Антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты Российский патент 2023 года по МПК A61K31/385 A61K31/05 A61K31/15 A61P39/06 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ветеринарной фармации, в частности к препаратам для профилактики и лечения заболеваний печени, свободно радикальной патологии у животных и может быть использовано в ветеринарной медицине.

Уровень техники

Известно соединение фуллерена (пат. № RU 2694754 С1, опубл. 16.07.2019), которое используются в этиотропной химиотерапии вирусных инфекций и для ингибирования герпесвирусных инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса в медицине и ветеринарии, для профилактики, общего и местного лечения при заболеваниях, вызванных герпесвирусами.

Недостатком данного соединения является отсутствие антиоксидантного эффекта.

Известна иммуностимулирующая композиция на основе продуктов нанотехнологий, а именно фуллеренов и ультрадисперсных алмазных порошков (наноалмазов), полученных детонационным синтезом (пат. № RU 2348416 С2, опубл. 03.10.2009). Композиция содержит модифицированный фуллерен общей формулы С60-Х, где С60 - фуллереновое ядро, X - формилпорфирин, а также ультрадисперсный алмазный порошок. Композиция обладает синергетическим эффектом, иммуностимулирующей активностью.

Недостатком композиции на основе продуктов нанотехнологий, а именно фуллеренов и ультрадисперсных алмазных порошков (наноалмазов), полученных детонационным синтезом,является отсутствие антиоксидантного эффекта. Данные композиции не используются в ветеринарной медицине.

В гуманитарной медицине известна композиция на основе аминопроизводных фуллерена С₆₀, (пат. № RU 2501785 С2, опубл. 20.12.2013), которая обладает противомикробными свойствами. Композиция предназначена для лечения и профилактики инфекционных заболеваний, кроме того может использоваться для создания дезинфекционных агентов, предназначенных для обеззараживания и стерилизации загрязненных микроорганизмами сред и поверхностей.

Недостатком композиции на основе аминопроизводных фуллерена C₆₀ является отсутствие антиоксидантного эффекта.

Известно фуллереновоепроизводное гликопептида формулы I: GlcNac-MurNac-Ala-DiGln[Lys-ε-CO(CH₂)5NHC60-H], (пат. № RU 2124022 C1, опубл. 27.12.1998 г.), обладающее адъювантной активностью. Получено путем синтеза фуллеренового производного аминокапроновой кислоты и последующего его присоединения к лизиновому производному гликопептида. Эксперименты, проведенные на группе мышей (самки линии Balb/c), показали, что при низких дозах 1-10 нм/животное синтезированное соединение обладает высокими адъювантными свойствами.

Недостатком фуллеренового производного гликопептида формулы I: GlcNac-MurNac-Ala-DiGln[Lys-ε-CO(CH₂)5NHC60-H], является отсутствие антиоксидантного эффекта, также данное исследование не применяется в ветеринарной фармакологии.

Прототипом явилось водорастворимое производное фуллерена, применяемое в гуманитарной медицине в качестве лекарственных препаратов нейропротекторного и противоопухолевого действия (пат. № RU 2704483 С2, опубл. 29.10.2019 г.).

Недостатком водорастворимых производных соединений фуллерена в качестве лекарственных препаратов нейропротекторного и противоопухолевого действия является отсутствие антиоксидантного эффекта.

Раскрытие изобретения

Технической задачей заявляемого изобретения является разработка высокоэффективного препарата на основе водного раствора фуллерена С₆₀, обладающего выраженными антиоксидантным, иммуностимулирующим действием, низкой токсичностью, высокой эффективностью в профилактике и лечении свободнорадикальной патологии у животных, удобством введения и дозировки.

Технический результат, который может быть достигнут с помощью заявляемого изобретения, сводится к стимулированию защитных функций печени и антиоксидантному эффекту, ингибированию свободнорадикальных процессов в организме животных, повышению стрессоустойчивости организма, снижению токсичности, повышению удобства применения и дозирования.

Технический результат достигается с помощью антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, включающего водный раствор фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Альфа-липоевая кислота - 15 мг.

Заявляемый антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты представляет собой прозрачный раствор темно-коричневого цвета, без запаха, обладающий выраженным антиоксидантным, антигипоксическим эффектом, является ингибитором свободнорадикальных процессов, повышает стрессоустойчивость организма, низкотоксичен и удобен в введении и дозировании.

Под процессом перекисного окисления липидов (ПОЛ) принято понимать химический процесс окисления липидов под воздействием свободных радикалов. Реакции ПОЛ могут привести к нарушению структуры всех клеточных мембран и повреждению клеток, что представляет собой механизм патогенеза ряда заболеваний. В тоже время ПОЛ является физиологическим, обеспечивая регулировку структуры и реализацию функций мембран. В связи с чем, поддержание баланса между названными процессами обеспечивает физиологическое протекание многих процессов (Перекисное окисление липидов: "вред" и "польза" / Лебедев И.А., Бурундукова П.И., Абдуллина М.Б. // Заметки ученого. 2021. - №8. - С. 141-144).

Изначально происходит образование диеновых конъюгатов жирных кислот (ДКЖК). При дальнейшем воздействии на ДКЖК гидроксильных радикалов, образуются гидроперекиси липидов. Образовавшиеся продукты перекисного окисления воздействуют на фосфолипидные составляющие мембран и структур клеток, нарушая работу органоидов и организма в целом. Под воздействием свободных радикалов, жирные кислоты распадаются до конечных продуктов окисления: альдегидов, перекисей, диеновых конъюгатов (ДК), малоновых диальдегидов (МДА), шиффовых оснований (Влияние антиоксидантных препаратов разных механизмов действия на уровень продуктов перекисного окисления липидов в организме суягных овцематок / Каширина Л.Г., Дорохина Ю.Е., Трфандян М.Т. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2021. - Т. 247. - №3. - С. 80-85).

Антиоксиданты - это естественные или синтетические вещества, снижающие или нейтрализующие окислительное действие свободных радикалов (Особенности процессов перекисного окисления липидов в организме кошек с заболеваниями мочевыводящих путей и их коррекция коммерческими кормами / Воронцова О.А., Пудовкин Н.А., Салаутин В.В., Клюкин С.Д. // Аграрный научный журнал. 2021. - №4.- С. 37-40). К веществам с антиоксидантной способностью относятся:

а) ферменты - супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза и другие;

б) вещества пептидной природы - глутатион и другие;

в) экзогенные антирадикальные вещества - ретинол, аскорбиновая кислота, токоферол и глутатион и другие;

г) синтетические антирадикальные вещества - мельдоний, пробукол, пентагидроксиэтилнафтохинон, метил-этилпиридинол, бутилгидрокситолуол и другие (Обеспеченность организма витамином D у пациентов терапевтического и стоматологического профиля / Болдырева Ю.В., Курлович Н.А., Лебедев И.А., Брагин А.В., Шихшабекова У.А., Заитханова К.Э. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2021. Т. 24. №4. С. 51-54).

Производные фуллерена С₆₀ обладают необычно высокой способностью улавливать свободные радикалы. (Синтез новых липофильных производных фуллерена С₆₀ / Сахаутдинов И.М., Исламова А.Ф., Мананов Т.А., Гумеров A.M. // Вестник Башкирского университета. 2021. - Т. 26. - №3. С. 650-654).Опыты на животных показывают, что соединения фуллерена заметно повышают их устойчивость к оксидативным стрессам (Malikova R.N., Sakhautdinov I.М., Ishbaeva S.M., Yunusov M.S. Fullerene C60 DerivativesasEfficientSensitizersofOxidationundertheMildConditionsofAtmosphericAir // Russ. J. of Gen. Chem. 2017. - Vol. - 87. - №10. - P. 2497-2499).

Благодаря наличию π-сопряжения в молекуле фуллерена С₆₀ ее электронная система электронодефицитна. По этой причине фуллерен и его производные способны проявлять свойства акцептора свободных радикалов, обладают большой радикалоемкостью и могут выступать в качестве антиоксидантов в различных системах, в том числе биологических, а также в качестве соединений, способных влиять на свободно-радикальные процессы и процессы переноса энергии. Наряду с антиоксидантными свойствами, фуллерены способны передавать энергию фотовозбуждения и тем самым - переводить кислород из триплетного состояния в синглетное (Антиоксидантные свойства аминокислотных производных фуллерена С₆₀ // Волков В.А., Ямскова О.В., Шепель Н.Э., Романова B.C., Курилов Д.В., Трегубов А.В., Вышиванная О.В., Воронков М.В., Ямсков И.А., Мисин В.М., Зубарева Н.Д., Кустов Л.М. // Журнал физической химии. 2019. Т. 93. №11. С. 1674-1680).

Антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, состоит из следующих компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Альфа-липоевая кислота - 15 мг.

Раствор смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Краткое описание чертежей и иных материалов

На фигуре 1 представлено графическое изображение содержания диеновых коньюгатов в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

В таблице 1 представлена концентрация продуктов перекисного окисления в крови белых крыс и активность антиоксидантных ферментов в крови животных.

В таблице 2 представлены показатели белково-азотистого обмена в крови белых крыс.

На фигуре 2 представлено графическое изображение активности аспартатаминотрансферазы, (ед/л), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

На фигуре 3 представлено графическое изображение активности аланинаминотрансферазы, (ед/л), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

На фигуре 4 представлено графическое изображение активности аргиназы, (мкмоль/мочевины/г сырой ткани), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

На фигуре 5 представлено графическое изображение активности лактатдегидрогеназы, (ммоль/г), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

В таблице 3 представлены показатели белкового обмена в крови белых крыс.

В таблице 4 представлены результаты острой токсичности для белых крыс антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

В таблице 5 представлены результаты острой токсичности для белых мышей антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

В таблице 6 представлены результаты состояния физиологических параметров белых крыс при однократном подкожном введении антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты в дозе 2500 мг/кг по действующему веществу.

В таблице 7 представлены результаты состояния физиологических параметров белых крыс при однократном внутрижелудочном введении антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты в дозе 2500 мг/кг по действующему веществу.

На фигурах 6 и 7 - иллюстрации кожно-резорбтивной реакции для морских свинок и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

В таблице 8 представлена шкала оценки аппликационных кожных тестов.

В таблице 9 представлены результаты оценки раздражающего действия антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты для морских свинок и кроликов.

В таблице 10 представлены результаты конъюнктивальных проб антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты для кроликов.

На фигуре 8 представлены иллюстрации аллергической реакции для морских свинок на введение антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения получения и испытания с помощью антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты.

Пример 1.

Антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Альфа-липоевая кислота - 15 мг.

Изучаемое соединение вводили белым крысам подкожно.

Полученный раствор оказал воздействие на процессы перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы. Концентрация диеновых конъюгатов в сыворотке крови снизилась на 53,5% (фигура 1).

Концентрация малонового диальдегида понизилась в плазме крови - на 32,0%, в ткани головного мозга - на 11,5%, в легких - на 10,6%, почках - на 13,0%, печени - на 18,8%, скелетных мышцах - на 9,5%, в желудке - на 14,2% в тонком отделе кишечника - на 18,6%. В тканях толстого отдела кишечника и сердца изменений не установлено (таблица 1).

Активность каталазы после введения препарата на основе водного раствора фуллерена С₆₀ достоверно повысилась в плазме крови на 13,4%, в ткани головного мозга на 15,5%, в ткани почек - на 7,8%, ткани желудка - на 11,7%, в ткани тонкого отдела кишечника - на 13,3% и ткани толстого отдела кишечника - на 9,3%. В остальных тканях (печень, сердце, скелетные мышцы) активность фермента находилась в пределах физиологической нормы и достоверной разницы с контролем не было установлено (таблица 1).

Пример 2.

Антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Альфа-липоевая кислота - 15 мг.

Препарат вводили подкожно белым крысам.

Полученный раствор оказал существенное воздействие на состояние белково-азотистого обмена и мочевинообразовательной функции печени, которую оценивали по динамике в крови общего белка, ферментов трансаминирования, а также метаболитов орнитинового цикла и системы глутаминовая кислота-глутамин (таблица 2).

После введения изучаемого соединения содержание общего белка, мочевины, аммиака и орнитина повышается на 12,9%, 21,1%, 15,4% и 17,8% соответственно, по сравнению с контролем (таблица 2). Достоверных различий в содержании глутамина в сыворотке крови до и после введения изучаемого соединения не выявлено.

Аминокислотные продукты эндогенного и экзогенного переваривания белков расщепляются путем печеночного трансаминирования и окислительного дезаминирования с образованием аммиака. Затем аммиак превращается в мочевину с помощью пяти ферментов цикла мочевины и выводится почками. Установлено положительное влияние изучаемого соединения на белково-азотистый обмен в организме.

После введения антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты повышается и активность ферментов трансаминирования (фигура 2 и 3).

Транаминазы обычно высвобождаются с постоянной скоростью, при этом их обычные уровни у здоровых животных представляют собой равновесие между нормальным оборотом гепатоцитов в результате запрограммированной гибели клеток (апоптоз) и выведением ферментов из плазмы.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ) представляет собой фермент, который катализирует перенос аминогрупп с образованием печеночного метаболита оксалоацетата. Он состоит из 496 аминокислот, которые кодируются геном, расположенным в длинном плече хромосомы 8. АЛТ в изобилии обнаруживается в цитозолегепатоцита. Активность АЛТ в печени примерно в 3000 раз превышает активность в сыворотке.

В случае гепатоцеллюлярного повреждения или смерти высвобождение АЛТ из поврежденных клеток печени увеличивает измеренную активность АЛТ в сыворотке, что специфично для печени. АЛТ также обнаруживается в почках и, в гораздо меньших количествах, в клетках сердца и скелетных мышц.

Содержание орнитина в крови после введения изучаемого соединения повысилось на 17,8%, что является благоприятным прогностичным признаком. Так как цикл расщепления мочевины происходит частично в цитозоле и частично в митохондриях. На каждый оборот цикла расходуется две молекулы азота и одна молекула углекислого газа. Взамен создается одна молекула мочевины и регенерируется одна молекула орнитина, чтобы стимулировать другой виток цикла. Начиная и заканчивая орнитином, реакции цикла потребляют три эквивалента аденозинтрифосфорная кислота и всего четыре высокоэнергетических нуклеотидфосфата; мочевина - единственное новое соединение, образующееся в цикле.

Установлено, что после введения антиоксидантного препарата для животных водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты активность аргиназы повышается на 26% по сравнению с контрольными животными (фигура 4).

Активность лактатдегидрогеназы (фигура 5), то после введения антиоксидантного препарата для животных водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, не изменилась.

Концентрация общего белка после введения антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты повысилась на 6,2% по отношению к контрольным животным (таблица 3). Содержание в крови альбуминов повысилось на 13,1%. Концентрация глобулинов после введения изучаемого соединения не изменилась относительно контроля.

Таким образом, антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, оказывает выраженный антиоксидантный эффект.

Пример 3.

Острая токсичность антиоксидантного препарата для животных водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты была изучена на белых крысах (60 животных).

Белым крысам препарат вводили подкожно и внутрижелудочно в дозах 500, 1000, 2500, 5000 мг/кг по действующему веществу. За животными наблюдали в течение 14 суток после введения препарата. Объем вводимого раствора составлял белым крысам до 3 мл. Результаты исследований приведены в таблицах 4 и 5.

Клиника токсического действия при подкожном введении антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты у белых крыс, сопровождалась следующими симптомами (таблица 6).

Животные, получавшие антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты в изучаемых дозах в течение всего периода наблюдения (14 суток) активно передвигались по клеткам, по пищевому и питьевому поведению мало отличались от крыс контрольной группы, адекватная реакция на внешние раздражители (звук, свет) была на уровне контроля.

При внутрижелудочном введении препарата в дозе 2500 и 5000 мг/кг белые крысы в течение первых суток были угнетены, малоподвижны, отказывались от корма. Реакция на внешние раздражители была понижена. На вторые сутки после введения препарата восстанавливалось пищевое и питьевое поведение, реакции на внешние раздражители (таблица 7).

В течение 14 суток исследований падежа опытных животных не отмечено. В связи с этим установить среднесмертельную дозу (LD₅₀) не представилось возможным. Это позволяет считать антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, нетоксичным в испытанном диапазоне и варьировать его дозами в широких пределах.

Пример 4.

Оценку раздражающего действия антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты проводили на морских свинках и кроликах на основании результатов постановки метода накожных аппликаций и конъюнктивальных проб.

Для постановки метода накожных проб антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты в несколько серий использовались морские свинки и кролики. Раздражающее действие антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты оценивали на морских свинках в количестве 10 животных, разделенных на 2 группы.

Морским свинкам 1 опытной группы применяли антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, альфа-липоевая кислота - 15 мг.

Морским свинкам 2 опытной группы вводили антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты. Раствор готовят путем смешивания в 2 мл водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 250 мг, альфа-липоевая кислота - 150 мг.

Антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты применяли накожно. Местом введения являлась правая боковая поверхность середины туловища. На левую боковую поверхность туловища в качестве контроля наносили дистиллированную воду. Предварительно участок тела размером 2 см на 2 см коротко выстригали. Растворы препарата на основе водного раствора фуллерена С₆₀ для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у животных и дистиллированную воду наносили по 3 капли один раз в день в течение 14 суток. Для исключения развития контактного дерматита механическое воздействие на опытный участок кожи свели к минимуму (фигуры 6 и 7).

Реакцию кожи морских свинок при накожном применении водных растворов фуллерена С₆₀ оценивали по Шкале оценки аппликационных кожных тестов по Паттерсону(таблица 8). После нанесения препарата вели непрерывное наблюдение за животными в течение 20 минут. Затем тестируемые показатели снимали через каждые 24 часа. В ходе опытов установлено, что антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты не вызывает раздражающего действия на коже опытных морских свинок.

Раздражающее действие антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты изучали во 2 серии опытов. Для этого использовали морских свинок в количестве 10 животных, разделенных на 2 группы.

Морским свинкам 1 опытной группы применяли антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, альфа-липоевая кислота - 15 мг (таблица 9).

Морским свинкам 2 опытной группы вводили антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты. Раствор готовят путем смешивания водного раствора фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, альфа-липоевая кислота - 15 мг.

На поверхность спины с правой стороны наносили дистиллированную воду для снятия контрольных данных.

Ежедневно наблюдая за состоянием кожи в местах нанесения препарата установлено, что изучаемый препарат в 1 и 2 виде водных растворов не вызывает стойких морфологических изменений в различных слоях кожи у морских свинок за весь период наблюдений.

Аналогичные опыты на кроликах проведены антиоксидантным препаратом для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты. С этой целью подобрано 2 группы кроликов по 6 животных в каждой.

Кроликам 1 опытной группы применяли антиоксидантный препарат для животныхна основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, при следующем соотношении компонентов в мае. мг: водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, альфа-липоевая кислота - 15 мг (таблица 10).

Кроликам 2 опытной группы вводили антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты. Животным вводили водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 250 мг, альфа-липоевая кислота - 150 мг.

Установлено, что нанесение на кожу 1 и 2 раствора не оказывало патологического воздействия на кожу кроликов как на 7, так и 14 сутки опытов.

Препарат на основе водного раствора фуллерена С₆₀ для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у животныхне вызывает выраженных морфологических изменений в различных слоях кожи опытных животных.

Для постановки конъюнктивальной пробы были использованы морские свинки. Морским свинкам 1 опытной группы применяли антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, альфа-липоевая кислота - 15 мг.

Морским свинкам 2 опытной группы вводили антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты. Животным вводили водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 250 мг, альфа-липоевая кислота - 150 мг.

Готовые растворы по 1 капле вводили глазной пипеткой под верхнее веко правого глаза, а в левый глаз, служащий контролем, вводили дистиллированную воду. Для оценки аллергизирующего эффекта каждого препарата использовали 10 морских свинок по 5 животных в группах.

Гиперчувствительность немедленного типа оценивали через 15 минут после введения препаратов. Гиперчувствительность замедленного типа оценивали через 24-48 ч. Результаты исследований (таблица 8) оценивали по следующей шкале:

1 - легкое покраснение слезного протока;

2 - покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице;

3 - покраснение всей конъюнктивы и склеры. Реакция сопровождается зудом и при расчесывании лапками возможно развитие гнойного офтальмита.

В течение 6 ч непрерывного наблюдения за животными изменений в клиническом состоянии организма морских свинок после нанесения препарата на конъюнктиву зарегистрировано не было (фигура 8). Согласно методике, после 24 часового и 48 часового периода наблюдения, в состоянии морских свинок также не было зарегистрировано изменений.

Изобретение относится к ветеринарной фармации, а именно к антиоксидантному препарату для животных. Антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты при следующем соотношении компонентов: водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, альфа-липоевая кислота - 15 мг. Вышеописанный препарат является высокоэффективным в отношении антиоксидантного, иммуностимулирующего действия, обладает низкой токсичностью. 8 ил., 10 табл., 4 пр.

Антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и альфа-липоевой кислоты при следующем соотношении компонентов:

водный раствор фуллерена С₆₀ - 2 мл, 2 мг по действующему веществу;

ресвератрол - 25 мг;

альфа-липоевая кислота - 15 мг.