Биомедицинский клеточный продукт для терапии злокачественных новообразований Российский патент 2024 года по МПК C12N15/09 C12N15/81 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, конкретно к иммунотерапии злокачественных новообразований с использованием генетически модифицированных лимфокин-активированных киллеров (ЛАК-клетки) с универсальным химерным антигенным Т-клеточным рецептором.

Адоптивная клеточная терапия является одной из технологий иммунотерапии злокачественных новообразований. Метод основан на активации и экспансии ex vivo иммунных клеток (преимущественно лимфокин(цитокин)-активированных киллеров - ЛАК(ЦИК)-клеток с последующей их реинфузией онкологическим больным с лечебной целью и используется в клиническом практике. Химерные антигенные рецепторы (CAR) представляют собой искусственные рецепторы, которые имитируют функцию Т-клеточного рецептора. В последние годы в клинической практике онкологии используют CAR-T-клетки. Однако CAR-T-клетки имеют фиксированную антигенную специфичность и могут быть нацелены только на один опухоль-ассоциированный антиген (ОАА), что ограничивает эффективность CAR-T-клеток, вследствие гетерогенной экспрессии ОАА. Такой монотерапевтический подход подразумевает риск развития резистентных к иммунотерапии вариантов опухоли, которые утрачивают целевой антиген в процессе лечения. Появление резистентных вариантов опухоли при традиционной CAR-T-клеточной терапии отмечалось у пациентов уже через несколько месяцев после начала иммунотерапии (Grupp et al. N. Engl. J. Med. 368: 1509-1518 (2013)). Поэтому для повышения эффективности CAR-терапии требуется создание универсальных конструкций по отношению к различным ОАА. В данной области медицинской технологии существует острая потребность в разработке новых способов получения генетически модифицированных лимфоцитов с универсальным иммунным рецептором (UR), нацеленным на любой антиген.

Известны способы получения универсальных CAR-T и CAR-HK клеток с инактивацией собственных Т-клеточного рецепторов (ТКР) и главного комплекса гистосовместимости (ГКС). Такой поход позволяет нивелировать иммунное отторжение, а именно реакцию «трансплантат против хозяина» и реакцию «хозяин против трансплантата», что дает возможность использовать при лечении онкологических пациентов аллогенные (донорские) иммунные клетки. В частности, предложен способ получения универсальных CAR-T-клеток, в которых посредством мультигенного нокаута ингибируется как ТКР, так и ГКС I, ГКС II в Т-клетках. Молекулы-мишени, распознаваемые CAR, включают CD19, PSCA, CD123, CD20, CEA (карциноэмбриональный антиген), FAP, CD133, EGFR, EGFRVIII, ВСМА, PSMA, Her2, СА125, EphA2, C-met., L1CAM, VEGFR, CS1, ROR1, EC, NY-ESO-1, MUC1, MUC16, мезотелин, LewisY, GPC3, GD2, EPG, DLL3, CD99, 5T4, CD22, CD30, CD33, CD138, CD171. Этот способ позволяет получить универсальные CAR-T клетки или Т-лимфоциты, направленные на конкретный опухоль-ассоциированный антиген для аллогенной иммунотерапии пациентов [Universal CAR-T cell, preparation method therefor and application thereof. WO 2019076149 A1, 2019.04.25].

Известен также аналогичный способ получения универсальных CAR-Т-клеток посредством одновременного ингибирования функции ТКР и ГКС I, ГКС II в Т-клетке в результате множественного нокаута генов, кодирующих ТКР, включая TRAC и/или TRBC; гены, кодирующие ГКС, включая HLA-A, В2МН и CIITA. Изобретение относится к способу получения универсальных CAR-T-клеток и Т-клеток, нацеленных на конкретный антиген и применению для аллогенной иммунотерапии. Универсальная CAR-T-клетка может нацеливаться на специфические опухолевые маркеры, безопасно и эффективно устранять опухолевые клетки в организме пациента, не подвержена влиянию состояния пациента или используемого режима лечения. Универсальные CAR-T-лимфоциты могут быть подготовлены в любое время, могут быть использованы для лечения в наилучшее время и обеспечивают эффективность лечения [Universal CAR-T cell and preparation method and application thereof CN 107723275 B. 2018.02.23].

Известен способ получения универсальных CAR-T-клеток посредством полигенного нокаута и ингибирования функции ТКР и ГКС I, ГКС II в Т-клетке. Изобретение обеспечивает распознавание клетками конкретных маркеров, ассоциированных с опухолью и может использоваться в аллогенной CAR-T-терапии [Universal CAR Т cells and its preparation method and application. CN 107723275 A, 2020.09.04].

Недостатком этих методов является трудоемкая технология, включающая удаление НК-клеток и полигенный нокаут для снижения реактогенности универсальных CAR-T-клеток. Деплеция НК-клеток - эффекторов врожденного противоопухолевого иммунитета, способных распознавать и лизировать трансформированные клетки независимо от наличия опухоль-ассоциированного антигена, будет снижать эффективность CAR-T-клеток. Кроме того, универсальность CAR-T-клеток при данных методах обеспечивается за счет применения аллогенных (донорских) лимфоцитов у различных пациентов, но не позволяет их нацелить одновременно на несколько опухоль-ассоциированных антигенов.

Известен способ получения CAR-HK-клеток, основанный на подавлении экспрессии TIGIT в NKG2D-CAR-NK клетках с использованием технологии РНК-интерференции для усиления функции клеток CAR-NK и улучшения эффекта иммунотерапии. Изобретение также раскрывает целевую последовательность РНК гена TIGIT, интерференционную последовательность, основанную на целевой последовательности, способ конструирования и ее применение. Изобретение может быть применено для иммунотерапии злокачественных опухолевых заболеваний, предлагает новую идею улучшения лечения опухолей с использованием CAR-NK [Chimeric antigen receptor NK cell interfered by TIGIT gene and application thereof. CN 114836428 A, 2022.08.02]. Недостатком данного изобретения является удаление Т-клеток, играющих важную роль в противоопухолевом иммунитете и небольшое содержание НК-клеток в популяции лимфоцитов.

Известно изобретение, касающееся конструкций CAR, CAR-T и CAR-NK, предпочтительно содержащих фрагмент антитела scFv против ассоциированного с заболеванием антигена или гаптена. В качестве предпочтительного ОАА, рассматривается Тгор-2. Конструкции можно вводить пациентам со злокачественными опухолями, аутоиммунными заболеваниями или с иммунной дисфункцией, для индуцирования иммунного ответа против клеток, ассоциированных с заболеванием. Способ применения CAR-T и CAR-NK клеток предполагает предварительное введение пациентам антител, конъюгированных с гаптеном, которые связываются с антигеном, ассоциированным с заболеванием. Наиболее предпочтительно вводят для снижения системной иммунотоксичности, индуцированной конструкциями [Disease therapy with chimeric antigen receptor (CAR) constructs and T cells (CAR-T) or NK cells (CAR-NK) expressing car construct. WO 2016201300 A1, 2016-12-15]. Недостатком данного способа является раздельное применение CAR-T и CAR-NK клеток, а также использование в качестве биомишени непептидных антигенов и применение антител, конъюгированных с гаптеном, не являющихся фармакопейными препаратами. Кроме того, для снижения иммунотоксичности дополнительно предполагается введение антител против CD74 или HLA-DR, которые также не разрешены для клинического применения и могут индуцировать иммуноопосредованные реакции.

Описан алгоритм получения CAR-ЦИК-клеток для аллогенной клеточной терапии, которые производятся для клинических целей. CAR-ЦИК клетки сохраняются длительное время в организме и обладают двойным механизмом противоопухолевой активности, реализуемой за счет наличия в клеточном продукте эффекторов адаптивного и врожденного иммунитета. В отличие от CAR-T клеток CAR-ЦИК клетки не приводят к индукции реакции «трансплантат против хозяина», что позволяет использовать аллогенные (донорские) лимфоциты. [Chimeric Antigen Receptor (CAR) modified Cytokine Induced Killer (CIK) cells Chimeric Antigen Receptor (CAR) modified Cytokine Induced Killer (CIK) cells, https://www.coimmune.com/car-cik-2/]. Недостатком этой технологии является отсутствие возможность у данного варианта CAR-ЦИК клеток быть нацеленными одновременно на несколько опухоль-ассоциированных антигенов.

Известен способ получения универсального иммунного рецептора, экспрессируемого Т-клетками к множественным ОАА. Предложены композиции и способы для адоптивной Т-клеточной терапии при лечении различных заболеваний, включая рак, инфекции и аутоиммунные заболевания. Рекомбинантные Т-клетки, экспрессирующие универсальный иммунный рецептор (UnivIR), который содержит внеклеточный домен для связывания метки, трансмембранный домен и цитоплазматический домен. UnivIR включает метко-связывающий домен, например, содержит биотин-связывающий домен, который связывается с биотинилированным антигеном. UnivIR дополнительно содержит внутриклеточный домен, представленный костимулирующими молекулами, выбранными из группы, состоящей из CD27, CD28, CD2, 4-IBB, ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, антигена-1, ассоциированного с функцией лимфоцитов (LFA - 1), CD7, LIGHT, NKG2C, В7-Н3. Метко-связывающий домен связывается с меткой, выбранной из группы, состоящей из myc-метки, FLAG-метки, His-метки, НА-метки, флуоресцеин изотиоцианата (FITC), динитрофенола, перидинин-хлорофилл-белкового комплекса, зеленого флуоресцентного белка, биотина, фикоэритрина (РЕ), гистидина, стрептавидина, авидина, пероксидазы хрена, пальмитоилированных соединений, нитрозилированных соединений, алкаланинфосфатазы, глюкозооксидазы, глутатион-8-трансферазы (GST) и белка, связывающего мальтозу [A universal immune receptor expressed by T cells for the targeting of diverse and multiple antigens. WO 2013044225 A1, 2013-03-28 В].

Известен способ получения универсальной адаптируемой системы химерных антигенных рецепторов (AT-CAR), которая обеспечивает Т-клеткам способность и специфичность распознавания и уничтожения клеток-мишеней, таких как опухолевые клетки, после взаимодействия с мечеными антителами. Например, были разработаны αFITC-CAR-экспрессирующие Т-клетки, которые специфически распознают различные опухолевые клетки человека, когда эти клетки связаны с опухоль-реактивными FITC-меченными антителами. Показано, что активация Т-клеток, экспрессирующих αFITC-CAR, вызывает эффективный лизис мишени, пролиферацию Т-клеток и продукцию цитокинов/хемокинов. Система может быть использована для лечения больных раком [Universal anti-tag chimeric antigen receptor-expressing T cells and methods of treating cancer. US 9233125 B2 2019-12-20].

Предложены композиции и способы для адоптивной Т-клеточной терапии при лечении различных заболеваний, включая рак, инфекции и аутоиммунные заболевания. Рекомбинантные Т-клетки, экспрессируют универсальный иммунный рецептор (UnivIR), содержащий внеклеточный биотин-связывающий домен, который связывается с биотинилированным антигеном, трансмембранный домен и цитоплазматический домен. [А universal immune receptor expressed by T cells for the targeting of diverse and multiple antigens WO 2013044225 A1, 2013.03.28].

Известно изобретение, относящееся к иммунным клеткам, экспрессирующим иммунные рецепторы, содержащие полипептид, имеющий антигенсвязывающий домен, константный домен α-цепи ТКР и трансмембранный домен δ-цепи ТКР; и/или полипептид, имеющий антигенсвязывающий домен, константный домен β-цепи ТКР и трансмембранный домен γ-цепи ТКР. Антигенсвязывающий домен специфически связывает мишень, например, раковую клетку. Используются для модификации предпочтительно человеческие Т-клетки или NK-клетки. Экспрессия искусственной конструкции, такой как химерный антигенный рецептор, происходит на их клеточной поверхности. Последовательности CAR могут быть доставлены в клетки с использованием ретровирусного или лентивирусного вектора. Дополнительно используют меченый полипептид, который может представлять собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, связывающийся с антигеном, экспрессируемым на поверхности клетки-мишени, таким как опухоль-ассоциированный антиген на раковой клетке. Метка может представлять собой гаптен, такой как FITC, биотин, РЕ или стрептавидин, и гаптен может быть связан антигаптеновым (антиметковым) связывающим доменом CAR или ТКР [Modified immune receptor constructs. WO 2020201527 A1, 2020.10.08].

Недостатком этих изобретений является использование биотинилированных меченных антител, которые не являются фармакопейными препаратами. Кроме того, генетической модификации подвергались Т-клетки или НК, что требует дополнительного этапа иммуномагнитной сепарации и подобные продукты не могут быть рекомендованы для аллогенной иммунотерапии из-за риска развития реакции «трансплантат против хозяина».

Другой известный подход получения Т-клеток с универсальным рецептором освещен в публикациях: «CD16-полиморфизм и сконструированные Fc антитела обеспечивают активность Т-клеток, модифицированных CD16-химерным антигенным рецептором, для терапии рака» и «Т-лимфоциты, экспрессирующие сигнальный рецептор CD16, осуществляют антителозависимое уничтожение раковых клеток» [Rataj F, Jacobi SJ, Stoiber S, Asang F, Ogonek J, Tokarew N, Cadilha BL, van Puijenbroek E, Heise C, Duewell P, Endres S, Klein C, Kobold S. High-affinity CD16- polymorphism and Fc-engineered antibodies enable activity of CD16-chimeric antigen receptor-modified T cells for cancer therapy. Br J Cancer. 2019 Jan;120(1):79-87, Omoto T, Asaka J, Nihei S, Kudo K. Identifying risk factors for opioid-induced neurotoxicity in cancer patients receiving oxycodone. Support Care Cancer. 2023 Mar 13;31(4):20]. CD16-CAR Т-клетки распознают Fc-часть терапевтических антител, что может обеспечить избирательное нацеливание на различные антигены. Было предложено использование вариантов CD16 с повышенной аффинностью к Fc-участку антител в сочетании с Fc-инженерными антителами, что обеспечивало высокую эффективность CD16-CAR Т-клеток по отношению к перевиваемым клеточным линиям опухолевых клеток.

Прототип заявляемого изобретения описан в статье «Т-лимфоциты, сконструированные для экспрессии CD16-химерного антигенного рецептора, перенаправляют Т-клеточный иммунный ответ против опсонизированных иммуноглобулином G клеток-мишеней» [D'Aloia MM, Caratelli S, Palumbo С, Battella S, Arriga R, Lauro D, Palmieri G, Sconocchia G, Alimandi M. T lymphocytes engineered to express a CD16-chimeric antigen receptor redirect T-cell immune responses against immunoglobulin opsonized target cells. Cytotherapy. 2016;18(2):278-90]. Это способ получения генетически модифицированных цитотоксических Т-клеток, сконструированных с использованием химерных молекул FcγRIII (CD16) для распознавания моноклональных антител против злокачественных клеток. Были разработаны CD16A-CAR, оснащенные внеклеточным CD16A, шарнирным спейсером и трансмембранной областью CD8, а также ξ-цепью комплекса Т-клеточного рецептора CD3 в тандеме с костимуляторным модулем преобразователя сигнала CD28. Эта стратегия направлена на реализацию терапевтических функций моноклональных антител, в комбинации с сконструированными Т-клетками, экспрессирующими FcγR(CD16)-CAR для повышения противоопухолевой эффективности используемых в клинике таргетных препаратов. Сходство прототипа с заявляемым изобретением заключается в выборе CD16-CAR рецептора для генетической модификации Т-клеток и применение CD16-CAR-T клеток в комбинации с моноклональными антителами.

Недостатком прототипа является необходимость дополнительного этапа - проведения иммуномагнитной сепарации для элиминации НК, обладающих антигеннезависимой цитотоксической активностью и способных распознавать трансформированные клетки, не имеющие целевых биомишеней для антител и CD16A-CAR-Т-клеток и возможность использования только аутологичных Т-лимфоцитов.

Задачей заявляемого изобретения является создание биомедицинского клеточного продукта с универсальным Т-клеточным рецептором для терапии злокачественных новообразований.

Задача решается тем, что предложен биомедицинский клеточный продукт CD16-CAR-ЛАК-клетки, включающий выделенную из кДНК и модифицированную путем генной инженерии последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую универсальный иммунный рецептор (UR), где UR содержит внеклеточный домен, представленный высокоафинным вариантом рецептора CD16, трансмембранный домен, сигнальный домен Т-клеточного рецептора. Генетической модификации подвергаются ЛАК-клетки, полученные в результате активации и экспансии аутологичных или аллогенных лимфоцитов периферической крови. Внеклеточный домен CD16 связывается с моноклональными антителами к ОАА, обеспечивая антитело-зависимую цитотоксичность.

Целью представляемого изобретения является повышение эффективности терапии онкологических больных за счет комбинации таргетной терапии с биомедицинским клеточным продуктом на основе CD16CAR-ЛАК-клеток.

Предлагаемое изобретение представляет собой биомедицинский клеточный продукт на основе CAR-ЛАК клеток с универсальным высокоаффинным CD16 рецептором.

Техническим результатом заявленного изобретения является получение биомедицинского клеточного продукта с противоопухолевой активностью, регулируемой моноклональными антителами и представленного генетически модифицированными лимфокин-активираонными киллерами с универсальном химерным Т-клеточным рецептором CD16-CAR-ЛАК-клеток.

Отличием заявляемого биомедицинского клеточного продукта является использование для получения генетически модифицированных лимфоцитов с универсальным CD16-CAR ЛАК-клеток, состоящих преимущественно из активированных субпопуляций НК и НК-Т-клеток. Такой подход уменьшает трудоемкость технологии получения CD16-CAR-ЛАК-клеток за счет исключения стадии иммуноганитной сепарации и деплеции отдельных субклассов лимфоцитов. CD16-CAR-ЛАК-клетки, в отличие от CD16-CAR-T клеток могут быть использованы для аллогенной иммунотерапии.

Изобретение иллюстрировано примерами и чертежом.

Пример 1. Получение БМКП с заявленными характеристиками

Из донорской лейкотромбомассы были выделены лимфоциты. Выделенные лимфоциты культивировали в течение 72 ч. в полной культуральной среде с добавлением интерлейкина 2 в концентрации 1000 Ед/мл для получения лимфокин-активированных киллеров. На третьи сутки с момента выделения провели трансдукцию лимфокин-активированных киллеров летивирусным вектором с химерным антигенным рецептором CD 16. На 4-5 сутки провели иммунофенотипическое исследование полученных популяций клеток методом проточной цитофлюориметрии (BD FACSCanto II, США), согласно которому CAR-ЛАК клетки составили 25% и имели фенотип CAR+CD25+CD3+; CAR+CD16+CD56. Цитотоксическая способность полученных пулов клеток оценивалась на вторые сутки после проведения трансдукции с помощью МТТ-теста (Labsystems Multiscan MS, США, длина волны 540 нм). Оценивали цитотоксическую активность CD16-CAR-ЛАК-клеток в сочетании с моноклональными антителами к HER2 (трастузумаб) на HER2+ опухолевых клеточных линиях SKOV3 (рак яичника) и SKBR3 (рак молочной железы). В соотношении клеток-эффекторов к опухолевым 5:1 цитотоксичность на культуре SKOV3 составила 85%, на SRBR3 - 89%, (цитотоксическая активность контрольных ЛАК 35 и 42%, соответственно). Данный пример продемонстрировал специфическую противоопухолевую активность на HER2 экспрессирующих опухолевых клеточных линиях.

Пример 2. Получение генетической конструкции CD16-CAR

Получение последовательности CD16

На чертеже представлена базовая конструкция, содержащая последовательность универсального CAR 3 поколения, в которой антиген-распознающий участок представлен последовательностью CD16 (NM_000569.8, 83bp-706bp). Трансмембранный и внутриклеточные домены представлены полученными нами последовательностями CD28, ОХ40 и CD3zeta в плазмиде Hinge-IC2. Сиквенс представлен ниже.

Плазмида Hinge-IC2, содержащая CD28 ОХ40; CD3zeta:

GGCCCGGGATCCGATTATTAGTTAACTCACACATGCCCATTTTGGGTGC

TGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGT

GGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCAC

AGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAG

CATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCA

GGGACCAGAGGCTGCCCCCCGATGCCCACAAGCCCCCTGGGGGAGGCA

GTTTCCGGACCCCCATCCAAGAGGAGCAGGCCGACGCCCACTCCACCC

TGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGT

ACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAA

GAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGA

TGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAAT

GAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGAT

GAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGG

GTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGG

CCCTGCCCCCTCGCTAAGAATTCATTAAATCTAGATGCATCGCGAGTTC

AAGT

--->

Перечень последовательностей

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN"

"ST26SequenceListing V1 3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdversion="V1_3" fileName="Biomedical cell

product for the treatment of malignant neoplasms.xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.3.0"

productionDate="2023-11-14">

<ApplicationIdentification>

<IpofficeCode> М.М. Blokhin National Medical Research Center of

Oncology of the Ministry of

Health of the Russian Federation </IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>PCT/2023111306</ApplicationNumberText>

<ApplicantFileReference>125 ~2023111306</ApplicantFileReference>

<ApplicantName languageCode="ru">Muxaun Киселевский</Арр11сапЕМате>

<ApplicantNameLatin>Mikhail Kiselevskiy</ApplicantNameLatin>

<InventorName languageCode="ru">Muxaun Киселевский< /ТпуепфогМаме>

<InventorNameLatin>Mikhail Kiselevskiy</InventorNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru"> Биомедицинский клеточный продукт

для терапии злокачественных новообразований </InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>726</INSDSeq _length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_ division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature location>1..726</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier name>

<INSDQualifier value>other

DNA</INSDQualifier value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier value>Mus musculus</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggcccgggatccgattattagttaactcacacatgceccattttgggtgct

ggtggtggttggtggagtectggcttgctatagcttgctagtaacagtggectttattattttctgggtg

aggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccecgecgecccgggceccacc

cgcaagcattaccagecctatgccccaccacgcgacttcgcagectatcgctccagggaccagaggctge

cccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggecgacge

ccactccaccctggcecaagatcagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcaggg

ccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgt

ggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcectgtacaatgaactg

cagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggc

acgatggcectttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggece

ctgccccctcgctaagaattcattaaatctagatgcatcgcgagttcaagt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, конкретно к иммунотерапии злокачественных новообразований с использованием генетически модифицированных лимфокин-активированных киллеров (ЛАК-клетки) с универсальным химерным антигенным Т-клеточным рецептором. Изобретение представляет собой биомедицинский клеточный продукт - CAR-ЛAK-клетки с универсальным Т-клеточным рецептором (CD16-CAR), характеризуется фенотипом CAR+CD25+CD3+ и CAR+CD16+CD56+. Биомедицинский клеточный продукт предназначен для лечения онкологических пациентов в комбинации с моноклональными антителами к опухолевым антигенам. Изобретение позволяет получать биомедицинский клеточный продукт с противоопухолевой активностью, регулируемой моноклональными антителами. 1 ил., 2 пр.

Биомедицинский клеточный продукт для терапии злокачественных новообразований, включающий CAR-JIAK-клетки с универсальным T-клеточным рецептором, с фенотипом CAR+CD25+CD3+; CAR+CD16+CD56+, полученными путем выделения из донорской или аутологичной лейкотромбомассы лимфоцитов с получением из них лимфокин- активированных киллеров и их последующей трансдукцией лентивирусным вектором с химерным антигенным рецептором CD16, с целью экспрессии химерного высокоафинного CD16-CAR для получения CD16-CAR-ЛАК-клеток, где вектор представлен последовательностью SEQ ID NO: 1.