ПРИМЕНЕНИЕ ПРОИЗВОДНОГО 5-(4-МЕТИЛФЕНИЛ)-1Н-ПИРАЗОЛ-3-АМИНА В КАЧЕСТВЕ АНТИГЕЛЬМИНТНОГО И ЛАРВИЦИДНОГО СРЕДСТВА Российский патент 2024 года по МПК A61K31/415 A61P33/00 A61P33/10 A01N43/56 A01P5/00 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к применению гетероциклических соединений – производных 5-фенил-1Н-пиразол-3-аминов, а именно 5-(4-метилфенил)-1H-пиразол-3-амину, имеющему формулу I:

который может найти применение в медицине в качестве антигельминтного и ларвицидного средства.

Изобретение может быть использовано в композициях с другими активными и вспомогательными соединениями и их фармацевтически приемлемыми солями для борьбы с антигельминтными болезнями животных и человека, а также в качестве ларвицидного средства.

Соединения общей формулы I были получены по описанной в литературе методике [1].

Наиболее близким техническим решением к предлагаемому является применение препарата пирантел [3]. Недостатком его является недостаточная эффективность применения на моделях антигельминтной и ларвицидной активности, а также более высокая токсичность.

Острая токсичность (LD₅₀) пирантела при введении мышам per os составляет 620 мг/кг [3].

Острая токсичность соединения I cоставляет 1280 - 1660 мг/кг при пероральном введении у мышей, что соответствует 3 классу токсичности. [4].

В соответствии с рекомендациями ВОЗ в качестве объектов исследований для определения ларвицидной активности служат личинки хиромонид (Diptera, Chiromonidae) [5], а также объектами для изучения антигельминтной активности химических соединений являются дождевые черви - европейский ночной выползок – Dandrobaena veneta (семейство Lumbricidae) [6].

Оценку ларвицидного действия соединения I проводили по следующей методике, изложенной в МУ 3.5.2.1759-03. Одновременно испытывали три концентрации, каждая в 3 повторностях. Контролем служили личинки хиромонид (Diptera, Chiromonidae) размерами 5±1 см, находившиеся в воде без добавления инсектицида. В качестве аналога, обладающего ларвицидным действием, использовался раствор имидаклоприда в концентрации 0,1% (производство «», Россия). Температура воды находилась в пределах 21 - 23°С. Подсчет погибших личинок проводили через определенные периоды: через 1, 2, 3 часа 20 минут (200 минут), а также – через 24 ч. Результаты ларвицидного действия оценивали по значению так называемой ларвицидной концентрации ЛК₅₀. Фиксировали время наступления смерти личинок [7]. Каждый опыт проводился в 3 повторах. Контролем являлись личинки, находившиеся в 50 мл воды очищенной без добавления соединения.

ЛК₅₀ для личинок (Diptera, Chiromonidae) возраста (L₄) составляет
0,50 - 0,150 мг/мл.

Результаты сравнительной оценки ларвицидной активности соединений и прототипа приведены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты ларвицидной активности соединения I

Соединения Кол. особей Вид особей Кол. неподвижных, % ЛК₅₀ 1 ч 2 ч 3ч 20 мин 24ч Имидаклоприд 20 Chironomidae 5 15 20 75 0,5 I 20 Chironomidae 5 10 75 100 0,15 Контроль 20 Chironomidae 0 0 2 5 0

Ларвицидная концентрация ЛК₅₀ соединения I составляет 0,15 мг/мл, что в 3,5 раза и 10 раз соответственно ниже концентрации имидаклоприда. Соединение I за 200 мин. способно снизить число личинок на 75% и через 1 сутки -100%.

Антигельминтную активность (АГА) синтезированного соединения I определяли на дождевых червях – на европейском ночном выползке – Dandrobaena veneta (семейство Lumbricidae). В чашку Петри с диаметром 80-100 мм наливали 10 мл три концентрации 0,1, 0,3 и 0,5 мг/мл водного раствора исследуемых соединений, помещали в него 10 особей длиной 7±1 см и оставляли под наблюдением при температуре 21-23°С. Фиксировали время наступления полной неподвижности червей по отсутствию двигательной активности и реакции на внешнее механическое воздействие. Каждый опыт проводился в 3 повторностях. В качестве контроля использовали дождевых червей, находившихся в 10 мл воды очищенной без добавления соединений. Препаратами сравнения являлись 0,1% суспензия пирантела («Medana Pharma S.A.», Польша) и измельченные таблетки левамизола 150 мг («Гедеон Рихтер», Венгрия) [9]. Результаты исследования антигельминтной активности приведены в виде средней величины неподвижных особей в % с обозначением средней ошибки в таблице 2.

Таблица 2

Результаты антигельминтной активности соединения I

Соединения Кол. особей Кол. неподвижных, % IC50 за 200 мин,
мг/ мл 1 ч 2 ч 200 мин 24ч Левамизол 10 0 20 ± 3,18 55±5,35 100 0,1 Пирантел 10 0 0 25±4,82 75±6,27 0,3 I 10 0 30±3,94 75±6,38 100 0,1 Контроль 10 0 0 2 4 -

В соответствии с методическими рекомендациями для определения антигельминтной активности соединения I проводилось изучение in vivo на спонтанно инвазированных животных [10]. Значительная распространенность среди кишечных гельминтозов наблюдается у токсокароза, основными распространителями которых выступают собаки [11]. Аналогом антигельминтного средства для лечения токсокароза является альбендазол [12]. С целью подтверждения антигельминтного действия соединение I были проведены исследования в примере 1.

Пример 1. С целью обнаружения токсокароза проведены скрининговые тесты иммуноферментного анализа. Была сформирована группа собак из 40 собак пород немецкая овчарка (32 собаки) и бельгийская овчарка (8 собак) в возрасте от 3 до 6 месяцев, у которых тест был положительным. Далее собаки были разделены по группам по методу пар-аналогов: 1 группа - опыт (соединение I), 2 группа - опыт (соединение I), 3 группа - эталон сравнения, аналог (альбендазол), 4 группа - контроль по 10 голов обоих полов (50% кобелей и 50% сук) в каждой группе. В качестве эталона сравнения применяли аналог антигельминтиков альбендазол в дозе 50 мг/кг, соединение I давали в дозе 10 мг/кг. В течение 5 дней препарат был дан в день 1 (1 прием), 2 день (2 прием), 3 день (3 прием) и 4 день (4 прием) собакам, у которых были установлены разная степень инвазированности Toxocara canis. Результаты антигельминтной активности приведены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты антигельминтной активности в отношении T.canis

Соединения Кол. собак Интенсивность инвазии – количество яиц гельминтов в 1 г фекалий до после 1
приема после 2 приема после 3
приема после 4 приема Альбендазол 10 3240 1000 420 0 0 I 10 3400 860 320 0 0 Контроль 10 3300 3160 3340 3380 3400

Определение степени инвазии Т.canis определяли методом Фюллеборна с последующей копроовоскопией фекальных масс [13]. Общую антигельминтную активность рассчитывали исходя из числа яиц, обнаруженных при копрологическом анализе, проведенном после применения препарата на 2-е сутки после приема, на 3-и сутки, на 4-е сутки, на 5-е сутки. Таким образом, в сравнении с прототипом альбендазолом, соединение I показало снижение степени инвазии после 1 приема на 74,71% (у прототипа – на 69,13%), после 2 приема – уменьшение степени инвазии составило 90,59% (у прототипа – 87,04%). На 4 и 5 день яиц токсокар при копроовоскопическом анализе обнаружено не было.

Таким образом, результаты антигельминтной активности соединений I превосходят прототип альбендазол.

Литература

1. Elnagdi M.H., Abdel-Galil F.M., Riad B.Y., Elgemeine E.H. Recent developments in chemistry 3(5)-aminopyrazoles // Heterocycles. – 1983.-20, № 12.-Р. 2437-2470.

2. Дэвис А. Лекарственная терапия кишечных гельминтозов. М.: Медицина. 1975. 144 с.

3. Симонов А.П. Методика испытания и отбора овоцидных химических соединений для обеззараживания почвы. - Бюллетень Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени ин-та гельминтологии им. К.И. Скрябина, 1977, вып. 19. - С. 60-66.

4.  ГОСТ 12.1.007–76. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. https://files.stroyinf.ru/Data/10/1048.pdf

5. Рекомендации ВОЗ. Химические методы борьбы с переносчиками и паразитами, имеющими значение для здравоохранения. Под редакцией C.D. Chavesse и H.H. Yap. Пер. с англ. Электронный ресурс: https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/144040/EUR_01_5015707_Rus.pdf?sequence=1&isAllowed=y (дата обращения: 03.05.2022).

6. Сивкова Т.Н., Хазова М.В. Зараженность почвы кинологических центров МВД России по Пермскому краю яйцами гельминтов и способ ее дезинвазии // Российский паразитологический журнал. 2017. №2 (40). URL: https://cyberleninka.ru/article/n/zarazhennost-pochvy-kinologicheskih-tsentrov-mvd-rossii-po-permskomu-krayu-yaytsami-gelmintov-i-sposob-ee-dezinvazii (дата обращения: 03.05.2022).

7. МУ 3.5.2.1759-03 Методы определения эффективности инсектицидов, акарицидов, регуляторов развития и репеллентов, используемых в медицинской дезинсекции. – Москва: Ин-т мед. паразитологии и троп. мед. им. Е.И. Марциновского, 2003. – 55 с.

8. Зинченко Т.Д. Эколого-фаунистическая характеристика хирономид (Diptera, Chironomidae) малых рек бассейна Средней и Нижней Волги: атлас / Т. Д. Зинченко -Тольятти: Кассандра, 2011. - 258 с.

9. Argirova M.A., Georgieva M.K., Hristova-Avakumova N.G., Vuchev D.I., Popova-Daskalova G.V., Anichina K.K., Yancheva D.Y. New 1H-benzimidazole-2-yl hydrazones with combined antiparasitic and antioxidant activity. RSC Adv. 2021 Dec. 14;11(63):39848-39868. doi: 10.1039/d1ra07419a. PMID: 35494105; PMCID: PMC9044521.

10. Миронов А.Н., Бунатян Н.Д. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М.: Гриф и К. 2012. – 944с.

11.  Sawant, R. Synthesis and biological evaluation of some novel 2-phenyl benzimidazole-1-acetamide derivatives as potential anthelmintic agents // R. Sawant, D. Kawade // Acta Pharm. – 2011. – Vol. 61, № 3. – P. 353–361.

12.  Инструкция по применению препарата для ветеринарного применения альбендазол / Электронный ресурс: https://www.vidal.ru/veterinar/albendazol-10-27929.

13. Новикова Т. В., Гламаздин И. Г., Брагина М. А. Диагностика токсокароза собак: сравнительная характеристика эффективности методов //Молочнохозяйственный вестник. – 2016. – №. 2 (22). – С. 45-51.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к применению 2-(1-аминопропил)-6-(3-метоксифенил)пиридазин-3-она формулы I. Технический результат – выраженное антигельминтное и ларвицидное действие, а также низкая токсичность соединения формулы I. 3 табл., 1 пр.

I

Применение 5-(4-метилфенил)-1H-пиразол-3-амина, имеющего формулу I:

I

в качестве антигельминтного и ларвицидного средства.