) проанализировали контактные участки между антителами и их антигенами, исходя из опубликованных кристаллических структур, и сделали вывод о том, что только от приблизительно одной пятой до одной трети остатков в CDR действительно контактируют с антигеном. Padlan также обнаружил множество антител, у которых один или два CDR не содержали аминокислот, вступающих в контакт с антигеном (см. также Vajdos et al. 2002 J Mol Biol 320:415-428). Остатки CDR, не контактирующие с антигеном, могут быть идентифицированы на основании предыдущих исследований (например, остатки H60-H65 в CDRH2 зачастую не являются необходимыми), на основе участков CDR по Kabat, лежащих за пределами CDR по Chothia, с помощью молекулярного моделирования и/или эмпирическии путем. Если исключен CDR или его остаток(остатки), то он обычно заменен на аминокислоту, занимающую соответствующее положение в другой последовательности человеческого антитела, или на консенсусную последовательность для таких последовательностей. Положения для замены в пределах CDR и аминокислоты для замены также могут быть выбраны эмпирическим путем.

[00124] Полностью человеческие моноклональные антитела, раскрытые в данном документе, могут содержать одну или более аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных участках и/или участках CDR вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии. Такие мутации можно легко определить путем сравнения аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, с последовательностями зародышевой линии, доступными, например, из открытых баз данных последовательностей антител. Настоящее изобретение включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые получены из любой из аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, где одна или более аминокислот в пределах одного или более каркасных участков и/или участков CDR подвергнуты мутированию в соответствующий(-е) остаток(остатки) зародышевой линии, из которой произошло антитело, или в соответствующий(-е) остаток(остатки) другой последовательности зародышевой линии человека, или в консервативную аминокислотную замену соответствующего(-их) остатка(остатков) зародышевой линии (в данном документе такие изменения в последовательности в совокупности обозначаются как “герминативные мутации”). Рядовой специалист в данной области техники, начиная с последовательностей вариабельного участка тяжелой и легкой цепей, раскрытых в данном документе, может легко получить множество антител и антигенсвязывающих фрагментов, которые содержат одну или более отдельных герминативных мутаций или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления все из остатков каркасного участка и/или остатков CDR в пределах V_H- и/или V_L-доменов подвергнуты обратной мутации в остатки, обнаруженные в первоначальной последовательности зародышевой линии, из которой происходит антитело. В других вариантах осуществления только определенные остатки подвергаются обратной мутации в остатки первоначальной последовательности зародышевой линии, например, только мутированные остатки встречаются в пределах первых 8 аминокислот FR1, или в пределах последних 8 аминокислот FR4, или только мутированные остатки встречаются в пределах CDR1, CDR2 или CDR3. В других вариантах осуществления один или более из остатков каркасного участка и/или остатков в CDR подвергнуты мутированию в соответствующий(-е) остаток(остатки) последовательности зародышевой линии (т.е. последовательности зародышевой линии, которая отличается от последовательности зародышевой линии, из которой первоначально происходит антитело). Кроме того, антитела по настоящему изобретению могут содержать любую комбинацию из двух или более герминативных мутаций в пределах каркасного участка и/или участка CDR, например, где определенные индивидуальные остатки подвергнуты мутированию в соответствующий остаток конкретной последовательности зародышевой линии, тогда как определенные другие остатки, которые отличаются от первоначальной последовательности зародышевой линии, сохраняют или подвергают мутированию в соответствующий остаток другой последовательности зародышевой линии. После получения антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или более герминативных мутаций, можно легко протестировать в отношении одного или более требуемых свойств, таких как улучшенная специфичность связывания, повышенная аффинность связывания, улучшенные или улучшенные антагонистические или агонистические биологические свойства (в зависимости от конкретного случая), сниженная иммуногенность и т.д. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, полученные таким общепринятым образом, охватываются настоящее изобретение.

[00125] Настоящее изобретение также включает полностью моноклональные антитела, содержащие варианты любой из раскрытых в данном документе аминокислотных последовательностей CDR, которые содержат одну или более консервативных замен. Например, настоящее изобретение включает антитела, имеющие аминокислотные последовательности CDR, например, с 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и т.д. консервативными аминокислотными заменами по сравнению с любой из аминокислотных последовательностей CDR, раскрытых в данном документе.

[00126] Термины «антитело к CD3», «антитело, содержащее связывающий домен антитела к CD3», «антитело, которое связывается с CD3», «домен, связывающий CD3», «антитело, содержащее домен, связывающий CD3» и т.п. относятся к антителу (или домену, связывающему CD3), которые способны связывать CD3 с достаточной аффинностью и/или специфичностью, вследствие чего антитело является применимым в качестве диагностического и/или терапевтического средства, целенаправленного воздействующего на CD3. В одном варианте осуществления степень связывания антитела к CD3 с неродственным белком, отличным от CD3, составляет менее приблизительно 10% от связывания антитела к CD3, как измерено, например, с помощью одного из различных методов и инструментов для измерения аффинности на основе взаимодействия в растворах и поверхностного взаимодействия, таких как, например, интерферометрия биослоев (BLI), поверхностный плазмонный резонанс (SPR), анализы кинетического исключения на основе равновесия в растворе, анализ прямой ассоциации KinExA, анализы с применением инструментов и реагентов ForteBio, как, например, Octet RED 384, и инструменты на основе HTX BLI, твердофазные иммуноферментные анализы (ELISA) и радиоиммунологические анализы (RIA) (см., например, Estep et al, MAbs, Vol. 5, pages 270-278 (2013); Yu et al., J Biomol Screen, Vol. 21, pages 88-95 (2016)). В определенных вариантах осуществления антитело, которое связывается с CD3, характеризуется константой диссоциации (Kd), составляющей <1 мМ, <100 нМ, <10 нМ, <1 нМ, <0,1 нМ, <0,01 нМ или <0,001 нМ (например, 10-8 M или менее, например, от 10-8 M до 10-13 M, например, от 10-9 M до 10-13 M). В определенных вариантах осуществления антитело к CD3 связывается с эпитопом CD3, который является консервативным для CD3 от разных видов.

[00127] Термин «разрабатываемость» относится к степени, в которой один или более полипептидов из совокупности полипептидов обладает требуемыми характеристиками, такими как, например, требуемая экспрессия, например, в клетках млекопитающих; растворимость; вязкость; агрегация; химическая и/или физическая стабильность; требуемый «срок хранения»; температура плавления; фармакокинетические профили; время полужизни в кровотоке и характеристики клиренса. Такие характеристики могут выступать в качестве независимых признаков, в качестве комбинаций подмножеств таких признаков или все вместе для определения вероятности того, что такой один или более полипептидов могут подвергаться успешной разработке в качестве терапевтического кандидата и, в конечном итоге, одобренного лекарственного средства. Соответственно, из уровня техники в целом понятно, что полипептиды с требуемыми характеристиками разрабатываемости обладают, например, относительно высокой растворимостью, относительно низкой вязкостью, относительно низкой предрасположенностью к агрегации, относительно высокой химической стабильностью, относительно высокой физической стабильностью, относительно продолжительным «сроком хранения», относительно высокой температурой плавления, относительно длительным периодом полужизни в кровотоке, относительно длительным временем клиренса и т.п. Полипептиды с нежелательными характеристиками разрабатываемости обладают, например, относительно низкой растворимостью, относительно высокой вязкостью, относительно высокой предрасположенностью к агрегации, относительно неудовлетворительной химической стабильностью, относительно неудовлетворительной физической стабильностью, относительно коротким «сроком хранения», относительно низкой температурой плавления, относительно коротким периодом полужизни в кровотоке, относительно коротким временем клиренса и т.п.

[00128] Способы и анализы, которые можно использовать для определения степени, в которой полипептиды, такие как домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению, обладают такими требуемыми (или нежелательными, в зависимости от обстоятельств) свойствами разрабатываемости, доступны в данной области техники и включают, например, раскрытые в WO 2014/179363 и Xu et al., Protein Eng Des Sol, Vol. 26, pages 663-670 (2013); анализы SMP и SCP и подобные, хроматографию перекрестного взаимодействия (CIC); хроматографию самовзаимодействия (SIC); динамическое светорассеяние; эксклюзионную хроматографию (SEC), спектроскопию с динамическим светорассеянием (DLS); фотонно-корреляционную спектроскопию; квазиупругое светорассеяние, круговой дихроизм (CD), измерения вязкости; связывание цельных клеток; методы с применением микропанелей тканей; анализы BVP ELISA; анализы AC-SINS (Liu et al; MAbs, Vol. 6, pages 483-492 (2014); дифференциальную сканирующую калориметрию и т.д. (см., например, He et al., J. Pharm. Sci., Vol. 100(4), pp. 1330-1340 (2011); Wagner et al., Pharm. Develop. & Technol (опубликовано онлайн в 2012 году; протокол передачи гипертекста: informahealthcare.com/doi/abs/10.3109/10837450.2011.649851); Hotzel et al., mAbs, Vol. 4(6), pages 753-7601 (2012); Weiqiang et al., J. Pharm. Sci., Vol. 101(5), pp. 1701-1720 (2012); Banks et al., J. Pharm. Sci., Vol. 101(8), pp. 2720-2732 (2012); Lie et al., J. Pharm. Sci., Vol. 94(9), pp. 1928-1948 (2005); и Payne et al., Biopolymers, Vol. 85(5), pp. 527-533 (2006)).

[00129] Кроме того, полипептиды, такие как домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению, отобранные или идентифицированные как характеризующиеся улучшенной разрабатываемостью, называются «подлежащими разработке». Полипептиды, которые согласно раскрытым и заявленным способами считаются характеризующимися сниженной разрабатываемостью, считаются такими в силу их взаимодействия с раскрытыми и заявленными PSR, и собственно относятся к «полиспецифическим» полипептидам. Такие полиспецифические полипептиды дополнительно называются относительно «не подлежащими разработке» или полипептидами с относительно «не возможной разработкой».

[00130] Любые средства для выявления взаимодействия между одним или более полипептидами и фрагментом, с которым взаимодействуют один или более полипептидов, можно использовать согласно раскрытым и заявленным способам. Такие иллюстративные средства включают, например, проточную цитометрию; активируемую магнитным полем сортировку клеток (MAGS); флуоресцентную сортировку клеток (FACS); иммуногистохимическое исследование; колоночные и/или аффинные хроматографию или разделения; методы осаждения (например, центрифугирование); иммунопреципитацию; двугибридные анализы, такие как двугибридные анализы с клетками млекопитающих и двугибридные анализы с дрожжевыми клетками; анализы с использованием резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET); аффинную хроматографию и т.п. В определенных вариантах осуществления выявление такого взаимодействия предусматривает использование активируемой магнитным полем сортировки клеток (MAGS); флуоресцентной сортировки клеток (FACS) и/или комбинаций активируемой магнитным полем сортировки клеток (MAGS) и флуоресцентной сортировки клеток (FACS).

[00131] «Критерий разрабатываемости», также известный как «профиль разрабатываемости», относится к индексу, который может быть присвоен доменам, связывающим CD3, и/или содержащим их антителам по настоящему изобретению при оценке разрабатываемости, как описано в данном документе и, например, в WO 2014/179363 и Xu et al., Protein Eng Des Sol, Vol. 26, pages 663-670 (2013). Таким образом, критерий разрабатываемости является оценкой или мерой, посредством которой можно оценить, сравнить и/или ранжировать разрабатываемость фрагментов, связывающих CD3, и/или содержащих их антител. Такие критерии разрабатываемости служат в качестве оценки степени взаимодействия фрагментов, связывающих CD3, и содержащих их антител. Степень взаимодействия можно оценить с помощью любого из ряда средств, доступных в данной области техники, которые обеспечивают выходное значение, коррелирующее с силой или аффинностью полипептида в отношении фрагмента, с которым он связывается. Такие иллюстративные средства включают способы проточной цитометрии, такие как FACS; ELISA; количественные анализы иммунной аффинности или анализы иммунопреципитации; двугибридные анализы с клетками млекопитающих или двугибридные анализы с дрожжевыми клетками и т.п. В контексте FACS, как продемонстрировано в разделе Примеры, степень взаимодействия между полипептидами из совокупности и PSR можно определять путем получения средней интенсивности флуоресценции (MFI) для каждого выявляемого взаимодействия полипептид-PSR и последующего расположения MFI либо в возрастающем, либо в убывающем порядке, ранжируя тем самым полипептиды из совокупности в соответствии с относительной степенью взаимодействия между каждым выявленным полипептидом и PSR. Такое ранжирование обеспечивает ранжирование полипептидов из совокупности таким образом, что легко определить полипептиды, которые характеризуются улучшенной разрабатываемостью, а также полипептиды, которые характеризуются сниженной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 500 или менее, указывает на то, что полипептид характеризуется улучшенной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 400 или менее, указывает на то, что полипептид характеризуется улучшенной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 300 или менее, указывает на то, что полипептид характеризуется улучшенной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 200 или менее, указывает на то, что полипептид характеризуется улучшенной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 100 или менее, указывает на то, что полипептид характеризуется улучшенной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 1000 или более, указывает на то, что полипептид характеризуется сниженной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 900 или более, указывает на то, что полипептид характеризуется сниженной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 800 или более, указывает на то, что полипептид характеризуется сниженной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 700 или более, указывает на то, что полипептид характеризуется сниженной разрабатываемостью. В определенных вариантах осуществления MFI, составляющая 600 или менее, указывает на то, что полипептид характеризуется сниженной разрабатываемостью.

[00132] Критерий разрабатываемости также может принимать форму нормализованного показателя, например, по шкале от 0,0 до 1,0, при этом критерий для одного или более тестируемых фрагментов, связывающих CD3, и/или содержащих их антител нормализуют относительно критерия разрабатываемости, определенного при проведении анализа со стандартным или контрольным полипептидом или антителом. Такое иллюстративное стандартное или контрольное антитело может предусматривать, например, антитело, связывающее лизоцим яичного куриного яйца (HEL), такое как ADI-03847.

[00133] Термины «синдром высвобождения цитокинов», «цитокиновый криз» или «цитокиновый шторм» относятся к провоспалительной положительной обратной связи между цитокинами и иммунными клетками, приводящей к избыточному или неконтролируемому высвобождению провоспалительных цитокинов клетками иммунной системы (например, T-клетками) (см., например, Lee et al., Blood, Vol. 124, pages 188-195 (2014) и Tisoncik et al., Microbiol Mol Biol Rev, Vol. 76, pages 16-32 (2012). Не желая быть связанным какой-либо теорией, полагают, что после стимуляции и активации иммунные клетки (например, T-клетки) высвобождают серию цитокинов с таким уровнем и степенью, которые производят неблагоприятные биологические/физиологические эффекты различной степени и тяжести, включая острое воспаление, характеризующееся, например, покраснением кожи (краснотой), набуханием или отеком, жаром (повышением температуры), воспалением (болью) и «нарушением функции» (потерей функции); при локализации в коже или другой ткани: повышенным кровотоком, который обеспечивает возможность лейкоцитам в сосудах и белкам плазмы крови достигать внесосудистых участков повреждения, повышая местную температуру и приводят к возникновению болевых ощущений, отечности тканей и экстраваскулярному давлению, а также снижению тканевой перфузии; нарушение функции органов и систем, такое как нарушение функции сердца, респираторный дистресс-синдром у взрослых, нейротоксичность, почечная и/или печеночная недостаточность и диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови. Хотя возникновение CRS, по-видимому, ассоциировано с множеством цитокинов, считается, что повышенные уровни IFNγ, IL-6, TNFα, TGFбета, IL-2, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), IL-10, IL-8, IL-5 и/или фракталкина прогнозируют и/или вызывают CRS или показывают предрасположенность к вызову CRS после стимуляции T-клеток. В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения повышенные уровни продуцирования интерлейкина-6 (IL-6); интерлейкина-12 (IL-12); фактора некроза опухолей альфа (TNFa); (TGFb); интерлейкина-2 (IL-2) и/или интерферона-гамма (IFNg) T-клетками, инкубируемыми с доменами, связывающими CD3, и содержащими их антителами, прогнозируют предрасположенность к вызову CRS. В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения повышенные уровни продуцирования интерферона-гамма (IFNg) T-клетками, инкубируемыми с доменами, связывающими CD3, и содержащими их антителами, прогнозируют предрасположенность к вызову CRS.

[00134] «Критерий риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов», также известный как «профиль риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов», «критерий риска возникновения CRS» или «профиль риска возникновения CRS», относится к индексу, который может быть присвоен доменам, связывающим CD3, и/или содержащим их антителам по настоящему изобретению после оценки предрасположенности к вызову уровней продуцирования цитокинов T-клетками, инкубируемыми или приведенными в контакт с доменами, связывающими CD3 (и/или содержащими их антителами) по настоящему изобретению, на уровнях, достаточных для индуцирования у субъекта синдрома высвобождения цитокинов, при этом данные уровни могли бы быть прогностическими, или ожидаемыми, и/или фактически демонстрируемыми. Таким образом, критерий разрабатываемости является оценкой или мерой, посредством которой можно оценить, сравнить и/или ранжировать фрагменты, связывающие CD3, и/или содержащие их антитела в отношении риска возникновения CRS. Такие критерия риска возникновения CRS служат в качестве оценки предрасположенности, или прогностической, или демонстрируемой, фрагментов, связывающих CD3, и содержащих их антител вызывать высвобождение цитокинов при оценке либо in vitro (например, в клеточных анализах), либо in vivo (например, у тестируемого субъекта или пациента) анализах высвобождения цитокинов. Такие анализы доступны специалисту в данной области техники, и в определенных вариантах осуществления настоящего изобретения включают, например, применение PBMC, либо в виде культивируемых линий клеток, либо в качестве первичных клеток, полученных от живых доноров, для оценки способности иммуномодулирующих средств, таких как домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, индуцировать продуцирование/секрецию цитокинов в клеточных анализах высвобождения цитокинов, осуществляемых в форматах иммобилизированных или предпочтительно растворимых антител (см., например, Vessillier et al., J Immunol Methods, Vol. 424, pages 43-52 (2015). Как понятно для специалиста и/или как раскрыто на протяжении всего данного документа, в целом уровни продуцирования цитокинов, которые измеряются в качестве индикаторов или прогностических факторов риска возникновения CRS, являются более низкими для тестируемых молекул, чем определенные для известных (т.е. «положительного контроля») индукторов синдрома высвобождения цитокинов или цитокинового шторма, что указывает на сниженный риск индуцирования CRS под действием тестируемых индукторов.

[00135] Термин «рекомбинантный» в целом относится к любому белку, полипептиду или клетке, экспрессирующей представляющий интерес ген, который получен с помощью способов генной инженерии. Термин «рекомбинантный», используемый по отношению к белку или полипептиду, означает полипептид, полученный за счет экспрессии рекомбинантного полинуклеотида. Белки, применяемые в иммуногенных композициях по настоящему изобретению, можно выделять из природного источника или получать с помощью способов генной инженерии.

[00136] В некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению могут представлять собой рекомбинантные человеческие антитела. Подразумевается, что используемый в данном документе термин «рекомбинантное человеческое антитело» включает все антитела, включая человеческие или гуманизированные антитела, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют с помощью рекомбинантных средств, такие как антитела, экспрессируемые с применением рекомбинантного вектора экспрессии, трансфицированного в клетку-хозяина (дополнительно описано ниже), антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки человеческих антител (дополнительно описано ниже), антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным по генам иммуноглобулина человека (см., например, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295), или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные посредством любых других средств, при которых предусмотрен сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулина человека с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные и константные участки, происходящие из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Однако в определенных вариантах осуществления такие рекомбинантные человеческие антитела подвергают in vitro мутагенезу (или, если животное является трансгенным по последовательностям Ig человека, используют in vivo соматический мутагенез) и, таким образом, аминокислотные последовательности V_H- и V_L-участков рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и происходят и являются родственными последовательностям V_H и V_L зародышевой линии человека, могут не встречаться в природе в пределах in vivo репертуара антител зародышевой линии человека.

[00137] Термин «специфически связывает» или «специфически связывается с» и т.п. означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образуют комплекс с антигеном, который является относительно стабильным при физиологических условиях. Специфическое связывание может характеризоваться равновесной константой диссоциации, составляющей по меньшей мере приблизительно 1 x 10-⁶ M или менее (например, более низкое значение KD обозначает более крепкое связывание). Способы определения того, связываются ли специфически две молекулы, хорошо известны из уровня техники и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Описанные в данном документе антитела, которые специфически связываются с CD3, были идентифицированы посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, BIACORE™, с применением измерений интерферометрии биослоев, с применением, например, инструмента FORTEBIO Octet HTX (Pall Life Sciences). Более того, мультиспецифические антитела, которые связываются с CD3 и одним или более дополнительными антигенами, или биспецифическое антитело, которое связывается с двумя разными участками CD3 и/или разными участками дополнительного антигена, тем не менее, рассматриваются как антитела, которые «специфически связываются», как используется в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антитела, раскрытые в данном документе, проявляют равновесные константы диссоциации (и, следовательно, специфичности), составляющие приблизительно 1 x 10-⁶ M; приблизительно 1 x 10-⁷ M; приблизительно 1 x 10-⁸ M; приблизительно 1 x 10-⁹ M; приблизительно 1 x 10-¹⁰ M; от приблизительно 1 x 10-⁶ M до приблизительно 1 x 10-⁷ M; от приблизительно 1 x 10-⁷ M до приблизительно 1 x 10-⁸ M; от приблизительно 1 x 10-⁸ M до приблизительно 1 x 10-⁹ M; или от приблизительно 1 x 10-⁹ M до приблизительно 1 x 10-¹⁰ M.

[00138] Термин «высокоаффинное» антитело относится к mAb, которые характеризуются аффинностью связывания с CD3, выраженной как KD, составляющая по меньшей мере 10-⁹ M; более предпочтительно 10-¹⁰ M, более предпочтительно 10-¹¹ M, более предпочтительно 10-¹² M, как измерено посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, BIACOR, измерений с применением интерферометрии биослоев, с применением, например, инструмента FORTEBIO Octet HTX (Pall Life Sciences,) или определения аффинности в растворе методом ELISA.

[00139] Под термином «медленная скорость диссоциации» подразумевается антитело, которое диссоциирует от CD3 с константой скорости (Koff или KD), составляющей 1 x 10-³ сек"1 или менее, предпочтительно 1 x 10-⁴ сек"1 или менее, как определено посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, инструмента BIACORE™ или FORTEBIO Octet HTX (Pall Life Sciences).

[00140] Возвращаясь к фрагментам антитела, такие фрагменты антитела могут предусматривать Fab-фрагмент, F(ab')2, Fv-фрагмент, фрагмент dAb, фрагмент, содержащий CDR, или выделенный CDR. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены, например, из молекул полных антител с применением любых подходящих стандартных методик, таких как протеолитическое расщепление или рекомбинантные методики генной инженерии, предусматривающие осуществление манипуляции и экспрессию ДНК, кодирующей вариабельные и (необязательно) константные домены. Такая ДНК известна и/или легко доступна, например, из коммерческих источников, библиотек ДНК (включая, например, фаговых библиотек антител), или она может быть синтезирована. ДНК можно секвенировать и проводить с ней химические манипуляции или манипуляции с применением методик молекулярной биологии, например, для размещения одного или более вариабельных и/или константных доменов в подходящей конфигурации или для введения кодонов, создания цистеиновых остатков, осуществления модификации, добавления или удаления аминокислот и т.д.

[00141] Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают: (i) Fab-фрагменты; (ii) F(ab')2-фрагменты; (iii) Fd-фрагменты; (iv) Fv-фрагменты; (v) молекулы одноцепочечного Fv (scFv); (vi) dAb-фрагменты и (vii) минимальные распознающие единицы, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельный участок антитела (например, выделенный участок, определяющий комплементарность (CDR), такой как пептид CDR3), или пептид с ограниченной конформационной свободой FR3-CDR3-FR4. Другие сконструированные молекулы, такие как доменспецифические антитела, однодоменные антитела, антитела с удаленным доменом, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, минититела, нанотела (например, моновалентные нанотела, бивалентные нанотела и т.д.), иммунофармацевтические средства на основе малого модульного белка (SMIP) и вариабельные домены IgNAR акулы, также охватываются выражением «антигенсвязывающий фрагмент», используемым в данном документе.

[00142] Антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно будет содержать по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может иметь любой размер или аминокислотный состав, и обычно будет содержать по меньшей мере один CDR, который является смежным с одной или более последовательностями каркасных участков или расположен в рамке считывания с ними. В антигенсвязывающих фрагментах, имеющих V_H-домен, ассоциированный с V_L-доменом, V_H- и V_L-домены могут быть расположены в любом подходящем порядке относительно друг друга. Например, вариабельный участок может быть димерным и содержать димеры V_H - V_H, V_H - V_L или V_L - V_L. В качестве альтернативы антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный V_H- или V_L-домен.

[00143] В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный с по меньшей мере одним константным доменом. Неограничивающие иллюстративные конфигурации вариабельных и константных доменов, которые могут встречаться в пределах антигенсвязывающего фрагмента антитела по настоящему изобретению, включают: (i) V_H - C_H1; (ii) V_H - C_H 2; (iii) V_H - C_H 3; (iv) V_H - C_h1 - C_h2; (V) V_H - C_h1 - C_h2 - C_h3; (vi) V_H - C_H2 - C_H3; (vii) V_H - C_L; (viii) V_L - C_H1; (ix) V_L - C_H2; (x) V_L - C_H3; (xi) V_L -C_H1 - C_H2; (xii) V_L - C_H1 - C_H2 - C_H3; (xiii) V_L - C_H2 - C_H3 и (xiv) V_L - C_L. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любую из иллюстративных конфигураций, перечисленных выше, вариабельные и константные домены могут быть либо непосредственно связаны друг с другом, либо могут быть связаны с помощью полного или частичного шарнирного или линкерного участка. Шарнирный участок может состоять из по меньшей мере 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или больше) аминокислот, что обеспечивает гибкую или полугибкую связь между смежными вариабельными и/или константными доменами в одной полипептидной молекуле. Более того, антигенсвязывающий фрагмент антитела по настоящему изобретению может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) из любой из конфигураций вариабельных и константных доменов, перечисленных выше, в виде нековалентной ассоциации друг с другом и/или с одним или более мономерными V_H- или V_L-доменами (например, соединенные дисульфидной связью(-ями)).

[00144] Как и в случае с молекулами полных антител, антигенсвязывающие фрагменты могут быть моноспецифическими или мультиспецифическими (например, биспецифическими). Мультиспецифический антигенсвязывающий фрагмент антитела, как правило, будет содержать по меньшей мере два отличающихся вариабельных домена, где каждый вариабельный домен способен специфически связываться с отдельным антигеном или с отличающимся эпитопом на одном и том же антигене. Любой мультиспецифический формат антитела, включая иллюстративные антитела биспецифического формата, раскрытые в данном документе, можно адаптировать для применения в контексте антигенсвязывающего фрагмента антитела по настоящему изобретению с применением традиционных методик, доступных из уровня техники. Неограничивающие примеры мультиспецифических и биспецифических форматов, которые пригодны для включения связывающих доменов антитела к CD3, включают, например, Fab-Fc-scFv («открывалка для бутылок») (XENCOR), Mab-scFv (XENCOR), Mab-Fv (XENCOR), Dual scFv (XENCOR), центральный Fv (XENCOR), центральный scFv(XENCOR), одноплечевой центральный scFv (XENCOR), Fab-Fab (XENCOR), Fab-Fv (XENCOR), mAb-Fv (XENCOR), mAb-Fab (XENCOR), DART (MacroGenics), BiTE (Amgen/Micromet), KiTE, IgG с универсальной легкой цепью (Genentech), TandAb (SFFIMED) Cross-Mab (Roche), SEED (EMD Serono), BEAT (Glenmark), TrioMab (Trion Pharma/Fresenius Biotech), DuetMab (MedImmune) и другие, которые раскрыты, например, в WO 95/09917; WO 2008/119566; WO 2008/119567; WO2011/121110; WO 2010/037835; WO 2007/042261; WO 2007/110205; WO 2011/121110; WO 2012/055961; WO 2012/16067; WO 2016/086189; WO 2016/182751; WO 2015/006749; WO 2014/049003; WO 2013/177101; WO 2015/128509; US 7,951,917; US 2009/0252729; US 2014/0348839; US 7183076; Mazor et al., Mabs, Vol. 7, pages 377-389 (2015); Muda et al., Protein Engineering, Designe, & Selection, Vol. 24, pages 447-454 (2011) и Del Bano et al., Antibodies, Vol. 5, pages 1-23 (2016).

[00145] Конкретные варианты осуществления антитела или фрагментов антитела по настоящему изобретению можно конъюгировать с терапевтическим фрагментом («иммуноконъюгат»), таким как антибиотик, второе антитело к CD3, вакцина или анатоксин, или любой другой применимый терапевтический фрагмент.

[00146] Подразумевается, что используемое в данном документе «выделенное антитело» относится к антителу, которое фактически не содержит других антител (Ab), характеризующихся отличающимися антигенными специфичностями (например, выделенное антитело, которое специфически связывает CD3 или его фрагмент, фактически не содержит Ab, которые специфически связывают антигены, отличные от CD3).

[00147] Подразумевается, что используемое в данном документе «блокирующее антитело» или «нейтрализующее антитело» (или «антитело, которое нейтрализует активность CD3») относится к антителу, связывание с CD3 которого, в зависимости от случая оно может быть таким, как раскрыто в данном документе, приводит к ингибированию по меньшей мере одной биологической активности CD3.

[00148] Используемый в данном документе термин «поверхностный плазмонный резонанс» относится к оптическому явлению, которое позволяет анализировать биомолекулярные взаимодействия в режиме реального времени путем выявления изменений концентраций белков в пределах биосенсорной матрицы, например, с применением системы BIACORE™ (Pharmacia Biosensor AB, Уппсала, Швеция, и Пискатауэй, Нью-Джерси).

[00149] Подразумевается, что используемый в данном документе термин «KD» относится к равновесной константе диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген.

[00150] Термин «эпитоп» относится к антигенной детерминанте, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим сайтом в вариабельном участке молекулы антитела, известном как паратоп. Один антиген может иметь более одного эпитопа. Таким образом, разные антитела могут связываться с разными областями антигена и могут оказывать разные биологические эффекты. Термин «эпитоп» также относится к сайту на антигене, на который реагируют B- и/или T-клетки. Он также относится к участку антигена, который связывается антителом. Эпитопы могут быть определены как структурные или функциональные. Функциональные эпитопы в целом представляют собой подгруппу структурных эпитопов и содержат остатки, которые напрямую вносят вклад в аффинность взаимодействия. Эпитопы также могут быть конформационными, то есть состоять из нелинейно расположенных аминокислот. В определенных вариантах осуществления эпитопы могут включать детерминанты, которые представляют собой химически активные поверхностные группы молекул, таких как аминокислоты, сахарные боковые цепи, фосфорильные группы или сульфонатные группы, и в определенных вариантах осуществления могут обладать специфическими характеристиками трехмерной структуры и/или специфическими характеристиками заряда.

[00151] Термин «фактическая идентичность» или «фактически идентичный», используемый в отношении нуклеиновой кислоты или ее фрагмента или аминокислотной последовательности или ее фрагмента, указывает на то, что при оптимальном выравнивании, с учетом соответствующих вставок или делеций, с другой последовательностью нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательностью в зависимости от конкретного случая (или ее комплементарной нитью) существует идентичность последовательностей, составляющая по меньшей мере приблизительно 100%, по меньшей мере приблизительно 99%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 94%, по меньшей мере приблизительно 93%, по меньшей мере приблизительно 92%, по меньшей мере приблизительно 91%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 89%, по меньшей мере приблизительно 88%, по меньшей мере приблизительно 87%, по меньшей мере приблизительно 86%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 84%, по меньшей мере приблизительно 83%, по меньшей мере приблизительно 82%, по меньшей мере приблизительно 80% и необязательно и т.д., как измерено с помощью любого хорошо известного алгоритма определения идентичности последовательностей, такого как FASTA, BLAST или GAP, рассмотренные ниже. Соответственно, последовательности, которые демонстрируют определенный процент «идентичности», вместе характеризуются таким процентом идентичности и/или на такой процент «идентичны» друг другу.

[00152] В определенных вариантах осуществления раскрытые домены, связывающие CD3, и/или индивидуальная последовательность тяжелой цепи (HC), последовательность легкой цепи (LC), последовательность CDRH3, последовательность CDRH2, последовательность CHRH1, последовательность CDRL3 последовательность CDRL2, последовательность CDRL1 и/или последовательности каркасных участков независимо характеризуются по меньшей мере приблизительно 100%, по меньшей мере приблизительно 99%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 94%, по меньшей мере приблизительно 93%, по меньшей мере приблизительно 92%, по меньшей мере приблизительно 91%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 89%, по меньшей мере приблизительно 88%, по меньшей мере приблизительно 87%, по меньшей мере приблизительно 86%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере, приблизительно 84%, по меньшей мере, приблизительно 83%, по меньшей мере, приблизительно 82%, по меньшей мере приблизительно 80% и/или всеми процентами идентичности между ними, с другими последовательностями, и/или вместе характеризуются такими процентами идентичности друг относительно друга (или с определенными подгруппами раскрытых в данном документе последовательностей антител).

[00153] В определенных вариантах осуществления раскрытые аминокислотные последовательности, например, характеризуются поменьшей мере 70% идентичностью; по меньшей мере 75% идентичностью; 80% идентичностью; по меньшей мере 85% идентичностью; по меньшей мере 90% идентичностью; по меньшей мере 95% идентичностью; по меньшей мере 96% идентичностью; по меньшей мере 97% идентичностью; по меньшей мере 98% идентичностью; по меньшей мере 99% и/или всеми процентами идентичности между ними, с другими последовательностями и/или вместе характеризуются такими процентами идентичности друг относительно друга (или с определенными подгруппами раскрытых в данном документе последовательностей антител).

[00154] Предпочтительно положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами. «Консервативная аминокислотная замена» представляет собой замену, при которой аминокислотный остаток заменен на другой аминокислотный остаток с боковой цепью (R-группой) с аналогичными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В целом консервативная аминокислотная замена фактически не будет изменять функциональные свойства белка. В тех случаях, когда две или более аминокислотных последовательностей отличаются друг от друга консервативными заменами, процент или степень сходства можно скорректировать в сторону увеличения, с учетом консервативной природы замены. Средства для осуществления данной корректировки хорошо известны специалистам в данной области техники. (см., например, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307- 331). Примеры групп аминокислот, которые имеют боковые цепи с аналогичными химическими свойствами, включают 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатические гидроксильные боковые цепи: серин и треонин; 3) амид-содержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кислые боковые цепи: аспартат и глутамат; и 7) серосодержащие боковые цепи: цистеин и метионин. Предпочтительные группы замен консервативных аминокислотных замен представляют собой: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глутамин. В качестве альтернативы консервативная замена представляет собой любое изменение, характеризующееся положительным значением в матрице логарифмического правдоподобия PAM250, раскрытой в Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443 45. «Умеренно консервативное» замещение представляет собой любое изменение, характеризующееся неотрицательным значением в матрице логарифмического правдоподобия PAM250.

[00155] Сходство последовательностей полипептидов, как правило, измеряют с применением программного обеспечения для анализа последовательностей. Программное обеспечение для анализа белков осуществляет выравнивание сходных последовательностей с применением показателей сходства, присвоенным различным заменам, делециям и других модификациям, включая консервативные аминокислотные замены. Например, программное обеспечение GCG содержит такие программы, как GAP и BESTFIT, которые можно применять с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательности или идентичности последовательности между близкородственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды от разных видов организмов или между белком дикого типа и его мутеином. См., например, GCG версии 6.1. Полипептидные последовательности также можно сравнивать с применением FASTA с параметрами по умолчанию или рекомендованными параметрами; программа в GCG версии 6.1. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) обеспечивает выравнивания и определение процента идентичности последовательностей в участках с наилучшим перекрыванием между запрашиваемой последовательностью и искомой последовательностью (Pearson (2000) выше). Другой предпочтительный алгоритм, при котором последовательность по настоящему изобретению сравнивается с базой данных, содержащей большое количество последовательностей из разных организмов, представляет собой компьютерную программу BLAST, в частности BLASTP или TBLASTN, с применением параметров по умолчанию (см., например, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403 410 и (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389 402).

[00156] В определенных вариантах осуществления антитело или фрагмент антитела для применения в способе по настоящему изобретению может быть моноспецифическим, биспецифическим или мультиспецифическим. Мультиспецифические антитела могут быть специфическими в отношении разных эпитопов одного целевого полипептида, или могут содержать антигенсвязывающие домены, специфические в отношении эпитопов более чем одного целевого полипептида. Иллюстративное антитело биспецифического формата, которое можно применять в контексте настоящего изобретения, предусматривает применение первого иммуноглобулинового (Ig) CH3-домена и второго Ig-CH3-домена, где первый и второй Ig-CH3-домены отличаются друг от друга по меньшей мере одной аминокислотой, и где отличие по меньшей мере одной аминокислоты снижает связывание биспецифического антитела с белком A по сравнению с биспецифическим антителом, у которого отсутствует отличие аминокислот. В одном варианте осуществления первый Ig CH3-домен связывает белок A, а второй Ig CH3-домен содержит мутацию, которая снижает или устраняет связывание белка A, такую как модификация H95R (согласно нумерации экзонов IMGT; H435R согласно нумерации EU). Второй CH3 может дополнительно содержать модификацию Y96F (согласно IMGT; Y436F согласно EU). Дополнительные модификации, которые могут встречаться в пределах второго CH3, включают: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M и V82I (согласно IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M и V422I согласно EU) в случае IgG1 mAb; N44S, K52N и V82I (IMGT; N384S, K392N и V422I согласно EU) в случае IgG2 mAb; и Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q и V82I (согласно IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q и V422I согласно EU) в случае IgG4 mAb. Варианты антител биспецифического формата, описанные выше, предусмотрены в пределах объема настоящего изобретения.

[00157] Иллюстративные связывающие домены антител к CD3 и содержащие их антитела

[00158] Как упомянуто выше, в определенных вариантах осуществления настоящего изобретения представлена большая серия доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител, и способы их получения и применения. Неожиданным образом, представители этой большой серии доменов, связывающих CD3, в совокупности проявляют требуемые свойства, включая, например, широкий диапазон значений аффинности в отношении CD3-эпсилон; перекрестную реактивность как с CD3 человека («Hu CD3»), так и с CD3 яванского макака («Cy CD3»); а также требуемые профили разрабатываемости и/или профили риска возникновения высвобождения цитокинов (CRS). В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют профили разрабатываемости и/или профили риска возникновения CRS, которые превосходят профили разрабатываемости и/или профили риска возникновения CRS других антител к CD3. В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют профили разрабатываемости и/или профили риска возникновения CRS, которые превосходят профили разрабатываемости и/или профили риска возникновения CRS, например, I2C; SP34; 38E4; CAB21609_A01, CAB21609_B01, CAB21609_C01 и/или CAB21609_D01, раскрытых в данном документе, а также в Yang et al., J Immunol, Vol 137, pages 1097-1100 (August 4, 1986); US 2014/008295 и WO 2015/095392.

[00159] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, которые связываются с CD3 (например, CD3ε и/или CD3γ).

[00160] В определенных вариантах осуществления представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению, которые демонстрируют улучшенный профиль разрабатываемости по сравнению с другими доменами, связывающими CD3 (или содержащими их антителами). В определенных вариантах осуществления представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению, которые демонстрируют улучшенный профиль разрабатываемости по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, которые представлены в таблице 2.

[00161] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют критерий разрабатываемости, составляющий от приблизительно 0 MFI до приблизительно 500 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 200 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 150 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 100 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 50 MFI; от приблизительно 200 MFI до 500 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 200 MFI или от приблизительно 100 MFI до приблизительно 150 MFI.

[00162] В других вариантах осуществления фрагменты, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют нормализованный критерий разрабатываемости, составляющий от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,6; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,57; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,55; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,53; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,51; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,49; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,47; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,45; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,43; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,41; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,39; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,37; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,35; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,33; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,31; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,29; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,27; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,25; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,23; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,21; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,19; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,17; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,15; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,13; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,11; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,09; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,07 или от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,05.

[00163] В определенных вариантах осуществления профиль разрабатываемости и/или критерий разрабатываемости для фрагментов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению получают путем проведения анализа PSR; анализа SCP; AS-CINS; анализа BVP; ELISA; анализа DSF; анализа Tm; анализа HIC; анализа CIC или их комбинаций.

[00164] В других вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению вызывают сильную активацию Т-клеток или T-клеточный лизис, демонстрируя при этом сниженную предрасположенность к вызову продуцирования цитокинов до уровней, способных индуцировать синдром высвобождения цитокинов. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин, по которому измеряют уровни продуцирования цитокинов с целью оценки предрасположенности к вызову продуцирования цитокинов на уровнях, способных индуцировать синдром высвобождения цитокинов, выбран из группы, состоящей из интерлейкина 6 (IL-6); интерлейкина 12 (IL-12); фактора некроза опухолей альфа (TNFa); (TGFb); интерлейкина-2 (IL-2) и интерферона-гамма (IFNg).

[00165] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению вызывают активацию T-клеток или T-клеточный лизис, демонстрируя при этом сниженную предрасположенность к вызову продуцирования цитокинов до уровней, способных к индуцированию высвобождения цитокинов, по сравнению с уровнями, которые наблюдают при использовании одного или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин, по которому измеряют уровни продуцирования цитокинов с целью оценки предрасположенности к вызову продуцирования цитокинов на уровнях, способных индуцировать синдром высвобождения цитокинов, выбран из группы, состоящей из интерлейкина 6 (IL-6); интерлейкина 12 (IL-12); фактора некроза опухолей-альфа (TNFa); (TGFb); интерлейкина-2 (IL-2) и интерферона-гамма (IFNg).

[00166] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют профиль риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов, который является показателем сниженного риска вызова синдрома высвобождения цитокинов (CRS). В других вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют профиль риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов, который является показателем сниженного риска вызывания синдрома высвобождения цитокинов (CRS) по сравнению с профилем риска возникновения синдрома высвобождения цитокинов, оцениваемым для одного или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

[00167] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH3 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH3 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00168] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH2 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH2 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00169] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH1 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH1 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00170] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL3 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL3 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00171] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL2 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL2 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00172] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL1 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL1 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00173] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащеевариабельный участок тяжелой цепи (HC), который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен вариабельному участку HC, выбранному из группы, состоящей из вариабельных участков HC из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что вариабельный участок HC не характеризуется 100% идентичностью с вариабельным участком HC из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00174] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащеевариабельный участок легкой цепи (LC), который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен вариабельному участку LC, выбранному из группы, состоящей из вариабельных участков LC из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что вариабельный участок LC не характеризуется 100% идентичностью с вариабельным участком LC из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00175] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что ни CDRH3, CDRH2, ни CHRH1 не характеризуются 100% идентичностью с CDRH3, CDRH2 или CDRH1 соответственно из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00176] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что ни CDRL3, CDRL2, ни CHRL1 не характеризуются 100% идентичностью с CHRL3, CDRL2 или CDRL1 соответственно из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00177] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что ни CDRH3, CDRH2, CDRH1, CDRL3, CDHL2, ни CHRL1 не характеризуется 100% идентичностью с CHRH3, CDRH2, CDRH1, CDRL3, CDHL2 или CDRL1 соответственно из любых из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

[00178] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-15512; ADI-15516 и ADI-16513, представленных в таблице 2.

[00179] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-18562; ADI-18564; ADI-18565; ADI-18566; ADI-18567; ADI-18568; ADI-18570; ADI-18571; ADI-18572; ADI-18573; ADI-18563; ADI-18569; ADI-18574; ADI-18575; ADI-18576; ADI-18578; ADI-18579; ADI-18580; ADI-18581; ADI-18582; ADI-18584; ADI-18585; ADI-18577; ADI-18583; ADI-18588; ADI-18589; ADI-18590; ADI-18591; ADI-18593; ADI-18594; ADI-18595; ADI-18596; ADI-18597; ADI-18592; ADI-18587; ADI-18586; и ADI-16606; представленных в таблице 2.

[00180] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-18576; ADI-20820; ADI-20578; ADI-20571; ADI-21097; ADI-20577; ADI-20576; ADI-20568; ADI-20582; ADI-20575; ADI-20567; ADI-20574; ADI-20573; ADI-20579; ADI-18565; ADI-20818; ADI-20587; ADI-20588; ADI-20589; ADI-20590; ADI-20594; ADI-20596; ADI-20599; ADI-20605; ADI-20607; ADI-20608 и ADI-20609; представленных в таблице 2.

[00181] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-16606; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-28708; ADI-28709; ADI-28710; ADI-21943; ADI-28711; ADI-28712; ADI-28713; ADI-28714; ADI-28715; ADI-21944; ADI-28716; ADI-21945; ADI-21946; ADI-28717; ADI-21947; ADI-28718; ADI-28719; ADI-28720; ADI-28721; ADI-28722; ADI-28723; ADI-28724; ADI-28725; ADI-28726; ADI-28727; ADI-28728; ADI-28729; ADI-28730; ADI-28731; ADI-28732; ADI-28733; ADI-28734; ADI-28735; ADI-28736; ADI-28737; ADI-28738; ADI-28739; ADI-28740; ADI-28741; ADI-28742; ADI-28743; ADI-21948; ADI-21949; ADI-28744; ADI-21950; ADI-28745; ADI-28746; ADI-28747; ADI-28748; ADI-21951; ADI-21952; ADI-28749; ADI-28750; ADI-28751; ADI-21953; ADI-28752; ADI-21954; ADI-28753; ADI-28754; ADI-28755; ADI-28756; ADI-28757; ADI-28758; ADI-28759; ADI-28760; ADI-28761; ADI-28762; ADI-28763; ADI-28764; ADI-28765; ADI-28766; ADI-28767; ADI-28768; ADI-21955; ADI-28769; ADI-28770; ADI-21956; ADI-28771; ADI-28772; ADI-28773; ADI-28774 и ADI-28775; представленных в таблице 2.

[00182] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-21959; ADI-21963; ADI-21965; ADI-21967; ADI-21970; ADI-21971; ADI-21972; ADI-21973; ADI-21974; ADI-21975; ADI-21976; ADI-21977; ADI-21978; ADI-21979; ADI-21943; ADI-21944; ADI-21945; ADI-21946; ADI-21947; ADI-21948; ADI-21949; ADI-21950; ADI-21951; ADI-21952; ADI-21953; ADI-21954; ADI-21955 и ADI-21956; представленных в таблице 2.

[00183] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-21952; ADI-22523; ADI-24403; ADI-24404; ADI-24405; ADI-24407; ADI-24408; ADI-24409; ADI-24410; ADI-24411; ADI-24412; ADI-24413; ADI-24414; ADI-24415; ADI-24416; ADI-24417; ADI-24418; ADI-24434; ADI-24435; ADI-24436; ADI-24437; ADI-24438; ADI-24439; ADI-24440; ADI-24441; ADI-24442; ADI-24443; ADI-24444; ADI-24445; ADI-24446; ADI-24449; ADI-24388; ADI-24389; ADI-24390; ADI-24391; ADI-24392; ADI-24393; ADI-24394; ADI-24395; ADI-24396; ADI-24397; ADI-24398; ADI-24399; ADI-24400; ADI-24401; ADI-24402; ADI-24419; ADI-24420; ADI-24421; ADI-24422; ADI-24423; ADI-24424; ADI-24425; ADI-24426; ADI-24427; ADI-24428; ADI-24429; ADI-24430; ADI-24431; ADI-24432; ADI-24433; ADI-24447 и ADI-24448; представленных в таблице 2.

[00184] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-23652; ADI-23653; ADI-23654; ADI-23655; ADI-23656; ADI-23657; ADI-23658; ADI-23651; ADI-23644; ADI-23645; ADI-23646; ADI-23647; ADI-23648; ADI-23649; ADI-23650; ADI-23667; ADI-23668; ADI-23669; ADI-23670; ADI-23671; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23659; ADI-23660; ADI-23661; ADI-23663; ADI-23664; ADI-23639; ADI-23641; ADI-23642; ADI-23640; ADI-23643; ADI-21952; ADI-23633; ADI-23634; ADI-23635; ADI-23636; ADI-23637; ADI-23638; ADI-23632 и ADI-23629; представленных в таблице 2.

[00185] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26909; ADI-26910; ADI-26912; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26916; ADI-26917; ADI-26918; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26924; ADI-26925; ADI-26927; ADI-26928; ADI-26929; ADI-26930; ADI-26932; ADI-26933; ADI-26938; ADI-26939; ADI-26940; ADI-26941; ADI-26942; ADI-26943; ADI-26944; ADI-26945; ADI-26950; ADI-26954; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23664; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993; ADI-26994; и ADI-26995; представленных в таблице 2.

[00186] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26910; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26943; ADI-26954; ADI-21952; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26962; ADI-26978; ADI-26983 и ADI-26994; представленных в таблице 2.

[00187] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из ADI-15512; ADI-16513; ADI-15516; ADI-18565; ADI-18589; ADI-18585; ADI-18590; ADI-18576; ADI-20568; ADI-20580; ADI-21978; ADI-22523; ADI-25133 и ADI-26906.

[00188] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из ADI-16606; ADI-29601; ADI-29602; ADI-29603; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-21952; ADI-23633; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26961; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26967; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26970; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993; и ADI-26994.

[00189] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из ADI-32238, ADI-32241, ADI-32244, ADI-32247, ADI-32250, ADI-32253, ADI-32256, ADI-32259, ADI-32239, ADI-32242, ADI-32245, ADI-32248, ADI-32251, ADI-32254, ADI-32257, ADI-32260, ADI-32240, ADI-32243, ADI-32246, ADI-32249, ADI-32252, ADI-32255, ADI-32258 и ADI-32261.

[00190] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело, содержащее домен, связывающий CD3, выбранный из группы, состоящей из ADI-29295, ADI-32249, ADI-29298, ADI-29300 и ADI-26915.

[00191] В определенных вариантах осуществления или по отдельности, или в комбинации с другими вариантами осуществления по настоящему изобретению домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют сниженную предрасположенность к деградации по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

[00192] В определенных вариантах осуществления или по отдельности, или в комбинации с другими вариантами осуществления по настоящему изобретению домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению демонстрируют сниженный профиль риска возникновения CRS по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

[00193] В определенных вариантах осуществления и/или в комбинации с любым из вариантов осуществления, раскрытых на протяжении всего данного документа, представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, которые являются гуманизированными. В определенных вариантах осуществления такие домены, связывающие CD3, содержат CDR из таких других вариантов осуществления и дополнительно содержат акцепторный каркасный участок человека, например, каркасный участок иммуноглобулина человек или консенсусный каркасный участок человека.

[00194] В некоторых вариантах осуществления и/или в комбинации с любым из вариантов осуществления, раскрытых на протяжении всего данного документа, представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, содержащие VH, как и в любом из вариантов осуществления, представленных на протяжении всего данного документа, и VL, как и в любом из вариантов осуществления, представленных на протяжении всего данного документа, где одна или обе последовательности вариабельных доменов включают посттрансляционные модификации.

[00195] В дополнительном аспекте настоящего изобретения представлены домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела, которые связываются с теми же эпитопом, что и домены, связывающие CD3, представленные в других вариантах осуществления, раскрытых на протяжении всего данного документа.

[00196] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и/или содержащие их антитела характеризуются константой диссоциации (Kd) с CD3, составляющей ≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ, ≤0,1 нМ, ≤0,01 нМ или ≤0,001 нМ (например, 10^-8 M или меньше, например, от 10^-8 M до 10^-13 M, например, от 10^-9 M до 10^-13 M).

[00197] В определенных вариантах осуществления Kd измеряют с помощью интерферометрии биослоев (BLI), поверхностного плазмонного резонанса (SPR), анализов кинетического исключения на основе равновесия в растворе, анализа прямой ассоциации KinExA, анализов с применением инструментов и реагентов ForteBio, как, например, Octet RED 384, и инструментов на основе HTX BLI, твердофазных иммуноферментных анализов (ELISA) и радиоммунологических анализов (RIA). В определенных вариантах осуществления измерение Kd проводят с использованием Fab-версии домена, связывающего CD3, или содержащего его антитела по настоящему изобретению. Например, аффинность связывания Fab в растворе с антигеном измеряют посредством уравновешивания Fab с минимальной концентрацией антигена, меченного (125I), в присутствии серии титрации немеченного антигена с последующим захватом связанного антигена на планшете, покрытым антителом к Fab (см., например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)). Для создания условий для анализа многолуночные планшеты MICROTITER® (Thermo Scientific) покрывают в течение ночи с помощью 5 мкг/мл захватывающего антитела к Fab (Cappel Labs) в 50 мМ карбонате натрия (pH 9,6), и затем блокируют с помощью 2% (вес/объем) бычьего сывороточного альбумина в PBS течение двух-пяти часов при комнатной температуре (примерно 23°C). В неадсорбирующих планшетах (Nunc №269620) 100 пМ или 26 пМ [125I]-антигена смешивают с серийными разведениями представляющего интерес Fab (например, согласно проведению оценки антитела к VEGF, Fab-12, в Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). Затем представляющий интерес Fab инкубируют в течение ночи, однако, инкубация может продолжаться в течение более длительного периода (например, приблизительно 65 часов) для гарантирования достижения равновесия. Затем смеси переносят в планшет для захвата с инкубацией при комнатной температуре (например, в течение одного часа). Затем раствор удаляют и планшет промывают восемь раз с помощью 0,1% полисорбата 20 (TWEEN-20®) в PBS. После высушивания планшетов добавляют по 150 мкл/лунка сцинтилляционного раствора (MICROSCINT-20™; Packard) и считывание планшетов осуществляют на счетчике гамма-частиц TOPCOUNT™ (Packard) в течение десяти минут. Концентрации каждого Fab, которые приводят 20% или менее от максимального связывания, отбирают для применения в анализах конкурентного связывания.

[00198] В других вариантах осуществления Kd измеряют с применением анализа поверхностного плазмонного резонанса BIACORE®. Например, анализ с применением BIACORE®-2000 или BIACORE®-3000 (BIACORE, Inc., Пискатауэй, Нью-Джерси) осуществляют при 25°C с помощью чипов CM5 с иммобилизованным антигеном из расчета 10 единиц ответа (RU). В одном варианте осуществления биосенсорные чипы на основе карбоксиметилированого декстрана (CM5, BIACORE, Inc.) активируют с помощью N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида гидрохлорида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разбавляют с помощью 10 мМ ацетата натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед введением при расходе 5 мкл/минута для достижения приблизительно 10 единиц ответа (RU) связанного белка. После введения антигена 1 M этаноламин вводят для блокирования непрореагировавших групп. Для измерений кинетических параметров двухкратные серийные разведения Fab (0,78 нМ - 500 нМ) вводят в PBS с 0,05% поверхностно-активного вещества полисорбата-20 (TWEEN-20™) (PBST) при 25°C и расходе, составляющем примерно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (k_on) и скорости диссоциации (Kd) рассчитывают с применением простой модели связывания Ленгмюра один к одному (программное обеспечение BIACORE® Evaluation версии 3.2) путем одновременной аппроксимации сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (Kd) рассчитывают в виде соотношения kon/koff. См., например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 106 M-1с-1 согласно анализу поверхностного плазмонного резонанса, приведенного выше, то скорость ассоциации можно определить с применением методики гашения флуоресценции, которая измеряет увеличение или уменьшение интенсивности испускания флуоресценции (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, полоса пропускания 16 нм) при 25 C у 20 нМ антитела к антигену (в форме Fab) в PBS, pH 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, как измерено с помощью спектрофотометра, такого как, спектрофотометр с функцией остановки потока (Aviv Instruments) или спектрофотометра SLM-AMINC серии 8000 (ThermoSpectronic) в кювете с возможностью перемешивания.

[00199] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают фрагмент антитела. Фрагменты антитела включают без ограничения Fab-, Fab'-, Fab'-SH-, F(ab')2Fv- и scFv-фрагменты и другие фрагменты, описанные на всем протяжении в данного документа. Обзор определенных фрагментов антитела см., например, в Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Обзор scFv-фрагментов см., например, в в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); см. также WO 93/16185 и патенты США №№5571894 и 5587458. Описание Fab- и F(ab')2-фрагментов, содержащих остатки эпитопа связывания рецептора реутилизации, и характеризующихся увеличенным периодом полужизни in vivo, см. в патенте США №5869046.

[00200] Диатела представляют собой фрагменты антитела с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть бивалентными или биспецифическими. См., например, EP 404097; WO 1993/01161; Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003) и Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993). Триатела и тетратела также описаны в Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003).

[00201] Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антитела, содержащие весь вариабельный домен тяжелой цепи антитела или его часть или весь вариабельный домен легкой цепи антитела или его часть. В определенных вариантах осуществления однодоменное антитело представляет собой однодоменное человеческое антитело (Domantis, Inc., Уолтем, Массачусетс; см., например, патент США №6248516 B1).

[00202] Фрагменты антитела можно получать с помощью различных методик, в том числе без ограничения протеолитическое расщепление интактного антитела, а также продуцирование в рекомбинантных клетках-хозяевах (например, E. coli или фаге), описанных в данном документе.

[00203] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают химерное антитело. Определенные химерные антитела описаны, например, в патенте США №4816567 и Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). В одном примере химерное антитело содержит вариабельный участок, отличный от человеческого (например, вариабельный участок, полученный от мыши, крысы, хомяка, кролика или примата, отличного от человека, такого как обезьяна), и константный участок человека. В дополнительном примере химерное антитело представляет собой антитело «переключенного класса», при этом его класс или подкласс были изменены по сравнению с исходным антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.

[00204] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают химерное антитело, которое представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, антитело, отличное от человеческого, гуманизируют для снижения иммуногенности у человека, сохраняя при этом специфичность и аффинность исходного антитела, отличного от человеческого. Обычно гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых CDR (или их части) получены из антитела, отличного от человеческого, а FR (или их части) получены из последовательностей человеческих антител. Гуманизированное антитело также необязательно будет содержать по меньшей мере часть константного участка человека. В некоторых вариантах осуществления некоторые остатки FR в гуманизированном антителе заменены на соответствующие остатки антитела, отличного от человеческого (например, антитела, из которого получены остатки CDR), например, для сохранения или улучшения специфичности, аффинности антитела, отсутствия иммуногенности, стабильности, профиля разрабатываемости, снижения риска возникновения CRS и т.п.

[00205] Обзор гуманизированных антител и способов их получения изложен, например, в Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008), и они дополнительно описаны, например, в Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); патентах США №№5821337, 7527791, 6982321 и №7087409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (описание прививания определяющего специфичность участка (SDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (описание «изменения поверхности»); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (описание «шаффлинга FR»), и Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005), и Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (описание подхода «направленного отбора» для шаффлинга FR).

[00206] Каркасные участки человека, которые можно применять для гуманизации, включают без ограничения: каркасные участки, выбранные с применением способа «максимального соответствия» (см., например, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); каркасные участки, полученные из консенсусной последовательности человеческих антител конкретной подгруппы вариабельных участков легкой или тяжелой цепей (см., например, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992) и Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); человеческие зрелые (подвергнутые соматическому мутированию) каркасные участки или каркасные участки зародышевой линии человека (см., например, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); и каркасные участки, полученные в ходе скрининга библиотек FR (см., например, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) и Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).

[00207] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают человеческое антитело. Человеческие антитела можно получать с применением различных методик, известных из уровня техники. В целом человеческие антител описаны в van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) и Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).

[00208] Человеческие антитела можно получать путем введения иммуногена трансгенному животному, которое было модифицировано для продуцирования интактных человеческих антител или интактных антител с вариабельными участками человека в ответ на провокацию антигеном. Такие животные, как правило, содержат все или часть локусов иммуноглобулина человека, которые замещают эндогенные локусы иммуноглобулинов или которые присутствуют внехромосомно или интегрированы случайным образом в хромосомы животного. У таких трансгенных мышей эндогенные локусы иммуноглобулинов обычно были инактивированы. Обзор способов получения человеческих антител из трансгенных животных см. в Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005). См. также, например, патенты США №№6075181 и 6150584, в которых описана технология XENOMOUSE; патент США №5770429, в котором описана технология HUMAB®; патент США №7041870, в котором описана технология K-M MOUSE®, и публикацию заявки на патент США №US 2007/0061900, в которой описана технология VELOCIMOUSE®). Вариабельные участки человека из интактных антител, продуцируемых такими животными, можно дополнительно модифицировать, например, путем комбинирования с отличающимся константным участком человека.

[00209] Человеческие антитела также можно получать с помощью способов на основе гибридом. Были описаны линии клеток миеломы человека и гетеромиеломы мышь-человек, предназначенные для продуцирования человеческих моноклональных антител (см., например, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987) и Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991).). Человеческие антитела, полученные посредством технологии B-клеточной гибридомы человека, также описаны в Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. LISA. 103; 3557-3562 (2006). Дополнительные способы включают способы, описанные, например, в патенте США №7189826 (в котором описано продуцирование моноклональных человеческих антител IgM в линиях клеток гибридомы) и Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (в котором описаны человек-человеческие гибридомы). Технология с использованием гибридомы человека (технология Trioma) также описана в Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) и Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005).

[00210] Человеческие антитела также можно создавать путем выделения последовательностей вариабельного домена клона Fv, выбранных из библиотек фагового дисплея последовательностей, полученных от человека. Затем такие последовательности вариабельных доменов можно комбинировать с требуемым константным доменом человека. Методики отбора человеческих антител из библиотек антител описаны на всем протяжении данного документа.

[00211] Антитела по настоящему изобретению можно выделять с помощью скрининга комбинаторных библиотек в отношении антител с требуемой активностью или видами активности. Например, из уровня техники известны различные способы создания библиотек фагового дисплея и скрининга таких библиотек в отношении антител, обладающих требуемыми характеристиками связывания. Обзор такие способов приведен, например, в Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N.J., 2001), и они дополнительно описаны, например, в McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, в Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); и Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004).

[00212] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть выбраны из библиотек антител на дрожжевых клетках, таких как раскрытые, например, в WO 2009/0363379; WO 2010/105256 и WO 2012/009568. В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть оптимизированы (также известны как «подвергнутые созреванию аффинности»), как раскрыто на всем протяжении данного документа, а также в WO 2009/0363379; WO 2010/105256 и WO 2012/009568, и с помощью других методик, доступных из уровня техники.

[00213] В определенных способах фагового дисплея репертуары генов VH и VL отдельно клонируют посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) и рекомбинируют случайным образом в фаговые библиотеки, которые затем можно подвергать скринингу в отношении фага, связывающего антиген, как описано в Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Как правило, фаг представляет на своей поверхности фрагменты антитела либо в виде одноцепочечных Fv-фрагментов (scFv), либо в виде Fab-фрагментов. Библиотеки из иммунизированных источников обеспечивают антитела, характеризующиеся высокой аффинностью к иммуногену, без необходимости в конструировании гибридом. В качестве альтернативы можно клонировать не подвергнутый воздействию репертуар (например, человека) для обеспечения одного источника антител к широкому диапазону чужеродных антигенов, а также аутоантигенов, что исключает необходимость в проведении какой-либо иммунизации, как это описано в Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). И наконец, не подвергнутые воздействию библиотеки также можно получить синтетическим путем клонирования подвергнутых перестройке сегментов V-генов из стволовых клеток и применения праймеров для ПЦР, содержащих случайную последовательность, для кодирования высоко вариабельных CDR3-участков и для осуществления перестройки in vitro, как описано в Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992). Патентные публикации, в которых описаны фаговые библиотеки человеческих антител, включают, например: патент США №5750373 и публикации заявок на патент США №№2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 и 2009/0002360.

[00214] В данном документе антитела или фрагменты антитела, выделенные из библиотек человеческих антител, считаются человеческими антителами или фрагментами человеческих антител.

[00215] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например, биспецифическое антитело.. Мультиспецифические антитела представляют собой моноклональные антитела, которые обладают специфичностью связывания с по меньшей мере двумя разными антигенами или с по меньшей мере двумя разными эпитопами, присутствующими на одном и том же антигене. В определенных вариантах осуществления биспецифические антитела могут связываться с двумя разными эпитопами CD3 (например, CD3ε или CD3γ). В определенных вариантах осуществления одна из специфичностей связывания предусматривает связывание с CD3 (например, CD3ε или CD3γ), а другая предусматривает связывание с другим антигеном (например, второй биологической молекулой, например, антигеном клеточной поверхности, например, опухолевым антигеном). Соответственно, биспецифическое антитело к CD3 может обладать специфичностью связывания с CD3 и второй биологической молекулой, такой как вторая биологическая молекула (например, опухолевый антиген), перечисленная в таблице 1 и описанная в публикации заявки на патент США №2010/0111856. В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например, биспецифическое антитело, где мультиспецифическое антитело содержит второй связывающий домен, обладающий специфичностью в отношении второго антигена, такого как: комплекс человеческий лейкоцитарный антиген (HLA)-пептид, презентируемый на поверхности клеток с помощью MHC.

[00216] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например биспецифическое антитело, где мультиспецифическое антитело содержит второй связывающий домен, характеризующийся специфичностью в отношении второго антигена, выбранного из группы, состоящей из 0772P (CA125, MUC16; № доступа в Genbank AF36148); адипофилина (перилипин-2, белок, связанный с дифференцировкой адипоцитов, ADRP, ADFP, MGC10598; эталонная последовательность в NCBI: NP-001113.2); AIM-2 (отсутствующий при меланоме-2, PYHIN4, интерферон-индуцируемый белок AIM2; эталонная последовательность в NCBI: NP-004824.1); ALDH1 A1 (представитель A1 семейства 1 альдегиддегидрогеназ, ALDH1, PUMB1, ретинальдегиддегидрогеназа-1, ALDC, ALDH-E1, ALHDII, RALDH 1, EC 1.2.1.36, ALDH11, HEL-9, HEL-S-53e, HEL12, RALDH1, ацетальдегиддегидрогеназа 1, альдегиддегидрогеназа 1, растворимая альдегиддегидрогеназа, печеночная цитозольная, ALDH класса 1, белок-12 просвета придатка яичка, белок-9 просвета придатка яичка, белок Li 53e, связывающий секрет семенной жидкости придатка яичка, ретинальдегидрогеназа 1, RaIDH1, представитель A1 семейства 1 альдегиддегидрогеназ, альдегиддегидрогеназа цитозольная, EC 1.2.1; эталонная последовательность в NCBI: NP-000680.2); альфа-актинина-4 (ACTN4, актинин альфа-4, FSGS1, фокально-сегментарный гломерулосклероз 1, немышечный альфа-актинин-4, белок, перекрестно связывающий F-актин, FSGS, АКТИНИН-4, изоформа актинина-альфа4, альфа-актинин-4; эталонная последовательность в NCBI: NP-004915.2); альфа-фетопротеина (AFP, HPAFP, FETA, альфа-1-фетопротеин, альфа-фетоглобулин, альфа-1-фетопротеин, альфа-фетоглобулин, HP; GenBank: AAB58754.1); амфирегулина (AREG, SDGF, фактор роста шванномы, фактор роста клеток прямой и ободочной кишки, AR, CRDGF; GenBank: AAA51781.1); ARTC1 (ART1, ADP-рибозилтрансфераза-1, моно(ADP-рибозил)трансфераза-1, ADP-рибозилтрансфераза C2- и C3-токсин-подобная-1, ART2, CD296, RT6, ADP-рибозилтрансфераза-2, GPI-связанная NAD(P)(+)-аргинин-ADP-рибозилтрансфераза-1, EC 2.4.2.31, антиген CD296; NP); ASLG659; ASPHD1 (аспартат-бетагидроксилазный домен содержащий 1, белок-1, содержащий аспартат-бета-гидроксилазный домен, EC 1.14.11.-, EC 1.14.11; GenBank: AAI44153.1); B7-H4 (VTCN1, ингибитор-1 активации T-клеток, содержащих домен V-набора, B7H4, представитель-1 суперсемейства B7, иммунный костимулирующий белок B7-H4, B7h.5, костимулирующая молекула B7x T-клеток, B7S1, B7X, VCTN1, H4, представитель семейства B7, PRO1291, представитель семейства B7, H4, костимулирующая молекула B7x T-клеток, ингибитор-1 активации T-клеток, содержащих домен V-набора, белок B7S1; GenBank: AAZ17406.1); BAFF-R (TNFRSF13C, суперсемейство рецепторов фактора некроза опухоли, представитель 13C, BAFFR, рецептор фактора активации B-клеток, рецептор BAFF, рецептор-3 BLyS, CVID4, BROMIX, CD268, рецептор фактора активации B-клеток, проликсин, представитель BR3 суперсемейство рецепторов фактора некроза опухоли, антиген CD268; эталонная последовательность в NCBI: NP-443177.1); BAGE-1; BCLX (L); слитого белка BCR-ABL (b3a2); бета-катенина (CTNNB1, катенин (кадгерин-ассоциированный белок), бета-1, 88 кДа, CTNNB, MRD19, катенин (кадгерин-ассоциированный белок), бета-1 (88 кДа), armadillo, катенин-бета-1; GenBank: CAA61107.1); BING-4 (WDR46, домен 46 с WD-повтором, C6orf11, BING4, белок BING4, содержащий WD-повтор, открытая рамка считывания-11 хромосомы 6, FP221, UTP7, белок-46, содержащий WD-повтор; NP); BMPR1 B (рецептор типа IB костного морфогенетического белка, № доступа в Genbank NM-00120; NP); B-RAF (бревикан (BCAN, BEHAB, № доступа в Genbank AF22905); бревикана (BCAN, протеогликан-7 хондроитинсульфата, гиалуронан-связывающий белок, содержащийся в большом количестве в головном мозге, BEHAB, CSPG7, протеогликан-бревикан, коровый белок бревикан, протеогликан хондроитинсульфат BEHAB; GenBank: AAH27971.1); CALCA (родственный кальцитонину полипептид-альфа, CALC1, кальцитонин-1, кальцитонин, CGRP альфа-типа, пептид I, родственный гену кальцитонина, CGRP-I, CGRP, CGRP1, CT, KC, кальцитонин/родственный кальцитонину полипептид-альфа, катакальцин; NP); CASP-5 (CASP5, каспаза 5, апоптоз-связанная цистеинпептидаза, каспаза 5, апоптоз-связанная цистеинпротеаза, протеаза ICH-3, протеаза TY, ICE(rel)-111, ICE(rel)III, ICEREL-III, ICH-3, каспаза-5, TY-протеаза, EC 3.4.22.58, ICH3, EC 3.4.22; NP); CASP-8; CD19 (предшественник изоформы 2 антигена CD19 CD19-B-лимфоцитов, B4, CVID3 [Homo sapiens], эталонная последовательность в NCBI: NP-001761.3); CD20 (антиген CD20 CD20-B-лимфоцитов, представитель 1 подсемейства A белков с 4 доменами, пронизывающими мембрану, B1, Bp35, CD20, CVID5, LEU-16, MS4A2, S7; эталонная последовательность в NCBI: NP-690605.1); CD21 (CD21 (CR2 (рецептор комплемента) или C3DR (C3d/рецептор вируса Эпштейна-Барр) или Hs.73792; № доступа в Genbank M2600); CD22 (B-изоформа B-клеточного рецептора CD22, BL-CAM, Lyb-8, LybB, SIGLEC-2, FLJ22814, № доступа в Genbank AK02646); CD22; CD33 (молекула CD33, антиген CD33 (Gp67), Ig-подобный лектин-3, связывающий сиаловую кислоту, связывающий сиаловую кислоту Ig-подобный лектин-3, SIGLEC3, gp67, SIGLEC-3, поверхностный антиген CD33 миелоидных клеток, p67, Siglec-3, антиген CD33; GenBank: AAH28152.1); CD45; CD70 (суперсемейство (лигандов) фактора некроза опухоли CD70, представитель 7; поверхностный антиген CD70; антиген Ki-24; лиганд CD27; CD27-L; представитель 7 суперсемейства лигандов фактора некроза опухоли; эталонная последовательность в NCBI для вида Homo sapiens: NP-001243.1); CD72 (CD72 (B-клеточный антиген дифференцировки CD72, Lyb-; 359 aa, μl: 8,66, MW: 40225, TM: 1 [P] ген, хромосома: 9p13.3, № доступа в Genbank NP-001773.); CD79a (CD79a (CD79A, CD79a, иммуноглобулин-ассоциированный альфа, специфический для B-клеток белок, который ковалентно взаимодействует с Ig-бета (CD79B) и образует комплекс на поверхности с молекулами IgM, передает сигнал, вовлеченный в дифференцировку B-клеток), μl: 4,84, MW: 25028 TM: 2 [P] ген, хромосома: 19q13.2, № доступа в Genbank NP-001774.1); CD79b (CD79b (CD79B, CD79b, IGb (иммуноглобулин-ассоциированный бета), B29, № доступа в Genbank NM-000626 или 1103867); Cdc27 (белок 27 цикла клеточного деления, D0S1430E, D17S978E, субъединица-3 комплекса стимуляции анафазы, субъединица-3 анафаза-стимулирующего комплекса, ANAPC3, APC3, CDC27Hs, H-NUC, гомолог CDC27, гомолог белка-27 цикла клеточного деления (S. cerevisiae), HNUC, NUC2, белок-3 анафаза-стимулирующего комплекса, гомолог белка-27 цикла клеточного деления, белок-27 цикла клеточного деления, гомолог Nuc2; GenBank: AAH11656.1); CDK4 (циклинзависимая киназа 4, протеинкиназа-4 клеточного деления, PSK-J3, EC 2.7.11.22, CMM3, EC 2.7.11; эталонная последовательность в NCBI: NP-000066.1); CDKN2A (ингибитор циклинзависимой киназы 2A, MLM, CDKN2, MTS1, ингибитор 2A циклинзависимой киназы (меланома, P16, ингибирует CDK4), ингибитор A циклинзависимой киназы-4, множественный онкосупрессор-1, CDK4I, MTS-1, CMM2, P16, ARF, INK4, INK4A, P14, P14ARF, P16-INK4A, P16INK4, P16INK4A, P19, P19ARF, TP16, ингибитор CDK4 P16-INK4, отрицательный бета-регулятор клеточного цикла, p14ARF, p16-INK4, p16-INK4a, p16INK4A, p19ARF; NP); CEA; CLL1 (CLL-1 (CLEC12A, MICL и DCAL, кодирует представителя суперсемейства лектинов C-типа/лектиноподобных доменов C-типа (CTL/CTLD). Представители данного семейства имеют общую белковую укладку и имеют различные функции, такие как клеточная адгезия, межклеточная передача сигнала, обмен гликопротеинов, и играют роль в воспалении и иммунном ответе. Белок, кодируемый данным геном, является отрицательным регулятором функции гранулоцитов и моноцитов. Для данного гена было описано несколько вариантов транскриптов, возникших в результате альтернативного сплайсинга, но природа полноразмерной последовательности некоторых из таких вариантов не была определена. Данный ген тесно связан с другими представителями суперсемейства CTL/CTLD в участке генного комплекса натуральных киллеров на хромосоме 12p13 (Drickamer K Curr. Opin. Struct. Biol. 9):585-90; van Rhenen A, et al., Blood 110):2659-66; Chen C H, et al. Blood 107):1459-67; Marshall A S, et al. Eur. J. Immunol. 36):2159-69; Bakker A B, et al Cancer Res. 64:8443-50; Marshall A S, et al J. Biol. Chem. 279:14792-80. Было показано, что CLL-1 представляет собой трансмембранный рецептор II типа, содержащий одиночный лектиноподобный домен C-типа (который по прогнозам не связывает кальций или сахар), стеблевой участок, трансмембранный домен и короткий цитоплазматический хвост, содержащий мотив ITIM.); CLPP (протеолитическая субъединица казеинолитической митохондриальной матриксной пептидазы, эндопептидаза Clp, EC 3.4.21.92, PRLTS3, ATP-зависимая протеаза ClpAP (E. coli), гомолог ClpP (казеинолитическая протеаза, ATP-зависимая, протеолитическая субъединица, E. coli), казеинолитическая пептидаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы (E. coli), казеинолитическая протеаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы (E. coli), человек, протеолитическая субъединица, ATP-зависимая протеаза ClpAP, протеолитическая субъединица, человек, ATP-зависимая казеинолитическая пептидаза ClpP, протеолитическая субъединица, казеинолитическая пептидаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы, казеинолитическая протеаза ClpP, ATP-зависимая, гомолог протеолитической субъединицы, предполагаемая протеолитическая субъединица ATP-зависимой протеазы Clp, митохондриальная; NP); COA-1; CPSF; CRIPTO (CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, фактор роста тератокарциномы, № доступа в Genbank NP-003203 или NM-00321); Cw6; CXCR5 (CXCR5 (рецептор-1 лимфомы Беркитта, сопряженный с G-белком рецептор, который активируется под действием хемокина CXCL13, функция которого заключается в миграции лимфоцитов и гуморальной защите, играет роль в инфекции HIV-2 и, возможно, в развитии СПИДа, лимфомы, миеломы и лейкоза); 372 aa, μl: 8,54, MW: 41959 TM: 7 [P] ген, хромосома: 11q23.3, № доступа в Genbank NP-001707.); CXORF61 (CXORF61- открытая рамка считывания 61 хромосомы X [Homo sapiens], эталонная последовательность в NCBI: NP-001017978.1); циклина D1 (CCND1, BCL1, PRAD1, D11S287E, белок-1 B-клеточной CLL/лимфомы, белок-1 B-клеточной лимфомы, онкоген BCL-1, онкоген PRAD1, циклин D1 (PRAD1: белок-1 аденоматоза паращитовидной железы), G1/S-специфический циклин D1, белок-1 аденоматоза паращитовидной железы, U21B31, G1/S-специфический циклин-D1, BCL-1; эталонная последовательность в NCBI: NP-444284.1); циклина-A1 (CCNA1, CT146, циклин A1; GenBank: AAH36346.1); слитого белка dek-can; DKK1 (ингибитор-1 сигнального пути Dickkopf WNT, SK, hDkk-1, гомолог-1 Dickkopf (Xenopus laevis), гомолог Dickkopf-1 (Xenopus laevis), DKK-1, гомолог Dickkopf-1, родственный Dickkopf белок-1, Dickkopf-1-подобный, Dickkopf-подобный белок-1, Dickkopf-родственный белок-1, Dickkopf-1, Dkk-1; GenBank: AAQ89364.1); DR1 (супрессор-1 транскрипции, TBP-связывающий (отрицательный кофактор-2), отрицательный кофактор-2-бета, фосфобелок, ассоциированный с TATA-связывающим белком, NC2, NC2-БЕТА, белок Dr1, NC2-бета, супрессор-1 транскрипции; эталонная последовательность в NCBI: NP-001929.1); DR13 (главный комплекс гистосовместимости, класс II, DR-бета-1, HLA-DR1B, DRw10, DW2.2/DR2.2, SS1, DRB1, HLA-DRB, HLA-антиген комплекса гистосовместимости класса II, цепь DR-1-бета, антиген DRB1 лейкоцитов человека, антиген DRB1 лимфоцитов, антиген MHC класса II, цепь бета-1 HLA-DR MHC класса II, гликопротеин клеточной поверхности HLA-DR-бета MHC класса II, HLA-DRw10-бета MHC класса II, DR-1, DR-12, DR-13, DR-14, DR-16, DR-4, DR-5, DR-7, DR-8, DR-9, DR1, DR12, DR13, DR14, DR16, DR4, DR5, DR7, DRB, DR9, DRw11, DRw8, HLA-DRB2, клон P2-бета-3, антиген DRB1*1 MHC класса II, антиген DRB1*10 MHC класса II, антиген DRB1*11 MHC класса II, антиген DRB1*12 MHC класса II, антиген DRB1*13 MHC класса II, антиген DRB1*14 MHC класса II, антиген DRB1*15 MHC класса II, антиген DRB1*16 MHC класса II, антиген DRB1*3 MHC класса II, антиген DRB1*4 MHC класса II, антиген DRB1*7 MHC класса II, антиген DRB1*8 MHC класса II, антиген DRB1*9 MHC класса II; NP); E16 (E16 (LAT1, SLC7A5, № доступа в Genbank NM-00348); EDAR (EDAR- предшественник представителя EDAR суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли, рецептор EDA-A1; гомолог downless; рецептор эктодиспластина-A; рецептор эктодермальной дисплазии; рецептор-1 ангидротического эктодиспластина, DL; ECTD10A; ECTD10B; ED1R; ED3; ED5; EDA-A1R; EDA1R; EDA3; HRM1 [Homo sapiens]; эталонная последовательность в NCBI: NP-071731.1); EFTUD2 (молекула-2, содержащая GTP-связывающий домен фактора элонгации Tu, белок-2, содержащий GTP-связывающий домен фактора элонгации Tu, hSNU114, гомолог SNU114, U5 SnRNP-специфический Белок, 116 кДа, MFDGA, KIAA0031, 116 кДа, U5 SnRNP-специфический белок, компонент малого ядерного рибонуклеопротеина U5 размером 116 кДа, MFDM, SNRNP116, Snrp116, Snu114, U5-116KD, SNRP116, U5-116 кДа; GenBank: AAH02360.1); EGFR (рецептор эпидермального фактора роста, ERBB, протоонкоген C-ErbB-1, рецепторная тирозин-протеинкиназа ErbB-1, ERBB1, HER1, EC 2.7.10.1, рецептор эпидермального фактора роста (гомолог вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц (V-Erb-B)), гомолог вирусного онкогена эритробластного лейкоза (V-Erb-B) (птиц), PlG61, гомолог вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц (V-Erb-B), белок-40 ингибирования клеточного роста, белок-61, индуцирующий пролиферацию клеток, mENA, EC 2.7.10; GenBank: AAH94761.1); EGFR-G719A; EGFR-G719C; EGFR-G719S; EGFR-L858R; EGFR-L861 Q; EGFR-57681; EGFR-T790M; фактора элонгации 2 (EEF2, фактор элонгации-2 эукариотической трансляции, EF2, полипептидил-TRNA-транслоказа, EF-2, SCA26, EEF-2; эталонная последовательность в NCBI: NP-001952.1); ENAH (hMena) (гомолог enabled (Drosophila), MENA, enabled млекопитающих, ENA, NDPP1, гомолог белка enabled; GenBank: AAH95481.1)-результаты только для «ENAH», а не «ENAH (hMena)»; EpCAM (молекула адгезии эпителиальных клеток, M4S1, MIC18, опухолеассоциированный трансдуктор кальциевого сигнала 1, TACSTD1, TROP1, аденокарцинома-ассоциированный антиген, гликопротеин Trop-1 клеточной поверхности, гликопротеин-314 клеток эпителия, главный гастроинтестинальный опухолеассоциированный белок GA733-2, EGP314, KSA, DIAR5, HNPCC8, антиген, идентифицированный с помощью моноклонального антитела AUA1, EGP-2, EGP40, ESA, KS1/4, MK-1, гликопротеин-2 эпителиальных клеток человека, компонент мембраны, хромосома 4, поверхностный маркер (гликопротеин 35 кДа), EGP, Ep-CAM, GA733-2, M1S2, антиген CD326, поверхностный антиген эпителиальных клеток, hEGP314, антиген KS 1/4, ACSTD1; GenBank: AAH14785.1); EphA3 (рецептор-A3 EPH, ETK1, ETK, TYRO4, HEK, Eph-подобная тирозинкиназа-1, рецептор ETK1 тирозин-протеинкиназы, EK4, EPH-подобная киназа 4, EC 2.7.10.1, EPHA3, HEK4, эфриновый рецептор-3 типа-A, человеческая эмбриональная киназа-1, TYRO4-протеинтирозинкиназа, hEK4, человеческая эмбриональная киназа, тирозин-протеинкиназа TYRO4, EC 2.7.10; GenBank: AAH63282.1); EphB2R; эпирегулина (EREG, ER, проэпирегулин; GenBank: AAI36405.1); ETBR (EDNRB, рецептор эндотелина типа B, HSCR2, HSCR, эндотелиновый рецептор неселективного типа, ET-B, ET-BR, ETRB, ABCDS, WS4A, ETB, рецептор эндотелина B; NP); слитый белок ETV6-AML1; EZH2 (энхансер гомолога-2 zeste (Drosophila), лизин-N-метилтрансфераза-6, ENX-1, KMT6, EC 2.1.1.43, EZH1, WVS, энхансер гомолога-2 zeste (Drosophila), ENX1, EZH2b, KMT6A, WVS2, гистон-лизин-N-метилтрансфераза EZH2, энхансер гомолога-2 zeste, EC 2.1.1; GenBank: AAH10858.1); FcRH1 (FCRL1, Fc-рецептор-подобный 1, FCRH1, гомолог-1 Fc-рецептора, FcR-подобный белок 1, белок-2, ассоциированный с транслокацией иммунных рецепторов, IFGP1, IRTA5, hIFGP1, белок-1 семейства IFGP, CD307a, Fc-рецептор-подобный белок-1, Fc-рецептор суперсемейства иммуноглобулинов, Gp42, FcRL1, антиген CD307a; GenBank: AAH33690.1); FcRH2 (FCRL2, Fc-рецептор-подобный-2, SPAP1, SH2-домен-содержащий фосфатазный якорный белок-1, гомолог-2 Fc-рецептора, FcR-подобный белок-2, белок-4, ассоциированный с транслокацией иммуноглобулиновых рецепторов, FCRH2, IFGP4, IRTA4, белок-4 семейства IFGP, SPAP1A, SPAP1B, SPAP1C, CD307b, Fc-рецептор-подобный белок-2, белок-4, ассоциированный с транслокацией иммунных рецепторов, Fc-рецептор суперсемейства иммуноглобулинов, Gp42, фосфатазный якорный белок-1, содержащий домен SH2, FcRL2, антиген CD307b; GenBank: AAQ88497.1); FcRH5 (FCRL5, Fc-рецептор-подобный 5, IRTA2, гомолог-5 Fc-рецептора, FcR-подобный белок-5, белок-2, ассоциированный с транслокацией иммунных рецепторов, BXMAS1, FCRH5, CD307, CD307e, PRO820, Fc-рецептор-подобный белок-5, белок-2, ассоциированный с транслокацией рецепторов суперсемейства иммуноглобулинов (IRTA2), FCRL5, антиген CD307e; GenBank: AAI01070.1); FLT3-ITD; FN1 (фибронектин-1, криоглобулин, FN, фактор, стимулирующий миграцию, CIG, FNZ, GFND2, LETS, ED-B, FINC, GFND, MSF, фибронектин; GenBank: AAI43764.1); G250 (MN, CAIX, карбоангидраза IX, карбодегидратаза, RCC-ассоциированный белок-G250, карбонат-дегидратаза IX, антиген MN мембрана, антиген G250, ассоциированный с почечноклеточной карциномой, CA-IX, P54/58N, pMW1, RCC-ассоциированный антиген-G250, карбоангидраза 9; NP);- прочие результаты для «G250», но не «G250/MN/CAIX»; GAGE-1,2,8; GAGE-3,4,5,6,7; GDNF-Ra1 (рецептор-альфа-1 семейства GDNF; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-альфа1; GFR-АЛЬФА-; U95847; BC014962; NM-145793, NM-005264); GEDA (№ доступа в Genbank: AY26076); GFRA1 - рецептора-альфа-1 семейства GDNF; GDNF-рецептора альфа-1; GDNFR-альфа-1; GFR-альфа-1; лиганда-1 RET; рецептора-1 TGF-бета-родственного нейротрофического фактора [Homo sapiens]; ProtKB/Swiss-Prot: P56159.2; глипикана-3 (GPC3, глипикан-3, SDYS, глипикан-протеогликан-3, белок кишечника OCI-5, GTR2-2, MXR7, SGBS1, DGSX, OCI-5. SGB, SGBS, гепарансульфатный протеогликан, секретируемый глипикан-3, OCI5; GenBank: AAH35972.1); GnTVf; gp100 (PMEL, белок премеланосом, SILV, D12S53E, PMEL17, SIL, белок Pmel-17 меланоцитов, антиген GP100, специфический для линии дифференцировки меланоцитов, меланома-ассоциированный антиген ME20, гомолог белка локуса silver, ME20-M, ME20M, P1, P100, silver (мышиный гомолог)-подобный, гомолог silver (мышиный), ME20, SI, белок меланоцитов Mel-17, белок меланоцитов PMEL, белок-17 матрикса меланосом, гомолог silver мыши; GenBank: AAC60634.1); GPC; GPNMB (гликопротеин (трансмембранный) Nmb, гликопротеин NMB, белок, подобный гликопротеину Nmb, остеоактивин, трансмембранный гликопротеин HGFIN, HGFIN, NMB, трансмембранный гликопротеин, трансмембранный гликопротеин NMB; GenBank: AAH32783.1); GPR172A (рецептор-172A, сопряженный с G-белком; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e); NP-078807.1; NM-024531.3); GPR19 (рецептор-19, сопряженный с G белком; Mm.478; NP-006134.1; NM-006143.2); GPR54 (рецептор KISS1; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR1; NP-115940.2; NM-032551.4); HAVCR1 (клеточный рецептор-1 для вируса гепатита A, представитель-1 семейства белков, содержащих домен T-клеточного иммуноглобулина и муцина, молекула-1 повреждения почки, KIM-1, KIM1, TIM, TIM-1, TIM1, TIMD-1, TIMD1, рецептор-1 с доменами T-клеточного иммуноглобулина и муцина, T-клеточный мембранный белок-1, HAVCR, HAVCR-1, белок-1 с доменом T-клеточного иммуноглобулина и доменом муцина, HAVcr-1, белок-1, содержащий домен T-клеточного иммуноглобулина и муцина; GenBank: AAH13325.1); HER2 (ERBB2, гомолог-2 вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц V-Erb-B2, NGL, NEU, гомолог онкогена нейро/глиобластомы, белок гена 19 метастатически пораженных лимфатических узлов, протоонкоген C-ErbB-2, протоонкоген Neu, рецептор клеточной поверхности тирозинкиназного типа HER2, MLN 19, p185erbB2, EC 2.7.10.1, гомолог-2 вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц V-Erb-B2 (гомолог онкогена нейро-/глиобластомы), CD340, HER-2, HER-2/neu, TKR1, белок C-Erb B2/Neu, герстатин, гомолог онкогена нейробластомы/глиобластомы, рецепторная тирозин-протеинкиназа ErbB-2, гомолог-2 вирусного онкогена эритробластного лейкоза V-Erb-B2, гомолог онкогена нейро-/глиобластомы, MLN19, антиген CD340, EC 2.7.10; NP); HER-2/neu-прочее из приведенного выше; HERV-K-MEL; HLA-DOB (бета-субъединица молекулы MHC класса II (антиген la), которая связывает пептиды и презентирует их CD4+ T-лимфоцитам); 273 aa, μl: 6,56, MW: 30820.TM: 1 [P] ген, хромосома: 6p21.3, № доступа в Genbank NP-002111); hsp70-2 (HSPA2, белок-2 теплового шока 70 кДа, 70 кДа белок-2 теплового шока, HSP70-3, 70 кДа белок-2, родственный белкам теплового шока, белок-2 теплового шока размером 70 кДа; GenBank: AAD21815.1); IDO1 (индоламин-2,3-диоксигеназа-1, IDO, INDO, индоламинпиррол-2,3-диоксигеназа, ID0-1, индоламинпиррол-2,3-диоксигеназа, индоламин-2,3-диоксигеназа, индол-2,3-диоксигеназа, EC 1.13.11.52; эталонная последовательность в NCBI: NP-002155.1); IGF2B3; IL13R-альфа2 (IL13RA2, рецептор интерлейкина 13, альфа 2, антиген-19 рака яичек, белок, связывающий интерлейкин-13, IL-13R-альфа-2, IL-13RA2, альфа-2 субъединица рецептора IL-13, альфа-2 субъединица IL-13R, CD213A2, CT19, IL-13R, IL13BP, интерлейкин-13-связывающий белок, альфа-2 цепь рецептора интерлейкина-13, альфа-2 субъединица рецептора интерлейкина-13, IL13R, антиген CD213a2; NP); IL20Rα; кишечной карбоксилэстеразы; IRTA2 (прочие из FcRH5); калликреин-4 (KLK4, калликреин-родственная пептидаза 4, PRSS17, EMSP1, сериновая протеиназа-1 матрицы эмали, калликреин-подобный белок 1, сериновая протеаза-17, KLK-L1, PSTS, AI2A1, калликреин-4 (простаза, матрица эмали, предстательная железа), ARM1, EMSP, андроген-контролируемый первичный транскрипт-1, сериновая протеаза-1 матрицы эмали, калликреин, калликреин-4, простаза, EC 3.4.21.-, простаза, EC 3.4.21; GenBank: AAX30051.1); KIF20A (представитель 20A семейства кинезинов, RAB6KIFL, RAB6-взаимодействующий, кинезин-подобный (Rab-кинезин-6), митотический a; LAGE-1; слитый белок LDLR-фукозилтрансфераза-AS; lengsin (LGSN, lengsin, белок хрусталика глаза с доменом глутаминсинтетазы, GLULD1, белок-1, содержащий домен глутамат-аммоний-лигазы, LGS, белок-1, содержащий домен глутамат-аммоний-лигазы (глутаминсинтетазы), белок-1, содержащий домен глутамат-аммоний-лигазы (глутаминсинтазы), белок, подобный глутаминсинтазе хрусталика глаза; GenBank: AAF61255.1); LGR5 (сопряженный с G-белком рецептор-5, содержащий богатый лейцином; GPR49, GPR6; NP-003658.1; NM-003667.2); LY64 (антиген-64 лимфоцитов (RP10, мембранный белок I типа из семейства с богатым лейцином повтором (LRR), контролирует активацию и апоптоз B-клеток, потеря функции ассоциирована с повышенной активностью заболевания у пациентов с системной красной волчанкой); 661 aa, μl: 6,20, MW: 74147 TM: 1 [P] ген, хромосома: 5q12, № доступа в Genbank NP-005573.); Ly6E (комплекс антигена-6 лимфоцитов, локус E; Ly67, RIG-E,SCA-2, TSA-; NP-002337.1; NM-002346.2); Ly6G6D (комплекс антигена-6 лимфоцитов, локус G6D; Ly6-D, MEGT; NP-067079.2; NM-021246.2); LY6K (комплекс антигена-6 лимфоцитов, локус K; LY6K; HSJ001348; FLJ3522; NP-059997.3; NM-017527.3); белок-1, содержащий домен LyPD1-LY6/PLAUR, PHTS [Homo sapiens], GenBank: AAH17318.1); MAGE-A1 (представитель 1 семейства A антигенов меланомы (управляет экспрессией антигена MZ2-E, MAGE1, белок-1 из семейства A антигенов меланомы, MAGEA1, антиген меланомы MAGE-1, меланома-ассоциированный антиген 1, меланома-ассоциированный антиген MZ2-E, антиген MZ2-E, антиген 1.1 рака яичек, CT1.1, антиген MAGE-1, представитель 1 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель 1 семейства 1 антигенов рака яичек, MAGE1A; эталонная последовательность в NCBI: NP-004979.3); MAGE-A10 (MAGEA10, белок-10 семейства A антигенов меланомы, MAGE10, антиген MAGE-10, меланома-ассоциированный антиген-10, антиген рака яичек 1.10, CT1.10, представитель-10 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-10 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-001238757.1); MAGE-A12 (MAGEA12, белок-12 семейства A антигенов меланомы, MAGE12, антиген рака яичек 1.12, CT1.12, антиген MAGE12F, представитель-12 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-12 семейства 1 антигенов рака яичек, меланома-ассоциированный антиген 12, антиген MAGE-12; эталонная последовательность в NCBI: NP-001159859.1); MAGE-A2 (MAGEA2, белок-2 семейства A антигенов меланомы, MAGE2, антиген рака яичек 1.2, CT1.2, MAGEA2A, антиген MAGE-2, представитель-2 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-2 семейства 1 антигенов рака яичек, антиген меланомы 2, меланома-ассоциированный антиген 2; эталонная последовательность в NCBI: NP-001269434.1); MAGE-A3 (MAGEA3, белок-3 семейства A антигенов меланомы, MAGE3, антиген MAGE-3, антиген MZ2-D, меланома-ассоциированный антиген 3, антиген рака яичек 1.3, CT1.3, представитель-3 семейства 1 антигенов рака яичек, HIPS, HYPD, MAGEA6, представитель-3 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-005353.1); MAGE-A4 (MAGEA4, белок-4 семейства A антигенов меланомы, MAGE4, меланома-ассоциированный антиген 4, антиген рака яичек 1.4, CT1.4, антиген MAGE-4, антиген MAGE-41, антиген MAGE-X2, MAGE4A, MAGE4B, представитель-4 семейства 1 антигенов рака яичек, MAGE-41, MAGE-X2, представитель-4 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-001011550.1); MAGE-A6 (MAGEA6, белок-6 семейства A антигенов меланомы, MAGE6, антиген MAGE-6, меланома-ассоциированный антиген 6, антиген рака яичек 1.6, CT1.6, антиген MAGE3B, представитель-6 семейства 1 антигенов рака яичек, белок-6 семейства A антигенов меланомы, MAGE-3b, MAGE3B, представитель-6 семейства 1 антигенов рака яичек; эталонная последовательность в NCBI: NP-787064.1); MAGE-A9 (MAGEA9, белок-9 семейства A антигенов меланомы, MAGE9, антиген MAGE-9, меланома-ассоциированный антиген 9, антиген рака яичек 1.9, CT1.9, представитель-9 семейства 1 антигенов рака яичек, представитель-9 семейства 1 антигенов рака яичек, MAGEA9A; эталонная последовательность в NCBI: NP-005356.1); MAGE-C1 (MAGEC1, белок-1 семейства C антигенов меланомы, антиген рака яичек 7.1, CT7.1, антиген MAGE-C1, представитель-1 семейства 7 антигенов рака яичек, CT7, представитель-1 семейства 7 антигенов рака яичек, меланома-ассоциированный антиген C1; эталонная последовательность в NCBI: NP-005453.2); MAGE-C2 (MAGEC2, белок-2 семейства C антигенов меланомы, MAGEE1, антиген рака яичек 10, CT10, HCA587, белок-1 семейства E антигенов меланомы, специфический для рака яичек, антиген-587, ассоциированный с гепатоцеллюлярной карциномой, антиген MAGE-C2, антиген MAGE-E1, антиген-587 гепатоцеллюлярного рака, меланома-ассоциированный антиген C2; эталонная последовательность в NCBI: NP-057333.1); маммаглобин-A (SCGB2A2, представитель-2 семейства 2A секретоглобинов, MGB1, маммаглобин-1, UGB2, маммаглобин A, маммаглобин-A, маммаглобин-1, представитель-2 семейства 2A секретоглобинов; NP); MART2 (H HAT, ацилтрансфераза hedgehog, SKI1, антиген меланомы 2, распознаваемый T-клетками, белок-1 skinny hedgehog, Skn, антиген меланомы 2, распознаваемый T-клетками, протеин-цистеин-N-пальмитоилтрансфераза HHAT, EC 2.3.1.-; GenBank: AAH39071.1); M-CSF (CSF1, колониестимулирующий фактор-1 (макрофагальный), MCSF, CSF-1, ланимостим, макрофагальный колониестимулирующий фактор 1, Ланимостим; GenBank: AAH21117.1); MCSP (SMCP, богатый цистеином белок, ассоциированный с митохондриями сперматозоидов, MCS, селенобелок митохондриальной капсулы, HSMCSGEN1, богатый цистеином белок, ассоциированный с митохондриями сперматозоидов; эталонная последовательность в NCBI: NP-109588.2); XAGE-1b/GAGED2a; WT1 (белок-1 опухоли Вильмса, WAGR, GUD, WIT-2, WT33, амино-концевой домен EWS, NPHS4, последние три "цинковых пальца" ДНК-связывающего домена WT1, AWT1, белок опухоли Вильмса, EWS-WT1; GenBank: AAB33443.1); VEGF; тирозиназы (TYR; OCAIA; OCA1A; тирозиназа; SHEP; NP-000363.1; NM-000372.4; GenBank: AAB60319.1); TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, представитель-4 подсемейства M катионных каналов, действующих по механизму транзиторного рецепторного потенциала, № доступа в Genbank NM-01763); TRP2-INT2; TRP-2; TRP-1/gp75 (белок-1, родственный тирозиназе, оксидаза 5,6-дигидроксииндол-2-карбоновой кислоты, CAS2, CATB, TYRP, OCAS, каталаза B, b-БЕЛОК, гликопротеин 75, EC 1.14.18., антиген меланомы Gp75, TYRP1, TRP, TYRRP, TRP1, SHEP11, оксидаза DHICA, EC 1.14.18, GP75, EC 1.14.18.1; триозофосфатизомеразы (триозофосфатизомераза-1, TPID, триозо-фосфат-изомераза, HEL-S-49, TIM, секреторный белок придатка яичка Li 49, TPI, триозофосфатизомераза, EC 5.3.1.1); TRAG-3 (представитель-2 семейства CSAG, антиген рака яичек семейства 24, CSAG3B, представитель-2, представитель 3B семейства CSAG, представитель-2 семейства 24 антигена рака яичек, антиген рака яичек 24.2, белок хондросаркома-ассоциированного гена 2/3, белок гена 3, ассоциированного с устойчивостью к таксолу, белок, подобный белку хондросаркома-ассоциированного гена 2/3, CT24.2, ген 3, ассоциированный с устойчивостью к таксолу, TRAG-3, CSAG3A, TRAG3); TMEM46 (гомолог-2 shisa (Xenopus laevis); SHISA; NP-001007539.1; NM-001007538.1; TMEM118 (белок-2 ring finger, трансмембранный 2; RNFT2; FLJ1462; NP-001103373.1; NM-001109903.1); TMEFF1 (трансмембранный белок-1 с EGF-подобным и двумя фоллистатин-подобными доменами; томорегулин-; H7365; C9orf2; C9ORF2; U19878; X83961; NM-080655; NM-003692; TGF-бета-RII (TGFBR2, бета-рецептор II трансформирующего фактора роста (70/80 кДа), TGFбета-RII, MFS2, tбета-R-II, TGFR-2, рецептор TGF-бета типа IIB, рецептор типа II TGF-бета, рецептор TGF-бета типа-2, EC 2.7.11.30, рецептор трансформирующего фактора роста-бета типа IIC, AAT3, Tбета-R-II, бета-рецептор II трансформирующего фактора роста (70-80 кДа), рецептор типа II TGF-бета, FAA3, рецептор типа II трансформирующего фактора роста-бета, LDS1 B, HNPCC6, LDS2B, LDS2, RITC, EC 2.7.11, TAAD2); TENB2 (TMEFF2, томорегулин, TPEF, HPP1, TR, предполагаемый трансмембранный протеогликан, родственный семейству факторов роста EGF/херегулин и фоллистатину); 374 aa, № доступа в NCBI: AAD55776, AAF91397, AAG49451, RefSeq в NCBI: NP-057276; ген в NCBI: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; № доступа в Genbank AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436; TAG-2; TAG-1 (контактин-2 (аксональный), TAG-1, AXT, молекула клеточной адгезии аксонин-1, TAX, контактин-2 (временно экспрессируемый), TAXI, контактин-2, аксональный гликопротеин TAG-1, временно экспрессируемый аксональный гликопротеин, временный аксональный гликопротеин, аксонин-1, TAX-1, TAG1, FAMES; PRF: 444868); слитого белка SYT-SSX1 или -SSX2; сурвивина; STEAP2 (HGNC 8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, ген-1, ассоциированный с раком предстательной железы, белок-1, ассоциированный с предстательной железой, белок-2 шеститрансмембранного эпителиального антигена предстательной железы 2, шеститрансмембранный белок предстательной железы, № доступа в Genbank AF45513; STEAP1 (шеститрансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы, № доступа в Genbank. NM-01244); SSX-4; SSX-2 (SSX2, синовиальная саркома, X-хромосома точечный разрыв-2, X-хромосома точечный разрыв 2, SSX, X-хромосома точечный разрыв 2B, антиген рака яичек 5.2, X-хромосома-связанный белок-2, опухолевый антиген HOM-MEL-40, CT5.2, HD21, семейство 5 антигенов рака яичек, HOM-MEL-40, изоформа B, представитель-2 семейства 5 антигенов рака яичек, представитель 2a, белок SSX2, саркома, саркома, синовиальная, X-хромосома-связанный белок-2, синовиальная, синовиальная саркома, X-хромосома точечный разрыв 2B, синовиальная саркома, SSX2A); Sp17; SOX10 (SRY (участок определяющий пол Y-хромосомы)-бокс-10, мышиный, PCWH, DOM, WS4, WS2E, WS4C, доминантный мегаколон, мышиный, человеческий гомолог доминантного мегаколона, ген-10 SRY-связанного HMG-бокса, человеческий гомолог фактора транскрипции SOX-10; GenBank: CAG30470.1); SNRPD1 (малый ядерный нуклеопротеин D1, малый ядерный нуклеопротеин D1, полипептид 16 кДа, полипептид (16 кДа), SNRPD, HsT2456, Sm-D1, SMD1, аутоантиген Sm-D, псевдоген 16 кДа полипептида малого ядерного рибонуклеопротеина D1, коровый белок D1 SnRNP, малый ядерный рибонуклеопротеин Sm D1); SLC35D3 (семейство 35 переносчиков растворенных веществ, представитель D3, FRCL1, fringe connection-подобный белок-1, bA55K22.3, Frc, fringe-подобный 1, представитель D3 семейства 35 переносчиков растворенных веществ; NCBI GenBank: NC-000006.11 NC-018917.2 NT-025741.16); SIRT2 (сиртуин-2, NAD-зависимая деацетилаза сиртуин-2, SIRL2, белок-2 регулятор молчащей информации, гомолог-2 регуляторного белка SIR2, Sir2-родственный белок типа 2, SIR2-подобный белок-2, сиртуин типа 2, сиртуин-2 (гомолог белка-2 для регуляции молчащей информации типа спаривания) (S. cerevisiae), сиртуин-2, сиртуин-2 (белок-2 для регуляции молчащей информации типа спаривания, S. cerevisiae, гомолог), EC 3.5.1., SIR2; GenBank: AAK51133.1); Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, семафорин 5b Hlog, домен sema, семь тромбоспондиновых повторов (типа 1 and типа 1-подобных), трансмембранный домен™ и короткий цитоплазматический домен, (семафорин) 5B, № доступа в Genbank: AB04087; сецерина-1 (SCRN1, SES1, KIAA0193, сецерин-1; GenBank: EAL24458.1); SAGE (SAGE1, антиген-1 саркомы, антиген-14 рака яичек, CT14, предполагаемый опухолевый антиген; эталонная последовательность в NCBI: NP-061136.2); RU2AS (KAAG1, антиген-1, ассоциированный с почкой, RU2AS, белок гена антисмысловой RU2, почка-ассоциированный антиген-1; GenBank: AAF23613.1); RNF43-E3 (предшественник убиквитин-протеинлигазы RNF43 [Homo sapiens], RNF124; URCC; эталонная последовательность в NCBI: NP-060233.3; RhoC (RGS5 (регулятор-5 передачи сигнала с участием G-белка), MSTP032, регулятор-5 передачи сигнала с участием G-белка, MSTP092, MST092, MSTP106, MST106, MSTP129, MST129; GenBank: AAB84001.1); RET (протоонкоген ret; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE; NP-066124.1; NM-020975.4); RBAF600 (UBR4, компонент N-рекогнин-4 убиквитин-протеинлигазы E3, цинковый палец, UBR1 типа 1, ZUBR1, UBR4 E3-убиквитин-протеинлигазы, RBAF600, 600 кДа фактор, ассоциированный с белком ретинобластомы, белок-1 UBR1-цинковых пальцев, EC 6.3.2., N-рекогнин-4, KIAA0462, p600, EC 6.3.2, KIAA1307; GenBank: AAL83880.1); RAGE-1 (MOK, MOK-протеинкиназа, почечный опухолевый антиген, RAGE, MAPK/MAK/MRK перекрывающаяся киназа, почечный опухолевый антиген-1, антиген почечноклеточной карциномы, RAGE-1, EC 2.7.11.22, RAGE1; UniProtKB/Swiss-Prot: Q9UQ07.1); RAB38/NY-MEL-1 (RAB38, NY-MEL-1, RAB38, представитель семейства онкогенов RAS, антиген меланомы NY-MEL-1, Rab-родственный GTP-связывающий белок, Ras-родственный белок Rab-38, rrGTPbp; GenBank: AAH15808.1); PTPRK (DJ480J14.2.1 (протеин тирозинфосфатаза, рецепторного типа, K, R-PTP-KAPPA, протеин тирозинфосфатаза-каппа, протеин-тирозинфосфатаза-каппа), протеин-тирозинфосфатаза, рецепторного типа, K, протеин-тирозинфосфатаза-каппа, протеин-тирозинфосфатаза, рецепторного типа, каппа, R-PTP-каппа, тирозин-протеинфосфатаза-каппа рецепторного типа, EC 3.1.3.48, PTPK; GenBank: AAI44514.1); PSMA; PSCA hIg(2700050C12Rik, C530008016Rik, RIKEN кДНК 2700050C12, ген RIKEN кДНК 2700050C12, № доступа в Genbank: AY358628); PSCA (предшественник антигена стволовых клеток предстательной железы, № доступа в Genbank: AJ29743; PRDX5 (пероксиредоксин 5, EC 1.11.1.15, TPx типа VI, B166, антиоксидантный фермент B166, HEL-S-55, пятно 71 B при 2D-Page печеночной ткани, PMP20, пероксисомный антиоксидантный фермент, PRDX6, тиоредоксинпероксидаза PMP20, PRXV, AOEB166, секреторный белок Li 55 придатка яичка, корепрессор-1 Alu, пероксиредоксин-5, митохондриальный, пероксиредоксин V, prx-V, тиоредоксинредуктаза, Prx-V, ACR1, корепрессор Alu, PLP; GenBank: CAG33484.1); PRAME (преимущественно экспрессируемый антиген при меланоме, преимущественно экспрессируемый антиген меланомы, MAPE, 01P-4, OIPA, CT130, антиген-130 рака яичек, антиген меланомы, преимущественно экспрессируемый в опухолях, Opa-взаимодействующий белок-4, Opa- взаимодействующий белок 01P4; GenBank: CAG30435.1); слитый белок pml-RAR-альфа; PMEL17 (гомолог silver; SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL; ME20; gp10 BC001414; BT007202; M32295; M77348; NM-006928); PBF (ZNF395, белок-395 цинковых пальцев, PRF-1, регуляторный белок болезни Хантингтона, белок, связывающий регуляторный участок гена HD, участок-связывающий белок-2, белок-2, регуляторный фактор-1 папилломавируса, HD-регулирующий фактор-2, регуляторный фактор папилломавируса, PRF1, HDBP-2, Si-1-8-14, HDBP2, белок-2, связывающий регуляторный участок гена при болезни Хантингтона, HDRF-2, регуляторный фактор PRF-1 папилломавируса, PBF; GenBank: AAH01237.1); PAX5 (paired box 5, гомеозисный ген-5 из paired box, BSAP, белок paired box, Pax-5, специфический активатор линии дифференцировки B-клеток, ген-5 домена paired, ген-5 paired box (белок специфического активатора линии дифференцировки B-клеток), фактор транскрипции, специфический для B-клеток, ген-5 paired box (специфический активатор линии дифференцировки B-клеток); PAP (REG3A, белок-3 альфа из регенерирующих островков Лангерганса, INGAP, PAP-H, печеночно-кишечный панкреатический белок, PBBCGF, человеческий проостровковый пептид, REG-III, белок-1, ассоциированный с панкреатитом, Regi, Reg III-альфа, гепатокарцинома-кишечник-поджелудочная железа, белок III-альфа из регенерирующих островков Лангерганса, фактор роста бета-клеток поджелудочной железы, HIP, PAP-гомологичный белок, HIP/PAP, пролиферация-индуцирующий белок-34, PAP1, пролиферация-индуцирующий белок-42, REG-3-альфа, белок-3-альфа из регенерирующих островков Лангерганса, белок, ассоциированный с поджелудочной железой; GenBank: AAH36776.1); p53 (TP53, опухолевый белок P53, TPR53, P53, клеточный опухолевый антиген P53, антиген NY-CO-13, мутантный опухолевый белок-53, фосфопротеин P53, опухолевый супрессор P53, BCC7, связанный с трансформацией белок-53, LFS1, опухолевый белок-53, синдром Ли-Фраумени, опухоль супрессор P53); P2X5 (пуринергический рецептор P2X-5, функционирующий как лиганд-управляемый ионный канал, ионный канал, управляемый внеклеточным ATP, может быть вовлечен в синаптическую передачу и нейрогенез, дефицит может вносить вклад в патофизиологию идиопатической нестабильности детрузора); 422 aa, μl: 7,63, MW: 47206 TM: 1 [P] ген, хромосома: 17p13.3, № доступа в Genbank: NP-002552.); OGT (O-связанный N-ацетилглюкозамин(GlcNAc)-трансфераза, P110-субъединица O-GlcNAc-трансферазы, O-связанный N-ацетилглюкозамин(GlcNAc)-трансфераза (UDP-N-ацетилглюкозамин:полипептид-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза, 110 кДа субъединица UDP-N-ацетилглюкозамин-пептид-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, UDP-N-ацетилглюкозамин:полипептид-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза, уридиндифосфо-N-ацетилглюкозамин:полипептид-бета-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза, субъединица P110 O-GlcNAc-трансферазы, EC 2.4.1.255, 110 кДа субъединица O-связанный N-ацетилглюкозамин(GlcNAc)-трансферазы, EC 2.4.1, HRNT1, EC 2.4.1.186, O -GLCNAC; GenBank: AAH38180.1); OA1 (остеоартрит QTL 1, OASD; GenBank: CAA88742.1); NY-ESO-1/LAGE-2 (антиген рака яичек 1B, CTAG1 B, NY-ESO-1, LAGE-2, ESO1, CTAG1, CTAG, LAGE2B, антиген рака яичек 1, антиген аутоиммунного рака яичек NY-ESO-1, антиген рака 3, антиген рака яичек 6.1, белок-1 Нью-Йоркской плоскоклеточной карциномы пищевода, представитель 2 семейства L-антигенов, LAGE2, CT6.1, LAGE2A; GenBank: AAI30365.1); NY-BR-1 (ANKRD30A, домен анкиринового повтора 30A, антиген рака молочной железы NY-BR-1, серологически определенный антиген рака молочной железы NY-BR-1, белок 30A, содержащий домен анкиринового повтора; эталонная последовательность в NCBI: NP-443723.2); N-ras (NRAS, гомолог вирусного онкогена нейробластомы RAS (V-Ras), NRAS1, трансформирующий белок N-Ras, GTPаза NRas, ALPS4, часть-4 белка N-Ras, NS6, гомолог онкогена, HRAS1; GenBank: AAH05219.1); NFYC (ядерный транскрипционный фактор Y, гамма, HAP5, HSM, субъединица C ядерного транскрипционного фактора Y, трансактиватор HSM-1/2, субъединица C CCAAT-связывающегося фактора, NF-YC, субъединица-гамма транскрипционного CCAAT-связывающегося фактора, субъединица C белка, связывающего CAAT-бокс ДНК, большая субъединица 2A транскрипционного фактора гистона H1, CBFC, субъединица-гамма ядерного транскрипционного фактора Y, CBF-C, трансактиватор HSM-1, H1TF2A, транскрипционный фактор NF-Y, C-субъединица); нео-PAP (PAPOLG, поли(A)-полимераза-гамма, нео-поли(A)-полимераза, ядерная поли(A)-полимераза-гамма, полинуклеотид-аденилилтрансфераза-гамма, SRP РНК 3'-аденилирующий фермент/Pap2, PAP-гамма, Neo-PAP, SRP РНК 3'-аденилирующий фермент, PAP2, EC 2.7.7.19, PAPG; эталонная последовательность в NCBI: NP-075045.2); NCA (CEACAM6, № доступа в Genbank: M1872); Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, представитель 2 семейства 34 переносчиков растворимых веществ (натрий-фосфат), натрий-зависимый транспортер фосфата 3b типа II, № доступа в Genbank: NM-00642); миозина класса I; MUM-3; MUM-2 (TRAPPC1, белок-1 комплекса частицы направленного перемещения белка, BETS, гомолог BETS, MUM2, белок-2, убиквитарный при меланоме мутированный белок-2, белок-2 множественной миеломы, субъединица-1 комплекса частицы направленного перемещения белка; MUM-1f); муцина (MUC1, муцин 1, ассоциированный с клеточной поверхностью, PEMT, PUM, CA 15-3, MCKD1, ADMCKD, белок-1 медуллярно-кистозной болезни почек (аутосомная доминантная), ADMCKD1, муцин 1, трансмембранный, CD227, антиген DF3, ассоциированный с карциномой молочной железы, MAM6, раковый антиген 15-3, MCD, карцинома-ассоциированный муцин, MCKD, Krebs Von Den Lungen-6, MUC-1/SEC, муцин в моче, индуцированный арахисом, MUC1/ZD, опухолеассоциированный антиген мембраны эпителиальных клеток, антиген DF3, опухолеассоциированный муцин, эписиалин, EMA, антиген H23, H23AG, муцин-1, KL-6, опухолеассоциированный муцин эпителиальных клеток, MUC-1, эписиалин, PEM, антиген CD227; UniProtKB/Swiss-Prot: P15941.3); MUCSAC (муцин SAC, олигомерный белок, образующий слизь/гель, трахеобронхиальный муцин' MUC5, TBM, муцин-5, подтипы A и C, трахеобронхиальный/желудочный, leB, желудочный муцин, муцин SAC, олигомерный псевдоген, образующий слизь/гель, антиген группы крови Льюиса B, LeB, основной гликопротеин воздухоносных путей, MUC-SAC, муцин-5 подтипа AC, трахеобронхиальный); MUC1 (муцин 1, ассоциированный с клеточной поверхностью, PEMT, PUM, CA 15-3, MCKD1, ADMCKD, медуллярно-кистозная болезнь почек (аутосомная доминантная), ADMCKD1, муцин 1, трансмембранный, CD227, антиген DF3, ассоциированный с карциномой молочной железы, MAM6, раковый антиген 15-3, MCD, карцинома-ассоциированный муцин, MCKD, Krebs Von Den Lungen-6, MUC-1/SEC, муцин в моче, индуцированный арахисом, MUC-1/X, муцин полиморфных эпителиальных клеток, MUC1/ZD, опухолеассоциированный антиген мембран эпителиальных клеток, антиген DF3, опухолеассоциированный муцин, эписиалин, EMA, антиген h23, H23AG, муцин-1, KL-6, опухолеассоциированный муцин эпителиальных клеток, MUC-1, эписиалин, PEM, антиген CD227); MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315, № доступа в Genbank: NM-01776; изоформы-3 белка-4, ассоциированного с множественной лекарственной устойчивостью MRP4, MOAT-B; MOATB [Homo sapiens]; эталонная последовательность в NCBI: NP-001288758.1; MPF (MPF, MSLN, SMR, мегакариоцит-потенцирующий фактор, мезотелин, № доступа в Genbank: NM-00582); MMP-7 (MMP7, матрилизин, MPSL1, матрин, матриксная металлопротеиназа 7 (матрилизин, маточный), маточный матрилизин, матриксная металлопротеиназа-7, EC 3.4.24.23, протеаза Pump-1, Матрин, маточная металлопротеиназа, PUMP1, MMP-7, EC 3.4.24, PUMP-1; GenBank: AAC37543.1); MMP-2 (MMP2, матриксная металлопептидаза 2 (желатиназа A, 72 кДа желатиназа, 72 кДа коллагеназа типа IV), MONA, CLG4A, матриксная металлопротеиназа-2 (желатиназа A, 72 кДа желатиназа, 72 кДа коллагеназа типа IV), CLG4, 72 кДа желатиназа, 72 кДа коллагеназа типа IV), матриксная металлопротеиназа-2, MMP-II, 72 кДа желатиназа, коллагеназа типа IV-A, MMP-2, матриксная металлопротеиназа-II, TBE-1, желатиназа нейтрофилов, EC 3.4.24.24, EC 3.4.24; GenBank: AAH02576.1) и meloe.

[00217] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например биспецифическое антитело, где мультиспецифическое антитело содержит второй связывающий домен, характеризующийся специфичностью в отношении второго антигена, выбранного из группы, состоящей из 17-IA, 4-1BB, 4Dc, 6-кето-PGF1a, 8-изо-PGF2a, 8-оксо-dG, аденозинового рецептора A1, A33, ACE, ACE-2, активина, активина A, активина AB, активина B, активина C, активина RIA, активина RIA/ALK-2, активина RIB/ALK-4, активина RIIA, активина RUB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAM8, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, адресинов, aFGF, ALCAM, ALK, ALK-1, ALK-7, альфа-1-антитрипсина, антагониста альфа-V/бета-1, ANG, Ang, APAF-1, APE, APJ, APP, APRIL, AR, ARC, ART, артемина, антиидиотипа, аспарагиновой кислоты, предсердного натрийуретического фактора, интегрина av/b3, Ax1, b2M, B7-1, B7-2, B7-H, стимулятора B-лимфоцитов (BlyS), BACE, BACE-1, Bad, BAFF, BAFF-R, Bag-1, BAK, Bax, BCA-1, BCAM, Bel, BCMA, BDNF, b-ECGF, bFGF, BID, Bik, BIM, BLC, BL-CAM, BLK, BMP, BMP-2/BMP-2a, BMP-3/остеогенина, BMP-4/BMP-2b, BMP-5, BMP-6/Vgr-1, BMP-7 (OP-1), BMP-8 (BMP-8a, OP-2), BMPR, BMPR-IA (ALK-3), BMPR-IB (ALK-6), BRK-2, RPK-1, BMPR-II (BRK-3), разновидностей BMP, b-NGF, BOK, бомбезина, костного нейротрофического фактора, BPDE, BPDE-DNA, BTC, фактора комплемента 3 (C3), C3a, C4, C5, C5a, CIO, CA125, CAD-8, кальцитонина, cAMP, раково-эмбрионального антигена (CEA), карцинома-ассоцированного антигена, катепсина A, катепсина B, катепсина C/DPPI, катепсина D, катепсина E, катепсина H, катепсина L, катепсина O, катепсина S, катепсина V, катепсина X/Z/P, CBL, CCI, CCK2, CCL, CCL1, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9/10, CCR, CCR1, CCR10, CCR10, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CD1, CD2, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD27L, CD28, CD29, CD30, CD30L, CD32, CD33 (белки p67), CD34, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45, CD46, CD49a, CD52, CD54, CD55, CD56, CD61, CD64, CD66e, CD74, CD80 (B7-1), CD89, CD95, CD123, CD137, CD138, CD140a, CD146, CD147, CD148, CD152, CD164, CEACAM5, CFTR, cGMP, CINC, токсина Clostridium botulinum, токсина Clostridium perfringens, CKb8-1, CLC, CMV, CMV UL, CNTF, CNTN-1, COX, C-Ret, CRG-2, CT-1, CTACK, CTGF, CTLA-4, CX3CL1, CX3CR1, CXCL, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCR, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, цитокератинового опухолеассоциированного антигена, DAN, DCC, DcR3, DC-SIGN, фактора ускорения распада, дес(1-3)-IGF-1 (IGF-1 головного мозга), Dhh, дигоксина, DNAM-1, ДНКазы, Dpp, DPPIV/CD26, Dtk, ECAD, EDA, EDA-A1, EDA-A2, EDAR, EGF, EGFR (ErbB-1), EMA, EMMPRIN, EN A, рецептора эндотелина, энкефалиназы, eNOS, Eot, эотаксина-1, EpCAM, эфрина B2/EphB4, EPO, ERCC, E-селектина, ET-1, фактора IIa, фактора VII, фактора VIIIc, фактора IX, белка активации фибробластов (FAP), Fas, FcR1, FEN-1, ферритина, FGF, FGF-19, FGF-2, FGF3, FGF-8, FGFR, FGFR-3, фибрина, FL, FLIP, Flt-3, Flt-4, фолликулостимулирующего гормона, фракталкина, FZD1, FZD2, FZD3, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, FZD9, FZD10, G250, Gas 6, GCP-2, GCSF, GD2, GD3, GDF, GDF-1, GDF-3 (Vgr-2), GDF-5 (BMP-14, CDMP-1), GDF-6 (BMP-13, CDMP-2), GDF-7 (BMP-12, CDMP-3), GDF-8 (миостатин), GDF-9, GDF-15 (MIC-1), GDNF, GDNF, GFAP, GFRa-1, GFR-альфа1, GFR-альфа2, GFR-альфа3, GITR, глюкагона, Glut 4, гликопротеина IIb/IIIa (GP IIb/IIIa), GM-CSF, gp130, gp72, GRO, рилизинг-фактора гормона роста, гаптена (NP-cap или NIP-cap), HB-EGF, HCC, гликопротеина gB оболочки HCMV, гликопротеина gH оболочки HCMV, HCMV UL, гемопоэтического фактора роста (HGF), gp120 вируса гепатита B, гепараназы, Her2, Her2/neu (ErbB-2), Her3 (ErbB-3), Her4 (ErbB-4), гликопротеина gB вируса простого герпеса (HSV), гликопротеина gD HSV, HGFA, высокомолекулярного меланома-ассоциированного антигена (HMW-MAA), gp120 HIV, V3-петли gp 120 HIV IIIB, HLA, HLA-DR, HM1.24, HMFG PEM, HRG, Hrk, сердечного миозина человека, цитомегаловируса (HCMV) человека, гормона роста человека (HGH), HVEM, 1-309, IAP, ICAM, ICAM-1, ICAM-3, ICE, ICOS, IFNg, Ig, рецептора IgA, IgE, IGF, IGF-связывающих белков, IGF-1R, IGFBP, IGF-I, IGF-II, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-18R, IL-23, интерферона (INF)-альфа, INF-бета, INF-гамма, ингибина, iNOS, A-цепи инсулина, B-цепи инсулина, инсулиноподобного фактора роста 1, интегрина-альфа2, интегрина-альфа3, интегрина-альфа4, интегрина альфа4/бета1, интегрина, альфа4/бета7, интегрина-альфа5 (альфаV), интегрина-альфа5/бета1, интегрина альфа5/бета3, интегрина-альфа6, интегрина-бета1, интегрина-бета2, интерферона-гамма, IP-10, 1-TAC, JE, калликреина 2, калликреина 5, калликреина 6, калликреина 11, калликреина 12, калликреина 14, калликреина 15, калликреина L1, калликреина L2, калликреина L3, калликреина L4, KC, KDR, фактора роста кератиноцитов(КГF), ламинина 5, LAMP, LAP, LAP (TGF-1), латентного TGF-1, латентного TGF-1 bpl, LBP, LDGF, LECT2, Lefty, антигена Льюиса-Y, антигена, родственного антигену Льюиса-Y, LFA-1, LFA-3, Lfo, LIF, LIGHT, липопротеинов, LIX, LKN, Lptn, L-селектина, LT-a, LT-b, LTB4, LTBP-1, легочного сурфактанта, лютеинизирующего гормона, рецептора лимфотоксина-бета, Mac-1, MAdCAM, MAG, MAP2, MARC, MCAM, MCAM, MCK-2, MCP, M-CSF, MDC, Mer, металлопротеаз, рецептора MGDF, MGMT, MHC (HLA-DR), MIF, MIG, MIP, MIP-1-альфа, MK, MMAC1, MMP, MMP-1, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-2, MMP-24, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MPIF, Mpo, MSK, MSP, муцина (Muc1), MUC18, ингибирующего вещества Мюллера, Mug, MuSK, NAIP, NAP, NCAD, N-кадгерина, NCA 90, NCAM, NCAM, неприлизина, нейротрофина-3,-4 или -6, нейротурина, фактора роста нейронов (NGF), NGFR, NGF-бета, nNOS, NO, NOS, Npn, NRG-3, NT, NTN, OB, OGG1, OPG, OPN, OSM, OX40L, OX40R, p150, p95, PADPr, паратиреоидного гормона, PARC, PARP, PBR, PBSF, PCAD, P-кадгерина, PCNA, PDGF, PDGF, PDK-1, PECAM, PEM, PF4, PGE, PGF, PGI2, PGJ2, PIN, PLA2, плацентарной щелочной фосфатазы (PLAP), P1GF, PLP, PP14, проинсулина, прорелаксина, белка C, PS, PSA, PSCA, простатического специфического мембранного антигена (PSMA), PTEN, PTHrp, Ptk, PTN, R51, RANK, RANKL, RANTES, RANTES, A-цепи релаксина, B-цепи релаксина, ренина, F респираторно-синцитиального вируса (RSV), Fgp RSV, Ret, ревматоидных факторов, RLIP76, RPA2, RSK, S100, SCF/KL, SDF-1, серина, сывороточного альбумина, sFRP-3, Shh, SIGIRR, SK-1, SLAM, SLPI, SMAC, SMDF, SMOH, SOD, SPARC, Stat, STEAP, STEAP-II, TACE, TACI, TAG-72 (опухолеассоциированный гликопротеин-72), TARC, TCA-3, T-клеточных рецепторов (например, T-клеточного рецептора альфа/бета), TdT, TECK, TEM1, TEM5, TEM7, TEM8, ТРЕТ, PLAP-подобной щелочной фосфатазы яичек, TfR, TGF, TGF-альфа, TGF-бета, панспецифического TGF-бета, TGF-бета RI (ALK-5), TGF-бета RII, TGF-бета Rllb, TGF-бета RIII, TGF-бета1, TGF-бета2, TGF-бета3, TGF-бета4, TGF-бета5, тромбина, тимусного Ck-1, тиреостимулирующего гормона, Tie, TIMP, TIQ, тканевого фактора, TMEFF2, Tmpo, TMPRSS2, TNF, TNF-альфа, TNF-альфа/бета, TNF-бета2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF10A (TRAIL R1, Apo-2, DR4), TNFRSF10B (TRAIL R2, DR5, KILLER, TRICK-2A, TRICK-B), TNFRSF10C (TRAIL R3, DcR1, LIT, TRID), TNFRSF10D (TRAIL R4, DcR2, TRUNDD), TNFRSF11A (RANK, ODFR, TRANCE R), TNFRSF11B (OPG, OCIF, TR1), TNFRSF12 (TWEAK R, FN14), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFF R), TNFRSF14 (HVEM, ATAR, HveA, LIGHT R, TR2), TNFRSF16 (NGFR, p75NTR), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF18 (GITR, AITR), TNFRSF19 (TROY, TAJ, TRADE), TNFRSF19L (RELT), TNFRSFIA (TNF RI, CD120a, p55-60), TNFRSFIB (TNF RII, CD120b, p75-80), TNFRSF26 (TNFRH3), TNFRSF3 (LTbR, TNF RIII, TNFC R), TNFRSF4 (OX40, ACT35, TXGP1 R), TNFRSF5 (CD40, p50), TNFRSF6 (Fas, Apo-1, APT1, CD95), TNFRSF6B (DcR3, M68, TR6), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF9 (4-lBB, CD137, ILA), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF22 (DcTRAIL R2, TNFRH2), TNFRST23 (DcTRAIL R1, TNFRH1), TNFRSF25 (DR3, Apo-3, LARD, TR-3, TRAMP, WSL-1), TNFSF10 (TRAIL, лиганд Apo-2, TL2), TNFSF11 (TRANCE/RANK, лиганд ODF, лиганд OPG), TNFSF12 (TWEAK, лиганд Apo-3, лиганд DR3), TNFSF13 (APRIL, TALL2), TNFSF13B (BAFF, BLYS, TALL1, THANK, TNFSF20), TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM, LTg), TNFSF15 (TL1A/VEGI), TNFSF18 (лиганд GITR, лиганд AITR, TL6), TNFSFIA (TNF-a конектин, DIF, TNFSF2), TNFSF1B (TNF-b, LTa, TNFSF1), TNFSF3 (LTb, TNFC, p33), TNFSF4 (лиганд OX40, gp34, TXGP1), TNFSF5 (лиганд CD40, CD154, gp39, HIGM1, IMD3, TRAP), TNFSF6 (лиганд Fas, лиганд Apo-1, лиганд APT1), TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), TNFSF8 (лиганд CD30, CD153), TNFSF9 (лиганд 4-lBB, лиганд CD137), TP-1, t-PA, Tpo, TRAIL, TRAIL R, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRANCE, рецептора трансферрина, TRF, Trk, TROP-2, TSG, TSLP, опухолеассоциированного антигена CA 125, опухолеассоцированного антигена, экспрессирующего углевод, родственный антигену Льюса-Y, TWEAK, TXB2, Ung, uPAR, uPAR-1, урокиназы, VCAM, VCAM-1, VECAD, VE-кадгерина, VE-кадгерина-2, VEFGR-1 (flt-1), VEGF, VEGFR, VEGFR-3 (flt-4), VEGI, VIM, вирусных антигенов, VLA, VLA-1, VLA-4, интегрина VNR, фактора фон Виллебранда, WIF-1, WNT1, WNT2, WNT2B/13, WNT3, WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16, XCL1, XCL2, XCR1, XCR1, XEDAR, XIAP, XPD, CTLA4 (антиген-4 цитотоксических T-лимфоцитов), PD1 (белок-1 запрограммированной гибели клеток), PD-L1 (лиганд-1 белка запрограммированной гибели клеток), LAG-3 (ген-3 активации лимфоцитов), TIM-3 (белок-3, содержащий домены иммуноглобулина T-клеток и муцина), рецепторов для гормонов и факторов роста.

[00218] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению предусматривают мультиспецифическое антитело, например биспецифическое антитело, где мультиспецифическое антитело содержит второй связывающий домен, характеризующийся специфичностью в отношении второго антигена, выбранного из группы, состоящей из BCMA, CTLA4 (антиген-4 цитотоксических T-лимфоцитов), PD1 (белок-1 запрограммированной гибели клеток), PD-L1 (лиганд-1 белка запрограммированной гибели клеток), LAG-3 (ген-3 активации лимфоцитов), TIM-3, CD20, CD2, CD19, Her2, EGFR, EpCAM, FcyRIIIa (CD16), FcyRIIa (CD32a), FcyRIIb (CD32b), FcyRI (CD64), Toll-подобных рецепторов (TLRs), TLR4, TLR9, цитокинов, IL-2, IL-5, IL-13, IL-6, IL-17, IL-12, IL-23, TNFa, TGFb, цитокиновых рецепторов, IL-2R, хемокинов, хемокиновых рецепторов, факторов роста, VEGF и HGF.

[00219] В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении представлены биспецифические антитела, характеризующиеся аффинностью в отношении CD3 и HER2. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении представлены биспецифические антитела, содержащие фрагмент антитела (например, Fab) трастузумаба. Иллюстративные биспецифические антитела к CD3 включают ADI-29291, ADI-29292, ADI-29293, ADI-29294, ADI-29295, ADI-29297, ADI-29298, ADI-29300, ADI-29301, ADI-29302, ADI-29303, ADI-29304, ADI-29305 и ADI-29306.

[00220] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть получены с помощью различных методик, доступных специалисту в данной области техники, и они включают без ограничения рекомбинантную совместную экспрессию двух пар тяжелая цепь-легкая цепь иммуноглобулина с разной специфичностью (см. Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829 и Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)), и конструирование типа «выступ-во-впадину» (см., например, патент США №5731168). Конструирование типа «выступ-во-впадину» мультиспецифических антител можно использовать для получения первого плеча, содержащего выступ, и второго плеча, содержащего впадину, в которой может связываться выступ первого плеча. В одном варианте осуществления выступ в мультиспецифических антителах по настоящему изобретению может находиться на плече антитела к CD3. В качестве альтернативы в одном варианте осуществления выступ в мультиспецифических антителах по настоящему изобретению может находиться на плече антитела к мишени/антигену. В одном варианте осуществления впадина в мультиспецифических антителах по настоящему изобретению может находиться на плече антитела к CD3. В качестве альтернативы в одном варианте осуществления впадина в мультиспецифических антителах по настоящему изобретению может находиться на плече антитела к мишени/антигену. Мультиспецифические антитела также могут быть сконструированы с применением технологии кроссовера иммуноглобулинов (также известного как обмен Fab-доменов или формат CrossMab) (см., например, WO2009/080253; Schaefer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108:11187-11192 (2011)). Мультиспецифические антитела также могут быть получены посредством конструирования эффектов электростатической координации с получением Fc-гетеродимерных молекул антитела (WO 2009/089004 A1); перекрестной сшивки двух или более антител или фрагментов (см., например, патент США №4676980 и Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); с применением лейциновых застежек для получения биспецифических антител (см., например, Kostelny et al., J. Immunol, 148(5):1547-1553 (1992)); с применением технологии «диател» для получения биспецифических фрагментов антитела (см., например, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)), а также с применением одноцепочечных Fv(sFv)-димеров (см., например Gruber et al., J. ImmunoL, 152:5368 (1994)) и получения триспецифических антител, описываемых, например, в Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991). Дополнительные неограничивающие примеры мультиспецифических и биспецифических форматов, которые пригодны для встраивания доменов, связывающих CD3, по настоящему изобретению включают, например, Fab-Fc-scFv («открывалка для бутылок») (XENCOR), Mab-scFv (XENCOR), Mab-Fv (XENCOR), двойной scFv (XENCOR), центральный Fv (XENCOR), центральный scFv(XENCOR), одноплечевой центральный scFv (XENCOR), Fab-Fab (XENCOR), Fab-Fv (XENCOR), mAb-Fv (XENCOR), mAb-Fab (XENCOR), DART (MacroGenics), BiTE (Amgen/Micromet), KiTE, IgG с универсальной легкой цепью (Genentech), TandAb (Affimed), Cross-Mab (Roche), SEED (EMD Serono), BEAT (Glenmark), TrioMab (Trion Pharma/Fresnius Biotech), DuetMab (MedImmune) и другие. Способы получения таких мультиспецифических антител раскрыты, например, в WO 95/09917; WO 2008/119566; WO 2008/119567; WO 2011/121110; WO 2010/037835; WO 2007/042261; WO 2007/110205; WO 2011/121110; WO 2012/055961; WO 2012/16067; WO 2016/086189; WO 2016/182751; WO 2015/006749; WO 2014/049003; WO 2013/177101; WO 2015/128509; US 7951917; US 2009/0252729; US 2014/0348839; US 7183076; Mazor et al., Mabs, Vol. 7, pages 377-389 (2015); Muda et al., Protein Engineering, Designe, & Selection, Vol. 24, pages 447-454 (2011); и Del Bano et al., Antibodies, Vol. 5, pages 1-23 (2016).

[00221] Еще одно иллюстративное антитело биспецифического формата, которое можно использовать в контексте настоящего изобретения, предусматривает использование первого иммуноглобулинового (Ig) CH3-домена и второго Ig CH3-домена, где первый и второй Ig CH3-домены отличаются друг от друга по меньшей мере одной аминокислотой, и отличие по меньшей мере одной аминокислоты снижает связывание биспецифического антитела с белком A по сравнению с биспецифическим антителом, у которого отсутствует отличие аминокислот. В одном варианте осуществления первый Ig CH3-домен связывает белок A, а второй Ig CH3-домен содержит мутацию, которая снижает или устраняет связывание белка A, такую как модификация H95R (согласно нумерации экзонов IMGT; H435R согласно нумерации EU). Второй CH3 может дополнительно содержать модификацию Y96F (согласно IMGT; Y436F согласно EU). Дополнительные модификации, которые могут встречаться в пределах второго CH3, включают: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M и V82I (согласно IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M и V422I согласно EU) в случае lgG1-антител; N44S, K52N и V82I (IMGT; N384S, K392N и V422I согласно EU) в случае lgG2-антител; и Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q и V82I (согласно IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q и V422I согласно EU) в случае lgG4-антител.

[00222] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть получены в виде сконструированных антител с тремя или более функциональными антигенсвязывающими сайтами, включая «антитела Octopus», раскрытые, например, в US 2006/0025576 A1.

[00223] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть получены в виде «FAb двойного действия» или «DAF», содержащих антигенсвязывающий сайт, который связывается с CD3, а также с другим, отличающимся антигеном, как раскрыто, например, в US 2008/0069820.

[00224] Как раскрыто на протяжении всего данного документа домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут предусматривать моноспецифические, биспецифические или мультиспецифические антитела. Мультиспецифические антитела могут быть специфическими в отношении разных эпитопов одного целевого полипептида или могут содержать антигенсвязывающие домены, специфические в отношении более одного целевого полипептида. См., например, Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244. Антитела по настоящему изобретению могут быть связаны с другой функциональной молекулой, например, другим пептидом или белком, или экспрессированы совместно с ней. Например, антитело или его фрагмент могут быть функционально связаны (например, за счет химического сопряжения, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иного способа) с одной или более другими молекулярными частицами, такими как другое антитело или фрагмент антитела, с получением биспецифического или мультиспецифического антитела со второй специфичностью связывания.

[00225] В определенных вариантах осуществления предусмотрены варианты аминокислотной последовательности доменов, связывающих CD3, и содержащих их антител по настоящему изобретению. Например, это может потребоваться для усиления аффинности связывания и/или других биологический свойств антитела. Варианты аминокислотной последовательности антитела могут быть получены посредством введения подходящих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или посредством пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеции, и/или вставки, и/или замены остатков в пределах аминокислотных последовательностей антитела. Для получения конечной конструкции можно выполнять любую комбинацию из делеции, вставки и замены, при условии, что конечная конструкция обладает требуемыми характеристиками, например, связыванием антигена. В определенных вариантах осуществления представлены такие варианты, которые имеют одну или более аминокислотных замен. Сайты, представляющие интерес для мутагенеза с заменами, включают CDR и FR. Аминокислотные замены могут быть введены в представляющее интерес антитело, а продукты подвергнуты скринингу в отношении требуемой активности, например, сохраненного/усиленного связывания антигена, сниженной иммуногенности или усиленных ADCC или CDC.

[00226] Один тип варианта с заменами предусматривает замену одного или более остатков гипервариабельного участка в исходном антителе (например, в гуманизированном или человеческом антителе). Обычно полученный вариант(ы), выбранный для дальнейшего исследования, будет иметь модификации (например, усиления) некоторых биологических свойств (например, повышенную аффинность, сниженную иммуногенность) по сравнению с исходным антителом и/или будет иметь практически сохраненные некоторые биологические свойства исходного антитела. Иллюстративный вариант с заменами представляет собой антитело с созревшей аффинностью, которое может быть успешно получено, например, с применением методик созревания аффинности на основе фагового дисплея. Вкратце, один или более остатков в CDR подвергают мутации, а также проводят представление вариантов антител на фаге и подвергают их скринингу в отношении конкретной биологической активности (например, аффинности связывания).

[00227] В CDR могут выполняться изменения (например, замены), например, для усиления аффинности антитела. Такие изменения можно выполнять в «горячих точках» CDR, т.е. остатках, кодируемых кодонами, которые подвергаются мутации с высокой частотой во время процесса соматического созревания (см., например, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)), и/или в остатках, которые контактируют с антигеном, при этом полученные варианты VH или VL подвергают тестированию в отношении аффинности связывания. Созревание аффинности путем конструирования и повторного отбора из вторичных библиотек было описано, например, в Hoogenboom et al. в Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N.J., (2001)). В некоторых вариантах осуществления созревания аффинности разнообразие вводят в гены вариабельных доменов, выбранные для созревания, посредством любого из различных способов (например, ПЦР сниженной точности, шаффлинга цепей или олигонуклеотид-направленного мутагенеза). Затем создают вторичную библиотеку. Затем библиотеку подвергают скринингу для идентификации любых вариантов антитела с требуемой аффинностью. Другой способ введения разнообразия предусматривает CDR-направленные подходы, при которых рандомизируют несколько остатков в CDR (например, 4-6 остатков за раз). Можно специфически идентифицировать остатки в CDR, вовлеченные в связывание антигена, например, с применением аланин-сканирующего мутагенеза или моделирования. В частности, зачастую целенаправленно воздействуют на CDR-H3 и CDR-L3.

[00228] В определенных вариантах осуществления замены, вставки или делеции могут встречаться в пределах одного или более CDR в доменах, связывающих CD3, и содержащих их антителах по настоящему изобретению при условии, что такие изменения практически не снижают способность антитела к связыванию антигена. Например, в CDR можно выполнять консервативные изменения (например, консервативный замены, представленные в данном документе), которые практически не снижают аффинность связывания. Такие изменения, например, могут находиться в CDR за пределами остатков, контактирующих с антигеном. В определенных вариантах осуществления вариантов последовательностей VH и VL, представленных выше, каждый CDR является или неизмененным, или содержит не более одной, двух или трех аминокислотных замен.

[00229] Применимый способ для идентификации остатков или участков антитела, на которые может быть нацелен мутагенез, называется «аланин-сканирующий мутагенез», как описано в Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. В данном способе идентифицируют остаток или группу целевых остатков (например, заряженных остатков, таких как arg, asp, his, lys и glu) и замещают нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланин или полиаланин), чтобы определить, воздействует ли это на взаимодействие антитела с антигеном. В положения аминокислот, демонстрирующие функциональную чувствительность к исходным заменам, могут быть введены дополнительные замены. В качестве альтернативы или дополнения для идентификации точек контакта между антителом и антигеном определяют кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело. Такие контактные остатки и соседние остатки могут выступать в качестве кандидатов для замены, на которые оказывают целенаправленное воздействие или которые устраняют. Варианты могут быть подвергнуты скринингу для определения того, обладают ли они требуемыми свойствами.

[00230] Вставки в аминокислотной последовательности включают амино- и/или карбокси-концевые слияния, варьирующиеся по длине от одного остатка до полипептидов, содержащих сотню или более остатков, а также вставки одного или более аминокислотных остатков внутри последовательности. Примеры концевых вставок включают антитело с N-концевым метиониловым остатком. Другие варианты вставок в молекулу антитела включают слияние N- или C-конца антитела с ферментом (например, в случае ADEPT) или полипептидом, который увеличивает время полужизни антитела в сыворотке крови.

[00231] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть изменены для повышения или уменьшения степени, в которой антитело является гликозилированным. Добавление или удаление сайтов гликозилирования в антитело к CD3 по настоящему изобретения можно легко осуществлять путем изменения аминокислотной последовательности таким образом, чтобы создавать или удалять один или более сайтов гликозилирования.

[00232] Если антитело содержит Fc-участок, может быть изменен углевод, присоединенный к нему. Антитела, продуцируемые в клетках млекопитающих, как правило, содержат разветвленный, двухантенный олигосахарид, который обычно присоединен посредством N-связи к Asn297 из CH2-домена Fc-участка. См., например, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в «стебле» двухантенной олигосахаридной структуры. В некоторых вариантах осуществления модификация олигосахарида в антителе по настоящему изобретению может выполняться с целью создания вариантов антитела с определенными улучшенными свойствами.

[00233] В определенных вариантах осуществления представлены варианты доменов, связывающих CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению, которые имеют углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, присоединенная (непосредственно или опосредованно) к Fc-участку. Например, количество фукозы в таком антителе может составлять от 1% до 80%, от 1% до 65%, от 5% до 65% или от 20% до 40%. Количество фукозы определяют путем подсчета среднего количества фукозы в пределах сахарной цепи при Asn297 относительно суммы всех гликоструктур, присоединенных к Asn297 (например сложных, гибридных и высокоманнозных структур), что измеряют с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF, как описано, например, в WO 2008/077546. Asn297 относится к аспарагиновому остатку, расположенному приблизительно в положении 297 в Fc-участке (нумерация остатков Fc-участка согласно EU); однако Asn297 может также располагаться на приблизительно ±3 аминокислоты выше или ниже положения 297, т.е. между положениями 294 и 300, вследствие незначительных вариаций последовательности у антител. Такие варианты фукозилирования могут характеризоваться усиленной функцией ADCC. См., например, публикации заявок на патент США №№ US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, связанных с «дефукозилированными» или «дефицитными по фукозе» вариантами антитела, включают: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Примеры клеточных линий, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают клетки CHO Lec13 c недостаточным фукозилированием белка (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); публикация заявки на патент США 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams et al., в частности, в примере 11), и нокаутные клеточные линии, такие как клетки CHO с нокаутом гена альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8 (см., например, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); и WO 2003/085107).

[00234] Дополнительно представлены варианты антител к CD3 с двураздельными олигосахаридами, например, в которых двухантенный олигосахарид, присоединенный к Fc-участку антитела, разделен надвое с помощью GlcNAc. Такие варианты антитела могут характеризоваться сниженным фукозилированием и/или усиленной функцией ADCC. Примеры таких вариантов антитела описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США №6602684 (Umana et al.) и US 2005/0123546 (Umana et al.). Также представлены варианты антитела с по меньшей мере одним галактозным остатком в олигосахариде, присоединенном к Fc-участку. Такие варианты антитела могут характеризоваться усиленной функцией CDC. Такие варианты антитела описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.) и WO 1999/22764 (Raju, S.).

[00235] В определенных вариантах осуществления в Fc-участок антитела к CD3 по настоящему изобретению может быть введена одна или более аминокислотных модификаций с получением тем самым варианта Fc-участка (см., например, US 2012/0251531). Вариант Fc-участка может содержать последовательность Fc-участка человека (например, Fc-участок IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека), содержащую аминокислотную модификацию (например, замену) в одном или более аминокислотных положений.

[00236] В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен вариант антитела к CD3, обладающий некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, что делает его желательным кандидатом для вариантов применения, в которых важен период полужизни антитела in vivo, в то время как некоторые эффекторные функции (такие как комплементзависимая и ADCC) являются необязательными или вредными. Для подтверждения снижения/устранения активности CDC и/или ADCC можно проводить in vitro и/или in vivo анализы цитотоксичности. Например, можно проводить анализы связывания с Fc-рецептором (FcR), чтобы убедиться в том, что антитело не проявляет связывания с FcγR (следовательно, вероятно, у него отсутствует активность ADCC), но сохраняет способность к связыванию с FcRn. Первичные клетки, опосредующие ADCC, NK-клетки экспрессируют только FcγRIII, при этом моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках обобщена в таблице 3 на странице 464 в Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991). Неограничивающие примеры in vitro анализов для оценки активности ADCC у представляющей интерес молекулы описаны в патенте США №5500362 (см., например Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) и Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); патенте США №5821337 (см. Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). В качестве альтернативы можно использовать способы анализов без применения радиоактивных веществ (см., например, ACTI™ нерадиоактивный анализ цитотоксичности с применением проточной цитометрии (Cell Technology, Inc., Маунтин-Вью, Калифорния) и нерадиоактивный анализ цитотоксичности CytoTox 96® (Promega, Медисон, Висконсин). Применимые эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) и клетки природные киллеры (NK). В качестве альтернативы или дополнения активность ADCC у представляющей интерес молекулы можно оценивать in vivo, например, на животной модели, такой, которая раскрыта в Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998). Также можно проводить анализы связывания с C1q, чтобы подтвердить, что антитело не способно к связыванию с C1q, и, следовательно, у него отсутствует активность CDC. См., например, ELISA для связывания C1q и C3c в WO 2006/029879 и WO 2005/100402. Для оценки активации комплемента можно осуществлять анализ CDC (см., например, Gazzano-Santoro et al. J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M. S. et al. Blood. 101:1045-1052 (2003); и Cragg, M. S. and M. J. Glennie Blood. 103:2738-2743 (2004)). Связывание с FcRn и определение in vivo клиренса/периода полужизни также можно осуществлять с применением способов, известных из уровня техники (см., например, Petkova, S. B. et al. Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)).

[00237] Антитела со сниженной эффекторной функцией включают антитела с заменой одного или более остатков 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 Fc-участка (патенты США №№6737056 и 8219149). Такие Fc-мутанты включают Fc-мутантов с заменами в двух или более аминокислотных положений 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемого Fc-мутанта «DANA» с заменой остатков 265 и 297 на аланин (патенты США №№7332581 и 8219149).

[00238] В определенных вариантах осуществления пролин в положении 329 в Fc-участке человеческого антитела дикого типа заменен на глицин или аргинин или аминокислотный остаток, достаточно большой, чтобы нарушить пролиновый «сендвич» на границе контакта Fc/Fc-гамма рецептор, которая образуется между пролином 329 в Fc и триптофановыми остатками Trp 87 и Trp 110 в FcgRIII (Sondermann et al.: Nature 406, 267-273 (20 Jul. 2000)). В определенных вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну дополнительную аминокислотную замену. В одном варианте осуществления дополнительная аминокислотная замена представляет собой S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D или P331S, а d еще одном варианте осуществления по меньшей мере одна дополнительная аминокислотная замена представляет собой L234A и L235A из Fc-участка IgG1 человека или S228P и L235E из Fc-участка IgG4 человека (см., например, US 2012/0251531), а в еще одном варианте осуществления по меньшей мере одна дополнительная аминокислотная замена представляет собой L234A, и L235A, и P329G из Fc-участка IgG1 человека.

[00239] Описаны некоторые варианты антитела с усиленным или ослабленным связыванием с FcR (см., например, патент США №6737056; WO 2004/056312, и Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001).)

[00240] В определенных вариантах осуществления вариант антитела содержит Fc-участок с одной или более аминокислотными заменами, которые усиливают ADCC, например, заменами в положениях 298, 333 и/или 334 Fc-участка (остатки согласно нумерации EU).

[00241] В некоторых вариантах осуществления изменения выполняют в Fc-участке, что приводит к измененному (т.е. либо усиленному, либо ослабленному) связыванию с C1q и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC), например, как описано в патенте США №6194551, WO 99/51642, и Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

[00242] Антитела с увеличенными периодами полужизни и усиленным связыванием с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), который отвечает за перенос материнских IgG к плоду (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) и Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), описаны в US 2005/0014934 A1 (Hinton et al.). Эти антитела содержат Fc-участок с одной или более заменами в нем, которые усиливают связывание Fc-участка с FcRn. Такие варианты Fc включают варианты с заменами в одном или более остатков: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434 Fc-участка, например, замену остатка 434 Fc-участка (патент США №7371826). См. также Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); патент США №5648260; патент США №5624821 и WO 94/29351 касательно других примеров вариантов Fc-участка.

[00243] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3 (например, биспецифическое антитело к CD3) содержит Fc-участок, содержащий мутацию N297G.

[00244] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3, содержащее мутацию N297G, содержит один или более константных доменов тяжелой цепи, где один или более константных доменов тяжелой цепи выбраны из первого CH1-домена (CH11), первого CH2-домена (CH21), первого CH3-домена (CH31), второго CH1-домена (CH12), второго CH2-домена (CH22) и второго CH3-домена (CH32). В некоторых случаях по меньшей мере один из одного или более константных доменов тяжелой цепи образует пару с другим константным доменом тяжелой цепи. В некоторых случаях каждый из CH31- и CH32-доменов содержит выпячивание или полость, и при этом выпячивание или полость в CH31-домене может располагаться в соответственно полости или выпячивании в CH32-домене. В некоторых случаях CH31- и CH32-домены встречаются на границе контакта между указанными выпячиванием и полостью. В некоторых случаях каждый из CH21- и CH22-доменов содержит выпячивание или полость, и при этом выпячивание или полость в CH21-домене может располагаться в соответственно полости или выпячивании в CH22-домене. В других случаях CH21- и CH22-домены встречаются на границе контакта между указанными выпячиванием и полостью. В некоторых случаях антитело к CD3 представляет собой IgG1-антитело.

[00245] В определенных вариантах осуществления может потребоваться создание сконструированных антител с введенным цистеином, например, «тио-MAb», в которых один или более остатков антитела заменены на цистеиновые остатки. В конкретных вариантах осуществления остатки с заменой находятся на доступных сайтах антитела. За счет замены этих остатков на цистеин реакционно-способные тиольные группы тем самым располагаются на доступных сайтах антитела и могут использоваться для конъюгирования антитела с другими фрагментами, такими как фрагменты, представляющие собой лекарственное средство, или фрагменты, представляющие собой линкер-лекарственное средство, для создания иммуноконъюгата, как дополнительно описано в данном документе. В определенных вариантах осуществления любой один или более из следующих остатков может быть заменен на цистеин: V205 (нумерация согласно Kabat) в легкой цепи; A118 (нумерация согласно EU) в тяжелой цепи и S400 (нумерация согласно EU) в Fc-участке тяжелой цепи. Сконструированные антитела с введенным цистеином могут быть получены так, как это описано, например, в патенте США №7521541.

[00246] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть дополнительно модифицированы так, чтобы они содержали дополнительные небелковые фрагменты, которые известны из уровня техники и являются легкодоступными. Фрагменты, подходящие для дериватизации антитела, включают без ограничения водорастворимые полимеры. Неограничивающие примеры водорастворимых полимеров включают без ограничения полиэтиленгликоль (PEG), сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (или гомополимеры, или статистические сополимеры), а также декстран или поли(н-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры полипропиленгликоля, сополимеры полипропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт и их смеси. Полиэтиленгликоль-пропиональдегид может иметь преимущества в производстве, которые обусловлены его стабильностью в воде. Полимер может иметь любую молекулярную массу и может быть разветвленным или неразветвленным. Число полимеров, присоединенных к антителу может варьироваться, и в случае присоединения более одного полимера они могут представлять собой одинаковые или разные молекулы. Обычно число и/или тип полимеров, применяемых для дериватизации, можно определяться, исходя из факторов, включающих без ограничения конкретные свойства или функции антитела, подлежащие усилению, будет ли производное антитела применяться в терапии при определенных условиях и т.д.

[00247] В другом варианте осуществления представлены конъюгаты антитела и небелкового фрагмента, который можно селективно нагревать при воздействии ионизирующего излучения. В одном варианте осуществления небелковый фрагмент представляет собой углеродную нанотрубку (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). Ионизирующее излучение может характеризоваться любой длиной волны и включает без ограничения длины волн, которые не наносят вред обычным клеткам, но которые нагревают небелковый фрагмент до температуры, при которой уничтожаются клетки, находящие вблизи антитела-небелкового фрагмента.

[00248] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть получены с применением рекомбинантных способов и композиций, например, описанных в патенте США №4816567. В одном варианте осуществления представлена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело к CD3, описанное в данном документе. Такая нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную последовательность, предусматривающую VL, и/или аминокислотную последовательность, предусматривающую VH антитела (например, легкую и/или тяжелую цепи антитела). В дополнительном варианте осуществления представлены один или более векторов (например, векторы экспрессии), содержащих такую нуклеиновую кислоту. В дополнительном варианте осуществления представлена клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту. В одном таком варианте осуществления клетка-хозяин содержит (например, была трансформирована с помощью): (1) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, предусматривающую VL антитела, и аминокислотную последовательность, предусматривающую VH антитела, или (2) первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, предусматривающую VL антитела, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, предусматривающую VH антитела. В одном варианте осуществления клетка-хозяин является эукариотической, например, клеткой яичников китайского хомячка (CHO) или лимфоидной клеткой (например, клеткой Y0, NS0, Sp20). В одном варианте осуществления представлен способ получения антитела к CD3, где способ предусматривает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую представленное выше антитело, при условиях, подходящих для экспрессии антитела, и необязательно извлечение антитела из клетки-хозяина (или культуральной среды клетки-хозяина).

[00249] Например, в случае рекомбинантного получения антитела к CD3 нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, например, описанное выше, выделяют и вставляют в один или более векторов для дальнейшего клонирования в клетку-хозяина и/или экспрессии в ней. Такую нуклеиновую кислоту можно легко выделять и секвенировать с применением традиционных процедур (например, с применением олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелую и легкую цепи антитела).

[00250] Подходящие клетки-хозяева для клонирования или экспрессии векторов, кодирующих антитело, включают прокариотические или эукариотические клетки, описанные в данном документе. Например, антитело может быть получено в бактериях, в частности, если не требуется гликозилирование и эффекторная функция Fc. Касательно экспрессии фрагментов антитела и полипептидов в бактериях см., например, патенты США №№5648237, 5789199 и 5840523. (см. также Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 245-254, где описана экспрессия фрагментов антитела в E. coli). После экспрессии антитело может быть выделено из массы бактериальных клеток в виде растворимой фракции и может быть подвергнуто дополнительной очистке.

[00251] Помимо прокариот, подходящими хозяевами для клонирования или экспрессии векторов, кодирующих антитело, являются эукариотические микроорганизмы, такие как мицелиальные грибы или дрожжи, включая грибы и штаммы дрожжей, пути гликозилирования которых были подвергнуты «гуманизации», что приводит к продуцированию антител с частично или полностью человеческим паттерном гликозилирования. См., например, Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), и Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006); WO 2009/036379; WO 2010/105256 и WO 2012/009568.

[00252] Клетки-хозяева, подходящие для экспрессии гликозилированного антитела, также получают из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных организмов). Примеры клеток беспозвоночных организмов включают клетки растений и насекомых. Были идентифицированы многочисленные штаммы бакуловирусов, которые можно применять в сочетании с клетками насекомых, в частности, для трансфекции клеток Spodoptera frugiperda.

[00253] В качестве хозяев также могут использоваться культуры клеток растений. См., например, патенты США №№5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429 (описывающие технологию PLANTIBODIES™ для получения антител в трансгенных растениях).

[00254] В качестве хозяев также могут применяться клетки позвоночных организмов. Например, можно применять линии клеток млекопитающих, которые адаптированы для роста в суспензии. Другими примерами применимых линий клеток-хозяев, представляющих собой клетки млекопитающих, является линия клеток почки обезьяны CV1, трансформированная с помощью SV40 (COS-7); линия клеток почки эмбриона человека (293 или клетки 293, описанные, например, в Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); клетки почки детенышей хомячка (BHK); мышиные клетки Сертоли (клетки TM4, описанные, например, в Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); клетки почки обезьяны (CV1); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76); клетки карциномы шейки матки человека (HELA); клетки почки собаки (MDCK); клетки печени крысы линии Buffalo (BRL 3A); клетки легкого человека (W138); клетки печени человека (Hep G2); клетки опухоли молочной железы мыши (MMT 060562); клетки TRI, описанные, например, в Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982); клетки MRC 5 и клетки FS4. Другие применимые линии клеток-хозяев, представляющие собой клетки млекопитающих, включают клетки яичника китайского хомячка (CHO), включая клетки DHFR-CHO (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)) и линии клеток миеломы, такие как Y0, NS0 и Sp2/0. Обзор некоторых линий клеток-хозяев, представляющих собой клетки млекопитающих, подходящих для продуцирования антител, см, например, в Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003).

[00255] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению можно идентифицировать, подвергать скринингу, отбирать или характеризовать по их физическим/химическим свойствам и/или биологической активности с помощью различных анализов, известных из уровня техники.

[00256] В одном аспекте антитело к CD3 по настоящему изобретению тестируют в отношении его антигенсвязывающей активности, например, с помощью известных способов, таких как ELISA, вестерн-блоттинг и т.д.

[00257] В другом аспекте анализы конкурентного связывания могут применяться для идентификации антитела, которое конкурирует с антителом к CD3 по настоящему изобретению за связывание с CD3.

[00258] В иллюстративном анализе конкурентного связывания иммобилизованный CD3 инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с CD3, и второе немеченое антитело, которое подлежит тестированию в отношении его способности конкурировать с первым антителом за связывание с CD3. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля иммобилизованный CD3 инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не содержащем второе немеченое антитело. После инкубации при условиях, которые допускают связывание первого антитела с CD3, избыток несвязавшегося антитела удаляют и измеряют количество метки, ассоциированной с иммобилизованным CD3. Если количество метки, ассоциированной с иммобилизированным CD3, значительно снижено в тестовом образце по сравнению с контрольным образцом, тогда это указывает на то, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с CD3. См., например, Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual. Ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.).

[00259] В одном аспекте представлены анализы для идентификации таких антител к CD3, которые обладают биологической активностью. Биологическая активность может включать, например, связывание с CD3 (например, CD3 на поверхности T-клетки) или его пептидным фрагментом, или in vivo, или in vitro, или ex vivo. В случае мультиспецифического (например, биспецифического) антитела к CD3 по настоящему изобретению (например, зависимого от T-клетки биспецифического антитела (TDB), имеющего одно плечо антитела к CD3 и одно плечо, которое распознает вторую биологическую молекулу, например, антиген клеточной поверхности, например, опухолевый антиген), биологическая активность также может включать, например, активацию эффекторных клеток (например, активацию T-клеток (например, CD8+ и/или CD4+ T-клеток)), рост популяции эффекторных клеток (т.е. увеличение количества T-клеток), снижение популяции целевых клеток (т.е. уменьшение популяции клеток, экспрессирующих вторую биологическую молекулу на своей клеточной поверхности) и/или уничтожение целевых клеток. Представлены антитела, обладающие такой биологической активностью in vivo и/или in vitro. В определенных вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению тестируют в отношении такой биологической активности, как это подробно описано в примерах, приведенных в данном документе ниже.

[00260] В некоторых вариантах осуществления активность предусматривает способность поддерживать уничтожение B-клеток и/или активацию цитотоксических T-клеток. В определенных вариантах осуществления антитело к CD3 по настоящему изобретению, нацеливающееся на B-клетки, тестируют в отношении такого уничтожения B-клеток и/или активации цитотоксического эффекта биологической активности T-клеток с помощью любого из способов, описанных в данном документе, в частности, в примерах. В некоторых вариантах осуществления любого из таких анализов активность PBMC могут быть выделены из цельной крови здоровых доноров путем разделения с применением Ficoll. В частности, человеческую кровь можно собирать в шприцы с гепарином и выделять PBMC с применением Leucosep и Ficoll Paque Plus. При необходимости CD4+ T- и CD8+ T-клетки можно разделять с помощью наборов Miltenyi в соответствии с инструкциями производителя.

[00261] Кроме того, клетки можно промывать в среде RPMI, содержащей 10% FBS, дополненной GlutaMax, пенициллином и стрептомицином, и ~0,2 миллиона суспендированных клеток вносят в 96-луночный планшет с U-образными лунками. Клетки можно культивировать в RPMI1640, дополненной 10% FBS, при 37°C в увлажненном стандартном инкубаторе для культур клеток. В случае анализов уничтожения клеток BJAB 20000 клеток BJAB можно инкубировать с эффекторными клетками, либо в виде huPBMC, либо очищенными T-клетками, при указанных для анализа соотношениях в присутствии различных концентраций TDB-антител в течение 24 часов. В случае анализов уничтожения эндогенных B-клеток 200000 huPBMC можно инкубировать с различными концентрациями TDB-антител в течение 24 часов.

[00262] После культивирования клетки можно промывать с помощью буфера FACS (0,5% BSA, 0,05% азида Na в PBS). Затем клетки можно окрашивать в буфере FACS, промывать с помощью буфера FACS и суспендировать в буфере FACS, содержащем 1 мкг/мл йодида пропидия. Данные можно собирать на проточном цитометре FACSCalibur и анализировать с применением FlowJo. В FACS живые B-клетки могут быть выделены как PI-CD19+ или PI-CD20+ B-клетки, а абсолютное число клеток можно подсчитать с помощью гранул FITC, добавленных в реакционную смесь в качестве внутреннего контроля подсчета. Процент (%) уничтожения клеток может быть рассчитан на основе контролей, не обработанных с помощью TDB. Активированные T-клетки можно выявлять по поверхностной экспрессии CD69 и CD25 с применением антитела к CD69, конъюгированного с FITC, и антитела к CD25, конъюгированного с PE.

[00263] В настоящем изобретении также представлены иммуноконъюгаты, содержащие домен, связывающие CD3, или содержащее его антитело по настоящему изобретению. В данном документе антитело к CD3 конъюгировано с одним или более цитотоксическими средствами, такими как химиотерапевтические средства или лекарственные средства, средства, ингибирующие рост, токсины (например, белковые токсины, ферментативно активные токсины бактериального, грибного, растительного или животного происхождения или их фрагменты) или радиоактивные изотопы.

[00264] В некоторых вариантах осуществления иммуноконъюгат представляет собой конъюгат антитела и лекарственного средства (ADC), в котором антитело конъюгировано с одним или более лекарственными средствами, включающими без ограничения майтанзиноид (см. патенты США №№5208020, 5416064 и европейский патент EP 0425235 B1); ауристатин, такой как фрагменты DE и DF лекарственного средства монометилауристатин (MMAE и MMAF) (см. патенты США №№5635483, и 5780588, и 7498298); доластатин; калихеамицин или его производное (см. патенты США №№5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 и 5877296; Hinman et al., Рак Res. 53:3336-3342 (1993); и Lode et al., Рак Res. 58:2925-2928 (1998)); антрациклин, такой как дауномицин или доксорубицин (см. Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); и патент США №6630579); метотрексат; виндезин; таксан, такой как доцетаксел, паклитаксел, ларотаксел, тесетаксел и ортатаксел; трихотецен и CC1065.

[00265] В некоторых вариантах осуществления иммуноконъюгат содержит антитело к CD3, описанное в данном документе, конъюгированное с ферментативно активным токсином или его фрагментом, включая без ограничения A-цепь дифтерийного токсина, несвязывающие активные фрагменты дифтерийного токсина, A-цепь экзотоксина (из Pseudomonas aeruginosa), A-цепь рицина, A-цепь арабина, A-цепь модецина, альфа-сарцин, белки Aleurites fordii, диантиновые белки, белки Phytolaca americana (PAPI, PAPII и PAP-S), ингибитор из Momordica charantia, курцин, кротин, ингибитор из Saponaria officinalis, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, еномицин и трикотецены.

[00266] В некоторых вариантах осуществления иммуноконъюгат содержит антитело к CD3, описанное в данном документе, конъюгированное с радиоактивным атомом с образованием радиоактивного конъюгата. Для получения радиоактивных конъюгатов доступны различные радиоактивные изотопы. Примеры включают At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 и радиоактивные изотопы Lu. Когда радиоактивный конъюгат применяют для выявления, он может содержать радиоактивный атом для сцинтиграфического исследования, например tc99m или I123, или спиновую метку для визуализации с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (также известного как магнитно-резонансная томография, mri), такую как опять же йод-123, йод-131, индий-111, фтор-19, углерод-13, азот-15, кислород-17, гадолиний, марганец или железо.

[00267] Конъюгаты антитела и цитотоксического средства можно получать с применением разнообразных бифункциональных белоксвязывающих средств, таких как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат-HCl), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис(пара-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(пара-диазонийбензоил)-этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6-диизоцианат) и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, можно получать иммунотоксин рицина, как описано в Vitetta et al., Science 238:1098 (1987). 1-Изотиоцианатобензил-3-метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (MX-DTPA), меченая углеродом-14, представляет собой иллюстративное хелатирующее средство для конъюгации радиоактивного нуклеотида с антителом. См. WO 94/11026. Линкер может представлять собой «расщепляемый линкер», облегчающий высвобождение цитотоксического лекарственного средства в клетке. Например, может применяться кислотолабильный линкер, пептидаза-чувствительный линкер, фотолабильный линкер, диметиловый линкер или дисульфидсодержащий линкер (Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); патент США №5208020).

[00268] В данном документе иммуноконъюгаты или ADC в явной форме подразумевают без ограничения такие конъюгаты, которые получены с помощью сшивающих реагентов, включая без ограничения BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC, и сульфо-SMPB, и SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые являются коммерчески доступными (например, от Pierce Biotechnology, Inc., Рокфорд, Иллинойс, США).

[00269] В определенных вариантах осуществления любое из антител к CD3 по настоящему изобретению (например, биспецифические антитела к CD3 по настоящему изобретению, которые связываются с CD3 и второй биологической молекулой, например, антигеном клеточной поверхности, например, опухолевым антигеном, такие как TDB-антитела по настоящему изобретению или их варианты) применимы для выявления присутствия CD3 в биологическом образце. Применяемый в данном документе термин «осуществление выявления» охватывает количественное или количественное выявление. В определенных вариантах осуществления биологический образец представляет собой клетку или ткань.

[00270] В одном варианте осуществления представлено антитело к CD3 для применения в способе диагностики или выявления. В дополнительном аспекте представлен способ выявления присутствия CD3 в биологическом образце. В определенных вариантах осуществления способ предусматривает приведение биологического образца в контакт с антителом к CD3, описанным в данном документе, при условиях, которые допускают связывание антитела к CD3 с CD3, и выявление, образуется ли комплекс между антителом к CD3 и CD3. Такой способ может представлять собой in vitro или in vivo способ.

[00271] В определенных вариантах осуществления представлены меченые антитела к CD3. Метки включают без ограничения метки или фрагменты, которые выявляют непосредственно (такие как флуоресцентные, хромофорные, электронноплотные, хемилюминесцентные и радиоактивные метки), а также фрагменты, такие как ферменты или лиганды, которые выявляют опосредованно, например, посредством ферментативной реакции или молекулярного взаимодействия. Иллюстративные метки включают без ограничения радиоизотопы 32P, 14C, 125I, 3H и 131I, флуорофоры, такие как хелаты редкоземельных металлов или флуоресцеин и его производные, родамин и его производные, дансил, умбеллиферон, люциферазы, например, люциферазу светлячка и бактериальную люциферазу (патент США №4737456), люциферин, 2,3-дигидрофталазиндионы, пероксидазу хрена (HRP), щелочную фосфатазу, β-галактозидазу, глюкоамилазу, лизоцим, сахаридоксидазы, например, глюкооксидазу, галактозоксидазу и глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназу, гетероциклические оксидазы, такие как уриказа и ксантиноксидаза, сопряженные с ферментом, который использует пероксид водорода для окисления красителя-предшественника, с таким как HRP, лактопероксидаза или микропероксидаза, биотин/авидин, спиновые метки, метка на основе бактериофагов, стабильные свободные радикалы и т.п.

[00272] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению могут быть получены в виде фармацевтических составов (также известных как «фармацевтические композиции») путем смешивания такого антитела, характеризующегося требуемой степенью чистоты, с одним или более необязательными фармацевтически приемлемыми носителями (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)) в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители обычно являются нетоксичными для реципиента при используемых дозировках и концентрациях, и они включают без ограничения: буферы, такие как фосфатный, цитратный и буферы на основе других органических кислот; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид; бензетония хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирты; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и мета-крезол); низкомолекулярные (менее приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие средства, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; металлосодержащие комплексы (например Zn-белковые комплексы) и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (PEG). В данном документе иллюстративные фармацевтически приемлемые носители дополнительно включают средства для диспергирования лекарственных средств в межклеточном пространстве, такие как растворимые нейтрально-активные гиалуронидазные гликопротеины (sHASEGP), например, человеческие растворимые PH-20 гиалуронидазные гликопротеины, такие как rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Определенные иллюстративные sHASEGP и способы применения, предусматривающие rHuPH20, описаны в публикации заявки на патент США №№2005/0260186 и 2006/0104968. В одном аспекте sHASEGP объединяют с одной или более дополнительными гликозаминогликаназами, такими как хондроитиназы.

[00273] Иллюстративные лиофилизированные составы на основе антитела описаны в патенте США №6267958. Водные составы на основе антитела включают составы, описанные в патенте США №6171586 и WO 2006/044908, составы, описанные во втором документе, содержат гистидин-ацетатный буфер.

[00274] Состав в данном документе также может содержать более одного активного ингредиента, если это требуется для конкретного подлежащего лечению показания, предпочтительно ингредиенты c комплементарными активностями, которые не оказывают отрицательного воздействия друг на друга. Например, кроме того, может быть желательным обеспечить дополнительное терапевтическое средство (например, химиотерапевтическое средство, цитотоксическое средство, средство, ингибирующее рост, и/или антигормональное средство, такое как упомянутые в данном документе выше). Такие активные ингредиенты соответствующим образом присутствуют в комбинации в количествах, которые являются эффективными для заданной цели.

[00275] Активные ингредиенты могут быть заключены в микрокапсулы, полученные, например, с помощью методик коацервации или с помощью полимеризации на границе раздела фаз, например, в гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и микрокапсулы из поли-(метилметацилата) соответственно, в коллоидные системы для доставки лекарственного средства (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методики раскрыты в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

[00276] Можно получать препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, при этом матрицы представлены в форме формованных изделий, например, пленок или микрокапсул.

[00277] Составы, подлежащие применению для in vivo введения, обычно являются стерильными. Стерильность может быть с легкостью достигнута, например, с помощью фильтрации через мембраны для стерильной фильтрации.

[00278] В определенных вариантах осуществления домены, связывающие CD3, и содержащие их антитела по настоящему изобретению применяют в терапевтических способах.

[00279] В одном аспекте представлено антитело к CD3 для применения в качестве лекарственного препарата. В дополнительных аспектах представлено антитело к CD3 для применения в лечении или замедлении прогрессирования клеточного пролиферативного нарушения (например, рака) или аутоиммунного нарушения (например, артрита, ревматоидного артрита, колита, воспалительного заболевания кишечника, аутоиммунного диабета I типа и т.д.). В определенных вариантах осуществления представлено антитело к CD3 для применения в способе лечения. В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело к CD3 для применения в способе лечения индивидуума, имеющего клеточное пролиферативное нарушение или аутоиммунное нарушение, который предусматривает введение индивидууму эффективного количества антитела к CD3. В одном таком варианте осуществления способ дополнительно предусматривает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, описанного ниже. В дополнительных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело к CD3 для применения в усилении иммунной функции у индивидуума, имеющего клеточное пролиферативное нарушение или аутоиммунное нарушение. В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлено антитело к CD3 для применения в способе усиления иммунной функции у индивидуума, имеющего клеточное пролиферативное нарушение или аутоиммунное нарушение, который предусматривает введение индивидууму эффективного антитела к CD3 для активации эффекторных клеток (например, T-клеток, например, CD8+ и/или CD4+ T-клеток, включая Treg), роста (увеличения) популяции эффекторных клеток, снижения популяции целевой клетки (например, клетки, экспрессирующей вторую биологическую молекулу, распознаваемую антителом к CD3 по настоящему изобретению, таким как биспецифическое TDB-антитело по настоящему изобретению) и/или уничтожения целевой клетки (например, целевой опухолевой клетки). «Индивидуумом» в соответствии с любым из вышеприведенных вариантов осуществления может быть человек.

[00280] В дополнительном аспекте в настоящем изобретении представлено применение антитела к CD3 в изготовлении или получении лекарственного препарата. В одном варианте осуществления лекарственный препарат предназначен для лечения клеточного пролиферативного нарушения (например, рака) или аутоиммунного нарушения (например, артрита, ревматоидного артрита, колита, воспалительного заболевания кишечника, аутоиммунного диабета I типа и т.д.). В дополнительном варианте осуществления лекарственный препарат предназначен для применения в способе лечения клеточного пролиферативного нарушения или аутоиммунного нарушения, который предусматривает введение индивидууму, имеющему клеточное пролиферативное нарушение или аутоиммунное нарушение, эффективного количества лекарственного препарата. В одном таком варианте осуществления способ дополнительно предусматривает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, описанного ниже. В дополнительном варианте осуществления лекарственный препарат предназначен для активации эффекторных клеток (например, T-клеток, например, CD8+ и/или CD4+ T-клеток, включая Treg), роста (увеличения) популяции эффекторных клеток, снижения популяции целевой клетки (например, клетки, экспрессирующей вторую биологическую молекулу, распознаваемую антителом к CD3 по настоящему изобретению, таким как биспецифическое TDB-антитело по настоящему изобретению) и/или уничтожения целевых клеток (например, целевых опухолевых клеток) у индивидуума. В дополнительном варианте осуществления лекарственный препарат предназначен для применения в способе усиления иммунной функции у индивидуума, имеющего клеточное пролиферативное нарушение или аутоиммунное нарушение, который предусматривает введение индивидууму эффективного количества лекарственного препарата для активации эффекторных клеток (например, T-клеток, например, CD8+ и/или CD4+ T-клеток), роста (увеличения) популяции эффекторных клеток, снижения популяции целевой клетки (например, клетки, экспрессирующей вторую биологическую молекулу, распознаваемую антителом к CD3 по настоящему изобретению, таким как биспецифическое TDB-антитело по настоящему изобретению) и/или уничтожения целевой клетки (например, целевой опухолевой клетки). «Индивидуумом» в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления может быть млекопитающее и, в частности, человек.

[00281] В дополнительном аспекте в настоящем изобретении представлен способ лечения нарушения, предусматривающего пролиферативное нарушение, онкологическое нарушение, иммуноонкологическое нарушение, неврологическое нарушение, когнитивное расстройство, нейродегенеративное нарушение, аутоиммунное нарушение. В одном варианте осуществления способ предусматривает введение индивидууму, имеющему такое нарушение, эффективного количества антитела к CD3. В одном таком варианте осуществления способ дополнительно предусматривает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, описанного ниже. «Индивидуумом» в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления может быть млекопитающее и, в частности, человек.

[00282] В дополнительном аспекте в настоящем изобретении представлен способ усиления иммунной функции у индивидуума, имеющего нарушение, у индивидуума, имеющего такое нарушение. В одном варианте осуществления способ предусматривает введение индивидууму эффективного количества антитела к CD3 для активации эффекторных клеток (например, T-клеток, например, CD8+ и/или CD4+ T-клеток), роста (увеличения) популяции эффекторных клеток, снижения популяции целевых клеток и/или уничтожения целевой клетки (например, целевой опухолевой клетки). В одном варианте осуществления «индивидуумом» является млекопитающее и, в частности, человек.

[00283] В дополнительном аспекте в настоящем изобретении представлен способ лечения гематологического рака, такого как B-клеточный рак (например, зрелая B-клеточная лимфома) посредством введения эффективного количества антитела к CD3 по настоящему изобретению, такого как биспецифическое TDB-антитело по настоящему изобретению, такое как TDB, нацеливающееся на B-клетки, такое как CD20-TDB, имеющее плечо антитела к CD3 и плечо антитела к CD20. В дополнительном аспекте варианта осуществления зрелая B-клеточная лимфома представляет собой неходжкинскую лимфому (NHL). В дополнительном аспекте варианта осуществления NHL выбрана из группы, включающей DLBCL B-клеточного типа из герминативного центра (GCB), активную DLBCL B-клеточного типа (ABC), фолликулярную лимфому (FL), лимфому из клеток мантийной зоны (MCL), острый миелоидный лейкоз (AML), хронический лимфоидный лейкоз (CLL), лимфому из клеток маргинальной зоны (MZL), мелкоклеточный лимфоцитарный лейкоз (SLL), лимфоплазмацитарную лимфому (LL), макроглобулинемию Вальденстрема (WM), лимфому центральной нервной системы (CNSL), лимфому Беркитта (BL), B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, лимфому из клеток маргинальной зоны селезенки, волосатоклеточный лейкоз, лимфому/лейкоз селезенки, неклассифицируемые, диффузную B-мелкоклеточную лимфому из красной пульпы селезенки, вариант волосатоклеточного лейкоза, макроглобулинемию Вальденстрема, болезни тяжелых цепей, болезнь тяжелых цепей, болезнь γ-тяжелой цепи, болезнь μ-тяжелой цепи, плазмаклеточную миелому, одиночную плазмацитому кости, внекостную плазмацитому, экстранодальную лимфому из клеток маргинальной зоны лимфоидной ткани слизистых оболочек (MALT-лимфому), узловую лимфому из клеток маргинальной зоны, узловую лимфому из клеток маргинальной зоны у детей, фолликулярную лимфому у детей, первичную кожную лимфому из клеток фолликулярного центра, B-крупноклеточную лимфому, богатую Т-клетками/гистиоцитами, первичную DLBCL ЦНС, первичную кожную DLBCL, ножного типа, EBV-положительную DLBCL у лиц пожилого возраста, DLBCL, ассоциированную с хроническим воспалением, лимфоматоидный гранулематоз, первичную средостенную (тимическую) B-крупноклеточную лимфому, интраваскулярную B-крупноклеточную лимфому, ALK-положительную B-крупноклеточную лимфому, плазмобластную лимфому, B-крупноклеточную лимфому, возникающую при HHV8-ассоциированной многоочаговой болезни Кастлемана, первичную выпотную лимфому: B-клеточную лимфому, неклассифицируемую, занимающую промежуточное положение по признакам между диффузной В-крупноклеточной лимфомой и лимфомой Беркитта, и B-клеточную лимфому, неклассифицируемую, занимающую промежуточное положение по признакам между диффузной В-крупноклеточной лимфомой и классической лимфомой Ходжкина. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения способ предусматривает лечение рака, предусматривающего DLBCL B-клеточного типа из герминативного центра (GCB), активную DLBCL B-клеточного типа (ABC), фолликулярную лимфому (FL), лимфому из клеток мантийной зоны (MCL), острый миелоидный лейкоз (AML), хронический лимфоидный лейкоз (CLL), лимфому из клеток маргинальной зоны (MZL), мелкоклеточный лимфоцитарный лейкоз (SLL), лимфоплазмацитарную лимфому (LL), макроглобулинемию Вальденстрема (WM), лимфому центральной нервной системы (CNSL) или лимфому Беркитта (BL).

[00284] В одном варианте осуществления способ предусматривает введение индивидууму, имеющему такой гематологический рак (например, B-клеточный рак, например, B-клеточную лимфому), эффективного количества антитела к CD3 по настоящему изобретению, такого как биспецифическое TDB-антитело, такое как CD20-TDB, содержащее плечо антитела, нацеливающегося на CD20, и плечо антитела, нацеливающегося на CD3. В других вариантах осуществления CD20-TDB вводят совместно с одним или более дополнительными терапевтическими средствами. В одном варианте осуществления терапевтическое средство представляет собой антитело, нацеливающееся на CD20. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с одним или более антителами, нацеливающимися на CD20, выбранными из химерного моноклонального антитела к CD20, ритуксимаба (Rituxan®), или моноклонального антитела к CD20, обинутузумаба (Gazyva®). В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом и ритуксимабом.

[00285] В одном дополнительном варианте осуществления антитело к CD3 по настоящему изобретению (например, CD20-TDB) с моноклональным антителом CD20 или без него вводят с дополнительным химиотерапевтическим средством и/или конъюгатом антитела и лекарственного средства (ADC). В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с одним или более дополнительными химиотерапевтическими средствами, выбранными из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизолона (CHOP). В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ADC. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с CHOP, при этом винкристин замещен на ADC. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ADC, выбранным из конъюгата антитела к CD79b и лекарственного средства (такого как антитело к-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE или конъюгат антитела к CD79b и лекарственного средства, описанных в любом из патента США №8088378 и/или US 2014/0030280, или полатузумаб-ведотин), конъюгата антитела к CD19 и лекарственного средства, конъюгата антитела к CD22 и лекарственного средства, конъюгата антитела к CD45 и лекарственного средства и конъюгата антитела к CD32 и лекарственного средства.

[00286] В одном другом варианте осуществления терапевтическое средство представляет собой биологический модификатор. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с одним или более биологическими модификаторами, выбранными из ингибитора BCL-2 (такого как GDC-0199/ABT-199), леналидомида (Revlimid®), ингибитора PI3K-дельта (такого как иделалисиб (Zydelig®)), антагониста связывания PD-1-оси, агониста, например, антитела-агониста, направленного против активирующей костимулирующей молекулы, например, CD40, CD226, CD28, OX40 (например, AgonOX), GITR, CD137 (также известного как TNFRSF9, 4-1 BB или ILA), CD27 (например, CDX-1127), HVEM или CD127, антагониста, например, антитела-антагониста, направленного против ингибирующей костимулирующей молекулы, например, CTLA-4 (также известной как CD152), PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO (например, 1-метил-D-триптофан (также известного как 1-D-MT)), TIGIT, MICA/B, GITR (например, TRX518) или аргиназы, ипилимумаба (также известного как MDX-010, MDX-101 или Yervoy®), тремелимумба (также известного как тицилимумаб или CP-675,206), урелумаба (также известного как BMS-663513), MGA271, антагониста, направленного против TGF-бета, например, метелимумаба (также известного как CAT-192), фрезолимумаба (также известного как GC1008), LY2157299k, и адоптивного переноса T-клетки (например, цитотоксической T-клетки или CTL), экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), например, адоптивного переноса T-клетки, содержащей доминантно-негативный рецептор TGF-бета, например, доминантно-негативный рецептор TGF-бета II типа.

[00287] В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом и одним или более химиотерапевтическими средствами. В одном таком варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом и CHOP. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом и ADC. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом и CHOP, при этом винкристин замещен на ADC. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ADC, выбранным из конъюгата антитела к CD79b и лекарственного средства (такого как антитело к-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE или конъюгат антитела к CD79b и лекарственного средства, описанных в любом из патента США №8088378 и/или US 2014/0030280, или полатузумаб-ведотин), конъюгата антитела к CD19 и лекарственного средства, конъюгата антитела к CD22 и лекарственного средства, конъюгата антитела к CD45 и лекарственного средства и конъюгата антитела к CD32 и лекарственного средства. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом и одним или более биологическими модификаторами, выбранными из ингибитора BCL-2 (такого как GDC-0199/ABT-199), леналидомида (Revlimid®), ингибитора PI3K-дельта (такого как иделалисиб (Zydelig®)), антагониста связывания PD-1-оси, агониста, например, антитела-агониста, направленного против активирующей костимулирующей молекулы, например, CD40, CD226, CD28, OX40 (например, AgonOX), GITR, CD137 (также известного как TNFRSF9, 4-1 BB или ILA), CD27 (например, CDX-1127), HVEM или CD127, антагониста, например, антитела-антагониста, направленного против ингибирующей костимулирующей молекулы, например, CTLA-4 (также известной как CD152), PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO (например, 1-метил-D-триптофан (также известного как 1-D-MT)), TIGIT, MICA/B, GITR (например, TRX518) или аргиназы, ипилимумаба (также известного как MDX-010, MDX-101 или Yervoy®), тремелимумба (также известного как тицилимумаб или CP-675,206), урелумаба (также известного как BMS-663513), MGA271, антагониста, направленного против TGF-бета, например, метелимумаба (также известного как CAT-192), фрезолимумаба (также известного как GC1008), LY2157299k, и адоптивным переносом T-клетки (например, цитотоксической T-клетки или CTL), экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), например, адоптивным переносом T-клетки, содержащей доминантно-негативный рецептор TGF-бета, например, доминантно-негативный рецептор TGF-бета II типа.

[00288] В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом, одним или более химиотерапевтическими средствами и одним или более биологическими модификаторами, выбранными из ингибитора BCL-2 (такого как GDC-0199/ABT-199), леналидомида (Revlimid®), ингибитора PI3K-дельта (такого как иделалисиб (Zydelig®)), антагониста связывания PD-1-оси, агониста, например, антитела-агониста, направленного против активирующей костимулирующей молекулы, например, CD40, CD226, CD28, OX40 (например, AgonOX), GITR, CD137 (также известного как TNFRSF9, 4-1 BB или ILA), CD27 (например, CDX-1127), HVEM или CD127, антагониста, например, антитела-антагониста, направленного против ингибирующей костимулирующей молекулы, например, CTLA-4 (также известной как CD152), PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO (например, 1-метил-D-триптофан (также известного как 1-D-MT)), TIGIT, MICA/B, GITR (например, TRX518) или аргиназы, ипилимумаба (также известного как MDX-010, MDX-101 или Yervoy®), тремелимумба (также известного как тицилимумаб или CP-675,206), урелумаба (также известного как BMS-663513), MGA271, антагониста, направленного против TGF-бета, например, метелимумаба (также известного как CAT-192), фрезолимумаба (также известного как GC1008), LY2157299k, и адоптивным переносом T-клетки (например, цитотоксической T-клетки или CTL), экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), например, адоптивным переносом T-клетки, содержащей доминантно-негативный рецептор TGF-бета, например, доминантно-негативный рецептор TGF-бета II типа.

[00289] В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ритуксимабом, ADC и одним или более биологическими модификаторами, выбранными из ингибитора BCL-2 (такого как GDC-0199/ABT-199), леналидомида (Revlimid®), ингибитора PI3K-дельта (такого как иделалисиб (Zydelig®)), антагониста связывания PD-1-оси, агониста, например, антитела-агониста, направленного против активирующей костимулирующей молекулы, например, CD40, CD226, CD28, OX40 (например, AgonOX), GITR, CD137 (также известного как TNFRSF9, 4-1 BB или ILA), CD27 (например, CDX-1127), HVEM или CD127, антагониста, например, антитела-антагониста, направленного против ингибирующей костимулирующей молекулы, например, CTLA-4 (также известной как CD152), PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO (например, 1-метил-D-триптофан (также известного как 1-D-MT)), TIGIT, MICA/B, GITR (например, TRX518) или аргиназы, ипилимумаба (также известного как MDX-010, MDX-101 или Yervoy®), тремелимумба (также известного как тицилимумаб или CP-675,206), урелумаба (также известного как BMS-663513), MGA271, антагониста, направленного против TGF-бета, например, метелимумаба (также известного как CAT-192), фрезолимумаба (также известного как GC1008), LY2157299k, и адоптивным переносом T-клетки (например, цитотоксической T-клетки или CTL), экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), например, адоптивным переносом T-клетки, содержащей доминантно-негативный рецептор TGF-бета, например, доминантно-негативный рецептор TGF-бета II типа.

[00290] В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом и одним или более химиотерапевтических средств. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом и CHOP. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом и ADC. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом и CHOP, при этом винкристин замещен на ADC. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с ADC, выбранным из конъюгата антитела к CD79b и лекарственного средства (такого как антитело к-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE или конъюгат антитела к CD79b и лекарственного средства, описанных в любом из патента США №8088378 и/или US 2014/0030280, или полатузумаб-ведотин), конъюгата антитела к CD19 и лекарственного средства, конъюгата антитела к CD22 и лекарственного средства, конъюгата антитела к CD45 и лекарственного средства и конъюгата антитела к CD32 и лекарственного средства. В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом и одним или более биологическими модификаторами, выбранными из ингибитора BCL-2 (такого как GDC-0199/ABT-199), леналидомида (Revlimid®), ингибитора PI3K-дельта (такого как иделалисиб (Zydelig®)), антагониста связывания PD-1-оси, агониста, например, антитела-агониста, направленного против активирующей костимулирующей молекулы, например, CD40, CD226, CD28, OX40 (например, AgonOX), GITR, CD137 (также известного как TNFRSF9, 4-1 BB или ILA), CD27 (например, CDX-1127), HVEM или CD127, антагониста, например, антитела-антагониста, направленного против ингибирующей костимулирующей молекулы, например, CTLA-4 (также известной как CD152), PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO (например, 1-метил-D-триптофан (также известного как 1-D-MT)), TIGIT, MICA/B, GITR (например, TRX518) или аргиназы, ипилимумаба (также известного как MDX-010, MDX-101 или Yervoy®), тремелимумба (также известного как тицилимумаб или CP-675,206), урелумаба (также известного как BMS-663513), MGA271, антагониста, направленного против TGF-бета, например, метелимумаба (также известного как CAT-192), фрезолимумаба (также известного как GC1008), LY2157299k, и адоптивным переносом T-клетки (например, цитотоксической T-клетки или CTL), экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), например, адоптивным переносом T-клетки, содержащей доминантно-негативный рецептор TGF-бета, например, доминантно-негативный рецептор TGF-бета II типа.

[00291] В одном варианте осуществления CD20-TDB вводят совместно с обинутузумабом, ADC и одним или более биологическими модификаторами, выбранными из ингибитора BCL-2 (такого как GDC-0199/ABT-199), леналидомида (Revlimid®), ингибитора PI3K-дельта (такого как иделалисиб (Zydelig®)), антагониста связывания PD-1-оси, агониста, например, антитела-агониста, направленного против активирующей костимулирующей молекулы, например, CD40, CD226, CD28, OX40 (например, AgonOX), GITR, CD137 (также известного как TNFRSF9, 4-1 BB или ILA), CD27 (например, CDX-1127), HVEM или CD127, антагониста, например, антитела-антагониста, направленного против ингибирующей костимулирующей молекулы, например, CTLA-4 (также известной как CD152), PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO (например, 1-метил-D-триптофан (также известного как 1-D-MT)), TIGIT, MICA/B, GITR (например, TRX518) или аргиназы, ипилимумаба (также известного как MDX-010, MDX-101 или Yervoy®), тремелимумба (также известного как тицилимумаб или CP-675,206), урелумаба (также известного как BMS-663513), MGA271, антагониста, направленного против TGF-бета, например, метелимумаба (также известного как CAT-192), фрезолимумаба (также известного как GC1008), LY2157299k, и адоптивным переносом T-клетки (например, цитотоксической T-клетки или CTL), экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), например, адоптивным переносом T-клетки, содержащей доминантно-негативный рецептор TGF-бета, например, доминантно-негативный рецептор TGF-бета II типа.

[00292] В дополнительном аспекте настоящего изобретения дополнительная терапия предусматривает антитело к CD20. В одном варианте осуществления антитело к CD20 представляет собой ритуксимаб. В одном варианте осуществления антитело к CD20 представляет собой гуманизированное антитело B-Ly1. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело B-Ly1 представляет собой обинитузумаб. В одном варианте осуществления антитело к CD20 представляет собой офатумумаб, ублитуксимаб и/или ибритумомаб тиуксетан.

[00293] В дополнительном аспекте настоящего изобретения дополнительная терапия предусматривает алкилирующее средство. В одном варианте осуществления алкилирующее средство представляет собой 4-[5-[бис(2-хлорэтил)амино]-1-метилбензимидазоl-2-ил]бутановую кислоту и ее соли. В одном варианте осуществления алкилирующее средство представляет собой бендамустин.

[00294] В дополнительном аспекте настоящего изобретения дополнительная терапия предусматривает ингибитор BCL-2. В одном варианте осуществления ингибитор BCL-2 представляет собой 4-(4-{[2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-ен-1-ил]метил}пиперазин-1-ил)-N-({3-нитро-4-[(тетрагидро-2H-пиран-4-илметил)амино]фенил}сульфонил)-2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)бензамид и его соли. В одном варианте осуществления ингибитор BCL-2 представляет собой венетоклакс (№ по CAS: 1257044-40-8).

[00295] В дополнительном аспекте настоящего изобретения дополнительная терапия предусматривает ингибитор фосфоинозитид-3-киназы (PI3K). В одном варианте осуществления ингибитор PI3K ингибирует дельта-изоформу PI3K (т.е. P1106). В некоторых вариантах осуществления ингибитор PI3K представляет собой 5-фтор-3-фенил-2-[(1S)-1-(7H-пурин-6-иламино)пропил]-4(3H)-хиназолинон и его соли. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PI3K представляет собой иделалисиб (№ по CAS: 870281-82-6). В одном варианте осуществления ингибитор PI3K ингибирует альфа- и дельта-изоформы PI3K. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PI3K представляет собой 2-{3-[2-(1-изопропил-3-метил-1H-1,2-4-триазол-5-ил)-5,6-дигидробензо[f]имидазо[1,2-d][1,4]оксазепин-9-ил]-1H-пиразол-1-ил}-2-метилпропанамид и его соли.

[00296] В дополнительном аспекте настоящего изобретения дополнительная терапия предусматривает ингибитор тирозинкиназы Брутона (BTK). В одном варианте осуществления ингибитор BTK представляет собой 1-[(3R)-3-[4-амино-3-(4-феноксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]пиперидин-1-ил]проп-2-ен-1-он и его соли. В одном варианте осуществления ингибитор BTK представляет собой ибрутиниб (№ по CAS: 936563-96-1).

[00297] В дополнительном аспекте настоящего изобретения дополнительная терапия предусматривает талидомид или его производное. В одном варианте осуществления талидомид или его производное представляют собой (RS)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион и его соли. В одном варианте осуществления талидомид или его производное представляют собой лендалидомид (№ по CAS: 191732-72-6).

[00298] В дополнительном аспекте настоящего изобретения дополнительная терапия предусматривает одно или более из циклофосфамида, доксорубицина, винкристина или преднизолона (CHOP). В одном варианте осуществления дополнительная терапия дополнительно предусматривает антитело к CD20, описанное выше (например, GA-101 и/или Rituxan®). Любые из вышеприведенных способов и видов терапии могут применяться без ограничения для лечения любого рака, включая, например, лечение B-клеточного рака или рака молочной железы.

[00299] В дополнительном аспекте в настоящем изобретении представлен способ лечения HER2-положительных видов рака. В одном варианте осуществления способ предусматривает введение индивидууму, имеющему такой рак, эффективного количества антител к HER2 по настоящему изобретению, такого как биспецифическое TDB-антитело с плечом, нацеливающимся на HER2, и плечом, нацеливающимся на CD3. В предпочтительном варианте осуществления HER2-TDB обладает приемлемым профилем токсичности при введении пациенту эффективной дозы. В одном варианте осуществления CD3-плечо HER2-TDB с приемлемым профилем токсичности представляет собой CD3-плечо с низкой аффинностью. В одном варианте осуществления CD3-плечо HER2-TDB с приемлемым профилем токсичность представляет собой 40G5c.

[00300] В предпочтительном варианте осуществления HER2-положительный рак представляет собой HER2-положительный рак молочной железы или HER2-положительный рак желудка. В одном варианте осуществления HER2 TDB вводят совместно с одним или более дополнительными терапевтическими средствами, которые нацеливаются на HER-путь. В одном варианте осуществления терапевтическое средство, которое нацеливается на HER-путь, выбрано из ингибитора EGFR, ингибитора HER2, ингибитора HER3 и/или ингибитора HER4. В одном варианте осуществления HER2 TDB вводят совместно с одним или более дополнительными терапевтическими средствами, выбранными из трастузумаба (Herceptin®), T-DM1 (Kadcyla®) и пертузумаба (Perjeta®). В одном варианте осуществления HER2 TDB вводят совместно с трастузумабом. В одном варианте осуществления HER2 TDB вводят совместно с T-DM1. В одном варианте осуществления HER2 TDB вводят совместно с пертузумабом. В одном варианте осуществления HER2 TDB вводят совместно с трастузумабом и пертузумабом. В одном варианте осуществления HER2 TDB вводят совместно с T-DM1 и пертузумаб.

[00301] В дополнительном аспекте в настоящем изобретении представлены фармацевтические составы, содержащие любое из антител к CD3, представленных в данном документе, например, для применения в любом из вышеперечисленных терапевтических способов. В одном варианте осуществления фармацевтический состав содержит любое из антител к CD3, представленных в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В другом варианте осуществления фармацевтический состав содержит любое из антител к CD3, представленных в данном документе, и по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например, описанное в данном документе.

[00302] Антитела по настоящему изобретению можно использовать либо отдельно, либо в комбинации с другими средствами в терапии. Например, антитело по настоящему изобретению может вводиться совместно с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим средством. В определенных вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство, средство, ингибирующее рост, цитотоксическое средство, средство, применяемое в лучевой терапии, антиангиогенное средство, апоптическое средство, противотубулиновое средство или другое средство, такое как антагонист рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (например, ингибитор тирозинкиназы), ингибитор HER1/EGFR (например, эрлотиниб (Tarceva™)), ингибитор фактора роста тромбоцитов (например, Gleevec™ (иматиниба мезилат)), ингибитор COX-2 (например, целекоксиб), интерферон, цитокин, антитело, отличное от антитела к CD3 по настоящему изобретению, такое как антитело, которое связывается с одной или более из следующих мишеней: ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-бета, BIyS, APRIL, BCMA VEGF или рецептором(ами) VEGF, TRAIL/Apo2, PD-1, PD-L1, PD-L2 или другим биологически активным или органическим химическим средством.

[00303] В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении представлен способ, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой глюкокортикоид. В одном варианте осуществления глюкокортикоид представляет собой дексаметазон.

[00304] Такие виды комбинированной терапии, отмеченные выше, охватывают комбинированное введение (при котором два или более терапевтических средств включают в один и тот же или отдельные составы) и раздельное введение, в случае которого введение антитела по настоящему изобретению может происходить до, одновременно и/или после введения дополнительного терапевтического средства или средств. В одном варианте осуществления введение антитела к CD3 и введение дополнительного терапевтического средства происходит в пределах приблизительно одного месяца, или в пределах приблизительно одной, двух или трех недель, или в пределах приблизительно одной, двух, трех, четырех, пяти или шести дней друг от друга. Антитела к CD3 по настоящему изобретению (например, биспецифические антитела к CD3 по настоящему изобретению, которые связываются с CD3 и второй биологической молекулой, например, антигеном клеточной поверхности, например, опухолевым антигеном, таким как TDB-антитело по настоящему изобретению или его вариантом) также можно применять в комбинации с лучевой терапией.

[00305] Антитело по настоящему изобретению (и/или любое дополнительное терапевтическое средство) может быть введено с помощью любых подходящих способов, включая парентеральное, внутрилегочное и интраназальное и, если это требуется для местного лечения, внутриочаговое введение. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. В некоторых вариантах осуществления антитело вводят с помощью подкожного введения. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD3, введенное с помощью подкожной инъекции, проявляет менее токсичный ответ у пациента, чем то же антитело к CD3, вводимое с помощью внутривенной инъекции. Введение дозы может осуществляться с помощью любого подходящего пути введения, например, посредством инъекций, таких как внутривенные или подкожные инъекции, отчасти в зависимости от того, является ли введение краткосрочным или хроническим. В данном документе подразумеваются различные схемы введения доз, включая без ограничения однократное или множественное введения через различные моменты времени, болюсное введение и импульсную инфузию.

[00306] Антитела по настоящему изобретению будут составляться, разделяться на дозы и вводиться в соответствии с надлежащей медицинской практикой. Факторы, рассматриваемые в данном контексте, включают конкретное подлежащее лечению нарушение, конкретного подлежащего лечению млекопитающего, клиническое состояние отдельного пациента, причину нарушения, участок для доставки средства, способ введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим врачам. Антитело может и не быть, но необязательно составлено с одним или более средствами, применяемыми в настоящее время для предупреждения или лечения рассматриваемого нарушения. Эффективное количество таких других средств зависит от количества антитела, присутствующего в составе, типа нарушения или лечения, и других факторов, рассмотренных выше. Их обычно применяют в таких же дозировках и путях введения, которые описаны в данном документе, или в дозировках, составляющих от приблизительно 1 до 99% от дозировок, описанных в данном документе, или в любой дозировке и посредством любого пути, которые эмпирически/клинически определены как подходящие.

[00307] В случае предупреждения или лечения заболевания подходящая дозировка антитела по настоящему изобретению (применяемого отдельно или в комбинации с одним или более другими дополнительными терапевтическими средствами) будет зависеть от типа подлежащего лечению заболевания, типа антитела, тяжести и течения заболевания, от того, вводится ли антитело в профилактических или терапевтический целях, предшествующей терапии, клинического анамнеза пациента и ответа на антитело, а также решения лечащего врача. Антитело соответствующим образом вводят пациенту за один момент времени или в течении серии обработок.

[00308] В качестве общего предложения терапевтически эффективное количество антитела к CD3, вводимое человеку, будет находиться в диапазоне от приблизительно 0,01 до приблизительно 100 мг/кг веса тела пациента, независимо от того, вводится ли оно за одно или более введений. В некоторых вариантах осуществления, например, антитело применяют из расчета от приблизительно 0,01 до приблизительно 45 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 35 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 25 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 15 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 0,01 до приблизительно 5 мг/кг или от приблизительно 0,01 до приблизительно 1 мг/кг при ежедневном введении. В одном варианте осуществления антитело к CD3, описанное в данном документе, вводят человеку в дозе, составляющей приблизительно 100 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 600 мг, приблизительно 700 мг, приблизительно 800 мг, приблизительно 900 мг, приблизительно 1000 мг, приблизительно 1100 мг, приблизительно 1200 мг, приблизительно 1300 мг или приблизительно 1400 мг в день 1 циклов продолжительностью 21 день. Доза может вводится в виде однократной дозы или в виде множественных доз (например, 2 или 3 доз), таких как инфузии. В случае повторных введений через несколько дней или более, в зависимости от состояния, лечение обычно будет поддерживаться до проявления требуемого подавления симптомов заболевания. Одна иллюстративная дозировка антитела будет находиться в диапазоне от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг. Таким образом, пациенту могут вводиться одна или более доз, составляющих приблизительно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг или 10 мг/кг (или любая их комбинация). Такие дозы могут вводиться с перерывами, например, через неделю или через три недели (например, так, чтобы пациент получил от приблизительно двух до приблизительно двадцати или, например, приблизительно шесть доз антитела к CD3). Может вводиться начальная более высокая ударная доза с последующими одной или более низкими дозами. Прогресс данной терапии легко отслеживать с помощью традиционных методик и анализов.

[00309] В некоторых вариантах осуществления способы могут дополнительно предусматривать дополнительную терапию. Дополнительная терапия может представлять собой лучевую терапию, оперативное вмешательство, химиотерапию, генную терапию, ДНК-терапию, вирусную терапию, РНК-терапию, иммунотерапию, трансплантацию костного мозга, нанотерапию, терапию моноклональными антителами или комбинацию вышеуказанных. Дополнительная терапия может быть представлена в форме адъювантной или неоадъювантной терапии. В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой введение низкомолекулярного ферментативного ингибитора или противометастатического средства. В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой введение средств, ограничивающих побочные эффекты (например, средств, предназначенных для уменьшения частоты возникновения и/или тяжести побочных эффектов лечения, таких как противорвотные средства и т.д.). В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой лучевую терапию. В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой хирургическое вмешательство. В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой комбинацию лучевой терапии и хирургического вмешательства. В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой облучение гамма-лучами. В некоторых вариантах осуществления дополнительная терапия может представлять собой отдельное введение одного или более терапевтических средств, описанных выше.

[00310] В другом аспекте настоящего изобретения представлено изделие, содержащее материалы, применимые для лечения, предупреждения и/или диагностики описанных выше нарушений. Изделие содержит контейнер и этикетку или листок-вкладыш на контейнере, или они ассоциированны с ним. Подходящие контейнеры включают, например, бутыли, флаконы, шприцы, мешки для IV-растворов и т.д. Контейнеры могут быть образованы из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию, которая собственно сама находится в нем или объединена с другой композицией, эффективной для лечения, предупреждения и/или диагностики состояния, и он может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может представлять собой мешок для внутривенных растворов или флакон, имеющий пробку, которая протыкается с помощью иглы для подкожных инъекций). По меньшей мере одним активным средством в композиции является антитело по настоящему изобретению. Этикетка или листок-вкладыш указывают на то, что композицию применяют для лечения выбранного состояния. Более того, изделие может содержать (a) первый контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция содержит антитело по настоящему изобретению; и (b) второй контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция содержит дополнительное цитотоксическое средство или иное терапевтическое средство. В данном варианте осуществления настоящего изобретения изделие может дополнительно содержать листок-вкладыш указывающий на то, что композиции могут применяться для лечения конкретного состояния. В качестве альтернативы или дополнения изделие может дополнительно содержать второй (или третий) контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), забуференный фосфатом солевой раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Оно может дополнительно включать другие материалы, требуемые с коммерческой позиции и пользовательской точки зрения, включающие другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

ПРИМЕРЫ

[00311] Пример 1. Выделение антител к CD3 из иммунизированных мышей и создание, и выделение гуманизированных и оптимизированных вариантов

[00312] Иммунизации проводили так, как это показано на фигуре 1. Вкратце, мышей balb/c иммунизировали посредством первичной иммунизации, предусматривающей 1,0 x 10⁶ Т-клеток человека (которые экспрессируют CD3-эпсилон) и адъювант Sigma®, которые вводили каждой из десяти мышей. Через двадцать восемь дней после первичной иммунизации каждой из десяти мышей проводили первую бустерную иммунизацию, предусматривающую 1,0 x 10⁶ T-клеток человека (которые экспрессируют CD3-эпсилон) и адъювант Sigma®. Через двадцать восемь дней после первой бустерной иммунизации десяти мышам проводили вторую бустерную иммунизацию, предусматривающую 1,5 x 10⁶ T-клеток (которые экспрессируют CD3-эпсилон) и адъювант Sigma®; однако в случае данного второго бустерного введения пять мышей получали T-клетки человека (которые экспрессируют CD3-эпсилон), а другие пять мышей получали T-клетки яванского макака (cyno) (которые экспрессируют CD3-эпсилон яванского макака). Через сорок два дня после второй бустерной иммунизации все десять мышей получали третью бустерную иммунизацию, предусматривающую пятьдесят микрограммов денатурированного рекомбинантного белка CD3-эпсилон яванского макака, смешанного с семью микрограммами конъюгата пептид-BSA, в котором пептид соответствует N-концевому пептиду нативного белка CD3-эпсилон яванского макака. Через семь дней после третьей бустерной иммунизации десять мышей умерщвляли и их селезенки отбирали для сортировки B-клеток.

[00313] B-клетки селезенки, полученные из отобранных селезенок, окрашивали с помощью 50 нМ рекомбинантного биотинилированного CD3-эпсилон с применением традиционных способов (см., например, Tiller et al, J Immunol Methods, Vol. 329, pages 112-124, doi:10.1016/j.jim.2007.09.017 (2008). B-клетки, специфические в отношении CD3-эпсилон, подвергали одноклеточной сортировке посредством проточной цитометрии с применением стандартных способов (см., например, Tiller et al, J Immunol Methods, Vol. 329, pages 112-124, doi:10.1016/j.jim.2007.09.017 (2008); WO 2009/036379; WO 2010/105256 и WO 2012/009568). Когнатные пары тяжелой и легкой цепей амплифицировали с помощью ПЦР в одной клетке с применением ранее описанного набора праймеров (см., например, Tiller et al, J Immunol Methods, Vol. 329, pages 112-124, doi:10.1016/j.jim.2007.09.017 (2008). Иллюстративные результаты сортировки на основе проточной цитометрии изображены на фигуре 2, при этом у каждого из наборов мышей с бустерным введением клеток яванского макака (средняя диаграмма проточной цитометрии на фигуре 2) и бустерным введением клеток человека (правая диаграмма проточной цитометрии на фигуре 2) выделяли и подвергали сортировке 48 клеток. Ампликоны подтверждали с помощью электрофореза в агарозном геле (фигура 3) и трансформировали в штамм Saccharomyces cerevisiae, полученный путем сложного конструирования (см., например, Xu et al., Protein Eng Des Sel. Vol. 26(10), pages 663-670 (2013) doi: 10.1093/protein/gzt047; Sivasubramanian et al., MAbs. Vol. 9(1), pages 29-42 (2017) doi: 10.1080/19420862.2016.1246096; WO 2009/036379; WO 2010/105256 и WO 2012/009568).

[00314] Антитела экспрессировали в Saccharomyces cerevisiae, очищали с применением стандартных процедур и анализировали в отношении связывающей активности (см., например, Xu et al., Protein Eng Des Sel. Vol. 26(10), pages 663-670 (2013) doi: 10.1093/protein/gzt047; Sivasubramanian et al., MAbs. Vol. 9(1), pages 29-42 (2017) doi: 10.1080/19420862.2016.1246096; WO 2009/036379; WO 2010/105256 и WO 2012/009568. С рекомбинантным CD3-эпсилон человека связывался двадцать один клон (см., например, относительные аффинности связывания на фигуре 4A и идентификационные признаки и информацию о последовательности антител для каждого из 21 клона на фигуре 4B). Из этих 21 клона 14 также связывали CD3-эпсилон, экспрессированный на поверхности T-клеток (см. вместе фигуры 5, 6 и фигуру 7). Из этих 14 клонов, которые связывают CD3-эпсилон, экспрессированный на поверхности T-клеток, шесть клонов были специфическими в отношении CD3-эпсилон яванского макака (см. фигуру 5), в то время как восемь клонов связывали оба CD3-эпсилон человека и яванского макака (см. фигуры 6 и 7). Анализы конкурентного связывания показали, что все клоны, связывающие CD3-эпсилон, связывались с эпитопами, перекрывающимися с таковым для I2C, и не конкурировали в значительной степени с OKT3 (фигура 8).

[00315] Три клона с наиболее высокой аффинностью связывания CD3 (ADI-15512, ADH-15516 и ADI-16513; см., например, фигуру 9) отбирали для гуманизации. В ходе данной операции для каждого клона получили по двенадцать гуманизированных вариантов (36 вариантов в целом) и их тестировали в отношении активности связывания клеток (см. информацию о последовательности и зародышевой линии для каждого из этих вариантов в сравнении с соответствующими исходными клонами, ADI-15512, ADI-15516 и ADI-16513, на фигуре 10A). Большинство гуманизированных вариантов продемонстрировали аналогичные или улучшенные профили связывания клеток по сравнению с исходными химерными клонами (см., например, сравнение профилей связывания клеток у гуманизированных вариантов и исходных химерных клонов, ADI-15512, ADI-15516 и ADI-16513 соответственно, на фигурах 10B, 10C и 10D).

[00316] Шесть гуманизированных вариантов, ADI-18565, ADI-18576, ADI-18585, ADI-18589 и ADI-18590, отбирали для оптимизации на основе аффинности, исходя из их связывания (см., например, фигуры 10B, 10C, 10D, 11A, 11B, 11C и 13) и профилей полиреактивности (см., например, фигуры 12A и 12B). Созревание аффинности проводили путем создания библиотек вариантов антитела, содержащих мутации в VH и/или VL каждого из вышеуказанных клонов, и отбора в отношении улучшенного связывания с помощью проточной цитометрии (см., например, WO 2009/036379; WO 2010/105256; WO 2012/009569; Xu et al., Protein Eng Des Sel. Vol. 26(10), pages 663-670 (2013) doi: 10.1093/protein/gzt047; и Sivasubramanian et al., MAbs. Vol. 9(1), pages 29-42 (2017) doi: 10.1080/19420862.2016.1246096)

[00317] Цикл 1 оптимизации: мутагенез VH и VK. Для первого цикла оптимизации («цикл 1») ПЦР сниженной точности проводили на обоих генах VH и VL антитела с применением стандартных способов, а затем их трансформировали в дрожжи с применением гомологичной рекомбинации. Вкратце, создавали библиотеку диверсифицированных антител путем введения случайного разнообразия (с применением стандартных методик молекулярного клонирования c ПЦР сниженной точности) в участки вариабельного домена тяжелой и легкой цепей каждого антитела. Это дало библиотеку размером примерно 10⁸ молекул, которые подходили для отбора, направленного на обогащение потомством с улучшенной аффинностью. Элементы давления отбора включали титрование с антигеном, представляющим собой мономер гетеродимерного Fc-слитого белка на основе CD3εδ человека (Hu) и яванского макака (Cy) (далее в данном документе Hu CD3εδ Fc и Cy CD3εδ Fc соответственно; см. фигуру 18), титрование с антигеном, представляющим собой биотинилированный N-концевой пептид Hu CD3ε (CD3εN27 и CD3εN13 с последовательностями, описанными в Материалах и способах), и конкуренцию с Fab исходного антитела. Метод проточной цитометрии (FACS) использовали для визуализации и отбора с применением стандартных методик требуемой популяции, чтобы перенести ее в дополнительные раунды отбора (см., например, Chao et al. Nature Protocols, 2006, WO 2009/036379; WO 2010/105256; WO 2012/009569; Xu et al., Protein Eng Des Sel. Vol. 26(10), pages 663-670 (2013) doi: 10.1093/protein/gzt047; и Sivasubramanian et al., MAbs. Vol. 9(1), pages 29-42 (2017) doi: 10.1080/19420862.2016.1246096). После нескольких раундов обогащения дрожжи высевали с получением колоний, представляющих изоляты моноклональных антител, которые затем секвенировали с помощью стандартного метода Сэнгера, продуцировали и характеризовали так, как в отборе гуманизированных вариантов, описанном выше (см., например, изображение иллюстративного эксперимента FACS и полученной на выходе популяции на фигуре 14). Антитела, идентифицированные на выходе с улучшенными аффинностями связывания клеток, подвергали второму циклу мутагенеза и отбора с применением способов, аналогичных описываемым выше.

[00318] Цикл 2 оптимизации: шаффлинг цепей HC x LC. Вторую операцию выполняли для осуществления созревания аффинности у антител с перекрестной реактивностью к молекулам человека/яванского макака, полученных из линий ADI-18589 и 18590 («цикл 2»; см., например, иллюстративный эксперимент FACS и полученную на выходе популяцию на фигуре 15). Вкратце, HC и LC антитела подвергали шаффлингу с созданием комбинаторной библиотеки на дрожжах для каждого из начальных исходных антител и данную библиотеку подвергали раундам отбора с применением давления аффинности, аналогичного циклу 1. Моноклональные антитела на выходе последнего раунда секвенировали, продуцировали и характеризовали. Все клоны, отобранные из второго цикла созревания аффинности, демонстрировали высокую аффинность связывания с CD3 на поверхности клеток (см. фигуру 16) и имели мутации в обоих участках VH и VK по сравнению с исходными клонами (т.е. ADI-18589 и ADI-18590). Каждый проявлял аффинности моновалентного Fab в отношении Hu CD3εδ Fc, характеризующиеся KD в диапазоне 13-142 нМ, и аффинности моновалентного Fab в отношении Cy CD3εδ Fc, характеризующиеся KD в диапазоне 15-109 нМ, что определено с помощью измерения на ForteBio Octet BLI.

[00319] Чтобы определить функциональную активность клонов, связывающих CD3, проводили анализ секреции IL-2 из T-клеток - показатель активации T-клеток - с применением двух иллюстративных клонов, связывающих CD3, по настоящему изобретению (ADI-20582 и ADI-20566) в сравнении с I2C, изотипическим контролем, и отдельно буфером (DPBS). Результаты, изображенные на фигуре 17, демонстрируют, что иллюстративные клоны, связывающие CD3, вызывали устойчивое высвобождение IL-2 из CD3+ T-клеток Jurkat по сравнению с CD3- контрольными T-клетками на уровне, соответствующем или превышающем уровень, наблюдаемый с контрольным I2C. Соответственно, клоны, связывающие CD3, по настоящему изобретению вызывают эффективную активацию T-клеток.

[00320] Цикл 3 оптимизации: мутагенез CDR H3 и рациональное комбинирование. Впоследствии один клон (ADI-20580), идентифицированный в операции оптимизации цикла 2, отбирали для дополнительной операции оптимизации («цикл 3») с помощью мутагенеза H3. Библиотеки мутагенеза H3 создавали с применением стандартных способов на основе олигонуклеотидов (например, способов на основе NNK) и трансформировали в Saccharomyces cerevisiae с применением гомологичной рекомбинации (см., например, Lee et al, J. Mol. Biol. Vol. 340, pages 1073-1093 (2004); WO 2009/036379; WO 2010/105256 и WO 2012/009569). Вкратце, мутагенные олигонуклеотиды, кодирующие сайт-насыщающий мутагенез (NNK нуклеотид) в каждой паре остатков комбинаторным способом, применяли для конструирования библиотеки с теоретическим разнообразием, превышающим 2,6 x 10⁴ (фигура 19). Библиотеку подвергали двум раундам давления аффинности с применением титрования пептида CD3εN13 в диапазоне 100-10 нМ с помощью проточной цитометрии в целом, как это описано выше (см. изображение результатов FACS на фигуре 20). Отобранное потомство секвенировали, продуцировали и характеризовали. Мутации наблюдали в ADI-21970 и ADI-21961 и их подвергали рациональному комбинированию на основе наблюдаемого улучшения аффинности. Мутацию, наблюдаемую в ADI-21960, также включали на основе частоты повтора в H3 для создания вариантов, полученных с помощью объединения путем рационального комбинирования, на основе мутаций, наблюдаемых у пяти выбранных клонов (фигура 22). Некоторые клоны демонстрировали улучшенную аффинность связывания и окрашивания клеток по сравнению с ADI-20580, демонстрируя также при этом снижения показателя полиспецифической реактивности (PSR) (см. фигуры 21 и 22). ADI-21978 выбрали для превращения в scFv и рационального конструирования потенциальных мотивов деградации последовательности.

[00321] Цикл 4 оптимизации: рациональный мутагенез потенциальных мотивов деградации последовательности. В ADI-21978 наблюдали потенциальные мотивы деградации последовательности NG (Asn-Gly) и DP (Asp-Pro) в CDR H2, DG (Asp-Gly) в CDR H3 и NS (Asn-Ser) в CDR L1. Данные сайты подвергали рациональному мутагенезу в соответствии со следующими заменами: NG -> EG (Glu-Gly) или NA (Asn-Ala), DP -> QP (Gln-Pro) или DA (Asp-Ala), DG -> EG или DA и NS -> ES (Glu-Ser) или NA. Четыре сайта комбинировали в комбинаторной матрице и получали и характеризовали вариант IgG. Замены в отдельных сайтах были вполне допустимыми, в частности, мутации во втором положении с заменой на Ala (т.е. NG->NA, DG->DA и т.д.). Сравнение ADI-22523 (все четыре сайта подверженности последовательности разрушению) с индивидуальными заменами на Ala в VH продемонстрировало <2-кратное снижение аффинности моновалентного фрагмента (Fab) в отношении Cy CD3εδ, а исправление всех четырех сайтов оказывало умеренный эффект на авидную (IgG) аффинность в отношении Hu CD3εδ (см. фигуры 23A и 23B). Полученный вариант с четырьмя Ala, ADI-25133 (ADI-26906), применяли для составления панели из биспецифических молекул и для дополнительного мутагенеза CDR H3.

[00322] Кроме того, ADI-26906 дополнительно превращали в формат scFv с применением такого же способа, который описан для ADI-21978 и ADI-21952, и, как в случае таких других превращений в scFv, анализ связывания клеток выявил, что превращение было вполне допустимым. Оптимизированные scFv тестировали в отношении разрабатываемости и термостабильности.

[00323] Цикл 5 оптимизации: мутагенез CDR H3, сфокусированный на мотиве последовательности DG. ADI-21978 (ADI-22523) диверсифицировали посредством сайта-насыщающего мутагенеза (NNK), целенаправленно воздействующего на мотив деградации DG в CDR H3. Вкратце, каждый остаток в H3 мутировали в комбинации с первым или вторым положением в сайте Asp-Gly (фигура 24). Проводили один раунд FACS-отбора с применением пептида CD3εN13 при 100 нМ и 10 нМ и полученные на выходе клоны секвенировали, продуцировали и характеризовали. Только мутация остатков Gly в мотиве Asp-Gly давала связывающие клоны и все потомство демонстрировало некоторое снижение аффинности связывания по сравнению с исходным клоном (ADI-21978 (ADI-22523)).

[00324] Цикл 6: модулирование аффинности с помощью рационального комбинирования.ADI-25133 (ADI-26906) подвергали рациональному внесению изменений с помощью матрицы из последовательностей CDR H2 и H3, известных своим воздействием на аффинность, с последовательностями CDR L1 и L3, известными своим воздействием на аффинность, с получением панели из 68 комбинаций (фигура 25A). Полученные антитела с подтвержденными последовательностями продуцировали в дрожжах и характеризовали в отношении связывания рекомбинантного антигена и клеток. Аффинность связывания моновалентного Fab охватывала диапазон нМ-мкМ и коррелировала с медианной MFI связывания клеток при концентрации 100 нМ IgG в тесте (фигуры 25B и 25C). Продуцирование IFNγ в PBMC измеряли для обоих форматов IgG и Fab с применением двух доноров.

[00325] Клоны, полученные из циклов 5 и 6, затем тестировали в отношении их способности вызывать стимуляцию и активацию T-клеток, исчисленную путем измерения уровней цитокинов, как это описано ниже.

[00326] Клеточные линии/первичные клетки человека.

[00327] Замороженные мононуклеарные клетки периферической крови человека (PBMC) приобретали в AllCells Inc. (Аламеда, Калифорния)

[00328] Свежие мононуклеарные клетки периферической крови выделяли из цельной крови человека, полученной из банка крови Scripps, с помощью центрифугирования в градиенте плотности Ficoll-Hypaque.

[00329] Материалы для культивирования клеток.

[00330] PBMC культивировали в RPMI-10% FBS, состоящей из бессывороточной среды RPMI-1640, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone FBS; номер по каталогу SH30071.03IR, GE Healthcare, Логан, Юта), L-глутамином (номер по каталогу 11875-093, ThermoFisher, Уолтем, Массачусетс), 1% пенициллина/стрептомицина (номер по каталогу 15070-063, ThermoFisher), 1 мМ пирувата натрия (номер по каталогу 11360-070, ThermoFisher), 10 мМ 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислотой (HEPES; номер по каталогу 15630080, ThermoFisher) и 1X заменимой аминокислотой (номер по каталогу 11140-50, ThermoFisher).

[00331] Предварительно замороженные PBMC подвергали быстрому оттаиванию при 37°C на водяной бане и вносили в предварительно нагретую среду RPMI-10% FBS. Клетки осаждали при 300 x g, ресуспендировали в предварительно нагретой среде и подсчитывали перед использованием.

[00332] Определение активации T-клеток в PBMC под действием клона к CD3 в формате растворимого IgG1 и формате Fab

[00333] Процедура стимуляции клеток

[00334] Представленные IgG1 к CD3 или Fab к CD3 разбавляли в среде RPMI-10% FBS до 2x конечной концентрации (10 нМ и 0,3 нМ). В каждую лунку вносили по пятьдесят микролитров 2x конечной концентрации антител и 50 мкл PBMC донора при концентрации 2 x 10⁵ клеток/лунка. В отдельные лунки также включали контроль без стимуляции, содержащий только среду RPMI-10% FBS, и клон положительного контроля, ADI-22523, и отрицательный контроль ADI-03847. Планшеты инкубировали при 37°C в течение 48 часов, супернатант собирали для анализа на цитокины.

[00335] Измерение активации T-клеток по уровням цитокинов в супернатанте

[00336] После 48 часов инкубации супернатант собирали для анализа на цитокины с помощью набора для обнаружения интерферона-гамма в тканевых культурах от MesoScale в соответствии с инструкциями производителя. Супернатант анализировали без разбавления. Стандартную кривую, получаемую по используемому рекомбинантному цитокину, включали для каждого планшета для расчета уровня цитокинов в пг/мл.

[00337] Анализ данных

[00338] Измерение цитокинов с помощью MSD.

Концентрацию интерферона-гамма (пг мл-1) в супернатанте экстраполировали с применением стандартной кривой, полученной с помощью программного обеспечения MesoScale Discovery WorkBench. Концентрации интерферона-гамма приведены в пг/мл. Представлены данные по аффинности антитела (Fab, IgG) в отношении CD3εδчеловека, и они приведены в виде мольной концентрации. Данные представлены в таблице, расположенной непосредственно ниже (таблица 1).

Таблица 1

ID клона ADI A4560, 0,3 нМ, Fab, IFNg (пг мл-¹) A4560, 0,3 нМ, IgG1, IFNg (пг мл-¹) A4560, 10 нМ, Fab, IFNg (пг мл-¹) A4560, 10 нМ, IgG1, IFNg (пг мл-¹) D5801, 0,3 нМ, Fab, IFNg (пг мл-¹) D5801, 0,3 нМ, IgG1, IFNg (пг мл-¹) D5801, 10 нМ, Fab, IFNg (пг мл-¹) D5801, 10 нМ, IgG1, IFNg (пг мл-¹) KD Fab в отношении CD3εδ-Fc человека (M), моновалентное KD Fab в отношении CD3εδ-Fc яванского макака (M), моновалентное KD IgG в отношении CD3εδ-Fc человека (M), авидное KD IgG в отношении CD3εδ-Fc яванского макака (M), авидное ADI-03847 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. N.B. N.B. ADI-22523 0 2293,197 148,0116 4687,913 0 8857,269 698,8879 11887,59 5,9E-09 4,5E-09 2,0E-10 2,2E-10 ADI-23664 0 2725,718 239,8341 2131,418 0 4623,814 117,9867 5317,511 8,4E-09 8,9E-09 2,7E-10 2,8E-10 ADI-23672 0 1905,496 56,37432 2320,208 0 4121,787 172,223 4722,399 7,7E-09 8,8E-09 2,5E-10 2,4E-10 ADI-23673 0 2005,052 86,91475 4193,993 0 2627,311 185,1544 8565,428 7,6E-09 8,2E-09 2,7E-10 2,9E-10 ADI-26906 0 3849,833 70,52744 3983,237 0 9035,443 371,7809 9707,526 7,7E-09 8,1E-09 1,6E-09 2,5E-10 ADI-26907 0 1484,849 57,70298 5005,116 0 7885,667 335,9243 8561,689 9,6E-09 1,1E-08 1,8E-09 3,0E-10 ADI-26908 0 2629,234 20,6515 4618,489 0 8357,608 257,0513 7867,79 9,1E-09 1,0E-08 1,5E-09 3,1E-10 ADI-26909 0 3533,808 15,25265 3644,966 0 5777,494 101,2396 5639,143 1,4E-08 1,6E-08 1,9E-09 3,2E-10 ADI-26910 0 2128,518 37,69095 3142,977 0 5839,224 163,2046 5640,78 1,4E-08 1,6E-08 1,4E-09 2,6E-10 ADI-26912 0 0 0 0 0 0 0 0 1,3E-07 2,1E-07 3,0E-09 2,0E-09 ADI-26913 0 2235,181 0 3599,486 0 3239,355 0 4880,937 3,5E-08 3,8E-08 2,2E-09 4,0E-10 ADI-26915 0 0 2,579892 0 0 0 0 0 1,4E-07 P.F. 3,3E-09 2,6E-09 ADI-26916 0 0 0 14,77678 0 0 0 2,54948 1,7E-07 1,3E-07 2,9E-09 1,8E-09 ADI-26917 0 109,1881 0 895,5244 0 60,87033 0 1026,313 1,0E-07 1,2E-07 2,6E-09 1,0E-09 ADI-26918 0 0 0 0 0 0 0 0 1,4E-06 2,7E-07 3,0E-09 2,2E-09 ADI-26919 0 1221,756 0 1529,324 0 2607,514 0 2959,607 5,7E-08 5,4E-08 2,3E-09 5,9E-10 ADI-26920 0 710,0884 0 1667,536 0 787,9412 0 1783,751 7,6E-08 7,6E-08 3,4E-09 7,0E-10 ADI-26921 0 0 0 1496,688 0 86,26344 0 964,8354 9,5E-08 8,9E-08 3,7E-09 9,4E-10 ADI-26924 0 0 0 0 0 0 0 0 2,0E-07 2,8E-07 2,8E-09 2,1E-09 ADI-26925 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 1,1E-08 8,7E-09 ADI-26927 0 0 0 8,821052 0 0 0 8,597335 1,3E-07 1,5E-07 1,1E-09 1,1E-09 ADI-26928 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 2,8E-09 2,5E-09 ADI-26929 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 1,1E-08 9,7E-09 ADI-26930 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 1,0E-08 8,7E-09 ADI-26932 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 1,6E-08 1,3E-08 ADI-26933 0 1032,987 0 2752,275 0 660,8336 0 2100,075 5,9E-08 5,5E-08 6,7E-10 5,2E-10 ADI-26938 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 1,0E-08 1,0E-08 ADI-26939 0 0 0 0 0 0 0 0 3,5E-07 2,7E-07 1,9E-09 1,6E-09 ADI-26940 0 0 0 33,39678 0 0 0 2,8149 1,5E-07 1,5E-07 1,4E-09 1,2E-09 ADI-26941 0 0 0 0 0 0 0 0 1,1E-06 2,2E-07 1,7E-09 2,2E-09 ADI-26942 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 8,5E-09 7,8E-09 ADI-26943 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 7,6E-09 6,6E-09 ADI-26944 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 1,3E-08 1,2E-08 ADI-26945 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. 2,0E-08 2,1E-08 ADI-26950 0 0 0 0 0 0 0 0 N.B. N.B. N.B. N.B. ADI-26954 0 0 0 521,1572 0 0 0 227,3743 N.B. N.B. N.B. N.B. Без стимуляции 0 0 0 2,045886 0 0 0 0 #N/A #N/A #N/A #N/A

[00339] Подмножество данных представлены в виде графического отображения на фигуре 25D. Среди прочего, корреляцию моновалентной аффинности с продуцированием цитокинов наблюдали в случае обоих доноров для 10 нМ IgG, характеризующегося аффинностью в отношении Hu и Cy CD3εδ Fc, составляющей по меньшей мере 100 нМ. В случае Fab показан низкий уровень продуцирования IFNγ в PBMC при 10 нМ, и невыявляемое продуцирование IFNγ при концентрации 0,3 нМ (фигура 25D).

[00340] Превращение ADI-21978 (ADI-22523) в scFv. VH и VL амплифицировали и подвергали повторной сборке с помощью ПЦР с перекрывающимися праймерами с получением матрицы из scFv, слитых с Fc IgG1 (далее в данном документе называемых scFv-Fc и изображенных на фигуре 26A). Вкратце, в состав матрицы для разработки входили ориентация VH/VK или VK/VH, включение или исключение дисульфидной связи VH44 - VK100 (нумерация по Kabat) (DS1) (Brinkmann U. et al. PNAS 1993), связь из 5 или прямое слияние, линкеры длиной 15, 20, 25 и 30 аминокислот. Также использовали модифицированную дисульфидную связь VH44 - VK100 (DS2). Последовательности связи и линкера состояли из повторов (Gly4Ser)N. Верхний шарнирный участок IgG1 включает мутацию Cys220Ser, и слияния scFv проводили с Glu216. Двадцать девять scFv-Fc из линии ADI-21978 подвергали подтверждению последовательности, продуцировали и характеризовали (фигура 26B). Анализ связывания рекомбинантного CD3 и клеток выявил, что превращение в scFv было вполне допустимым, при этом наблюдали 2-4-кратное снижение аффинности по сравнению с IgG (фигура 26C). Многие из конструкций scFv-Fc проявляли пик неагрегированных мономеров, составляющий 85-90% (фигура 26D). Анализ термической стабильности с помощью DSF продемонстрировал, что scFv-Fc ADI-21978 были в целом стабильными, демонстрируя Tm в диапазоне 65-69°C (фигура 26E и фигура 26F). Включение DS1 и DS2 давало scFv-Fc с временем удерживания в HIC, аналогичным таковому для исходного клона, при этом scFv-Fc без DS1/2 имел профиль с широким пиком и отсроченным временем удерживания (фигура 26G).

[00341] Пример 2. Получение вариантов антитела SP34 (антитела к CD3): гуманизация и оптимизация SP34

[00342] Гуманизация SP34. Гуманизацию SP34 проводили путем скрининга начальной панели конструкций гуманизации, полученной в дрожжах (фигура 27). Вкратце, 28 конструкций, представляющих комбинации четырех гуманизированных VH и семи гуманизированных Vκ или Vλ, получали в дрожжах и характеризовали в отношении связывания с Hu CD3εδ и Cy CD3εδ Fc. Вследствие относительно низких титров экспрессии пять выбранных конструкций HuSP34 продуцировали путем временной экспрессии в HEK и оценивали в отношении связывания рекомбинантного антигена, окрашивания клеток и профилей разрабатываемости (фигура 27). Из них ADI-16606 (комбинация HC2 с LC3) выбрали из-за хорошего связывания и наиболее чистого профиля разрабатываемости, на что указывают данные AC-SINS и PSR. Примечательно, что фоновое связывание с клетками Jurkat, экспрессирующими CD3 (CD3+ клетки Jurkat), клетками Jurkat, не экспрессирующими CD3 (CD3- клетки Jurkat) и HSC-F яванского макака было сравнимо со связыванием химерного SP34 (ChSP34).

[00343] Операция оптимизации аффинности HuSP34, дающая в результате ADI-26956 и родственные варианты антитела. Первую операцию выполняли для осуществления созревания активности у антитела ADI-16606, гуманизированного SP34 к CD3 (HuSP34), характеризующегося перекрестной реактивностью в отношении молекулы человека/яванского макака (см. схему процедуры отбора на фигуре 28A и иллюстративные графики отбора с помощью проточной цитометрии на фигуре 28B). Вкратце, создавали библиотеку диверсифицированных антител путем введения случайного разнообразия в участки вариабельного домена тяжелой и легкой цепей антитела. Это дало в результате библиотеку, превышающую 108 в реализованном разнообразии. Вкратце, элементы давления отбора для раундов 1 и 2 (R1 и R2) включали титрование с биотинилированным антигеном Hu CD3εδ Fc в диапазоне 50-5 нМ с отбором связывающих клонов при параметре 10 нМ, гейтированных по увеличенной экспрессии и связыванию антигена по сравнению с исходным клоном. В третьем раунде (R3) антиген титровали до 0,2 нМ, и отобранные связывающие клоны, представляющие потомство клонов, подвергнутых давлению аффинности, высевали, секвенировали и продуцировали. В параллельной операции клоны, полученные на выходе R2, подвергали термическому давлению в R3. Вкратце, обогащенные популяции связывающих клонов подвергали термическому давлению посредством инкубации дрожжей в диапазоне параметров температуры, охватывающих 53-65°C, в течение 10 мин в амплификаторе. После этого дрожжи охлаждали до 4°C, применяли 50 нМ антигена CD3εN27 и определяли оптимальные параметры для сортировки. Плазмиды высвобождали из отсортированных дрожжевых клеток с применением набора Zymo Research, трансформировали в электрокомпетентные E. coli, получали минипрепы из E. coli и повторно трансформировали в штаммы, несущие исходные HC или LC, из цикла 1 для мутагенеза Vλ и VH соответственно. Давление аффинности и термическое давление привели в результате к разнообразным слияниям последовательности и консенсусным мотивам (фигуры 28C и 28D). Уникальные клоны получали и характеризовали в отношении связывания Fab и IgG с рекомбинантными антигенами Hu и Cy CD3εδ Fc, связывания клеток Hu и Cy, продуцирования IL-2 клетками Jurkat, полиспецифической реактивности (PSR), предрасположенности к самовзаимодействию (AC-SINS) и термической стабильности с помощью DSF.

[00344] Цикл 2 оптимизации HuSP34: шаффлинг цепей VH x Vλ, а также мутагенез VH и мутагенез Vλ. Выбранные HC и LC, полученные в цикле 1, подвергали шаффлингу и диверсифицировали с помощью ПЦР сниженной точности (фигура 29A). Отбор проводили, используя давление аффинности и термическое давление, аналогичные таковым в цикле 1 (фигура 29B). На выходе получали уникальные последовательности и их характеризовали. ADI-20587, ADI-20607 и ADI-20590 отбирали для другого цикла оптимизации.

[00345] Цикл 3 оптимизации HuSP34: рациональное комбинирование Vλ с 3X VH. HC из ADI-20587, ADI-20607 и ADI-20590 применяли для получения матрицы с 28 LC, полученными с помощью рационального конструирования (фигура 30). LC комбинировали с наиболее благоприятными мутациями, выбранными в циклах 1 и 2. Вкратце, комбинировали мутации в Vλ, которые повышают термическую стабильность (F11L, T27A, T74I, A78V, D81E, S84A и S93N), увеличивают экспрессию (R24G), снижают PSR (N52D) и улучшают аффинность (A89V и L95H). Клоны с подтвержденной последовательностью продуцировали и характеризовали. ADI-21952, комбинацию HC из ADI-20587 и разработанной LC, несущей мутации F11L, R24G, N52D, D81E, S84A и L95H, выбирали для дальнейших операций из-за комбинации аффинности, связывания клеток, продуцирования IL-2, термической стабильности и PSR.

[00346] Цикл 4 оптимизации HuSP34: рациональное мутирование потенциальных мотивов деградации последовательности. Потенциальные мотивы деградации в ADI-21952 обнаружили в VH FR3, NS (Asn-Ser) и CDR H3, NG (Asn-Gly). Данные сайты подвергали рациональному мутагенезу в соответствии со следующими заменами: NG -> EG (Glu-Gly) или NA (Asn-Ala) и NS -> ES (Glu-Ser) или NA. Эти два сайта комбинировали в комбинаторной матрице и вариант IgG продуцировали и характеризовали. Сравнение ADI-21952 (исходный клон) и ADI-23634 и ADI-23637 показало, что обе рациональные мутации в сайте NG CDR H3 значимо воздействовали на аффинность, при этом мутации в сайте NS FR3, что наблюдали в случае ADI-23633 и ADI-23636, не воздействовали в значительной степени на свойства (фигура 31).

[00347] Цикл 5 оптимизации: мутагенез CDR H3 для удаления мотива NG. ADI-23633 отбирали для диверсификации с помощью сайт-насыщающего (NNK) мутагенеза, целенаправленно воздействующего на мотив деградации NG в CDR H3. Проводили один раунд давления аффинности с применением CD3εN13 при параметре 10 нМ. Отобранное потомство продуцировали и характеризовали с получением по меньшей мере двух вариантов с сопоставимой или улучшенной аффинностью относительно исходного клона (фигура 32).

[00348] Цикл 6 оптимизации: модулирование аффинности с помощью рационального комбинирования. ADI-21952 подвергали рациональному внесению изменений с помощью матрицы из последовательностей CDR H1, CDR H2 и CDR H3, известных своим воздействием на аффинность, с последовательностями CDR L3, известных своим воздействием на аффинность, с получением панели из 42 комбинаций (фигура 33A). Полученные антитела с подтвержденными последовательностями продуцировали в дрожжах и характеризовали в отношении связывания рекомбинантного антигена (фигура 33B) и клеток (фигура 33C). Аффинность связывания моновалентного Fab охватывала диапазон нМ-мкМ и коррелировала с медианной MFI связывания клеток при концентрации 100 нМ IgG в тесте (фигуры 33B и 33C).

[00349] Превращение ADI-21952 в scFv. VH и VL амплифицировали и подвергали повторной сборке с помощью ПЦР с перекрывающимися праймерами для составления матрицы из scFv, слитых с Fc IgG1. Матрица для разработки была идентична той, которую использовали для превращения ADI-21978. Анализ связывания рекомбинантного CD3 и клеток выявил <2-кратное снижение аффинности по сравнению с IgG в случае scFv, который не содержит DS1 или DS2, но в то же время значительное (~8-кратное) снижение аффинности в случае scFv, содержащего дисульфидную связь (фигура 34A). Многие из конструкций scFv-Fc проявляли пик неагрегированных мономеров, составляющий 85-90%, небольшое количество конструкций продемонстрировало содержание мономеров >90% (фигура 34B). Анализ термической стабильности с помощью DSF продемонстрировал, что scFv-Fc ADI-21952 были метастабильными, демонстрируя Tm в диапазоне 59-66°C (фигура 34C). Включение DS1 и DS2 давало scFv-Fc с временем удерживания в HIC, аналогичным таковому для исходного клона, при этом scFv-Fc без DS1/2 имел профиль с широким пиком и отсроченным временем удерживания (фигура 34D).

[00350] Панель с широкой аффинностью для продуцирования в HEK для определения профиля разрабатываемости. Специализированную панель вариантов, представляющих широкий диапазон аффинности, выбирали для продуцирования в HEK. IgG и Fab характеризовали в отношении аффинности связывания с рекомбинантным Hu и Cy CD3εδ Fc и линиями клеток человека и яванского макака (фигура 35A). Анализы разрабатываемости включали PSR, анализ с бакуловирусными частицами, HIC, SEC, AC-SINS (самовзаимодействие), Tm Fab с помощью DSF, титр при временной экспрессии в HEK. Химическую чистоту оценивали путем проверки ширины и симметрии пика интактной HC (см. фигуру 35B). Известное из литературы контрольное антитело, CTL-19672 (GNE 38E4, раскрываемое, например, в публикации заявки на патент США номер US 2015/0166661), и связывающий клон новой линии c неисправленными потенциальными сайтами деградации, ADI-22523, демонстрировали образование сукцинимидного промежуточного соединения в условиях отсутствия стресса (фигура 35B). ADI-26906, у которого все прогнозируемые сайты подверженности последовательности разрушению были исправлены, не демонстрировал расширение пика, что подтверждает благотворную роль данных модификаций для химической стабильности антитела.

[00351] Продуцирование в HEK биспецифических антител к CD3 x TAA. Известные из литературы антитела, связывающие опухолеассоциированный антиген (TAA), которые целенаправленно воздействуют на CD33 (линтузумаб) и HER2 (трастузумаб), выбирали для сборки биспецифических молекул, используемых для функциональной валидации, наряду с HEL-связывающим антителом отрицательного контроля, ADI-03847 (фигура 36A). В качестве первой стадии антитела переформатировали в scFv-Fc, имеющие изотип IgG4 и мутацию Ser228Phe, стабилизирующую шарнирный участок, их продуцировали в HEK293ADI1 и очищали с помощью CaptureSelect FcXL (GE Healthcare LifeSciences). Все scFv-Fc связывались только с ожидаемым целевым антигеном (см., например, фигуру 36A, нижняя панель). Биспецифические антитела к CD3 x TAA получали путем котрансфекции HEK293ADI1 с помощью плазмид как с HC, так и с CD3 LC. Очистку гетеродимера осуществляли с помощью элюирования с градиентом pH из колонки POROS MabCapture A, которое в целом было эффективным для отделения гетеродимера от моноспецифического антитела к CD3 (фигура 36B). Биспецифические антитела к CD3/HER2 и контрольное антитело к TAA тестировали в отношении их способности активировать T-клетки в присутствии и в отсутствие клеток SK-BR-3, экспрессирующих HER2, что определяли по процентной доле CD25+ CD69+ T-клеток (CD8) после инкубации с возрастающими количествами тестируемых антител (фигура 36C). Активация T-клеток не наблюдалась в отсутствие плеча, связывающего HER2, за исключением низкого уровня активации, наблюдаемого в случае HuOKT3 (ADI-10390) в качестве плеча антитела к CD3. В присутствии клеток-мишеней оба ADI-21978/трастузумаб и ADI-10390/трастузумаб активировали T-клетки, но ни один клон, связывающий CD3, не активировал клетки, когда он находился в паре с контрольным плечом антитела к HEL.

[00352] Анализ активации T-клеток и цитолиза целевых клеток. Затем биспецифические антитела к CD3/HER2 и CD3/HEL тестировали в анализе цитотоксичности под действием перенаправленных T-клеток (RTCC). ADI-21952 (ADI-24780) и ADI-21978 (ADI-24781) вызывали дозозависимый цитолиз целевых клеток под действием инкубируемых T-клеточных эффекторных клеток с эффективностью (EC50), которая приблизительно такая же или лучше, чем у положительных контролей. В частности, биспецифическое антитело ADI-21978/трастузамаб вызывало цитолиз целевых клеток в пикомолярном (пМ) диапазоне (см., например, фигуру 37).

[00353] Схематическое отображение процедур отбора, гуманизации и оптимизации и линии клонов, полученных при этом так, как это описано в примерах 1 и 2, представлено на фигуре 38A и фигуре 38B соответственно.

Варианты

[00354] Заявитель обнаружил, что введение определенных изменений в последовательности CDR в антителах или антигенсвязывающих полипептидах к CD3 может придавать благоприятные свойства, такие как повышенная аффинность связывания мишени, устойчивость к деградации (например, под действием протеаз) и улучшенная разрабатываемость (например, снижение полиспецифичности). Например, в данном документе было обнаружено, что введение «T» в положение одного из CDRH3 может приводить к повышенной аффинности связывания мишени. В некоторых вариантах осуществления представлены антитела или антигенсвязывающие полипептиды к CD3, в которых «T» введен в положение 1 CDRH3, и они характеризуются повышенной аффинностью связывания с антигенами CD3.

[00355] Также, в данном документе заявитель обнаружил, что исключение определенных последовательностей смежных аминокислот в CDRH2 (например,«NG») и/или CDRH3 (например,«DG») может повышать устойчивость к деградации. В некоторых вариантах осуществления представлены антитела или антигенсвязывающие полипептиды к CD3, в определенных положениях которых исключены конкретные аминокислоты (например, осуществляют исключение «G», «N» или «D») в CDRH2 и/или CDRH3, и они характеризуются устойчивостью к деградации.

[00356] Кроме того, в данном документе заявитель обнаружил, что введение определенных аминокислот (например, «L» или «I») в CDRL3 может улучшать разрабатываемость (например, измеряемую с помощью AC-SINS, времени удерживания в HIC или связывания реагентов для анализа полиспецифичности). В некоторых вариантах осуществления представлены антитела или антигенсвязывающие полипептиды к CD3, которые имеют замены на «L» или «I», и они характеризуются улучшенными критериями разрабатываемости.

[00357] Материалы и способы

[00358] В дополнение к описанию, представленному выше, в примерах использовали следующие материалы и способы.

[00359] Продуцирование гетеродимерных антигенов Hu и Cy CD3εδ Fc. Рекомбинантные гетеродимерные Fc-слитые антигены CD3 получали в клетках HEK 293 путем котрансфекции плазмид, кодирующих Hu CD3ε Fc (эктодомен, ECD, остатки 22-126) и CD3δ Fc-HIS (ECD, остатки 22-100) или Cy CD3ε Fc (ECD, остатки 22-117) и CD3δ Fc-HIS (ECD, остатки 22-100), с использованием гетерологичной последовательности сигнального пептида. Хроматографические разделения проводили на компьютеризованной системе для препаративной хроматографии Avant 150 (GE Healthcare Life Sciences), оснащенной встроенным кондуктометрическим датчиком, позволяющим отслеживать поточную концентрацию соли в ходе прогона. Осветленные культуральные супернатанты очищали с помощью Ni Sepharose 6 Fast Flow (GE Healthcare Life Sciences), которая удаляет гомодимер CD3εε Fc-HIS. Гетеродимер CD3εδ Fc-HIS отделяли от гомодимера CD3δδ Fc-HIS с помощью Mono Q 10/100 GL с применением линейного градиента KCl в буфере Tris при pH 8,5.

[00360] Пептиды. N-концевые пептиды CD3ε, биотинилированные на C-конце, получали от New England Peptide. Все пептиды поставлялись при чистоте ≥95%. Пептиды конструировали на основе первичной последовательности Hu CD3ε и кристаллической структуры Hu CD3εδ, связанного с OKT3 (Kjer-Nielsen L. et al. PNAS 2004). Пептид CD3εN27 имеет последовательность H2N-QDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILT[K/SCBiot(dPEG4)]-амид, а пептид CD3εN13 имеет последовательность H2N-QDGNEEMGGITQT[K/SCBiot(dPEG4)]-амид.

[00361] Биотинилирование антигенов. Антигены CD3 биотинилировали с применением набора для биотинилирования EZ-Link Sulfo-NHS от Pierce. Антитело козы к F(ab')2-каппа человека, конъюгированное с FITC (LC-FITC), экстравидин-PE (EA-PE) и стрептавидин-633 (SA-633) получали соответственно от Southern Biotech, Sigma и Molecular Probes. Стрептавидиновые микрогранулы и колонки для LC-разделения MACS приобретали у Miltenyi Biotec.

[00362] Размножение клеточных линий и анализы мечения клеток. Человеческие CD3+ клетки Jurkat (ATCC TIB-152) и CD3- клетки Jurkat (ATCC TIB-153) получали от ATCC. Клетки HSC-F яванского макака получали из лаборатории ресурсов реактивов от приматов, отличных от человека, в NIH. Все линии клеток культивировали в средах RPMI 1640 GlutaMax, дополненных 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS).

[00363] Мечение клеток проводили путем разделения на аликвоты, содержащие 100000-200000 клеток на лунку, в 96-луночном аналитическом планшете. Клетки центрифугировали при 500 x g в течение 5 мин при 4°C, затем ресуспендировали в 100 мкл 100 нМ IgG и инкубировали при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем клетки трижды промывали в буфере (забуференный фосфатом солевой раствор (PBS)/0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и ресуспендировали во вторичном реагенте, как правило, в антителе козы к R человека, конъюгированному с PE (Southern Biotech). Планшет анализировали на FACSCanto (BD Biosciences) с применением устройства для ввода образцов HTS. Данные проточной цитометрии анализировали в отношении медианной интенсивности флуоресценции в канале R-PE.

[00364] Источники PBMC человека и их размножение. Замороженные мононуклеарные клетки из периферической крови человека (PBMC) приобретали в AllCells Inc. (Аламеда, Калифорния) Свежие мононуклеарные клетки периферической крови выделяли из цельной крови человека, полученной из банка крови Scripps, с помощью центрифугирования в градиенте плотности Ficoll-Hypaque.

[00365] PBMC культивировали в RPMI-10% FBS, состоящей из бессывороточной среды RPMI-1640, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone FBS; номер по каталогу SH30071.03IR, GE Healthcare, Логан, Юта), L-глутамином (номер по каталогу 11875-093, ThermoFisher, Уолтем, Массачусетс), 1% пенициллина/стрептомицина (номер по каталогу 15070-063, ThermoFisher), 1 мМ пирувата натрия (номер по каталогу 11360-070, ThermoFisher), 10 мМ 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислотой (HEPES; номер по каталогу 15630080, ThermoFisher) и 1X заменимой аминокислотой (номер по каталогу 11140-50, ThermoFisher).

[00366] Предварительно замороженные PBMC подвергали быстрому оттаиванию при 37°C на водяной бане и вносили в предварительно нагретую среду RPMI-10% FBS. Клетки осаждали при 300 x g, ресуспендировали в предварительно нагретой среде и подсчитывали перед использованием.

[00367] Активация мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) с помощью антител к CD3. IgG и Fab к CD3 разбавляли в среде RPMI-10% FBS до 2x конечной концентрации (10 нМ и 0,3 нМ). В каждую лунку вносили по пятьдесят микролитров 2x конечной концентрации антител и 50 мкл PBMC донора при концентрации 2 x 10⁵ клеток/лунка. В отдельные лунки также включали контроль без стимуляции, содержащий только среду RPMI-10% FBS, и клон положительного контроля, ADI-22523, и отрицательный контроль ADI-03847. Планшеты инкубировали при 37°C в течение 48 часов, супернатант собирали для анализа на цитокины.

[00368] Измерение активации T-клеток по цитокинам в супернатанте. После 48 часов инкубации супернатант собирали для анализа на цитокины с помощью набора для обнаружения интерферона-гамма в тканевых культурах от MesoScale в соответствии с инструкциями производителя. Супернатант анализировали без разбавления. Стандартную кривую, получаемую по используемому рекомбинантному цитокину, включали для каждого планшета для расчета уровня цитокинов в пг/мл.

[00369] Концентрацию интерферона-гамма (пг/мл) в супернатанте экстраполировали с применением стандартной кривой, полученной с помощью программного обеспечения MesoScale Discovery WorkBench. Концентрации интерферона-гамма приведены в пг/мл. Представлены данные по аффинности антитела (Fab, IgG) в отношении CD3εδчеловека, и они приведены в виде мольной концентрации.

[00370] Способы FACS-отбора с давлением аффинности. Вкратце, клетки дрожжей (по меньшей мере ~2 x 10⁷ клеток/параметр мечения) инкубировали с достаточным объемом биотинилированного антигена, чтобы обеспечить стехиометрический избыток относительно среднего числа презентирования IgG. Параметры мечения альбумина представляют собой 100-1 нМ в равновесных условиях; как правило, мечение проводили в течение от 20 мин до нескольких часов при комнатной температуре в буфере для промывки FACS (забуференный фосфатом солевой раствор (PBS)/0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA)). Затем после трехкратной промывки с помощью буфера для промывки, дрожжи окрашивали с помощью вторичных реагентов, конъюгата антитела к легкой цепи человека с FITC (LC-FITC), разбавленного 1:100, и либо стрептавидина-633 (SA-633), разбавленного 1:500, либо экстравидина-фикоэритрина (EA-PE), разбавленного 1:50, в течение 15 мин при 4°C. После двукратной промывки с помощью ледяного буфера для промывки клеточные осадки ресуспендировали в буфере для промывки в типичном объеме, составляющем по меньшей мере 1 мл на 1 x 10⁷ дрожжей и переносили в пробирки для сортировки, закрытые защелкивающейся крышкой с ситом. Сортировку проводили с применением сортера FACS ARIA (BD Biosciences) и определяли сортировочные гейты для отбора связывающих молекул. После последнего раунда сортировки дрожжи высевали и отдельные колонии отбирали для определения характеристик.

[00371] Способы FACS-отбора с термическим давлением. Исходное антитело подвергали диверсификации с помощью ПЦР сниженной точности с получением библиотеки оптимизации в дрожжах. Вначале данную дрожжевую библиотеку подвергали раунду положительного отбора с антигеном, чтобы отобрать клетки, экспрессирующие связывающие молекулы, с применением CD3εN27. Затем данную обогащенную популяцию пропускали через ряд параметров термического давления в диапазоне от ~50°C до 65°C включительно в течение 10 мин с применением в качестве контроля комнатной температуры. Оптимальные параметры давления гейтировали по презентации LC (антитело к лямбда-цепи человека, конъюгированное с PE) и связыванию антигена (SA-APC), что отражает остаточный свернутый IgG, компетентный для связывания реагентов отбора. Отсортированные клетки осаждали и плазмиды экстрагировали с применением коммерческого набора для очистки плазмид дрожжей (Zymo Research), при этом клеточные стенки дрожжей разрушали с помощью зимолазы, а ДНК впоследствии очищали с помощью миниколонки для очистки ДНК. Затем плазмидную ДНК трансформировали в E. coli для амплификации с последующим выделением минипрепов плазмидной ДНК с помощью набора для очистки плазмид E. coli (Qiagen). Затем плазмидную ДНК готовили для трансформации в соответствующий штамм дрожжей для последующих циклов отбора или секвенирования и продуцирования IgG.

[00372] Оптимизация с помощью ПЦР сниженной точности. С помощью мутагенеза тяжелой цепи (VH) и/или легкой цепи (VL) на основе ПЦР сниженной точности с применением стандартных методик молекулярной биологии вводили случайное разнообразие. Вкратце, мутагенные аналоги нуклеотидов dPTP и 8-оксо-dGTP вводили в процесс амплификации VH и VL при концентрации 1 мкМ для повышения частоты ошибки включения основания до приблиз. 0,01 п. о. Мутированный ПЦР-продукт рекомбинировали in situ с помощью гомологичной рекомбинации с линеаризованным вектором, содержащий последовательности константного участка HC или LC. Это, как правило, давало библиотеку с разнообразием 1 x 10^7-8. Давление аффинности и экспрессии использовали совместно путем инкубации комплекса антиген-антитело-дрожжевая клетка при уменьшающихся концентрациях антигена (равновесное давление) или конкуренции с исходным Fab (равновесное и кинетическое давление) различное количество раз для отбора антител с наивысшей аффинностью в FACS на протяжении последовательных раундов отбора.

[00373] Мутагенез CDR H3 на основе олигонуклеотидных праймеров. Выявленные или ранее оптимизированные антитела можно усовершенствовать посредством дальнейшей оптимизации с помощью введения разнообразия в последовательность CDR H3. Для этого вариабельный участок легкой цепи начального антитела подвергают ПЦР-амплификации, а затем с применением дрожжевой гомологичной рекомбинации вводят в штамм дрожжей, содержащий пустой вектор для легкой цепи. Он представляет собой штамм дрожжей с исходной легкой цепью. Тяжелую цепь начального антитела используют в качестве исходного материала для ПЦР в комбинации с праймерами, специфическими в отношении генов зародышевой линии, что дает ПЦР-продукт, который содержит тяжелую цепь от каркасного участка 1 до каркасного участка три. Данную амплификацию осуществляют с применением мутагенного нуклеотида 8-оксо-dGTP для обеспечения дополнительных низких уровней мутагенеза в амплифицированном участке тяжелой цепи. С целью создания сконструированного разнообразия в участке CDR H3 начального антитела создавали/заказывали библиотеку олигонуклеотидов CDR H3 (т.е. из IDT). Пул олигонуклеотидов амплифицировали с помощью праймеров, содержащих 5'-хвосты, которые обеспечивают рекомбинацию, специфическую в отношении генов зародышевой линии, с амплифицированным участком FW1-FW3 и пустым вектором. Для FW4 используют универсальный 3'-праймер. В качестве альтернативы можно осуществлять мутагенную ПЦР, которая вводит 8-оксо-dGTP в реакцию ПЦР, с использованием 5'-праймеров, специфических в отношении генов зародышевой линии, универсального 3'-праймера и ДНК VH. После того, как были получены исходные материалы в виде штамма с LC, FW1-FW3 HC и диверсифицированного CDR H3-FW4, проводят тройную трансформацию путем введения двух компонентов HC вместе с пустым вектором для HC в штамм с LC. Затем клетки выращивали в условиях давления отбора, чтобы убедиться в присутствии компонентов HC и LC.

[00374] Продуцирование антитела в дрожжах и его очистка. Клоны дрожжей выращивали до насыщения, а затем индуцировали в течение 48 ч при 30°C со встряхиванием. После индукции клетки дрожжей осаждали и супернатанты собирали для очистки. IgG очищали с использованием колонки с белком A и элюировали с помощью уксусной кислоты, pH 2,0. Fab-фрагменты получали с помощью расщепления под действием папаина и очищали путем пропускания через KappaSelect или CaptureSelect IgG-CH1 (GE Healthcare LifeSciences).

[00375] Продуцирование антитела в HEK и его очистка. Экспрессию IgG в клетках млекопитающих выполняли путем субклонирования антител в новый вектор экспрессии с последующими временной трансфекцией и экспрессией в HEK293ADI1, моноклональной линией клеток, полученной из HEK293 (DSMZ), выбранной из-за роста без образования скоплений, скорости роста и трансфицируемости. Вкратце, векторы экспрессии, содержащие представляющее интерес антитело, трансфицировали путем образования комплекса с реагентом для трансфекции с последующим воздействием на клетки HEK в течение одного часа, после чего следовало разбавление питательной средой до конечной плотности, составляющей 4 миллиона клеток на мл. Затем клетки культивировали в течение 7 дней с подпиткой свежей средой через каждые 48 часов. Через 7 дней супернатант собирали после центрифугирования и проводили очистку с применением белка A. При необходимости добавочно использовали очистку на колонке CHT для достижения >95% мономеров.

[00376] Продуцирование биспецифического антитела в HEK и его очистка. Молекулы scFv-Fc IgG4, несущие мутации His435->Arg, Tyr436->Phe («RF»), приводящие к отсутствию связывания с белком A, очищали с помощью CaptureSelect™ FcXL (GE HealthCare) и элюировали с помощью уксусной кислоты, pH 3,5.

[00377] Биспецифические антитела экспрессировали в клетках HEK293ADI1, выращиваемых во встряхиваемых колбах. Для осуществления очистки RF-гомодимера, не связывающегося с белком A, первичный захват проводили с использованием колонки Mab Select SuRE, элюировали с помощью уксусной кислоты, pH 3,5 и нейтрализовали с помощью 2 M HEPES, pH 8,0. Затем выделяли гетеродимер посредством вторичной очистки на колонке POROS MabCapture A и элюирования в линейном градиенте 40 мМ уксусной кислоты, 500 мМ NaCl от pH 6,0 до pH 3,0. Фракции нейтрализовали с использованием 2 M HEPES, pH 8,0, объединяли, избегая включения агрегатов, возникающих на конце пика гетеродимеров, и анализировали с помощью LCMS, чтобы гарантировать чистоту гетеродимеров.

[00378] Измерения KD с помощью ForteBio (интерферометрия биослоя; BLI). Измерения аффинности с помощью ForteBio проводили в целом так, как это описано ранее (Estep, P., et al., High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. MAbs, 2013. 5(2): p. 270-8). Вкратце, измерения аффинности с помощью ForteBio проводили путем загрузки IgG в рабочем режиме на сенсоры AHQ. Сенсоры уравновешивали в холостом режиме с помощью буфера для анализа в течение 30 мин, а затем отслеживали в рабочем режиме в течение 60 секунд для установки исходных значений. Сенсоры с загруженными IgG подвергали воздействию 100 нМ антигена в течение 5 мин, после чего их переносили в буфер для анализа на 5 мин для измерения скорости диссоциации. Кинетику анализировали с применением модели связывания 1:1.

[00379] Измерения KD с помощью BiaCore (поверхностный плазмонный резонанс; SPR).Биосенсорный анализ проводили при 25°C в буферной системе HBS-EP (10 мМ HEPES, pH 7,3, 150 мМ NaCl, 3 мМ EDTA, 0,05% поверхностно-активного вещества P20) с применением оптического биосенсора Biacore 8K, прикрепленного к сенсорному чипу CM5 (GE Healthcare, Марлборо, Массачусетс). Отсек с образцами поддерживали при 10°C. Антитело для захвата, представляющее собой антитело козы к IgG человека (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., Вест-Гроув, Пенсильвания; 109-005-098), иммобилизировали (11700 +/- 400 RU) на обеих проточных ячейках сенсорного чипа с применением стандартной химии иммобилизации по аминогруппе. Данный тип поверхности обеспечивает формат для повторяемого захвата свежего анализируемого антигена после каждой стадии регенерации. Проточную ячейку 2 использовали для анализа захваченного антигена (35,7 +/- 0,8 RU), в то время как проточную ячейку 1 использовали в качестве эталонной проточной ячейки. В проточном буфере готовили Fab в концентрации в диапазоне от 100 до 0,412 нМ (3-кратные разбавления). Каждую из концентраций образца Fab прогоняли в виде одной повторности. Также прогоняли два холостых ввода (буфер), и их использовали для оценки и вычитания артефактов системы. Фазы ассоциации и диссоциации для всех концентраций Fab отслеживали в течение 180 с каждая при расходе, составляющем 30 мкл/мин. Поверхность регенерировали с помощью 10 мМ глицина, pH 1,5, в течение 30 с при расходе 30 мкл/мин. Данные выравнивали, учитывали два эталона и аппроксимировали с применением программного обеспечения для оценки Biacore 8K, версии 1.0.

[00380] Эпитоп-специфическая сортировка/блокирование лиганда с помощью Octet Red384. Эпитоп-специфическую сортировку/блокирование лиганда проводили с применением стандартного анализа перекрестного блокирования в «сэндвич»-формате. Контрольные IgG к мишени загружали на сенсоры AHQ и незанятые сайты связывания Fc на сенсоре блокировали с помощью нерелевантного IgG1-антитела человека. Затем на сенсоры воздействовали с помощью 100 нМ целевого антигена, а затем вторым антителом к мишени или лигандом. Данные обрабатывали с применением программного обеспечения для анализа данных ForteBio 7.0. Дополнительное связывание вторым антителом или лигандом после ассоциации с антигеном указывает на незанятый эпитоп (неконкурирующая молекула), в то время как отсутствие связывания указывает на блокирование эпитопа (конкурирующая молекула или блокирование лиганда).

[00381] Эксклюзионная хроматография. Колонку TSKgel SuperSW mAb HTP (22855) применяли для быстрого SEC-анализа mAb, продуцируемых в клетках дрожжей и млекопитающих, при расходе 0,4 мл/мин c длительностью цикла, составляющей 6 мин/прогон. В качестве подвижной фазы применяли 200 мМ фосфат натрия и 250 мМ хлорид натрия.

[00382] Динамическая сканирующая флуориметрия (DSF). 10 мкл 20x Sypro Orange добавляют к 20 мкл 0,2-1 мг/мл раствора mAb или Fab. Устройство для RT-PCR (BioRad CFX96 RT PCR) применяют для линейного увеличения температуры планшета с образцами от 40 до 95°C при шаге 0,5°C с уравновешиванием в течение 2 мин при каждом значении температуры. Отрицательное значение первой производной для исходных данных используют для извлечения Tm.

[00383] Получение PSR. Реагент полиспецифической реактивности (PSR) получали так, как это описано, например, в WO 2014/179363 и Xu et al., mAbs, 2013. Вкратце, 2,5 литра клеток CHO-S применяли в качестве начального материала. Клетки осаждали при 2400 x g в течение 5 мин в 500-мл центрифужных бутылях, заполненных до 400 мл. Клеточные осадки объединяли, а затем ресуспендировали в 25 мл буфера B и осаждали при 2400 x g в течение 3 мин. Буфер декантировали и промывку повторяли еще раз. Клеточные осадки ресуспендировали в 3x объеме осадка буфера B, содержащего 1x ингибиторы протеаз (Roche, Complete, без EDTA), с применением гомогенизатора Polytron, при этом клетки выдерживали на льду. Затем гомогенат центрифугировали при 2400 x g в течение 5 мин и супернатант выдерживали и дополнительно однократно осаждали (2400 x g/5 мин) с тем, чтобы обеспечить удаление неразрушенных клеток, клеточного дебриса и ядер; полученный супернатант представляет собой препарат общего белка. Затем супернатант переносили в две 45-мл центрифужные пробирки Nalgene Oak Ridge и осаждали при 40000 x g в течение 40 мин при 4°C. Затем супернатанты, содержащие отделенные цитозольные белки (SCP), переносили в чистые пробирки Oak Ridge и дополнительно однократно центрифугировали при 40000 x g. Параллельно осадки, содержащие мембранную фракцию (EMF), выдерживали и центрифугировали при 40000 в течение 20 мин для удаления остаточного супернатанта. Затем осадки с EMF ополаскивали с помощью буфера B. Затем 8 мл буфера B добавляли к осадкам, содержащим мембраны, для разрыхления осадков и их переносили в гомогенизатор Даунса. После гомогенизации осадков их переносили в 50-мл коническую пробирку, и они представляли собой конечный препарат EMF.

[00384] Один миллиард клеток млекопитающих (например CHO, HEK293, Sf9) при концентрации ~10⁶ - 10⁷ клеток/мл переносили из среды культивирования тканей в 4x 250-мл конические пробирки и осаждали при 550 x g в течение 3 мин. Все последующие стадии проводили при 4°C или на льду с ледяными буферами. Клетки промывали с помощью 100 мл PBSF (1x PBS + 1 мг/мл BSA) и объединяли в одной конической пробирке. После удаления супернатанта далее клеточный осадок ресуспендировали в 30 мл буфера B (50 мМ HEPES, 0,15 M NaCl, 2 мМ CaCl2, 5 мМ KCl, 5 мМ MgCl2, 10% глицерина, pH 7,2) и осаждали при 550 x g в течение 3 мин. Супернатант из буфера B декантировали и клетки ресуспендировали в 3x объеме осадка буфера B с 2,5x ингибитором протеаз (Roche, Complete, без EDTA). С этого момента и далее в буфер B включены ингибиторы протеаз. Клетки гомогенизировали четыре раза на протяжении 30-секундных импульсов (гомогенизатор Polytron, PT1200E) и мембранную фракцию осаждали при 40000 x g в течение 1 часа при 4°C. Осадок ополаскивали с помощью 1 мл буфера B; супернатант выдерживали, и он представляет собой. Осадок переносили в гомогенизатор Даунса с 3 мл буфера B и ресуспендировали путем медленного подъема и опускания пестика в ходе 30-35 движений. Обогащенную мембранную фракцию (EMF) переносили в новую пробирку для сбора, промывая пестик для сбора всего возможного белка. Концентрацию белка в очищенной EMF определяли с применением набора для анализа белка Dc (BioRad). Чтобы солюбилизировать EMF, ее переносили в буфер для солюбилизации (50 мМ HEPES, 0,15 M NaCl, 2 мМ CaCl2, 5 мМ KCl, 5 мМ MgCl2, 1% н-додецил-b-D-мальтопиранозида (DDM), 1x ингибитор протеаз, pH 7,2) с получением конечной концентрации 1 мг/мл. Смесь перемешивали в течение ночи при 4°C путем вращения с последующим центрифугированием в 50-мл пробирке Oak Ridge (Fisher Scientific, 050529-ID) при 40000 x g в течение 1 часа. Собирали супернатант, который представляет собой растворимые мембранные белки (SMP), и количественно оценивали выход белка так, как это описано выше.

[00385] Для биотинилирования готовили исходный раствор NHS-LC-биотина в соответствии с протоколом производителя (Pierce, Thermo Fisher). Вкратце, 20 мкл реагента биотина добавляли на каждый 1 мг образца EMF и инкубировали при 4°C в течение 3 часов при аккуратном перемешивании. Объем доводили до 25 мл с помощью буфера B и переносили в центрифужную пробирку Oak Ridge. Биотинилированную EMF (b-EMF) осаждали при 40000 x g в течение 1 часа и дважды промывали с помощью 3 мл буфера C (буфер B без глицерина), не нарушая целостность осадка. Остаточный раствор удаляли. Осадок ресуспендировали с помощью гомогенизатора Даунса в 3 мл буфера C так, как это описано ранее. Теперь ресуспендированный осадок представлял собой биотинилированную EMF (b-EMF). Проводили солюбилизацию, как это описано выше, для получения b-SMP.

[00386] Анализы связывания PSR. Анализы проводили в целом так, как это описано, например, в Xu et al. Чтобы охарактеризовать профиль PSR моноклональных антител, презентированных на дрожжах, два миллиона дрожжей, презентирующих IgG, переносили в 96-луночный аналитический планшет и осаждали при 3000 x g в течение 3 мин для удаления супернатанта. Осадок ресуспендировали в 50 мкл свежеприготовленного разбавления 1:10 исходных растворов b-PSR и инкубировали на льду в течение 20 минут. Клетки дважды промывали с помощью 200 мкл холодного PBSF и осадок ресуспендировали в 50 мкл смеси для вторичного мечения (экстравидин-R-PE, антитело к LC человека, конъюгированное с FITC и йодидом пропидия). Смесь инкубировали на льду в течение 20 минут с последующими двумя промывками с помощью 200 мкл ледяного PBSF. Клетки ресуспендировали в 100 мкл ледяного PBSF и планшет прогоняли на FACSCanto (BD Biosciences) с применением устройства для ввода образцов HTS. Данные проточной цитометрии анализировали в отношении средней интенсивности флуоресценции в канале R-PE и нормализовали относительно надлежащих контролей для оценки неспецифического связывания. Ранее были описаны многочисленные способы презентации или отображения антител или фрагментов антител на поверхности дрожжей, все из которых соответствуют данному протоколу (Blaise et al., 2004, Boder and Wittrup, 1997, Kuroda and Ueda, 2011, Orcutt and Wittrup, 2010, Rakestraw et al., 2011, Sazinsky et al., 2008, Tasumi et al., 2009, Vasquez et al., 2009).

[00387] Анализ с бакуловирусными частицами (BVP). BVP (BlueSky Biotech) инкубировали на планшетах для ELISA путем внесения 50 мкл 1:1 исходного раствора BVP:50 мМ карбоната натрия (pH 9,6) на лунку, и их выдерживали при 4°C в течение 16-24 ч. На следующий день несвязанные BVP удаляли аспирацией из лунок. Все остальные стадии проводили при комнатной температуре (22°C). Добавляли сто микролитров блокирующего буфера (PBS с 0,5% BSA) и оставляли для инкубации в течение 1 ч перед проведением трех промывок с помощью 100 мкл PBS. Затем в лунки добавляли по 50 мкл 1 мкМ первичных антител (т. e. тестовых антител) в блокирующем буфере и инкубировали в течение 1 ч с последующими шести промывками с помощью 100 мкл PBS. В лунки добавляли по пятьдесят микролитров антител к IgG человека, конъюгированных с HRP (Promega W4038, приготовленной в PBS) и инкубировали в течение 1 ч с последующими шестью промывками так, как это описано ранее. Наконец, в каждую лунку добавляли по 50 мкл субстрата TMB (Fisher Scientific, 34021) и инкубировали в течение 10-15 мин. Реакции останавливали путем добавления в каждую лунку по 50 мкл 2 M серной кислоты. Поглощение считывали при 450 нм и показатель BVP определяли путем нормализации поглощения относительно контрольных лунок с отсутствием тестового антитела.

[00388] Кинетический анализ с помощью ForteBio.Устройства FortBio Octet HTX применяли в 12-канальном режиме (8 сенсоров на канал, 96 сенсоров на эксперимент) с одним из сенсоров AHC, SA или AHQ. Устройство управлялось посредством программного обеспечения, поставляемого производителем (версия 8.2 и 9.0). Названия образцов и концентрации вводились на страницу данных о планшете, а белки, ассоциированные с сенсором, идентифицировались в колонке «информация» на странице данных сенсора. Данные экспериментов по кинетике собирали на 90 или 180 с исходного уровня, 180 с фазы ассоциации и 180 с фазы диссоциации. Данные экспериментов по сортировке собирали на 5 стадиях: 90 с исходного уровня 1, 90 с проверки связывания сенсора со вторичной связывающей молекулой, 90 с исходного уровня 2, 180 с ассоциации и 180 с диссоциации в лунке, содержащей вторичное mAb. Все файлы сохраняли на сетевой диск общего пользования согласно правилу формирования названий, которые идентифицируют формат эксперимента.

[00389] HIC. Образцы IgG1 подвергали замене буфера на 1 M сульфат аммония и 0,1 M фосфат натрия при pH 6,5 с применением 0,5-мл спин-колонки Zeba 40 кДа (Thermo Pierce, № по кат. 87766). Градиент солей устанавливали на колонке Dionex ProPac HIC-10 от 1,8 M сульфата аммония, 0,1 M фосфата натрия при pH 6,5 до таких же параметров без аммония сульфата. Градиент пропускали на 17 мин при расходе 0,75 мл/мин. В конце прогона добавляли стадию промывки ацетонитрилом для удаления всего оставшегося белка, а колонку снова уравновешивали посредством 7 объемов колонки перед следующим циклом введения. Значения времени удерживания пиков отслеживали при поглощении A280 и концентрации сульфата аммония при элюировании рассчитывали на основе градиента и расхода.

[00390] LCMS. Образцы mAb восстанавливали с помощью DTT с последующей передачей анализа LCMS вниз на масс-спектрометр Bruker maXis4G, соединенный с Agilent 1100 HPLC (Agilent). Для удаления соли из образцов применяли колонку для обращенно-фазовой хроматографии POROS R2 10 мкм (2,1 x 30 мм). Быстрый поток LC при 2 мл/мин обеспечивает разделение между образцом и солью, и элюирование образцов и регенерация колонки завершались в пределах цикла 2,1 мин. T-образное соединение применяли для доставки только 0,15 мл/мин потока образца в масс-спектрометр для анализа образца. Масс-спектрометр Bruker Maxis 4G прогоняли в режиме положительных ионов с детекцией в диапазоне 750-2500 масса/заряд. Остальные параметры источника устанавливали следующим образом: капилляр был установлен на 5500В, распылитель на 4,0 бар, сушильный газ из расчета 4,0 л/мин и температуру сушки устанавливали на 200°С.

[00391] MS-спектры анализировали с применением программы для анализа данных Bruker версии 4.1, а деконволюцию осуществляли с применением максимально энтропийной деконволюции с массой в диапазоне 20-30 кДа.

[00392] Секреция IL2.96-луночный планшет для культивирования с плоским дном у лунок (Thermo Scientific, 446612) покрывали из расчета 200 мкл на лунку антителом к CD3 при концентрации 10 мкг/мл в стерильном DPBS; накрывали крышкой и инкубировали в течение ночи при 4°C. Непосредственно перед добавлением клеток на следующий день промывали 96-луночный планшет для культивирования 3 раза с помощью 200 мкл ледяного стерильного DPBS. Параллельно подготавливали клетки. Измеряли плотность клеток и рассчитывали общее количество CD3+ и CD3- клеток для обеспечения 1 x 10⁶ клеток/лунка. Отмеряли требуемое количество клеток в 50-мл коническую пробирку, а затем 3X промывали клетки в 50 мл теплой (37°C) RPMI 1640 GlutaMAX (Gibco, 61870-127). Клетки ресуспендировали в теплой питательной среде, содержащей растворимое антитело к CD28 (BioLegend) при концентрации 2 мкг/мл, до плотности клеток, составляющей 1 x 10⁷ клеток/мл. В покрытый антителом к CD3 планшет для культивирования клеток распределяли по 100 мкл раствора, содержащего 1,0 x 10⁶ клеток на лунку. Планшет накрывали крышкой для планшета из твердого пластика и инкубировали в стационарном инкубаторе при 37°C в течение 14-16 ч. На следующий день собирали содержимое каждой лунки путем аккуратного пипетирования, а затем переносили клетки и супернатант в 96-луночный планшет (Thermo Scientific, 264623). Планшет центрифугировали при 500 x g в течение 3 мин для осаждения клеток. Не нарушая целостность осадка, осторожно переносили супернатант в новую пробирку Eppendorf или в планшет Canto. Собирали и подготавливали все подлежащие применению реагенты в наборе MSD (набор Meso Scale Discovery IL-2 V-Plex, K151QQD-2). Проводили серийное разведение калибровочного стандарта IL-2 с помощью разбавителя 2 с получением набора, обеспечивающего 7 точек стандартной кривой, в дополнение к нулевому образцу, содержащему только разбавитель 2. По 50 мкл каждого стандарта переносили в каждую лунку в одной колонке планшета MSD, убедившись, что полностью покрыто дно лунки. По 50 мкл образца из каждой лунки переносили в планшет MSD. Убеждались, что жидкость полностью покрывает все дно каждой лунки, включая оба электрода. Планшет MSD накрывали прозрачной пленкой и инкубировали на встряхивателе для планшетов в течение 2 ч при 700 об/мин при комнатной температуре (22-25°C). Через 2 ч стряхивали и промокали планшет бумажным полотенцем и трижды промывали с помощью 150 мкл буфера для промывки, стряхивая с тем, чтобы освободиться от буфера между промывками. После последней промывки планшет промокали бумажным полотенцем для удаления всего оставшегося буфера. По 25 мкл раствора детектирующего антитела к IL-2 добавляли на дно каждой лунки. Планшет MSD накрывали прозрачной пленкой и инкубировали его на встряхивателе для планшетов в течение 1-2 ч при 700 об/мин при комнатной температуре. Через 2 ч стряхивали и промокали планшет бумажным полотенцем, а затем трижды промывали с помощью 150 мкл буфера для промывки. В каждую лунку добавляли по 150 мкл 2X буфера для считывания с поверхностно-активным веществом и планшет анализировали (или выбранные лунки планшета) на устройстве MSD.

[00393] Неофициальный перечень последовательностей представлен в таблице 2 ниже. В неофициальном перечне последовательностей представлены следующие шестнадцать (16) элементов последовательности, содержащихся в каждом из 405 антител, идентифицированных так, как это описано выше и обозначенных под номерами антител (Ab №) 1-405, в следующем порядке:

• Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка тяжелой цепи («HC»)

• Аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой цепи («HC»)

• Аминокислотная последовательность CDR H1 («H1») вариабельного участка тяжелой цепи

• Последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 («H1») вариабельного участка тяжелой цепи

• Аминокислотная последовательность CDR H2 («H2») вариабельного участка тяжелой цепи

• Последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 («H2») вариабельного участка тяжелой цепи

• Аминокислотная последовательность CDR H3 («H3») вариабельного участка тяжелой цепи

• Последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 («H3») вариабельного участка тяжелой цепи

• Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка легкой цепи («LC»)

• Аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой цепи («LC»)

• Аминокислотная последовательность CDR L1 («L1») вариабельного участка легкой цепи

• Последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 («L1») вариабельного участка легкой цепи

• Аминокислотная последовательность CDR L2 («L2») вариабельного участка легкой цепи

• Последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 («L2») вариабельного участка легкой цепи

• Аминокислотная последовательность CDR L3 («L3») вариабельного участка легкой цепи

• Последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 («L3») вариабельного участка легкой цепи

Дополнительные варианты осуществления пронумерованы в нижеприведенных пунктах.

1. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанное антитело демонстрирует улучшенный профиль разрабатываемости по сравнению с одним или более из трастузумаба; (Herceptin®); линтизумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

2. Антитело по пункту 1, где улучшенный профиль разрабатываемости получен путем проведения анализа PSR; анализа SCP; AS-CINS; анализа BVP; ELISA; анализа DSF; анализа Tm; анализа HIC; анализа CIC или их комбинации.

3. Антитело, содержащее домен, связывающий CD3, где указанное антитело демонстрирует критерий разрабатываемости: от приблизительно 0 MFI до приблизительно 500 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 200 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 150 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 100 MFI; от приблизительно 0 MFI до приблизительно 50 MFI; от приблизительно 200 MFI до 500 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 200 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 450 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 400 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 350 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 300 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 250 MFI; от приблизительно 100 MFI до приблизительно 200 MFI или от приблизительно 100 MFI до приблизительно 150 MFI.

4. Антитело по пункту 3, где критерий разрабатываемости получен путем проведения анализа PSR, анализа SCP, AS-CINS; анализа BVP; ELISA; анализа DSF; анализа Tm; анализа HIC; анализа CIC или их комбинаций.

5. Антитело, содержащее домен, связывающий CD3, где указанное антитело демонстрирует нормализованный критерий разрабатываемости от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,6; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,57; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,55; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,53; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,51; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,49; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,47; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,45; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,43; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,41; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,39; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,37; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,35; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,33; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,31; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,29; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,27; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,25; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,23; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,21; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,19; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,17; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,15; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,13; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,11; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,09; от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,07 или от приблизительно 0,0 до приблизительно 0,05.

6. Антитело, содержащее домен, связывающий CD3, где указанное антитело вызывает активацию T-клеток или T-клеточный цитолиз, демонстрируя при этом сниженную предрасположенность к вызову продуцирования цитокинов до уровней, способных индуцировать синдром высвобождения цитокинов.

7. Антитело, содержащее домен, связывающий CD3, где указанное антитело вызывает активацию T-клеток или T-клеточный лизис, демонстрируя при этом сниженную предрасположенность к вызову продуцирования цитокинов до уровней, способных индуцировать высвобождение цитокинов по сравнению с такими уровнями, которые наблюдаются при использовании одного или более из трастузумаба (Herceptin®); линтизумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

8. Антитело по пункту 6 или пункту 7, где активация T-клеток, T-клеточный лизис и/или продуцирование цитокинов оцениваются путем проведения клеточного анализа.

9. Антитело по пункту 8, где активация T-клеток, T-клеточный лизис и/или продуцирование цитокинов оцениваются путем проведения анализа активации T-клеток, анализа уничтожения целевых клеток под действием перенаправленных T-клеток и анализа уровня продуцирования цитокинов, где каждый анализ предусматривает инкубирование PBMC с антителом.

10. Антитело по пункту 9, где анализ уничтожения целевых клеток под действием перенаправленных T-клеток дополнительно предусматривает инкубирование PBMC и антитела с целевыми клетками, экспрессирующими целевой антиген, отличный от CD3.

11. Антитело по любому из пунктов 6-10, где по меньшей мере один цитокин, для которого измерены уровни продуцирования цитокинов, выбран из группы, состоящей из: интерлейкина 6 (IL-6); интерлейкина 12 (IL-12); фактора некроза опухолей альфа (TNFa); (TGFb); интерлейкина-2 (IL-2) и интерферона-гамма (IFNg).

12. Антитело по любому из пунктов 6-11, где измерены уровни продуцирования IFNg.

13. Антитело по любому из пунктов 6-13, где уровни продуцирования цитокинов составляют профиль риска синдрома высвобождения цитокинов (CRS).

14. Антитело по любому из пунктов 6-13, где уровни продуцирования составляют профиль риска синдрома высвобождения цитокинов, который является показателем сниженного риска вызова синдрома высвобождения цитокинов (CRS).

15. Антитело по любому из пунктов 6-14, где уровни продуцирования цитокинов составляют профиль риска синдрома высвобождения цитокинов, который является показателем сниженного риска вызова синдрома высвобождения цитокинов (CRS) по сравнению с профилем риска синдрома высвобождения цитокинов, оцениваемым для одного или более из трастузумаба; (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

16. Антитело, содержащее CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH3 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH3 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

17. Антитело, содержащее CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH2 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH2 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

18. Антитело, содержащее CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRH1 не характеризуется 100% идентичностью с CDRH1 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

19. Антитело содержащее CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL3 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL3 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

20. Антитело, содержащее CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL2 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL2 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

21. Антитело, содержащее CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что CDRL1 не характеризуется 100% идентичностью с CDRL1 из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

22. Антитело, содержащее тяжелую цепь (HC), которая на 100% идентична; по меньшей мере 99% идентична; по меньшей мере 98% идентична; по меньшей мере 97% идентична; по меньшей мере 96% идентична; по меньшей мере 95% идентична; по меньшей мере 94% идентична; по меньшей мере 93% идентична; по меньшей мере 92% идентична; по меньшей мере 91% идентична; по меньшей мере 90% идентична; по меньшей мере 89% идентична; по меньшей мере 88% идентична; по меньшей мере 87% идентична; по меньшей мере 86% идентична; по меньшей мере 85% идентична; по меньшей мере 84% идентична; по меньшей мере 83% идентична; по меньшей мере 82% идентична или по меньшей мере 80% идентична HC, выбранной из группы, состоящей из HC из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что HC не характеризуется 100% идентичностью с HC из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

23. Антитело, содержащее легкую цепь (LC), которая на 100% идентична; по меньшей мере 99% идентична; по меньшей мере 98% идентична; по меньшей мере 97% идентична; по меньшей мере 96% идентична; по меньшей мере 95% идентична; по меньшей мере 94% идентична; по меньшей мере 93% идентична; по меньшей мере 92% идентична; по меньшей мере 91% идентична; по меньшей мере 90% идентична; по меньшей мере 89% идентична; по меньшей мере 88% идентична; по меньшей мере 87% идентична; по меньшей мере 86% идентична; по меньшей мере 85% идентична; по меньшей мере 84% идентична; по меньшей мере 83% идентична; по меньшей мере 82% идентична или по меньшей мере 80% идентична LC, выбранной из группы, состоящей из LC из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что LC не характеризуется 100% идентичностью с LC из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

24. Антитело, содержащее:

A) CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

B) CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и

C) CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; при условии, что ни CDRH3, CDRH2, ни CHRH1 не характеризуются 100% идентичностью с CHRH3, CDRH2 или CDRH1 соответственно из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

25. Антитело, содержащее:

A) CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

B) CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и

C) CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

при условии, что ни CDRL3, CDRL2, ни CHRL1 не характеризуются 100% идентичностью с CHRL3, CDRL2 или CDRL1 соответственно из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

26. Антитело, содержащее:

A) CDRH3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH3, выбранному из группы, состоящей из CDRH3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

B) CDRH2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH2, выбранному из группы, состоящей из CDRH2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

C) CDRH1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRH1, выбранному из группы, состоящей из CDRH1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

D) CDRL3, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL3, выбранному из группы, состоящей из CDRL3 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

E) CDRL2, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL2, выбранному из группы, состоящей из CDRL2 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2; и

F) CDRL1, который на 100% идентичен; по меньшей мере 99% идентичен; по меньшей мере 98% идентичен; по меньшей мере 97% идентичен; по меньшей мере 96% идентичен; по меньшей мере 95% идентичен; по меньшей мере 94% идентичен; по меньшей мере 93% идентичен; по меньшей мере 92% идентичен; по меньшей мере 91% идентичен; по меньшей мере 90% идентичен; по меньшей мере 89% идентичен; по меньшей мере 88% идентичен; по меньшей мере 87% идентичен; по меньшей мере 86% идентичен; по меньшей мере 85% идентичен; по меньшей мере 84% идентичен; по меньшей мере 83% идентичен; по меньшей мере 82% идентичен или по меньшей мере 80% идентичен CDRL1, выбранному из группы, состоящей из CDRL1 из Mab 1-21, 23-222, 224-363 и 371-405, представленных в таблице 2;

при условии, что ни CDRH3, CDRH2, CDRH1, CDRL3, CDHL2, ни CHRL1 не характеризуются 100% идентичностью с CHRH3, CDRH2, CDRH1, CDRL3, CDHL2 или CDRL1 соответственно из любого из Mab 223, 364, 365, 366, 367, 368, 369 или 370, представленных в таблице 2.

27. Антитело по любому из пунктов 16-26, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3).

28. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-15512; ADI-15516 и ADI-16513; представленных в таблице 2.

29. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-18562; ADI-18564; ADI-18565; ADI-18566; ADI-18567; ADI-18568; ADI-18570; ADI-18571; ADI-18572; ADI-18573; ADI-18563; ADI-18569; ADI-18574; ADI-18575; ADI-18576; ADI-18578; ADI-18579; ADI-18580; ADI-18581; ADI-18582; ADI-18584; ADI-18585; ADI-18577; ADI-18583; ADI-18588; ADI-18589; ADI-18590; ADI-18591; ADI-18593; ADI-18594; ADI-18595; ADI-18596; ADI-18597; ADI-18592; ADI-18587; ADI-18586 и ADI-16606; представленных в таблице 2.

30. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-18576; ADI-20820; ADI-20578; ADI-20571; ADI-21097; ADI-20577; ADI-20576; ADI-20568; ADI-20582; ADI-20575; ADI-20567; ADI-20574; ADI-20573; ADI-20579; ADI-18565; ADI-20818; ADI-20587; ADI-20588; ADI-20589; ADI-20590; ADI-20594; ADI-20596; ADI-20599; ADI-20605; ADI-20607; ADI-20608 и ADI-20609; представленных в таблице 2.

31. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-16606; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-28708; ADI-28709; ADI-28710; ADI-21943; ADI-28711; ADI-28712; ADI-28713; ADI-28714; ADI-28715; ADI-21944; ADI-28716; ADI-21945; ADI-21946; ADI-28717; ADI-21947; ADI-28718; ADI-28719; ADI-28720; ADI-28721; ADI-28722; ADI-28723; ADI-28724; ADI-28725; ADI-28726; ADI-28727; ADI-28728; ADI-28729; ADI-28730; ADI-28731; ADI-28732; ADI-28733; ADI-28734; ADI-28735; ADI-28736; ADI-28737; ADI-28738; ADI-28739; ADI-28740; ADI-28741; ADI-28742; ADI-28743; ADI-21948; ADI-21949; ADI-28744; ADI-21950; ADI-28745; ADI-28746; ADI-28747; ADI-28748; ADI-21951; ADI-21952; ADI-28749; ADI-28750; ADI-28751; ADI-21953; ADI-28752; ADI-21954; ADI-28753; ADI-28754; ADI-28755; ADI-28756; ADI-28757; ADI-28758; ADI-28759; ADI-28760; ADI-28761; ADI-28762; ADI-28763; ADI-28764; ADI-28765; ADI-28766; ADI-28767; ADI-28768; ADI-21955; ADI-28769; ADI-28770; ADI-21956; ADI-28771; ADI-28772; ADI-28773; ADI-28774 и ADI-28775; представленных в таблице 2.

32. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-21959; ADI-21963; ADI-21965; ADI-21967; ADI-21970; ADI-21971; ADI-21972; ADI-21973; ADI-21974; ADI-21975; ADI-21976; ADI-21977; ADI-21978; ADI-21979; ADI-21943; ADI-21944; ADI-21945; ADI-21946; ADI-21947; ADI-21948; ADI-21949; ADI-21950; ADI-21951; ADI-21952; ADI-21953; ADI-21954; ADI-21955 и ADI-21956; представленных в таблице 2.

33. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-21952; ADI-22523; ADI-24403; ADI-24404; ADI-24405; ADI-24407; ADI-24408; ADI-24409; ADI-24410; ADI-24411; ADI-24412; ADI-24413; ADI-24414; ADI-24415; ADI-24416; ADI-24417; ADI-24418; ADI-24434; ADI-24435; ADI-24436; ADI-24437; ADI-24438; ADI-24439; ADI-24440; ADI-24441; ADI-24442; ADI-24443; ADI-24444; ADI-24445; ADI-24446; ADI-24449; ADI-24388; ADI-24389; ADI-24390; ADI-24391; ADI-24392; ADI-24393; ADI-24394; ADI-24395; ADI-24396; ADI-24397; ADI-24398; ADI-24399; ADI-24400; ADI-24401; ADI-24402; ADI-24419; ADI-24420; ADI-24421; ADI-24422; ADI-24423; ADI-24424; ADI-24425; ADI-24426; ADI-24427; ADI-24428; ADI-24429; ADI-24430; ADI-24431; ADI-24432; ADI-24433; ADI-24447 и ADI-24448; представленных в таблице 2.

34. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-23652; ADI-23653; ADI-23654; ADI-23655; ADI-23656; ADI-23657; ADI-23658; ADI-23651; ADI-23644; ADI-23645; ADI-23646; ADI-23647; ADI-23648; ADI-23649; ADI-23650; ADI-23667; ADI-23668; ADI-23669; ADI-23670; ADI-23671; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23659; ADI-23660; ADI-23661; ADI-23663; ADI-23664; ADI-23639; ADI-23641; ADI-23642; ADI-23640; ADI-23643; ADI-21952; ADI-23633; ADI-23634; ADI-23635; ADI-23636; ADI-23637; ADI-23638; ADI-23632 и ADI-23629; представленных в таблице 2.

35. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26909; ADI-26910; ADI-26912; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26916; ADI-26917; ADI-26918; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26924; ADI-26925; ADI-26927; ADI-26928; ADI-26929; ADI-26930; ADI-26932; ADI-26933; ADI-26938; ADI-26939; ADI-26940; ADI-26941; ADI-26942; ADI-26943; ADI-26944; ADI-26945; ADI-26950; ADI-26954; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23664; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993; ADI-26994 и ADI-26995; представленных в таблице 2.

36. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26910; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26943; ADI-26954; ADI-21952; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26962; ADI-26978; ADI-26983 и ADI-26994; представленных в таблице 2.

37. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы, состоящей из: ADI-15512; ADI-16513; ADI-15516; ADI-18565; ADI-18589; ADI-18585; ADI-18590; ADI-18576; ADI-20568; ADI-20580; ADI-21978; ADI-22523; ADI-25133 и ADI-26906.

38. Антитело по любому из пунктов 16-27, где антитело содержит домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), который выбран из группы состоящей из: ADI-16606; ADI-29601; ADI-29602; ADI-29603; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-21952; ADI-23633; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26961; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26967; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26970; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993 и ADI-26994.

39. Антитело, содержащее домен, связывающее кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-15512; ADI-15516 и ADI-16513; представленных в таблице 2.

40. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-18562; ADI-18564; ADI-18565; ADI-18566; ADI-18567; ADI-18568; ADI-18570; ADI-18571; ADI-18572; ADI-18573; ADI-18563; ADI-18569; ADI-18574; ADI-18575; ADI-18576; ADI-18578; ADI-18579; ADI-18580; ADI-18581; ADI-18582; ADI-18584; ADI-18585; ADI-18577; ADI-18583; ADI-18588; ADI-18589; ADI-18590; ADI-18591; ADI-18593; ADI-18594; ADI-18595; ADI-18596; ADI-18597; ADI-18592; ADI-18587; ADI-18586 и ADI-16606; представленных в таблице 2.

41. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-18576; ADI-20820; ADI-20578; ADI-20571; ADI-21097; ADI-20577; ADI-20576; ADI-20568; ADI-20582; ADI-20575; ADI-20567; ADI-20574; ADI-20573; ADI-20579; ADI-18565; ADI-20818; ADI-20587; ADI-20588; ADI-20589; ADI-20590; ADI-20594; ADI-20596; ADI-20599; ADI-20605; ADI-20607; ADI-20608 и ADI-20609; представленных в таблице 2.

42. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-16606; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-28708; ADI-28709; ADI-28710; ADI-21943; ADI-28711; ADI-28712; ADI-28713; ADI-28714; ADI-28715; ADI-21944; ADI-28716; ADI-21945; ADI-21946; ADI-28717; ADI-21947; ADI-28718; ADI-28719; ADI-28720; ADI-28721; ADI-28722; ADI-28723; ADI-28724; ADI-28725; ADI-28726; ADI-28727; ADI-28728; ADI-28729; ADI-28730; ADI-28731; ADI-28732; ADI-28733; ADI-28734; ADI-28735; ADI-28736; ADI-28737; ADI-28738; ADI-28739; ADI-28740; ADI-28741; ADI-28742; ADI-28743; ADI-21948; ADI-21949; ADI-28744; ADI-21950; ADI-28745; ADI-28746; ADI-28747; ADI-28748; ADI-21951; ADI-21952; ADI-28749; ADI-28750; ADI-28751; ADI-21953; ADI-28752; ADI-21954; ADI-28753; ADI-28754; ADI-28755; ADI-28756; ADI-28757; ADI-28758; ADI-28759; ADI-28760; ADI-28761; ADI-28762; ADI-28763; ADI-28764; ADI-28765; ADI-28766; ADI-28767; ADI-28768; ADI-21955; ADI-28769; ADI-28770; ADI-21956; ADI-28771; ADI-28772; ADI-28773; ADI-28774 и ADI-28775; представленных в таблице 2.

43. Антитело содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-21959; ADI-21963; ADI-21965; ADI-21967; ADI-21970; ADI-21971; ADI-21972; ADI-21973; ADI-21974; ADI-21975; ADI-21976; ADI-21977; ADI-21978; ADI-21979; ADI-21943; ADI-21944; ADI-21945; ADI-21946; ADI-21947; ADI-21948; ADI-21949; ADI-21950; ADI-21951; ADI-21952; ADI-21953; ADI-21954; ADI-21955 и ADI-21956; представленных в таблице 2.

44. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-21952; ADI-22523; ADI-24403; ADI-24404; ADI-24405; ADI-24407; ADI-24408; ADI-24409; ADI-24410; ADI-24411; ADI-24412; ADI-24413; ADI-24414; ADI-24415; ADI-24416; ADI-24417; ADI-24418; ADI-24434; ADI-24435; ADI-24436; ADI-24437; ADI-24438; ADI-24439; ADI-24440; ADI-24441; ADI-24442; ADI-24443; ADI-24444; ADI-24445; ADI-24446; ADI-24449; ADI-24388; ADI-24389; ADI-24390; ADI-24391; ADI-24392; ADI-24393; ADI-24394; ADI-24395; ADI-24396; ADI-24397; ADI-24398; ADI-24399; ADI-24400; ADI-24401; ADI-24402; ADI-24419; ADI-24420; ADI-24421; ADI-24422; ADI-24423; ADI-24424; ADI-24425; ADI-24426; ADI-24427; ADI-24428; ADI-24429; ADI-24430; ADI-24431; ADI-24432; ADI-24433; ADI-24447 и ADI-24448; представленных в таблице 2.

45. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-23652; ADI-23653; ADI-23654; ADI-23655; ADI-23656; ADI-23657; ADI-23658; ADI-23651; ADI-23644; ADI-23645; ADI-23646; ADI-23647; ADI-23648; ADI-23649; ADI-23650; ADI-23667; ADI-23668; ADI-23669; ADI-23670; ADI-23671; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23659; ADI-23660; ADI-23661; ADI-23663; ADI-23664; ADI-23639; ADI-23641; ADI-23642; ADI-23640; ADI-23643; ADI-21952; ADI-23633; ADI-23634; ADI-23635; ADI-23636; ADI-23637; ADI-23638; ADI-23632 и ADI-23629, представленных в таблице 2.

46. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26909; ADI-26910; ADI-26912; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26916; ADI-26917; ADI-26918; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26924; ADI-26925; ADI-26927; ADI-26928; ADI-26929; ADI-26930; ADI-26932; ADI-26933; ADI-26938; ADI-26939; ADI-26940; ADI-26941; ADI-26942; ADI-26943; ADI-26944; ADI-26945; ADI-26950; ADI-26954; ADI-23672; ADI-23673; ADI-23664; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993; ADI-26994 и ADI-26995; представленных в таблице 2.

47. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из доменов, связывающих CD3, из ADI-22523; ADI-26906; ADI-26907; ADI-26908; ADI-26910; ADI-26913; ADI-26915; ADI-26919; ADI-26920; ADI-26921; ADI-26943; ADI-26954; ADI-21952; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26962; ADI-26978; ADI-26983 и ADI-26994; представленных в таблице 2.

48. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из: ADI-15512; ADI-16513; ADI-15516; ADI-18565; ADI-18589; ADI-18585; ADI-18590; ADI-18576; ADI-20568; ADI-20580; ADI-21978; ADI-22523; ADI-25133 и ADI-26906.

49. Антитело, содержащее домен, связывающий кластер дифференцировки три (CD3), где указанный домен, связывающий CD3, выбран из группы, состоящей из: ADI-16606; ADI-29601; ADI-29602; ADI-29603; ADI-20587; ADI-20607; ADI-20590; ADI-21952; ADI-23633; ADI-26955; ADI-26956; ADI-26957; ADI-26958; ADI-26959; ADI-26960; ADI-26961; ADI-26962; ADI-26963; ADI-26964; ADI-26965; ADI-26966; ADI-26967; ADI-26968; ADI-26969; ADI-26970; ADI-26971; ADI-26972; ADI-26973; ADI-26974; ADI-26975; ADI-26976; ADI-26977; ADI-26978; ADI-26979; ADI-26980; ADI-26981; ADI-26982; ADI-26983; ADI-26984; ADI-26985; ADI-26986; ADI-26987; ADI-26988; ADI-26989; ADI-26990; ADI-26991; ADI-26992; ADI-26993 и ADI-26994.

50. Антитело по любому из пунктов 1-49, где антитело демонстрирует сниженную предрасположенность к деградации по сравнению с одним или более из трастузумаба; (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

51. Антитело по любому из пунктов 16-49, где антитело демонстрирует сниженный профиль риска CRS по сравнению с одним или более из трастузумаба (Herceptin®); линтузумаба; блинатумомаба (Blincyto®) и Mab 364, Mab 366, Mab 367, Mab 368, Mab 369, Mab 370 или Mab 22, представленных в таблице 2.

52. Антитело по любому из пунктов 1-51, где антитело предусматривает мультиспецифическое антитело.

53. Антитело по любому из пунктов 1-52, где антитело предусматривает биспецифическое антитело.

54. Антитело по любому из пунктов 1-53, где антитело содержит по меньшей мере второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с целевым антигеном онкологического заболевания; целевым антигеном иммуноонкологического заболевания; целевым антигеном нейродегенеративного заболевания; целевым антигеном аутоиммунного нарушения; целевым антигеном инфекционного заболевания; целевым антигеном метаболического заболевания; целевым антигеном когнитивного нарушения; целевым антигеном гематоэнцефалического барьера или целевым антигеном заболевания крови.

55. Антитело по любому из пунктов 1-54, где антитело содержит по меньшей мере второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с антигеном, выбранным из группы, состоящей из: 17-IA, 4-1BB, 4Dc, 6-кето-PGF1a, 8-изо-PGF2a, 8-оксо-dG, аденозинового рецептора A1, A33, ACE, ACE-2, активина, активина A, активина AB, активина B, активина C, активина RIA, активина RIA/ALK-2, активина RIB/ALK-4, активина RIIA, активина RUB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAM8, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, адресинов, aFGF, ALCAM, ALK, ALK-1, ALK-7, альфа-1-антитрипсина, антагониста альфа-V/бета-1, ANG, Ang, APAF-1, APE, APJ, APP, APRIL, AR, ARC, ART, артемина, антиидиотипа, аспарагиновой кислоты, предсердного натрийуретического фактора, интегрина av/b3, Ax1, b2M, B7-1, B7-2, B7-H, стимулятора B-лимфоцитов (BlyS), BACE, BACE-1, Bad, BAFF, BAFF-R, Bag-1, BAK, Bax, BCA-1, BCAM, Bel, BCMA, BDNF, b-ECGF, bFGF, BID, Bik, BIM, BLC, BL-CAM, BLK, BMP, BMP-2/BMP-2a, BMP-3/остеогенина, BMP-4/BMP-2b, BMP-5, BMP-6/Vgr-1, BMP-7 (OP-1), BMP-8 (BMP-8a, OP-2), BMPR, BMPR-IA (ALK-3), BMPR-IB (ALK-6), BRK-2, RPK-1, BMPR-II (BRK-3), разновидностей BMP, b-NGF, BOK, бомбезина, костного нейротрофического фактора, BPDE, BPDE-DNA, BTC, фактора комплемента 3 (C3), C3a, C4, C5, C5a, CIO, CA125, CAD-8, кальцитонина, cAMP, раково-эмбрионального антигена (CEA), карцинома-ассоцированного антигена, катепсина A, катепсина B, катепсина C/DPPI, катепсина D, катепсина E, катепсина H, катепсина L, катепсина O, катепсина S, катепсина V, катепсина X/Z/P, CBL, CCI, CCK2, CCL, CCL1, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9/10, CCR, CCR1, CCR10, CCR10, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CD1, CD2, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD27L, CD28, CD29, CD30, CD30L, CD32, CD33 (белки p67), CD34, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45, CD46, CD49a, CD52, CD54, CD55, CD56, CD61, CD64, CD66e, CD74, CD80 (B7-1), CD89, CD95, CD123, CD137, CD138, CD140a, CD146, CD147, CD148, CD152, CD164, CEACAM5, CFTR, cGMP, CINC, токсина Clostridium botulinum, токсина Clostridium perfringens, CKb8-1, CLC, CMV, CMV UL, CNTF, CNTN-1, COX, C-Ret, CRG-2, CT-1, CTACK, CTGF, CTLA-4, CX3CL1, CX3CR1, CXCL, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCR, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, цитокератинового опухолеассоциированного антигена, DAN, DCC, DcR3, DC-SIGN, фактора ускорения распада, дес(1-3)-IGF-1 (IGF-1 головного мозга), Dhh, дигоксина, DNAM-1, ДНКазы, Dpp, DPPIV/CD26, Dtk, ECAD, EDA, EDA-A1, EDA-A2, EDAR, EGF, EGFR (ErbB-1), EMA, EMMPRIN, EN A, рецептора эндотелина, энкефалиназы, eNOS, Eot, эотаксина-1, EpCAM, эфрина B2/EphB4, EPO, ERCC, E-селектина, ET-1, фактора IIa, фактора VII, фактора VIIIc, фактора IX, белка активации фибробластов (FAP), Fas, FcR1, FEN-1, ферритина, FGF, FGF-19, FGF-2, FGF3, FGF-8, FGFR, FGFR-3, фибрина, FL, FLIP, Flt-3, Flt-4, фолликулостимулирующего гормона, фракталкина, FZD1, FZD2, FZD3, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, FZD9, FZD10, G250, Gas 6, GCP-2, GCSF, GD2, GD3, GDF, GDF-1, GDF-3 (Vgr-2), GDF-5 (BMP-14, CDMP-1), GDF-6 (BMP-13, CDMP-2), GDF-7 (BMP-12, CDMP-3), GDF-8 (миостатин), GDF-9, GDF-15 (MIC-1), GDNF, GDNF, GFAP, GFRa-1, GFR-альфа1, GFR-альфа2, GFR-альфа3, GITR, глюкагона, Glut 4, гликопротеина IIb/IIIa (GP IIb/IIIa), GM-CSF, gp130, gp72, GRO, рилизинг-фактора гормона роста, гаптена (NP-cap или NIP-cap), HB-EGF, HCC, гликопротеина gB оболочки HCMV, гликопротеина gH оболочки HCMV, HCMV UL, гемопоэтического фактора роста (HGF), gp120 вируса гепатита B, гепараназы, Her2, Her2/neu (ErbB-2), Her3 (ErbB-3), Her4 (ErbB-4), гликопротеина gB вируса простого герпеса (HSV), гликопротеина gD HSV, HGFA, высокомолекулярного меланома-ассоциированного антигена (HMW-MAA), gp120 HIV, V3-петли gp 120 HIV IIIB, HLA, HLA-DR, HM1.24, HMFG PEM, HRG, Hrk, сердечного миозина человека, цитомегаловируса (HCMV) человека, гормона роста человека (HGH), HVEM, 1-309, IAP, ICAM, ICAM-1, ICAM-3, ICE, ICOS, IFNg, Ig, рецептора IgA, IgE, IGF, IGF-связывающих белков, IGF-1R, IGFBP, IGF-I, IGF-II, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-18R, IL-23, интерферона (INF)-альфа, INF-бета, INF-гамма, ингибина, iNOS, A-цепи инсулина, B-цепи инсулина, инсулиноподобного фактора роста 1, интегрина-альфа2, интегрина-альфа3, интегрина-альфа4, интегрина альфа4/бета1, интегрина, альфа4/бета7, интегрина-альфа5 (альфаV), интегрина-альфа5/бета1, интегрина альфа5/бета3, интегрина-альфа6, интегрина-бета1, интегрина-бета2, интерферона-гамма, IP-10, 1-TAC, JE, калликреина 2, калликреина 5, калликреина 6, калликреина 11, калликреина 12, калликреина 14, калликреина 15, калликреина L1, калликреина L2, калликреина L3, калликреина L4, KC, KDR, фактора роста кератиноцитов(KGF), ламинина 5, LAMP, LAP, LAP (TGF-1), латентного TGF-1, латентного TGF-1 bpl, LBP, LDGF, LECT2, Lefty, антигена Льюиса-Y, антигена, родственного антигену Льюиса-Y, LFA-1, LFA-3, Lfo, LIF, LIGHT, липопротеинов, LIX, LKN, Lptn, L-селектина, LT-a, LT-b, LTB4, LTBP-1, легочного сурфактанта, лютеинизирующего гормона, рецептора лимфотоксина-бета, Mac-1, MAdCAM, MAG, MAP2, MARC, MCAM, MCAM, MCK-2, MCP, M-CSF, MDC, Mer, металлопротеаз, рецептора MGDF, MGMT, MHC (HLA-DR), MIF, MIG, MIP, MIP-1-альфа, MK, MMAC1, MMP, MMP-1, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-2, MMP-24, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MPIF, Mpo, MSK, MSP, муцина (Muc1), MUC18, ингибирующего вещества Мюллера, Mug, MuSK, NAIP, NAP, NCAD, N-кадгерина, NCA 90, NCAM, NCAM, неприлизина, нейротрофина-3,-4 или -6, нейротурина, фактора роста нейронов (NGF), NGFR, NGF-бета, nNOS, NO, NOS, Npn, NRG-3, NT, NTN, OB, OGG1, OPG, OPN, OSM, OX40L, OX40R, p150, p95, PADPr, паратиреоидного гормона, PARC, PARP, PBR, PBSF, PCAD, P-кадгерина, PCNA, PDGF, PDGF, PDK-1, PECAM, PEM, PF4, PGE, PGF, PGI2, PGJ2, PIN, PLA2, плацентарной щелочной фосфатазы (PLAP), P1GF, PLP, PP14, проинсулина, прорелаксина, белка C, PS, PSA, PSCA, простатического специфического мембранного антигена (PSMA), PTEN, PTHrp, Ptk, PTN, R51, RANK, RANKL, RANTES, RANTES, A-цепи релаксина, B-цепи релаксина, ренина, F респираторно-синцитиального вируса (RSV), Fgp RSV, Ret, ревматоидных факторов, RLIP76, RPA2, RSK, S100, SCF/KL, SDF-1, серина, сывороточного альбумина, sFRP-3, Shh, SIGIRR, SK-1, SLAM, SLPI, SMAC, SMDF, SMOH, SOD, SPARC, Stat, STEAP, STEAP-II, TACE, TACI, TAG-72 (опухолеассоциированный гликопротеин-72), TARC, TCA-3, T-клеточных рецепторов (например, T-клеточного рецептора альфа/бета), TdT, TECK, TEM1, TEM5, TEM7, TEM8, ТРЕТ, PLAP-подобной щелочной фосфатазы яичек, TfR, TGF, TGF-альфа, TGF-бета, панспецифического TGF-бета, TGF-бета RI (ALK-5), TGF-бета RII, TGF-бета Rllb, TGF-бета RIII, TGF-бета1, TGF-бета2, TGF-бета3, TGF-бета4, TGF-бета5, тромбина, тимусного Ck-1, тиреостимулирующего гормона, Tie, TIMP, TIQ, тканевого фактора, TMEFF2, Tmpo, TMPRSS2, TNF, TNF-альфа, TNF-альфа/бета, TNF-бета2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF10A (TRAIL R1, Apo-2, DR4), TNFRSF10B (TRAIL R2, DR5, KILLER, TRICK-2A, TRICK-B), TNFRSF10C (TRAIL R3, DcR1, LIT, TRID), TNFRSF10D (TRAIL R4, DcR2, TRUNDD), TNFRSF11A (RANK, ODFR, TRANCE R), TNFRSF11B (OPG, OCIF, TR1), TNFRSF12 (TWEAK R, FN14), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFF R), TNFRSF14 (HVEM, ATAR, HveA, LIGHT R, TR2), TNFRSF16 (NGFR, p75NTR), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF18 (GITR, AITR), TNFRSF19 (TROY, TAJ, TRADE), TNFRSF19L (RELT), TNFRSFIA (TNF RI, CD120a, p55-60), TNFRSFIB (TNF RII, CD120b, p75-80), TNFRSF26 (TNFRH3), TNFRSF3 (LTbR, TNF RIII, TNFC R), TNFRSF4 (OX40, ACT35, TXGP1 R), TNFRSF5 (CD40, p50), TNFRSF6 (Fas, Apo-1, APT1, CD95), TNFRSF6B (DcR3, M68, TR6), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF9 (4-lBB, CD137, ILA), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF22 (DcTRAIL R2, TNFRH2), TNFRST23 (DcTRAIL R1, TNFRH1), TNFRSF25 (DR3, Apo-3, LARD, TR-3, TRAMP, WSL-1), TNFSF10 (TRAIL, лиганд Apo-2, TL2), TNFSF11 (TRANCE/RANK, лиганд ODF, лиганд OPG), TNFSF12 (TWEAK, лиганд Apo-3, лиганд DR3), TNFSF13 (APRIL, TALL2), TNFSF13B (BAFF, BLYS, TALL1, THANK, TNFSF20), TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM, LTg), TNFSF15 (TL1A/VEGI), TNFSF18 (лиганд GITR, лиганд AITR, TL6), TNFSFIA (TNF-a конектин, DIF, TNFSF2), TNFSF1B (TNF-b, LTa, TNFSF1), TNFSF3 (LTb, TNFC, p33), TNFSF4 (лиганд OX40, gp34, TXGP1), TNFSF5 (лиганд CD40, CD154, gp39, HIGM1, IMD3, TRAP), TNFSF6 (лиганд Fas, лиганд Apo-1, лиганд APT1), TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), TNFSF8 (лиганд CD30, CD153), TNFSF9 (лиганд 4-lBB, лиганд CD137), TP-1, t-PA, Tpo, TRAIL, TRAIL R, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRANCE, рецептора трансферрина, TRF, Trk, TROP-2, TSG, TSLP, опухолеассоциированного антигена CA 125, опухолеассоцированного антигена, экспрессирующего углевод, родственный антигену Льюса-Y, TWEAK, TXB2, Ung, uPAR, uPAR-1, урокиназы, VCAM, VCAM-1, VECAD, VE-кадгерина, VE-кадгерина-2, VEFGR-1 (flt-1), VEGF, VEGFR, VEGFR-3 (flt-4), VEGI, VIM, вирусных антигенов, VLA, VLA-1, VLA-4, интегрина VNR, фактора фон Виллебранда, WIF-1, WNT1, WNT2, WNT2B/13, WNT3, WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16, XCL1, XCL2, XCR1, XCR1, XEDAR, XIAP, XPD, CTLA4 (антиген-4 цитотоксических T-лимфоцитов), PD1 (белок-1 запрограммированной гибели клеток), PD-L1 (лиганд-1 белка запрограммированной гибели клеток), LAG-3 (ген-3 активации лимфоцитов), TIM-3 (белок-3, содержащий домены иммуноглобулина T-клеток и муцина), рецепторов для гормонов и факторов роста.

56. Антитело по любому из пунктов 1-55, где антитело содержит по меньшей мере второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с антигеном, выбранным из группы, состоящей из: BCMA, CTLA4 (антиген-4 цитотоксических T-лимфоцитов), PD1 (белок-1 запрограммированной гибели клеток), PD-L1 (лиганд-1 белка запрограммированной гибели клеток), LAG-3 (ген-3 активации лимфоцитов), TIM-3, CD20, CD2, CD19, Her2, EGFR, EpCAM, FcyRIIIa (CD16), FcyRIIa (CD32a), FcyRIIb (CD32b), FcyRI (CD64), Toll-подобных рецепторов (TLRs), TLR4, TLR9, цитокинов, IL-2, IL-5, IL-13, IL-6, IL-17, IL-12, IL-23, TNFa, TGFb, цитокиновых рецепторов, IL-2R, хемокинов, хемокиновых рецепторов, факторов роста, VEGF и HGF.

57. Антитело по любому из пунктов 1-56, где антитело содержит по меньшей мере второй антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с антигеном, где указанное антитело предусматривает мультиспецифический формат, выбранный из группы, состоящей из: Fab-Fc-scFv, «открывалки для бутылок», Mab-scFv, Mab-Fv, двойного scFv, центрального Fv, центрального scFv, одноплечевого центрального scFv, Fab-Fab, Fab-Fv, mAb-Fv, mAb-Fab, DART, BiTE, IgG с универсальной легкой цепью, TandAb, Cross-Mab, SEED, BEAT, TrioMab и DuetMab.

58. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело по любому из пунктов 1-57.

59. Вектор экспрессии, содержащий выделенную последовательность нуклеиновой кислоты по пункту 58.

60. Клетка-хозяин, трансфицированная, трансформированная или трансдуцированная с помощью последовательности нуклеиновой кислоты по пункту 58 или вектора экспрессии по пункту 59.

61. Фармацевтическая композиция, содержащая одно или более антител по любому из пунктов 1-57 и фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.

62. Фармацевтическая композиция, содержащая одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты по пункту 58 или один или более векторов экспрессии по пункту 59 и фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.

63. Способ лечения или замедления прогрессирования нарушения у млекопитающего, нуждающегося в таком лечении, при этом способ предусматривает введение одного или более антител по любому из пунктов 1-57, где в результате указанного введения нарушение ослабляется или уменьшается его тяжесть.

64. Способ предупреждения или уменьшения риска развития нарушения у млекопитающего путем введения антитела по любому из пунктов 1-57, где в результате указанного введения нарушение предупреждается.

65. Способ лечения нарушения у млекопитающего, нуждающегося в таком лечении, где нарушение предусматривает пролиферативное нарушение, онкологическое нарушение, иммуноонкологическое нарушение, неврологическое нарушение, нейродегенеративное нарушение или аутоиммунное нарушение, который предусматривает введение одного или более антител по любому из пунктов 1-57, где в результате указанного введения нарушение ослабляется или уменьшается его тяжесть.

66. Способ по любому из пунктов 63-65, где способ дополнительно предусматривает введение млекопитающему дополнительного терапевтического средства.

67. Способ по любому из пунктов 63-66, где млекопитающим является человек.

68. Гетеродимерный слитый белок на основе CD3, содержащий первую полипептидную цепь, содержащую полипептид CD3-эпсилон, слитый с первым Fc-участком; и вторую полипептидную цепь, содержащую полипептид CD3-дельта, слитый со вторым Fc-участком.

69. Гетеродимерный слитый белок на основе CD3 по пункту 68, где полипептид CD3-эпсилон содержит полипептид CD3-эпсилон человека, а полипептид CD3-дельта содержит полипептид CD3-дельта человека.

70. Гетеродимерный слитый белок на основе CD3 по пункту 68, где полипептид CD3-эпсилон представляет собой полипептид CD3-эпсилон человека, а полипептид CD3-дельта представляет собой полипептид CD3-дельта человека.

71. Гетеродимерный слитый белок на основе CD3 по пункту 69, где полипептид CD3-эпсилон содержит полипептид CD3-эпсилон яванского макака, а полипептид CD3-дельта содержит полипептид CD3-дельта яванского макака.

72. Гетеродимерный слитый белок на основе CD3 по пункту 69, где полипептид CD3-эпсилон представляет собой полипептид CD3-эпсилон яванского макака, а полипептид CD3-дельта представляет собой полипептид CD3-дельта яванского макака.

73. Гетеродимерный слитый белок по любому из пунктов 68-70, где первая полипептидная цепь содержит следующую аминокислотную последовательность: QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK;

и вторая полипептидная цепь содержит следующую аминокислотную последовательность: FKIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMCQSCVELDGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.

74. Гетеродимерный слитый белок по любому из пунктов 68, 71 и 72, где первая полипептидная цепь содержит следующую аминокислотную последовательность: QDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILTCSQHLGSEAQWQHNGKNKEDSGDRLFLPEFSEMEQSGYYVCYPRGSNPEDASHHLYLKARVCENCMEMDGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK;

и вторая полипептидная цепь содержит следующую аминокислотную последовательность: FKIPVEELEDRVFVKCNTSVTWVEGTVGTLLTNNTRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESAVQVHYRMCQNCVELDPGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.

75. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие CDRH1, содержащий аминокислотную последовательность FNIKDYYMH (SEQ ID NO: 6720), YTFTSYTIH (SEQ ID NO: 6721) или FTFX₁TYAMN (SEQ ID NO: 6722), где X₁ представляет собой любую аминокислоту.

76. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 75, где X₁ представляет собой N или D.

77. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие CDRH2, содержащий аминокислотную последовательность WIDLENX₁NTX₂YDX₃KFOG (SEQ ID NO: 6723), где X₁, X₂ и X₃ независимо представляют собой любую аминокислоту.

78. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 77, где X₁ не является G.

79. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по любому из пунктов 77-78, где X₂ представляет собой V или I.

80. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по любому из пунктов 77-79, где X₃ не является G.

81. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие CDRH3, содержащий аминокислотную последовательность X₁QSYSX₂RT (SEQ ID NO: 6724) или X₃RDX₄YGX₅YFYDV (SEQ ID NO: 6725), где X₁, X₂, X₃, X₄ и X₅ независимо представляют собой любую аминокислоту.

82. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 81, где X₁ представляет собой K или T.

83. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 81, где X₁ представляет собой T.

84. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по любому из пунктов 81-83, где X₂ представляет собой R или L.

85. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по любому из пунктов 81-83, где X₃ представляет собой A или G.

86. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по любому из пунктов 81-83, где X₄ не является G.

87. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по любому из пунктов 81-86, где X₅ представляет собой R, A, G или L.

88. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие CDRL1, содержащий аминокислотную последовательность X₁KSSQX₂LLX₃X₄RTGKX₅YLA (SEQ ID NO: 6726), где X₁, X₂, X₃, X₄ и X₅ независимо представляют собой любую аминокислоту.

89. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 88, где X₁ представляет собой K или R.

90. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 88, где X₂ представляет собой S или N

91. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 88, где X₃ представляет собой E или N.

92. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 88, где X₄ представляет собой A или S.

93. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 88, где X₅ представляет собой N или S.

94. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие CDRL2, содержащий аминокислотную последовательность WASTRES (SEQ ID NO: 6727) или GTX₁KRAP (SEQ ID NO: 6728), где X₁ представляет собой любую аминокислоту.

95. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 94, где X₁ представляет собой N или D.

96. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие CDRL3, содержащий аминокислотную последовательность KQSYSX1RT (SEQ ID NO: 6729), где X₁ представляет собой любую аминокислоту.

97. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 96, где X₁ представляет собой R.

98. Антитело или антигенсвязывающий полипептид по пункту 96, где X₁ представляет собой L или I.

99. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие один или более CDRH1 по любому из пунктов 75-76, CDRH2 по любому из пунктов 77-81 и CDRH3 по любому из пунктов 84-90.

100. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие один или более CDRL1 по любому из пунктов 88-91, CDRL2 по любому из пунктов 94-95 и CDRL3 по любому из пунктов 96-98.

101. Антитело или антигенсвязывающий полипептид, содержащие CDRH1 по любому из пунктов 75-76, CDRH2 по любому из пунктов 77-81, CDRH3 по любому из пунктов 84-90 и CDRL1 по любому из пунктов 88-91, CDRL2 по любому из пунктов 94-95 и CDRL3 по любому из пунктов 96-98.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> АДИМАБ, Эл-Эл-Си

<120> ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА К CD3

<130> 2009186-0189

<140>

<141>

<160> 6480

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 1

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttaac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag ttatgtatcc tggtttgctt attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 2

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 2

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 3

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 3

Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 4

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 4

ttcaccttta acacatatgc catgaat

27

<210> 5

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 5

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 6

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 6

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 7

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 7

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr

1 5 10 15

<210> 8

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 8

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagttat gtatcctggt ttgcttat

48

<210> 9

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 9

cagactgtgg tgacccagga gccatcgttc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccacg cggactcatc ggcggcacaa acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaatctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 10

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 10

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 11

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 11

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 12

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 12

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 13

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 13

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 14

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 14

ggcacaaaca agcgcgctcc t

21

<210> 15

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 15

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 16

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 16

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 17

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 17

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt tcgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacgg ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 18

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 18

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 19

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 19

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 20

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 20

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 21

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 21

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 22

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 22

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 23

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 23

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 24

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 24

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacggttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 25

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 25

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcggtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcccggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagagg atgaatctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 26

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 26

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 27

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 27

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 28

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 28

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 29

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 29

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 30

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 30

ggcacagaca agcgcgctcc c

21

<210> 31

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 31

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 32

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 32

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 33

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 33

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacgg ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 34

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 34

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 35

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 35

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 36

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 36

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 37

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 37

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 38

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 38

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 39

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 39

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 40

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 40

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacggttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 41

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 41

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacaa acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 42

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 42

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 43

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 43

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 44

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 44

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 45

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 45

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 46

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 46

ggcacaaaca agcgcgctcc t

21

<210> 47

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 47

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 48

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 48

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 49

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 49

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgaggctc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttaac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attaggtcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacagtaact tcgggaacgg ttatgtatcc tggtttgctt actggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 50

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 50

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 51

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 51

Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 52

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 52

ttcaccttta acacatatgc catgaat

27

<210> 53

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 53

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 54

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 54

aggattaggt ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 55

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 55

Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr

1 5 10 15

<210> 56

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 56

gtcaggcaca gtaacttcgg gaacggttat gtatcctggt ttgcttac

48

<210> 57

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 57

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcggtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcccggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagagg atgaatctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 58

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 58

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 59

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 59

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 60

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 60

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 61

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 61

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 62

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 62

ggcacagaca agcgcgctcc c

21

<210> 63

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 63

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 64

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 64

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 65

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 65

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa gggtcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aagtgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 66

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 66

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Val Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 67

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 67

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 68

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 68

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 69

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 69

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 70

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 70

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaagggt

57

<210> 71

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 71

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 72

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 72

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 73

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 73

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcggtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcccggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagagg atgaatctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 74

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 74

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 75

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 75

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 76

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 76

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 77

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 77

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 78

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 78

ggcacagaca agcgcgctcc c

21

<210> 79

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 79

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 80

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 80

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 81

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 81

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 82

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 82

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 83

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 83

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 84

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 84

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 85

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 85

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 86

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 86

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 87

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 87

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 88

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 88

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 89

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 89

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg gatccagcag

120

accccaggcc aggccccgcg cggactcatc ggcggcacaa acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgcc tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 90

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 90

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Ile Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Leu

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 91

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 91

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 92

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 92

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 93

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 93

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 94

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 94

ggcacaaaca agcgcgctcc t

21

<210> 95

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 95

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 96

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 96

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 97

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 97

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccggggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctacg

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtacctgc aaataaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggagccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 98

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 98

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 99

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 99

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 100

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 100

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 101

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 101

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 102

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 102

aggattagat ccaagtataa caattacgct acgtactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 103

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 103

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 104

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 104

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 105

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 105

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcggtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcccggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagagg atgaatctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 106

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 106

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 107

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 107

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 108

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 108

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 109

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 109

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 110

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 110

ggcacagaca agcgcgctcc c

21

<210> 111

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 111

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 112

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 112

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 113

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 113

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 114

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 114

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 115

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 115

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 116

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 116

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 117

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 117

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 118

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 118

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 119

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 119

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 120

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 120

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 121

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 121

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcggtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcccggggtc

180

cctgagcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagagg atgaatctga ttattactgt gtgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 122

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 122

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Glu Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 123

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 123

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 124

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 124

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 125

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 125

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 126

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 126

ggcacagaca agcgcgctcc c

21

<210> 127

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 127

Val Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 128

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 128

gtgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 129

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 129

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 130

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 130

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 131

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 131

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 132

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 132

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 133

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 133

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 134

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 134

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 135

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 135

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 136

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 136

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 137

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 137

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcggtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcccggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgctcggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagagg atgaatctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacca ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 138

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 138

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 139

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 139

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 140

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 140

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 141

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 141

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 142

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 142

ggcacagaca agcgcgctcc c

21

<210> 143

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 143

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val

1 5

<210> 144

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 144

gcgctgtggt acagtaacca ttgggtg

27

<210> 145

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 145

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc gccatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacagtaact tcgggaacag ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 146

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 146

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 147

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 147

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 148

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 148

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 149

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 149

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 150

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 150

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 151

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 151

Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 152

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 152

gtcaggcaca gtaacttcgg gaacagttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 153

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 153

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacaa acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 154

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 154

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 155

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 155

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 156

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 156

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 157

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 157

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 158

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 158

ggcacaaaca agcgcgctcc t

21

<210> 159

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 159

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 160

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 160

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 161

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 161

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctctgcc acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag tcacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 162

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 162

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Ala Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser His Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 163

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 163

Phe Thr Ser Ala Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 164

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 164

ttcacctctg ccacatatgc catgaat

27

<210> 165

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 165

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 166

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 166

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 167

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 167

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser His Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 168

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 168

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagtcac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 169

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 169

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtagat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacaa acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 170

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 170

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 171

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 171

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 172

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 172

agatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 173

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 173

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 174

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 174

ggcacaaaca agcgcgctcc t

21

<210> 175

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 175

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 176

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 176

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 177

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 177

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttaac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagaacacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacag ttatgtatcc tggtttgctt cttggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 178

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 178

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 179

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 179

Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 180

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 180

ttcaccttta acacatatgc catgaat

27

<210> 181

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 181

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 182

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 182

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 183

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 183

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Ser

1 5 10 15

<210> 184

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 184

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacagttat gtatcctggt ttgcttct

48

<210> 185

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 185

cagactgtgg tgacccagga gccatcgttc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtggct caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccacg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaatctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 186

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 186

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 187

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 187

Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 188

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 188

ggctcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 189

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 189

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 190

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 190

ggcacagaca agcgcgctcc t

21

<210> 191

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 191

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 192

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 192

gcgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 193

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 193

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt tcgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacgg ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 194

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 194

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 195

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 195

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 196

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 196

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 197

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 197

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 198

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 198

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 199

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 199

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 200

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 200

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacggttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 201

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 201

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtggat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcatcat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacca ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 202

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 202

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Ile Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 203

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 203

Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 204

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 204

ggatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 205

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 205

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 206

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 206

ggcacagaca agcgcgctcc t

21

<210> 207

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 207

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val

1 5

<210> 208

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 208

gcgctgtggt acagtaacca ttgggtg

27

<210> 209

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 209

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt tcgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacgg ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 210

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 210

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 211

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 211

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 212

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 212

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 213

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 213

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 214

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 214

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 215

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 215

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 216

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 216

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacggttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 217

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 217

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtggat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggtc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacca ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 218

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 218

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Val

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 219

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 219

Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 220

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 220

ggatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 221

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 221

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 222

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 222

ggcacagaca agcgcgctcc t

21

<210> 223

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 223

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val

1 5

<210> 224

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 224

gcgctgtggt acagtaacca ttgggtg

27

<210> 225

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 225

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt tcgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacgg ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 226

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 226

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 227

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 227

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 228

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 228

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 229

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 229

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 230

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 230

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 231

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 231

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 232

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 232

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacggttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 233

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 233

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtggat caagcgctgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccacg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gtgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 234

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 234

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 235

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 235

Gly Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 236

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 236

ggatcaagcg ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 237

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 237

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 238

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 238

ggcacagaca agcgcgctcc t

21

<210> 239

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 239

Val Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 240

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 240

gtgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 241

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 241

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt tcgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacgg ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 242

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 242

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 243

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 243

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 244

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 244

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 245

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 245

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 246

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 246

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 247

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 247

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 248

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 248

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacggttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 249

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 249

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtggat caagcgctgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccacg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acagtaacca ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 250

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 250

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 251

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 251

Gly Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 252

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 252

ggatcaagcg ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 253

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 253

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 254

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 254

ggcacagaca agcgcgctcc t

21

<210> 255

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 255

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val

1 5

<210> 256

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 256

gcgctgtggt acagtaacca ttgggtg

27

<210> 257

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 257

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt tcgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc accatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacggtaact tcgggaacgg ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 258

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 258

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 259

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 259

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 260

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 260

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 261

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 261

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 262

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 262

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 263

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 263

Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 264

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 264

gtcaggcacg gtaacttcgg gaacggttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 265

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 265

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtggat caagcactgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccgcg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gcgctgtggt acaataacca ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 266

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 266

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Asn Asn

85 90 95

His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 267

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 267

Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 268

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 268

ggatcaagca ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 269

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 269

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 270

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 270

ggcacagaca agcgcgctcc t

21

<210> 271

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 271

Ala Leu Trp Tyr Asn Asn His Trp Val

1 5

<210> 272

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 272

gcgctgtggt acaataacca ttgggtg

27

<210> 273

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 273

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc

60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgac acatatgcca tgaattgggt ccgccaggct

120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagg attagatcca agtataacaa ttacgctaca

180

tactacgcag actccgtgaa ggatcggttc gccatctcca gagacgattc caagagcacg

240

ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgtcagg

300

cacagtaact tcgggaacag ttacgtatcc tggtttgctc attggggcca aggaaccctg

360

gtcaccgtct cctca

375

<210> 274

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка тяжелой

цепи

<400> 274

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 275

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H1 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 275

Phe Thr Phe Asp Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 276

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H1 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 276

ttcacctttg acacatatgc catgaat

27

<210> 277

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H2 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 277

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 278

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H2 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 278

aggattagat ccaagtataa caattacgct acatactacg cagactccgt gaaggat

57

<210> 279

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR H3 вариабельного участка

тяжелой цепи

<400> 279

Val Arg His Ser Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 280

<211> 48

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR H3 вариабельного

участка тяжелой цепи

<400> 280

gtcaggcaca gtaacttcgg gaacagttac gtatcctggt ttgctcat

48

<210> 281

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного участка

легкой цепи

<400> 281

cagactgtgg tgacccagga gccatcgctc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc

60

acttgtggat caagcgctgg cgcagtcact actagtaact acgccaactg ggtccagcag

120

accccaggcc aggctccacg cggactcatc ggcggcacag acaagcgcgc tcctggggtc

180

cctgatcgct tctctggctc cctgcttggg gacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc

240

caggcagatg atgaagctga ttattactgt gtgctgtggt acagtaacct ttgggtgttc

300

ggcggaggga ccaagctgac cgtccta

327

<210> 282

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой

цепи

<400> 282

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 283

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L1 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 283

Gly Ser Ser Ala Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 284

<211> 42

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L1 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 284

ggatcaagcg ctggcgcagt cactactagt aactacgcca ac

42

<210> 285

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L2 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 285

Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 286

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L2 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 286

ggcacagaca agcgcgctcc t

21

<210> 287

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

аминокислотная последовательность CDR L3 вариабельного участка

легкой цепи

<400> 287

Val Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 288

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетическая

последовательность нуклеиновой кислоты CDR L3 вариабельного

участка легкой цепи

<400> 288

gtgctgtggt acagtaacct ttgggtg

27

<210> 289

<211> 375