СОЕДИНЕНИЕ С МЕТИЛЛАКТАМНЫМ КОЛЬЦОМ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В ФАРМАЦЕВТИКЕ Российский патент 2023 года по МПК C07D403/12 A61K31/4155 A61P3/10 

Область техники

Настоящее изобретение касается соединения с метиллактамным кольцом, обладающего SGLT1-ингибирующей активностью, или его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтической композиции, содержащей указанное соединение, а также его применения в фармацевтике.

Уровень техники

SGLT1, т.е. натрий-зависимый котранспортер глюкозы 1, как известно, играет большую роль в абсорбции глюкозы и галактозы в тонком кишечнике. Сообщалось, что у пациентов с дефицитом SGLT1 наблюдался синдром малабсорбции глюкозы и галактозы. Кроме того, подтверждено, что экспрессия SGLT1 в тонком кишечнике повышается у пациентов с диабетом, и считается, что повышение абсорбции сахара у пациентов с диабетом вызвано высоким уровнем экспрессии SGLT1 в тонком кишечнике.

Исходя из этих данных, ожидается, что ингибитор SGLT1 нормализует уровень глюкозы в крови, блокируя абсорбцию глюкозы в тонком кишечнике. Поэтому ингибитор SGLT1 рассматривается как эффективное средство против диабета и осложнений диабета, связанных с гипергликемией. Он также рассматривается как эффективное средство для борьбы с ожирением, благодаря ингибированию поступления глюкозы в организм (Непатентные документы 1 и 2).

Воглибоз (непатентованное название) является лекарственным средством, одобренным для производства и продажи в рамках Japan Pharmaceutical Affairs Act, ст. 14 (Номер разрешения: 21600AMZ00368). Воглибоз снижает повышенный уровень глюкозы после еды путем подавления дисахаридазы, α-глюкозидазы, которая разлагает дисахариды, присутствующие в слизистой кишечника, на моносахариды, и подавления или замедления переваривания и абсорбции углеводов в желудочно-кишечном тракте. Известно, что такое фармакологическое действие эффективно против диабета 2-го типа с замедленным развитием при нарушенной толерантности к глюкозе.

Исходя из имеющихся данных, подавление абсорбции сахаров в тонком кишечнике с помощью ингибитора SGLT1 и снижение, благодаря этому, повышенного уровня сахара в крови после еды считается эффективным средством против диабета 2-го типа с замедленным развитием при нарушенной толерантности к глюкозе.

Подтверждена также экспрессия SGLT1 в кардиомиоцитах. Известно, что обычно в поступлении глюкозы в кардиомиоциты играют роль GLUT1 (переносчик глюкозы тип 1) и GLUT4 (переносчик глюкозы тип 4), а вклад SGLT1 - меньше. Однако экспрессия SGLT1 индуцируется в сердечной мышце у мышей, которым вводят мутированные гены PRKAG2 (гамма 2 субъединица АМФК (АМФ-активируемая протеинкиназа)), который является геном, ответственным за наследственную гипетрофическую кардиомиопатию (миокардоз с накоплением гликогена), или у мышей, проходящих лечение от ишемии миокарда, и сообщалось, что SGLT1 участвует в поглощении глюкозы кардиомиоцитами при этих патологиях. Считается, что глюкоза, усвоенная при участии SGLT1, избыточно накапливается или метаболизируется в кардиомиоцитах и дестабилизирует эти клетки. Для прошлых мышиных моделей сообщалось, что накопление гликогена в сердечной мышце действительно ингибируется при воздействии неселективного ингибитора SGLT, флоризина.

Исходя из имеющихся данных, считается, что ингибитор SGLT1 эффективен против гипертрофической кардиомиопатии и ишемической болезни сердца, благодаря ингибированию избыточного поглощения глюкозы кардиомиоцитами (Непатентные документы 3 и 4).

SGLT1 стабилизируется в раковых клетках рецепторами эпидермального фактора роста, т.е. белками на поверхности многих типов раковых клеток. Известно, что переносчики глюкозы, молочной кислоты, аминокислот и т.д. участвуют в поступлении питательных веществ в раковые клетки, и это особенно касается переноса глюкозы, т.к. SGLT1 и GLUT1 непрерывно поставляют глюкозу в раковые клетки. Когда глюкоза не поступает в течение длительного времени, клетки разрушаются вследствие аутофагии.

Исходя из имеющихся данных, считается, что ингибитор SGLT1 ингибирует поставку глюкозы в раковые клетки и оказывает противораковое действие (Непатентные документы 5 и 6).

Поскольку углеводы из пищи разлагаются до моносахаридов в желудочно-кишечном тракте и абсорбируются в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, многие сахара никогда не попадают в нижние отделы желудочно-кишечного тракта. Однако при введении лекарственных средств, которые замедляют или ингибируют абсорбцию глюкозы, или при поглощении большого количества устойчивых полисахаридов непереваренные сахара попадают в нижние отделы желудочно-кишечного тракта и задерживаются в нижних отделах желудочно-кишечного тракта, вызывая осмотическую диарею.

Ингибитор SGLT1 ингибирует абсорбцию глюкозы и увеличивает количество моносахаридов в нижних отделах желудочно-кишечного тракта. Поэтому считается, что ингибитор SGLT1 будет эффективен против запора.

Диабет вызывается повышенным уровнем глюкозы в крови из-за недостаточного действия инсулина, и постоянный повышенный уровень глюкозы в крови может вызвать диабетические осложнения (например, ретинопатия, нефропатия и нейропатия, которые в целом известны как микроангиопатия; и цереброваскулярная болезнь, ишемическая болезнь сердца и облитерирующий артериосклероз нижних конечностей, которые в целом известны как макроангиопатия). Другие заболевания, связанные с повышенным уровнем глюкозы в крови, включают ожирение.

Диабет делят на диабет 1-го типа и диабет 2-го типа. Считается, что диабет 1-го типа развивается из-за недостаточного действия инсулина, вызванного деструкцией β-клеток поджелудочной железы, секретирующих инсулин, а диабет 2-го развивается вследствие воздействия факторов окружающей среды, таких как переедание, недостаточная физическая активность, ожирение, стресс, старение, в дополнение к ряду генетических факторов, включающих снижение выработки инсулина и инсулинорезистентность. Диагностика диабета подразделяется на три типа, а именно на норму, пограничный тип и диабетический тип, в соответствии с уровнем глюкозы в крови. Когда выявляется любой из следующих пунктов (1) – (4):

(1) уровень глюкозы в крови 126 мг/дл или больше утром натощак,

(2) двухчасовое значение 200 мг/дл или больше в 75 г ОГТТ (оральный глюкозотолерантный тест),

(3) уровень глюкозы в крови 200 мг/дл или больше при замере в случайный момент времени,

(4) 6.5% или больше HbA1cg,

то субъекта относят к диабетическому типу, и у него диагностируют диабет или подозрение на диабет (Непатентный документ 7).

ОГТТ, использующийся в описанном выше пункте (2), является одним из методов диагностики диабета. В целом, когда человеку вводят раствор, содержащий 75 г глюкозы натощак, и через определенное время после приема глюкозы уровень глюкозы в крови составляет 200 мг/дл или больше, то у человека диагностируется диабет (Непатентный документ 7). Таким образом, ОГТТ является инструментом постановки диагноза диабет, и соединение, которое снижает уровень глюкозы в крови у субъектов в тесте ОГТТ с нагрузкой глюкозой, считается эффективным против диабета.

Непатентные документы

[Непатентный документ 1] Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2002; 282(2):G241-8

[Непатентный документ 2] Nature. 1991; 350(6316):354-6

[Непатентный документ 3] J Mol Cell Cardiol. 2010; 49(4):683-92

[Непатентный документ 4] Cardiovasc Res. 2009; 84(1):111-8

[Непатентный документ 5] Cancer Cell. 2008, 13: 385-93

[Непатентный документ 6] Pharmacol Ther. 2009, 121: 29-40

[Непатентный документ 7] Treatment Guide for Diabetes 2016-2017

Краткое описание изобретения

Описано соединение с метиллактамным кольцом, которое обладает SGLT1-ингибирующей активностью и может применяться в качестве лекарственного средства, или его фармацевтически приемлемая соль; фармацевтическая композиция, содержащая его; и его применение в фармацевтике.

После обширных исследований авторы настоящего изобретения обнаружили особое соединение с метиллактамным кольцом, в результате чего было создано настоящее изобретение.

В одном варианте осуществления описано соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль, а также его применение в фармацевтике.

Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль обладают SGLT1-ингибирующей активностью и поэтому могут применяться для лечения и/или предотвращения различных заболеваний или патологических состояний, для которых ожидается улучшение при регулировке активности SGLT1. Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль могут также применяться для лечения и/или предотвращения различных заболеваний или патологических состояний, которые могут быть вызваны повышенным уровнем глюкозы в крови.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 показано, что соединение из Примера 1 (далее в тексте именуется “соединение 1”) значительно снижает уровень глюкозы в крови у SD крыс с нагрузкой глюкозой в ОГТТ, в сравнении с крысами, получавшими только носитель.

На фиг. 2 показано, что из всех протестированных соединений только соединение 1 значительно снижает уровень глюкозы в крови у SD крыс с нагрузкой глюкозой в ОГТТ, в сравнении с крысами, получавшими только носитель.

Описание вариантов осуществления

Настоящее изобретение включает проиллюстрированные ниже варианты осуществления.

Пункт 1. Соединение, имеющее формулу [I]:

или его фармацевтически приемлемая соль.

Пункт 2. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

Пункт 3. Ингибитор SGLT1, содержащий соединение по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемую соль.

Пункт 4. Терапевтическое или профилактическое средство против диабета, содержащее соединение по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемую соль.

Пункт 5. Терапевтическое или профилактическое средство по Пункту 4, где диабет представляет собой диабет 2-го типа.

Пункт 6. Способ ингибирования SGLT1, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемой соли млекопитающим.

Пункт 7. Способ лечения или предотвращения диабета, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемой соли млекопитающим.

Пункт 8. Способ по Пункту 7, где диабет представляет собой диабет 2-го типа.

Пункт 9. Применение соединения по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемой соли для производства ингибитора SGLT1.

Пункт 10. Применение соединения по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемой соли для производства терапевтического или профилактического средства против диабета.

Пункт 11. Применение по Пункту 10, где диабет представляет собой диабет 2-го типа.

Пункт 12. Соединение по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемая соль для применения для ингибирования SGLT1.

Пункт 13. Соединение по Пункту 1 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении или предотвращении диабета.

Пункт 14. Соединение по Пункту 13 или его фармацевтически приемлемая соль, где диабет представляет собой диабет 2-го типа.

Пункт 15. Коммерческая упаковка, содержащая композицию по Пункту 2 и письменные указания, что данная композиция может или должна применяться для лечения и/или предотвращения диабета.

Пункт 16. Набор, содержащий композицию по Пункту 2 и письменные указания, что данная композиция может или должна применяться для лечения и/или предотвращения диабета.

Термин “фармацевтически приемлемая соль” включает любые известные в данной области техники соли, не ассоциирующиеся с избыточной токсичностью. Такая фармацевтически приемлемая соль включает, в частности, соли с неорганическими кислотами, соли с органическими кислотами, соли с неорганическими основаниями и соли с органическими основаниями. Различные формы фармацевтически приемлемых солей хорошо известны в данной области техники и описаны, например, в следующих источниках:

(a) Berge et al., J. Pharm. Sci., 66, p1-19 (1977),

(b) Stahl et al., “Handbook of Pharmaceutical Salt: Properties, Selection, and Use” (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002),

(c) Paulekuhn et al., J. Med. Chem., 50, p6665-6672 (2007).

Соединение, имеющее формулу [I], можно вводить в реакцию с неорганической кислотой, органической кислотой, неорганическим основанием или органическим основанием согласно известным методикам, получая его соответствующую фармацевтически приемлемую соль.

Такая соль с неорганической кислотой включает соль с фтористоводородной кислотой, соляной кислотой, бромистоводородной кислотой, иодистоводородной кислотой, азотной кислотой, фосфорной кислотой и серной кислотой. Такая соль предпочтительно включает соль с соляной кислотой, азотной кислотой, серной кислотой, фосфорной кислотой и бромистоводородной кислотой.

Такая соль с органической кислотой включает соль с уксусной кислотой, адипиновой кислотой, альгиновой кислотой, 4-аминосалициловой кислотой, дегидрометиленлимонной кислотой, бензойной кислотой, бензолсульфокислотой, эдетатом кальция, камфорной кислотой, камфор-10-сульфокислотой, угольной кислотой, лимонной кислотой, эдетовой кислотой, этан-1.2-дисульфокислотой, додецилсерной кислотой, этансульфокислотой, фумаровой кислотой, глюкогептоновой кислотой, глюконовой кислотой, глюкуроновой кислотой, глюкогептоновой кислотой, гликоллиларсаниловой кислотой, гексилрезорциновой кислотой, гидроксинафтойной кислотой, 2-гидрокси-1-этансульфокислотой, молочной кислотой, лактобионовой кислотой, яблочной кислотой, малеиновой кислотой, миндальной кислотой, метансульфокислотой, метилсерной кислотой, метилазотной кислотой, метиленбис(салициловой кислотой), галактаровой кислотой, нафталин-2-сульфокислотой, 2-нафтоевой кислотой, 1,5-нафталиндисульфокислотой, олеиновой кислотой, щавелевой кислотой, памоевой кислотой, пантотеновой кислотой, пектиновой кислотой, пикриновой кислотой, пропионовой кислотой, полигалактуроновой кислотой, салициловой кислотой, стеариновой кислотой, янтарной кислотой, галлодубильной кислотой, винной кислотой, теоклиновой кислотой, тиоциановой кислотой, трифторуксусной кислотой, п-толуолсульфокислотой, ундекановой кислотой, аспартамовой кислотой и глутаминовой кислотой. Такая соль предпочтительно представляет собой соль с щавелевой кислотой, малеиновой кислотой, лимонной кислотой, фумаровой кислотой, молочной кислотой, яблочной кислотой, янтарной кислотой, винной кислотой, уксусной кислотой, трифторуксусной кислотой, бензойной кислотой, глюкуроновой кислотой, олеиновой кислотой, памоевой кислотой, метансульфокислотой, бензолсульфокислотой, п-толуолсульфокислотой и 2-гидрокси-1-этансульфокислотой.

Такая соль с неорганическим основанием включает соль лития, натрия, калия, магния, кальция, бария, алюминия, цинка, висмута и аммония. Такая соль предпочтительно включает соль натрия, калия, кальция, магния и цинка.

Такая соль с органическим основанием включает соль с ареколином, бетаином, холином, клемизолом, этилендиамином, N-метилглюкамином, N-бензилфенетиламином, трис(гидроксиметил)метиламином, аргинином и лизином. Такая соль предпочтительно включает соль с трис(гидроксиметил)метиламином, N-метилглюкамином и лизином.

Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль могут существовать в форме сольвата. Термин “сольват” означает соединение, в котором молекула растворителя скоординирована с соединением, имеющим формулу [I], или его фармацевтически приемлемой солью, и включает гидрат. Сольват предпочтительно представляет собой фармацевтически приемлемый сольват; и включает, например, гидрат, этанолят и диметилсульфоксидный сольват соединения, имеющего формулу [I], или его фармацевтически приемлемой соли. Такой сольват в частности включает полугидрат, моногидрат, дигидрат и моноэтанолят соединения, имеющего формулу [I]; и моногидрат натриевой соли соединения, имеющего формулу [I], и 2/3 этанолят его дигидрохлоридной соли. Эти сольваты можно получить любыми известными способами.

Соединение, имеющее формулу [I], может быть помечено изотопом, таким как ²H, ³H, ¹⁴C и ³⁵S.

Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль предпочтительно представляют собой по существу очищенные соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемую соль, и более предпочтительно – соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемую соль, имеющие чистоту 80% или выше.

Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль имеют SGLT1-ингибирующую активность, и поэтому могут применяться для лечения и/или предотвращения различных заболеваний или патологических состояний, для которых ожидается улучшение при регулировании активности SGLT1, например диабета (например, диабет 1-го типа и диабет 2-го типа), ожирения, осложнений диабета (например, ретинопатия, нефропатия и нейропатия, которые в целом известны как микроангиопатия; и цереброваскулярная болезнь, ишемическая болезнь сердца и облитерирующий артериосклероз нижних конечностей, которые в целом известны как макроангиопатия), гипертрофической кардиомиопатии, ишемической болезни сердца, рака и запора.

Термин “ингибирование SGLT1” означает, что функция SGLT1 ингибирована до исчезновения или снижения ее активности; и, например, он означает, что функция SGLT1 ингибирована по результатам описанного далее Примера Теста 1. Термин “ингибирование SGLT1” предпочтительно означает “ингибирование человеческой SGLT1”. Ингибирование функции или исчезновение или снижение активности предпочтительно проводится при клиническом показании у людей.

Термин “ингибитор SGLT1” означает любое вещество, которое ингибирует SGLT1, и включает в себя низкомолекулярные соединения, нуклеиновые кислоты, полипептиды, белки, антитела и вакцины. Термин “ингибитор SGLT1” предпочтительно означает “ингибитор человеческой SGLT1”.

Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль могут быть также полезны для лечения и/или предотвращения различных заболеваний или патологических состояний, которые могут быть вызваны повышенным уровнем глюкозы в крови.

Термин “различные заболевания или патологические состояния, которые могут быть вызваны повышенным уровнем глюкозы в крови” включает, например, диабет (например, диабет 1-го типа и диабет 2-го типа), ожирение и осложнения диабета (например, ретинопатия, нефропатия и нейропатия, которые в целом известны как микроангиопатия; и цереброваскулярная болезнь, ишемическая болезнь сердца и облитерирующий артериосклероз нижних конечностей, которые в целом известны как макроангиопатия).

Термин “лечение” включает облегчение состояния, предотвращение ухудшения, поддержание ремиссии, предотвращение обострения и предотвращение рецидива.

Термин “предотвращение” или “профилактика” включает замедление появления патологических состояний. Например, “предотвращение диабета” включает замедление появления диабета 2-го типа при нарушении толерантности к глюкозе.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получить из терапевтически эффективного количества соединения, имеющего формулу [I], или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одного или более фармацевтически приемлемых носителей, необязательно с последующим перемешиванием, согласно известным методикам в области медицинских препаратов. Количество соединения, имеющего формулу [I], или его фармацевтически приемлемой соли, содержащееся в фармацевтической композиции, варьируется в зависимости от таких факторов, как вид дозированной формы и размер дозировки, и находится в диапазоне, например, от 0,1 до 100 мас.% от общего количества композиции.

Дозированная форма, которая может быть составлена на основе соединения, имеющего формулу [I], или его фармацевтически приемлемой соли, включает пероральные препараты, такие как таблетки, капсулы, гранулы, порошки, литые таблетки, сиропы, эмульсии и суспензии; и парентеральные препараты, такие как препараты для наружного применения, суппозитории, инъекции, глазные капли, назальные препараты и легочные препараты.

Термин “фармацевтически приемлемый носитель” включает различные органические или неорганические вещества, которые обычно применяются в качестве компонента препарата. Такие вещества включают, например, вспомогательные вещества, разрыхлители, связующие вещества, улучшители текучести, и лубриканты для твердых препаратов; растворители, солюбилизаторы, суспендирующие агенты, агенты для поддержания тоничности, буферные вещества, и успокаивающие вещества для жидких препаратов; а также основы, эмульгаторы, увлажняющие агенты, стабилизаторы, диспергаторы, пластификаторы, регуляторы рН, стимуляторы абсорбции, загеливатели, антисептические агенты, наполнители, солюбилизаторы, и суспендирующие агенты для полутвердых препаратов. При необходимости можно дополнительно добавлять добавки, такие как консерванты, антиоксиданты, красители и подсластители.

Такое “вспомогательное вещество” включает, например, лактозу, белый мягкий сахар, D-маннит, D-сорбит, кукурузный крахмал, декстрин, микрокристаллическую целлюлозу, кристаллическую целлюлозу, кармеллозу, кармеллозу кальция, натрия карбоксиметилкрахмал, низкозамещенную гидроксипропилцеллюлозу и аравийскую камедь.

Такой “разрыхлитель” включает, например, кармеллозу, кальция кармеллозу, натрия кармеллозу, натрия карбоксиметилкрахмал, натрия кроскармеллозу, кросповидон, низкозамещенную гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и кристаллическую целлюлозу.

Такое “связующее вещество” включает, например, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, повидон, кристаллическую целлюлозу, белый мягкий сахар, декстрин, крахмал, желатин, натрия кармеллозу и аравийскую камедь.

Такой “улучшитель текучести” включает, например, легкий безводный силикагель и стеарат магния.

Такой “лубрикант” включает, например, стеарат магния, стеарат кальция и тальк.

Такой “растворитель” включает, например, очищенную воду, этанол, пропиленгликоль, макрогол, сезамовое масло, кукурузное масло и оливковое масло.

Такой “солюбилизатор” включает, например, пропиленгликоль, D-маннит, бензилбензоат, этанол, триэтаноламин, карбонат натрия и цитрат натрия.

Такое “суспендирующий агент” включает, например, бензалкония хлорид, кармеллозу, гидроксипропилцеллюлозу, пропиленгликоль, повидон, метилцеллюлозу и моностеарат глицерина.

Такой “агент для поддержания тоничности” включает, например, глюкозу, D-сорбит, натрия хлорид и D-маннит.

Такое “буферное вещество” включает, например, динатрия гидрофосфат, натрия ацетат, карбонат натрия и цитрат натрия.

Такое “успокаивающее вещество” включает, например, бензиловый спирт.

Такая “основа” включает, например, воду, масла животного или растительного происхождения, такие как оливковое масло, кукурузное масло, арахисовое масло, сезамовое масло и касторовое масло, низшие спирты, такие как этанол, пропанол, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль и фенол, высшие жирные кислоты и их эфиры, воска, высшие спирты, многоатомные спирты, углеводороды, такие как белый вазелин, жидкий парафин и парафин, гидрофильный вазелин, очищенный ланолин, абсорбирующаяся мазь, гидратированный ланолин, гидрофильная мазь, крахмал, пуллулан, аравийская камедь, трагакантовая камедь, желатин, декстран, производные целлюлозы, такие как метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза и гидроксипропилцеллюлоза, синтетические полимеры, такие как карбоксивиниловый полимер, полиакрилат натрия, поливиниловый спирт и поливинилпирролидон, пропиленгликоль, макрогол, такой как Макрогол от 200 до 600, и комбинация двух или более из перечисленных.

Такой “консервант” включает, например, этил парагидроксибензоат, хлорбутанол, бензиловый спирт, дегидроацетат натрия и сорбиновую кислоту.

Такой “антиоксидант” включает, например, сульфит натрия и аскорбиновую кислоту.

Такой “краситель” включает, например, пищевые красители (например, Food Red No. 2 или No. 3, Food Yellow No. 4 или No. 5) и β-каротин.

Такой “подсластитель” включает, например, сахарин натрия, дикалия глицирризинат и аспартам.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально (например, наружно, ректально, внутривенно, внутримышечно и подкожно) людям, а также млекопитающим, отличным от человека, таким как мыши, крысы, хомяки, морские свинки, кролики, кошки, собаки, свиньи, коровы, лошади, овцы и обезьяны. Дозировка варьируется в зависимости от субъекта, которому осуществляется введение, от заболеваний, патологических состояний, дозированных форм и способа введения. Например, суточная доза при пероральном введении взрослому пациенту обычно находится в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 1 г действующего вещества, т.е. соединения, имеющего формулу [I]. Такую дневную дозу можно вводить за один раз или в несколько приемов.

Могут применяться также набор, такой как набор для введения, лечения и/или профилактики, упаковка, такая как упакованные изделия, и комплекс и/или коробка с лекарственным средством, которые включают фармацевтическую композицию, содержащую соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемую соль в качестве действующего вещества или активного агента, и письменный материал о композиции, указывающий, что данная композиция может или должна быть использована для лечения и/или профилактики. Такой набор, упаковка и комплекс с лекарственным средством может содержать один или больше контейнеров, заполненных фармацевтической композицией или одним или больше действующими веществами и другими лекарственными средствами (или ингредиентами), применяющимися в композиции. Примеры такого набора, упаковки и комплекса с лекарственным средством включают коммерческие наборы, коммерческие упаковки и коммерческие медицинские комплексы для соответствующего применения в лечении и/или предотвращении определенных заболеваний. Письменный материал, содержащийся в таком наборе, упаковке или медицинском комплексе, включает предупреждение или вкладыш в форме, установленной правительственной организацией, регулирующей производство, применение или продажу фармацевтических или биологических продуктов, где указывается разрешение государственной организации на производство, применение или продажу продуктов для введения людям. Такой набор, упаковка или медицинский комплекс могут включать упакованные продукты, а также приспособления для соответствующих операций введения, сконструированные таким образом, чтобы обеспечить наиболее предпочтительное медицинское лечение и/или профилактику, включая лечение и/или профилактику определенных заболеваний.

Способ получения соединения, имеющего формулу [I], или его фармацевтически приемлемой соли проиллюстрирован ниже. Однако способ получения соединения, имеющего формулу [I], или его фармацевтически приемлемой соли не ограничивается только описанным ниже.

Каждое соединение, полученное на каждой стадии, может быть при необходимости выделено и/или очищено согласно любому из известных способов, таких как перегонка, перекристаллизация и колоночная хроматография, или, опционально, последующую стадию можно проводить без выделения и/или очистки.

В настоящем документе термин “комнатная температура” означает температуру, которая не находится под контролем и включает, в одном варианте осуществления, температуру от 1°C до 40°C.

Способ получения A

Соединение, имеющее формулу [I], можно получить согласно Способу получения A1 или A2, как показано ниже на схеме.

Способ получения A1

(Стадия A1-1)

Соединение, имеющее формулу [I], можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [1], или его соли с соединением, имеющим формулу [2], или его солью в присутствии конденсирующего агента и добавки в растворителе.

Применяющийся в этом случае конденсирующий агент включает, например, дициклогексилкарбодиимид (DCC), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид (WSC•HCl), диизопропилкарбодиимид, 1,1’-карбонилдиимидазол (CDI), O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N’,N’-тетраметилурония гексафторфосфат (HATU), {{[(1-циано-2-этокси-2-оксоэтилиден)амино]окси}-4-морфолинометилен}диметиламмония гексафторфосфат (COMU), 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния хлорид н-гидрат (DMT-MM), (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфат (PyBOP), дифенилфосфорил азид и ангидрид пропилфосфоновой кислоты.

Применяющаяся в этом случае добавка включает, например, 1-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt), N-гидроксисукцинимид (HOSu), 4-диметиламинопиридин и 1-метилимидазол.

Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, галогенированные углеводородные растворители, такие как хлороформ; простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран; полярные растворители, такие как пиридин, ацетонитрил, N,N-диметилформамид; и смесь любых из перечисленных растворителей.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 0°C до 100°C.

Когда применяется соль соединения, имеющего формулу [1], реакцию можно проводить в присутствии основания. Такое основание включает, например, органические основания, такие как триэтиламин, и соли щелочных металлов, такие как карбонат натрия.

Соединение, имеющее формулу [I], можно также получить путем превращения соединения, имеющего формулу [2], с помощью галогенирующего агента в соответствующий галогенангидрид карбоновой кислоты в растворителе, и последующей реакции с соединением, имеющим формулу [1], в присутствии основания.

Применяющийся в этой реакции галогенирующий агент, включает, например, оксалилхлорид и тионилхлорид. Предпочтительным галогенирующим агентом является оксалилхлорид.

Основание, применяющееся в этой реакции, включает, например, органические основания, такие как пиридин, триэтиламин и N,N-диизопропилэтиламин; и соли щелочных металлов, такие как гидрокарбонат натрия и карбонат натрия. Предпочтительным основанием является пиридин.

Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, галогенированные углеводородные растворители, такие как хлороформ; простоэфирные растворители, такие как циклопентилметиловый эфир и тетрагидрофуран; углеводородные растворители, такие как толуол; и смесь любых из перечисленных растворителей с водой. Предпочтительным растворителем является хлороформ.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 0°C до 80°C, предпочтительно от 0°C до 60°C.

При получении галогенангидрида карбоновой кислоты можно добавлять N,N-диметилформамид в качестве добавки.

Способ получения A2

На этой схеме P^N1 представляет собой защитную группу для аминогруппы. P^N1 предпочтительно представляет собой 2,4-диметоксибензильную группу.

Стадия A2-1

Соединение, имеющее формулу [1], или его соль и соединение, имеющее формулу [3], или его соль можно вводить в реакцию согласно Способу получения A1 Стадия A1-1, получая соединение, имеющее формулу [4].

Стадия A2-2

Соединение, имеющее формулу [I], или его соль можно получить, удаляя P^N1 из соединения, имеющего формулу [4], в реакции снятия защиты. Реакцию снятия защиты можно проводить в подходящих условиях, зависящих от P^N1.

Например, когда P^N1 представляет собой 2,4-диметоксибензил, соединение, имеющее формулу [I], или его соль можно получить реакцией с кислотой в присутствии добавки в растворителе.

Применяющаяся в этом случае кислота включает, например, метансульфокислоту, п-толуолсульфокислоту и трифторуксусную кислоту. Предпочтительной кислотой является трифторуксусная кислота.

Применяющаяся в этом случае добавка включает, например, анизол и триэтилсилан. Предпочтительной добавкой является анизол.

Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, галогенированные углеводородные растворители, такие как дихлорметан, углеводородные растворители, такие как толуол, вода и смесь любых из перечисленных растворителей. Органическая кислота, такая как трифторуксусная кислота, также может применяться в качестве растворителя.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 0°C до 130°C, предпочтительно от 25°C до 80°C.

Когда на этой стадии используется кислота, получают соединение, имеющее формулу [5]:

или его соль. Соединение, имеющее формулу [I], или его соль можно получить превращением гидроксильной группы в соединении, имеющем формулу [5], или в его соли в трет-бутокси-группу согласно любому из известных способов.

Например, соединение, имеющее формулу [I], или его соль можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [5], или его соли с ди-трет-бутилдикарбонатом в присутствии перхлорат магния.

Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, галогенированные углеводородные растворители, такие как хлороформ, и простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран. Предпочтительным растворителем является хлороформ.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 0°C до 100°C, предпочтительно от комнатной температуры до 70°C.

Способ получения B

Соединение, имеющее формулу [1], можно получить согласно Способу получения B1 как показано ниже на схеме.

Способ получения B1

На этой схеме L¹ представляет собой уходящую группу. L¹ предпочтительно представляет собой хлор, бром или иод. P^N2 каждый независимо представляет собой защитную группу для амина. Две группы P^N2 предпочтительно объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 2,5-диметилпиррола.

Стадия B1-1

Соединение, имеющее формулу [7], или его соль можно получить введением P^N2 в аминогруппу в соединении, имеющем формулу [6], или в его соли согласно любому из известных способов. Введение защитной группы можно проводить в подходящих условиях, зависящих от P^N2. Например, когда две группы P^N2 объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 2,5-диметилпиррола, соединение, имеющее формулу [7], можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [6], с 2,5-гександионом в растворителе в кислых условиях.

Применяющаяся в этом случае кислота включает, например, концентрированную соляную кислоту, концентрированную серную кислоту, амидосерную кислоту, п-толуолсульфкислоту и уксусную кислоту. Предпочтительной кислотой является уксусная кислота.

Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, спиртовые растворители, такие как этанол, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, углеводородные растворители, такие как толуол, полярные растворители, такие как N,N-диметилформамид, галогенированные углеводородные растворители, такие как дихлорэтан, и смесь любых из перечисленных растворителей. Органическая кислота, такая как уксусная кислота, также может применяться в качестве растворителя.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от комнатной температуры до 150°C, предпочтительно от 80°C до 140°C.

Стадия B1-2

Соединение, имеющее формулу [8], можно получить, например, способом, включающим:

Стадия (a): реакция соединения, имеющего формулу [7], с дибромдифторметаном в присутствии основания и катализатора в растворителе, и

Стадия (b): фторирование полученного продукта в присутствии тетраметиламмония фторида или тетрафторбората серебра (I) в растворителе.

Основание, применяющееся на Стадии (a), включает, например, гидрид натрия и трет-бутоксид калия. Предпочтительным основанием является гидрид натрия.

Катализатор, применяющийся на Стадии (a), включает, например, тетрабутиламмония бромид и цинк. Предпочтительным катализатором является тетрабутиламмония бромид.

Растворитель, применяющийся на Стадии (a), включает, например, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, и полярные растворители, такие как N,N-диметилформамид. Предпочтительным растворителем является N,N-диметилформамид.

Температура реакции на Стадии (a) находится в диапазоне, например, от 0°C до 40°C, предпочтительно от 0°C до комнатной температуры.

Когда на Стадии (b) применяется тетраметиламмония фторид, использующийся в таком случае растворитель включает, например, простоэфирные растворители, такие как 1,4-диоксан, и полярные растворители, такие как сульфолан. Предпочтительным растворителем является сульфолан. Когда на Стадии (b) применяется тетрафторборат серебра(I), использующийся в таком случае растворитель включает, например, галогенированные углеводородные растворители, такие как дихлорметан. Предпочтительным растворителем является дихлорметан.

Когда на Стадии (b) применяется тетраметиламмония фторид, температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 80°C до 180°C, предпочтительно от 100°C до 140°C. Когда на Стадии (b) применяется тетрафторборат серебра (I), температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от -78°C до 50°C, предпочтительно от -78°C до комнатной температуры.

Стадия B1-3

Соединение, имеющее формулу [9], можно получить введением L¹ в соединение, имеющее формулу [8], в присутствии основания в растворителе. Например, когда L¹ представляет собой иод, соединение, имеющее формулу [9], можно получить иодированием соединения, имеющего формулу [8], в присутствии основания в растворителе.

Применяющееся в данном случае основание включает, например, н-бутиллитий, диизопропиламид лития, гексаметилдисилазид лития и тетраметилпиперидид лития. Предпочтительным основанием является н-бутиллитий.

Применяющийся в этом случае иодирующий агент включает, например, иод, монохлорид иода, N-иодсукцинимид и 1-хлор-2-иодэтан. Предпочтительным иодирующим агентом является иод.

Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, углеводородные растворители, такие как толуол, и смесь любых из перечисленных растворителей. Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от -100°C до 40°C, предпочтительно от -78°C до 20°C.

Стадия B1-4

Соединение, имеющее формулу [10], или его соль можно получить удалением P^N2 из соединения, имеющего формулу [9], в реакции снятия защиты. Реакцию снятия защиты можно проводить в подходящих условиях, зависящих от P^N2. Например, когда две P^N2 объединены с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 2,5-диметилпиррола, соединение, имеющее формулу [10], или его соль можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [9], с гидроксиламином в растворителе.

Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, спиртовые растворители, такие как этанол, вода, и смесь любых из перечисленных растворителей. Предпочтительным растворителем является смесь спиртовых растворителей с водой.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 40°C до 150°C, предпочтительно от 80°C до 130°C.

Гидрохлорид гидроксиламина можно применять вместо гидроксиламина. В этом случае, реакцию можно проводить в присутствии основания. Применяющееся в данном случае основание включает, например, органические основания, такие как триэтиламин, и соли щелочных металлов, такие как карбонат натрия. Предпочтительным основанием является триэтиламин.

Стадия B1-5

Соединение, имеющее формулу [1], или его соль можно получить реакцией Сузуки между соединением, имеющим формулу [10], или его солью и соединением, имеющим формулу [11]. Например, соединение, имеющее формулу [1], или его соль можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [10], или его соли с соединением, имеющим формулу [11], в присутствии основания и палладиевого катализатора в растворителе.

Палладиевый катализатор, применяющийся в этой реакции, включает, например, тетракис(трифенилфосфин)палладий, аддукт [1,1’-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II)-дихлорметан, [1,1’-бис(ди-трет-бутилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II) и смесь ацетата палладия(II) и трициклогексилфосфина, 2-дициклогексилфосфино-2’,6’-диметоксибифенила или 2-дициклогексилфосфино-2’,4’,6’-триизопропилбифенила. Предпочтительным палладиевым катализатором является аддукт [1,1’-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II)-дихлорметан.

Основание, применяющееся в этой реакции, включает, например, трикалия фосфат, карбонат цезия, карбонат натрия, натрия гидрокарбонат, карбонат калия и триэтиламин. Предпочтительным основанием является трикалия фосфат, карбонат цезия или карбонат натрия.

Растворитель в данном случае включает, например, простоэфирные растворители, такие как 1,4-диоксан, тетрагидрофуран, диэтиловый эфир и 1,2-диметоксиэтан; спиртовые растворители, такие как метанол, этанол, 1-пропанол и 2-пропанол; углеводородные растворители, такие как толуол, н-гексан и ксилол; полярные растворители, такие как N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид и ацетонитрил; и смесь любых из перечисленных растворителей с водой. Предпочтительным растворителем является 1,2-диметоксиэтан, толуол, диметилсульфоксид или смесь любых из перечисленных растворителей с водой.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 20°C до 150°C, предпочтительно от 80°C до 130°C.

Соединение, имеющее формулу [11], можно получить согласно любому из известных способов. Соответствующий эфир бороновой кислоты можно применять вместо соединения, имеющего формулу [11], в реакции на стадии B1-5. Например, такой эфир бороновой кислоты можно получить согласно Способу получения B2, как показано ниже на схеме.

Способ получения B2

На этой схеме R¹ представляет собой фтор или гидроксильную группу. L² представляет собой уходящую группу. L² предпочтительно представляет собой хлор, бром, иод, п-толуолсульфонилокси-, метансульфонилокси- или трифторметансульфонилокси-группу. B(OR²)₂ представляет собой эфир бороновой кислоты. R² каждый независимо представляет собой, например, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил или трет-бутил, или, в альтернативном варианте, OR² могут быть объединены с атомом бора, к которому они присоединены, с образованием циклического эфира бороновой кислоты. B(OR²)₂ предпочтительно представляет собой пинаколовый эфир бороновой кислоты.

Стадия B2-1

Соединение, имеющее формулу [13], можно получить превращением R¹ в трет-бутокси-группу в соединении, имеющем формулу [12]. Реакцию можно проводить согласно любому из известных способов.

Когда R¹ представляет собой фтор, соединение, имеющее формулу [13], можно получить, например, реакцией соединения, имеющего формулу [12], с трет-бутоксидом натрия или трет-бутоксидом калия в растворителе. Применяющийся в данном случае растворитель включает, например, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран; и полярные растворители, такие как N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Предпочтительным растворителем является N,N-диметилформамид. Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 0°C до 100°C, предпочтительно от комнатной температуры до 85°C.

Когда R¹ представляет собой гидроксильную группу, соединение, имеющее формулу [13], можно получить, например, способом получения соединения, имеющего формулу [I], или его соли из соединения, имеющего формулу [5], или его соли, описанным в Способе получения A2 Стадия A2-2.

Стадия B2-2

Соединение, имеющее формулу [14], можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [13], с борсодержащим соединением в присутствии палладиевого катализатора, фосфорорганического соединения и основания в растворителе.

Палладиевый катализатор в данном случае включает, например, ацетат палладия(II), хлорид палладия(II) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0).

Фосфорорганическое соединение в этом случае включает, например, трифенилфосфин, трициклогексилфосфин, 1,1’-бис(дифенилфосфино)ферроцен, 2-дициклогексилфосфино-2’,6’-диметоксибифенил, 2-дициклогексилфосфино-2’,4’,6’-триизопропилбифенил и 2-дициклогексилфосфино-2’-(N,N-диметиламино)бифенил.

Вместо палладиевого катализатора и фосфорорганического соединения можно применять тетракис(трифенилфосфин)палладий, аддукт [1,1’-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II)-дихлорметан или [1,1’-бис(ди-трет-бутилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II).

Основание в этом случае включает, например, ацетат калия, карбонат натрия, карбонат цезия и карбонат калия. Предпочтительным основанием является ацетат калия.

Борсодержащее соединение в этом случае включает, например, бис(пинаколато)диборон.

Растворитель в данном случае включает, например, простоэфирные растворители, такие как 1,4-диоксан, тетрагидрофуран и 1,2-диметоксиэтан; углеводородные растворители, такие как толуол; и полярные растворители, такие как N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Предпочтительным растворителем является диметилсульфоксид.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от комнатной температуры до 150°C, предпочтительно от 70°C до 110°C.

Способ получения C

Соединение, имеющее формулу [2], или его соль и соединение, имеющее формулу [3], или его соль можно получить согласно Способу получения C1, как показано ниже на схеме.

Способ получения C1

На этой схеме P^C1 и P^C2 каждый независимо представляют собой защитную группу для карбокси-группы. Предпочтительно P^C1 и P^C2 каждый независимо представляют собой метил, этил, трет-бутил или бензил. R³ каждый независимо представляет собой метокси или этокси. L³ представляет собой уходящую группу. L³ предпочтительно представляет собой бром или хлор. Остальные символы имеют те же значения, как указано выше.

Стадия C1-1

Соединение, имеющее формулу [17], можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [15], с соединением, имеющим формулу [16], в присутствии основания в растворителе.

Основание, применяющееся в этой реакции, включает, например, трет-бутоксид калия, натрия метоксид, натрия этоксид, лития диизопропиламид, калия гексаметилдисилазан, карбонат калия, карбонат цезия и гидрид натрия. Предпочтительным основанием является трет-бутоксид калия.

Растворитель в данном случае включает, например, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран; спиртовые растворители, такие как метанол и этанол; полярные растворители, такие как N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от -78°C до 100°C, предпочтительно от 0°C до 70°C.

Стадия C1-2

Соединение, имеющее формулу [18], можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [17], с формальдегидом (предпочтительно, раствором формальдегида) в присутствии основания в растворителе.

Основание, применяющееся в этой реакции, включает, например, трет-бутоксид калия, натрия метоксид, натрия этоксид, лития диизопропиламид, калия гексаметилдисилазан, карбонат калия, карбонат цезия и гидрид натрия. Предпочтительным основанием является карбонат калия.

Растворитель в данном случае включает, например, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран; спиртовые растворители, такие как метанол и этанол; и полярные растворители, такие как N,N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от -78°C до 100°C, предпочтительно от 0°C до 70°C.

Стадия C1-3

Соединение, имеющее формулу [20], можно получить реакцией соединения, имеющего формулу [18], с соединением, имеющим формулу [19], в растворителе.

Растворитель в данном случае включает, например, углеводородные растворители, такие как толуол; спиртовые растворители, такие как метанол и этанол; и смесь любых из перечисленных растворителей. Предпочтительным растворителем является толуол.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 20°C до 150°C, предпочтительно от 80°C до 130°C.

Стадия C1-4

Соединение, имеющее формулу [21], или его соль можно получить удалением P^C1 из соединения, имеющего формулу [20], в реакции снятия защиты. Реакцию снятия защиты можно проводить в подходящих условиях, зависящих от P^C1. Например, когда P^C1 представляет собой этил, соединение, имеющее формулу [21], или его соль можно получить гидролизом соединения, имеющего формулу [20], в присутствии основания в растворителе.

Основание, применяющееся в этой реакции, включает, например, лития гидроксид, натрия гидроксид, калия гидроксид, натрия этоксид. Предпочтительным основанием является натрия этоксид.

Растворитель в данном случае включает, например, спиртовые растворители, такие как этанол, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, воду и смесь любых из перечисленных растворителей. Предпочтительным растворителем является смесь этанола и воды.

Температура реакции в таком случае находится в диапазоне, например, от 0°C до 100°C, предпочтительно от 0°C до 40°C.

Стадия C1-5

Соединение, имеющее формулу [3], или его соль можно получить путем выделения из соединения, имеющего формулу [21], или его соли. Выделение соединения, имеющего формулу [3], или его соли можно проводить в условиях, подходящих для разделения согласно хорошо известным в данной области методам. Например, соединение, имеющее формулу [3], или его соль можно получить путем выделения его диастереомерной соли с основным оптически активным реагентом, с последующей обработкой соли кислотой.

Основный оптически активный реагент в этом случае включает, например, (1R,2R)-(-)-2-амино-1-(4-нитрофенил)-1,3-пропандиол.

Растворитель, применяющийся при получении диастереомерной соли, включает, например, спиртовые растворители, такие как 2-пропанол, простоэфирные растворители, такие как 1,2-диметоксиэтан, полярные растворители, такие как ацетонитрил, и смесь любых из перечисленных растворителей с водой. Предпочтительным растворителем является ацетонитрил, 1,2-диметоксиэтан или смесь любых из перечисленных растворителей с водой.

Оптическую чистоту диастереомерной соли можно повысить посредством перекристаллизации. Растворитель, применяющийся при перекристаллизации, включает, например, простоэфирные растворители, такие как 1,2-диметоксиэтан, полярные растворители, такие как ацетонитрил, и смесь любых из перечисленных растворителей с водой. Предпочтительным растворителем является смесь ацетонитрила и воды.

Кислота, применяющаяся для обработки диастереомерной соли, включает, например, соляную кислоту, серную кислоту и гидросульфат калия. Предпочтительной кислотой является соляная кислота.

Растворитель, применяющийся при обработке диастереомерной соли, включает, например, сложноэфирные растворители, такие как этилацетат, простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, воду и смесь любых из перечисленных растворителей. Предпочтительным растворителем является смесь этилацетата и воды.

Стадия C1-6

Соединение, имеющее формулу [2], или его соль можно получить удалением P^N1 из соединения, имеющего формулу [3], или его соли в реакции снятия защиты. Реакцию снятия защиты можно проводить в подходящих условиях, зависящих от P^N1. Например, когда P^N1 представляет собой 2,4-диметоксибензил, соединение, имеющее формулу [2], или его соль можно получить согласно Способу получения A2 Стадия A2-2.

Примеры

Настоящее изобретение более подробно проиллюстрировано с привлечением Синтезов, Примеров, Сравнительных примеров, Примеров тестов и Примеров препаратов, которые приведены ниже, но не ограничивают объем настоящего изобретения.

Использующиеся в настоящем тексте аббревиатуры имеют следующие значения:

ДМФА: N,N-диметилформамид

ДМСО: диметилсульфоксид

ТГФ: тетрагидрофуран

ЦПМЭ: циклопентилметиловый эфир

¹H-ЯМР спектры записывали в CDCl₃ или ДМСО-d₆ с тетраметилсиланом в качестве внутреннего стандарта, и все значения δ приведены в м.д. Спектры регистрировали на ЯМР-спектрометре с рабочей частотой 400 МГц, если не указано иное.

Применяющиеся в Примерах символы имеют следующие значения:

с: синглет

д: дублет

т: триплет

кв: квартет

дд: дублет дублетов

ддд: дублет дублетов

ушир. с: уширенный синглет

м: мультиплет

J: константа спин-спинового взаимодействия.

Синтез 1. Получение 2-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана

Стадия 1. Получение 1-бром-3-(трет-бутокси)-5-фторбензола

К 3-бром-5-фторфенолу (500 мг) последовательно добавляли ди-трет-бутил дикарбонат (1,14 г) и перхлорат магния (58 мг) при комнатной температуре в токе аргона. Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 1 часа 20 минут. В реакционную смесь добавляли ди-трет-бутил дикарбонат при 50°C. Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 1 часа и дополнительно перемешивали при 65°C в течение 1 часа, и затем охлаждали до комнатной температуры. В реакционную смесь добавляли при комнатной температуре ди-трет-бутил дикарбонат. Реакционную смесь перемешивали при 65°C в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли смесь н-гексан/этилацетат (1/1). Реакционную смесь последовательно промывали 3н. раствором соляной кислоты, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = от 1/0 до 20/1), получая указанное в заголовке соединение (437 мг) с выходом 68%.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,35 (с, 9H), 6,62-6,66 (м, 1H), 6,92-6,98 (м, 2H).

Стадия 2. Получение 2-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана

В раствор 1-бром-3-(трет-бутокси)-5-фторбензола (437 мг), полученного на Стадии 1, в ДМСО (5 мл) последовательно добавляли ацетат калия (434 мг), бис(пинаколато)диборон (898 мг) и аддукт [1,1’-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II)-дихлорметан (144 мг) в атмосфере аргона при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 2,5 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. В реакционную смесь последовательно добавляли смесь н-гексан/этилацетат (1/1) и воду. Смесь перемешивали при комнатной температуре 50 минут и оставляли на ночь. В смесь последовательно добавляли смесь н-гексан/этилацетат (1/1), воду, силикагель и целит. Реакционную смесь перемешивали, затем нерастворенные частицы отфильтровывали и промывали смесью н-гексан/этилацетат (1/1). Фильтрат экстрагировали смесью н-гексан/этилацетат (1/1). Органический слой последовательно промывали водой два раза и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток очищали методом тонкослойной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = 10/1), получая указанное в заголовке соединение (443 мг) с выходом 85%.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,33 (с, 12H), 1,36 (с, 9H), 6,77-6,82 (м, 1H), 7,18-7,23 (м, 2H).

Синтез 2. Получение (3R,4R)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты

Стадия 1. Получение диэтил 2-метил-3-метиленсукцината

К трет-бутоксиду калия (180 г) добавляли ТГФ (2,55 л) при комнатной температуре в токе азота. В полученную смесь по каплям добавляли триэтил фосфоноацетат (314 г) при охлаждении льдом в течение 13 минут. Использовавшуюся капельную воронку промывали тетрагидрофураном (511 мл), и промывные растворы добавляли в реакционную смесь. Реакционную смесь перемешивали 2 часа 9 минут при охлаждении льдом. В смесь добавляли по каплям этил 2-бромпропионат (247 г) в течение 20 минут при охлаждении льдом. Использовавшуюся капельную воронку промывали тетрагидрофураном (79 мл), и промывные растворы добавляли в реакционную смесь. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 22 часов 45 минут. В реакционную смесь добавляли карбонат калия (188 г) в течение 1 минуты при охлаждении льдом. В реакционную смесь добавляли по каплям 37%-ного водного раствора формальдегида (152 мл) в течение 10 минут при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 19 часов 44 минут. В реакционную смесь добавляли воду (1,57 л) при комнатной температуре в течение 1 минуты. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа 48 минут. Реакционную смесь разделяли. Отделенный водный слой экстрагировали тетрагидрофураном (200 мл) два раза. Полученные органические слои объединяли и упаривали. В остаток добавляли толуол (471 мл) и насыщенный водный раствор хлорида натрия (471 мл). Реакционную смесь перемешивали и разделяли. Органический слой сушили над сульфатом натрия (63 г). Сульфат натрия отфильтровывали. Отдельно проводили такую же реакцию с триэтил фосфоноацетатом (300 г), получая фильтрат, который затем объединяли с полученным выше фильтратом, получая раствор указанного в заголовке соединения (эквивалент 2,66 моль) в толуоле (примерно 921 мл). Полученный раствор указанного в заголовке соединения в толуоле считали полученным с выходом 100% и использовали на следующей стадии. Образование указанного в заголовке соединения было подтверждено ВЭЖХ анализом.

Применялись следующие приборы и условия ВЭЖХ анализа:

Прибор: ВЭЖХ система от Shimadzu Corporation, High-Performance Liquid Chromatograph Prominence

Условия регистрации:

Колонка: Kinetex C18: 2,6 мкм, 50 мм x 2,1 мм (Phenomenex)

Температура колонки: 40°C

Скорость потока: 0,4 мл/мин.

Время анализа: 10 мин.

Длина волны детектора: УФ (220 нм)

Подвижная фаза: (Раствор A) вода, (Раствор B) ацетонитрил.

Градиент подвижной фазы: Поддерживали соотношение (Раствор A/ Раствор B (об. %)) между Раствором A и Раствором B 80/20 с 0 минуты до 0,01 минуты после введения, линейно изменяли от 80/20 до 10/90 с 0,01 минуты до 7 минут, выдерживали 10/90 с 7 минут до 8 минут, линейно изменяли от 10/90 до 80/20 с 8 минут до 9 минут, и поддерживали соотношение 80/20 с 9 минут до 10 минут.

Время удерживания указанного в заголовке соединения составляло около 3,7 минут в применявшихся при ВЭЖХ-анализе условиях.

Стадия 2. Получение смеси этил (цис)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксилата и этил (транс)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксилата

В раствор диэтил 2-метил-3-метиленсукцината (эквивалентно 2,66 моль), полученного на Стадии 1, в толуоле (около 921 мл) добавляли по каплям 2,4-диметоксибензиламин (468 г) в течение 2 минут при комнатной температуре в токе азота. Реакционную смесь перемешивали при 120°C в течение 5 часов 45 минут. Реакционную смесь оставляли стоять на выходные при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали льдом до внутренней температуры около 15°C. В реакционную смесь добавляли по каплям 2н. раствор соляной кислоты (1,33 л), и полученную смесь перемешивали. Реакционную смесь разделяли. Водный слой экстрагировали толуолом (150 мл). Органические слои объединяли, промывали смесью насыщенного водного раствора хлорида натрия и воды (600 мл, насыщенный водный раствор хлорида натрия/вода = 1/1), сушили над сульфатом натрия (120 г), упаривали, и сушили при пониженном давлении при комнатной температуре в течение ночи, получая сырое указанное в заголовке соединение (790 г; цис/транс = около 1/1, включая 5,5 мас.% толуола). Образование указанного в заголовке соединения было подтверждено методом ВЭЖХ-анализа.

Применялись следующие приборы и условия ВЭЖХ анализа:

Прибор: ВЭЖХ система от Shimadzu Corporation, High-Performance Liquid Chromatograph Prominence

Условия анализа:

Колонка: Atlantis T3: 5 мкм, 150 мм x 4,6 мм (Waters)

Температура колонки: 40°C

Скорость потока: 1,15 мл/мин.

Время анализа: 18 мин.

Длина волны детектора: УФ (220 нм)

Подвижная фаза: (Раствор A) 10 мM (натрия) фосфатный буфер (pH = 2,6), (Раствор B) ацетонитрил.

Градиент подвижной фазы: Поддерживали соотношение (Раствор A/ Раствор B (об. %)) между Раствором A и Раствором B 60/40 с 0 минуты до 0,5 минуты после введения, линейно изменяли от 60/40 до 10/90 с 0,5 минуты до 8 минут, выдерживали 10/90 с 8 минут до 12,5 минут, линейно изменяли от 10/90 до 60/40 с 12,5 минут до 13,5 минут, и поддерживали соотношение 60/40 с 13,5 минут до 18 минут.

Время удерживания составляло около 6,6 минут для этил (цис)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксилата и около 6,9 минут для этил (транс)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксилата в применявшихся при ВЭЖХ-анализе условиях.

Стадия 3. Получение (транс)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты

В неочищенную смесь (790 г, включая 5,5 мас.% толуола) этил (цис)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксилата и этил (транс)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксилата, полученную на Стадии 2, добавляли этанол (1,15 л) при комнатной температуре в токе азота. В реакционную смесь добавляли по каплям этоксид натрия (20 мас.% раствор в этаноле, 1,15 л) при комнатной температуре в течение 31 минуты. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 2 часа 57 минут. Реакционную смесь охлаждали льдом и добавляли по каплям воду (1,84 л) в течение 33 минут. В реакционную смесь добавляли ЦПМЭ (1,8 л) и толуол (1,8 л) при комнатной температуре, и полученную смесь разделяли (органический слой 1). В водный слой добавляли ЦПМЭ (1,8 л), и полученную смесь разделяли (органический слой 2). Растворитель (1,8 л) удаляли из водного слоя упариванием. В водный слой добавляли по каплям 6н. раствор соляной кислоты (110 мл) при охлаждении льдом, и затем добавляли этилацетат (1,8 л). В полученную смесь добавляли по каплям 6н. раствор соляной кислоты (300 мл) при охлаждении льдом, и полученную смесь перемешивали около 10 минут. В смесь последовательно добавляли воду (2,2 л), 6н. раствор соляной кислоты (50 мл), воду (1,0 л), 10%-ный раствор гидросульфата натрия (300 мл) и этанол (300 мл) при охлаждении льдом. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. В полученную смесь добавляли этилацетат (600 мл), и полученную смесь разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (600 мл) два раза. Органические слои объединяли (за исключением органического слоя 1 и органического слоя 2) и промывали смесью насыщенного водного раствора хлорида натрия и воды (1 л, насыщенный водный раствор хлорида натрия/вода = 1/1). В полученный органический слой добавляли сульфат натрия (120 г) и активированный уголь (30 г), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь фильтровали через целит для удаления нерастворенных частиц. Нерастворенные частицы промывали этилацетатом (3 л). Фильтраты объединяли и упаривали, сушили при пониженном давлении при комнатной температуре в течение 3 часов, получая сырое указанное в заголовке соединение (561 г).

Отдельно объединяли и упаривали описанные выше органический слой 1 и органический слой 2. В остаток добавляли толуол (450 мл) и воду (450 мл), и полученную смесь разделяли. Водный слой промывали толуолом (450 мл) два раза. В водный слой добавляли этилацетат (450 мл). В полученную смесь добавляли по каплям 6н. раствор соляной кислоты (70 мл) при охлаждении льдом. В полученную смесь добавляли этилацетат (300 мл), и смесь разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (150 мл). Органические этилацетатные слои объединяли и промывали смесью насыщенного водного раствора хлорида натрия и воды (225 мл, насыщенный водный раствор хлорида натрия/вода = 1/1). В органический слой добавляли сульфат натрия (30 г) и активированный уголь (7,5 г), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Полученную смесь фильтровали для удаления нерастворенных частиц. Нерастворенные частицы промывали этилацетатом (750 мл). Фильтраты объединяли и упаривали, и сушили при пониженном давлении при комнатной температуре в течение 3 часов, получая сырое указанное в заголовке соединение (87,3 г).

Этот сырой продукт объединяли с описанным выше сырым указанным в заголовке соединением, и затем добавляли ЦПМЭ (3 л) в токе азота. Смесь перемешивали при 120°C. Полученную смесь медленно охлаждали до комнатной температуры при перемешивании в течение 17 часов 34 минут. Смесь охлаждали льдом и перемешивали при внутренней температуре примерно 1°C в течение 3 часов. Осадок отфильтровывали и промывали холодным ЦПМЭ (900 мл). Осадок сушили при пониженном давлении при 50°C в течение ночи, получая указанное в заголовке соединение (585 г) с общим выходом 75% за 3 стадии. Формирование указанного в заголовке соединения было подтверждено методом ВЭЖХ анализа и ЯМР.

Прибор и условия проведения ВЭЖХ анализа такие же, как на Стадии 2. Время удерживания указанного в заголовке соединения составляло около 3,1 минут в указанных условиях проведения ВЭЖХ анализа.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,33 (д, 3H, J = 6,5 Гц), 2,68-2,85 (м, 2H), 3,33-3,48 (м, 2H), 3,80 (с, 6H), 4,43 (с, 2H), 6,42-6,46 (м, 2H), 7,11-7,15 (м, 1H).

Стадия 4. Получение диастереомерной соли (3R,4R)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты с (1R,2R)-(-)-2-амино-1-(4-нитрофенил)-1,3-пропандиолом

К (транс)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоте (585 г), полученной на Стадии 3, добавляли ацетонитрил (2,9 л) при комнатной температуре в токе азота. Смесь перемешивали при 85°C. В полученную смесь добавляли (1R,2R)-(-)-2-амино-1-(4-нитрофенил)-1,3-пропандиол (254 г) в течение 14 минут при 85°C. Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 2 часов 48 минут. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры при перемешивании в течение ночи. Осадок отфильтровывали и промывали ацетонитрилом (2,4 л). Осадок сушили при обычном давлении в течении 8,5 часов при комнатной температуре, получая неочищенные кристаллы указанного в заголовке соединения (516 г). К полученным неочищенным кристаллам добавляли ацетонитрил (2,5 л) и воду (0,5 л) при комнатной температуре в токе азота. Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа 14 минут. В смесь добавляли по каплям ацетонитрил (1,5 л) при 100°C в течение 1 часа 7 минут. Смесь перемешивали при 100°C в течение 10 минут. Смесь охлаждали до комнатной температуры при перемешивании в течение 21 часа 10 минут. Смесь перемешивали в течение 3 часов 54 минут при охлаждении льдом. Осадок отделяли фильтрованием и промывали ацетонитрилом (1,5 л). Осадок сушили при атмосферном давлении при комнатной температуре 4 часа, получая указанное в заголовке соединение (448 г, 99,8% de) с выходом 45%. Формирование указанного в заголовке соединения было подтверждено методом ВЭЖХ анализа.

Применялись следующие приборы и условия ВЭЖХ анализа:

Прибор: ВЭЖХ система от Shimadzu Corporation, High-Performance Liquid Chromatograph Prominence

Условия регистрации:

Колонка: CHIRAL PAK AD-3R: 3 мкм, 150 мм x 4,6 мм (Daicel)

Температура колонки: 40°C

Скорость потока: 0,50 мл/мин.

Время анализа: 10 мин.

Длина волны детектора: УФ (220 нм)

Подвижная фаза: (Раствор A) 10 мM (натрия) фосфатный буфер (pH = 2,6), (Раствор B) ацетонитрил.

Режим подачи подвижной фазы: Поддерживали соотношение (Раствор A/ Раствор B (об. %)) между Раствором A и Раствором B 60/40.

Время удерживания составляло около 5,6 минут для (3R,4R)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты и около 6,5 минут для (3S,4S)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты в указанных условиях проведения ВЭЖХ анализа.

Конформацию указанного в заголовке соединения определяли методом рентгеновской кристаллографии на его монокристалле, полученном перекристаллизацией из метилизобутилкетона.

Диастереомерный избыток определяли по площадям ВЭЖХ пиков, и он составлял ((3R,4R)/(3S,4S) = 99,886%/0,114%).

Стадия 5. Получение (3R,4R)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты

К диастереомерной соли (3R,4R)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты с (1R,2R)-(-)-2-амино-1-(4-нитрофенил)-1,3-пропандиолом (448 г), полученной на Стадии 4, добавляли этилацетат (1,8 л) и воду (1,34 л) при комнатной температуре. В полученную смесь добавляли по каплям 6н. раствор соляной кислоты (168 мл) при комнатной температуре в течение 16 минут. Смесь разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (450 мл) три раза. Органические слои объединяли и промывали последовательно 2н. раствором соляной кислоты (224 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (224 мл), и затем сушили над сульфатом натрия (90 г) и упаривали. В остаток добавляли толуол (220 мл), и смесь упаривали. Остаток сушили при пониженном давлении при комнатной температуре, получая указанное в заголовке соединение (254 г) с выходом 98%.

¹H-ЯМР (ДМСО-D₆) δ: 1,15 (д, 3H, J = 7,2 Гц), 2,50-2,58 (м, 1H), 2,73-2,83 (м, 1H), 3,18-3,25 (м, 1H), 3,30-3,38 (м, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,77 (с, 3H), 4,19-4,35 (м, 2H), 6,48 (дд, 1H, J = 8,4, 2,3 Гц), 6,56 (д, 1H, J = 2,3 Гц), 7,00 (д, 1H, J = 8,4 Гц), 12,61 (ушир.с, 1H).

Пример 1. Синтез (3R,4R)-N-(5-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-ил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксамида

Стадия 1. Получение 3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразола

К 1H-пиразол-3-амину (100 г) добавляли уксусную кислоту (1 л) при комнатной температуре, и полученную смесь перемешивали 5 минут. В полученную смесь добавляли 2,5-гександион (148 мл) при комнатной температуре, и смесь перемешивали 5 минут. Реакционную смесь перемешивали при 120°C 2,5 часа и охлаждали до комнатной температуры. В реакционную смесь добавляли воду (1 л) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 50 минут. Твердый осадок отфильтровывали и промывали водой (1 л). Полученный влажный осадок сушили при атмосферном давлении при комнатной температуре в течение ночи, и затем сушили при пониженном давлении при 65°C в течение 3 дней и 8,5 часов, получая указанное в заголовке соединение (172,47 г) с выходом 89%.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 2,11 (с, 6H), 5,90 (с, 2H), 6,25 (д, 1H, J = 2,4 Гц), 7,51 (д, 1H, J = 2,4 Гц).

Стадия 2. Получение смеси 1-(бромдифторметил)-3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразола и 1-(бромдифторметил)-5-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразола

ДМФА (100 мл) добавляли к гидриду натрия (14,9 г) в токе аргона при охлаждении льдом. В полученную смесь добавляли по каплям суспензию 3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразола (40 г), полученного на Стадии 1, в ДМФА (150 мл) при охлаждении льдом в течение 20 минут. Использовавшуюся капельную воронку промывали ДМФА (50 мл), и промывные растворы добавляли в реакционную смесь. Реакционную смесь перемешивали при охлаждении водой в течение 1,5 часов. В реакционную смесь добавляли тетрабутиламмония бромид (0,80 г) при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали при охлаждении льдом 15 минут. В реакционную смесь добавляли по каплям раствор дибромдифторметана (45 мл) в ДМФА (50 мл) при охлаждении льдом в течение 15 минут. Реакционную смесь перемешивали при охлаждении водой в течение 2 часов и 10 минут. В смесь добавляли по каплям дибромдифторметан (20 мл) в атмосфере аргона при охлаждении водой. Реакционную смесь перемешивали при охлаждении водой 40 минут и оставляли на ночь. В реакционную смесь добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (200 мл) при охлаждении льдом. В реакционную смесь добавляли этилацетат и воду. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, и добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия. Смесь фильтровали через целит и фильтрат разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, затем сушили над сульфатом натрия и упаривали. Толуол (250 мл) добавляли в остаток, и полученную смесь упаривали. Эту процедуру повторяли. Этилацетат (около 150 мл) добавляли в остаток, и нерастворенные частицы отфильтровывали. Эти нерастворенные частицы промывали этилацетатом. Фильтраты объединяли и упаривали. Остаток сушили при пониженном давлении при перемешивании при комнатной температуре 10 минут. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = от 30/1 до 20/1), получая указанное в заголовке соединение (40,6 г, включая 3,7 мас.% гексана, 1-(бромдифторметил)-3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразол : 1-(бромдифторметил)-5-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразол = около 3:1) с выходом 54%.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 2,03 (с, 1,5H), 2,18 (с, 4,5H), 5,89 (с, 1,5H), 5,91 (с, 0,5H), 6,39-6,41 (м, 1H), 7,86-7,88 (м, 1H).

Стадия 3. Получение смеси 3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1-(трифторметил)-1H-пиразола и 5-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1-(трифторметил)-1H-пиразола

В раствор смеси 1-(бромдифторметил)-3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразола и 1-(бромдифторметил)-5-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1H-пиразола (40,6 г, включая 3,7 мас.% гексана), полученного на Стадии 2, в сульфолане (400 мл) добавляли тетраметиламмония фторид (13,0 г) при комнатной температуре в токе аргона. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа. В реакционную смесь добавляли тетраметиламмония фторид (9,4 г) при 100°C. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа 15 минут. В смесь добавляли тетраметиламмония фторид (10 г) при 100°C. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 40 минут. В смесь дополнительно добавляли тетраметиламмония фторид (5 г) при 100°C. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 часов 5 минут и затем охлаждали до комнатной температуры. В смесь медленно и последовательно добавляли воду (400 мл) и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (200 мл) при охлаждении льдом. В реакционную смесь добавляли смесь н-гексан/этилацетат (2/3) (400 мл). Смесь фильтровали через целит и фильтрат разделяли. Органический слой промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия. Водные слои объединяли и экстрагировали смесью н-гексан/этилацетат (2/3) (300 мл). Органический слой промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = от 30/1 до 25/1), получая указанное в заголовке соединение (21,85 г, 3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол : 5-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол = около 6:1, включая 24,4 мас.% н-гексана) с выходом 51%.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 2,00 (с, 0,86H), 2,16 (с, 5,1H), 5,89 (с, 1,7H), 5,91 (с, 0,29H), 6,40 (д, 0,86H, J = 2,8 Гц), 6,42 (д, 0,14H, J = 1,6 Гц), 7,83 (д, 0,14H, J = 1,6 Гц), 7,87 (д, 0,86H, J = 2,8 Гц).

Стадия 4. Получение 3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-5-иод-1-(трифторметил)-1H-пиразола

В раствор смеси 3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1-(трифторметил)-1H-пиразола и 5-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-1-(трифторметил)-1H-пиразола (21,85 г, включая 24,4 мас.% н-гексана), полученного на Стадии 3, в ТГФ (180 мл) добавляли по каплям раствор н-бутиллития в н-гексане (1,55M, 51,1 мл) при -70°C в течение 5 минут в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивали при -70°C в течение 25 минут. В реакционную смесь добавляли по каплям раствор иода (18,3 г) в ТГФ (50 мл) при -70°C в течение 5 минут. Использовавшуюся капельную воронку промывали тетрагидрофураном (10 мл), и промывные растворы добавляли в реакционную смесь. Реакционную смесь перемешивали при -70°C в течение 30 минут. В смесь добавляли иод (0,90 г) при -70°C. Реакционную смесь перемешивали при -70°C в течение 0,5 часа. В смесь последовательно добавляли воду (250 мл) и этилацетат (250 мл) при -70°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре и разделяли. Органический слой последовательно промывали 10%-ным водным раствором гидросульфата натрия (250 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл), сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = от 50/1 до 30/1). Фракции, содержащие указанное в заголовке соединение, собирали и упаривали. В остаток добавляли н-гексан. Смесь упаривали до веса остатка 27,5 г. В остаток добавляли н-гексан (20 мл). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре 10 минут. Осадок отделяли фильтрованием, промывали н-гексаном (30 мл) и сушили при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (17,14 г) с выходом 67%. Затем этот фильтрат упаривали. Остаток кристаллизовали из н-гексана, получая указанное в заголовке соединение (1,63 г) с выходом 6,4%.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 2,15 (с, 6H), 5,88 (с, 2H), 6,60 (с, 1H).

Стадия 5. Получение 5-иод-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-амина

К 3-(2,5-диметил-1H-пиррол-1-ил)-5-иод-1-(трифторметил)-1H-пиразолу (18,77 г), полученному на Стадии 4, последовательно добавляли смесь этанола и воды (этанол/вода = 2/1, 480 мл), гидроксиламин гидрохлорид (73,5 г) и триэтиламин (14,7 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 38 часов 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и удаляли этанол упариванием. В реакционную смесь медленно добавляли раствор гидроксида натрия (42,3 г) в воде (130 мл), затем добавляли этилацетат (200 мл) при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали и разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (200 мл). Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и упаривали. В остаток добавляли этилацетат (30 мл) и н-гексан (30 мл), и нерастворимые частицы отфильтровывали. Фильтрат упаривали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = от 4/1 до 3/1), получая указанное в заголовке соединение (16,27 г, включая 14 мас.% этилацетата) с выходом 96%.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 3,93 (ушир.с, 2H), 6,09 (с, 1H).

Стадия 6. Получение 5-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-амина

В раствор 5-иод-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-амина (80 мг, включая 14 мас.% этилацетата), полученного на Стадии 5, в толуоле (3 мл) последовательно добавляли 2-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан (127 мг), полученный на Стадии 2 Синтеза 1, ацетат палладия(II) (6,5 мг) и 2-дициклогексилфосфино-2’,6’-диметоксибифенил (20 мг) при комнатной температуре в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 4 минуты. В реакционную смесь добавляли 2М водный раствор трикалия фосфата (1,5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 47 минут. Смесь охлаждали до комнатной температуры. В реакционную смесь добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия. Реакционную смесь фильтровали через хлопок и экстрагировали этилацетатом. Органический слой последовательно промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток объединяли с частью указанного в заголовке соединения (15 мг), отдельно полученного аналогично данной стадии при использовании 5-иод-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-амина (70 мг, включая 14 мас.% этилацетата), полученного на Стадии 5, и полученную смесь очищали методом тонкослойной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = 3/1), получая указанное в заголовке соединение (108 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,36 (с, 9H), 3,93 (ушир.с, 2H), 5,83 (с, 1H), 6,75-6,85 (м, 3H).

Стадия 7. Получение (3R,4R)-N-(5-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-ил)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксамида

В раствор (3R,4R)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты (55 мг), полученной аналогично Стадии 5 Синтеза 2 в хлороформе (0,55 мл), последовательно добавляли ДМФА (1 мкл) и оксалилхлорид (33 мкл) при охлаждении льдом в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивали при охлаждении льдом 50 минут. Смесь упаривали и сушили при пониженном давлении. В остаток последовательно добавляли хлороформ (0,4 мл) и 5-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-амин (40 мг), полученный на Стадии 6, в атмосфере аргона при охлаждении льдом. В реакционную смесь добавляли пиридин (50 мкл) при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали при охлаждении льдом 5 минут и при комнатной температуре 35 минут. В смесь добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия при комнатной температуре, и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток очищали методом тонкослойной хроматографии на силикагеле (элюент: н-гексан/этилацетат = 1/1), получая указанное в заголовке соединение (60 мг) с выходом 80%. Формирование указанного в заголовке соединения было подтверждено методом тонкослойной хроматографии (элюент: н-гексан/этилацетат = 2/1, Rf: 0,19).

Стадия 8. Получение (3R,4R)-N-(5-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-ил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксамида

К (3R,4R)-N-(5-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-ил)-1-(2,4-диметоксибензил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксамиду (60 мг), полученному на Стадии 7, добавляли анизол (58 мкл) и трифторуксусную кислоту (2 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 1 часа 20 минут. Смесь упаривали. В остаток добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток очищали методом тонкослойной хроматографии на силикагеле (элюент: хлороформ/этилацетат = 1/1), получая указанное в заголовке соединение (29,9 мг) с выходом 76%.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 1,06 (д, 3H, J = 7,2 Гц), 2,50-2,53 (м, 1H), 2,96-3,04 (м, 1H), 3,17-3,23 (м, 1H), 3,40-3,46 (м, 1H), 6,67-6,81 (м, 3H), 6,96 (с, 1H), 7,67 (с, 1H), 10,34 (с, 1H), 11,26 (с, 1H).

Стадия 9. Получение (3R,4R)-N-(5-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-ил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксамида

К (3R,4R)-N-(5-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-ил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксамиду (30 мг), полученному на Стадии 8, последовательно добавляли ди-трет-бутилдикарбонат, хлороформ (1 мл) и перхлорат магния при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 55°C в течение 0,5 часа. В реакционную смесь добавляли перхлорат магния при 55°C. Реакционную смесь перемешивали при 55°C в течение 1 часа 10 минут. В смесь добавляли еще перхлорат магния при 55°C. Реакционную смесь перемешивали при 55°C в течение 20 минут. Смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли этилацетат. Реакционную смесь последовательно промывали 1н. раствором соляной кислоты и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток очищали методом тонкослойной хроматографии на силикагеле (элюент: хлороформ/метанол = 15/1), получая указанное в заголовке соединение (19,2 мг) с выходом 56%.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 1,08 (д, 3H, J = 7,2 Гц), 1,34 (с, 9H), 2,51-2,55 (м, 1H), 2,98-3,06 (м, 1H), 3,19-3,25 (м, 1H), 3,42-3,48 (м, 1H), 6,95 (с, 1H), 7,00-7,07 (м, 2H), 7,11-7,17 (м, 1H), 7,68 (с, 1H), 11,28 (с, 1H).

MS (M+H) 443, MS (M-H) 441.

Стадия 10. Получение кристаллов (3R,4R)-N-(5-(3-(трет-бутокси)-5-фторфенил)-1-(трифторметил)-1H-пиразол-3-ил)-4-метил-5-оксопирролидин-3-карбоксамида

Указанное в заголовке соединение (100 мг) перемешивали в этаноле (0,4 мл) при 65°C в течение 8 минут до растворения. В раствор добавляли по каплям воду (0,4 мл) при 65°C в течение 2 минут. Смесь перемешивали при 65°C в течение 10 минут. Смесь охлаждали до 25°C при перемешивании в течение 2 часов. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре 2 часа. Выпавший осадок отделяли фильтрованием. Полученный твердый осадок промывали смесью этанол/вода (= 1/1) и сушили при пониженном давлении при 60°C, получая кристаллы указанного в заголовке соединения (87,8 мг) с выходом 88%.

Сравнительный пример

Соединение A, Соединение B и Соединение C, все из которых изображены ниже в таблице, получали согласно описанию в WO 2013/031922.

Соединение A Соединение B Соединение C

Метаболит 1 (т.е. метаболит Соединения 1) и Метаболит C (т.е. метаболит Соединения C), оба из которых изображены ниже в таблице, получали согласно описанному выше Примеру 1 и описанию в WO 2013/031922.

Метаболит 1 Метаболит C

Пример Теста 1

Активность тестируемых соединений в качестве ингибиторов SGLT1 (значения IC₅₀) подсчитывали по величине клеточного захвата меченого α-метил-D-глюкопиранозида (¹⁴C-AMG), переносимого SGLT1.

1) Формирование плазмиды, экспрессирующей человеческий SGLT1

Фрагмент ДНК, содержащий ген человеческого SGLT1, амплифицировали методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) с использованием pCMV6-hSGLT1 (OriGene) в качестве темплата. В человеческий SGLT1 добавляли последовательность распознавания и расщепления NheI выше (upstream) относительно консенсусной последовательности Kozac из вектора, и стоп-кодон, TAG, и последовательность распознавания и расщепления SalI добавляли сразу после (downstream) белок-транслирующего участка человеческого SGLT1. Очищенный фрагмент ДНК расщепляли рестрикционными ферментами NheI и SalI, затем лигировали с pcDNA3.1 (+), которую расщепляли с помощью NheI и XhoI, формируя тем самым плазмиду, экспрессирующую человеческий SGLT1. Последовательность нуклеиновых кислот человеческого SGLT1, вставленная в вектор, была полностью идентична белок-транслирующему участку последовательности человеческого SGLT1 (Accession number NM_000343), зарегистрированному в GenBank, и последовательность участка, соединенного с вектором, была такой, как ожидалось.

2) Формирование линий клеток, устойчиво экспрессирующих человеческий SGLT1

Плазмиду, экспрессирующую человеческий SGLT, pcDNA-hSGLT1, трансфицировали в каждую клетку CHO-K1 с применением Lipofectamine 2000 (Invitrogen) и культивировали в присутствии G418 (Nacalai Tesque), чтобы отобрать линии лекарственноустойчивых клеток. Линию клеток, имеющую наивысшее соотношение (соотношение S/B) величины клеточного захвата ¹⁴C-AMG на клетку к величине клеточного захвата ¹⁴C-AMG после воздействия ингибитора SGLT, флоризина, выбирали в качестве линии клеток, устойчиво экспрессирующей человеческий SGLT1, из числа линий лекарственноустойчивых клеток.

3) Оценка SGLT1-ингибирующей активности

Клетки, устойчиво экспрессирующие человеческий SGLT1, высевали в количестве 5 x 10⁴ клеток на лунку в BioCoat^TM Poly-D-Lysine 96-луночные планшеты с крышкой (Becton, Dickinson and Company) и культивировали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ в течение ночи. Среду заменяли на 100 мкл/лунку Na(-) буфера (140 мM холин хлорид, 2 мM KCl, 1 мM MgCl₂, 1 мМ CaCl₂, 10 мМ HEPES, 5 мМ Tris, pH 7,4), и смесь оставляли при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ на 20 минут. После удаления Na(-) буфера, добавляли 40 мкл/лунку раствора тестируемого соединения, приготовленного в Na(+) буфере (140 мМ NaCl, 2 мМ KCl, 1 мМ MgCl₂, 1 мМ CaCl₂, 10 мМ HEPES, 5 мМ Tris, pH 7,4), содержащем БСА (бычий сывороточный альбумин). Затем добавляли 40 мкл/лунку Na(+) буфера, содержащего 8 кБк ¹⁴C-AMG и 2 мМ AMG, и полученную смесь хорошо перемешивали. В контрольном образце добавляли 40 мкл/лунку Na(-) буфера, содержащего БСА, и кроме того добавляли 40 мкл/лунку Na(-) буфера, содержащего 8 кБк ¹⁴C-AMG и 2 мМ AMG, и полученную смесь хорошо перемешивали. После инкубации в течение 1 часа при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ клетки промывали два раза по 100 мкл на лунку ледяного промывного буфера (100 мМ AMG, 140 мМ холин хлорид, 2 мМ KCl, 1 мМ MgCl₂, 1 мМ CaCl₂, 10 мМ HEPES, 5 мМ Tris, pH 7,4) для остановки реакции. Клеточный лизат готовили посредством добавления 50 мкл/лунку 0,2н. водного раствора NaOH. Для оценки способности поглощения ¹⁴C-AMG, все количество клеточного лизата переносили в OptiPlate 96 (Perkin-Elmer) со 100 мкл/лунку MicroScint-40 (Perkin-Elmer), и измеряли CPM (число импульсов в минуту) ¹⁴C с помощью TOPCOUNT NXT (Perkin-Elmer).

Вычисляли результат посредством вычитания среднего значения CPM для контрольного образца из среднего значения CPM для каждой обработанной ячейки. Степень ингибирования для каждого протестированного соединения в каждой концентрации вычисляли по следующему уравнению:

[(A-B)/A] x 100

где A это результат для контрольного образца, а B это результат при обработке каждым тестируемым соединением.

Каждое значение IC₅₀ (50%-ингибирующая концентрация) для каждого тестируемого соединения вычисляли по двум концентрациям выше и ниже 50%-ного ингибирования, и по значению ингибирования. В этом исследовании для соединения 1 была подтверждена SGLT1-ингибирующая активность.

Пример Теста 2

ОГТТ (Оральный глюкозотолерантный тест)

Носитель (0,5%-ный раствор метилцеллюлозы) или соединение 1 (1, 3 или 10 мг/кг), суспендированное в 0,5%-ном растворе метилцеллюлозы, вводили перорально в количестве 5 мл/кг содержавшимся без пищи около 4 часов самцам крыс SD (возраст 8 недель, Nihon Charles River K.K., 6 животных в каждой группе). Через 16 часов проводили нагрузку глюкозой путем перорального введения 0,4 г/мл раствора глюкозы в количестве 5 мл/кг. Брали кровь из хвостовой вены непосредственно перед нагрузкой глюкозой, а также через 30, 60 и 120 минут после нагрузки глюкозой; и замеряли уровень глюкозы в крови с помощью автоматического биохимического анализатора (HITACHI, Model No. 7180).

Результаты представлены на фиг. 1. Показаны средние значения ± стандартное отклонение для соотношения площади под кривой (Δ AUC) уровня глюкозы в крови для группы с нагрузкой глюкозой за 120 минут к соответствующим значениям для контрольной группы (% от Носителя). Статистический анализ проводили с использованием критерия Стила. Уровень значимости был двусторонний 5%. Результаты показывают, что соединение 1 значительно снижает уровень глюкозы в крови после нагрузки глюкозой, по сравнению с контрольной группой.

Пример Теста 3

ОГТТ (Оральный глюкозотолерантный тест)

Носитель (0,5%-ный раствор метилцеллюлозы) или соединение 1, соединение А или соединение В (3 мг/кг в каждом случае), суспендированные в 0,5%-ном растворе метилцеллюлозы, вводили перорально в количестве 5 мл/кг содержавшимся без пищи около 4 часов самцам крыс SD (возраст 8 недель, Nihon Charles River K.K., 5 животных в каждой группе). Через 16 часов проводили нагрузку глюкозой путем перорального введения 0,4 г/мл раствора глюкозы в количестве 5 мл/кг. Брали кровь из хвостовой вены непосредственно перед нагрузкой глюкозой, а также через 30, 60 и 120 минут после нагрузки глюкозой; и замеряли уровень глюкозы в крови с помощью автоматического биохимического анализатора (HITACHI, Model No. 7180).

Результаты представлены на фиг. 2. Показаны средние значения ± стандартное отклонение для соотношения площади под кривой (Δ AUC) уровня глюкозы в крови для группы с нагрузкой глюкозой за 120 минут к соответствующим значениям для контрольной группы (% от Носителя). Статистический анализ проводили с использованием критерия Даннетта. Уровень значимости был двусторонний 5%. Результаты показывают, что только соединение 1 значительно снижает уровень глюкозы в крови после нагрузки глюкозой, по сравнению с контрольной группой.

Пример Теста 4

Тест Эймса (тест обратной мутации)

В этом тесте исследовали Метаболит 1 и Метаболит C. Целью этого теста была оценка потенциала каждого метаболита вызывать обратные мутации в стандартных линиях Salmonella typhimurium (TA98, TA1537, TA100 и TA1535) и Escherichia coli (WP2uvrA), в присутствии или в отсутствие системы метаболической активации печени крыс (S9 mix).

Растворитель, применявшийся в данном случае, представлял собой диметилсульфоксид (ДМСО, 100 мкл/лунку).

Тест проводили методом предварительной инкубации с S9 mix или без него. Когда тест проводили без S9 mix, добавляли натрий-фосфатный буферный раствор (pH 7,4).

0,5 мл S9 mix или 0,5 мл 0,1 моль/л натрий-фосфатного буферного раствора (pH 7,4), и 0,1 мл раствора бактериальной культуры добавляли в пробирку, содержащую 0,1 мл отрицательного контроля (только ДМСО), метаболита или положительного контроля. Смеси предварительно инкубировали при 37°C в течение 20 минут при встряхивании. После предварительной инкубации добавляли 2 мл агара для верхнего слоя, и смеси перемешивали на вихревой мешалке и распределяли в планшетах. Использовали два планшета на каждый испытуемый образец. Планшеты инкубировали при 37 ± 1°C в течение 48 часов или больше, и подсчитывали число ревертантных колоний. Вычисляли среднее число ревертантных колоний для каждого испытуемого образца. Наличие или отсутствие ингибирования роста вследствие антибактериального действия испытуемых образцов, а также выпадение осадка оценивали визуально или с помощью стереомикроскопа. Результаты оценивались как положительные, если среднее число ревертантных колоний показывало дозозависимый рост, достигавший 2-кратного в сравнении с отрицательным контролем, в одной или больше дозировках. Оценку проводили по средним значениям без применения статистического сравнения.

Результаты теста приведены в следующих далее таблицах (таблицы 1-4 и таблицы 5-7). В заключение необходимо отметить, что Метаболит 1 не обладает потенциалом вызывать обратные мутации ни у одной из протестированных линий бактерий, в то время как Метаболит C обладает потенциалом вызывать обратные мутации у линии бактерий TA98 с S9 mix и у TA100 с S9 mix.

Таблица 1

Испытываемый образец Доза
(мкг/лунку) S9 Mix Число ревертантных колоний TA98 TA100 ДМСО (0,1 мл) + 36 133 Метаболит 1 2,3 + 35 120 6,9 + 31 119 21 + 35 117 62 + 28 104 185 + 16 * 78 * 556 † + 15 * 59 * 1667 † + 13 * 50 * 5000 † + 13 * 52 * B[a]P 5,0 + 455 1069 +: Присутствует S9 mix *: Ингибирование роста †: Осадок ДМСО: Диметилсульфоксид B[a]P: Бензо[a]пирен Число ревертантных колоний показывает среднее значение для каждого планшета.

Таблица 2

Испытываемый образец Доза
(мкг/лунку) S9 Mix Число ревертантных колоний TA1537 TA1535 WP2uvrA ДМСО (0,1 мл) + 13 102 25 Метаболит 1 2,3 + 11 13 31 6,9 + 10 7 31 21 + 9 6 32 62 + 6 8 40 185 + 2 * 5 * 16 * 556 + 0 * 4 * 18 * 1667 + 0 * 4 * 9 * 5000 † + 0 * 2 * 0 * 2AA 2,0 + -- 223 -- 10,0 + -- -- 818 B[a]P 5,0 + 119 -- -- +: Присутствует S9 mix *: Ингибирование роста †: Осадок --: Не тестировалось ДМСО: Диметилсульфоксид 2AA: 2-аминоантрацен B[a]P: Бензо[a]пирен Число ревертантных колоний показывает среднее значение для каждого планшета.

Таблица 3

Испытываемый образец Доза
(мкг/лунку) S9 Mix Число ревертантных колоний WP2uvrA ДМСО (0,1 мл) + 31 Метаболит 1 6,9 + 31 12 + 28 21 + 25 36 + 34 62 + 35 107 + 25 185 + 9 * 2AA 10,0 + 740 +: Присутствует S9 mix *: Ингибирование роста ДМСО: Диметилсульфоксид 2AA: 2-аминоантрацен Число ревертантных колоний показывает среднее значение для каждого планшета.

Таблица 4

Испытываемый образец Доза
(мкг/
лунку) S9 Mix Число ревертантных колоний TA98 TA1537 TA100 TA1535 WP2uvrA ДМСО (0,1 мл) - 18 8 100 8 26 Метаболит 1 2,3 - 14 7 99 6 32 6,9 - 16 10 113 9 27 21 - 14 9 124 8 31 62 - 21 9 88 8 24 185 - 9 * 0 * 38 * 0 * 15 * 556 - 0 * 0 * 0 * 0 * 8 * 1667 - 0 * 0 * 0 * 0 * 5 * 5000 † - 0 * 0 * 0 * 0 * 0 * AF-2 0,01 - -- -- 633 -- 69 0,1 - 341 -- -- -- -- ICR-191 1,0 - -- 1170 -- -- -- SA 0,5 - -- -- -- 217 -- --: Не тестировалось *: Ингибирование роста †: Осадок ДМСО: Диметилсульфоксид AF-2: 2-(2-Фурил)-3-(5-нитро-2-фурил)акриламид SA: Азид натрия ICR-191: 2-Метокси-6-хлор-9-[3-(2-хлорэтил)-аминопропиламино]акридин дигидрохлорид Число ревертантных колоний показывает среднее значение для каждого планшета.

Таблица 5

Испытываемый образец Доза
(мкг/лунку) S9 Mix Число ревертантных колоний TA98 TA100 ДМСО (0,1 мл) + 28 117 Метаболит C 2,34 + 38 526 # 4,69 + 36 778 # 9,38 + 73 # 1210 # 18,8 + 107 # 1745 # 37,5 + 133 # 2049 # 75 + 153 # 2147 # 150 + 133 # 2043 # 300 + 138 * 1412 * B[a]P 5,0 + 404 1078 #: Результаты оценивались как положительные, если среднее число ревертантных колоний показывало дозозависимый рост, достигавший 2-кратного в сравнении с отрицательным контролем. *: Ингибирование роста ДМСО: Диметилсульфоксид B[a]P: Бензо[a]пирен Число ревертантных колоний показывает среднее значение для каждого планшета.

Таблица 6

Испытываемый образец Доза
(мкг/лунку) S9 Mix Число ревертантных колоний TA1537 TA1535 WP2uvrA ДМСО (0,1 мл) + 6 5 21 Метаболит C 2,3 + 6 8 28 6,9 + 7 8 23 21 + 7 5 21 62 + 9 4 26 185 + 9 * 5 * 17 556 † + 4 * 4 * 8 * 1667 † + 4 * 5 * 12 * 5000 † + 5 * 4 * 16 * 2AA 2,0 + -- 250 -- 10,0 + -- -- 685 B[a]P 5,0 + 80 -- -- --: Не тестировалось *: Ингибирование роста †: Осадок ДМСО: Диметилсульфоксид 2AA: 2-аминоантрацен B[a]P: Бензо[a]пирен Число ревертантных колоний показывает среднее значение для каждого планшета.

Таблица 7

Испытываемый образец Доза
(мкг/
лунку) S9 Mix Число ревертантных колоний TA98 TA1537 TA100 TA1535 WP2uvrA ДМСО (0,1 мл) - 17 6 86 6 18 Метаболит C 2,3 - 14 3 87 6 15 6,9 - 15 1 * 99 5 * 16 21 - 17 3 * 48 * 6 * 17 62 - 8 3 * 41 * 3 * 13 185 - 8 * 2 * 45 * 4 * 13 556 † - 8 * 0 * 33 * 0 * 13 * 1667 † - 8 * 0 * 25 * 1 * 10 * 5000 † - 0 * 0 * 35 * 0 * 11 * AF-2 0,01 - -- -- 542 -- 74 0,1 - 317 -- -- -- -- ICR-191 1,0 - -- 1131 -- -- -- SA 0,5 - -- -- -- 222 -- --: Не тестировалось *: Ингибирование роста †: Осадок ДМСО: Диметилсульфоксид AF-2: 2-(2-Фурил)-3-(5-нитро-2-фурил)акриламид SA: Азид натрия ICR-191: 2-Метокси-6-хлор-9-[3-(2-хлорэтил)-аминопропиламино]акридин дигидрохлорид Число ревертантных колоний показывает среднее значение для каждого планшета.

Примеры препаратов

Примеры препаратов с соединением по настоящему изобретению включают, например, описанные ниже препараты. Однако настоящее изобретение не ограничивается только эти примерами препаратов.

Пример препарата 1 (капсула)

(1) Соединение 1 30 мг (2) Микрокристаллическая целлюлоза 10 мг (3) Лактоза 19 мг (4) Стеарат магния 1 мг

Ингредиенты (1), (2), (3) и (4) смешивают для последующего заполнения в желатиновую капсулу.

Пример препарата 2 (таблетка)

(1) Соединение 1 10 г (2) Лактоза 50 г (3) Кукурузный крахмал 15 г (4) Кальция кармеллоза 44 г (5) Стеарат магния 1 г

Всё количество ингредиентов (1), (2) и (3) и 30 г ингредиента (4) объединяют с водой, сушат в вакууме и затем гранулируют. Полученные гранулы смешивают с 14 г ингредиента (4) и 1 г ингредиента (5), и таблетируют на таблеточном прессе. Таким образом получают 1000 таблеток, содержащих 10 мг соединения 1 в каждой таблетке.

Промышленная применимость

Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль имеют SGLT1-ингибирующую активность и поэтому могут применяться для лечения и/или предотвращения различных заболеваний или патологических состояний, для которых ожидается улучшение при регулировании активности SGLT1. Соединение, имеющее формулу [I], или его фармацевтически приемлемая соль также могут применяться для лечения и/или предотвращения различных заболеваний или патологических состояний, которые могут быть вызваны повышенным уровнем глюкозы в крови.

Группа изобретений относится к органической химии и включает соединение формулы [I], его фармацевтически приемлемую соль, применение, фармацевтическую композицию, его содержащую, способ ингибирования SGLT1 и способ лечения диабета. Технический результат – соединение формулы [I], обладающее SGLT1-ингибирующей активностью, применяемое для лечения диабета. 8 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 7 табл., 8 пр.

1. Соединение, имеющее формулу [I]:

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Фармацевтическая композиция, способная ингибировать SGLT1, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Применение соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве ингибитора SGLT1.

4. Применение соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве терапевтического средства против диабета.

5. Применение по п. 4, где диабет представляет собой диабет 2-го типа.

6. Способ ингибирования SGLT1, включающий введение млекопитающим терапевтически эффективного количества соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли.

7. Способ лечения диабета, включающий введение млекопитающим терапевтически эффективного количества соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли.

8. Способ по п. 7, где диабет представляет собой диабет 2-го типа.

9. Применение соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли для производства ингибитора SGLT1.

10. Применение соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли для производства терапевтического средства против диабета.

11. Применение по п. 10, где диабет представляет собой диабет 2-го типа.