Метод определения минимальной остаточной болезни методом мультипараметрической проточной цитометрии у детей и взрослых с В-линейным острым лимфобластным лейкозом в условиях применения CD19-направленной иммунотерапии Российский патент 2024 года по МПК G01N33/53 A61B5/00 

Метод определения минимальной остаточной болезни методом мультипараметрической проточной цитометрии у детей и взрослых с В-линейным острым лимфобластным лейкозом в условиях применения CD19-направленной иммунотерапии.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и предназначено для определения минимальной остаточной болезни (МОБ) методом мультипараметрической проточной цитометрии (МПЦ) у пациентов с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (ВП-ОЛЛ), получающих CD19-направленную иммунотерапию.

В последнее десятилетие при лечении онкологических заболеваний наряду с традиционной химиотерапией и лучевой терапией стали активно использоваться таргетные - молекулярно-направленные - препараты. С каждым годом спектр их применения все более расширяется. Эти препараты обладают направленным действием, повышают продолжительность и качество жизни онкологических пациентов, на фоне их применения существенно снижается вероятность возникновения побочных эффектов ( Le Jeune C., Thomas X. Potential for bispecific T-cell engagers: role of blinatumomab in acute lymphoblastic leukemia. Drug Des Devel Ther. 2016; 10: 757-765). При лечении пациентов с ВП-ОЛЛ широкое применение нашли препараты, действующие против клеток, несущих B-клеточный маркер CD19. Этот антиген экспрессируется опухолевыми клетками в подавляющем большинстве случаев ВП-ОЛЛ. На данный момент в мировой клинической практике введены в коммерческий оборот и широко применяются препарат биспецифического активатора Т-лимфоцитов (блинатумомаб) и препарат Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR-T). Эти препараты используются для лечения рецидива заболевания и элиминации малых количеств остаточных опухолевых клеток, в комбинации с трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) и/или химиотерапией. Оба типа иммунотерапии зарекомендовали себя как высокоэффективные способы лечения ВП-ОЛЛ, показав высокую частоту достижения ремиссии (Von Stackelberg A., Locatelli F., Zugmaier G. et al. Phase I/Phase II Study of Blinatumomab in Pediatric Patients With Relapsed/Refractory Acute Lymphoblastic Leukemia. J Clin Oncol. 2016; 34(36): 4381-4389; Lee D.W., Kochenderfer J.N., Stetler-Stevenson M. et al. T cells expressing CD19 chimeric antigen receptors for acute lymphoblastic leukaemia in children and young adults: a phase 1 dose-escalation trial. Lancet. 2015; 385(9967): 517-528; Davila M.L., Riviere I., Wang X. et al. Efficacy and toxicity management of 19-28z CAR T cell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia. Sci Transl Med. 2014; 6(224): 224ra25; Maude S.L., Frey N., Shaw P.A. et al. Chimeric antigen receptor T cells for sustained remissions in leukemia. N Engl J Med. 2014; 371(16): 1507-1517).

Одним из важнейших звеньев контроля эффективности терапии ОЛЛ является определение минимальной остаточной болезни (МОБ) - популяции опухолевых клеток, персистирующих в крайне низких количествах в организме пациента после достижения клинико-гематологической ремиссии. Величина МОБ, являясь одним из самых важных прогностических факторов, позволяет распределять пациентов по группам риска и принимать решения об интенсификации и деинтенсификации терапии. Скорость элиминации МОБ на разных этапах лечения является ключевым фактором прогноза развития рецидива.

Определение МОБ возможно только с использованием высоко чувствительных методов диагностики. Одним из способов определения МОБ является выявление результатов перестройки генов иммуноглобулинов (ИГ) и Т-клеточных рецепторов (ТКР) методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ). Данный метод хорошо стандартизован, обладает высокой чувствительностью (10^-4-10^-5), применим для большинства пациентов с ОЛЛ (Van der Velden V.H., Willemse M.J., van der Schoot C.E., Hahlen K., van Wering E.R., van Dongen J.J. Immunoglobulin kappa deleting element rearrangements in precursor-B acute lymphoblastic leukemia are stable targets for detection of minimal residual disease by real-time quantitative PCR. Leukemia. 2002; 16(5): 928-936). Для определения МОБ путем выявления перестроек генов ИГ и ТКР также может использоваться высокопроизводительное секвенирование нового поколения (Liu Z., Li Y., Shi C. Monitoring minimal/measurable residual disease in B-cell acute lymphoblastic leukemia by flow cytometry during targeted therapy. Int J Hematol. 2021; 113(3): 337-343). Однако, детекция МОБ данными методами является относительно дорогим исследованием, требует больших затрат труда и времени (van Dongen J.J., van der Velden V.H., Bruggemann M., Orfao A. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood. 2015; 125(26): 3996-4009).

Еще один метод определения МОБ - выявление химерного транскрипта при помощи ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Метод сравнительно недорогой, обладает высокой чувствительностью (10^-4-10^-6), основан на выявлении стабильной в процессе терапии мишени (Van Dongen J.J., van der Velden V.H., Bruggemann M., Orfao A. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood. 2015; 125(26): 3996-4009). Также методом ПЦР-РВ возможно выявлять химерный ген в остаточных опухолевых клетках (Burmeister T., Marschalek R., Schneider B. et al. Monitoring minimal residual disease by quantification of genomic chromosomal breakpoint sequences in acute leukemias with MLL aberrations. Leukemia. 2006; 20(3): 451-457). Однако, наличие химерных генов отмечается лишь в 25-40% ВП-ОЛЛ (в зависимости от возраста) (Van Dongen J.J., van der Velden V.H., Bruggemann M., Orfao A. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood. 2015; 125(26): 3996-4009), что делает метод неприменимым для многих пациентов.

Третий метод выявления МОБ - МПЦ. Выделение остаточных лейкемических клеток данным методом основано на выявлении лейкоз-ассоциированного иммунофенотипа (ЛАИФ) - профиля экспрессии антигенов, не встречающегося на нормальных клетках, характерного только для опухолевых клеток при остром лейкозе (Campana D., Coustan-Smith E. Advances in the immunological monitoring of childhood acute lymphoblastic leukaemia. Best Pract Res Clin Haematol. 2002; 15(1): 1-19). Данный метод имеет более низкую чувствительность, чем молекулярно-генетические (до 10^-4), однако, благодаря относительно низким затратам времени на выполнение анализа, применимости для большинства пациентов и большей финансовой доступности (Van Dongen J.J., van der Velden V.H., Bruggemann M., Orfao A. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood. 2015; 125(26): 3996-4009) он широко распространен в онкогематологии. Современная МПЦ позволяет описать антигенный профиль опухоли, который крайне важен при выборе таргетных препаратов, что делает ее незаменимым инструментом в диагностическом арсенале.

Применение CD19-направленной терапии - огромная проблема для стандартной технологии определения МОБ методом МПЦ. Трудность состоит в том, что CD19 может исчезать с поверхности опухолевых клеток в результате таргетного воздействия (Topp M.S., Gokbuget N., Zugmaier G. et al. Phase II trial of the anti-CD19 bispecific T cell-engager blinatumomab shows hematologic and molecular remissions in patients with relapsed or refractory B-precursor acute lymphoblastic leukemia. J Clin Oncol. 2014 ;32(36): 4134-4140; Mejstrikova E., Hrusak O., Borowitz M.J. et al. CD19-negative relapse of pediatric B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia following blinatumomab treatment. Blood Cancer J. 2017; 7(12): 659; Mikhailova E., Gluhanyuk E., Illarionova O. et al. Immunophenotypic changes of leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia, who have been treated with Blinatumomab. Haematologica. 2021; 106(7): 2009-2012; Mikhailova E., Illarionova O., Shelikhova L. et al. Immunophenotypic changes in leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia after treatment with CD19-directed chimeric antigen receptor (CAR)-expressing T cells. Haematologica. 2022; 107(4): 970-974). Данный антиген является ключевым начальным звеном во всех алгоритмах поиска МОБ методом МПЦ, поэтому при его потере опухолевые клетки среди CD19-позитивных клеток детектировать будет невозможно. В связи с этим стандартный подход к способу детекции МОБ не подходит для применения у пациентов после CD19-направленной терапии. Необходимо заменить CD19 в алгоритме другим маркером или сочетанием маркеров. Кроме того, под действием иммунотерапевтических препаратов может изменяться экспрессия и других маркеров, используемых при мониторинге МОБ (Mikhailova E., Gluhanyuk E., Illarionova O. et al. Immunophenotypic changes of leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia, who have been treated with Blinatumomab. Haematologica. 2021; 106(7): 2009-2012; Mikhailova E., Illarionova O., Shelikhova L. et al. Immunophenotypic changes in leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia after treatment with CD19-directed chimeric antigen receptor (CAR)-expressing T cells. Haematologica. 2022; 107(4): 970-974), что также может стать причиной трудностей в детекции опухолевых клеток по иммунофенотипу с использованием стандартного подхода МПЦ.

Методика определения МОБ методом МПЦ у пациентов с ВП-ОЛЛ после CD19-направленной терапии разработана на основании ряда исследований, направленных на изучение изменений в антигенном профиле опухолевых клеток и особенностей пула нормальных В-клеток в костном мозге на фоне иммунотерапии ( Mikhailova E., Gluhanyuk E., Illarionova O. et al. Immunophenotypic changes of leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia, who have been treated with Blinatumomab. Haematologica. 2021; 106(7): 2009-2012; Mikhailova E., Illarionova O., Shelikhova L. et al. Immunophenotypic changes in leukemic blasts in children with relapsed/refractory B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia after treatment with CD19-directed chimeric antigen receptor (CAR)-expressing T cells. Haematologica. 2022; 107(4): 970-974; Mikhailova E., Itov A., Zerkalenkova E. et al. B-lineage antigens that are useful to substitute CD19 for minimal residual disease monitoring in B cell precursor acute lymphoblastic leukemia after CD19 targeting. Cytometry B Clin Cytom. 2022; Mikhailova E., Roumiantseva .J, Illarionova O. et al. Strong expansion of normal CD19-negative B-cell precursors after the use of blinatumomab in the first-line therapy of acute lymphoblastic leukaemia in children. Br J Haematol. 2022; 196(1): e6-e9; Mikhailova E., Semchenkova A., Illarionova O. et al. Relative expansion of CD19-negative very-early normal B-cell precursors in children with acute lymphoblastic leukaemia after CD19 targeting by blinatumomab and CAR-T cell therapy: implications for flow cytometric detection of minimal residual disease. Br J Haematol. 2021; 193(3): 602-612; Semchenkova A., Mikhailova E., Komkov A. et al. Lineage Conversion in Pediatric B-Cell Precursor Acute Leukemia under Blinatumomab Therapy. Int J Mol Sci. 2022; 23(7)). Диагностическая панель антител включает в себя антитела к мембранным CD19, CD22, CD24, CD10, CD45, CD34, CD20, CD58, CD38 и цитоплазматическому (i) CD79a (iCD79a). Более ранние, чем CD19, В-линейные маркеры CD22, iCD79a, CD24, а также маркер CD10, служат в алгоритме в качестве замены CD19 для выделения региона В-клеток на точечных графиках, внутри которого далее ведется поиск опухолевой популяции. Данные маркеры выбраны как ключевые ввиду их высокой частоты встречаемости и высокого уровня экспрессии на опухолевых клетках ВП-ОЛЛ (Mikhailova E., Itov A., Zerkalenkova E. et al. B-lineage antigens that are useful to substitute CD19 for minimal residual disease monitoring in B cell precursor acute lymphoblastic leukemia after CD19 targeting. Cytometry B Clin Cytom. 2022). Наличие расширенного набора В-линейных маркеров позволяет использовать описанную панель антител также для мониторинга МОБ у пациентов, получающих CD22-направленную иммунотерапию (инотузумаб озогамицин, CAR-T к CD22).

Технический результат заключается в разработке оригинального метода определения МОБ методом МПЦ у пациентов с ВП-ОЛЛ, получающих CD19-направленную иммунотерапию, позволяющего производить мониторинг результатов терапии с высокой эффективностью, не уступающей молекулярным методам диагностики.

Указанный технический результат отличается тем, что для выявления остаточных опухолевых клеток в аспирате костного мозга используют расширенную панель антител, включающую в себя, помимо широко используемых в других алгоритмах мониторинга маркеров (CD10, CD34, CD58, CD38, CD20, CD45, CD10), также дополнительные В-линейные антигены CD22, CD24 и CD79a, способные заменить CD19 при анализе данных, при этом алгоритм анализа учитывает возможную потерю таргетируемого антигена CD19, изменения в антигенном профиле опухолевой популяции и особенности нормальных клеточных популяций костного мозга при применении иммунотерапии.

Способ осуществляется следующим образом: на первом этапе производят пробоподготовку - измеряют клеточность образца костного мозга при помощи гематологического анализатора; исходя из клеточности, берут необходимую аликвоту для окрашивания (примерно в 4-5 раз больше количества клеток, которое планируется включить в анализ), добавляют в нее антитела к поверхностным антигенам (CD58, CD10, CD45, CD34, CD19, CD20, CD38, CD22, CD24), тщательно перемешивают образец, инкубируют 15 минут в темноте при комнатной температуре; далее добавляют реагент для фиксации клеток в соответствии с инструкцией фирмы-производителя, инкубируют 5 минут; затем добавляют соответствующее объему материала количество лизирующего раствора, инкубируют согласно инструкции фирмы-производителя лизирующего раствора; далее образец отмывают в 3 мл фосфатно-солевого буфера с pH 7,0, удаляют супернатант; к осадку добавляют раствор для пермеабилизации и антитело к цитоплазматическому антигену CD79a, инкубируют согласно инструкции фирмы-производителя пермеабилизирующего раствора; после этого образец отмывают в 3 мл фосфатно-солевого буфера с pH 7,0, удаляют супернатант; к осадку добавляют 2-3 мкл раствора (1:200 в 20 мМ Трис-буфере с pH 7,5) ДНК-тропного красителя (предпочтительно SYTO41), инкубируют 10 минут; затем добавляют 300 мкл фосфатно-солевого буфера и осуществляют запись данных образца на проточном цитофлуориметре; на втором этапе производят анализ полученных на проточном цитофлуориметре данных при помощи специальных программ обработки - на точечном графике SYTO41 против показателя бокового светорассеяния (рассеяния света под прямым углом, SSC) выбирают SYTO41-положительные (ядросодержащие) клетки; среди них выделяют В-клеточный регион на точечных графиках (при гомогенной и яркой экспрессии CD22 и iCD79a на опухолевых клетках - путем последовательного выделения CD22- и iCD79a-позитивных регионов, при гомогенной и яркой экспрессии только одного из антигенов CD22 и iCD79a - путем выделения региона позитивных по данному маркеру клеток, при одновременно гетерогенной и/или слабой экспрессии и CD22 и iCD79a, но наличии до терапии гомогенной тотальной экспрессии CD24 или CD10 - путем выделения региона позитивных по данному маркеру клеток) (фиг. 1); в В-клеточном регионе производят поиск опухолевых клеток на основании данных об иммунофенотипе опухоли до проведения иммунотерапии и расположении нормальных клеточных популяций (зависит от способа выделения В-клеточного региона, фиг. 2) на точечных графиках; при нахождении 10 и более опухолевых клеток ВП-ОЛЛ их количественную оценку производят путем вычисления процента данных клеток от всех SYTO41-позитивных клеток; дополнительно проводят оценку расположения ядросодержащих клеток на графиках CD45/SSC, CD38/SSC, CD34/SSC, CD24/SSC для поиска «подозрительных» популяций, которые могут быть следствием феномена смены линейной принадлежности опухолевых клеток под действием иммунотерапии.

Описанный метод подтверждался исследованием, проведенным в ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России.

Пример 1

Оценка диагностической эффективности метода. Оценка диагностической эффективности метода производилась путем качественного сравнения результатов определения МОБ методом МПЦ с результатами, полученными при использовании молекулярно-генетических технологий, включая полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и высокопроизводительное секвенирование нового поколения (ВПС). Общая сходимость результатов между МПЦ-МОБ и ВПС-МОБ составила 82,8%, что хорошо соотносится с данными других исследований (Sala Torra O., Othus M., Williamson D.W. et al. Next-Generation Sequencing in Adult B Cell Acute Lymphoblastic Leukemia Patients. Biol Blood Marrow Transplant. 2017; 23(4): 691-696; Wood B., Wu D., Crossley B. et al. Measurable residual disease detection by high-throughput sequencing improves risk stratification for pediatric B-ALL. Blood. 2018; 131(12): 1350-1359; Popov A., Tsaur G., Verzhbitskaya T. et al. Comparison of minimal residual disease measurement by multicolour flow cytometry and PCR for fusion gene transcripts in infants with acute lymphoblastic leukaemia with KMT2A gene rearrangements. Br J Haematol. 2021), полученных для образцов от пациентов в отсутствии таргетного воздействия. Общая сходимость результатов МПЦ-МОБ и ПЦР-МОБ (89,8%) оказалась также близка к ранее опубликованным данным (Theunissen P., Mejstrikova E., Sedek L. et al. Standardized flow cytometry for highly sensitive MRD measurements in B-cell acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2017; 129(3): 347-357; Gaipa G., Cazzaniga G., Valsecchi M.G. et al. Time point-dependent concordance of flow cytometry and real-time quantitative polymerase chain reaction for minimal residual disease detection in childhood acute lymphoblastic leukemia. Haematologica. 2012; 97(10): 1582-1593; Huang Y.J., Coustan-Smith E., Kao H.W. et al. Concordance of two approaches in monitoring of minimal residual disease in B-precursor acute lymphoblastic leukemia: Fusion transcripts and leukemia-associated immunophenotypes. J Formos Med Assoc. 2017; 116(10): 774-787). Следует отметить, что методика определения МПЦ-МОБ показала одинаково высокую сопоставимость результатов с данными ВПС и ПЦР при определении как CD19(+) (78,8% и 90,3%), так и CD19(-) клеток ВП-ОЛЛ (85,1% и 88,5%), что говорит о высокой эффективности метода и возможности его широкого применения на практике даже в случае потери опухолевыми клетками таргетируемого антигена CD19.

Пример 2. Пациентка К., 11 лет

Диагноз: ВП-ОЛЛ, ВII иммуновариант, гиперплоидный кариотип, без стратифицирующих генетических аномалий.

Ввиду ранее выявленной тотальной и яркой экспрессии CD22 и iCD79a опухолевыми клетками у данной пациентки, сочетание CD22 и iCD79a было выбрано для выделения В-клеточного региона для поиска опухолевых клеток на точечных графиках. В результате анализа были обнаружены клетки ВП-ОЛЛ в количестве 0,359% от ядросодержащих клеток образца, только 87% клеток данной опухолевой популяции экспрессировали CD19 (фиг. 3).

Пример 3. Пациент Ф., 13 лет

Диагноз: ВП-ОЛЛ, ВII иммуновариант, гиперплоидный кариотип, без стратифицирующих генетических аномалий.

До проведения CAR-T против CD19 опухолевые клетки пациента тотально и ярко экспрессировали CD22 и имели лишь частичную экспрессию iCD79a (53% позитивных клеток), поэтому при анализе данных в выделение В-клеточного региона производилось только на основании только экспрессии CD22. В результате были обнаружены клетки ВП-ОЛЛ в количестве 1,163% от ядросодержащих клеток образца, при этом экспрессия CD19 на данных клетках отсутствовала (фиг. 4).

Пример 4. Пациент К., 6 лет

Диагноз: ВП-ОЛЛ, BI иммуновариант с коэкспрессией CD15, NG2, t(4;11)(q21;q23).

Ранее было установлено, что клетки пациента ярко и гомогенно экспрессируют iCD79a, при этом CD22 экспрессировался всего 71% клеток опухолевой популяции. В связи с этим выделение В-клеточного региона при анализе цитометрических данных производилось по экспрессии iCD79a. В данном регионе были выявлены клетки ВП-ОЛЛ в количестве 0,161% (фиг. 5).

Пример 5. Пациент К., 4 года

Диагноз: ВП-ОЛЛ, ВII иммуновариант, без стратифицирующих генетических аномалий.

До проведения иммунотерапии клетки ВП-ОЛЛ пациента имели гетерогенную экспрессию CD22 и iCD79a - 72% и 65% позитивных клеток опухолевой популяции соответственно, при этом клетки тотально и ярко экспрессировали маркеры CD24 и CD10. В данном случае в качестве маркера для выделения В-клеточного региона был выбран CD24. В данном регионе на основании гиперэкспрессии CD10 были детектированы клетки ВП-ОЛЛ с гетерогенной экспрессией CD22, CD19, iCD79a в количестве 0,341% (фиг. 6).

Исследование было проведено в соответствии с действующими нормативными-правовыми и этическими требованиями, предъявляемыми к клиническим исследованиям с участием детей (Федеральный закон «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21.11.2011 г. №323-ФЗ в действующей редакции, Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 01.04.2016 г. №200н «Об утверждении правил надлежащей клинической практики») и одобрены Независимым этическим комитетом.

Таким образом, в данном клиническом исследовании отображена возможность применения расширенной панели антител, способных заменить CD19 при анализе данных, и инновационного алгоритма анализа, учитывающего возможную потерю таргетируемого антигена CD19. Применение заявленного способа позволяет учитывать изменения в антигенном профиле опухолевой популяции и особенности нормальных клеточных популяций костного мозга при применении иммунотерапии.

Фиг. 1. Алгоритм анализа цитометрических данных при определении МОБ методом МПЦ без использования маркера CD19.

Фиг. 2. Перечень нормальных клеточных популяций костного мозга в В-клеточном регионе в зависимости от способа его выделения на точечных графиках.

Фиг. 3. Пример определения МОБ у Пациента 1 с использованием комбинации CD22 и iCD79a для выделения B-клеток. Первая строка содержит последовательность поиска опухолевых клеток на точечных графиках, вторая и третья строки демонстрируют расположение клеток CD22(+)iCD79a(+) на точечных графиках. SSC - показатель бокового светорассеяния. Светло-синий; клетки В-клеточного региона; красные, опухолевые бласты; зеленый, CD19(+) В-предшественники; фиолетовый, CD19(-) В-предшественники; темно-синий, зрелые В-лимфоциты; серый, другие ядросодержащие клетки.

Фиг. 4. Пример определения МОБ у Пациента 2 с использованием CD22 для выделения B-клеток. Первая строка содержит последовательность поиска опухолевых клеток на точечных графиках, вторая и третья строки демонстрируют расположение клеток CD22(+) на точечных графиках. SSC - показатель бокового светорассеяния. Светло-синий; клетки В-клеточного региона; красные, опухолевые бласты; зеленый, CD19(+) В-предшественники; фиолетовый, CD19(-) В-предшественники; темно-синий, зрелые В-лимфоциты; черный, CD22(+) нормальные миелоидные клетки; серый, другие ядросодержащие клетки.

Фиг. 5. Пример определения МОБ у Пациента 2 с использованием iCD79a для выделения B-клеток. Первая строка содержит последовательность поиска опухолевых клеток на точечных графиках, вторая и третья строки демонстрируют расположение клеток iCD79a(+) на точечных графиках. SSC - показатель бокового светорассеяния. Светло-синий; клетки В-клеточного региона; красные, опухолевые бласты; зеленый, CD19(+) В-предшественники; фиолетовый, CD19(-) В-предшественники; оранжевый, плазматические клетки; серый, другие ядросодержащие клетки.

Фиг. 6. Пример определения МОБ у Пациента 2 с использованием CD24 для выделения B-клеток. Первая строка содержит последовательность поиска опухолевых клеток на точечных графиках, вторая и третья строки демонстрируют расположение клеток CD24(+) на точечных графиках. SSC - показатель бокового светорассеяния. Светло-синий; клетки В-клеточного региона; красные, опухолевые бласты; зеленый, CD19(+) В-предшественники; серый, другие ядросодержащие клетки.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и предназначено для определения минимальной остаточной болезни (МОБ) методом мультипараметрической проточной цитометрии (МПЦ) у пациентов с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (ВП-ОЛЛ), получающих CD19-направленную иммунотерапию. Для выявления остаточных опухолевых клеток в аспирате костного мозга используют панель антител, включающую в себя антитела к CD10, CD34, CD58, CD38, CD20, CD45, CD19. Также относится к дополнительным В-линейным антигенам CD22, CD24 и CD79a. Проводят оценку количества остаточных опухолевых клеток в костном мозге. Изобретение обеспечивает оригинальный метод определения МОБ методом МПЦ у пациентов с ВП-ОЛЛ, получающих CD19-направленную иммунотерапию, позволяющим производить мониторинг результатов терапии с высокой эффективностью, не уступающей молекулярным методам диагностики.

6 ил., 4 пр.

Способ количественной оценки остаточных опухолевых клеток в костном мозге методом мультипараметрической проточной цитометрии у пациентов с В-линейным острым лимфобластным лейкозом после применения CD19-направленной иммунотерапии, отличающийся тем, что для выявления остаточных опухолевых клеток в аспирате костного мозга используют панель антител, включающую в себя антитела к CD10, CD34, CD58, CD38, CD20, CD45, CD19, также к дополнительным В-линейным антигенам CD22, CD24 и CD79a, и проводят оценку количества остаточных опухолевых клеток в костном мозге.