Искусственный пептид для лечения черепно-мозговой травмы Российский патент 2024 года по МПК C07K7/08 A61K38/10 A61P9/10 

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) представляет собой нарушение функций мозга, вызванное приложением внешней физической силы. Лечение ЧМТ, особенно тяжелой ЧМТ, представляет сложную проблему [Khellaf A., Zaman Khan D. Z., Adel Helmy A. Recent advances in traumatic brain injury // Journal of Neurology. 2019. T. 266. C. 2878-2889. https://doi.org/10.1007/s00415-019-09541-4].

Кроме непосредственных повреждений ткани мозга, вызванных ранениями, контузией, геморрагией, диффузным нарушением аксонных связей, ЧМТ характеризуется нарушениями цитокинового сигналинга, повреждением гематоэнцефалического барьера и развитием нейровоспаления [Pearn М.L., Niesman I.R. Egawa J. et al. Pathophysiology Associated with Traumatic Brain Injury: Current Treatments and Potential Novel Therapeutics // Cell Mol Neurobiol. 2016. DOI 10.1007/s10571-016-0400-1].

Известен Са-связывающий белок S100A12, являющийся алармином, иммуномодулятором, а также стимулятором роста нейритов в культивируемых нейронах головного мозга [MikkelsenS.E., NovitskayaV., KriajevskaM. et al. S100A12 protein is a strong inducer of neurite outgrowth from primary hippocampal neurons // J. Neurochem. 2001. V. 79. P. 767-776. doi: 10.1046/j.l471-4159.2001.00605.x.; Donato R. Intracellular and extracellular roles of S100 proteins // Microsc Res Tech. 2003. V. 60. P. 540-551. doi: 10.1002/jemt. 10296.]

Также известно, что в регенерации тканей мозга важную роль играют специализированные факторы роста - нейротрофины, поддерживающие и стимулирующие пролиферацию, развитие и диффференцировку нейронов. К нейтротрофинам относятся фактор роста нервов (nerve growth factor, NGF) и нейротрофический фактор мозга (brain-derived neurotrophic factor, BDNF). По современным представлениям NGF обеспечивает сохранение популяций нейронов и связей между ними в оптимальном функциональном состоянии, контролирует репаративные процессы, a BDNF обеспечивает синаптическую консолидацию, способствуя долговременной потенциации и памяти [Иванов А.Д. // Журнал высшей нервной деятельности, 2014, том 64, №2, с. 137-146. doi: 10.7868/S0044467714020099].

Все вышеперечисленные факторы являются белками, проникновение которых в ткани головного мозга затруднено наличием гематоэнцефалического барьера. Однако синтез нейтротрофинов in situ может стимулироваться, в частности, естественными или искусственно сконструированными пептидами, проникновение которых в ткани головного мозга через гематоэнцефалический барьер является более эффективным вследствие их относительно небольшой молекулярной массы [Abbott N. J., Patabendige A. A., Dolman D. Е. et al. Structure and function of the blood-brain barrier // Neurobiol. Dis. 2010. V. 37. P. 13-25. doi: 10.1016/j.nbd.2009.07.030.].

В частности, известен пептид γ-глутамил-аланин (H-Glu(Ala)-OH), обладающий нейростимулирующей и нейропротекторной активностью. Данный пептид предложено использовать для восстановления способности к обучению и улучшения памяти. Однако возможность применения γ-глутамил-аланина для лечения последствий ЧМТ не изучалась [RU 2768475].

Известен другой пептид, H-Glu-Asp-Arg-OH [RU 2301678], стимулирующий регенерацию нейронов. Курс лечения данным пептидом крысспредварительно нанесенной ЧМТ, ускорял показатель обучаемости крыс в промежутке времени 96 час - 30 суток после ЧМТ, а также координацию движений и мышечный тонус травмированных крыс.В клинических испытаниях было показано, что у больных, перенесших ЧМТ и принимавших H-Glu-Asp-Arg-OH, наблюдались ускоренное восстановление внимания и альфа-ритма головного мозга по сравнению с контрольной группой.

Известен нейрозащитный искусственный пептид Gly-Arg-Gly-Cys-Thr-Pro [RU 2019126014], нейропротективное действие которого было изучено на модели глаукомы и заболеваний сетчатки глаза, однако действие данного пептида при лечении ЧМТ и последствий ЧМТ не исследовалось

Также известен искусственный гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, торговое название Семакс [RU2 045958], обладающий ноотропным, церебропротективным, антигипоксическим, антиокеидантным действием. Семакс применяется для лечения интеллектуально-мнестических расстройств, возникающих при сосудистых поражениях головного мозга, дисциркуляторной энцефалопатии, а также для лечения последствий черепно-мозговой травмы и инсульта.

С целью расширения спектра пептидов, обладающих нейропротективным действием и стимулирующих регенерацию тканей головного мозга после ЧМТ, нами были сконструированы и испытаны в опытах in vivo новые синтетические пептиды miniBac-1, Вас5-2, PR5.

Молекулярный дизайн новых пептидов

Пептид miniBac-1

Пептид miniBac-1 содержит 14 аминокислотных остатков (Arg-Arg-Leu-Arg-Pro-Arg-Thr-Arg-Pro-Arg-Phe-Pro-Gly-Pro), его молекулярная масса - 1760 Да. Данный пептид состоит из фрагментов известных пептидов: мини-бактенецина mini-ChBac7.5Na (Arg-Arg-Leu-Arg-Pro-Arg), тафтцина (Thr-Arg-Pro-Arg), а также фрагмента N-концевого участка адренокортикотропного гормона человека (Phe-Pro-Gly-Pro).

Мини-бактенецин домашней козы ChBac7.5Na - природный пептид, обладающий антимикробной активностью [Шамова О.В., Орлов Д.С, Жаркова М.С.и др. Мини-бактенецины ChBac7.5Na и ChBac7.5NP - антимикробные пептиды из лейкоцитов козы Capra hircus // Acta Nature. 2016. Т. 8 №3. С. 147-157.]. Тафцин - фрагмент тяжелой цепи иммуноглобулина G, являющийся иммуномодулятором, обладающим нейротропным действием [Kozlovskaya М.М., Kozlovskii I.I., Val'dman, Е. A., et al. Selank and Short Peptides of the Tuftsin Family in the Regulation of Adaptive Behavior in Stress. Neurosci. Behav. Physiol. 2003. V. 33. P. 853-860. doi:10.1023/a: 1025988519919; Fridkin, M., Najjar, V. A. Tuftsin: Its Chemistry, Biology, and Clinical Potentia // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1989. V. 24. P. 1-40. doi: 10.3109/ 10409238909082550].

Фрагмент АКТГ (Phe-Pro-Gly-Pro) известен как составная часть искусственного пептида Семакса, обладающего ноотропным действием [Glazova N.Y., Manchenko D.М, Volodina М.A., et al. Semax, synthetic АСТH (4-10) analogue, attenuates behavioural and neurochemical alterations following early-life fluvoxamine exposure in white rats // Neuropeptides. 2021. V. 86. P. 102114. doi: 10.1016/j.npep.2 020.102114.].

Пептид PR5

Пептид PR5 noSeqIDNo 1 состоит из 15 аминокислот (Arg-Arg-Arg-Pro-Pro-Ile-Pro-Arg-Pro-Pro-Ile-Arg-Pro-Gly-Pro), его молекулярная масса также составляет 1,76 Да. Пептид PR5 составлен из фрагментов известных пептидов: PR-39 (Arg-Arg) и ChBac5 (Arg-Pro-Pro-Ile-Pro-Arg-Pro-Pro-Ile-Arg) [Holani R., Shah С, Haji Q., et al. Proline-arginine rich (PR-39) cathelicidin: Structure, expression and functional implication in intestinal health // Соmр. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2016. V. 49. P. 95-101. doi: 10.1016/j.cimid.2016.10.004; Shamova O., Brogden K.A., Zhao C, et al. Purification and properties of proline-rich antimicrobial peptides from sheep and goat leukocytes. Infect. Immun. 1999. V. 67. №8. P. 4106-4111. doi: 10.1128/IAI.67.8.4106-4111.1999.], на его С-конце расположен глипролин (Pro-Gly-Pro) - фрагмент коллагена, повышающий устойчивость пептидов к действию протеиназ [Zhuikova S.Е., Smirnova Е.А., Bakaeva Z.V., et al. Effect of Semax on homeostasis of gastric mucosa in albino rats // Bull. Exp. Biol. Med. 2000. V. 130. №9. P. 871-873.].

Пептид Bac5-2

Пептид Bac5-2, характеризующийся последовательностью Seq ID No 3 содержит 23 аминокислоты (Pro-Pro-Val-Arg-Pro-Pro-Phe-Arg-Pro-Pro-Phe-Arg-Pro-Pro-Phe-Arg-Pro-Pro-Ile-Gly-Pro-Phe-Pro), его молекулярная масса составляет 2670 Да. Вас5-2 является фрагментом (амк 20-43) известного природного антимикробного пептида ChBac5 [Shamova О., Brogden К.А., Zhao С. et al. Purification and properties of proline-rich antimicrobial peptides from sheep and goat leukocytes // Infect. Immun. 1999. Vol. 67. №8. P. 4106-4111. doi: 10.1128/IAI.67.8.4106-4111.1999.]

Пептиды miniBac-1, Bac5-2 hPR5 были получены путем твердофазного синтеза из Fmoc-аминокислот с помощью автоматического синтезатора пептидов SymphonyX (ProteinTechnologies, США). После завершения синтеза и снятия со смолы пептид был очищен методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии ОФ-ВЭЖХ на хроматографе Beckman Gold System, колонка - Vydac C18 column, 10×250 mm, 5 μm. Чистота пептидов, по данным аналитической хроматографии составляла 96-98%. Молекулярная масса подтверждена данными масс-спектрометрического анализа MALDITOF. Препарат Семакс (1% водный раствор) приобретали в аптеке. Свойства полученных пептидов представлены в примерах

Пример 1. Модель механической травмы головного мозга и дизайн экспериментов

Крысам-самцам породы Wistar массой 300-350 г. травму головного мозга наносили методом "падающего груза" по методике [БурешЯ., Бурешова О., Хьюстон Д. П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения: пер. с англ. Е.Н. Живописцевой. М.: Высшая школа, 1991. 399 с.]. Предварительно животные получали эфирный наркоз. Зона нанесения удара падающим грузом весом 460 г и площадью ударной поверхности 1,5 см² находилась в центральной части теменной области. Препараты вводили интраназально в дозе 100 мкг/кг веса тела, первый раз -через час после черепно-мозговой травмы (ЧМТ) и затем два раза в день в течение 4 дней. Животных содержали в виварии при комнатной температуре с 12-часовым циклом день-ночь на стандартной диете со свободным доступом к воде и пище.

Для сравнения действия пептидов на репарационные процессы в головном мозге после ЧМТ исследовали следующие показатели: экспрессию генов алармина S100A12 и нейротрофических факторов NGF и BDNF в гипоталамусе головного мозга животных, горизонтальную и вертикальную двигательную активность, ориентировочно-исследовательскую реакцию в тесте "открытое поле". Также сравнивали действие пептидов на активность врожденной иммунной системы путем определения цитотоксической и пролиферативной активности спленоцитов.

Животные были разбиты на следующие экспериментальные группы, по 7 животных в каждой:

1 - интактные животные

2 - животные, перенесшие ЧМТ

3-6 - животные, перенесшие ЧМТ и получавшие препараты пептидов

Изучение поведенческих реакций и забор материала для исследования осуществляли на 7 и 14 сутки после ЧМТ.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета прикладных программ «STATISTICA 7» с использованием критерия попарного сравнения Манна-Уитни. Различия считались достоверными при р<0,05.

Пример 2. Изучение экспрессии генов белка-алармина S100A12 и нейротрофических факторов NGF и BDNF в гипоталамусе головного мозга животных

На 7-е и на 14-е сутки после ЧМТ животных из различных экспериментальных групп декапитировали, извлекали головной мозг, из которого выделяли гипоталамус. Выделение общего пула РНК проводили при помощи набора «Aurum Total RNA Fatty and Fibrous Tissue» (Bio-Rad), по предложенному фирмой-производителем протоколу. Постановку ПЦР в реальном времени осуществляли с помощью готовой реакционной смеси, производства фирмы «Синтол», и по рекомендованному фирмой-производителем протоколу. Уровень экспрессии генов определяли относительно экспрессии гена белка-18 малой субъединицы рибосомы (rps18) с использованием метода 2-ΔΔCq. Специфичность продуктов ПЦР устанавливали по кривым плавления. Расчеты всех параметров проводили встроенным программным обеспечением амплификатора. Использовали следующие праймеры:

Праймеры к BDNF (экзон IV):

прямой: 5'-TTCCACTATCAATAATTTAACTTCTTTGC-3'

обратный: 5'-CTCTTACTATATATTTCCCCTTCTCTTCAGT-3'

Праймеры к NGF:

прямой: 5'-GCAGACCCGСААCATСАСTG-3'

обратный: 5'-ТСТCCAАСССАСАСАCTGАСА-3'

Праймеры к S100A12:

прямой: 5'-CTTCCACCAATACTCAGTTCGG-3'

обратный: 5'-GCAATGGCTACCAGGGATATG-3'

Праймеры к rps-18:

прямой: 5'-CAGCAAAGGCCCAAAGACTCAT- '

обратный: 5'-TTTTGGGGCCTTCGTGTCCG-3'

Результаты представлены в таблице 1

Из таблицы 1 следует, что при ЧМТ у крыс экспрессия гена алармина S100A12, стимулирующего врожденную иммунную систему, в течение первой недели после травмы не повышается по сравнению с интактными животными. Все исследованные пептиды повышают ее в 16-26 раз, при этом наиболее активным является пептид PR5. Значительное (более, чем в 30 раз) усиление экспрессии мРНК S100A12 у нелеченых животных наблюдается на 14-е сутки после ЧМТ. Все исследованные пептиды несколько подавляли экспрессию данного гена, однако она в значительной степени (в 17-26 раз) превышала данный показатель у интактных животных. Данный показатель был максимальным также у пептида PR5.

Экспрессия гена NGF у нелеченых животных повышалась как на 7-е, так и на 14-е сутки после ЧМТ, и на 7-е сутки еще более повышалось при введении пептидов Вас5-2 и PR5.Ha 14 -е сутки после ЧМТ введение Вас5-2 в максимальной степени (почти в 4 раза) повышало экспрессию гена NGF.

Введение Семакса снижало экспрессию мРНК NGF на 7 и 14-е сутки после ЧМТ, повышало экспрессию мРНК BDNF на 7-е сутки и снижало ее на 14-е сутки по сравнению с показателем животных с ЧМТ. Между тем, пептиды PR5 и Вас5-2 стимулировали экспрессию гена BDNF как на 7-е сутки, так и на 14-е сутки после ЧМТ.

Пример 3. Изучение влияния синтетических пептидов на активность клеток иммунной системы

Выделенные из селезенки крыс спленоциты (1 × 105/мл) использовали для определения их пролиферативной и цитотоксической активности.

3.1. Определение цитотоксической активности спленоцитов.

В качестве мишеней (2 × 104/лунку) для определения специфической цитотоксичности спленоцитов использовали клетки эритромиелолейкоза человека К-562 Для оценки цитотоксической активности ЕK-клеток селезенки, в лунки круглодонных планшетов (Sarstedt, США) вносили суспензии клеток селезенки и клеток-мишеней в соотношении 5:1.

После инкубации суспезии клеток в среде RPMI-1640 с добавлением 10% инактивированной фетальной сыворотки при температуре 37°С и 5% СO2 в течение 18 часов в каждую лунку добавляли 22 мкл раствора ресазурина (7-гидрокси-3Н-феноксазин-3-он-10-оксида натриевой соли) (Sigma- Aldrich, США) до конечной концентрации 50 мкМ. Планшеты инкубировали еще в течение 4 часов.

Флуоресценцию восстановленного красителя определяли с помощью планшетного флуориметра (Omega) (возбуждение при 530 нм, эмиссия при 590 нм). Цитотоксическую активность ЕK-клеток селезенки в % рассчитывали по формуле:

ЦА=((1 - Фл. яч./фл. контр.) / Фл. контр.)) × 100%

где: ЦА - цитотоксическая активность, фл. яч. - средняя флуоресценция в тест-ячейке; фл. контр. - средняя флуоресценция в контроле

3.2. Определение пролиферативной активности спленоцитов.

Пролиферативную активность спленоцитов крыс оценивали по реакции бласттрансформации лимфоцитов селезенки при добавлении к пробам лектина Конканавалина А и рекомбинантного IL-1β

Отмытые спленоциты культивировали в 96-луночных планшетах в среде для культивирования клеток RPMI-1640, содержащей 2 мМ глютамина. В первую пару лунок вносили по 50 мкл суспензии клеток (1×106 клеток), в третью и четвертую дополнительно вносили 50 мкл Конканавалина А (КонА) (Sigma, 0,75 мкг/мл), в пятую и шестую, помимо Кон А, также вносили дополнительно по 50 мкл рекомбинантного препарата IL-1β (беталейкин) в дозе 250 нг/мл. В качестве контролей использовали культуры спленоцитов без митогенов.

Клетки культивировали при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО₂ и 100% влажности. Через 72 часа после начала инкубации в лунки планшета вносили по 100 мкл ресазурина (концентрация в лунке - 50 мкМ), после чего инкубировали еще 4 часа в СО₂-инкубаторе при 37°С.Флуоресценцию восстановленного красителя определяли с помощью планшетного флуориметра (OmegaStar) (возбуждение при 530 нм, эмиссия при 590 нм).Данные выражали в индексах стимуляции (ИС), рассчитанных по формуле: ИС = опыт/контроль, где опыт - флюоресценция культур лимфоцитов со стимулятором (Кон А, Кон А+ИЛ-1β), контроль - флюоресценция культур лимфоцитов без стимулятора. Все культуры клеток ставились в 3 параллелях.

Результаты определения цитотоксической и пролиферативной активности представлены в таблице 2.

По сравнению с интактными животными, у нелеченых крыс цитотоксичность NK-клеток снижалась на 7 сутки после травмы и восстанавливалась, приближаясь к контрольным значениям, к 14-м суткам.

У животных, пролеченных всеми пептидами, угнетение цитотоксичности NK-клеток на 7 д.п.т. было меньшим по сравнению с травмированными нелечеными животными, причем высокая цитотоксичность наблюдалась при введении Семакс и еще более высокая - при введении PR5. На 14-е сутки после ЧМТ цитотоксическая активность спленоцитов всех животных с ЧМТ восстанавливалась и приближалась к цитотоксичности интактных животных.

ЧМТ достоверно угнетала пролиферативную активность спленоцитов стимулированных митогенами СоnА, и сочетанием СоnА с IL-1β. Данное угнетение носило продолжительный характер, поскольку наблюдалось как на 7-е, так и на 14-е сутки после ЧМТ.

Введение препаратов Семакс и PR5 предотвращало угнетение пролиферативной активности спленоцитов травмированных животных. На 14-е сутки после ЧМТ введение обоих пептидов привело к повышению индекса стимуляции до его значения у интактных животных при стимуляции ConА и сочетанием ConА+IL-1β, причем введение PR5 привело к восстановлению индекса стимуляции спленоцитов уже на 7-е сутки после ЧМТ. Пептид miniBac-1 также предотвращал снижение пролиферативной активности спленоцитов травмированных животных, но только в ответ на комбинированную стимуляцию клеток Кон А и IL-1.

Пример 4. Изучение влияния синтетических пептидов на поведенческие реакции животных.

Для оценки поведенческих реакций животных использовали тест «Открытое Поле». Установка «Открытое поле», представляла собой круглую арену из серого пластика диаметром 1 метр, дно которой разделено на сектора-регионы (периферия, средний сектор и центр). В дне арены имеются отверстия диаметром 2 см - норки, располагающиеся на равных расстояниях друг от друга. Высота стенок арены составляла 30 см. Освещение производилось лампой мощностью 100 Вт, подвешенной на высоте 1,5 м от дна. Перед проведением теста животных помещали в затемненную комнату с соблюдением тишины в течение 30 минут. В начале тестирования каждое животное помещали в центр установки.

Ориентировочно-исследовательская активность (ОИА) представлена в виде суммы поведенческих актов животных: ОИА = количество выходов в центр открытого поля + количество заглядываний в норки +к оличество вертикальных стоек за 5 минут наблюдения.

Двигательную активность описывали по величинам длины пробега за 5 минут наблюдения (в метрах) и скорости движения (см/сек). Результаты представлены в таблице 3.

Из таблицы 3 следует, что после ЧМТ показатели горизонтальной активности - пробег и скорость, а также ориентировочно-исследовательская активность животных понижались как на 7-е, так и на 14-е сутки.

Введение пептида PR5 повышало горизонтальную двигательную активность (пробег и скорость) травмированных животных как на 7-е, так и на 14-е сутки. Изучение поведения в тесте «открытое поле» у животных, пролеченных пептидными препаратами Семакс, miniBac-1, Вас5-2 и PR5, показало, что во всех группах исследованных крыс после ЧМТ горизонтальная двигательная активность достоверно снижалась на 7 сутки после ЧМТ (7 д.п.т.) по сравнению с интактными животными, за исключением животных, получавших PR5, у которых, двигательная активность сохранялась и оставалась значимо более высокой, чем у нелеченых травмированных крыс. К 14 суткам после ЧМТ горизонтальная двигательная активность животных, получавших пептиды Семакс, Вас5-2 и PR5 была выше, чем у нелеченых животных с ЧМТ, а у животных, получавших и Вас5-2 и PR5 - выше, чем у интактных животных. Полученные данные могут свидетельствовать о значительном положительном влиянии препаратов Вас5-2 и PR5 на восстановление локомоторной активности экспериментальных животных в посттравматический период. Наилучшие результаты восстановления горизонтальной двигательной активности после ЧМТ как на 7-е сутки, так и на 14-е сутки после травмы, показал пептид PR5

Результаты исследования ориентировочно-исследовательской реакции (ОИР), представленные в таблице 3, показывают, что после ЧМТ ОИР прогрессивно угнеталась, показатель ОИР был снижен на 7 день после ЧМТ и еще более понизился на 14-е сутки после ЧМТ. На 7-е сутки после ЧМТ пептиды Семакс и PR5, а на 14-е сутки - пептиды Семакс и Вас5-2 наиболее эффективно повышали данный показатель.

О состоянии скрытой тревожности у крыс судили по количеству актов груминга и длительности фризинга (реакции замирания). Выявлено, что травмированные нелеченые крысы существенно отличались по длительности фризинга от интактных животных на 7 и 14 д.п.т. (таблица 3). При этом у животных, пролеченных пептидными препаратами, также отмечалось увеличение продолжительности фризинга по сравнению с интактными животными, но эти эпизоды замирания животных были достоверно менее продолжительными по сравнению с травмированными нелечеными животными в случае использования препаратов Семакс и PR5.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что все исследованные препараты снижают степень тревожности животных уже к 14 д.п.т., а препараты Семакс и PR5 проявляют свое седативное действие уже на 7-е сутки после ЧМТ.

Суммируя полученные данные, можно заключить, что из всех исследованных пептидов пептиды Семакс и PR5 оказали максимальное протективное действие, вызывая раннюю (7 суток после ЧМТ) экспрессию генов алармина S100A12 и генов нейтрофилинов NGF и BDNF, защитив животных от индуцированного ЧМТ снижения активности естественных киллеров и снижения пролиферативной активности спленоцитов. При этом перечисленные пептиды обеспечили более высокие показатели физической активности крыс и снизили показатели тревожности.

Пептид PR5 отличался от Семакса более ранним (7 суток после ЧМТ) и более высоким уровнем экспрессии генов S100A12, NGF и BDNF. Кроме того, PR5 отличался от Семакса и более высокой экспрессией гена BDNF на 14-е сутки после ЧМТ. Очевидно, повышенная экспрессия нейротрофинов NGF и BDNF является причиной более эффективного восстановления горизонтальной двигательной активности при введении пептида PR5 по сравнению с пептидом Семекс на 7-е и на 14-е сутки после ЧМТ.

Полученные данные свидетельствуют, что пептидный препарат PR5 превосходит известный пептид Семакс в лечении последствий ЧМТ.

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="Artificial Peptide

PR5 for the treatment of traumatic brain injury .xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.2.0"

productionDate="2023-06-27">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>606</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-06-27</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>606</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>606</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-06-27</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное

бюджетное научное учреждение &quot;Институт экспериментальной

медицины&quot; </ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>Federalnoe gosudarstvennoe byudzhetnoe nauchnoe

uchrezhdenie &quot;Institut eksperimentalnoj

meditsiny&quot;</ApplicantNameLatin>

<InventorName languageCode="ru">Шамова Ольга

Валерьевна</InventorName>

<InventorNameLatin>Shamova Olga Valer&apos;evna</InventorNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Искусственный пептид для лечения

черепно-мозговой травмы</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>15</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..15</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>RRRPPIPRPPIRPGP</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к новому искусственному пептиду PR5, содержащему фрагменты природных пептидов PR-39 и ChBac5, а также фрагмент коллагена глипролин. Пептид имеет аминокислотную последовательность Arg-Arg-Arg-Pro-Pro-Ile-Pro-Arg-Pro-Pro-Ile-Arg-Pro-Gly-Pro (SEQ ID NO: 1) и предназначен для лечения последствий черепно-мозговой травмы. При интраназальном введении лабораторным животным, получившим черепно-мозговую травму, предложенный пептид вызывал более быструю и более выраженную экспрессию белков S100А12, NGF и BDNF, стимулирующих пролиферацию и дифференцировку нейронов и рост нейритов в гипоталамусе головного мозга, чем другие исследованные пептиды. В результате введения пептида PR5 происходило более раннее восстановление цитотоксичности спленоцитов и их способности к пролиферации, улучшались показатели ориентировочно-исследовательской реакции и двигательной активности животных после черепно-мозговой травмы по сравнению с другими исследованными пептидами. 3 табл., 3 пр.

Искусственный пептид для лечения последствий черепно-мозговой травмы, отличающийся тем, что характеризуется аминокислотной последовательностью по SEQ ID NO: l.