Штамм спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis spp. morrisoni, обладающий инсектоакарицидной, фунгицидной и стимулирующей рост растений активностью Российский патент 2024 года по МПК A01N63/23 C12N1/20 

Изобретение относится к штамму спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis spp. morrisoni, обладающему инсектицидной активностью против жесткокрылых насекомых-вредителей, акарицидной активностью в отношении паутинного клеща, фунгицидной активностью, а также стимулирующему рост растений. Изобретение может использоваться в биотехнологии для получения микробиологического препарата, примененяемого в сельском хозяйстве.

Известен штамм Bacillus thuringiensis 16T100/18 (патент RU 2559548 C2) для борьбы с колорадским жуком. Недостаток штамма - узкий спектр действия.

Известен штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki, обладающий инсектоакарицидной активностью против представителей отрядов Lepidoptera/ Coleoptera, Homoptera, Thysanoptera и Acariformes (патент RU 2278159 C1). Штамм получен в результате скрещивания методом Гонзалеса (Gonzalez J.M., Brown B.J., Carlton B.C. 1982. Transfer of Bacillus thuringiensis plasmids cording for delta endotoxin among strains of B.thuringiensis and B.cereus. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.79^6951-6955) двух родительских штаммов Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki ВКПМ-В-1226 и Bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis ВКПМ В-5081. В большинстве стран применение таких генетически модифицированных организмов ограничено или вовсе находится под запретом из-за потенциальных рисков для здоровья человека, с одной стороны. С другой стороны, в генетически модифицированных микроорганизмах имеется вероятность потери плазмид, количество копий плазмид в модифицируемых клетках может значительно варьировать, что не гарантирует стабильность свойств штамма Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki.

Известен штамм Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis 56 в качестве полифункционального средства для растениеводства (патент RU 2692655 C2). Штамм проявляет энтомоцидную активность в отношении жесткокрылых насекомых (Coleoptera), антифунгальной активности против фитопатогенных грибов и ростостимулирующим действием на растения. Этот штамм кроме дельта- эндотоксина синтезирует бета-экзотоксин, который хотя и имеет широкий спектр действия на насекомых, однако небезопасен для теплокровных и человека.

Известен штамм рода Bacillus. thuringiensis ssp. morrisoni, Btm (В.С. Масленникова, В.П. Цветкова, С.М. Нерсесян, Е.В. Бедарева, Г.В. Калмыкова, И.М. Дубовский и Л.А. Литвина/ "Влияние инокуляции клубней картофеля бактериями рода bacillus на популяцию ризосферных микроорганизмов"//«Вестник НГАУ» - 1(62)/2022, стр. 46-55.). Исследованы состав и структура микробного сообщества почвы при предпосадочной инокуляции клубней картофеля сорта Тулеевский штаммом B. thuringiensis ssp. morrisoni c титром 2,7⋅10⁶ КОЕ/мл, который оказал существенный эффект на бактерии-аммонификаторы. Указанный бактериальный штамм угнетал развитие грибов родов Fusarium и Penicillium. При применении штамма B. thuringiensis vs. morrisoni в 2020 г. он оказывал полифункциональное положительное действие, а бактерии, усваивающие минеральный азот, развивались активнее.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является штамм Bacillus thuringiensis с ростостимулирующей и фунгицидной активностью (Горобей И.М., Калмыкова Г.В., Давыдова Н.В., Андреева И.В. "Штаммы Bacillus thuringiensis с ростостимулирующей и фунгицидной активностью"// Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2018. Т. 48. № 6. С. 5-12. DOI: 10.26898/0370-8799-2018-6-1). В публикации представлены результаты изучения ростостимулирующей и антифунгальной активности штамма Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni. Выявлено положительное влияние изученного штамма на морфометрические показатели проростков ярового рапса и яровой пшеницы. Обработка семян ярового рапса B. thuringiensis способствовала достоверному увеличению длины корней. Выявлена тенденция снижения количества пораженных корневой гнилью проростков яровой пшеницы при обработке семян штаммом B. thuringiensis ssp. morrisoni. Ингибирующая активность штамма B. thuringiensis на 10-е сутки эксперимента в отношении Fusarium oxysporum варьировала от 68 до 83%, Alternaria alternata от 71 до 89%. Проведенный анализ показал, что исследуемый штамм стимулировал рост растений ярового рапса и яровой пшеницы и проявляли антифунгальную активность.

Техническим результатом заявляемого изобретения является расширение спектра новых экологически безопасных штаммов бактерий Bacillus thuringiensis, сочетающих высокую инсектицидную активность в отношении насекомых отряда Coleoptera c акарицидной активностью против паутинного клеща Tetranychus urticae, проявляющего фунгицидную активность против фитопатогенных грибов и обладающего ростостимулирующим действием на растения.

Указанный технический результат достигается получением штамма спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9, обладающего инсектоакарицидной, фунгицидной и стимулирующей рост растений активностью, пригодный для органического земледелия и депонированный в Биоресурсном Центре Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ В-14326.

Изобретение иллюстрируется следующими графическими материалами. На фиг. 1 приведена сшитая из секвенограмм последовательность образца штамма КА9. На фиг. 2 приведена фотография световой микроскопии споро-кристаллической суспензии Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 ВКПМ-14326. На фиг. 3 представлены данные электрофоретического анализа в 10% SDS-PAGE споро-кристаллических смесей: 1 - Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 ВКПМ-14326, 2 - Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, 3 - Bacillus thuringiensis ssp. amagiensis.

Штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 выделен из природных образцов (погибших личинок колорадского жука, собранных на картофельном поле в Новосибирской области, в 2014г.) с последующей многоступенчатой селекцией: к суспензии штамма Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 в питательном бульоне Луриа-Бертрани добавляли 0,25М ацетата натрия и инкубировали 4ч при 30°С, постоянно перемешивая. Затем образцы прогревали при 80°С в течение 15 минут и точечно высевали на агаризованные среды с различным содержанием аминного азота и глюкозы. Выросшие колонии исследовали световой микроскопией для определения наличия и синхронности высыпания параспоральных кристаллов на всех средах. Отобранные варианты культивировали в жидких питательных средах для определения морфологической однородности и стабильности. Полученный штамм Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 обладал морфологической однородностью и образовывал крупные близкие к прямоугольной форме параспоральные включения разных размеров после культивирования в жидкой питательной среде через 48 часов. Штамм давал положительную реакцию жгутикового антигена с типовой сывороткой H8ab. Штамм был депонирован во Всероссийскую коллекцию промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-14326, что подтверждается справкой о депонировании от 27 сентября 2022 г. (Справка прилагается).

Результаты по идентификации заявляемого штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp.morissoni KA9 с помощью секвенирования нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК бактериальной ДНК.

Исходные условия: четыре образца геномной ДНК

Краткий протокол работы:

• Получена ДНК фрагмента гена 16S размером около 1500 н.п, с помощью ПЦР и специфических для гена 16S рРНК праймеров в препаративном количестве.

• Полученная ДНК очищена от компонентов реакции ПЦР (праймеры, dNTP, полимераза) с помощью сорбции на магнитных частицах.

• Фрагмент гена 16S рРНК для каждого образца секвенирован с двух сторон по методу Сэнгера и проанализирован на автоматическомкапиллярном генном анализаторе ABI3130XL.

• Секвенограммы всех исследуемых образцов ДНК проанализированы на предмет гомологии/идентичности c помощью программы BLAST базы данных ГенБанк и классификатора базы 16S рибосомальных последовательностей - RDB.

На фиг. 1 и в приложении приведена сшитая из секвенограмм нуклеотидная последовательность SEQ ID NO:1 образца штамма КА9.

Blast анализ нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК, образец КА9:

№ Ближайший гомолог Номер в Genbank % гомологии 1 Bacillus thuringiensis YBT-1518 NC_022873 99,65 2 Bacillus cereus ATCC 14579 NC_004722 99,58

Заявляемый штамм Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 ВКПМ-14326 не продуцирует водорастворимый бета-экзотоксин, синтезирует инсектицидный дельта-эндотоксин, состоящий из белка, кодируемого генами cry3A.

1. Культивирование штамма.

Для культивирования штамма использовали питательные среды: А, Б, LB следующего состава, г/л:

Среда А:

Пептон «Difco» -7,0;

Панкреатический гидролизат рыбной муки - 4,0;

Натрия хлорид - 5,0;

Вода дистиллированная - 1000 мл.

Среда Б:

Пептон «Difco» -7,0;

Панкреатический гидролизат рыбной муки - 4,0;

Натрия хлорид - 5,0;

Д-глюкоза - 5,0;

Вода дистиллированная - 1000 мл.

Среда LB:

Триптон «Difco» -10,0;

Дрожжевой экстракт «Difco» -5,0;

Натрия хлорид - 10,0;

Вода дистиллированная - 1000 мл.

Для приготовления агаризованных питательных сред в жидкие среды дополнительно добавляли агар (1,2 мас.%).

2. Культурально-морфологические свойства. Культурально-морфологические особенности штамма с указанием среды: грамположительные подвижные, образующие жгутики, палочки размером 0,7-1,2 × 2,5-4,0 мкм. Через 96 ч роста на агаризованной среде «А» образуют овальные споры размером 0,5 ×× 1,0 мкм и параспоральные включения близкие к прямоугольной форме разных размеров (рис.1). На среде «А» штамм образует серые крупные плотные, плоские колонии с мелкозернистой поверхностью, край колоний слегка волнистый. На среде «Б» - колонии крупные плоские, чуть морщинистые с плотным беловатым центром, край - расплывчато-войлочный, серый, поверхность мелкозернистая. На среде Лурия-Бертрани формируются крупные, плоские, плотные, белые колонии с волнистым краем и мелкозернистой поверхностью. В жидких питательных средах рост умеренный, образует равномерную муть. Оптимальная температура роста +28°С.

На Фиг. 2 предсталена фотография световой микроскопии споро-кристаллической суспензии Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 ВКПМ-14326.

3. Физиолого-биохимические признаки. Органические источники азота, используемые данным микроорганизмом: пептон, мясные, рыбные и растительные экстракты. Соевая, кукурузная и рыбокостная муки, автолизаты дрожжей и казеина, гидролизаты соевой и кукурузной муки, кормовые дрожжи. Штамм усваивает аммонийные и нитратные формы азота, глюкозу и глицерин в виде углеводного питания. Штамм КА9 продуцирует ацетилметилкарбинол, проявляет амилазную, протеазную активности, не обладает уреазной и лецитиназной активностями. Не сбраживает салицин, но сбраживает маннозу, сахарозу с образованием кислоты. Штамм КА9 устойчив к бензилпенициллину (10ЕА) и оксациллину (1 мкг), не проявляет лизоцимную активность. Штамм не продуцирует бета-экзотоксин. Дает положительную реакцию жгутикового антигена с типовой сывороткой Bacillus thuringiensis spp. morissoni H-8ab.

4. Молекулярно генетические свойства. Электрофорез споро-кристаллической смеси штамма KA9 в SDS-PAGE показал присутствие инсектицидного Coleoptera-специфичного белка в области 70 кДа (рис.2). Результаты ПЦР-анализа показали присутствие cry3 гена в ДНК штамма. Штамм KA9 содержал ген ацил-гомосеринлактоназы (aiiA), отвечающий за контроль сигнальных молекул, которые регулируют плотность популяции (QS) фитопатогенов. На фиг. 3 приведен электрофоретический анализ в 10% SDS-PAGE споро-кристаллических смесей: 1 - Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9 ВКПМ-14326, 2 - Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, 3 - Bacillus thuringiensis ssp. amagiensis,

5. Биологические свойства штамма

Штамм проявляет инсектицидную активность против личинок первого-третьего возраста колорадского жука Leptinotarsa decemlineata, акарицидную активность в отношении паутинного клеща Tetranychus urticae, подавляет рост фитопатогенных грибов: Fuzarium oxisporum, Alternaria alternata, Rhizoctonia solani, Bipolaris sp., повышает урожайность картофеля. Штамм сочетает ростостимулирующее действие на яровом рапсе и яровой пшенице с фунгицидной активностью в отношении фитопатогенных грибов Fusarium oxysporum и Alternaria alternata.

Изобретение проиллюстрировано следующими примерами

Пример 1. Культивирование штамма Bacillus thuringiensis ВКПМ В-1432. Для культивирования штамма использовали колбы Эрленмейера объемом 750 мл, которые заполняли 100 мл стерильной среды «А». Среду готовили на дистиллированной воде, доводили значение рН до 7,0, разливали в колбы по 100 мл и стерилизовали в автоклаве при давлении 1,1 атм при температуре 121°С в течение 15 минут. После стерилизации колбы с содержащейся в них средой охлаждали до комнатной температуры. Стерильность и рН контролировали путем стерильного отбора пробы среды. Колбы инокулировали внесением 1 мл посевного материала, приготовленного следующим образом: в стандартную пробирку с 5 мл стерильного физиологического раствора, помещали бактериальную культуру, собранную петлей с агаризованной среды «А». Содержимое пробирки после контроля на отсутствие посторонней микрофлоры использовали как посевной материал.

Штамм выращивали при температуре +28-30°С при встряхивании (220 об/мин) в течение 72 часов. В процессе культивирования осуществляли контроль на отсутвие посторонней микрофлоры светооптическим методом или визуального контроля за морфологией колоний, выросших после высева культуральной жидкости штамма на чашке Петри с агаризованной питательной средой «А». Через 72 часа методом световой микроскопии оценивали наличие и размер кристаллов. А также определяли титр КОЕ (колоний образующих единиц - бактериальных клеток и спор), которая на среде «А» составляла 1,0×10⁹ КОЕ/мл.

Пример 2. Оценка инсектицидной активности заявляемого штамма в лабораторных условиях.

Оценку инсектицидной активности для личинок колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata) первого-второго возраста проводили в лабораторных условиях. Для этого в чашки Петри разливали 1,5% голодный агар, на который помещали по 2 отчлененных листа картофеля (площадью по 4-5 см²). На каждый лист наносили по 40 мкл споро-кристаллической суспензии штамма Bacillus thuringiensis ssp.morissoni ВКПМ В-14326 с титром 1,0 х10⁷ спор/мл, споро-кристаллической суспензии штамма Bacillus thuringiensis ssp. thuringiensis с титром 5,0×10⁸ спор/мл, в качестве контроля использовали физиологический раствор и препарат Битоксибациллин.

Как следует из результатов, представленных в таблице 1, споро-кристаллическая суспензия заявляемого штамма ВКПМ B-14326 обладает высокой инсектицидной активностью против личинок колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata), чем отличается от штамма Bt ssp. thuringiensis - продуцента битоксибациллина, y которого активность против этого насекомого отсутствует. Действие препарата битоксибациллина обусловлено наличием в-экзотоксина, синтезируемого в процессе вегетативного роста в питательную среду.

Таблица 1 Гибель личинок колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata) первого-второго возраста при действии споро-кристаллических суспензий штаммов Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 (титр 1,0×10⁷ спор/мл) и Bt ssp. thuringiensis (титр 5,0×10⁸ спор/мл) и препарата Битоксибациллин в лабораторных условиях Штамм/препарат Гибель личинок, % на 3-и сутки Контроль 0 Битоксибациллин 93,3±2,9 Bt ssp. thuringiensis* 0 Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 100

Примечание: * - продуцент Битоксибациллина, выделенный при рассеве препарата

Пример 3. Акарицидная активность заявляемого штамма в лабораторных условиях.

Лабораторные эксперименты по оценке акарицидного действия споро-кристаллической суспензии заявляемого штамма ВКПМ B-14326 проводили чашечным методом, включающим нанесение рабочей суспензии на кормовой субстрат с дальнейшей подсадкой тестируемых клещей Tetranychus urticae. На кормовое растение наносили по 100 мкл споро-кристаллической суспензии штамма Bacillus thuringiensis ssp.morissoni ВКПМ В-14326 с титром 1,0×10⁸ спор/мл. Для опыта отбирали одновозрастных клещей, варианты лабораторных экспериментов закладывали в 3-5-ти кратной повторности. Количество тестируемых паутинных клещей - от 25 до 95 особей на одну повторность. Учеты количества выживших клещей проводили на 3-й и 5-й день после начала опыта. Расчет биологической эффективности проводили по формуле Аббота.

Результаты лабораторного эксперимента приведены в таблице 2.

Данные таблицы 2 свидетельствуют о высокой акарицидной эффективности заявляемого штамма ВКПМ B-14326 в отношении клещей Tetranychus urticae. Выживаемость клещей через 5 суток после обработки споро-кристаллической суспензией составила 17%, тогда как в контроле количество увеличилось на 28%.

Таблица 2 Действие споро-кристаллической суспензии штамма Bacillus thuringiensis ssp. morissoni ВКПМ В-14326 (титр 1,0×10⁸ спор/мл) на паутинного клеща Tetranychus urticae Вариант Исходная выборка особей Количество живых особей, % от первоначальной численности, по суткам Биологическая эффективность на 5-е сутки, % 3 4 5 6 Контроль 45 43 96 48 107 25 33 132 32 128 40 60 150 59 148 124 128 Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 75 40 53 15 20 80 25 31 15 19 95 40 42 20 21 75 46 61 7 9 65 15 23 10 15 42 17 83,0

Пример 4. Оценка фунгицидной активности заявляемого штамма в лабораторных условиях

Фунгицидную активность микроорганизмов определяли методом агаровых блоков. Фитопатогенные тест-культуры возбудителя альтернариоза ярового рапса Alternariaa aternata и наиболее распространенного возбудителя фузариоза сельскохозяйственных культур - Fusarium oxysporum культивировали на среде Чапека в течение 6 сут. Заявляемый штамм ВКПМ B-14326 высевали сплошным «газоном» на поверхность агаризованной среды «Б», в центр чашки Петри помещали вырезанные диски фитопатогенных грибов. Чашки Петри инкубировали в термостате при 25-28°С в течение 7-10 суток. Опыты по определению фунгицидной активности закладывали в четырехкратной повторности.

Антагонистическую активность штамма ВКПМ B-14326 оценивали по величине диаметра фитопатогенного гриба в опытных вариантах в сравнении с контролем. Ингибирующую активность (ИА) рассчитывали по формуле ИА =(Дк - До)/ Дк × 100, где Дк - диаметр колонии в контрольном варианте, см; До - диаметр колонии в опытном варианте, см. Полученные результаты приведены в таблице 3.

Таблица 3 Влияние споро-кристаллической суспензии штамма
Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 (титр 1,0×10⁶ спор/мл) на рост фитопатогенных тест-культур Вариант Диаметр колонии, см Ингибирующая активность, % R. solani Сутки 7 10 7 10 Контроль 9,5 9,5 - - Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 1,2 1,2 88 88 Al. alternata Сутки 7 10 7 10 Контроль 8,8 8,9 - - Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 1,7 2,1 81 76 F. oxysporum Сутки 7 10 7 10 Контроль 9,0 9,0 - - Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 1,5 1,5 83 83

Результаты, представленные в таблице 3, свидетельствуют о том, что штамм ВКПМ B-14326 обладает антагонистической активностью в отношении фитопатогиенных грибов, наиболее часто вызывающих болезни растений.

Пример 5. Ростостимулирующее действие

Способность штамма оказывать ростостимулирующее действие исследовали в лабораторных опытах на яровом рапсе и сое. При оценке ростостимулирующего действия использовали метод рулонов согласно ГОСТ 123038-84. Учет морфометрических показателей проводили на 7-е сутки эксперимента.

Для проведения полевого эксперимента семена ярового рапса и сои накануне посева обрабатывали споро-кристаллической суспензии штамма Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326. Семена контрольного варианта замачивали в дистиллированной воде. Посевная и учетная площадь делянки составляла 36 м², повторность 3-х кратная, размещение в 1 ярус. Учет урожайности семян ярового рапса и сои проводили в период их созревания. Урожайность зеленой массы ярового рапса учитывали в фазе цветения, сои в фазе налива стручков, рамкой на площади 0,25 м² по 2 площадки.

Результаты опытов представлены в таблице 4.

Таблица 4 Ростостимулирующая активность споро-кристаллической суспензии штамма
Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 (титр 1,0×10⁶ спор/мл) в отношении ярового рапса Культура % к контролю Длина корней Высота проростка Урожайность семян Биологическая урожайность Яровой рапс 290 140 127 143 Соя 115 129 108 138

Лабораторные и полевые испытания, представленные в таблице 4, показали, что обработка семян споро-кристаллической суспензией штамма Bt ssp. morissoni ВКПМ -14326 оказывала положительное влияние на рост корней и проростков растений что подтверждает ростостимулирующие свойства штамма, а в полевых опытах обработка семян повышала урожайность проверенных кормовых культур.

Полевые опыта также были проведены на картофеле для оценки ростостимулирующего действия штамма Bt ssp. morissoni ВКПМ-14326. Для проведения эксперимента клубни картофеля перед посадкой опрыскивали споро-кристаллической суспензией, а в контроле - водой. Подсушенные клубни сажали в землю и выращивали обычным методом. Через 10 недель роста измеряли количество и высоту стеблей, вес растений, а после сбора картофеля определяли полученный урожай. Результаты опыта приведены в таблице 5.

Результаты опыта, представленные в таблице 5, демонстрируют ростостимулирующее влияние штамма на ботву и урожайность картофеля при опрыскивании им клубней. Контрольный вариант уступает по высоте, количеству стеблей и особенно по весу растения на 10-ю неделю учета. Предпосевное опрыскивание клубней картофеля споро-кристаллической суспензией штамма повышает урожайность на 58%.

Таблица 5 Влияние культуральной жидкости на основе штамма
Bt ssp. morissoni ВКПМ В-14326 (титр 1,0×10⁶ спор/мл) на рост и развитие картофельной ботвы и урожай картофеля Вариант Учет на 10 недель Урожайность, % к контролю Вес растений, г Высота стеблей, см Количество стеблей, шт. Контроль 292 60,5 2,8 - Bt ssp. morissoni
ВКПМ В-14326 1285 77 3,7 158

Таким образом, примеры 2-5 подтверждают достижение заявляемого технического результата, а именно: получение нового экологически безопасного штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp. morissoni ВКПМ-14326, сочетающего высокую инсектицидную активность в отношении насекомых отряда Coleoptera c акарицидной активностью против паутинного клеща Tetranychus urticae, проявляющего фунгицидную активность против фитопатогенных грибов и обладающего ростостимулирующим действием на растения.

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="Штамм Btm КА9.xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.3.0"

productionDate="2023-11-05">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>123456</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-11-05</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>12345</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>1234567</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-10-29</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">Общество с ограниченной

отвественностью (ООО) «Микопро».</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>OOO &quot;Mikopro&quot;</ApplicantNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Штамм спорообразующих бактерий

Bacillus thuringiensis spp. morrisoni, обладающий инсектоакарицидной,

фунгицидной и стимулирующей рост растений

активностью</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>1424</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..1424</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tgcaagtcgagcgaatggattnagagcttgctctnangaagttagcggc

ggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcccataagactgggataactccgggaaaccggggctaatac

cggataacattttgaactgcatggttcgaaattgaaaggcggcttcggctgtcacttatggatggacccg

cgtcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaacgatgcgtagccnacctgagagggtga

tcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatg

gacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttagg

gaagaacaagtgctagttgaataagctggcaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacg

tgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcagg

tggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactgggagacttga

gtgcagaagaggaaagtggaattccatgtgtagcggtgaaatgcgtagagatatggaggaacaccagtgg

cgaaggcgactttctggtctgtaactgacactgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagatac

cctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgaagtta

acgcattaagcactccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattgacgggggcccgc

acaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctga

aaaccctagagatagggcttctccttcgggagcagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtg

tcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccatcattaagttgggc

actctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatg

acctgggctacacacgtgctacaatggacggtacaaagagctgcaagaccgcgaggtggagctaatctca

taaaaccgttctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagctggaatcgctagtaatcgcg

gatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgta

acacccgaagtcggtggggtaaccttttnggagccagccgcctaa</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к штамму спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis spp. morrisoni КА9, обладающему инсектоакарицидной, фунгицидной и стимулирующей рост растений активностью, пригодному для органического земледелия и депонированному в Биоресурсном Центре Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ В-14326, обладающему инсектицидной активностью против жесткокрылых насекомых-вредителей, акарицидной активностью в отношении паутинного клеща, фунгицидной активностью, а также стимулирующему рост растений. Изобретение может использоваться в биотехнологии для получения микробиологического препарата, применяемого в сельском хозяйстве. Изобретение позволяет расширить спектр новых экологически безопасных штаммов бактерий Bacillus thuringiensis, сочетающих высокую инсектицидную активность в отношении насекомых отряда Coleoptera c акарицидной активностью против паутинного клеща Tetranychus urticae, проявляющего фунгицидную активность против фитопатогенных грибов и обладающего ростостимулирующим действием на растения. 3 ил., 5 табл.

Штамм спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni КА9, обладающий инсектоакарицидной, фунгицидной и стимулирующей рост растений активностью, пригодный для органического земледелия и депонированный в Биоресурсном Центре Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ В-14326.