СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/50 

Предлагаемое изобретение относится к области биохимии и может быть использовано в фармакологии для создания новых лекарственных препаратов для лечения неврологических заболеваний.

В настоящее время в мире выпускаются и широко применяются фармакологические средства на основе гетерополисахаридов - гликозаминогликанов (ГАГ). К ним относятся "гепарин", "артепарон", "healon", "provisk" и др. Первый препарат - отечественный, второй выпускается в ФРГ, третий - в Швеции, четвертый - в Канаде. Эти лекарственные средства, помимо того, что они содержат ГАГ, объединяет то, что их получают из тканей животных.

Принято считать, что ГАГ высших млекопитающих не обладают антигенностью в отношении организма человека, но неизбежные негомологичные человеческому организму примеси (например, белков), появляющиеся на этапах наработки препаратов из тканей животных, неизбежно приводят к появлению случаев плохой переносимости этих лекарств больными (Машковский М. Д. Лекарственные средства. - Медицина, 1988. - Т. 2, С. 75, Артепарон для лечения артроза /Информация по применению. - Мюнхен, Луитпольд-Верк, 1990. - 14 с.)
Известны ГАГ, извлекаемые из более чем одного органа животных (тонкий кишечник, легкие или плацента) и включающие все известные классы этих гетерополисахаридов:
- гепарин - 2-30%;
- гепарансульфат - 10-35%;
- дерматансульфат - 10-35%;
- хондроитинсульфаты A и C - 15-40%;
- кератансульфат - 0-17%;
- гиалуроновая кислота - 0-17% масс.

Количество нуклеиновых кислот не превышает 0,5%, белка - также 0,5% масс.

Активные ингредиенты экстрагируются из измельченных животных тканей, обработанных 0,3N водным раствором NaOH при 70^oC в течение 12 часов. Затем pH смеси доводят до 6, суспензию фильтруют, фильтрат обрабатывают папаином 24 ч при 45^oC; продукт осаждают ацетоном и в дальнейшем его в виде цинковой соли сульфомукополисахаридов используют в косметической композиции для стимуляции роста волос (Eur Pat. Appl EP 297, 455, 1989). ГАГ, получаемые вышеописанным способом из тканей животных (тонкий кишечник, легкие или плацента), негомологичны человеческому организму и при применении их в качестве косметического препарата для наружного применения могут возникнуть случаи плохой переносимости и аллергических реакций.

Наиболее близкими по сущности к предлагаемому изобретению являются лекарственные вещества биогенного характера, выделяемые из зародыша животного или пуповины животного или человека, которые представляют интерес как органические регуляторы клеточного обмена и восстановители биологического равновесия. В соответствующих дозировках препараты также применимы при нервных заболеваниях (FR 2413912). Согласно описанию этого изобретения биогенными средствами являются в основном экстракты биологических тканей без глубокой степени очистки этих экстрактов.

Авторами предлагаемого изобретения предлагаются ГАГ, извлекаемых из плаценты человека, которые являются гомологичными человеческому организму полисахаридами и подвергаются нескольким стадиям очистки от белков, нуклеиновых кислот и других биологических примесей с целью получения веществ фармацевтической степени чистоты и соответственно высокой фармакологической активности.

Поставленная задача достигается следующим образом: гомогенизированную плаценту человека, тестированную на инфицирование ВИЧ, гепатитом и сифилисом, обрабатывают 1N водным раствором NaOH при комнатной температуре. Затем суспензию подвергают ряду операций, способствующих избавлению от белков и нуклеиновых кислот. Окончательную очистку проводят с помощью метода колоночной хроматографии на DEAE-целлюлозе или ECTEOLA-целлюлозе, продукт осаждают этанолом, осадок растворяют в воде и подвергают лиофильной сушке (или высушивают под вакуумом). Очищенные по такой методике ГАГ содержат нуклеиновые кислоты меньше 5%, белки - меньше 5% масс. (определены методами Дише (Bitter T. , Muir H.M. A modified uronic acid carbazole reaction. //Anal. Biochem., 1962. - V. 4. - # 4. - P. 330-334.) и Лоури (Кочетков Г.А. Практическое руководство по энзимологии. - М., Высшая школа, 1980. - С. 224-226.) соответственно), а также следующие классы ГАГ: гепарин и гепарансульфаты, гиалуроновая кислота и хондроитинсульфаты.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1. 2 кг плаценты человека, тестированной на ВИЧ, гепатит, сифилис, гомогенизируют и смешивают с 0,8 л 4N водного раствора NaOH. Смесь выдерживают при комнатной температуре 3-5 суток при постоянном перемешивании. Дальше процесс осуществляют согласно приведенной схеме:
pH доводят HCl_конц. до 4 ---> центрифугирование, осадок отбрасывают ---> супернатант обрабатывают ТХУ с [C_{конечн.}] = 8% масс. ---> центрифугирование, осадок отбрасывают ---> pH доводят NaOH до 10-11 ---> центрифугирование, осадок отбрасывают ---> супернатант нейтрализуют HCl_конц. до pH 7,2 ---> диализ против дистиллированной воды ---> центрифугирование, незначительный осадок отбрасывают. Далее диализат пропускают через колонку с DEAE-целлюлозой или ECTEOLA-целлюлозой (V = 250 мл), промывают колонку дистиллированной водой до исчезновения поглощения в УФ-области при 220 нм, затем элюируют балластные вещества 0,3 М раствором NaCl до прекращения поглощения при 220 нм; конечный продукт элюируют 1,2 М раствором NaCl и осаждают этанолом (1: 4). Осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде и подвергают лиофильной сушке (или высушивают под вакуумом). Продукт получают в виде гигроскопичного порошка (или пластинок) слегка желтоватого или розоватого цвета в количестве 0,6 г, содержащий следующие классы ГАГ:
- гепарин и гепарансульфаты - 2-7%
- гиалуроновая кислота - 46-51%
- хондроитинсульфаты - 42-52% масс.

В своем составе полученные ГАГ содержат остаточные нуклеиновые кислоты в количестве меньше 1,5% и белки - меньше 3% масс.

Очищенные таким образом ГАГ использовали в качестве активного ингредиента при изготовлении средства для лечения неврологических заболеваний.

Пример 2. Взвешивали 0,1 г субстанции ГАГ, растирали в фарфоровой ступке и при помешивании постепенно добавляли фармацевтически приемлемый носитель до 100 г.

ГАГ в составе лекарственного средства исследовали на токсичность.

Исследования были выполнены на кроликах породы "Шиншилла" массой 2,5±0,3 кг, белых мышах-самцах массой 21±3 г, белых крысах-самцах и самках массой 190±24 г, морских свинках-самках белой масти массой 230±25 г.

Острая токсичность плацентарных ГАГ исследована в опытах на белых мышах при накожном нанесении препарата. Результаты опытов по критерию выживаемости в сериях "контроль-опыт" обрабатывались статистически по методу В.Б.Прозоровского.

Общетоксическое действие препаратов исследовалось в опытах на крысах, ежедневно в течение 28 суток получавших на эпилированный участок кожи площадью 4 см² мг ГАГ (2 мл 1% водного раствора). Оценивались интегральные показатели (внешний вид, поведение, симптомы интоксикации, прирост массы тела - один раз в неделю). Кроме того, в динамике исследовали биохимические показатели (общий белок крови, содержание гормонов в крови, сахар крови, общий холестерин), гематологические показатели (количество эритроцитов и лейкоцитов в крови), а также поведенческие реакции, характер двигательной активности, реакцию на внешние раздражители.

В конце опытов производили забой и вскрытие контрольных и опытных животных, исследовали макро-микроскопическую структуру внутренних органов.

Общий белок определяли в сыворотке крови по методу Лоури.

Содержание гормонов в сыворотке крови определяли с помощью иммунолюминесцентных наборов фирмы "Амершам". Лютеинизирующий гормон с помощью набора "Амерлайт ЛГ-30", фолликулостимулирующий - "Амерлайт ФСГ", пролактин - "Амерлайт Пролактин", хорионический гонадотропин - "Амерлайт ХГТ-60", кортизол - "Амерлайт Кортизол", прогестерон - "Амерлайт Прогестерон".

Глюкозу в крови определяли с помощью набора "Декстранол". Общий холестерин в сыворотке крови определяли по методу Либермана-Бурхарда в модификации Илька. Количество эритроцитов и лейкоцитов в крови подсчитывали в камере Горяева.

Двигательную активность (ориентировочную реакцию) исследовали в опытах на крысах методом "открытого поля". Для этого использовали площадку размером 60 х 60 см, разделенную на 9 квадратов с 16 отверстиями диаметром 4 см. В процессе 10-минутного пребывания крыс на "открытом поле" регистрировали число вставаний на задние лапки (вертикальный компонент) и переходов с квадрата на квадрат (горизонтальный компонент).

Объектом макро-, микроскопического и ультраструктурного исследования с использованием гистологических методов служили кожа, печень, почки и легкие крыс, подвергнутых воздействию ГАГ, и контрольных животных. Органы животных, предназначенные для гистологических исследований, помещались в жидкость Карнау и после обезвоживания и удаления спирта производилась заливка кусочков в парафин (изготавливались блоки). Полученные на микротоме гистологические срезы окрашивались гематоксилин-эозином.

Местное раздражающее действие на кожу изучали в опытах на морских свинках светлой масти. Плацентарные ГАГ наносили на подготовленный участок кожи спины из расчета 20 мг/см². Кроме того, в опытах на крысах 20 мг ГАГ в виде водного раствора вводили внутрикожно в течение 5 дней. По окончании опыта проводили гистологическое исследование кожи и подлежащих тканей (подкожной клетчатки и прилегающей мышечной ткани) в области инъекции ГАГ. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, жидкости Карнуа. Осуществляли проводку и заливку в парафин. Гистологические срезы тканей окрашивали гематоксилин-эозином и по Браше (на ДНК и РНК).

Сенсибилизирующее действие ГАГ исследовали на морских свинках светлой масти путем постановки конъюктивальной пробы и на модели аллергического контактного дерматита (АКД) (Рабен А.С., Алексеева О.Г., Дуева А.А., 1970).

Оценку интенсивности реакций на кожные тесты оценивали по следующей шкале:
- (0 баллов) - отсутствие реакции кожи;
± (1 балл) - слабая (точечная) гиперемия;
+ (2 балла) - точечная выраженная гиперемия;
++ (3 балла) - сплошная умеренная гиперемия;
+++ (4 балла) - сплошная выраженная гиперемия и уплотнение на месте капельной аппликации.

Влияние гликозаминогликанов на процессы регенерации в коже исследовали на модели дерматомной раны.

Острая токсичность плацентарных ГАГ исследовали в опытах на 24 белых мышах-самцах массой 21±3 г и 18 белых крысах обоего пола массой 190±24 г. Исследуемый препарат наносили животным на предварительно освобожденный от шерсти участок кожи межлопаточной области в дозах 500 - 2500 мг/кг массы тела в виде концентрированной мази (в качестве мазевой основы использовали вазелин). После воздействия препарата животных наблюдали в течение 10 суток. Результаты опытов представлены в таблице 1.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии летальных исходов у животных при нанесении препарата в дозах 1750 мг/кг для мышей и 2500 мг/кг для крыс, что позволяет отнести плацентарные ГАГ по степени воздействия на организм к IV классу опасности веществ ("малотоксичные и малоопасные"). Не отмечено также изменений внешнего вида, поведения, каких-либо симптомов интоксикации у опытных крыс и мышей по сравнению с контрольными.

В опытах на 18 крысах-самцах исследовали динамику массы тела (прирост) у интактных крыс и животных, ежедневно получавших препараты. Результаты представлены в таблице 2.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в природе массы тела крыс, получавших эпикутанно плацентарные ГАГ, и у контрольных животных. Не отмечено также изменений внешнего вида и поведения опытных крыс по сравнению с контрольными.

На 24 крысах-самках исследовано содержание общего белка в сыворотке крови. Животные ежедневно получали препараты. 1-я группа служила биологическим контролем; 2-я группа получала физиологический раствор; 3-я группа получала 1% водный раствор ГАГ. Результаты эксперимента представлены в таблице 3.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в показателях содержания общего белка у крыс, подвергнутых ежедневному воздействию ГАГ, и у контрольных животных.

В опытах на 12 морских свинках-самках изучали влияние плацентарных ГАГ на содержание гормонов в сыворотке крови этих животных. 1-я группа (n = 6) служила биологическим контролем; 2-я группа (n = 6) ежедневно в течение 28 суток получала накожно 1% водный раствор ГАГ. Полученные результаты представлены в таблице 4.

Полученные данные свидетельствуют, что плацентарные ГАГ при длительном ежедневном нанесении на кожу не влияют на гормональный статус животных.

В опытах на 18 крысах-самках, получавших субстанцию ГАГ, исследовано содержание глюкозы в крови. 1-я группа животных (n = 6) служила биологическим контролем, 2-я группа ежедневно в течение 28 дней получала физиологический раствор, 3-я группа ежедневно в течение 28 дней получала 1% водный раствор плацентарных ГАГ. Полученные результаты представлены в таблице 5.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в содержании глюкозы в крови у крыс, подвергнутых длительному ежедневному воздействию плацентарных ГАГ и у контрольных животных.

В опытах на 18 крысах-самках, ежедневно в течение 28 суток получавших плацентарные ГАГ, исследовано содержание общего холестерина в сыворотке крови. Животных разделили на 3 группы. 1-я группа служила биологическим контролем, 2-я группа получала физиологический раствор, 3-я группа получала 1% водный раствор плацентарных ГАГ. Полученные результаты представлены в таблице 6.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в количестве общего холестерина в сыворотке крови крыс, подвергнутых воздействию плацентарных ГАГ, и у контрольных животных.

В опытах на 12 крысах-самках, получавших ежедневно в течение 28 суток эпикутанно плацентарные ГАГ, исследовали двигательную активность по методу "открытого поля". Препараты наносились на кожу, предварительно освобожденную от шерсти, в межлопаточной области. Результаты представлены в таблице 7.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в двигательной активности крыс, получавших плацентарные ГАГ, и у контрольных животных.

В опытах на 12 крысах-самках исследовано влияние плацентарных ГАГ на численный состав эритроцитов крови. 1-я группа животных получала накожно физиологический раствор, 2-я группа - 1% водный раствор ГАГ. Полученные результаты представлены в таблице 8.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в количестве эритроцитов в крови у крыс, ежедневно в течение 28 суток получавших плацентарные ГАГ, и у контрольных животных.

В опытах на 12 крысах при подсчете количества эритроцитов параллельно определяли количество лейкоцитов. Результаты, показывающие влияние ГАГ на уровень лейкоцитов в крови, представлены в таблице 9.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в количестве лейкоцитов в крови у крыс, ежедневно в течение 28 суток получавших плацентарные ГАГ, и у контрольных животных.

При исследовании макро- и микроскопической структуры внутренних органов забой и вскрытие контрольных и опытных животных проводили на 29-е сутки опыта. Объектом микроскопического исследования служили легкие, печень и почки крыс, подвергавшихся воздействию плацентарных ГАГ, и контрольных. Органы животных, предназначенные для гистологического исследования, помещались в жидкость Карнуа и после обезвоживания и удаления спирта производилась заливка кусочков в парафин - приготавливались блоки. Полученные на микротоме гистологические срезы окрашивались гематоксилин-эозином.

При макроскопическом исследовании патологических изменений органов и тканей не обнаружено.

При исследовании микроскопической картины органов крыс, подвергавшихся воздействию плацентарных ГАГ, наблюдалось полное сходство с органами контрольных животных:
печень - кровообращение органа не нарушено, в просвете капилляров встречаются единичные купферовские клетки, структурные и тинкториальные свойства сохранения;
легкие - отмечается умеренное полнокровие сосудов, местами субплеврально встречаются эмфизематозные расширенные альвеолы с истонченными перегородками. Структура органа не нарушена.

почки - гиперемия кровеносных сосудов в корковом веществе, гиперемия капилляров в сосудах клубочков. Между извитыми канальцами скопления лимфоидных клеток.

Таким образом, при микроскопическом исследовании структурных и тинкториальных изменений органов крыс, получавших плацентарные ГАГ, по сравнению с контрольными животными не отмечено.

Местное раздражающее действие ГАГ оценивали по их воздействию на состояние кожи. Опыты проводили на 6 морских свинках белой масти. Шерсть выстригали на симметричных участках спины по обе стороны от позвоночника, участок аппликации составлял 2х2 см. Исследуемый препарат в чистом виде наносили на подготовленный участок кожи правой половины туловища из расчета 20 мг/см², левая половина служила контролем. Время экспозиции - 4 часа. Время наблюдения после однократной аппликации - 2 недели. После окончания экспозиции остатки продукта удаляли теплой водой.

Реакцию кожи регистрировали через 1 и 16 часов однократного воздействия в сравнении с контрольным участком. Оценку степени эритемы производили визуально, интенсивность отека - путем измерения толщины кожной складки (в мм).

Результаты опытов свидетельствуют, что однократное нанесение на кожу морским свинкам плацентарных ГАГ не вызывает образования эритемы. Не установлено также увеличения толщины кожной складки на правой (опытной) стороне по сравнению с левой (контрольной) половиной туловища. В соответствии с классификацией химических веществ по выраженности раздражающего действия на кожу морских свинок при однократной аппликации плацентарные ГАГ могут быть отнесены к веществам, не оказывающим раздражающего действия.

Кроме того, проведены опыты с внутрикожным введением плацентарных ГАГ. Исследования выполнены на 14 крысах-самках. Семи опытным и семи контрольным животным на боковой поверхности туловища производилась эпиляция участка кожи размером 2х2 см. Семи крысам ежедневно в течение 5 дней в эпилированный участок кожи вводили 20 мг ГАГ в виде водного раствора. Контрольные животные получали дистиллированную воду. В ходе эксперимента ежедневно исследовали состояние кожи в месте введения препарата (местное действие), а по окончании опыта проводили гистологическое исследование кожи и подлежащих тканей (подкожной клетчатки прилегающей мышечной ткани) в области инъекции ГАГ.

Клинически в процессе наблюдения за крысами не установлено каких-либо отклонений от нормы общего состояния, а также местных изменений кожи (цвета, наличия гиперемии, отека, утолщения кожной складки, температурной реакции) у опытных животных по сравнению с контрольными.

Микроскопическая картина кожи опытных и контрольных крыс была практически одинаковой. Воспалительных инфильтратов, гранулем, а также повреждений подкожной клетчатки и мышц не обнаружено.

Сенсибилизирующее действие ГАГ изучали на моделях конъюнктивальной пробы и внутрикожного введения. При постановке первого опыта 8 морским свинкам белой масти одну каплю плацентарных ГАГ в виде 1%, 5% и 10% растворов пипеткой наносили под верхнее веко опытным животным (n=4).

Контрольным свинкам закапывали одну каплю дистиллированной воды. Реакция учитывалась через 15 минут, 24 и 28 часов после однократного воздействия, оценку интенсивности реакции осуществляли по следующей шкале:
1 балл - легкое покраснение слизистой оболочки;
2 балла - покраснение протока склеры по направлению к роговице;
3 балла - покраснение всей конъюнктивы и склеры.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют об отсутствии различий между опытной и контрольной группами животных в реакции конъюнктивы на воздействие плацентарных ГАГ во все указанные сроки наблюдения.

Внутрикожное введение ГАГ производили в кожу наружной поверхности уха морских свинок опытной группы (n= 6) туберкулиновым шприцом в дозе 0,05 мг/кг, контрольным животным (n=6) вводили дистиллированную воду. Тестирование проводили на 11 день после введения препарата. Разрешающие аппликации ГАГ (кожные пробы) наносили на 4 отдаленных друг от друга участка правой половины туловища 3 каплям 0,2% и 1% раствора ГАГ. Чтение результатов проводили через 24 часа. В параллельных опытах на контрольных морских свинках, не подвергавшихся воздействию изучаемого препарата, проведены разрешающие аппликации (также как у опытных) с чтением результатов через 24 часа.

Интенсивность кожной реакции оценивали визуально по следующей шкале:
- (0 баллов) - отсутствие реакции;
± (1 балл) - слабая (точечная) гиперемия;
+ (2 балла) - точечная выраженная гиперемия;
++ (3 балла) - сплошная умеренная гиперемия;
+++ (4 балла) - сплошная выраженная гиперемия и уплотнение на месте капельной аппликации.

Результаты данной серии опытов свидетельствуют об отсутствии реакции кожи у сенсибилизированных животных.

В опытах на морских свинках белой масти воспроизводилась модель аллергического контактного дерматита. Объектами исследования служили плацентарные ГАГ в виде 0,1% и 1% водных растворов. Опыты проводили по следующей схеме: аппликации водных растворов субстанции ГАГ проводили на эпилированный участок кожи правой боковой поверхности туловища двум группам морских свинок (в каждой группе по 6 животных) в течение 14 суток. Разрешающие аппликации (кожные пробы) ставили 1 каплей 0,1% и 1% растворов ГАГ на участки кожи левой половины туловища на 15 сутки от начала сенсибилизации. Результаты опытов представлены в таблице 10.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии развития аллергического контактного дерматита у животных, сенсибилизированных 0,1% и 1% растворами ГАГ.

Таким образом, ГАГ в условиях однократного накожного введения в организм животных не вызывают их гибели в диапазоне доз от 500 до 2500 мг/кг, что позволяет отнести их по степени воздействия на организм к IV классу опасности веществ "малотоксичные и малоопасные". При ежедневных аппликациях на кожу в течение 28 суток 1% водного раствора ГАГ не выявлено признаков интоксикации, изменений внешнего вида, отклонений в поведении, двигательной активности и динамике увеличения массы тела лабораторных животных. Также оставалось в норме содержание в сыворотке крови общего белка, глюкозы, холестерина, гормонов (лютеинизирующего, фолликулостимулирующего кортизола, хорионического гонадотропина, пролактина, прогестерона), не отличалось от контрольного количество эритроцитов и лейкоцитов в крови.

ГАГ в диапазоне концентраций от 1 до 10% не оказывают аллергизирующего действия, не вызывают патологических изменений роговицы, кожи и внутренних органов (легких, печени, почек), что показано данными морфологических исследований.

Лечение плацентарными ГАГ неврологических заболеваний на примере рефлекторных синдромов при остеохондрозах и прежде всего болевых и мышечно-тонических симптомов осуществляют мазью, содержащей ГАГ в количестве 0,1% масс. , после определения симптомов, характера и локализации основного рефлекторного синдрома (мышечно-тонического, алгического, ишемического, дистрофического) при остеохондрозе.

Все лица, получавшие лечение препаратом ГАГ, имели положительный терапевтический эффект. Уменьшалась или исчезала выраженность болевого синдрома, болевых точек, симптомов натяжения мышц. Отмечалась нормализация реовазографических и тепловизорных показателей. Катамнестическое изучение результатов лечения 21 больного с давностью до 1 года указало на стойкость терапевтического эффекта. Отрицательного и побочного действия при использовании препарата ГАГ не отмечалось.

Больной М-в, 46 лет находился на лечении в неврологическом отделении Республиканской клинической больницы им. Куватова (г. Уфа). Диагноз: остеохондроз L5-S1 позвонков, ирригативно-корешковый синдром с выраженным болевым синдромом. При поступлении в отделение жаловался на сильные резкие боли в области поясницы и правой ноге, усиливающиеся при движении. Из-за боли больной не мог сидеть и ходить. Впервые боли в пояснице отмечались 20 лет назад, которые кратковременно периодически возобновлялись. Лечился амбулаторно. За 7 дней до поступления в отделение после легкого прыжка остро возникли вышеуказанные боли.

Объективно: вынужденное положение лежа с согнутыми ногами, малейшее движение усиливает боли. Со стороны внутренних органов отклонений нет.

Неврологически: черепные нервы в норме, двигательных, чувствительных и рефлекторных нарушений верхних конечностей нет. Длинные мышцы спины справа резко напряжены. Поясничный лордоз сглажен. Гипотония мышц бедра и голени. Снижение мышечной силы сгибателей и разгибателей большого пальца стопы справа. Гипэстезия в зоне L5-S1 справа, S1-S2 слева. Положительные болевые паравертебральные точки L5-S2, симптом Лассега на 15 градусов справа, 45 градусов слева. Коленные рефлексы живые, равномерные, Ахиллов рефлекс справа снижен, патологических рефлексов нет.

Общий анализ крови, мочи, иммунный статус - в норме. На термограмме задней поверхности туловища поясничной области паравертебрально справа определен очаг гипертермии с перепадом температуры до 1^oC. После назначения препарата ГАГ: напряжение длинных мышц спины отсутствует, больной смог свободно ходить, исчез болевой синдром. После проведенного лечения при выписке: напряжения мышц спины нет, симптом Лассега на 80 градусов, гипотония мышц бедра и голени менее выражена, Ахиллов рефлекс справа - живой.

Больной Н-н, 57 лет, находился на лечении в неврологическом отделении РКБ с диагнозом: остеохондроз позвоночника L4-5, S1 васкулярно-корешковым синдромом слева, обострение. Из-за болей не ходит. Пациент 30 лет лечится амбулаторно, обострения часты, последнее обострение 2 недели назад после "неловкого" движения, амбулаторное лечение не дало эффекта - боли усилились. Перенес инфаркт миокарда в 1987 году, имеет ишемическую болезнь сердца с экстрасистолической аритмией.

Объективно: Вынужденное положение из-за боли в области поясницы и левой ноге. Неврологически: черепные нервы в норме. Двигательных, чувствительных и рефлекторных нарушений в руках нет. Снижен поясничный лордоз, длинные мышцы спины резко напряжены, сколиоз влево. Снижен тонус икроножных мышц слева, сила разгибателей левой стопы и первого пальца слева снижена. Положительны точки Валле, гипэстезия S1, симптом Лассега на 30^o слева. Снижен Ахиллов рефлекс слева.

Данные дополнительного исследования крови, мочи, УЗИ внутренних органов, рентгенография грудной клетки в пределах нормы. На серии МР-томограммах выявлены дегенеративные изменения тел позвонков. Грыжи Ширля Th12, L1, L4. Задняя грыжа диска L4-5 до 0,6 мм, деформация дурального мешка, травмирующая нервный корешок, циркулярная протрузия диска L4-5 - до 0,3 мм. ЭКГ - синусовая тахикардия с частотой 91 удар в 1 минуту, частые экстрасистолы. Блокада пучка Гисса, гипертрофия левого желудочка. Соматическая сопутствующая патология препятствовала назначенного активного физиотерапевтического лечения. Проведенная монотерапия препаратом ГАГ позволила существенно уменьшить напряжение мышц спины, снять болевые ощущения и выраженность симптомов натяжения, увеличить силу разгибателей стопы слева.

Больная М-н, 65 лет, диагноз: обменно-дистрофический полиартрит, обострение артрита коленных суставов.

Сопутствующие заболевания: атеросклероз с артериальной гипертензией, ишемическая болезнь сердца, бронхопневмония.

Жалобы на сильные боли в коленных суставах, препятствующие передвижению. Общая слабость, боли в области сердца, одышка. Больна 15 лет, последнее обострение 10 дней назад.

Объективно: Повышенного питания. Ограничение движений в коленных суставах из-за болей, вынужденное положение. Гипэстезия и болезненность при пальпации в области коленных суставов. В легких жесткое дыхание, влажные хрипы, тоны сердца приглушены. Артериальное давление 170/90 мм рт.ст.

Неврологически: сглаженность носогубной складки справа, легкая анизорефлексия, справа рефлексы чуть выше. Положительны рефлексы орального автоматизма. Резкая гипертрофия на термограммах. Проведение интенсивной терапии с использованием физиотерапевтических методов больной противопоказано из-за сопутствующих заболеваний, поэтому было назначено только лечение препаратом плацентарных ГАГ, которое привело к устранению болей и дало возможность свободного передвижения. Катамнестическое наблюдение в течение 2 месяцев дает информацию о стойкости терапевтического эффекта.

Применение препарата плацентарных ГАГ позволило снять или существенно уменьшить выраженность болевого синдрома, мышечно-тонического напряжения мышц, дать положительную динамику на ликвидацию неврологического дефекта, у всех 55 пролеченных больных побочных явлений и осложнений не было.

Литература
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М., Медицина, 1988. - Т.2. - С. 75.

2. Артепарон для лечения артроза /Информация по применению. - Мюнхен, Луитпольд-Верк, 1990. - 14 с.

3. Eur. Pat. Appl. EP 297,455 (C1. A 61 K 7/06) 1989.

4. FR 2413912
5. Bitter T. , Muir H.M. A modified uronic acid carbazole reaction // Anal. Biochem. 1962. - V. 4. - #4. - P. 330-334.

6. Кочетков Г.А. Практическое руководство по энзимологии. - М., Высшая школа, 1980. - С. 224-226.

Изобретение относится к области биохимии и может быть использовано в фармакологии для создания новых лекарственных препаратов. Гликозаминогликаны, извлекаемые из плаценты человека, применяются в качестве активного ингредиента в средстве для лечения неврологических заболеваний. Технический результат: средство проявляет высокую терапевтическую эффективность, не оказывает токсического действия в силу гомологичности тканям человеческого организма. 10 табл.

Средство для лечения неврологических заболеваний из плаценты человека, содержащее активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель, отличающееся тем, что в качестве активного ингредиента оно содержит гликозаминогликаны, представляющие смесь 2-7%-гепарина и гепарансульфатов, 46-51% гиалуроновой кислоты, 42-52% хондроитинсульфатов, остаточные нуклеиновые кислоты менее 1,5% и белка менее 3,0% при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Активный ингредиент - 0,1
Фармацевтически приемлемый носитель - До 100и