Способ получения биопсийного материала при внутриглазных образованиях Российский патент 2023 года по МПК A61F9/07 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для получения биопсийного материала при внутриглазных образованиях путем забора субретинальной жидкости.

Внутриглазные образования - большая полиморфная группа заболеваний, представляющих опасность не только для зрения, но и, в ряде случаев, для жизни пациента. В настоящее время офтальмоонкологи располагают богатым арсеналом диагностических методов внутриглазных образований, однако, не всегда удается получить информативный материал для прогнозирования метастатического процесса внутриглазных образований и, как следствие затрудняется определение тактики ведения и рисков для жизни пациента. В связи с данной проблемой, встает вопрос о поиске новых способов получения биопсийного материала. Нами предложен способ забор субретинальной жидкости при внутриглазных образованиях, сопровождающихся отслойкой сетчатки, путем аспирационной биопсии. Получаемый материал используется для проведения цитологического исследования и, при достаточном объеме материала, иммуноцитохимического и генетического исследований.

Известно несколько способов получения материала внутриглазного образования для проведения морфологического или генетического исследования. Получение опухолевого материала возможно при хирургическом удалении опухоли или ее биопсии.

В онкологической практике довольно широко известен метод жидкостной биопсии, с помощью которого возможно получить опухолевый материал (опухолевые клетки, опухолевую ДНК, микроРНК, экзосомы) для генетического или морфологического исследования путем взятия биологических жидкостей пациента. В контексте внутриглазных образований возможно исследование крови для определения циркулирующих мутаций (для увеальной меланомы de Bruyn DP, Beasley AB, Verdijk RM, van Poppelen NM, Paridaens D, de Keizer ROB, Naus NC, Gray ES, de Klein A, Brosens E, Is Tissue Still the Issue? The Promise of Liquid Biopsy in Uveal Melanoma. Biomedicines. 2022 Feb 21;10(2):506. doi: 10.3390/biomedicines10020506. PMID: 35203714; PMCID: PMC8962331.), а также влаги передней камеры (для ретинобластомы doi: 10.1080/08820538.2022.2078165 Ghose N, Kaliki S. Liquid biopsy in Retinoblastoma: A review. Semin Ophthalmol. 2022 Oct-Nov;37(7-8):813-819. doi: 10.1080/08820538.2022.2078165. Epub 2022 May 23. PMID: 35604935.). Способы получения данного материала известны и широко используются в практике.

Авторам не известны способы получения биопсийного материала при внутриглазных образованиях путем забора субретинальной жидкости.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения биопсийного материала при внутриглазных образованиях путем забора субретинальной жидкости для проведения цитологического и генетического исследований.

Техническим результатом является получение достаточного объема субретинальной жидкости при создании малоинвазивного доступа, позволяющего использовать материал для генетического и цитологического исследования.

Технический результат достигается тем, что при отслойке сетчатки на фоне внутриглазного образования, выполняется биопсия субретинальной жидкости путем установки витреоретинального порта, соответствующего диаметру инструмента (эндовитреальных ножниц и биопсийной иглы), дополнительного витреоретинального порта для введения эндоосветителя; ретинотомия производится эндовитреальными ножницами под контролем операционного микроскопа; активная аспирация субретинальной жидкости с помощью биопсийной иглы и последующее извлечение витреоретинальных портов с наложением узловых эписклеральных швов.

Способ поясняется фиг. 1 и 2, на фигуре 1 изображен глаз с внутриглазным образованием и отслойкой сетчатки на склоне. На фиг. 2 изображен глаз с отслойкой сетчатки в центральном отделе при ее отсутствии на склонах образования.

Позицией 1 обозначено внутриглазное образование, 2 - отслойка сетчатки, 3 - субретинальная жидкость, 4 - диск зрительного нерва (ДЗН), 5 - витреоретинальный порт для введения эндовитреальных ножниц и биопсийной иглы, 6 - дополнительный витреоретинальный порт для введения эндоосветителя, 7 - эндовитреальные ножницы, 8 - эндоосветитель, 9 - ретинотомическое отверстие.

Способ осуществляется следующим образом.

Операция проводится под контролем операционного микроскопа. В качестве проводника устанавливается витреоретинальный порт 5 калибром 25G, соответствующий диаметру эндовитреальных ножниц 7 и биопсийной иглы (на чертеже не показана). Дополнительный витреоретинальный порт 6 калибром 25G устанавливается для введения эндоосветителя 8. Оба порта устанавливаются вне зоны проекции опухоли на склеру. Зона расположения ретинотомического отверстия 9 для получения субретинальной жидкости определяется исходя из клинических особенностей внутриглазного образования 1 и отслойки сетчатки 2. В случае максимальной высоты отслойки сетчатки на склоне внутриглазного образования, ретинотомия эндовитреальными ножницами 7 осуществляется по краю фиксации сетчатки к опухоли в зоне максимального ее натяжения. В случае распространения отслойки сетчатки в центральный отдел при ее отсутствии на склонах внутриглазного образования, ретинотомия выполняется у ДЗН 4, за исключением наружного сегмента глазного дна. Размер ретинотомии соответствует диаметру биопсийной иглы. По завершении ретинотомии, эндовитреальные ножницы 7 извлекают. Через витреоретинальный порт 5, соответствующий калибру биопсийной иглы, и сформированное эндовитреальными ножницами 7 ретинотомическое отверстие 9, вводят биопсийную иглу для аспирации субретинальной жидкости 3. Производится активная аспирация субретинальной жидкости 3. Полученный биопсийный материал помещают в емкость с консервантом для проведения последующих лабораторных исследований. Операция завершается извлечением витреоретинальных портов 5 и 6 с наложением эписклеральных узловых швов. Способ поясняется следующими примерами. Клинический пример 1

Пациент А. 55 лет, в течение 6 месяцев отмечает появление молний перед правым глазом. При обращении в МНТК МГ г. Москвы при офтальмоскопии: ДЗН бледно-розовый, границы четкие, ход сосудов правильный. В наружном отделе определяется проминирующее в стекловидное тело внутриглазное образование серого цвета с крапчатой поверхностью. На склонах образования - локальная вторичная отслойка сетчатки (фиг. 1).

По данным В-сканирования правого глаза: в наружном сегменте определяется внутриглазное образование, проминирующее в стекловидное тело высотой 5,0-5,2 мм, протяженностью 9,51*10,06 мм. По верхнему краю внутриглазного образования локально просматривается сетчатка на 1,8-2,0 мм. На остальном протяжении сетчатка прилежит. В стекловидном теле умеренное количество мелкоточечных помутнений.

Диагноз: Меланома хориоидеи правого глаза (T2aNoMo). Вторичная отслойка сетчатки.

Пациенту рекомендовано проведение органосохраняющего лечения, а также выполнение биопсии субретинальной жидкости для молекулярно-генетического исследования с прогностической целью.

После обработки операционного поля, во внутреннем квадранте (5 ч) в 4 мм от лимба установлен порт 25 G, соответствующий диаметру эндовитреальных ножниц и биопсийной иглы. На 2 ч установлен дополнительный витреоретинальный порт, через который введен эндоосветитель. Под контролем операционного микроскопа эндовитреальные ножницы направлены к зоне максимального натяжения отслойки сетчатки, ретинотомическое отверстие создано по краю фиксации сетчатки к внутриглазному образованию. По завершении ретинотомии, витреальные ножницы извлечены. Через этот же порт и сформированное витреальными ножницами ретинотомическое отверстие введена биопсийная игла. Произведена активная аспирация субретинальной жидкости. Полученный материал помещен в емкость с консервантом для проведения последующих лабораторных исследований. Инструменты и витреоретинальные порты извлечены с наложением эписклеральных узловых швов.

Операция завершена фиксацией радиоактивного офтальмоаппликатора к склере в зоне проекции опухоли.

Из полученного материала изготовлены стеклопрепараты для проведения цитологического и генетического исследований. Материал признан пригодным и информативным: клеточность препаратов высокая, зона осаждения клеток контурирована четко, обнаружены клетки с округлыми ядрами и нерезко пигментированной цитоплазмой округлой (95%) формы и группы клеток с аналогичной морфологией, вероятно, принадлежащие меланоме эпителиоидного типа. Проанализированные стеклопрепараты были признаны пригодными для достоверного молекулярного исследования опухолевых клеток и были использованы для выделения ДНК и для исследований in situ. ДНК, выделенная из материала, по концентрации и качеству удовлетворяла критериям для достоверного ПЦР-анализа мутаций.

Клинический пример 2

Пациент Д., 62 года, в течение 12 месяцев отмечает снижение остроты зрения правого глаза, вспышки, молнии перед правым глазом в течение 8 месяцев. При обращении в МНТК МГ г. Москвы при офтальмоскопии: ДЗН бледно-розовый, границы четкие, ход сосудов правильный. В нижнем отделе определяется проминирующее в полость стекловидного тела внутриглазное образование серо-коричневого цвета, локальная вторичная отслойка сетчатки с распространением в центральном отделе (фиг. 2).

По данным В-сканирования правого глаза: в верхнем отделе определяется внутриглазное образование с проминенцией 6,4-6,5 мм, протяженностью 8,7*9,2 мм. По краям внутриглазного образования локально просматривается сетчатка на 2,5-2,7 мм. На остальном протяжении сетчатка прилежит.

Диагноз: Меланома хориоидеи правого глаза (T2aNoMo). Вторичная отслойка сетчатки.

Пациенту рекомендовано проведение органосохраняющего лечения, а также выполнение биопсии субретинальной жидкости для молекулярно-генетического исследования с прогностической целью.

После обработки операционного поля, в нижнем квадранте (5 ч) в 4 мм от лимба установлен порт 25 G, соответствующий диаметру эндовитреальных ножниц и биопсийной иглы. На 8 ч установлен дополнительный витреоретинальный порт и введен эндоосветитель. Под контролем операционного микроскопа эндовитреальные ножницы направлены к ДЗН, где создано ретинотомическое отверстие. По завершении ретинотомии, витреальные ножницы извлечены. Через тот же порт и сформированное витреальными ножницами ретинотомическое отверстие введена биопсийная игла. Произведена активная аспирация субретинальной жидкости. Полученный материал помещен в емкость с консервантом для проведения последующих лабораторных исследований. Инструменты и витреоретинальные порты извлечены с наложением эписклеральных узловых швов.

Операция завершена фиксацией радиактивного офтальмоаппликатора к склере в зоне проекции опухоли.

Из полученного материала изготовлены стеклопрепараты для проведения цитологического и генетического исследований. Материал признан пригодным и информативным: клеточность препаратов высокая, зона осаждения клеток контурирована четко, обнаружены клетки с округлыми ядрами и нерезко пигментированной цитоплазмой округлой (70-95%) и веретенообразной (10-30%) формы и группы клеток с аналогичной морфологией, вероятно, принадлежащие меланоме смешанного эпителиоидного типа с преобладанием эпителиоидного компонента. Проанализированные стеклопрепараты были признаны пригодными для достоверного молекулярного исследования опухолевых клеток и были использованы для выделения ДНК и для исследований in situ. ДНК, выделенная из материала, по концентрации и качеству удовлетворяла критериям для достоверного ПЦР-анализа мутаций.

Таким образом, заявленным способом было проведено 28 биопсий субретинальной жидкости.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Осуществляют биопсию субретинальной жидкости при внутриглазных образованиях. Производят установку порта для введения эндовитреальных ножниц и биопсийной иглы и дополнительного порта для введения эндоосветителя. Проводят ретинотомию эндовитреальными ножницами под контролем операционного микроскопа: в случае максимальной высоты отслойки сетчатки на склоне внутриглазного образования - по краю фиксации сетчатки к опухоли в зоне максимального ее натяжения. В случае распространения отслойки сетчатки в центральный отдел при ее отсутствии на склонах внутриглазного образования - у диска зрительного нерва, за исключением наружного сегмента глазного дна. Затем извлекают ножницы и вводят биопсийную иглу через порт в сформированное ретинотомическое отверстие. После чего проводят активную аспирацию субретинальной жидкости и извлекают иглу, эндоосветитель и витреоретинальные порты с наложением узловых эписклеральных швов. Способ позволяет получить достаточный объем субретинальной жидкости при создании малоинвазивного доступа, позволяющего использовать материал для генетического и цитологического исследования. 2 ил., 2 пр.

Способ биопсии субретинальной жидкости при внутриглазных образованиях, характеризующийся тем, что производят установку порта для введения эндовитреальных ножниц и биопсийной иглы и дополнительного порта для введения эндоосветителя; проводят ретинотомию эндовитреальными ножницами под контролем операционного микроскопа: в случае максимальной высоты отслойки сетчатки на склоне внутриглазного образования - по краю фиксации сетчатки к опухоли в зоне максимального ее натяжения, в случае распространения отслойки сетчатки в центральный отдел при ее отсутствии на склонах внутриглазного образования - у диска зрительного нерва, за исключением наружного сегмента глазного дна; затем извлекают ножницы и вводят биопсийную иглу через порт в сформированное ретинотомическое отверстие, после чего проводят активную аспирацию субретинальной жидкости и извлекают иглу, эндоосветитель и витреоретинальные порты с наложением узловых эписклеральных швов.