КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛЕГКИХ, СОДЕРЖАЩАЯ ГИАЛУРОНАН/ПРОТЕОГЛИКАН-СВЯЗЫВАЮЩИЙ БЕЛОК 1 Российский патент 2023 года по МПК C07K14/47 C12N15/63 A61K38/17 A61P11/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[1] Настоящее изобретение относится к рекомбинантному гиалуронан/протеогликан-связывающему белку 1 (HAPLN1) и композиции для профилактики или лечения заболевания легких, содержащей по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белка HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1), гена, кодирующего белок HAPLN1, и эффективного средства, способствующего экспрессии или активации функций белка или гена HAPLN1, в качестве активного ингредиента.

[2] УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[3] Хроническая обструктивная болезнь легких (далее в настоящем описании обозначаемая как "ХОБЛ") является четвертой по распространенности причиной смерти в мире, и в 2016 году ХОБЛ страдал приблизительно 251 миллион человек (4,8% всего населения мира). По сообщениям, в 2015 году от ХОБЛ умерло приблизительно 3,17 миллионов человек. ХОБЛ также более распространена среди мужчин, чем среди женщин, и количество пациентов с ХОБЛ растет с каждым годом.

[4] ХОБЛ является хроническим респираторным заболеванием, встречающимся чаще рака легких. Она отличается необратимой обструкцией дыхательных путей и непрерывным прогрессированием респираторных симптомов, таких как кашель, мокрота и одышка. Широко известно, что основными причинами ХОБЛ являются курение, профессиональное воздействие и загрязнение воздуха, например, твердыми частицами, и т.д. В результате воздействия этих разных причин возникает снижение поступления воздуха, вызванное комбинацией заболевания мелких дыхательных путей и деструкции паренхимы, приводящей к разным клиническим симптомам.

[5] Согласно недавним исследованиям, старение само по себе может являться важной причиной ХОБЛ и определено как фактор риска. В частности, ХОБЛ быстро усиливается после 50 лет, а затем все более усиливается с возрастом, и ее частота в возрасте 60 лет или более в 2-3 раза выше, чем у более молодых людей. ХОБЛ обладает выраженным эффектом в отношении легких, и во время этого процесса происходит повреждение альвеол, из-за чего не происходит правильный газообмен. Причиной отсутствия заболеваний у молодых курильщиков считают активное восстановление и регенерацию одновременно с повреждением.

[6] С глобальной тенденцией к старению, старение клеток, более короткие теломеры и снижение уровня некоторых замедляющих старение молекул вызывают хроническое воспаление в легких, которое может являться непосредственной причиной эмфиземы, которая, как известно, вызвана сужением небольших дыхательных путей и разрушением эластина в ткани легких. Патогенез и биохимические изменения этой сенильной эмфиземы очень схожи с общей эмфиземой. Т.к. эмфизема является необратимой, подобно астме или бронхиту, а необратимой, ее очень трудно лечить, и не существует терапевтических или профилактических лекарственных средств, с помощью которых можно эффективно лечить эмфизему.

[7] В частности, белок эластин, являющийся компонентом внеклеточного матрикса (ECM), является очень важным белком, обеспечивающим эластичность и эластическую тягу, необходимые для функции газообмена альвеол. Когда альвеолярная стенка разрушена или повреждена из-за снижения продукции эластина или стимуляции деградации эластина, альвеолярная стенка становится невосстановимой, и, таким образом, возникает проблема при дилатации-констрикции альвеол, т.е. дыхании, что в конечном итоге приводит к ХОБЛ.

[8] Т.к. ХОБЛ становится важной глобальной проблемой при тенденции к старению, возникает вопрос, можно ли проводить лечение и профилактику ХОБЛ, вызванной старением. До недавнего времени лечение или профилактику ХОБЛ считали маловероятными, т.к. легкие известны как органы, которые не могут восстанавливаться или регенерировать. Однако, как доказано в исследовании Butler et al., 2012, т.к. продемонстрировано, что ткани легких взрослых являются органами, которые могут регенерировать, в нескольких недавних исследованиях с помощью клеточно-биологических доказательств и механизмов показано, что группа эпителиальных клеток легких обладает способностью к самодифференцировке и пролиферации, и, таким образом, поврежденные или подвергнутые дегенерации альвеолы могут восстанавливаться или регенерировать. Таким образом, в будущем ожидают более активных исследований терапевтических и профилактических лекарственных средств вместе с разработкой технологий регенерации и восстановления подвергнутых дегенерации альвеол.

[9] Как описано выше, ХОБЛ является заболеванием легких, отличающимся необратимым снижением поступления воздуха, возникающим и развивающимся из-за деструкции дыхательных путей и паренхимы, вызванной хроническим воспалением. Однако, как описано выше, ХОБЛ известна как заболевание, которое можно подвергать профилактике и лечению. В настоящее время, чаще всего используемые лекарственные средства против ХОБЛ по всему миру включают ингаляционные кортикостероиды (ICS) и антагонисты мускариновых рецепторов длительного действия (LAMA), являющиеся лекарственными средствами против астмы, и β-агонисты длительного действия (LABA), являющиеся лекарственными средствами против хронического бронхита и эмфиземы. Однако эти лекарственные средства не приводят к полному лечению ХОБЛ. В частности, т.к. ICS вводят напрямую в дыхательные пути, они имеют сильный локальный противовоспалительный эффект. Однако системные побочные эффекты могут усиливаться, когда стероиды, вводимые в дыхательные пути, распространяются от альвеол в кровь и по всему организму. Побочные эффекты этих существующих лекарственных средств, могут заставлять пациентов нервничать и, в тяжелых случаях, могут приводить к отказу от введения, и, таким образом, на рынке крайне желательна разработка лекарственных средств с меньшим количеством побочных эффектов.

[10] ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая задача

[11] В контексте решения указанных выше задач настоящее изобретение относится к рекомбинантному белку и превосходной композиции для профилактики или лечения заболевания легких, содержащей по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белка HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1), гена, кодирующего белок HAPLN1, и эффективного средства, способствующего экспрессии или активации функций белка или гена HAPLN1, в качестве активного ингредиента.

[12] Дополнительные аспекты будут частично изложены в последующем описании, и частично будут очевидны из описания, или их можно понять при практическом осуществлении вариантов осуществления настоящего изобретения.

[13] Решение задачи

[14] Рекомбинантный белок по настоящему изобретению может являться рекомбинантным гиалуронан/протеогликан-связывающим белком 1 (HAPLN1), имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.

[15] Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболевания легких по настоящему изобретению может содержать по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белка HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1), гена, кодирующего белок HAPLN1, и эффективного средства, способствующего экспрессии или активации функций белка или гена HAPLN1, в качестве активного ингредиента.

[16] Композиция функционального продукта оздоровительного питания для профилактики или улучшения заболеваний легких по настоящему изобретению может содержать по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белка HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1), гена, кодирующего белок HAPLN1, и эффективного средства, способствующего экспрессии или активации функций белка или гена HAPLN1, в качестве активного ингредиента.

[17] Полезные эффекты изобретения

[18] Композиция имеет мало побочных эффектов по сравнению с существующими терапевтическими средствами для лечения заболеваний легких, и, таким образом, с помощью нее можно безопасно и эффективно осуществлять профилактику или лечение заболеваний легких, увеличивающихся с каждым годом вместе с глобальной тенденцией к старению.

[19] Следует понимать, что описанные варианты осуществления следует рассматривать исключительно в описательном смысле, а не как ограничение. Описание признаков или аспектов каждого варианта осуществления, как правило, следует рассматривать как подходящее для других схожих признаков или аспектов других вариантов осуществления. Хотя один или более вариантов осуществления описаны со ссылкой на фигуры, специалистам в этой области будет понятно, что можно осуществлять различные изменения формы и подробностей без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения, определяемых в формуле изобретения.

[20] КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[21] Указанные выше и другие аспекты, признаки и преимущества некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения будут более очевидны из следующего описания, учитываемого в совокупности с сопутствующими чертежами, на которых:

[22] на фиг. 1A, 1B и 1C показаны результаты экспериментов на альвеолах старых мышей в соответствии с одним из экспериментальных примеров в настоящем описании, где на фиг. 1A приведены микроскопические изображения альвеолярных тканей после окрашивания, а на фиг. 1B и 1C приведены графики, на которых показан количественный анализ плотности альвеол, на фиг. 1A, 1B и 1C обозначение "молодые - физиологический раствор" соответствует группе, полученной посредством введения фосфатно-солевого буфера (PBS) нормальной контрольной группе (группе молодых), обозначение "старые - физиологический раствор" соответствует группе, полученной посредством введения PBS старой контрольной группе (группе старых), и обозначение "старые - rhHAPLN1" соответствует группе, полученной посредством введения rhHAPLN1, разведенного в PBS, группе старых, которой вводили rhHAPLN1 (группа старые+rhHAPLN1);

[23] на фиг. 2 приведена схема аэрозолизации в соответствии с одним из экспериментальных примеров в настоящем описании;

[24] на фиг. 3A, 3B и 3C показаны результаты экспериментов на группах ингаляции аэрозолей (группах AH) в соответствии с одним из экспериментальных примеров в настоящем описании, где на фиг. 3A приведены микроскопические изображения альвеолярных тканей в каждой группе после окрашивания, а на фиг. 3B и 3C приведены графики, на которых показаны результаты измерения их средних линейных интерцептов (MLI); и

[25] на фиг. 4A, 4B, и 4C показаны результаты экспериментов для групп интратрахеальных инстилляций (групп TI) в соответствии с одним из экспериментальных примеров в настоящем описании, где на фиг. 4A показаны микроскопические изображения альвеолярных тканей в каждой группе после окрашивания, а на фиг. 4B и 4C приведены графики, на которых показаны результаты измерения их MLI.

[26] ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[27] Далее ссылаются на варианты осуществления, примеры которых проиллюстрированы на сопутствующих чертежах, где повсеместно одинаковые ссылочные позиции относятся к одинаковым элементам. В связи с этим, варианты осуществления настоящего изобретения могут иметь разные формы, и их не следует истолковывать как ограниченные описаниями, приведенными в настоящем описании. Таким образом, варианты осуществления приведены ниже со ссылкой на фигуры исключительно для объяснения аспектов настоящего изобретения. В рамках изобретения термин "и/или" включает любые и все комбинации из одного или более из соответствующих перечисленных элементов. Такие выражения, как "по меньшей мере один из", предшествующие списку элементов, определяют весь список элементов и не определяют отдельные элементы из списка.

[28] Далее в настоящем описании настоящее изобретение будет описано более подробно.

[29] Авторы настоящего изобретения получали рекомбинантный гиалуронан/протеогликан-связывающий белок 1 (HAPLN1) и демонстрировали его эффект улучшения повреждения альвеол и его терапевтический эффект в модели хронической обструктивной болезни легких на животных, таким образом, осуществляя настоящее изобретение.

[30] В рамках изобретения термин "профилактика" относится ко всем действиям, посредством которых возникновение заболеваний легких или одного или более из его симптомов сдерживают или замедляют посредством введения фармацевтической композиции или композиции функциональных продуктов оздоровительного питания по настоящему изобретению. Кроме того, он включает лечение индивидуума с регрессированием заболевания для профилактики или избегания рецидивирования.

[31] В рамках изобретения термин "лечение" относится ко всем действиям, посредством которых заболевания легких или один или более из его симптомов изменяют к лучшему или благоприятно модифицируют, например, облегчают, уменьшают и устраняют, посредством введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

[32] В рамках изобретения термин "улучшение" относится ко всем действиям, посредством которых заболевания легких или один или более из его симптомов изменяют к лучшему или благоприятно модифицируют, например, облегчают, уменьшают и устраняют, посредством приема композиции функциональных продуктов оздоровительного питания по настоящему изобретению.

[33] В рамках изобретения термин "фармацевтическая композиция" относится к композиции, вводимой для конкретной цели, и в отношении целей по настоящему изобретению, термин "фармацевтическая композиция" относится к композиции, вводимой для профилактики или лечения заболеваний легких или одного или более из их симптомов.

[34] В рамках изобретения термин "функциональные продукты оздоровительного питания" относится к продуктам питания, производимым или обрабатываемым с использованием функционального сырья или ингредиентов, полезных для организма человека в соответствии с Законом о функциональных продуктах оздоровительного питания № 6727, и относится к продуктам питания, имеющим значительные медицинские и лекарственные эффекты, обрабатываемым так, чтобы они эффективно демонстрировали биорегуляторные функции, такие как профилактика или улучшение заболеваний легких, биологическая защита, иммунитет и восстановление, в отношении объектов по настоящему изобретению, в дополнение к снабжению питательными веществами.

[35] Настоящее изобретение относится к рекомбинантному гиалуронан/протеогликан-связывающему белку 1 (HAPLN1), имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.

[36] "HAPLN1" является белком, стабилизирующим гиалуроновую кислоту посредством связывания гиалуроновой кислоты с протеогликанами, и является белковым компонентом внеклеточного матрикса, впервые обнаруженным в суставах позвоночных.

[37] "Рекомбинантный HAPLN1" по настоящему изобретению является рекомбинантным белком, полученным с использованием HAPLN1.

[38] Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения заболевания легких, содержащей: по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белка HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1), гена, кодирующего белок HAPLN1, и эффективного средства, способствующего экспрессии или активации функций белка или гена HAPLN1, в качестве активного ингредиента.

[39] В некоторых вариантах осуществления белок HAPLN1, представленный в настоящем описании, может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 1. В некоторых из этих вариантов осуществления белок HAPLN1 может содержать аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или по меньшей мере 99,5% идентичности последовательности в отношении аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1. Кроме того, полипептид, представленный в настоящем описании, может включать пептид SEQ ID NO: 1, его фрагмент и пептид, в котором по меньшей мере одна, два, три, четыре, пять, шесть или семь аминокислот модифицированы.

[40] В рамках изобретения термин "идентичность" означает взаимосвязь между двумя или более полипептидными последовательностями, соответственно, что определяют посредством сравнения последовательностей. В этой области термин "идентичность" также означает степень родства последовательности между полипептидными последовательностями, соответственно, что определяют по совпадению между цепями таких последовательностей. "Идентичность" легко можно вычислять известными способами, например, с использованием программного обеспечения BLAST (Basic Local Alignment Search Tool от National Center for Biological Information (NCBI)) версии 2.2.1 с параметрами по умолчанию.

[41] В некоторых вариантах осуществления некоторые аминокислоты в пептиде, изменяющие физико-химические характеристики полипептида SEQ ID NO: 1, можно модифицировать в объеме настоящего изобретения. Например, аминокислоты можно модифицировать, чтобы пептид имел повышенную ферментативную, химическую или термическую стабильность, измененную субстратную специфичность и сдвинутый оптимальный pH.

[42] Рекомбинантный HAPLN1 может обладать эффектом улучшения повреждения альвеол, вызванного старением или снижением эластина, и, таким образом, его можно использовать в качестве фармацевтической композиции для профилактики или лечения заболевания легких. Кроме того, в соответствии с одним из экспериментальных примеров в настоящем описании, подтверждено, что рекомбинантный HAPLN1 демонстрирует значительные терапевтические эффекты в модели хронической обструктивной болезни легких на животных.

[43] В рамках изобретения термин "средство" относится к любому веществу, включая, в качестве неограничивающих примеров, химическое соединение, низкомолекулярное соединение, антитело, пептидный миметик, пептид или белок.

[44] В рамках изобретения термин "эффективное средство" относится к средству, способствующему экспрессии HAPLN1, стимулирующему экспрессию белка или гена HAPLN1; или HAPLN1-активирующему средству, активирующему функции белка или гена HAPLN1. В рамках изобретения термин "эффективное средство" включает различные соединения, белки или пептиды, последовательности оснований и т.п., способные повышать экспрессию гена HAPLN1 или белка HAPLN1 и/или его фрагмента или активирующие функции белка или гена HAPLN1. Активирующее средство также включает различные метаболиты, предшественники или фармацевтические эквиваленты соединений, белков или пептидов или последовательности оснований.

[45] В фармацевтической композиции по настоящему изобретению заболевание легких может являться одним или более, выбранным, в качестве неограничивающих примеров, из группы, состоящей из хронического бронхита, астмы, эмфиземы и хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), и заболевание легких может включать различные заболевания, вызванные повреждением легких.

[46] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получать способом, общепринятым в области фармацевтики. В дополнение к активному ингредиенту, фармацевтическую композицию можно смешивать с подходящим фармацевтически приемлемым носителем, в зависимости от состава, и она может дополнительно включать эксципиенты, разбавители, дисперсанты, эмульгаторы, буферы, стабилизаторы, связывающие средства, разрыхлители, растворители и т.д., при необходимости. Подходящими носителями являются те, которые не мешают активности и свойствам рекомбинантного HAPLN1 по настоящему изобретению, и их можно по-разному выбирать, в зависимости от лекарственной формы и состава.

[47] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно использовать в любой лекарственной форме и, более конкретно, ее можно составлять в пероральных лекарственных формах, или парентеральных лекарственных формах, таких как препараты для наружного использования, суппозитории и стерильные инъецируемые растворы в соответствии с общепринятым способом.

[48] Помимо пероральных лекарственных форм, твердая лекарственная форма может находиться в форме таблеток, пилюль, порошков, гранул, капсул и т.д., и ее можно получать посредством смешивания по меньшей мере с одним из эксципиентов, например, крахмалом, карбонатом кальция, сахарозой, лактозой, сорбитом, маннитом, целлюлозой, желатином и т.д. В дополнение к простым эксципиентам, также можно включать смазочные средства, такие как стеарат магния, тальк и т.д. Кроме того, лекарственная форма в капсуле может дополнительно включать жидкий носитель, такой как жирное масло, в дополнение к указанным выше веществам.

[49] Среди пероральных лекарственных форм, жидкие лекарственные формы соответствуют суспензиям, жидким растворам для внутреннего использования, эмульсиям, сиропам и т.д. В дополнение к воде и парафиновому маслу, которые являются общеупотребительными простыми разбавителями, можно включать различные эксципиенты, такие как увлажнители, подсластители, ароматизаторы, консерванты и т.д.

[50] Парентеральные лекарственные формы могут включать стерильный водный раствор, неводный растворитель, суспензию, эмульсию, лиофилизированный состав и суппозиторий. В качестве неводного растворителя и суспензии можно использовать пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, инъецируемые сложные эфиры, такие как этилолеат, и т.д. В качестве основы для суппозиториев можно использовать витепсол, макрогол, Tween 61, масло какао, лауриновый жир, глицерожелатин и т.д. Настоящее изобретение не ограничено ими, и можно использовать любой подходящий состав, известный в этой области.

[51] К фармацевтической композиции по настоящему изобретению можно дополнительно добавлять кальций или витамин D₃ для повышения терапевтической эффективности.

[52] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить в фармацевтически эффективном количестве.

[53] В рамках изобретения термин "фармацевтически эффективное количество" относится к количеству, достаточному для лечения заболеваний с разумным соотношением польза/риск, подходящим для любого лечения и невызывающим неблагоприятные эффекты.

[54] Эффективный уровень дозы фармацевтической композиции можно определять в зависимости от факторов, включающих цель использования, возраст пациента, пол, массу тела и состояние здоровья, тип и тяжесть заболевания, активность лекарственного средства, чувствительность к лекарственному средству, способ введения, время введения, путь введения, скорость выведения, длительность лечения, лекарственные средства, используемые в комбинации или используемые одновременно, и других факторов, известных в области медицины. Например, хоть и не постоянно, фармацевтическую композицию, как правило, можно вводить в количестве от 0,001 мг/кг до 100 мг/кг, предпочтительно - от 0,01 мг/кг до 10 мг/кг от одного до нескольких раз в сутки. Вводимая доза не ограничивает объем настоящего изобретения в каком-либо аспекте.

[55] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить любому животному, у которого могут развиться заболевания легких, и животное может включать, например, людей и приматов, а также домашний скот, такой как крупный рогатый скот, свиньи, лошади, собаки и т.д.

[56] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить подходящим способом введения в зависимости от типа состава и различными путями, пероральным или парентеральным путем, при условии, что она может достигать целевой ткани. Способ введения конкретно не ограничен, но введение можно осуществлять общепринятым способом, например, перорально, ректально, внутривенно, внутримышечно или локально, подкожно, посредством ингаляции, инъекции в эндометрий или интрацеребровентрикулярной инъекции.

[57] Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно использовать в отдельности или в комбинации с хирургическим вмешательством или другим медикаментозным лечением для профилактики или лечения заболеваний легких.

[58] Кроме того, настоящее изобретение относится к композиции функциональных продуктов оздоровительного питания для профилактики или улучшения заболевания легких, содержащей по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белка HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1), гена, кодирующего белок HAPLN1, и эффективного средства, способствующего экспрессии или активации функций белка или гена HAPLN1, в качестве активного ингредиента.

[59] В некоторых вариантах осуществления белок HAPLN1, представленный в настоящем описании, может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 1. В некоторых из этих вариантов осуществления белок HAPLN1 может содержать аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или по меньшей мере 99,5% идентичности последовательности в отношении аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1. Кроме того, полипептид, представленный в настоящем описании, может включать пептид SEQ ID NO: 1, его фрагмент и пептид, в котором по меньшей мере одна, две, три, четыре, пять, шесть или семь аминокислот модифицированы.

[60] Рекомбинантный HAPLN1 может обладать эффектом улучшения повреждения альвеол, вызванного старением или снижением эластина, и, таким образом, его можно использовать в качестве композиции функциональных продуктов оздоровительного питания для профилактики или улучшения заболевания легких.

[61] В контексте композиции функциональных продуктов оздоровительного питания по настоящему изобретению заболевание легких может являться одним или более, выбранным из группы, состоящей, в качестве неограничивающих примеров, из хронического бронхита, астмы, эмфиземы и хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), и заболевание легких может включать различные заболевания, вызванные повреждением легких.

[62] В контексте композиции функциональных продуктов оздоровительного питания по настоящему изобретению, функциональные продукты оздоровительного питания можно получать в порошке, гранулах, таблетках, капсулах, сиропах, напитках и т.д. для профилактики или улучшения заболевания легких, и форма продукта питания не ограничена и может включать все продукты питания в общепринятом значении этого термина. Например, продукты питания могут включать безалкогольные напитки и различные алкогольные напитки, фрукты и продукты их переработки (консервированные фрукты, джемы и т.д.), рыбу, мясо и продукты его переработки (ветчину, бекон и т.д.), хлеб и макаронные изделия, печенье и закуски, молочные продукты (сливочное масло, сыры и т.д.) и т.д. и могут включать все функциональные продукты питания в общепринятом значении этого термина. Кроме того, продукт питания может включать продукт питания, используемый в качестве корма для животных.

[63] Композицию функциональных продуктов оздоровительного питания по настоящему изобретению можно получать посредством дополнительного включения добавок, подходящих для использования в пище, и других подходящих вспомогательных средств, общеупотребительных в этой области.

[64] Пригодность пищевых добавок определяют спецификацией и стандартом соответствующего изделия в соответствии с Общими правилами и общими испытаниями в Korean Food Additives Code, одобренного Министерством безопасности пищевых продуктов и медикаментов республики Корея, если не указано иначе. Изделия, приведенные в указанном "Food Additives Code" являются, например, синтетическими добавками, такими как кетоны, глицин, цитрат калия, никотиновая кислота, коричная кислота и т.д.; природными добавками, такими как краситель на основе хурмы, экстракт корня солодки, микрокристаллическая целлюлоза, краситель из гаоляна, гуаровая камедь и т.д.; и смешанные добавки, такие как L-глутамат натрия, щелочные добавки для макаронных изделий, консерванты, анилиновые красители и т.д.

[65] Другие вспомогательные средства могут дополнительно включать, например, ароматизаторы, природные углеводы, подсластители, витамины, электролиты, красители, пектиновые кислоты, альгиновые кислоты, органические кислоты, защитные коллоидные загустители, регуляторы pH, стабилизаторы, консерванты, глицерин, спирты, карбонизаторы и т.д. В частности, в качестве природного углевода, можно использовать моносахариды, такие как глюкоза и фруктоза, дисахариды, такие как мальтоза и сахароза, полисахариды, такие как декстрины и циклодекстрины, сахарный спирт, такой как ксилит, сорбит, эритрит и т.д. Примеры подсластителей могут включать природные подсластители, такие как тауматин и экстракт стевии, или синтетические подсластители, такие как сахарин и аспартам и т.д.

[66] Эффективную дозу рекомбинантного HAPLN1, включенного в функциональные продукты оздоровительного питания по настоящему изобретению, можно соответствующим образом корректировать в соответствии с целью использования, такой как профилактика или улучшения заболеваний легких. Т.к. композиция включает пищу в виде сырья, она обладает преимуществом, состоящим в том, что не имеет побочных эффектов, которые могут возникать при приеме общепринятых лекарственных средств в течение длительного периода времени. Композиция также исключительна в силу своей портативности, и таким образом, ее можно вводить в качестве дополнительного средства для профилактики или улучшения заболевания легких.

[67] Далее настоящее изобретение для лучшего понимания будет подробно описано со ссылкой на примеры вариантов осуществления. Однако следующие примеры вариантов осуществления являются исключительно иллюстративными, и объем настоящего изобретения ими не ограничен. Примеры вариантов осуществления настоящего изобретения приведены для лучшего объяснения настоящего изобретения специалисту в этой области.

[68] Кроме того, настоящее изобретение может относиться к способу профилактики или лечения заболевания легких у нуждающегося в этом индивидуума, включающему введение индивидууму фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

[69] Индивидуум, предпочтительно, является млекопитающим, включая людей, и может представлять собой пациентов, нуждающихся в лечении заболеваний легких. Термин "пациент" может включать пациентов, подвергаемых лечению заболевания легких, пациентов, подвергавшихся лечению заболевания легких, и пациентов, нуждающихся в лечении заболевания легких, а также пациентов, подвергнутых хирургическим вмешательствам для лечения заболевания легких. Введение фармацевтической композиции по настоящему изобретению индивидууму может позволить облегчить или лечить заболевание легких.

[70] В рамках изобретения термин "облегчение" относится к любому действию, посредством которого уменьшают заболевание легких, или пользе от введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят в фармацевтически эффективном количестве.

[71] В рамках изобретения термин "введение" относится к введению фармацевтической композиции по настоящему изобретению индивидууму любым подходящим способом. Пути введения могут включать, в качестве неограничивающих примеров, интратрахеальную или интрабронхиальную инстилляцию или ингаляцию, или любые типы инъекций, или любые типы пероральных лекарственных средств, или любые типы трансдермальных лекарственных средств. В качестве одного из примеров, фармацевтическую композицию можно вводить в форме аэрозоля или посредством инстилляции.

[72] Введение фармацевтической композиции по настоящему изобретению можно осуществлять с помощью аэрозоля, который можно получать с помощью небулайзера, или с помощью инстилляции. Фармацевтическую композицию можно вводить в отдельности или с носителем, таким как физиологический раствор, DMSO, спирт или вода. Ее также можно использовать в качестве носителя для интратрахеального введения различных средств, таких как средства, предотвращающие деградацию эластических волокон или способствующие их ресинтезу. Эффективная суточная доза композиции составляет приблизительно от 0,001 мг/кг до 100 мг/кг, предпочтительно - от 0,01 мг/кг до 10 мг/кг массы тела. Вводимая доза не ограничивает объем настоящего изобретения в каком-либо аспекте. Например, количество фармацевтической композиции, вводимое человеку интратрахеально в сутки, может варьироваться от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг массы тела. Предпочтительно, суточная доза составляет от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг массы тела человека, подвергаемого лечению (в сутки).

[73] Кроме того, время, за которое вводят фармацевтическую композицию, можно варьировать, как известно в этой области, для достижения желаемых результатов. Например, фармацевтическую композицию можно вводить в виде аэрозоля в течение от приблизительно 30 секунд до приблизительно 1 часа по схеме лечения, от 1 до 5 раз в сутки или до полного введения желаемой суточной дозы.

[74] Кроме того, фармацевтическую композицию для профилактики или лечения заболевания легких, содержащую: по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белка HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1), гена, кодирующего белок HAPLN1, и эффективного средства, способствующего экспрессии или активации функций белка или гена HAPLN1, в качестве активного ингредиента по настоящему изобретению, можно вводить одновременно/последовательно в комбинации с другими существующими лекарственными средствами для лечения заболеваний легких или существующими способами лечения. Такое введение может являться однократным или многократным введением. Важно вводить количество, которое позволит достичь максимального эффекта с минимальными побочными эффектами с учетом всех факторов. Специалисты в этой области легко могут определять количество.

[75] <Пример 1> Получение рекомбинантного HAPLN1 человека (rhHAPLN1)

[76] 1. Аминокислотная последовательность рекомбинантного HAPLN1 человека

[77] Аминокислотная последовательность, составляющая рекомбинантный HAPLN1, является следующей:

[78] DHLSDNYTLDHDRAIHIQAENGPHLLVEAEQAKVFSHRGGNVTLPCKFYRDPTAFGSGIHKIRIKWTKLTSDYLKEVDVFVSMGYHKKTYGGYQGRVFLKGGSDSDASLVITDLTLEDYGRYKCEVIEGLEDDTVVVALDLQGVVFPYFPRLGRYNLNFHEAQQACLDQDAVIASFDQLYDAWRGGLDWCNAGWLSDGSVQYPITKPREPCGGQNTVPGVRNYGFWDKDKSRYDVFCFTSNFNGRFYYLIHPTKLTYDEAVQACLNDGAQIAKVGQIFAAWKILGYDRCDAGWLADGSVRYPISRPRRRCSPTEAAVRFVGFPDKKHKLYGVYCFRAYN (SEQ ID NO: 1)

[79] 2. Экспрессия, очистка и консервация рекомбинантного белка HAPLN1 человека (rhHAPLN1)

[80] Для получения белка rhHAPLN1 (регистрационный номер гена 2678736) с помощью ДНК-вектора, кодирующего аминокислотную последовательность rhHAPLN1, трансфицируют клетки Expi™ 293 (ThermoFisher Scientific Co., Waltham, MA, USA) в качестве клеток-хозяев. Для очистки секреторного сигнального пептида на амино-конец встраивали 10 гистидинов (H, His) и участок распознавания протеазы TEV и экспрессировали. Через 3 дня после трансфекции вектора собирали среду для культивирования и очищали с помощью колонки HisTrap (GE Healthcare, IL, USA), а затем участок распознавания протеазы TEV расщепляли с помощью протеазы TEV, и молекулы, включающие гистидин, удаляли с использованием DynaBeads (Thermo Fisher Scientific). Полученный таким образом раствор подвергали диализу с использованием 40 мМ Tris-HCl и 1 M NaCl при pH 8,0 в течение 16 ч. Концентрация белка в конечном продукте очистки составляла 0,11 мг/мл, и его аликвотировали по однократным дозам с использованием 20 мМ Tris-HCl, 0,5 M NaCl при pH 8,0, 50% глицерина в качестве растворителя, а затем хранили в холодильной камере при -20°C перед использованием.

[81] <Экспериментальный Пример 1> Исследование эффекта улучшения альвеолярной архитектуры у старых мышей посредством повторного интраперитонеального введения rhHAPLN1

[82] 1. Получение и выращивание экспериментальных животных

[83] Что касается экспериментальных животных, самцов мышей C57BL/6J (Young Bio Co., Ltd., Korea) возрастом 2 месяца определяли как молодых мышей, а самцов мышей C57BL/6J возрастом 20 месяцев определяли как старых мышей. У животных был свободный доступ к воде и корму, и в камере для размножения поддерживали температуру от 21°C до 24°C, влажность от 40% до 60% и цикл 12 часов освещения/12 часов темноты.

[84] Пять молодых мышей приписывали в нормальную контрольную группу (группу молодых), и каждые пять старых мышей приписывали в контрольную группу старых (группу старых) и группу старых, которым вводили rhHAPLN1 (группу старые+rhHAPLN1). rhHAPLN1, разведенные в фосфатно-солевом буфере (PBS), интраперитонеально инъецировали группе старых, которым вводили rhHAPLN1 (группе старые+rhHAPLN1) (IP-инъекция) в дозе 0,1 мг/кг в объеме 80 мкл за раз, что осуществляли 3 раза в неделю всего в течение 3 недель. Другим двум контрольным группам вводили равное количество PBS аналогичным образом.

[85] 2. Окрашивание и микроскопия альвеолярной ткани

[86] К концу эксперимента осуществляли перфузию сердца, а затем левое легкое рассекали на верхнюю и нижнюю части, фиксировали нейтральным забуференным 10%-ным формалином (NBF) и получали парафиновые тканевые срезы таким образом, что был виден поперечный срез верхнего фрагмента. Тканевые срезы окрашивали гематоксилином и эозином (H&E) и фотографировали с использованием микроскопа Ni-U (Nikon) и цифровой камеры DS-Ri1 (Nikon), и результаты показаны на фиг. 1(A) (масштабная линейка=100 мкм).

[87] Кроме того, что касается окрашенных тканевых срезов каждого индивидуума, средние линейные интерцепты (MLI) вычисляли с использованием программного обеспечения Image J для количественного анализа альвеолярной плотности. Более высокое значение MLI свидетельствует о меньшей площади поверхности альвеол, и его используют в качестве показателя, свидетельствующего о тяжести эмфиземы или хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Уравнение представляет собой Lm (мкм)=количество пересечений/(расстояние по сетке координат (мкм) × количество линий). После измерения среднего значения трех случайных областей на животное осуществляли статистический анализ значений для пяти животных с использованием программного обеспечения SigmaPlot 12.0 и GraphPad Prism 8. Результаты показаны на фиг. 1(B).

[88] Как показано на фиг. 1(A) и 1(B), значения MLI альвеол (мкм) старых мышей повышались на приблизительно 141% по сравнению с молодыми мышами (p<0,001). В то же время, обнаружили, что это повышение по причине самого старения снижалось на приблизительно 56% при введении rhHAPLN1 (p<0,0435).

[89] <Экспериментальный пример 2> Эффективность rhHAPLN1 в модели индуцируемой свиной панкреатической эластазой (PPE) ХОБЛ

[90] 1. Получение и выращивание экспериментальных животных

[91] Что касается экспериментальных животных, использовали самок мышей C57BL6/N (Young Bio, Republic of Korea) возрастом от 6 до 10 недель и массой от 20 г до 25 г, и мышей разделяли по пять на группу. У животных был свободный доступ к воде и корму, и в камере для размножения поддерживали температуру от 21°C до 24°C, влажность от 40% до 60% и цикл 12 часов освещения/12 часов темноты.

[92] 2. Индуцирование ХОБЛ

[93] Модель на мышах с индуцированной ХОБЛ получали, как описано в Suki et al (2017, Methods Mol.Biol.1639:67-75) и Wright et al (2008, Am J Physiol Lung Mol Physiol 295: L1-L15).

[94] Для ингаляции эластазы в легкие сначала в Elastin Products Company Inc. (Owensville, Missouri, USA) приобретали свиную панкреатическую эластазу (EC134; PPE) и 6 МЕ/30 мкл вводили животному раз в сутки перед введением лекарственного средства. Введение осуществляли, разделяя животных на две группы в зависимости от способа ингаляции.

[95] Более подробно, группе ингаляции аэрозоля (AH) пероральное введение осуществляли с использованием иглы для орального зонда калибра 20G (0,9×50 мм). Его вводили, осторожно открывая рот, вытягивая язык, капая раствор эластазы на его корень, т.е. на дистальный отдел ротоглотки, одновременно блокируя обе ноздри для вызывания ингаляции. В то же время, в группе интратрахеальной инстилляции (TI) введение осуществляли, вызывая спонтанную ингаляцию мышами посредством инстилляции в носовую полость с использованием пипетки Eppendorf. Мышей взвешивали дважды в неделю, и каждую группу разделяли на четыре подгруппы для введения композиции лекарственного средства.

[96] 3. Эффективность композиции лекарственного средства

[97] Группу AH разделяли на AH-1: группу без введения PPE (нормальную), AH-2: группу PPE+физиологический раствор, AH-3: группу PPE+rhHAPLN1, и AH-4: группу PPE+гиалуроновая кислота (HA), и группу TI разделяли на TI-1: группу без введения PPE (нормальную), TI-2: группу PPE+физиологический раствор, TI-3: группу PPE+rhHAPLN1, и TI-4: группу PPE+HA. В этом случае "HA" означает гиалуроновую кислоту, используемую в качестве положительного контроля, т.к. известно, что она эффективна против ХОБЛ. Введение и концентрацию HA определяли в соответствии с Cantor et al (2005, Experimental Lung Research, 31:417-430), и таким образом, приобретали и использовали натриевую соль полученной из Streptococcus equi гиалуроновой кислоты (Sigma-Aldrich; St.Louis, MO, USA, кат. № 73641-10MG).

[98] Каждый образец фармацевтической композиции вводили пять раз с использованием системы массового введения, в частности, аэрозольной камеры (Data Science International) для аэрозолизации с 1-ого дня после введения эластазы (шариковый расходомер 3, аэрозоль 1 час, мощность 30%). Схема аэрозолизации показана на фиг. 2.

[99] Каждый образец превращали в аэрозоль с помощью распылителя в концентрации 0,33% (масс./об.) rhHAPLN1 и 5,71% (масс./об.) HA, доводя их объем до 6,8 мл на одно введение с использованием физиологического раствора в качестве растворителя, через 1 день после последней аэрозолизации в 21-ый день осуществляли перфузию сердца под анестезией. Затем левое легкое рассекали горизонтально, отбирали нижнюю часть, фиксировали нейтральным забуференным 10%-ным формалином (NBF) и парафиновый тканевой срез получали таким образом, что был виден поперечный срез верхнего фрагмента. Тканевые срезы окрашивали гематоксилином и эозином (H&E), фотографировали с использованием микроскопа Ni-U (Nikon) и цифровой камеры DS-Ri1 (Nikon) с 200-кратным увеличением для получения визуальных данных о ткани альвеол (масштабная линейка=100 мкм) и измеряли MLI альвеол. Более высокое значение MLI свидетельствует о меньшей площади поверхности альвеол, и его используют в качестве показателя, свидетельствующего о тяжести эмфиземы или ХОБЛ. Уравнение представляет собой Lm (мкм)=количество пересечений/(расстояние по сетке координат (мкм) × количество линий). После измерения среднего значения трех случайных областей на животное осуществляли статистический анализ значений для пяти животных с использованием программного обеспечения SigmaPlot 12.0 и GraphPad Prism 8.

[100] Результаты экспериментов в группах AH показаны на фиг. 3, и результаты экспериментов в группах TI показаны на фиг. 4.

[101] На фиг. 3 показаны результаты в группах AH, и как показано на фиг. 3A-3C, группа, которой вводили PPE, (AH-2) с 21,2 мкм демонстрировала приблизительно 1,5-кратное повышение по сравнению с нормальной группой без введения (AH-1) с 13,8 мкм (p<0,001). Группа, которой вводили rhHAPLN1, (AH-3) с 14,5 мкм демонстрировала приблизительно 95%-ное снижение по сравнению с группой, которой вводили PPE, с 21,2 мкм (p<0,00002), что свидетельствует о восстановлении почти до нормального состояния.

[102] В отличие от этого, с точки зрения концентрации, группа, которой вводили HA, (AH-4) с 5,71% (масс./об.), что составляло приблизительно в 17 больше, чем 0,33% (масс./об.), демонстрировала приблизительно 73%-ное снижение (p<0,002), что свидетельствовало о том, что введение положительного контроля HA демонстрировало немного меньшую эффективность, чем введение rhHAPLN1, демонстрировавшее приблизительно 95%-ное снижение.

[103] На фиг. 4 показаны результаты в группах TI, и как показано на фиг. 4A-4C, группа, которой вводили PPE (TI-2), с 22,1 мкм демонстрировала снижение в приблизительно 1,6 раз по сравнению с нормальной группой без введения (TI-1) с 13,8 мкм (p<0,001). Группа, которой вводили rhHAPLN1, (TI-3) с 16,1 мкм демонстрировала приблизительно 72%-ное снижение по сравнению с группой, которой вводили PPE, (TI-2) с 22,1 мкм (p<0,0009).

[104] В отличие от этого, с точки зрения концентрации, группа, которой вводили HA, (TI-4) с 5,71% (масс./об.), что составляло приблизительно в 17 больше, чем 0,33% (масс./об.), демонстрировала приблизительно 64%-ное снижение (p<0,00123), что свидетельствовало о том, что введение положительного контроля HA также демонстрировало немного меньшую эффективность, чем введение rhHAPLN1, демонстрировавшее приблизительно 72%-ное снижение.

[105] Рекомбинантный HAPLN1 по настоящему изобретению может обладать превосходными эффектами улучшения повреждения альвеол, вызванного старением или снижением эластина, и, таким образом, его можно использовать в качестве фармацевтической композиции или композиции функциональных продуктов оздоровительного питания для профилактики или лечения заболеваний легких, таких как хронический бронхит, астма, эмфизема, хроническая обструктивная болезнь легких и т.д., вызванных старением или снижением эластина.

[106] Композиция обладает небольшим количеством побочных эффектов по сравнению с существующими терапевтическими средствами для заболеваний легких, и, таким образом, ее можно безопасно и эффективно использовать для профилактики или лечения заболеваний легких, частота которых растет с каждым годом вместе с глобальной тенденцией к старению.

[107] Следует понимать, что варианты осуществления, представленные в настоящем описании, следует истолковывать в описательном смысле, а не для ограничения. Описания признаков или аспектов каждого варианта осуществления, как правило, следует рассматривать как подходящие для других схожих признаков или аспектов в других вариантах осуществления. Хотя один или более вариантов осуществления описаны со ссылкой на фигуры, специалистам в этой области будет понятно, что можно осуществлять различные изменения их формы и подробностей без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения, определяемого в следующей формуле изобретения.

--->

<110> HAPLNSCIENCE INC.

<120> КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛЕГКИХ,

СОДЕРЖАЩАЯ ГИАЛУРОНАН/ПРОТЕОГЛИКАН-СВЯЗЫВАЮЩИЙ БЕЛОК 1

<130> PX063437OV

<150> KR 10-2020-0012742

<151> 2020-02-03

<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 339

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Рекомбинантный HAPLN1 человека

<400> 1

Asp His Leu Ser Asp Asn Tyr Thr Leu Asp His Asp Arg Ala Ile His

1 5 10 15

Ile Gln Ala Glu Asn Gly Pro His Leu Leu Val Glu Ala Glu Gln Ala

20 25 30

Lys Val Phe Ser His Arg Gly Gly Asn Val Thr Leu Pro Cys Lys Phe

35 40 45

Tyr Arg Asp Pro Thr Ala Phe Gly Ser Gly Ile His Lys Ile Arg Ile

50 55 60

Lys Trp Thr Lys Leu Thr Ser Asp Tyr Leu Lys Glu Val Asp Val Phe

65 70 75 80

Val Ser Met Gly Tyr His Lys Lys Thr Tyr Gly Gly Tyr Gln Gly Arg

85 90 95

Val Phe Leu Lys Gly Gly Ser Asp Ser Asp Ala Ser Leu Val Ile Thr

100 105 110

Asp Leu Thr Leu Glu Asp Tyr Gly Arg Tyr Lys Cys Glu Val Ile Glu

115 120 125

Gly Leu Glu Asp Asp Thr Val Val Val Ala Leu Asp Leu Gln Gly Val

130 135 140

Val Phe Pro Tyr Phe Pro Arg Leu Gly Arg Tyr Asn Leu Asn Phe His

145 150 155 160

Glu Ala Gln Gln Ala Cys Leu Asp Gln Asp Ala Val Ile Ala Ser Phe

165 170 175

Asp Gln Leu Tyr Asp Ala Trp Arg Gly Gly Leu Asp Trp Cys Asn Ala

180 185 190

Gly Trp Leu Ser Asp Gly Ser Val Gln Tyr Pro Ile Thr Lys Pro Arg

195 200 205

Glu Pro Cys Gly Gly Gln Asn Thr Val Pro Gly Val Arg Asn Tyr Gly

210 215 220

Phe Trp Asp Lys Asp Lys Ser Arg Tyr Asp Val Phe Cys Phe Thr Ser

225 230 235 240

Asn Phe Asn Gly Arg Phe Tyr Tyr Leu Ile His Pro Thr Lys Leu Thr

245 250 255

Tyr Asp Glu Ala Val Gln Ala Cys Leu Asn Asp Gly Ala Gln Ile Ala

260 265 270

Lys Val Gly Gln Ile Phe Ala Ala Trp Lys Ile Leu Gly Tyr Asp Arg

275 280 285

Cys Asp Ala Gly Trp Leu Ala Asp Gly Ser Val Arg Tyr Pro Ile Ser

290 295 300

Arg Pro Arg Arg Arg Cys Ser Pro Thr Glu Ala Ala Val Arg Phe Val

305 310 315 320

Gly Phe Pro Asp Lys Lys His Lys Leu Tyr Gly Val Tyr Cys Phe Arg

325 330 335

Ala Tyr Asn

<---

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине. Изобретение раскрывает возможность применения рекомбинантного гиалуронан/протеогликан-связывающего белка 1 (HAPLN1) или кодирующего его гена в составе фармацевтической композиции для лечения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 пр., 4 ил.

1. Фармацевтическая композиция для лечения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), содержащая белок HAPLN1 (гиалуронан/протеогликан-связывающий белок 1) или ген, кодирующий белок HAPLN1, в эффективном количестве в качестве активного ингредиента.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, где белок HAPLN1 содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 1.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, где белок HAPLN1 улучшает повреждения альвеол, вызванные старением или снижением эластина.

4. Способ лечения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ)у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму фармацевтической композиции по п.1.

5. Способ по п.4, где белок HAPLN1 улучшает повреждения альвеол, вызванные старением или снижением эластина.