ИНГИБИТОР EGFR Российский патент 2024 года по МПК A61K31/519 A61P35/00 C07D487/04 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0001] Настоящее изобретение относится к ингибитору EGFR, содержащему пиримидиновое соединение или его соль.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] EGFR (также обозначаемый как "ErbB1") является рецепторной тирозинкиназой, принадлежащей к семейству ErbB, и описано, что она участвует в росте клеток или ингибировании апоптоза посредством связывания с эпидермальным фактором роста (также обозначаемым как "EGF"), в основном, в эпителиальных тканях, среди нормальных тканей (непатентный документ 1).

[0003] EGFR считают протоонкогеном. Описано, что амплификация, гиперэкспрессия, мутация гена EGFR и т.п. происходит в различных типах злокачественных новообразований. Учитывая неклинические и клинические исследовательские данные, считают, что активация EGFR и нисходящих сигналов играет важную в выживании и/или пролиферация, и т.д. в выживании и/или пролиферации и т.д. злокачественных клеток, ассоциированных с генетической аномалией, гиперэкспрессией и т.п. EGFR. Например, мутацию в области экзона 19 EGFR, приводящую к делеции аминокислоты в положениях 746-750 (также обозначаемую как "делеционная мутация в экзоне 19"), и мутацию в области экзона 21, приводящую к замене аминокислоты лейцин в положении 858 аргинином (также обозначаемую как "мутация L858R"), считают вносящими вклад в выживание и/или пролиферацию злокачественных клеток посредством аутофосфорилирования EGFR EGF-независимым образом и, таким образом, индуцирующими киназную активность (непатентный документ 2). Описано, что эти мутации присутствуют в приблизительно от 30 до 50% случаев немелкоклеточного рака легких в Восточной Азии и приблизительно 10% случаев немелкоклеточного рака легких в Европе и США (непатентный документ 3).

[0004] Таким образом, предполагают, что ингибитор, способный регулировать киназную активность EGFR, будет ингибировать EGFR и нисходящие сигналы в злокачественных клетках, имеющих амплификацию, гиперэкспрессию и/или мутацию гена EGFR, демонстрируя противоопухолевые эффекты в отношении злокачественных клеток. Таким образом, такой ингибитор считают полезным для лечения, продления жизни или улучшения QOL пациентов со злокачественными новообразованиями.

[0005] Таким образом, ранее исследовано и разработано множество ингибиторов EGFR в качестве противоопухолевых средств, и их используют в лечении положительной по мутации EGFR опухоли. Например, лекарственные средства, такие как афатиниб, гефитиниб и эрлотиниб одобрены в качестве терапевтических средств для положительного по мутации EGFR рака легких, имеющего делеционную мутацию в экзоне 19 или мутацию L858R. Кроме того, осимертиниб одобрен в качестве терапевтического средства для положительного по мутации EGFR рака легких, имеющего делеционную мутацию в экзоне 19 или мутацию L858R, а также мутацию в области экзона 20, приводящую к замене аминокислоты треонин в положении 790 метионином (также обозначаемую как "мутация T790M").

[0006] Мутацию в области экзона 20, приводящую к инсерции один или более аминокислот (также обозначаемую как "инсерционная мутация в экзоне 20"), также считают активирующей мутацией при раке легких и т.п. (непатентный документ 4). Описано, что злокачественное новообразование, имеющее такую мутацию, имеет тенденцию к низкой чувствительности к множеству существующих ингибиторов EGFR. Например, что касается клинического эффекта афатиниба в отношении положительного по мутации EGFR рака легких, описано, что его эффект в отношении инсерционной мутации в экзоне 20 имеет тенденцию быть намного ниже, чем в случае делеционной мутации в экзоне 19 или мутации L858R (непатентный документ 5). В отношении рака легких, имеющего инсерционную мутацию в экзоне 20 EGFR, проведено множество клинических испытаний. Однако в текущих обстоятельствах еще не разработан терапевтический способ для этого. Таким образом, желательно разработать ингибитор EGFR, имеющий ингибиторную активность против инсерционной мутации в экзоне 20.

[0007] Описано, что метастазирование в головной мозг происходит в приблизительно от 25% до 40% случаев рака легких, приблизительно от 15% до 30% случаев рака молочной железы и в некотором проценте случаев многих других злокачественных новообразований (непатентные документы 6 и 7).

[0008] С точки зрения контроля патологических состояний, включая очаг метастазирования в головной мозг, желательно разработать ингибитор EGFR, имеющий ингибиторную активность против мутаций EGFR, а также свойства проникновения в головной мозг.

Список цитирования

Непатентная литература

[0009] [Непатентный документ 1] Nat. Rev. Cancer, vol. 6, pp. 803-812 (2006)

[Непатентный документ 2] Nature Medicine, vol. 19, pp. 1389-1400 (2013)

[Непатентный документ 3] Nat. Rev. Cancer, vol. 7, pp. 169-181 (2007)

[Непатентный документ 4] Signal Transduct Target Ther. 4: 5, pp. 1-10 (2019)

[Непатентный документ 5] Lancet Oncol. vol. 16, pp. 830-838 (2015)

[Непатентный документ 6] Current Oncology, 25, p. S103-S114 (2018)

[Непатентный документ 7] Breast Cancer Research, 18 (1), 8, p. 1-9 (2016)

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая задача

[0010] Целью настоящего изобретения является предоставление терапевтического средства для заболевания, ассоциированного с EGFR, содержащего соединение, имеющее EGFR-ингибиторную активность и свойства проникновения в головной мозг, в качестве активного ингредиента.

Решение задачи

[0011] В результате интенсивных исследований авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединение, представленное следующей формулой (I), имеющее пиримидин в качестве основного каркаса, или его соль имеет EGFR-ингибиторную активность и свойства проникновения в головной мозг, и его можно использовать в качестве терапевтического средства для заболеваний, ассоциированных с EGFR (в частности, злокачественной опухоли), посредством ингибирования EGFR, достигая осуществления настоящего изобретения.

[0012] В частности, один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к следующему:

[1] Терапевтическое средство для заболевания, ассоциированного с EGFR, содержащее пиримидиновое соединение, представленное следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

[2] Терапевтическое средство по п.[1], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным следующей формулой (II):

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

[3] терапевтическое средство по п.[1] или [2], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₂ представляет собой C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп в качестве заместителей.

[4] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[3], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₃ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей.

[5] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[4], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₅ является фенильной группой, необязательно имеющей 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[6] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[5], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₁ является метильной группой, трет-бутильной группой или циклопропильной группой.

[7] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[6], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₂ является метильной группой, этильной группой, метоксиметильной группой или этоксиметильной группой.

[8] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[7], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₃ является метильной группой.

[9] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[8], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₄ является атомом водорода.

[10] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[9], где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₅ является фенильной группой.

[11] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[10], где пиримидиновое соединение является соединением, выбранным из следующего (1)-(3):

(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида,

(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида и

(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида.

[12] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[11], где пиримидиновое соединение представляет собой 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.

[13] Терапевтическое средство по любому из пп.[1]-[12], где заболевание, ассоциированное с EGFR, является злокачественной опухолью, имеющей гиперэкспрессию EGFR, амплификацию гена EGFR или мутацию EGFR.

[14] Ингибитор EGFR, содержащий пиримидиновое соединение, представленное следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

[15] Терапевтическое средство для EGFR-положительной опухоли, содержащее пиримидиновое соединение, представленное следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

[16] Фармацевтическая композиция для применения в лечении заболевания, ассоциированного с EGFR, содержащая пиримидиновое соединение, представленное следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

[17] Фармацевтическая композиция по п.[16], где заболевание, ассоциированное с EGFR, является злокачественной опухолью, имеющей гиперэкспрессию EGFR, амплификацию гена EGFR или мутацию EGFR.

[0013] Настоящее изобретение также относится к следующим аспектам:

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль для лечения заболевания, ассоциированного с EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для лечения заболевания, ассоциированного с EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для заболевания, ассоциированного с EGFR.

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль для лечения EGFR-положительной опухоли.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для лечения EGFR-положительной опухоли.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для EGFR-положительной опухоли.

Способ лечения заболевания, ассоциированного с EGFR, включающий введение эффективного количества соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму.

Способ лечения EGFR-положительной опухоли, включающий введение эффективного количества соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму.

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль для лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 18 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 18 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 18 EGFR.

Способ лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 18 EGFR, включающий введение эффективного количества соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму.

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль для лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 19 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 19 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 19 EGFR.

Способ лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 19 EGFR, включающий введение эффективного количества соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму.

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль для лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 20 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 20 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 20 EGFR.

Способ лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 20 EGFR, включающий введение эффективного количества соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму.

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль для лечения злокачественной опухоли, имеющий мутантный по экзону 21 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 21 EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 21 EGFR.

Способ лечения злокачественной опухоли, имеющей мутантный по экзону 21 EGFR, включающий введение эффективного количества соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму.

Соединение, представленное формулой (I) или его фармацевтически приемлемая соль для лечения злокачественной опухоли, резистентной к существующему ингибитору EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для лечения злокачественной опухоли, резистентной к существующему ингибитору EGFR.

Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для получения терапевтического средства для злокачественной опухоли, резистентной к существующему ингибитору EGFR.

Способ лечения злокачественной опухоли, резистентной к существующему ингибитору EGFR, включающий введение эффективного количества соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму.

Полезные эффекты настоящего изобретения

[0014] Терапевтическое средство для заболевания, ассоциированного с EGFR, по изобретению относится к новому терапевтическому способу лечения заболевание, ассоциированного с EGFR, или EGFR-положительной опухоли.

Соединение по изобретению или его соль обладает исключительной ингибиторной активностью против EGFR дикого типа и мутантного EGFR и исключительными свойствами проникновения в головной мозг, противоопухолевым эффектом в отношении злокачественной опухоли и эффектов увеличения периода выживания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0015] [Фигура 1] На фигуре 1 показаны противоопухолевые эффекты соединений из примера 2, 11 и 12 в отношении моделей, включающих подкожную трансплантацию линии клеток H1975-EGFRinsSVD.

[Фигура 2] На фигуре 2 показан процент изменения массы тела мышей при введении соединений из примеров 2, 11 и 12 в моделях, включающих подкожную трансплантацию линии клеток H1975-EGFRinsSVD.

[Фигура 3] На фигуре 3 показаны противоопухолевые эффекты соединения из примера 11 в отношении моделей, включающих прямую трансплантацию в головной мозг линии клеток, экспрессирующей мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20 с встроенным геном люциферазы (H1975-EGFRinsSVD-Luc).

[Фигура 4] На фигуре 4 показан коэффициент выживаемости мышей при введении соединения из примера 11 в моделях, включающих прямую трансплантацию в головной мозг линии клеток, экспрессирующей мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20 с встроенным геном люциферазы (H1975-EGFRinsSVD-Luc).

ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0016] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, представленному следующей формулой (I), или его соли:

(где R₁-R₅ являются такими, как определено выше).

[0017] Один из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения является пиримидиновым соединением, представленным следующей формулой (II), или его солью:

(где R₁-R₅ являются такими, как определено выше).

[0018] Соединение, представленное приведенной выше формулой (I) или формулой (II), по настоящему изобретению является соединением, имеющим пирроло[2,3-d]пиримидин в качестве основной структуры, и оно является новым соединением, неописанным в указанных выше публикациях предшествующего уровня техники, и т.д.

[0019] В настоящем описании конкретные примеры "атома галогена" могут включать атом хлора, атом брома, атом фтора и атом йода. Среди них, атом хлора и атом фтора являются предпочтительными, и атом фтора является более предпочтительным.

[0020] В настоящем описании термин "алкильная группа" означает линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу. Конкретные примеры алкильной группы могут включать метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу, n-бутильную группу, изобутильную группу, втор-бутильную группу, трет-бутильную группу, пентильную группа и гексильную группу. Среди них, линейная или разветвленная алкильная группа, содержащая от 1 до 4 атомов углерода, является предпочтительной, и метильная группа и трет-бутильная группа являются более предпочтительными.

[0021] В настоящем описании термин "галогеналкильная группа" означает линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу, в которой от одного до всех атомов водорода заменены описанными выше атомами галогена. Конкретные примеры галогеналкильной группы могут включать монофторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, 1-фторэтильную группу, 2-фторэтильную группу, 1,1-дифторэтильную группу, 1,2-дифторэтильную группу, 2,2-дифторэтильную группу, 2,2,2-трифторэтильную группу, монохлорметильную группу, дихлорметильную группу, трихлорметильную группу, 1-хлорэтильную группу, 2-хлорэтильную группу и 1,1-дихлорэтильную группу. Среди них, линейная или разветвленная насыщенная углеводородная группа, содержащая от 1 до 6 атомов углерода, среди которых от 1 до 3 атомов водорода заменены описанными выше атомами галогена, является предпочтительным, и монофторметильная группа является более предпочтительной.

[0022] В настоящем описании термин "циклоалкильная группа" означает моноциклическую или полициклическую насыщенную углеводородную группу, содержащую от 3 до 7 атомов углерода. Конкретные примеры циклоалкильной группы могут включать циклопропильную группу, циклобутильную группу, циклопентильную группу, циклогексильную группу и циклогептильную группу. Среди них, циклопропильная группа и циклобутильная группа являются предпочтительными.

[0023] В настоящем описании термин "ароматическая углеводородная группа" означает циклический заместитель, состоящий из углерода и водорода, имеющий ненасыщенную связь, в которой 4e+2 электронов (где e представляет собой целое число 1 или более) содержатся в циклической π-электронной системе.

[0024] В настоящем описании термин "C6-C14-ароматическая углеводородная группа" означает моноциклическую или полициклическую ароматическую углеводородную группу, содержащую от 6 до 14 атомов углерода. Конкретные примеры C6-C14-ароматической углеводородной группы могут включать фенильную группу, нафтильную группу, тетрагидронафтильную группу и антраценильную группу. Среди них, фенильная группа является предпочтительной.

[0025] В настоящем описании термин "аралкильная группа" означает описанную выше алкильную группу, замещенную описанной выше ароматической углеводородной группой. Конкретные примеры аралкильной группы могут включать C7-C16-аралкильные группы, такие как бензильная группа, фенилэтильная группа, фенилпропильная группа, нафтилметильная группа и нафтилэтильная группа. Среди них, бензильная группа является предпочтительной.

[0026] В настоящем описании термин "ненасыщенная углеводородная группа" означает линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую от 2 до 6 атомов углерода, содержащую по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь или тройную связь. Конкретные примеры ненасыщенной углеводородной группы могут включать винильную группу, аллильную группу, метилвинильную группу, пропенильную группу, бутенильную группу, пентенильную группу, гексенильную группу, этинильную группу и 2-пропинильную группу. Среди них, винильная группа, аллильная группа и 1-пропенильная группа являются предпочтительными.

[0027] В настоящем описании термин "алкенильная группа" означает линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую от 2 до 6 атомов углерода, содержащую по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь. Конкретные примеры алкенильной группы могут включать C2-C6-алкенильные группы, такие как винильная группа, аллильная группа, 2-метил-2-пропенильная группа, изопропенильная группа, 1-, 2- или 3-бутенильная группа, 2-, 3- или 4-пентенильная группа, 2-метил-2-бутенильная группа, 3-метил-2-бутенильная группа и 5-гексенильная группа. Среди них, винильная группа, аллильная группа, 1-пропенильная группа и 2-метил-2-пропенильная группа являются предпочтительными.

[0028] В настоящем описании термин "алкинильная группа" означает линейную или разветвленную ненасыщенную углеводородную группу, имеющую по меньшей мере одну тройную связь (например, 1 или 2, и предпочтительно - 1 тройную связь). Конкретные примеры алкинильной группы могут включать C2-C6-алкинильные группы такие как этинильная группа, 1- или 2-пропинильная группа, 1-, 2- или 3-бутинильная группа и 1-метил-2-пропинильная группа. Среди них, этинильная группа и 2-пропинильная группа являются предпочтительными.

[0029] В настоящем описании термин "C3-C10-циклическая ненасыщенная углеводородная группа" означает моноциклическую или полициклическую углеводородную группу, содержащую от 3 до 10 атомов углерода, содержащую по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь. Конкретные примеры C3-C10-циклической ненасыщенной углеводородной группы могут включать циклопропенильную группу, циклобутенильную группу, циклопентенильную группу, циклогексенильную группу циклогептенильную группу, циклооктенильную группу и циклононильную группу. Среди них, моноциклическая или полициклическая углеводородная группа, содержащая от 3 до 7 атомов углерода, содержащая по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, является предпочтительной, и циклопропенильная группа является более предпочтительной.

[0030] В настоящем описании термин "алкоксигруппа" означает оксигруппу, имеющую описанную выше алкильную группу. Конкретные примеры алкоксигруппы могут включать C1-C6-алкоксигруппы, такие как метоксигруппа, этоксигруппа, n-пропоксигруппа, изопропоксигруппа, n-бутоксигруппа, изобутоксигруппа, втор-бутоксигруппа, трет-бутоксигруппа, пентилоксигруппа, изопентилоксигруппа и гексилоксигруппа. Среди них, метоксигруппа и этоксигруппа являются предпочтительными, и метоксигруппа является более предпочтительной.

[0031] В настоящем описании "галогеналкоксигруппа" могут включать описанную выше алкоксигруппу, имеющую по меньшей мере один атом галогена (предпочтительно - от 1 до 13, и более предпочтительно - от 1 до 3 атомов галогена). Конкретные примеры галогеналкоксигруппы могут включать C1-C6-галогеналкоксигруппы, такие как фторметоксигруппа, дифторметоксигруппа, трифторметоксигруппа, трихлорметоксигруппа, фторэтоксигруппа, 1,1,1-трифторэтоксигруппа, монофтор-n-пропоксигруппа, перфтор-n-пропоксигруппа и перфтор-изопропоксигруппа.

[0032] В настоящем описании термин "циклоалкоксигруппа" означает оксигруппу, имеющую описанную выше циклоалкильную группу. Конкретные примеры циклоалкоксигруппы могут включать C3-C7-циклоалкоксигруппы, такие как циклопропоксигруппа, циклобутоксигруппа, циклопентилоксигруппа, циклогексилоксигруппа и циклогептилоксигруппа. Среди них, циклобутоксигруппа, циклопентилоксигруппа и циклогексилоксигруппа являются предпочтительными.

[0033] В настоящем описании термин "аралкилоксигруппа" означает оксигруппу, имеющую описанную выше аралкильную группу. Конкретные примеры аралкилоксигруппы могут включать C7-C20-аралкилоксигруппы, такие как бензилоксигруппа, фенэтилоксигруппа, нафтилметилоксигруппа и фторенилметилоксигруппа. Среди них, бензилоксигруппа является предпочтительной.

[0034] В настоящем описании термин "алкилтиогруппа" означает тиоксигруппу, имеющую описанную выше алкильную группу. Конкретные примеры алкилтиогруппы могут включать C1-C6-алкилтиогруппы, такие как метилтиогруппа, этилтиогруппа, n-пропилтиогруппа, изопропилтиогруппа, n-бутилтиогруппа, изобутилтиогруппа, трет-бутилтиогруппа, n-пентилтиогруппа, изопентилтиогруппа и гексилтиогруппа. Среди них, метилтиогруппа, этилтиогруппа и n-пропилтиогруппа являются предпочтительными.

[0035] В настоящем описании термин "алкоксиалкильная группа" означает описанную выше алкильную группу, имеющую по меньшей мере одну из описанных выше алкоксигрупп. Конкретные примеры алкоксиалкильной группы могут включать C1-C6-алкокси-C1-C6-алкильные группы, такие как метоксиметильная группа, этоксиэтильная группа, метоксиэтильная группа и метоксипропильная группа.

[0036] В настоящем описании термин "алкиламиногруппа" означает аминогруппу, в которой 1 или 2 атома водорода заменены линейными или разветвленными углеводородными группами, содержащими от 1 до 6 атомов углерода. Конкретные примеры алкиламиногруппы могут включать метиламиногруппу, этиламиногруппу, диметиламиногруппу, диэтиламиногруппу и этилметиламиногруппу. Среди них, предпочтительной является аминогруппа, в которой 1 или 2 атома водорода заменены линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей от 1 до 3 атомов углерода.

[0037] В настоящем описании термин "моноалкиламиногруппа" означает аминогруппу, в которой один атом водорода заменен линейной или разветвленной углеводородной группой. Конкретные примеры моноалкиламиногруппы могут включать метиламиногруппу, этиламиногруппу, n-пропиламиногруппу, изопропиламиногруппу, n-бутиламиногруппу, изобутиламиногруппу, втор-бутиламиногруппу, трет-бутиламиногруппу, пентиламиногруппу и гексиламиногруппу. Среди них, предпочтительной является аминогруппа, в которой один атом водорода заменен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей от 1 до 3 атомов углерода.

[0038] В настоящем описании термин "диалкиламиногруппа" означает аминогруппу, в которой два атома водорода заменены линейными или разветвленными углеводородными группами, содержащими от 1 до 6 атомов углерода. Конкретные примеры диалкиламиногруппы могут включать диметиламиногруппу, диэтиламиногруппу и этилметиламиногруппу. Среди них, аминогруппа, в которой два атома водорода заменены линейными или разветвленными углеводородными группами, содержащими от 1 до 3 атомов углерода, является предпочтительной, и диметиламиногруппа является более предпочтительной.

[0039] В настоящем описании термин "ацильная группа" означает формильную группу, в которой атом водорода заменен линейной или разветвленной углеводородной группой. Конкретные примеры ацильной группы могут включать ацетильную группу, n-пропаноильную группу, изопропаноильную группу, n-бутилоильную группу и трет-бутилоильную группу. Среди них, формильная группа, в которой атом водорода заменен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей от 1 до 3 атомов углерода, является предпочтительной, и ацетильная группа является более предпочтительной.

[0040] В настоящем описании термин "ацилоксигруппа" означает оксигруппу, имеющую описанную выше ацильную группу. Конкретные примеры ацилоксигруппы могут включать алкилкарбонилоксигруппу и арилкарбонилоксигруппу. Среди них, оксигруппа, в которой атом водорода формильной группы заменен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей от 1 до 3 атомов углерода, является предпочтительной, и алкилкарбонилоксигруппа является более предпочтительной.

[0041] В настоящем описании термин "алкоксикарбонильная группа" означает карбонильную группу, имеющую описанную выше алкоксигруппу. Конкретные примеры алкоксикарбонильной группы могут включать (C1-C6-алкокси)карбонильные группы, такие как метоксикарбонильная группа, этоксикарбонильная группа, пропоксикарбонильная группа, изопропоксикарбонильная группа, бутоксикарбонильная группа, изобутоксикарбонильная группа, трет-бутоксикарбонильная группа, пентилоксикарбонильная группа, изопентилоксикарбонильная группа и гексилоксикарбонильная группа. Среди них, трет-бутоксикарбонильная группа является предпочтительной.

[0042] В настоящем описании термин "аралкилоксикарбонильная группа" означает карбонильную группу, имеющую описанную выше аралкилоксигруппу. Конкретные примеры аралкилоксикарбонильной группы могут включать (C6-C20-аралкил)оксикарбонильные группы, такие как бензилоксикарбонильная группа, фенэтилоксикарбонильная группа, нафтилметилоксикарбонильная группа и фторенилметилоксикарбонильная группа. Среди них, бензилоксикарбонильная группа является предпочтительной.

[0043] В настоящем описании термин "насыщенная гетероциклическая группа" означает моноциклическую или полициклическую насыщенную гетероциклическую группу, имеющую по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно - от 1 до 5, и более предпочтительно - от 1 до 3 гетероатомов), выбранный из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы. Конкретные примеры насыщенной гетероциклической группы могут включать азиридинильную группу, азетидинильную группу, имидазолидинильную группу, морфолиногруппу, пирролидинильную группу, пиперидинильную группу, пиперазинильную группу, тетрагидрофуранильную группу, тетрагидропиранильную группу, тетрагидротиофенильную группу, тиазолидинильную группу и оксазолидинильную группу. Среди них, азетидинильная группа, пирролидинильная группа и пиперидинильная группа являются предпочтительными, и азетидинильная группа и пирролидинильная группа являются более предпочтительными.

[0044] В настоящем описании термин "ненасыщенная гетероциклическая группа" означает моноциклическую или полициклическую полностью ненасыщенную или частично ненасыщенную гетероциклическую группу, имеющую по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно - от 1 до 5, и более предпочтительно - от 1 до 3 гетероатомов), выбранный из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы. Конкретные примеры ненасыщенной гетероциклической группы могут включать имидазолильную группу, тиенильную группу, пирролильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, тиадиазолильную группу, оксадиазолилгруппу, пиразолильную группу, триазолильную группу, тетразолильную группу, пиридильную группу, пиразильную группу, пиримидинильную группу, пиридазинильную группу, индолильную группу, изоиндолильную группу, индазолильную группу, триазолопиридильную группу, бензимидазолильную группу, бензоксазолильную группу, бензотиазолильную группу, бензотиенильную группу, фуранильную группу, бензофуранильную группу, пуринильную группу, хинолильную группу, изохинолильную группу, хиназолинильную группу, хиноксалильной группу, метилендиоксифенильную группу, этилендиоксифенильную группу и дигидробензофуранильную группу. Среди них, имидазолильная группа, пиразолильная группа, тиазолильная группа, изоксазолильная группа и фуранильная группа являются предпочтительными; имидазолильная группа, пиразолильная группа и тиазолильная группа являются более предпочтительными; и имидазолильная группа является наиболее предпочтительной.

[0045] В настоящем описании термин "насыщенная гетероциклическая оксигруппа" означает оксигруппу, имеющую описанную выше насыщенную гетероциклическую группу. Конкретные примеры насыщенной гетероциклической оксигруппы могут включать морфолинилоксигруппу, 1-пирролидинилоксигруппу, пиперидиноксигруппу, пиперазинилоксигруппу, 4-метил-1-пиперазинилоксигруппу, тетрагидрофуранилоксигруппу, тетрагидропиранилоксигруппу, тетрагидротиофенилоксигруппу, тиазолидинилоксигруппу и оксазолидинилоксигруппу. Среди них, 1-пирролидинилоксигруппа, пиперидиноксигруппа и пиперазинилоксигруппа являются предпочтительными.

[0046] В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) по настоящему изобретению, R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу.

[0047] "C1-C4-алкоксигруппа" в выражении "C1-C4-алкильная группа, необязательно имеющая C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя", представленная R₁, предпочтительно, представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу. В настоящем описании количество заместителей предпочтительно составляет 1 до 3, и наиболее предпочтительно - 1. Если C1-C4-алкильная группа имеет два или более заместителей, заместители могут являться идентичными или отличаться друг от друга.

[0048] "C1-C4-алкильная группа" в выражении "C1-C4-алкильная группа, необязательно имеющая C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя", представленная R₁, предпочтительно, представляет собой метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно - метильную группу, этильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу или трет-бутильную группу.

[0049] "C1-C4-алкильная группа, необязательно имеющая C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя", представленная R₁, предпочтительно, представляет собой C1-C4-алкильную группу, имеющую от 1 до 3 метоксигрупп в качестве заместителей, более предпочтительно - метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу или 1-метил-1-метоксиэтильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу или трет-бутильную группу.

[0050] "C3-C4-циклоалкильная группа", представленная R₁, предпочтительно, представляет собой циклопропильную группу или циклобутильную группу, и наиболее предпочтительно - циклопропильную группу.

[0051] R₁, предпочтительно, представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 C1-C4-алкоксигрупп в качестве заместителей, или C3-C4-циклоалкильную группу.

[0052] R₁, более предпочтительно, представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 метоксигрупп в качестве заместителей, или C3-C4-циклоалкильную группу.

[0053] R₁, более предпочтительно, представляет собой метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу, 1-метил-1-метоксиэтильную группу или циклопропильную группу.

[0054] R₁, наиболее предпочтительно, представляет собой метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу.

[0055] В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II), по настоящему изобретению R₂ является атомом водорода, атомом галогена, C1-C6-алкильной группой, необязательно имеющей от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппой.

[0056] "Атом галогена", представленный R₂, предпочтительно, представляет собой атом фтора или атом хлора.

[0057] "C1-C4-алкоксигруппа" в выражении "C1-C6-алкильная группа, необязательно имеющая от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей", представленная R₂, предпочтительно, представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу.

[0058] "C1-C6-алкильная группа, необязательно имеющая от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей", представленная R₂, предпочтительно, представляет собой метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0059] "C1-C6-алкильная группа" в выражении "C1-C6-алкильная группа, необязательно имеющая от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей", представленная R₂, предпочтительно, представляет собой C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей (в частности, метильную группу, метоксиметильную группу, этоксиметильную группу, метоксиэтильную группу, этоксиэтильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу и т.д.), более предпочтительно - C1-C6-алкильную группу, более предпочтительно - метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0060] "C1-C6-алкоксигруппа", представленная R₂, предпочтительно, представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу.

[0061] R₂, предпочтительно, представляет собой C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей. В одном из вариантов осуществления R₂ представляет собой C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей. В другом варианте осуществления R₂ является метильной группой, этильной группой, n-пропильной группой, изопропильной группой или трет-бутильной группой (предпочтительно - метильной группой или этильной группой, и более предпочтительно - метильной группой), каждая из которых необязательно имеет от 1 до 5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей.

[0062] R₂, более предпочтительно, представляет собой C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп в качестве заместителей. В одном из вариантов осуществления R₂ представляет собой C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 метоксигрупп или этоксигрупп в качестве заместителей. В другом варианте осуществления R₂ является метильной группой, этильной группой, n-пропильной группой, изопропильной группой или трет-бутильной группой (предпочтительно - метильной группой или этильной группой, и более предпочтительно - метильной группой), каждая из которых необязательно имеет от 1 до 5 метоксигрупп или этоксигрупп в качестве заместителей. В дополнительном варианте осуществления R₂ является метильной группой, этильной группой, метоксиметильной группой или этоксиметильной группой.

[0063] R₂, даже более предпочтительно, представляет собой C1-C6-алкильную группу.

[0064] R₂, более предпочтительно, представляет собой метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.

R₂, особенно предпочтительно, представляет собой метильную группу или этильную группу.

R₂, наиболее предпочтительно, представляет собой метильную группу.

[0065] В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II), по настоящему изобретению R₃ является атомом водорода или C1-C4-алкильной группой, необязательно имеющей от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей.

[0066] "C1-C4-алкильная группа" в выражении "C1-C4-алкильная группа, необязательно имеющая от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей", представленная R₃, предпочтительно, представляет собой метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно - метильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0067] "C1-C4-алкильная группа, необязательно имеющая от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей", представленная R₃, предпочтительно, представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу, более предпочтительно - метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0068] R₃, предпочтительно, представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей.

[0069] R₃, более предпочтительно, представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, этильную группу, фторэтильную группу, дифторэтильную группу, трифторэтильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.

[0070] R₃, даже более предпочтительно, представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу.

[0071] R₃, более предпочтительно, представляет собой метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу.

R₃, особенно предпочтительно, представляет собой метильную группу или этильную группу.

R₃, наиболее предпочтительно, представляет собой метильную группу.

[0072] В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II), по настоящему изобретению R₄ является атомом водорода или C1-C4-алкильной группой.

[0073] "C1-C4-алкильная группа", представленная R₄, предпочтительно, представляет собой метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно - метильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0074] R₄, предпочтительно, представляет собой атом водорода, метильную группу, этильную группу, n-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.

[0075] R₄, более предпочтительно, представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу.

[0076] R₄, более предпочтительно, представляет собой атом водорода или метильную группу.

R₄ наиболее предпочтительно, представляет собой атом водорода.

[0077] В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II), по настоящему изобретению R₅ является фенильной группой, необязательно имеющей от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[0078] R₅, предпочтительно, представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[0079] R₅, более предпочтительно, представляет собой фенильную группу, 2-фторфенильную группу, 3-хлорфенильную группу, 2,3-дифторфенильную группу, 2,4-дифторфенильную группу или 3,5-дифторфенильную группу.

[0080] R₅ наиболее предпочтительно, представляет собой фенильную группу.

[0081] Пиримидиновое соединение по изобретению, предпочтительно, представляет собой соединение, представленное формулой (I) или формулой (II), или его соль, где в формуле (I) или формуле (II)

R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу,

R₂ представляет собой C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп в качестве заместителей,

R₃ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей,

R₄ является атомом водорода или C1-C4-алкильной группой, и

R₅ является фенильной группой, необязательно имеющей 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[0082] Соединение по изобретению, более предпочтительно, представляет собой соединение, представленное формулой (I) или формулой (II), или его соль, где в формуле (I) или формуле (II)

R₁ является метильной группой, этильной группой, n-пропильной группой, изопропильной группой, трет-бутильной группой, 1-метил-1-метоксиэтильной группой, циклопропильной группой или циклобутильной группой,

R₂ является метильной группой, этильной группой, n-пропильной группой, трет-бутильной группой, метоксиметильной группой или этоксиметильной группой,

R₃ является метильной группой, фторметильной группой, дифторметильной группой, трифторметильной группой, этильной группой, фторэтильной группой, дифторэтильной группой, трифторэтильной группой, n-пропильной группой, изопропильной группой или трет-бутильной группой,

R₄ является атомом водорода, метильной группой, этильной группой, n-пропильной группой, изопропильной группой или трет-бутильной группой, и

R₅ является фенильной группой, 2-фторфенильной группой, 3-фторфенильной группой, 2,4-дифторфенильной группой, 2,3-дифторфенильной группой, 3,5-дифторфенильной группой, 2-хлорфенильной группой, 3-хлорфенильной группой, 2,4-дихлорфенильной группой или 3,5-дихлорфенильной группой.

[0083] Соединение по изобретению, даже более предпочтительно, представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II)

R₁ является метильной группой, этильной группой, изопропильной группой, трет-бутильной группой, 1-метил-1-метоксиэтильной группой или циклопропильной группой,

R₂ является метильной группой, этильной группой, метоксиметильной группой или этоксиметильной группой,

R₃ является метильной группой, фторметильной группой, дифторметильной группой, трифторметильной группой или этильной группой,

R₄ является атомом водорода, метильной группой или этильной группой, и

R₅ является фенильной группой, 2-фторфенильной группой, 3-хлорфенильной группой, 2,3-дифторфенильной группой, 2,4-дифторфенильной группой или 3,5-дифторфенильной группой.

[0084] Соединение по изобретению дополнительно предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II)

R₁ является метильной группой, трет-бутильной группой или циклопропильной группой,

R₂ является метильной группой, этильной группой, метоксиметильной группой или этоксиметильной группой,

R₃ является метильной группой, трифторметильной группой или этильной группой,

R₄ является атомом водорода или метильной группой, и

R₅ является фенильной группой.

[0085] Соединение по изобретению дополнительно предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II)

R₁ является метильной группой, трет-бутильной группой или циклопропильной группой,

R₂ является метильной группой, этильной группой или метоксиметильной группой,

R₃ является метильной группой,

R₄ является атомом водорода, и

R₅ является фенильной группой.

[0086] Соединение по изобретению, особенно предпочтительно, представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II)

R₁ является метильной группой, трет-бутильной группой или циклопропильной группой,

R₂ является метильной группой,

R₃ является метильной группой,

R₄ является атомом водорода, и

R₅ является фенильной группой.

[0087] Конкретные примеры соединения, представленного формулой (I) или формулой (II), могут включать соединения, полученные в следующих примерах, но не ограничены ими.

[0088] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, выбранному из следующих (1)-(18), или его соли. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, выбранному из следующих (1)-(15), или его соли.

(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(4) 7-(R)-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3,5-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(5) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-фенилпропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(6) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилпропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(7) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(8) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3-хлорфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(9) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(2,4-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(10) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-N-((S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(11) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-(2-фенилпропан-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(12) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-(2,3-дифторфенил)этил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(13) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(14) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(бут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(15) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(3-метилбут-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(16) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(17) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(18) 7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(метоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид и

(19) 7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(этоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.

[0089] Предпочтительным примером соединения, представленного формулой (I) или формулой (II), может являться соединение, выбранное из следующих (1)-(3), или его соль.

(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид и

(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.

[0090] Наиболее предпочтительным пиримидиновым соединением по изобретению является 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.

[0091] <Способ получения соединения, представленного формулой (I)>

Соединение по изобретению можно получать, например, следующим способом получения или способами, описанными в примерах. Однако способ получения соединения по изобретению не ограничен этими примерами.

[0092] Соединения (I) и (II) по настоящему изобретению можно получать, например, следующим способом получения.

<Способ получения>

В указанном выше способе каждый из L₁, L₂ и L₃, являющихся одинаковыми или разными, представляет собой уходящую группу; каждый из P₁ и P₂, являющихся одинаковыми или разными, представляет собой защитную группу; и другие символы являются такими, как определено выше.

[0093] <Стадия 1>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 3, посредством осуществления реакции Мицунобу между соединением, представленным формулой 1, и соединением, представленным формулой 2, являющимся коммерчески доступным соединением или соединением, которое можно получать известным способом. Реакцию Мицунобу, как правило, осуществляют в присутствии реагента Мицунобу и фосфинового реагента.

[0094] Соединение, представленное формулой 2 (в формуле 2 P₁ представляет собой защитную группу для аминогруппы), можно использовать в количестве от 1 до 10 эквивалентов, и предпочтительно - от 1 до 3 эквивалентов, с учетом количества соединения, представленного формулой 1 (1 моль).

[0095] "Защитная группа для аминогруппы" конкретно не ограничена, при условии, что она имеет защитную функцию. Примеры защитной группы для аминогруппы могут включать: аралкильные группы, такие как бензильная группа, p-метоксибензильная группа, 3,4-диметоксибензильная группа, o-нитробензильная группа, p-нитробензильная группа, бензгидрильная группа, тритильная группа и кумильная группа; низшие алканоильные группы, такие как, например, формильная группа, ацетильная группа, пропионильная группа, бутирильная группа, пивалоильная группа, трифторацетильная группа и трихлорацетильная группа; например, бензоильная группы; арилалканоильные группы, такие как, например, фенилацетильная группа и феноксиацетильная группа; низшие алкоксикарбонильные группы, такие как, например, метоксикарбонильная группа, этоксикарбонильная группа, пропилоксикарбонильная группа и трет-бутоксикарбонильная группа; аралкилоксикарбонильные группы, такие как, например, p-нитробензилоксикарбонильная группа и фенэтилоксикарбонильная группа; низшие алкилсилильные группы, такие как, например, триметилсилильная группа и трет-бутилдиметилсилильная группа; например, тетрагидропиранильные группы; например, триметилсилилэтоксиметильные группы; низшие алкилсульфонильные группы и т.д., такие как, например, метилсульфонильная группа, этилсульфонильная группа и трет-бутилсульфонильная группа; низшие алкилсульфинильные группы и т.д., такие как, например, трет-бутилсульфинильная группа; арилсульфонильные группы и т.д., такие как, например, бензолсульфонильная группа и толуолсульфонильная группа; и имидные группы, такие как, например, фталимидная группа. Среди них, трифторацетильная группа, ацетильная группа, трет-бутоксикарбонильная группа, бензилоксикарбонильная группа, триметилсилилэтоксиметильная группа или кумильная группа являются особенно предпочтительными.

[0096] В качестве реагента Мицунобу используют диэтилазодикарбоксилат, диизопропилазодикарбоксилат или т.п. Такой реагент Мицунобу используют в количестве, как правило, приблизительно от 1 до 100 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 10 моль, с учетом соединения, представленного формулой 1 (1 моль).

[0097] В качестве фосфинового реагента используют трифенилфосфин, трибутилфосфин, трифурилфосфин или т.п. Такой фосфиновый реагент используют в количестве, как правило, приблизительно от 1 до 100 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 10 моль, с учетом соединения, представленного формулой 1 (1 моль).

[0098] Растворитель конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 100°C.

[0099] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 3, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0100] <Стадия 2>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 4, посредством допущения реакции между соединением, представленным формулой 3, с аммиаком или его солью.

[0101] Аммиак или его соль можно использовать в количестве от 1 до 1000 эквивалентов, и предпочтительно - от 1 до 100 эквивалентов, с учетом количества соединения, представленного формулой 3 (1 моль).

[0102] Растворитель конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 150°C.

[0103] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 4, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0104] <Стадия 3>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 5, посредством проведения реакции соединения, представленного формулой 4, в атмосфере монооксида углерода, например, в присутствии катализатора на основе переходного металла, основания и спирта.

[0105] На этой стадии, давление монооксида углерода составляет, как правило, от 1 до 20 атмосфер, и предпочтительно - от 1 до 10 атмосфер.

[0106] Примеры спирта могут включать метанол, этанол, пропанол, изопропанол, диэтиламиноэтанол, изобутанол, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, 3-морфолинопропанол и диэтиламинопропанол.

[0107] Спирт используют в количестве, как правило, приблизительно от 1 до 100 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 50 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0108] Примеры катализатора на основе переходного металла, используемого в настоящем описании, могут включать палладиевые катализаторы (например, ацетат палладия, хлорид палладия, тетракис(трифенилфосфин)палладий, палладированный уголь и т.д.). При необходимости, можно добавлять лиганд (например, трифенилфосфин, три-трет-бутилфосфин и т.д.). Количество используемого катализатора на основе переходного металла отличается в зависимости от типа катализатора. катализатор на основе переходного металла используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,0001 до 1 моль, и предпочтительно - приблизительно от 0,01 до 0,5 моль, с учетом количества соединения 4 (1 моль). Лиганд используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,0001 до 4 моль, и предпочтительно - приблизительно от 0,01 до 2 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0109] Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.) и дисилазиды щелочных металлов (например, дисилазид лития, дисилазид натрия, дисилазид калия и т.д.). Помимо прочего, предпочтительными являются соли щелочных металлов, такие как карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия и фосфат калия, алкоксиды щелочных металлов, такие как трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия, органические амины, такие как триэтиламин и диизопропилэтиламин, и т.п. Основание используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,1 до 50 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 20 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0110] Растворитель конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид, N-метилпирролидон и т.д.), воду и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 150°C.

[0111] После завершения этой реакции сложноэфирную форму, соответствующую используемому спирту, или смесь сложноэфирной формы и соединения, представленного формулой 5, подвергают реакции гидролиза, таким образом, что она может превращаться в соединение, представленное формулой 5.

[0112] В качестве такого основания, предпочтительно, используют гидрокарбонат натрия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития или т.п. Основание используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,5 до 100 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 10 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0113] Растворитель конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Например, воду, метанол, этанол, изопропанол, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, N, N-диметилформамид и т.п. можно использовать в отдельности или в комбинации. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 100°C.

[0114] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 5, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0115] <Стадия 4>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 6 (где P₂ представляет собой защитную группу для карбоксильной группы) посредством встраивания защитной группы в соединение, представленное формулой 5. Защиту можно осуществлять общеизвестным способом, например, способом, описанным в Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, John Wiley & Sons (1999), или эквивалентным ему способом.

[0116] "Защитная группа для карбоксильной группы" конкретно не ограничена, при условии, что она имеет защитную функцию. Примеры защитной группы для карбоксильной группы могут включать: низшие алкильные группы, такие как, например, метильная группа, этильная группа, пропильная группа, изопропильная группа и трет-бутильная группа; низшие галогеналкильные группы, такие как, например, 2,2,2-трихлорэтильная группа; низшие алкенильные группы, такие как, например, аллильная группа; например, триметилсилилэтоксиметильная группа; и аралкильные группы, такие как, например, бензильная группа, p-метоксибензильная группа, p-нитробензильная группа, бензгидрильная группа и тритильная группа. В частности, предпочтительной является метильная группа, этильная группа, трет-бутильная группа, аллильная группа, бензильная группа, p-метоксибензильная группа или триметилсилилэтоксиметильная группа.

[0117] В этой реакции, предпочтительно, встраивают защитную группу, такая как, например, группа трет-бутилового сложного эфира, группа метилового сложного эфира или группа этилового сложного эфира.

[0118] Средство-защитная группа, используемое в этой реакции, может являться, например, 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевиной. Такое средство-защитную группу используют в количестве, как правило, приблизительно от 1 до 50 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 10 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 5 (1 моль).

[0119] Растворитель конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран, трет-бутилметиловый простой эфир и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 100°C.

[0120] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 6, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0121] <Стадия 5>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 7 (где L₃ представляет собой атом галогена), посредством галогенирования соединения, представленного формулой 6. Галогенирование можно осуществлять способом с использованием фтора, хлора, брома, йода и т.д. или способом с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-йодсукцинимида и т.д. В этой реакции способ с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-йодсукцинимида и т.д. является предпочтительным.

[0122] N-хлорсукцинимид, N-бромсукцинимид, N-йодсукцинимид и т.д. можно использовать в количестве от 1 до 10 эквивалентов, и предпочтительно - от 1 до 3 эквивалентов, с учетом количества соединения, представленного формулой 6 (1 моль).

[0123] Растворитель конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 100°C.

[0124] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 7, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0125] <Стадия 6>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 8, посредством удаления защитной группы для аминогруппы (P₁ в формуле 7) из соединения, представленного формулой 7 (снятия защитных групп). Такое снятие защитных групп можно осуществлять общеизвестным способом, например, способом, описанным в Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, John Wiley & Sons (1999), или эквивалентным ему способом.

[0126] Защитная группа может являться, например, трет-бутилоксикарбонилом. Если такую трет-бутилоксикарбонильную группу используют, например, в качестве защитной группы, снятие защитных групп, предпочтительно, осуществляют в кислых условиях. Примеры кислоты, используемой в настоящем описании, могут включать соляную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, серную кислоту и тозиловую кислоту.

[0127] Кислоту, предпочтительно, используют в количестве приблизительно от 1 до 100 эквивалентов с учетом количества соединения, представленного формулой 7 (1 моль).

[0128] Растворитель, используемый в реакции, конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя, используемого в настоящем описании, могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.) и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет 0°C до 100°C, и предпочтительно - от 0°C до 50°C.

[0129] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 8, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0130] <Стадия 7>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 9, посредством осуществления реакции амидирования между аминогруппой соединения, представленного формулой 8, и галидом акриловой кислоты или ангидридом акриловой кислоты.

[0131] В случае использования галида акриловой кислоты или ангидрида акриловой кислоты, такой галид акриловой кислоты или ангидрид акриловой кислоты используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,5 до 10 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 5 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 8 (1 моль). Следует отметить, что этот галид акриловой кислоты или ангидрид акриловой кислоты можно получать в виде коммерчески доступного продукта или можно получать известным способом.

[0132] Кроме того, при необходимости, можно добавлять основание. Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, изопропилэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.) и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.). Основание используют в количестве, как правило, приблизительно от 1 до 100 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 10 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 8 (1 моль).

[0133] Растворитель, используемый в реакции, конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя, используемого в настоящем описании, могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.) и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 100°C.

[0134] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 9, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0135] <Стадия 8>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 10, посредством осуществления реакции Соногаширы между соединением, представленным формулой 9, и производным ацетиленом, которое является коммерчески доступным продуктом, или которое можно получать известным способом.

[0136] Производное ацетилена можно использовать в количестве от 1 до 50 эквивалентов, и предпочтительно - от 1 до 10 эквивалентов, с учетом количества соединения, представленного формулой 9 (1 моль).

[0137] Примеры катализатора на основе переходного металла, используемого в настоящем описании, могут включать палладиевые катализаторы (например, ацетат палладия, хлорид палладия, тетракис(трифенилфосфин)палладий, дихлорбис(трифенилфосфин)палладий и т.д.) и никелевые катализаторы (например, хлорид никеля и т.д.). При необходимости, можно добавлять лиганд (например, трифенилфосфин, три-трет-бутилфосфин и т.д.) и в качестве сокатализатора можно использовать медный катализатор (например, йодид меди, бромид меди, или хлорид меди) или т.п. Количество используемого катализатора на основе переходного металла отличается в зависимости от типа катализатора. Катализатор на основе переходного металла используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,0001 до 1 моль, и предпочтительно - приблизительно от 0,01 до 0,5 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 9 (1 моль). Лиганд используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,0001 до 4 моль, и предпочтительно - приблизительно от 0,01 до 2 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 9 (1 моль). Медный катализатор используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,0001 до 4 моль, и предпочтительно - приблизительно от 0,010 до 2 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 9 (1 моль).

[0138] Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.), и дисилазид щелочного металла (например, дисилазид лития, дисилазид натрия, дисилазид калия и т.д.). Среди них, предпочтительные примеры основания могут включать: соли щелочных металлов, такие как карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия и фосфат калия; алкоксиды щелочных металлов, такие как трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия; и органические амины, такие как триэтиламин и диизопропилэтиламин. Основание используют в количестве, как правило, приблизительно от 0,1 до 10 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 5 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 9 (1 моль).

[0139] Растворитель конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 150°C.

[0140] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 10, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0141] <Стадия 9>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 11, посредством снятия защитных групп для карбоксильной группы (P₂ в формуле 10) соединения, представленного формулой 10. Снятие защитных групп можно осуществлять общеизвестным способом, например, способом, описанным в Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, John Wiley & Sons (1981), или эквивалентным ему способом.

[0142] Защитная группа может являться, например, трет-бутиловым сложным эфиром. Если такую группу трет-бутилового сложного эфира используют в качестве защитной группы, например, снятие защитных групп, предпочтительно, осуществляют в кислых условиях. Примеры кислоты, используемой в настоящем описании, могут включать соляную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, серную кислоту и тозиловую кислоту.

[0143] Кислоту, предпочтительно, используют в количестве приблизительно от 1 до 100 эквивалентов с учетом количества соединения, представленного формулой 10 (1 моль).

[0144] Растворитель, используемый в реакции, конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя, используемого в настоящем описании, могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.) и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет 0°C до 100°C, и предпочтительно - от 0°C до 50°C.

[0145] Полученное таким образом соединение, представленное формулой 11, можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки или можно подвергать последующей стадии без выделения и очистки.

[0146] <Стадия 10>

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой (I), посредством осуществления реакции амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амина, который является коммерчески доступным продуктом, или который можно получать известным способом.

[0147] Амидирование можно осуществлять общеизвестным способом. Примеры способа амидирования могут включать способ осуществления реакции в присутствии конденсирующего средства и способ, включающий активацию части карбоновой кислоты общеизвестным способом для получения реакционноспособного производного, а затем осуществления амидирования между производным и амином (см. оба способа в "Peptide Gosei no Kiso to Jikken (Principle of Peptide Synthesis and Experiments)" (Nobuo IZUMIYA et al., Maruzen Co., Ltd., 1983)).

[0148] Примеры конденсирующего средства могут включать N, N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC), N, N'-диизопропилкарбодиимид (DIC), гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (WSC), дифенилфосфорилазид (DPPA), гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окситрисдиметиламинофосфония (BOP), гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфония (PyBOP), фосфат 7-азабензотриазол-1-илокситриспирролидинофосфония (PyAOP), гексафторфосфат бромтриспирролидинофосфония (BroP), гексафторфосфат хлортрис(пирролидин-1-ил)фосфония (PyCroP), 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4(3H)-он (DEPBT), Гексафторфосфат O-(азабензотриазол-1-ил)-N, N,N',N'-тетраметилурония (HATU) и гидрохлорид 4-(5,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолин (DMTMM). Примеры добавки, используемой в это время, могут включать 1-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt) и N-гидроксисукцинимид (HOSu). Такие средства используют в количестве, как правило, приблизительно от 1 до 100 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 10 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 11 (1 моль).

[0149] Кроме того, при необходимости, можно добавлять основание. Примеры такого основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.). Основание используют в количестве, как правило, приблизительно от 1 до 100 моль, и предпочтительно - приблизительно от 1 до 10 моль, с учетом количества соединения, представленного формулой 11 (1 моль).

[0150] Растворитель, используемый в реакции, конкретно не ограничен, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя, используемого в настоящем описании, могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.) и их смеси. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов, и предпочтительно - от 0,5 до 24 часов. Соответственно, температура реакции составляет от 0°C до температуры, при которой растворитель кипит, и предпочтительно - от 0°C до 100°C.

[0151] Полученные таким образом соединения (I) и (II) можно выделять и очищать известными способами разделения и очистки, такими как, например, концентрирование, концентрирование под вакуумом, кристаллизация, экстракция растворителем, переосаждение или хроматография.

[0152] В описанном выше способе получения стадии в диапазоне от "встраивания защитной группы в карбоксильную группу соединения, представленного формулой 5" (стадии 4) до "реакции амидирования между карбоксильной группы соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом, или который можно получать известным способом" (стадии 10) последовательно осуществляют в этом порядке. Однако порядок осуществления этих стадий можно изменять. Кроме того, "встраивание защитной группы в карбоксильную группу соединения, представленного формулой 5" (стадию 4) и "удаление защитной группы для карбоксигруппы из соединения, представленного формулой 10" (стадию 9) можно опускать.

[0153] В частности, отдельные стадии осуществляют в порядке "реакция амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом, или который можно получать известным способом" (стадия 10), "галогенирование соединения, представленного формулой 6" (стадия 5), "удаление защитной группы для аминогруппы из соединения, представленного формулой 7" (стадия 6), "реакция амидирования между аминогруппой соединения, представленного формулой 8, и галидом акриловой кислоты или ангидридом акриловой кислоты" (стадия 7), и "реакция Соногаширы между соединением, представленным формулой 9, и производным ацетилена, которое является коммерчески доступным продуктом, или которое можно получать известным способом, если L3 соединения, представленного формулой 9, имеет уходящую группу, такую как галоген" (стадия 8), таким образом, что от рассматриваемого соединения можно дойти до соединений, представленных формулами (I) и (II). Условия, используемые на отдельных стадиях, являются такими же, как и описанные выше.

[0154] Если соединение по изобретению имеет изомер, такой как оптический изомер, стереоизомер, вращательный изомер или таутомер, все из этих изомеров или их смеси включены в пиримидиновое соединение по изобретению, если не указано иначе. Например, если соединение по изобретению имеет оптический изомер, и рацемат, и оптический изомер, полученный в результате разделения рацематов, включены в пиримидиновое соединение по изобретению, если не указано иначе.

[0155] Термин "соль соединения по изобретению" означает фармацевтически приемлемую соль, и она может являться, например, основной солью присоединения или кислой солью присоединения.

[0156] Соединение по изобретению или его соль также включает пролекарство. Термин "пролекарство" означает соединение, превращающееся в соединение по изобретению или его соль в результате реакции с ферментом, желудочным соком и т.д. в физиологических условиях в живом организме; а именно, соединение, ферментативно вызывающие окисление, восстановление, гидролиз и т.д., таким образом, что оно превращается в соединение по изобретению или его соль, или соединение, вызывающее гидролиз и т.д. желудочным соком или т.п., таким образом, что оно превращается в соединение по изобретению или его соль. В ином случае, оно также может являться соединением, превращающимся в соединение по изобретению или его соль в физиологических условиях, как описано в "Iyakuhin no Kaihatsu (Development of Pharmaceutical Products)," Hirokawa Shoten, 1990, Vol. 7, Bunshi Sekkei (Molecular Designing), pp. 163 to 198.

[0157] Пиримидиновое соединение по изобретению или его соль может являться аморфным материалом или кристаллом. Хотя его кристаллическая форма может представлять собой монокристалл или полиморфную смесь, они включены в соединение по изобретению или его соль. Кристалл можно получать посредством кристаллизации соединения по изобретению или его соли известным способом кристаллизации. Соединение по изобретению или его соль может являться сольватом (например, гидратом и т.д.) или не-сольватом, и оба из них включены в соединение по изобретению или его соль. Соединения, меченые радиоактивными изотопами (например, ³H, ¹⁴C, ³⁵S, ¹²⁵I и т.д.) и т.п. также включены в соединение по изобретению или его соль.

[0158] Соединение по изобретению или его соль обладает исключительной EGFR-ингибиторной активностью. Таким образом, соединение по изобретению или его соль можно использовать в качестве противоопухолевого средства против злокачественной опухоли, имеющей гиперэкспрессию EGFR, амплификацию гена EGFR или мутацию EGFR и т.д. Кроме того, т.к. у мышей не обнаружили значимого снижения массы тела, соединение по изобретению или его соль является предпочтительным в том, что оно имеет мало побочных эффектов.

В настоящем описании термин "EGFR" включает EGFR человека или не являющегося человеком млекопитающего, и он, предпочтительно, представляет собой EGFR человека. NCBI Gene ID EGFR человека представляет собой 1956. Кроме того, термин "EGFR" включает изоформы.

[0159] Т.к. соединение по изобретению или его соль обладает исключительной EGFR-ингибиторной активностью, его можно использовать в качестве лекарственного средства для профилактики или лечения заболевания, ассоциированного с EGFR.

[0160] Термин "заболевание, ассоциированное с EGFR" означает заболевание, при котором снижения частоты возникновения или ремиссии, облегчения и/или полного восстановления его симптомов достигают посредством делеции, супрессии и/или ингибирования функции EGFR. Неограничивающие примеры такого заболевания могут включать злокачественные опухоли. Предпочтительные примеры заболевания могут включать злокачественные опухоли, имеющие гиперэкспрессию EGFR, амплификацию гена EGFR или мутацию EGFR.

[0161] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к терапевтическому средству против заболевания, ассоциированного с EGFR, содержащему соединение по изобретению или его соль. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к ингибитору EGFR, содержащему соединение по изобретению или его соль. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к терапевтическому средству для EGFR-положительной опухоли, содержащему соединение по изобретению или его соль. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению по изобретению или его соли для лечения заболевания, ассоциированного с EGFR. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для лечения заболевания, ассоциированного с EGFR. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для получения терапевтического средства для заболевания, ассоциированного с EGFR. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения заболевания, ассоциированного с EGFR, включающему введение эффективного количества соединения по изобретению или его соли нуждающемуся в этом индивидууму. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению по изобретению или его соли для лечения EGFR-положительной опухоли. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для лечения EGFR-положительной опухоли. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для получения терапевтического средства для EGFR-положительной опухоли. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения EGFR-положительной опухоли, включающему введение эффективного количества соединения по изобретению или его соли нуждающемуся в этом индивидууму.

[0162] Соединение по одному из вариантов осуществления настоящего изобретения или его соль ингибирует EGFR дикого типа и мутантный EGFR, имеющий инсерционную мутацию, точечную мутацию или делеционную мутацию, и т.д. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, имеющему ингибиторную активность против EGFR дикого типа и мутантного EGFR, или его соли, или лекарственному средству, или фармацевтической композиции, содержащей его. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к ингибитору EGFR дикого типа и мутантного EGFR, содержащему соединение по изобретению или его соль. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к способу для ингибирования EGFR дикого типа и мутантного EGFR, включающему введение эффективного количества соединения по изобретению или его соли нуждающемуся в этом индивидууму. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для получения ингибитора для EGFR дикого типа и мутантного EGFR. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению по изобретению или его соли для применения в качестве ингибитора EGFR дикого типа и мутантного EGFR. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для ингибирования EGFR дикого типа и мутантного EGFR. Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для профилактики или лечения заболеваний, ассоциированных с EGFR дикого типа и мутантный EGFR.

[0163] Ген EGFR человека дикого типа приведен, например, в SEQ ID NO: 1. Белок EGFR человека дикого типа состоит из аминокислотной последовательности, приведенной, например, в SEQ ID NO: 2. Информацию о нуклеотидной последовательности гена EGFR человека дикого типа и информацию об аминокислотной последовательности белка EGFR человека дикого типа можно получать, например, из референсной последовательности NCBI: NM_005228 и из референсной последовательности NCBI: NP_005219, соответственно.

[0164] В нескольких вариантах осуществления пиримидиновое соединение по изобретению или его соль демонстрирует ингибиторную активность против мутантного EGFR. В настоящем описании "мутантный EGFR" является EGFR, имеющим одну или более активирующих мутаций или мутаций приобретения резистентности, таких как инсерционные мутации, точечные мутации или делеционные мутации, в области экзона 18, области экзона 19, области экзона 20, области экзона 21 или т.п. EGFR человека дикого типа.

[0165] В настоящем описании "экзон 18" соответствует области положений 688-728 в аминокислотной последовательности белка EGFR человека дикого типа (например, белка, состоящего из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2).

[0166] В настоящем изобретении термин "мутация в экзоне 18" относится к точечной мутации или делеционной мутации в области экзона 18, приводящей к мутации аминокислоты в белке EGFR человека дикого типа (например, белке, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2). Примеры точечной мутации в экзоне 18 включают точечную мутацию E709X или G719X в области экзона 18, приводящую к замене глутаминовой кислоты в положении 709 или глицина в положении 719 любой аминокислотой. Примеры E709X включают точечную мутацию E709K в области экзона 18, приводящую к замене глутаминовой кислоты в положении 709 лизином, и точечную мутацию E709A в области экзона 18, приводящую к замене глутаминовой кислоты в положении 709 аланином. Примеры G719X включают точечную мутацию G719A в области экзона 18, приводящую к замене глицина в положении 719 аланином, точечную мутацию G719S в области экзона 18, приводящую к замене глицина в положении 719 серина, и точечную мутацию G719C в области экзона 18, приводящую к замене глицина в положении 719 цистеина. Делеционная мутация в области экзона 18 включает не только мутацию в области экзона 18, приводящую к делеции некоторых аминокислот, но также мутации в них, приводящую к инсерции любой одной или более аминокислот в дополнение к делеции аминокислот. Примеры делеционной мутации в экзоне 18 включают мутацию в области экзона 18, приводящую к делеции глутаминовой кислоты в положении 709 и треонина в положении 710, а затем инсерции аспарагиновой кислоты (Del E709-T710insD).

[0167] В настоящем описании "экзон 19" соответствует области положений 729-761 в аминокислотной последовательности белка EGFR человека дикого типа (например, белка, состоящего из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2).

[0168] В настоящем описании термин "мутация в экзоне 19" относится к мутации в области экзона 19, приводящей к делеции одной или более аминокислот в белке EGFR человека дикого типа (например, белке, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2). Делеционная мутация в области экзона 19 включает не только мутацию в области экзона 19, приводящую к делеции некоторых аминокислот, но также мутации в них, приводящей к инсерции любой одной или более аминокислот в дополнение к делеции аминокислот. Примеры делеционной мутации в экзоне 19 включают мутацию в области экзона 19, приводящую к делеции 5 аминокислот от глутаминовой кислоты в положении 746 до аланина в положении 750 (Del E746-A750 (или также обозначаемой как d746-750)), мутацию в области экзона 19, приводящую к делеции 7 аминокислот от лейцина в положении 747 до пролина в положении 753, а затем инсерции серина (Del L747-P753insS), мутацию в области экзона 19, приводящую к делеции 5 аминокислот от лейцина в положении 747 до треонина в положении 751 (Del L747-T751), и мутацию в области экзона 19, приводящую к делеции 4 аминокислот от лейцина в положении 747 до аланина в положении 750, а затем инсерцию пролина (Del L747-A750insP). В одном из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения делеционная мутация в экзоне 19 является мутацией в области экзона 19, приводящей к делеции 5 аминокислот от глутаминовой кислоты в положении 746 до аланина в положении 750 (Del E746-A750).

[0169] В настоящем описании "экзон 20" соответствует области положений 762-823 в аминокислотной последовательности белка EGFR человека дикого типа (например, белка, состоящего из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2).

[0170] В настоящем изобретении термин "мутация в экзоне 20" относится к точечной мутации, инсерционной мутации, делеционной мутации или т.п. в области экзона 20, приводящей к мутации аминокислоты в белке EGFR человека дикого типа (например, белке, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2). Примеры мутации в экзоне 20 включают A763insFQEA, A767insASV, S768dupSVD, V769insASV, D770insNPG, D770insSVD и D773insNPH (Nature medicine, 24, p638-646,2018). В одном из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения мутация в экзоне 20 является одной или более инсерционными мутациями или точечными мутациями, выбранными из V769_D770insASV, D770_N771insNPG, D770_N771insSVD, H773_V774insNPH, и T790M.

[0171] В настоящем описании "экзон 21" соответствует области положений 824-875 в аминокислотной последовательности белка EGFR человека дикого типа (например, белка, состоящего из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2).

[0172] В настоящем изобретении термин "мутация в экзоне 21" относится к точечной мутации в области экзона 21, приводящей к мутации аминокислоты в белке EGFR человека дикого типа (например, белке, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2). Примеры точечной мутации в экзоне 21 включают точечные мутации в области экзона 21, приводящие к замене одной аминокислоты и, предпочтительно, включающие положение мутаций L858X или L861X в области экзона 21, приводящих к замене лейцина в положении 858 или лейцина в положении 861 любой аминокислотой. Примеры L858X включают точечную мутацию L858R в области экзона 21, приводящую к замене лейцина в положении 858 аргинином. Примеры L861X включают точечную мутацию L861Q в области экзона 21, приводящую к замене лейцина в положении 861 глутамином. В одном из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения точечная мутация в экзоне 21 является L858R.

[0173] В нескольких вариантах осуществления, что касается мутации в некоторой изоформе EGFR, даже если положение мутации отличается от положения аминокислоты, приведенного в SEQ ID NO: 2, из-за делеции или инсерции аминокислот, следует понимать, что мутация является той же, что и мутация в положении, соответствующем положению аминокислоты, приведенному в SEQ ID NO: 2. Таким образом, например, треонин в положении 790 в EGFR, приведенном в SEQ ID NO: 2, соответствует треонину в положении 745 в EGFR, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 4. Например, термин "T790M" означает, что треонин в положении 790 в EGFR, приведенном в SEQ ID NO: 2, подвергнут мутации в метионин. Т.к. такая "T790M" находится в положении, соответствующем аминокислоте в положении 745 в EGFR, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 4, "T745M" в EGFR, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 4, соответствует "T790M" в EGFR, приведенном в SEQ ID NO: 2. Например, треонин в положении 790 в EGFR, приведенном в SEQ ID NO: 2, соответствует треонину в положении 523 в EGFR, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 6. Например, термин "T790M" означает, что треонин в положении 790 в EGFR, приведенном в SEQ ID NO: 2, подвергнут мутации в метионин. Т.к. такая "T790M" находится в положении, соответствующем аминокислоте в положении 523 в EGFR, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 6, "T523M" в EGFR, состоящем из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 6, соответствует "T790M" в EGFR, приведенном в SEQ ID NO: 2. Кроме того, положение аминокислоты в SEQ ID NO: 2, соответствующее некоторой аминокислоте в некоторой изоформе EGFR, можно подтверждать посредством множественного выравнивания BLAST.

[0174] SEQ ID NO: 1-6 являются такими, как описано ниже.

Вариант 1 EGFR

Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 1)

ATGCGACCCTCCGGGACGGCCGGGGCAGCGCTCCTGGCGCTGCTGGCTGCGCTCTGCCCGGCGAGTCGGGCTCTGGAGGAAAAGAAAGTTTGCCAAGGCACGAGTAACAAGCTCACGCAGTTGGGCACTTTTGAAGATCATTTTCTCAGCCTCCAGAGGATGTTCAATAACTGTGAGGTGGTCCTTGGGAATTTGGAAATTACCTATGTGCAGAGGAATTATGATCTTTCCTTCTTAAAGACCATCCAGGAGGTGGCTGGTTATGTCCTCATTGCCCTCAACACAGTGGAGCGAATTCCTTTGGAAAACCTGCAGATCATCAGAGGAAATATGTACTACGAAAATTCCTATGCCTTAGCAGTCTTATCTAACTATGATGCAAATAAAACCGGACTGAAGGAGCTGCCCATGAGAAATTTACAGGAAATCCTGCATGGCGCCGTGCGGTTCAGCAACAACCCTGCCCTGTGCAACGTGGAGAGCATCCAGTGGCGGGACATAGTCAGCAGTGACTTTCTCAGCAACATGTCGATGGACTTCCAGAACCACCTGGGCAGCTGCCAAAAGTGTGATCCAAGCTGTCCCAATGGGAGCTGCTGGGGTGCAGGAGAGGAGAACTGCCAGAAACTGACCAAAATCATCTGTGCCCAGCAGTGCTCCGGGCGCTGCCGTGGCAAGTCCCCCAGTGACTGCTGCCACAACCAGTGTGCTGCAGGCTGCACAGGCCCCCGGGAGAGCGACTGCCTGGTCTGCCGCAAATTCCGAGACGAAGCCACGTGCAAGGACACCTGCCCCCCACTCATGCTCTACAACCCCACCACGTACCAGATGGATGTGAACCCCGAGGGCAAATACAGCTTTGGTGCCACCTGCGTGAAGAAGTGTCCCCGTAATTATGTGGTGACAGATCACGGCTCGTGCGTCCGAGCCTGTGGGGCCGACAGCTATGAGATGGAGGAAGACGGCGTCCGCAAGTGTAAGAAGTGCGAAGGGCCTTGCCGCAAAGTGTGTAACGGAATAGGTATTGGTGAATTTAAAGACTCACTCTCCATAAATGCTACGAATATTAAACACTTCAAAAACTGCACCTCCATCAGTGGCGATCTCCACATCCTGCCGGTGGCATTTAGGGGTGACTCCTTCACACATACTCCTCCTCTGGATCCACAGGAACTGGATATTCTGAAAACCGTAAAGGAAATCACAGGGTTTTTGCTGATTCAGGCTTGGCCTGAAAACAGGACGGACCTCCATGCCTTTGAGAACCTAGAAATCATACGCGGCAGGACCAAGCAACATGGTCAGTTTTCTCTTGCAGTCGTCAGCCTGAACATAACATCCTTGGGATTACGCTCCCTCAAGGAGATAAGTGATGGAGATGTGATAATTTCAGGAAACAAAAATTTGTGCTATGCAAATACAATAAACTGGAAAAAACTGTTTGGGACCTCCGGTCAGAAAACCAAAATTATAAGCAACAGAGGTGAAAACAGCTGCAAGGCCACAGGCCAGGTCTGCCATGCCTTGTGCTCCCCCGAGGGCTGCTGGGGCCCGGAGCCCAGGGACTGCGTCTCTTGCCGGAATGTCAGCCGAGGCAGGGAATGCGTGGACAAGTGCAACCTTCTGGAGGGTGAGCCAAGGGAGTTTGTGGAGAACTCTGAGTGCATACAGTGCCACCCAGAGTGCCTGCCTCAGGCCATGAACATCACCTGCACAGGACGGGGACCAGACAACTGTATCCAGTGTGCCCACTACATTGACGGCCCCCACTGCGTCAAGACCTGCCCGGCAGGAGTCATGGGAGAAAACAACACCCTGGTCTGGAAGTACGCAGACGCCGGCCATGTGTGCCACCTGTGCCATCCAAACTGCACCTACGGATGCACTGGGCCAGGTCTTGAAGGCTGTCCAACGAATGGGCCTAAGATCCCGTCCATCGCCACTGGGATGGTGGGGGCCCTCCTCTTGCTGCTGGTGGTGGCCCTGGGGATCGGCCTCTTCATGCGAAGGCGCCACATCGTTCGGAAGCGCACGCTGCGGAGGCTGCTGCAGGAGAGGGAGCTTGTGGAGCCTCTTACACCCAGTGGAGAAGCTCCCAACCAAGCTCTCTTGAGGATCTTGAAGGAAACTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGGGCTCCGGTGCGTTCGGCACGGTGTATAAGGGACTCTGGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTTAAAATTCCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTCGATGAAGCCTACGTGATGGCCAGCGTGGACAACCCCCACGTGTGCCGCCTGCTGGGCATCTGCCTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCACGCAGCTCATGCCCTTCGGCTGCCTCCTGGACTATGTCCGGGAACACAAAGACAATATTGGCTCCCAGTACCTGCTCAACTGGTGTGTGCAGATCGCAAAGGGCATGAACTACTTGGAGGACCGTCGCTTGGTGCACCGCGACCTGGCAGCCAGGAACGTACTGGTGAAAACACCGCAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAATACCATGCAGAAGGAGGCAAAGTGCCTATCAAGTGGATGGCATTGGAATCAATTTTACACAGAATCTATACCCACCAGAGTGATGTCTGGAGCTACGGGGTGACTGTTTGGGAGTTGATGACCTTTGGATCCAAGCCATATGACGGAATCCCTGCCAGCGAGATCTCCTCCATCCTGGAGAAAGGAGAACGCCTCCCTCAGCCACCCATATGTACCATCGATGTCTACATGATCATGGTCAAGTGCTGGATGATAGACGCAGATAGTCGCCCAAAGTTCCGTGAGTTGATCATCGAATTCTCCAAAATGGCCCGAGACCCCCAGCGCTACCTTGTCATTCAGGGGGATGAAAGAATGCATTTGCCAAGTCCTACAGACTCCAACTTCTACCGTGCCCTGATGGATGAAGAAGACATGGACGACGTGGTGGATGCCGACGAGTACCTCATCCCACAGCAGGGCTTCTTCAGCAGCCCCTCCACGTCACGGACTCCCCTCCTGAGCTCTCTGAGTGCAACCAGCAACAATTCCACCGTGGCTTGCATTGATAGAAATGGGCTGCAAAGCTGTCCCATCAAGGAAGACAGCTTCTTGCAGCGATACAGCTCAGACCCCACAGGCGCCTTGACTGAGGACAGCATAGACGACACCTTCCTCCCAGTGCCTGAATACATAAACCAGTCCGTTCCCAAAAGGCCCGCTGGCTCTGTGCAGAATCCTGTCTATCACAATCAGCCTCTGAACCCCGCGCCCAGCAGAGACCCACACTACCAGGACCCCCACAGCACTGCAGTGGGCAACCCCGAGTATCTCAACACTGTCCAGCCCACCTGTGTCAACAGCACATTCGACAGCCCTGCCCACTGGGCCCAGAAAGGCAGCCACCAAATTAGCCTGGACAACCCTGACTACCAGCAGGACTTCTTTCCCAAGGAAGCCAAGCCAAATGGCATCTTTAAGGGCTCCACAGCTGAAAATGCAGAATACCTAAGGGTCGCGCCACAAAGCAGTGAATTTATTGGAGCATGA

[0175] Аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 2)

MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEVVLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALAVLSNYDANKTGLKELPMRNLQEILHGAVRFSNNPALCNVESIQWRDIVSSDFLSNMSMDFQNHLGSCQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGCTGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA

[0176] Вариант 5 EGFR

Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 3)

ATGCGACCCTCCGGGACGGCCGGGGCAGCGCTCCTGGCGCTGCTGGCTGCGCTCTGCCCGGCGAGTCGGGCTCTGGAGGAAAAGAAAGTTTGCCAAGGCACGAGTAACAAGCTCACGCAGTTGGGCACTTTTGAAGATCATTTTCTCAGCCTCCAGAGGATGTTCAATAACTGTGAGGTGGTCCTTGGGAATTTGGAAATTACCTATGTGCAGAGGAATTATGATCTTTCCTTCTTAAAGACCATCCAGGAGGTGGCTGGTTATGTCCTCATTGCCCTCAACACAGTGGAGCGAATTCCTTTGGAAAACCTGCAGATCATCAGAGGAAATATGTACTACGAAAATTCCTATGCCTTAGCAGTCTTATCTAACTATGATGCAAATAAAACCGGACTGAAGGAGCTGCCCATGAGAAATTTACAGGGCCAAAAGTGTGATCCAAGCTGTCCCAATGGGAGCTGCTGGGGTGCAGGAGAGGAGAACTGCCAGAAACTGACCAAAATCATCTGTGCCCAGCAGTGCTCCGGGCGCTGCCGTGGCAAGTCCCCCAGTGACTGCTGCCACAACCAGTGTGCTGCAGGCTGCACAGGCCCCCGGGAGAGCGACTGCCTGGTCTGCCGCAAATTCCGAGACGAAGCCACGTGCAAGGACACCTGCCCCCCACTCATGCTCTACAACCCCACCACGTACCAGATGGATGTGAACCCCGAGGGCAAATACAGCTTTGGTGCCACCTGCGTGAAGAAGTGTCCCCGTAATTATGTGGTGACAGATCACGGCTCGTGCGTCCGAGCCTGTGGGGCCGACAGCTATGAGATGGAGGAAGACGGCGTCCGCAAGTGTAAGAAGTGCGAAGGGCCTTGCCGCAAAGTGTGTAACGGAATAGGTATTGGTGAATTTAAAGACTCACTCTCCATAAATGCTACGAATATTAAACACTTCAAAAACTGCACCTCCATCAGTGGCGATCTCCACATCCTGCCGGTGGCATTTAGGGGTGACTCCTTCACACATACTCCTCCTCTGGATCCACAGGAACTGGATATTCTGAAAACCGTAAAGGAAATCACAGGGTTTTTGCTGATTCAGGCTTGGCCTGAAAACAGGACGGACCTCCATGCCTTTGAGAACCTAGAAATCATACGCGGCAGGACCAAGCAACATGGTCAGTTTTCTCTTGCAGTCGTCAGCCTGAACATAACATCCTTGGGATTACGCTCCCTCAAGGAGATAAGTGATGGAGATGTGATAATTTCAGGAAACAAAAATTTGTGCTATGCAAATACAATAAACTGGAAAAAACTGTTTGGGACCTCCGGTCAGAAAACCAAAATTATAAGCAACAGAGGTGAAAACAGCTGCAAGGCCACAGGCCAGGTCTGCCATGCCTTGTGCTCCCCCGAGGGCTGCTGGGGCCCGGAGCCCAGGGACTGCGTCTCTTGCCGGAATGTCAGCCGAGGCAGGGAATGCGTGGACAAGTGCAACCTTCTGGAGGGTGAGCCAAGGGAGTTTGTGGAGAACTCTGAGTGCATACAGTGCCACCCAGAGTGCCTGCCTCAGGCCATGAACATCACCTGCACAGGACGGGGACCAGACAACTGTATCCAGTGTGCCCACTACATTGACGGCCCCCACTGCGTCAAGACCTGCCCGGCAGGAGTCATGGGAGAAAACAACACCCTGGTCTGGAAGTACGCAGACGCCGGCCATGTGTGCCACCTGTGCCATCCAAACTGCACCTACGGATGCACTGGGCCAGGTCTTGAAGGCTGTCCAACGAATGGGCCTAAGATCCCGTCCATCGCCACTGGGATGGTGGGGGCCCTCCTCTTGCTGCTGGTGGTGGCCCTGGGGATCGGCCTCTTCATGCGAAGGCGCCACATCGTTCGGAAGCGCACGCTGCGGAGGCTGCTGCAGGAGAGGGAGCTTGTGGAGCCTCTTACACCCAGTGGAGAAGCTCCCAACCAAGCTCTCTTGAGGATCTTGAAGGAAACTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGGGCTCCGGTGCGTTCGGCACGGTGTATAAGGGACTCTGGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTTAAAATTCCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTCGATGAAGCCTACGTGATGGCCAGCGTGGACAACCCCCACGTGTGCCGCCTGCTGGGCATCTGCCTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCACGCAGCTCATGCCCTTCGGCTGCCTCCTGGACTATGTCCGGGAACACAAAGACAATATTGGCTCCCAGTACCTGCTCAACTGGTGTGTGCAGATCGCAAAGGGCATGAACTACTTGGAGGACCGTCGCTTGGTGCACCGCGACCTGGCAGCCAGGAACGTACTGGTGAAAACACCGCAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAATACCATGCAGAAGGAGGCAAAGTGCCTATCAAGTGGATGGCATTGGAATCAATTTTACACAGAATCTATACCCACCAGAGTGATGTCTGGAGCTACGGGGTGACTGTTTGGGAGTTGATGACCTTTGGATCCAAGCCATATGACGGAATCCCTGCCAGCGAGATCTCCTCCATCCTGGAGAAAGGAGAACGCCTCCCTCAGCCACCCATATGTACCATCGATGTCTACATGATCATGGTCAAGTGCTGGATGATAGACGCAGATAGTCGCCCAAAGTTCCGTGAGTTGATCATCGAATTCTCCAAAATGGCCCGAGACCCCCAGCGCTACCTTGTCATTCAGGGGGATGAAAGAATGCATTTGCCAAGTCCTACAGACTCCAACTTCTACCGTGCCCTGATGGATGAAGAAGACATGGACGACGTGGTGGATGCCGACGAGTACCTCATCCCACAGCAGGGCTTCTTCAGCAGCCCCTCCACGTCACGGACTCCCCTCCTGAGCTCTCTGAGTGCAACCAGCAACAATTCCACCGTGGCTTGCATTGATAGAAATGGGCTGCAAAGCTGTCCCATCAAGGAAGACAGCTTCTTGCAGCGATACAGCTCAGACCCCACAGGCGCCTTGACTGAGGACAGCATAGACGACACCTTCCTCCCAGTGCCTGGTGAGTGGCTTGTCTGGAAACAGTCCTGCTCCTCAACCTCCTCGACCCACTCAGCAGCAGCCAGTCTCCAGTGTCCAAGCCAGGTGCTCCCTCCAGCATCTCCAGAGGGGGAAACAGTGGCAGATTTGCAGACACAGTGA

[0177] Аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 4)

MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEVVLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALAVLSNYDANKTGLKELPMRNLQGQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGCTGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPGEWLVWKQSCSSTSSTHSAAASLQCPSQVLPPASPEGETVADLQTQ

[0178] EGFRvIII (del2-7 EGFR)

Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 5)

ATGCGACCCTCCGGGACGGCCGGGGCAGCGCTCCTGGCGCTGCTGGCTGCGCTCTGCCCGGCGAGTCGGGCTCTGGAGGAAAAGAAAGGTAATTATGTGGTGACAGATCACGGCTCGTGCGTCCGAGCCTGTGGGGCCGACAGCTATGAGATGGAGGAAGACGGCGTCCGCAAGTGTAAGAAGTGCGAAGGGCCTTGCCGCAAAGTGTGTAACGGAATAGGTATTGGTGAATTTAAAGACTCACTCTCCATAAATGCTACGAATATTAAACACTTCAAAAACTGCACCTCCATCAGTGGCGATCTCCACATCCTGCCGGTGGCATTTAGGGGTGACTCCTTCACACATACTCCTCCTCTGGATCCACAGGAACTGGATATTCTGAAAACCGTAAAGGAAATCACAGGGTTTTTGCTGATTCAGGCTTGGCCTGAAAACAGGACGGACCTCCATGCCTTTGAGAACCTAGAAATCATACGCGGCAGGACCAAGCAACATGGTCAGTTTTCTCTTGCAGTCGTCAGCCTGAACATAACATCCTTGGGATTACGCTCCCTCAAGGAGATAAGTGATGGAGATGTGATAATTTCAGGAAACAAAAATTTGTGCTATGCAAATACAATAAACTGGAAAAAACTGTTTGGGACCTCCGGTCAGAAAACCAAAATTATAAGCAACAGAGGTGAAAACAGCTGCAAGGCCACAGGCCAGGTCTGCCATGCCTTGTGCTCCCCCGAGGGCTGCTGGGGCCCGGAGCCCAGGGACTGCGTCTCTTGCCGGAATGTCAGCCGAGGCAGGGAATGCGTGGACAAGTGCAACCTTCTGGAGGGTGAGCCAAGGGAGTTTGTGGAGAACTCTGAGTGCATACAGTGCCACCCAGAGTGCCTGCCTCAGGCCATGAACATCACCTGCACAGGACGGGGACCAGACAACTGTATCCAGTGTGCCCACTACATTGACGGCCCCCACTGCGTCAAGACCTGCCCGGCAGGAGTCATGGGAGAAAACAACACCCTGGTCTGGAAGTACGCAGACGCCGGCCATGTGTGCCACCTGTGCCATCCAAACTGCACCTACGGATGCACTGGGCCAGGTCTTGAAGGCTGTCCAACGAATGGGCCTAAGATCCCGTCCATCGCCACTGGGATGGTGGGGGCCCTCCTCTTGCTGCTGGTGGTGGCCCTGGGGATCGGCCTCTTCATGCGAAGGCGCCACATCGTTCGGAAGCGCACGCTGCGGAGGCTGCTGCAGGAGAGGGAGCTTGTGGAGCCTCTTACACCCAGTGGAGAAGCTCCCAACCAAGCTCTCTTGAGGATCTTGAAGGAAACTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGGGCTCCGGTGCGTTCGGCACGGTGTATAAGGGACTCTGGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTTAAAATTCCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTCGATGAAGCCTACGTGATGGCCAGCGTGGACAACCCCCACGTGTGCCGCCTGCTGGGCATCTGCCTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCACGCAGCTCATGCCCTTCGGCTGCCTCCTGGACTATGTCCGGGAACACAAAGACAATATTGGCTCCCAGTACCTGCTCAACTGGTGTGTGCAGATCGCAAAGGGCATGAACTACTTGGAGGACCGTCGCTTGGTGCACCGCGACCTGGCAGCCAGGAACGTACTGGTGAAAACACCGCAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAATACCATGCAGAAGGAGGCAAAGTGCCTATCAAGTGGATGGCATTGGAATCAATTTTACACAGAATCTATACCCACCAGAGTGATGTCTGGAGCTACGGGGTGACTGTTTGGGAGTTGATGACCTTTGGATCCAAGCCATATGACGGAATCCCTGCCAGCGAGATCTCCTCCATCCTGGAGAAAGGAGAACGCCTCCCTCAGCCACCCATATGTACCATCGATGTCTACATGATCATGGTCAAGTGCTGGATGATAGACGCAGATAGTCGCCCAAAGTTCCGTGAGTTGATCATCGAATTCTCCAAAATGGCCCGAGACCCCCAGCGCTACCTTGTCATTCAGGGGGATGAAAGAATGCATTTGCCAAGTCCTACAGACTCCAACTTCTACCGTGCCCTGATGGATGAAGAAGACATGGACGACGTGGTGGATGCCGACGAGTACCTCATCCCACAGCAGGGCTTCTTCAGCAGCCCCTCCACGTCACGGACTCCCCTCCTGAGCTCTCTGAGTGCAACCAGCAACAATTCCACCGTGGCTTGCATTGATAGAAATGGGCTGCAAAGCTGTCCCATCAAGGAAGACAGCTTCTTGCAGCGATACAGCTCAGACCCCACAGGCGCCTTGACTGAGGACAGCATAGACGACACCTTCCTCCCAGTGCCTGAATACATAAACCAGTCCGTTCCCAAAAGGCCCGCTGGCTCTGTGCAGAATCCTGTCTATCACAATCAGCCTCTGAACCCCGCGCCCAGCAGAGACCCACACTACCAGGACCCCCACAGCACTGCAGTGGGCAACCCCGAGTATCTCAACACTGTCCAGCCCACCTGTGTCAACAGCACATTCGACAGCCCTGCCCACTGGGCCCAGAAAGGCAGCCACCAAATTAGCCTGGACAACCCTGACTACCAGCAGGACTTCTTTCCCAAGGAAGCCAAGCCAAATGGCATCTTTAAGGGCTCCACAGCTGAAAATGCAGAATACCTAAGGGTCGCGCCACAAAGCAGTGAATTTATTGGAGCATGA

[0179] Аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 6)

MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKGNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA

[0180] В настоящем изобретении "EGFR-положительная опухоль" является опухолью, в которой определен белок EGFR или ген EGFR. Белок EGFR и ген EGFR также включают мутантный белок EGFR и мутантный ген EGFR, имеющий точечную мутацию, инсерционную мутацию или делеционную мутацию и т.д.

[0181] Примеры способа детекции белка EGFR включают общепринятые способы детекции, такие как ELISA, Вестерн-блоттинг и иммуноокрашивание с использованием антитела, специфически связывающегося с белком EGFR. Антитело, специфически связывающееся с белком EGFR, может являться коммерчески доступным продуктом, или его можно получать общепринятым способом.

[0182] Примеры способа детекции гена EGFR включают общепринятые способы детекции, такие как нозерн-блоттинг, Саузерн-блоттинг, RT-ПЦР, ПЦР в реальном времени, цифровую ПЦР, ДНК-микрочипы, гибридизацию in situ и анализ последовательности. Другой пример включает способ детекции с использованием набора для детекции мутаций EGFR cobas (Roche Diagnostics K.K.), являющийся коммерчески доступным набором для детекции мутаций EGF.

[0183] В настоящем описании термин "эффективное количество", используемый в отношении пиримидинового соединения по изобретению, означает количество соединения по изобретению, вызывающее биологический или медицинский ответ у индивидуума, такой как, например, снижение или ингибирование активности фермента или белка; или улучшение симптомов, облегчение состояний и задержку, или замедление прогрессирования заболевания, или профилактику заболевания и т.д. (терапевтически эффективное количество).

В настоящем описании термин "индивидуум" включает млекопитающих и не-млекопитающих. Неограничивающие примеры млекопитающего могут включать человека, шимпанзе, обезьяну Старого света, обезьяну нового света, крупный рогатый скот, лошадь, овцу, козу, свинью, кролика, собаку, кошку, крысу, мышь, морскую свинку, ежа, кенгуру, крота, дикую свинью, медведя, тигра и льва. Неограничивающие примеры не-млекопитающих могут включать птиц, рыбу и пресмыкающихся. В одном из вариантов осуществления индивидуум является человеком и может являться человеком, у которого диагностирована потребность в лечении симптомов, состояний или заболевания, представленных в настоящем описании.

[0184] При использовании соединения по изобретению или его соли в качестве лекарственного средства фармацевтически приемлемый носитель смешивают с ним, при необходимости, и можно адаптировать различные типы лекарственных форм в зависимости от профилактической или терапевтической цели. Примеры лекарственной формы могут включать все из перорального средства, инъекционного препарата, суппозитория, мази и пластыря. Предпочтительно, адаптируют пероральное средство. Эти лекарственные формы можно получать общепринятыми способами получения, известными специалистам в этой области.

[0185] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к противоопухолевому средству для перорального введения, содержащему соединение по изобретению или его соль в качестве активного ингредиента. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к способу профилактики и/или лечения опухоли, включающему введение эффективного количества соединения по изобретению или его соли нуждающемуся в этом индивидууму посредством перорального введения. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для получения противоопухолевого средства для перорального введения. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению по изобретению или его соли для применения в профилактике и/или лечении опухоли посредством его перорального введения.

[0186] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по изобретению или a его соль. Фармацевтическая композиция по одному из вариантов осуществления настоящего изобретения содержит соединение по изобретению или его соль и фармацевтически приемлемый носитель. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения по изобретению или его соли для получения фармацевтической композиции. Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению по изобретению или его соли для применения в качестве лекарственного средства.

[0187] В качестве фармацевтически приемлемых носителей используют различные типы органических или неорганических носитель, общеупотребительных в качестве материалов для препаратов. Если соединение по изобретению перерабатывают в твердый препарат, примеры фармацевтически приемлемого носителя, смешиваемого с соединением по настоящему изобретению, могут включать эксципиент, связывающее средство, дезинтегрирующее средство, смазочное средство, покрывающее средство и краситель. Если соединение по изобретению перерабатывают в жидкий препарат, примеры фармацевтически приемлемого носителя, смешиваемого с соединением по настоящему изобретению, могут включать растворитель, солюбилизатор, суспендирующее средство, регулятор тоничности, буфер и смягчающее средство. Кроме того, при необходимости, также можно использовать добавки для препарата, такие как антисептическое средство, антиоксидант, подсластитель и стабилизатор.

[0188] В случае получения твердого препарата для перорального введения к пиримидиновому соединению по изобретению добавляют эксципиент и, при необходимости, связывающее средство, дезинтегрирующее средство, смазочное средство, краситель, корригирующее вещество и т.д., а затем общепринятыми способами можно получать таблетку, таблетку, покрытую оболочкой, гранулу, порошок, капсулу и т.д.

[0189] В случае получения инъекционного препарата к пиримидиновому соединению по изобретению добавляют регулятор pH, буфер, стабилизатор, регулятор тоничности, местный анестетик и т.д., а затем можно получать подкожные, внутримышечные и внутривенные инъекционные препараты общепринятыми способами.

[0190] Количество соединения по изобретению, подлежащее примешиванию к каждой описанной выше стандартной лекарственной форме, зависит от симптомов у индивидуума, которому будут вводить пиримидиновое соединение по изобретению, лекарственной формы и т.п., и, таким образом, количество соединения по изобретению не является постоянным. В основном, предпочтительно, используемую дозу устанавливают равной от 0,05 до 1000 мг на стандартную лекарственную форму в случае перорального средства, равной от 0,01 до 500 мг на стандартную лекарственную форму в случае в случае инъекционного препарата, и равной от 1 до 1000 мг на стандартную лекарственную форму в случае суппозитория.

Суточная доза лекарственного средства, имеющего описанную выше лекарственную форму, отличается в зависимости от симптомов, массы тела, возраста, пола и т.п. индивидуума, и, таким образом, ее нельзя определить в общем случае. Однако соединение по изобретению можно вводить взрослому (масса тела: 50 кг) в суточной дозе, как правило, от 0,05 до 5000 мг, и предпочтительно - от 0,1 до 1000 мг.

[0191] Злокачественная опухоль, являющаяся мишенью по настоящему изобретению, конкретно не ограничена. Примеры опухоли могут включать опухоль головного мозга, рак головы и шеи, рак пищеварительной системы (рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, рак желчных протоков (рак желчного пузыря и/или желчных протоков и т.д.), рак поджелудочной железы, колоректальный рак (рак толстого кишечника, рак прямой кишки и т.д.) и т.д.), рак легких (немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, мезотелиому и т.д.), рак молочной железы, рак половых органов (рак яичников, рак матки (рак шейки матки, рак эндометрия и т.д.) и т.д.), рак органов мочевыделительной системы (рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, опухоль яичка и т.д.), гемобластоз (лейкоз, злокачественную лимфому, множественную миелому и т.д.), опухоль костной ткани и/или мягких тканей и рак кожи. Среди них, предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, рак желудка, рак головы и шеи, опухоль головного мозга, колоректальный рак, рак мочевого пузыря, рак желчных протоков или рак матки, и более предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, колоректальный рак или опухоль головного мозга.

[0192] В одном из вариантов осуществления опухоль, являющаяся мишенью по настоящему изобретению, является злокачественной опухолью, имеющий гиперэкспрессию EGFR, амплификацию гена EGFR или мутацию EGFR. Конкретные примеры опухоли могут включать опухоль головного мозга, рак головы и шеи, рак пищеварительной системы (рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, рак желчных протоков (рак желчного пузыря и/или желчных протоков и т.д.), рак поджелудочной железы, колоректальный рак (рак толстого кишечника, рак прямой кишки и т.д.) и т.д.), рак легких (немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, мезотелиому и т.д.), рак молочной железы, рак половых органов (рак яичников, рак матки (рак шейки матки, рак эндометрия и т.д.) и т.д.), рак органов мочевыделительной системы (рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, опухоль яичка и т.д.), гемобластоз (лейкоз, злокачественную лимфому, множественную миелому и т.д.), опухоль костной ткани и/или мягких тканей и рак кожи. Среди них, предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, рак желудка, рак головы и шеи, опухоль головного мозга, колоректальный рак, рак мочевого пузыря, рак желчных протоков или рак матки, и более предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, колоректальный рак или опухоль головного мозга.

[0193] В одном из вариантов осуществления опухоль, являющаяся мишенью по настоящему изобретению, является EGFR-положительной опухолью. Конкретные примеры опухоли могут включать опухоль головного мозга, рак головы и шеи, рак пищеварительной системы (рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, рак желчных протоков (рак желчного пузыря и/или желчных протоков и т.д.), рак поджелудочной железы, колоректальный рак (рак толстого кишечника, рак прямой кишки и т.д.) и т.д.), рак легких (немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, мезотелиому и т.д.), рак молочной железы, рак половых органов (рак яичников, рак матки (рак шейки матки, рак эндометрия и т.д.) и т.д.), рак органов мочевыделительной системы (рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, опухоль яичка и т.д.), гемобластоз (лейкоз, злокачественную лимфому, множественную миелому и т.д.), опухоль костной ткани и/или мягких тканей и рак кожи. Среди них, предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, рак желудка, рак головы и шеи, опухоль головного мозга, колоректальный рак, рак мочевого пузыря, рак желчных протоков или рак матки, и более предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, колоректальный рак или опухоль головного мозга.

[0194] В одном из вариантов осуществления опухоль является опухолью головного мозга. Пиримидиновое соединение по изобретению можно использовать для лечения симптомов, связанных с головным мозгом, требующего прохождения через гематоэнцефалический барьер. Пиримидиновое соединение по одному из вариантов осуществления имеет благоприятную проникающую способность в отношении гематоэнцефалического барьера для его доставки в головной мозг, а именно, исключительные свойства проникновения в головной мозг. В качестве показателя свойств проникновения соединения в головной мозг используют концентрацию соединения в головном мозге или значение Kp (соотношение концентрации лекарственного средства головной мозг-к-плазме.

[0195] Опухоль головного мозга, подлежащая лечению по настоящему изобретению, относится к метастатической опухоли головного мозга и первичной опухоли головного мозга.

[0196] Неограничивающие примеры опухоли головного мозга могут включать метастатическую опухоль головного мозга (например, метастазирование в головной мозг рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки и т.д. (предпочтительно, рака легких, рака молочной железы или рака желудка)), пилиоцитарную астроцитому, диффузную астроцитому, олигодендрому и/или олигодендроастроцитому, анапластическую астроцитому и/или анапластическую олигодендроглиому, анапластическую олигодендроастроцитому, глиобластома, эпендимому, анапластическую эпендимому, ганглиоглиому, центральную нейроцитому, медуллобластому, герминому, злокачественную лимфому центральной нервной системы, менингиому, неврилеммому, СТГ-секретирующую аденому гипофиза, пролактин-секретирующую аденому гипофиза, АКТГ-секретирующую аденому гипофиза, нефункциональную аденому гипофиза, краниофарингиому, хордому, гемангиобластому и эпидермоидную опухоль.

ПРИМЕРЫ

[0197] Далее в настоящем описании настоящее изобретение будет подробно описано в следующих примерах. Однако эти примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

[0198] В настоящем описании термин "комнатная температура", как правило, означает температуру, составляющую от приблизительно 10°C до приблизительно 35°C. Кроме того, в следующих примерах, касающихся соединений, символом "%" указан процент по массе, если не указано иначе.

[0199] Различные типы реагентов, используемых в примерах, являлись коммерчески доступными продуктами, если не указано иначе. Хроматографию на силикагеле осуществляли с использованием картриджа Biotage SNAP Cartridge Ultra, производимого Biotage Japan Ltd. Базовую хроматографию на силикагеле осуществляли с использованием картриджа Biotage SNAP Cartridge Isolute Flash-NH2, производимого Biotage Japan Ltd.

[0200] Препаративную тонкослойную хроматографию осуществляли с использованием Kieselgel TM60F254, кат. № 5744, производимого Merck, или силикагеля-NH2 60F254 Plate-Wako, производимого FUJIFILM Wako Pure Chemical Cooperation.

¹H-ЯМР измеряли с использованием тетраметилсилана в качестве референсного материала и AL400 (400 МГц), производимого JEOL, Mercury (400 МГц) производимого Varian, или Inova (400 МГц) производимого Varian. Кроме того, массовый спектр измеряли с использованием Micromass ZQ или SQD, производимого Waters, в режиме ионизации электрораспылением (ESI) или химической ионизации при атмосферном давлении (APCI). Микроволновую реакцию осуществляли с использованием Initiator, производимого Biotage Japan Ltd.

[0201] Сокращения обладают следующими значениями.

с: Синглет

д: Дублет

т: Триплет

к: Квартет

дд: Двойной дублет

дт: Двойной триплет

тд: Тройной дублет

тт: Тройной триплет

ддд: Двойной двойной дублет

ддт: Двойной двойной триплет

дтд: Двойной тройной дублет

тдд: Тройной двойной дублет

м: Мультиплет

ш.: Широкий

АТФ: Аденозин трифосфат

DMSO-d6: Дейтерированный диметилсульфоксид

CDCl₃: Дейтерированный хлороформ

ЭДТА: Этилендиаминтетрауксусная кислота

THF: Тетрагидрофуран

DMF: N, N-диметилформамид

DMSO: Диметилсульфоксид

NMP: N-метилпирролидон

HATU: Гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N, N,N',N'-тетраметилурония

HPMC: Гипромеллоза

PdCl₂(PPh₃)₂: Дихлорбис(трифенилфосфин)палладий (II)

[0202]

<Ссылочный пример 1>

Ссылочный пример 1(1)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат

Трет-бутил-(2S,4S)-4-гидрокси-2-метилпирролидин-1-карбоксилат (19,0 г) и 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (13,1 г) растворяли в THF (190 мл), а затем полученный раствор охлаждали до 0°C. Затем в реакционный раствор добавляли трифенилфосфин (37,2 г) и диизопропилазодикарбоксилат (28,1 мл), а затем температуру смеси повышали до комнатной температуры с последующим перемешиванием в течение 1 часа. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток затем очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения соответствующей основы для реакции сочетания. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.

[0203]

Полученную основу для реакции сочетания, THF (114 мл) и водный аммиак (114 мл) добавляли в устойчивую к давлению пробирку, а затем полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 14 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, а затем наливали в воду (285 мл). Полученную таким образом смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Затем, осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации, затем промывали водой, а затем сушили для получения интересующего продукта (34,5 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,27 (с, 1H), 7,15 (с, 1H), 5,55-5,73 (м, 2H), 5,12-5,25 (м, 1H), 3,86-4,18 (м, 2H), 3,43-3,57 (м, 1H), 2,59-2,69 (м, 1H), 1,92-2,03 (м, 1H), 1,48 (с, 9H), 1,30-1,40 (м, 3H)

ESI-MS m/z 444 (MH⁺)

[0204] Ссылочный пример 1(2)

4-амино-7-((3R,5S)-1-(трет-бутоксикарбонил)-5-метилпирролидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоновая кислота

Соединение из ссылочного примера 1(1) (28,0 г), 10% углерод-палладиевый катализатор (720 мг), NMP (84 мл), метанол (26 мл) и триэтиламин (17,6 мл) добавляли в устойчивую к давлению пробирку с последующим замещением монооксидом углерода и полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, a затем в нее добавляли 2 M водный раствор гидроксида натрия (79 мл), а затем полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем фильтровали через целит, а затем промывали метанолом. Затем метанол в фильтрате концентрировали при пониженном давлении. Дополнительно добавляли воду, а затем водный слой промывали трет-бутилметиловым простым эфиром. К водному слою добавляли водный раствор 1 M гидросульфата калия для коррекции pH до приблизительно 3. Осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации, затем промывали водой, а затем сушили для получения интересующего продукта (23,4 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ: 8,14 (с, 1H), 8,08 (с, 1H), 5,16-4,93 (м, 1H), 4,07-3,79 (м, 2H), 3,61-3,45 (м, 1H), 2,53 (м, 1H), 2,33-2,02 (м, 1H), 1,42(с, 9H), 1,29 (д, J=6,1 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 362 (MH⁺)

[0205]

<Примеры>

Пример 1(1)

Трет-бутил-4-амино-6-бром-7-((3R,5S)-1-(трет-бутоксикарбонил)-5-метилпирролидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат

В атмосфере азота соединение из ссылочного примера 1(2) (15,0 г) растворяли в хлороформе (150 мл), а затем к указанному выше полученному раствору добавляли 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевину (25 мл). Температуру полученной смеси повышали до 60°C, а затем смесь перемешивали в течение 2 часов. Затем в реакционную смесь дополнительно добавляли 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевину (25 мл), а затем полученную таким образом смесь перемешивали в течение 2 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, а затем концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли трет-бутилметиловый простой эфир и осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации, а затем промывали трет-бутилметиловым простым эфиром. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, а затем к полученному остатку добавляли трет-бутилметиловый простой эфир. Осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации, а затем промывали трет-бутилметиловым простым эфиром. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения трет-бутиловой сложноэфирной формы. Полученное соединение использовали в последующей реакции галогенирования без дополнительной очистки.

[0206] Полученную трет-бутиловую сложноэфирную форму растворяли в хлороформе (140 мл), а затем к указанному выше полученному раствору добавляли N-бромсукцинимид (11,8 г). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем в реакционную смесь последовательно добавляли хлороформ и 10% водный раствор бисульфита натрия, а затем полученную смесь экстрагировали хлороформом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения интересующего продукта (13,8 г).

¹H-ЯМР (CDCl3) δ: 8,02 (с, 1H), 5,74-5,13 (м, 2H), 4,07-3,64 (м, 2H), 2,43-2,29 (м, 1H), 2,07-1,97 (м, 1H), 1,63 (с, 9H), 1,48 (м, 12H)

ESI-MS m/z 496,498 (MH⁺)

[0207] Пример 1(2)

Трет-бутил-7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат

Соединение из примера 1(1) (11,4 г) растворяли в THF (57 мл), а затем полученный раствор охлаждали до 0°C. Затем в смесь добавляли раствор 4 M хлороводорода в 1,4-диоксане (114 мл), а затем полученную таким образом смесь перемешивали при 0°C в течение 10 часов. Затем в реакционную смесь добавляли 5 M водный раствор гидроксида натрия (92 мл), ацетонитрил (57 мл), диизопропилэтиламин (20 мл) и акрилоилхлорид (2,0 мл), а затем полученную смесь перемешивали в течение 30 минут. Затем реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения интересующего продукта (7,72 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,26-8,16 (м, 1H), 6,62-6,30 (м, 2H), 5,81-5,64 (м, 1H), 5,33-5,14 (м, 1H), 4,81-3,75 (м, 3H), 3,07-2,86 (м, 1H), 2,67-2,33 (м, 1H), 1,69-1,61 (м, 9H), 1,60-1,51 (м, 3H)

ESI-MS m/z 450,452 (MH⁺)

[0208] Пример 1(3)

Трет-бутил-7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат

К соединению из примера 1(2) (7,72 г) добавляли раствор 1,0 M пропина в DMF (85,7 мл), ацетонитрил (154 мл), триэтиламин (7,2 мл), PdCl₂(PPh₃)₂ (1,2 г) и йодид меди (I) (330 мг) с последующим замещением азотом. Затем смесь перемешивали при 70°C в течение 4 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и в смесь добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия. Затем, полученную смесь экстрагировали этилацетатом и собранный органический слой промывали водой, а затем насыщенным физиологическим раствором. Полученное сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения интересующего продукта (4,06 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,29-8,17 (м, 1H), 6,63-6,30 (м, 2H), 5,81-5,63 (м, 1H), 5,42-5,15 (м, 1H), 4,66-3,81 (м, 3H), 3,01-2,82 (м, 1H), 2,65-2,32 (м, 1H), 2,92-2,13 (м, 3H), 1,65-1,59 (м, 9H), 1,57-1,49 (м, 3H)

ESI-MS m/z 410 (MH⁺)

[0209] Пример 1(4)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-карбоновая кислота

Соединение из примера 1(3) (1,52 г) растворяли в хлороформе (5 мл), а затем к указанному выше полученному раствору добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, а затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли хлороформ и полученную смесь снова концентрировали при пониженном давлении. Остаток сушили при пониженном давлении для получения интересующего продукта (1,25 г).

ESI-MS m/z 354 (MH⁺)

[0210] Пример 1(5)

7-(R)-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3,5-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К раствор соединения из примера 1(4) (100 мг) в DMF (1,0 мл) добавляли (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амин (89,0 мг), диизопропилэтиламин (0,25 мл) и HATU (215 мг), а затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем в реакционную смесь добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, а затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения титульное соединение (60 мг).

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ: 8,51 (д, J=7,3 Гц, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,25-7,07 (м, 3H), 6,74-6,47 (м, 1H), 6,25-6,08 (м, 1H), 5,78-5,58 (м, 1H), 5,41-5,21 (м, 1H), 5,21-5,06 (м, 1H), 4,45-4,29 (м, 1H), 4,24-3,91 (м, 2H), 2,78-2,58 (м, 1H), 2,52-2,41 (м, 1H), 2,23 (с, 3H), 1,48 (д, J=7,1 Гц, 3H), 1,39(д, J=6,1 Гц,3H)

ESI-MS m/z 493 (MH⁺)

[0211] Пример 2

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали (R)-1-фенилэтан-1-амин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ: 8,35 (д, J=7,8 Гц, 1H), 8,17-8,13 (м, 1H), 7,48-7,23 (м, 5H), 6,76-6,46 (м, 1H), 6,28-6,06 (м, 1H), 5,81-5,58 (м, 1H), 5,43-5,02 (м, 2H), 4,42-4,28 (м, 1H), 4,21-3,96 (м, 2H), 2,74-2,59 (м, 1H), 2,54-2,41 (м, 1H), 2,17 (с, 3H), 1,50 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,42-1,33 (м, 3H)

ESI-MS m/z 457 (MH⁺)

[0212] Пример 3

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-фенилпропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали 2-фенилпропан-2-амин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ: 8,26 (с, 1H), 8,16-8,08 (м, 1H), 7,44 (дд, J=8,8, 1,2 Гц, 2H), 7,38-7,28 (м, 2H), 7,21 (тт, J=7,3, 1,27 Гц, 1H), 6,76-6,50 (м, 1H), 6,25-6,10 (м, 1H), 5,79-5,62 (м, 1H), 5,45-5,19 (м, 1H), 4,45-4,30 (м, 1H), 4,26-4,01 (м, 2H), 2,79-2,42 (м, 2H), 2,29-2,22 (м, 3H), 1,71 (с, 6H), 1,43-1,36 (м, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH⁺)

[0213] Пример 4

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилпропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали (R)-1-фенилпропан-1-амин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ: 8,35 (ш. д., J=8,0 Гц, 1H), 8,17-8,11 (м, 1H), 7,46-7,22 (м, 5H), 6,74-6,50 (м, 1H), 6,26-6,08 (м, 1H), 5,79-5,60 (м, 1H), 5,40-5,21 (м, 1H), 4,99-4,87 (м, 1H), 4,43-4,30 (м, 1H), 4,23-3,94 (м, 2H), 2,76-2,42 (м, 2H), 2,21 (с, 3H) 1,95-1,74 (м, 2H), 1,44-1,34 (м, 3H), 0,91 (т, J=7,3 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH⁺)

[0214] Пример 5

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали 2-(2-фторфенил)пропан-2-амин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl3) δ: 8,28 (с, 1H), 8,11 (д, J=4,4 Гц, 1H), 8,02 (с, 1H), 7,47-7,42 (м, 1H), 7,29-7,23 (м, 1H), 7,15 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,02 (ддд, J=12,5,8,1, 1,1 Гц, 1H), 6,58-6,35 (м, 2H), 5,79-5,70 (м, 1H), 5,30-5,19 (м, 1H), 4,53 (т, J=10,1 Гц, 0,7H), 4,38-4,25 (м, 1,6H), 3,92 (т, J=8,8 Гц, 0,7H), 2,91-2,78 (м, 1H), 2,70-2,60 (м, 0,3H), 2,54-2,43 (м, 0,7H), 2,28 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,88 (дт, J=10,0, 5,0 Гц, 6H), 1,53 (т, J=6,2 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 489 (MH⁺)

[0215] Пример 6

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3-хлорфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали гидрохлорид (R)-(+)-1-(3-хлорфенил)этиламина вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl3) δ: 8,22 (д, J=5,9 Гц, 1H), 7,75(д, J=7,0 Гц, 1H), 7,38 (с, 1H), 7,35-7,27 (м, 3H), 6,58-6,33 (м, 2H), 5,78-5,66 (м, 1H), 5,29-5,19 (м, 2H), 4,56 (т, J=10,3 Гц, 0,7H), 4,39-4,20 (м, 1,6H), 3,89 (т, J=8,8 Гц, 0,7H), 2,94-2,82 (м, 1H), 2,66-2,58 (м, 0,3H), 2,46 (дт, J=14,5, 6,1 Гц, 0,7H), 2,18 (д, J=11,0 Гц, 3H), 1,60 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,55-1,51 (м, 3H)

ESI-MS m/z 491,493 (MH⁺)

[0216] Пример 7

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(2,4-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали гидрохлорид (R)-(+)-1-(2,4-дифторфенил)этиламина вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,20 (д, J=5,9 Гц, 1H), 7,98(д, J=7,7 Гц, 1H), 7,37-7,31 (м, 1H), 6,90-6,81 (м, 2H), 6,58-6,35 (м, 2H), 5,78-5,65 (м, 1H), 5,44-5,37 (м, 1H), 5,30-5,19 (м, 1H), 4,56 (т, J=10,1 Гц, 0,7H), 4,38-4,23 (м, 1,6H), 3,88 (т, J=8,8 Гц, 0,7H), 2,94-2,83 (м, 1H), 2,66-2,57 (м, 0,3H), 2,51-2,42 (м, 0,7H), 2,27 (д, J=9,2 Гц, 3H), 1,61 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,56-1,51 (м, 3H)

ESI-MS m/z 493 (MH⁺)

[0217] Пример 8

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-N-((S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали (S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтан-1-амин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,40 (д, J=8,8 Гц, 1H), 8,16 (с, 1H) 7,44 (с, 5H), 6,58-6,38 (м, 2H), 5,92-5,84 (м, 1H), 5,81-5,69 (м, 1H) 5,29-5,19 (м, 1H), 4,55 (т, J=10,3 Гц, 0,7H), 4,41-4,24 (м, 1,6H), 3,91 (т, J=8,6 Гц, 0,7H), 2,92-2,80 (м, 1H), 2,70-2,61 (м, 0,3H), 2,54-2,46 (м, 0,7H), 2,35 (д, J=8,4 Гц, 3H) 1,54 (т, J=7,3 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 511 (MH⁺)

[0218] Пример 9

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-(2-фенилпропан-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали циклопропилацетилен вместо раствора 1,0 M пропина в DMF в примере 1(3), и что использовали 2-фенилпропан-2-амин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,15 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,44 (д, J=7,7 Гц, 2H), 7,37 (т, J=7,7 Гц, 2H), 7,32-7,27 (м, 1H), 6,66-6,30 (м, 2H), 5,81-5,69 (м, 1H), 5,38-5,24 (м, 1H), 4,48 (т, J=9,9 Гц, 0,7H), 4,42-4,29 (м, 1,6H), 4,22 (т, J=10,4 Гц, 0,7H), 2,77-2,68 (м, 1H), 2,67-2,60 (м, 0,3H), 2,59-2,52 (м, 0,7H), 1,83 (с, 6H), 1,60-1,52 (м, 4H), 1,08-1,01 (м, 2H), 0,92-0,88 (м, 2H)

ESI-MS m/z 497 (MH⁺)

[0219] Пример 10

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-(2,3-дифторфенил)этил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали циклопропилацетилен вместо раствора 1,0 M пропина в DMF в примере 1(3), и что использовали (R)-(+)-1-(2,3-дифторфенил)этиламин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,17 (д, J=4,0 Гц, 1H), 8,04 (д, J=8,1 Гц, 1H), 7,15-7,05 (м, 3H), 6,58-6,36 (м, 2H), 5,80-5,68 (м, 1H), 5,49-5,42 (м, 1H), 5,34-5,24 (м, 1H), 4,52 (т, J=10,1 Гц, 0,7H) 4,37-4,23 (м, 1,6H), 3,92 (т, J=8,8 Гц, 0,7H), 2,86-2,76 (м, 1H) 2,69-2,63 (м, 0,3H), 2,52-2,46 (м, 0,7H), 1,73-1,63 (м, 4H) 1,55 (т, J=5,3 Гц, 3H), 1,14-1,07 (м, 2H), 1,01-0,92 (м, 2H)

ESI-MS m/z 519 (MH⁺)

[0220] Пример 11

Пример 11(1)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-6-бром-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат

Добавляли соединение из ссылочного примера 1(2) (1,00 г), (R)-(+)-1-фенилэтиламин (0,503 г), диизопропилэтиламин (1,79 г) и N, N-диметилформамид (10 мл), а затем добавляли HATU (1,58 г). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем в реакционную смесь добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, а затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали водой, а затем насыщенным физиологическим раствором. Полученное сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения амидной формы (1,53 г). Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.

К амидной форме (1,53 г) добавляли хлороформ (15 мл), а затем полученную смесь охлаждали до 0°C. Затем в реакционную смесь N-бромсукцинимид (0,88 г) добавляли, а затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения интересующего продукта (1,39 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,21 (с, 1H), 7,42-7,28 (м, 5H), 6,97 (д, J=7,3 Гц, 1H), 5,36-5,29 (м, 1H), 5,20-5,07 (м, 1H), 4,30 (т, J=10,3 Гц, 1H), 4,04-3,72 (м, 2H), 3,00-2,86 (м, 1H) 2,38 (дт, J=14,3, 6,0 Гц, 1H), 1,63 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,53-1,43 (м, 12H)

ESI-MS m/z 543,545 (MH⁺)

[0221] Пример 11(2)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению из примера 11(1) (600 мг) добавляли хлороформ (3 мл), а затем полученную смесь охлаждали до 0°C. Затем в реакционную смесь добавляли трифторуксусную кислоту (4,44 г) и полученную таким образом смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, а затем к остатку добавляли ацетонитрил (5 мл). Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении снова для получения аминовой формы. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.

К полученной аминовой форме добавляли ацетонитрил (3 мл), а затем полученную смесь охлаждали до 0°C. Затем добавляли акрилоилхлорид (99,9 мг) и диизопропилэтиламин (713 мг), а затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (этилацетат:метанол) для получения интересующего продукта (281 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,20 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,42-7,36 (м, 4H) 7,32-7,28 (м, 1H), 7,00-6,94 (м, 1H), 6,57-6,33 (м, 2H), 5,76-5,66 (м, 1H), 5,36-5,29 (м, 1H), 5,14-5,08 (м, 1H) 4,71 (т, J=9,9 Гц, 0,7H), 4,42-4,23 (м, 1,6H), 3,83 (т, J=8,6 Гц, 0,7H), 3,03-2,92 (м, 1H), 2,60-2,57 (м, 0,3H), 2,44-2,40 (м, 0,7H), 1,64 (д, J=6,6 Гц, 3H), 1,56 (дд, J=11,7, 6,2 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 497,499 (MH⁺)

[0222] Пример 11(3)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Добавляли соединение из примера 11(2) (65 мг), дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладия (9,2 мг), йодид меди (I) (5,0 мг), циклопропилацетилен (13,0 мг), триэтиламин (39,7 мг) и N, N-диметилформамид (1,3 мл), а затем внутри реакционной системы проводили замещение азотом. Затем смесь перемешивали при 70°C в течение 2,5 часов. Затем в реакционную смесь добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония, а затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали водой, а затем насыщенным физиологическим раствором. Полученное сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (хлороформ:метанол) для получения интересующего продукта (50 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,22 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,82 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,43-7,35 (м, 4H), 7,30 (т, J=6,8 Гц, 1H), 6,58-6,34 (м, 2H), 5,77-5,66 (м, 1H), 5,35-5,20 (м, 2H), 4,54 (т, J=10,1 Гц, 0,7H), 4,35-4,25 (м, 1,6H), 3,88 (т, J=8,8 Гц, 0,7H), 2,90-2,78 (м, 1H), 2,65-2,56 (м, 0,3H), 2,49-2,40 (м, 0,7H), 1,63 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,56-1,45 (м, 4H), 1,03-0,91 (м, 2H), 0,84-0,69 (м, 2H)

ESI-MS m/z 483 (MH⁺)

[0223] Пример 12

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 11, за исключением того, что использовали 3,3-диметил-1-бутин вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,22 (д, J=5,9 Гц, 1H), 7,75 (д, J=7,7 Гц, 1H) 7,38 (дт, J=15,5, 7,1 Гц, 4H), 7,31-7,25 (м, 1H), 6,57-6,34 (м, 2H), 5,77-5,65 (м, 1H), 5,44-5,35 (м, 1H), 5,33-5,15 (м, 1H) 4,63 (т, J=10,1 Гц, 0,7H), 4,40-4,20 (м, 1,6H) 3,89 (т, J=8,8 Гц, 0,7H), 2,90-2,76 (м, 1H), 2,65-2,55 (м, 0,3H), 2,49-2,40 (м, 0,7H), 1,85 (с, 1H), 1,64 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,55 (д, J=5,9 Гц, 3H), 1,26(с,9H)

ESI-MS m/z 499 (MH⁺)

[0224] Пример 13

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 11, за исключением того, что использовали 3-метокси-3-метил-1-бутин вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,17 (с, 1H), 7,61 (д, J=7,7 Гц, 1H), 7,43-7,35 (м, 4H), 7,30 (д, J=7,0 Гц, 1H), 6,57-6,33 (м, 2H), 5,81-5,68 (м, 1H), 5,43-5,33 (м, 1H), 5,29-5,12 (м, 1H) 4,59 (т, J=10,1 Гц, 0,7H), 4,38-4,22 (м, 1,6H), 3,92 (т, J=8,6 Гц, 0,7H) 3,30 (с, 3H), 2,86-2,72 (м, 1H), 2,70-2,60 (м, 1,3H), 2,52-2,44 (м, 0,7H), 1,64 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,55 (т, J=5,5 Гц, 3H), 1,46 (д, J=2,2 Гц, 6H)

ESI-MS m/z 515 (MH+)

[0225] Пример 14

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(бут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 11, за исключением того, что использовали 1-триметилсилил-1-бутин и фторид тетра-n-бутиламмония вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,26-8,25 (м, 1H), 7,79 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,42-7,36 (м, 4H), 7,32-7,30 (м, 1H), 6,57-6,37 (м, 2H), 5,76-5,66 (м, 1H), 5,33-5,20 (м, 2H), 4,57 (т, J=10,3 Гц, 0,7H), 4,36-4,22 (м, 1,6H), 3,88 (т, J=8,8 Гц, 0,7H), 2,92-2,81 (м, 1H) 2,65-2,57 (м, 0,3H), 2,48-2,38 (м, 2,7H), 1,63(д, J=7,0 Гц, 3H) 1,54-1,51 (м, 3H), 1,17-1,12 (м, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH+)

[0226] Пример 15

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(3-метилбут-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 11, за исключением того, что использовали 2-(2-фторфенил)пропан-2-амин вместо (R)-(+)-1-фенилэтиламина в примере 11(1), и что 3 использовали -метил-1-бутин вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,92 (с, 1H), 7,44 (т, J=7,9 Гц, 1H), 7,30-7,23 (м, 1H), 7,14 (т, J=7,5 Гц, 1H), 7,02 (дд, J=12,6, 8,2 Гц, 1H) 6,58-6,35 (м, 2H), 5,80-5,69 (м, 1H), 5,33-5,16 (м, 1H) 4,58 (т, J=9,9 Гц, 0,7H), 4,38-4,23 (м, 1,6H), 3,91 (т, J=8,4 Гц, 0,7H) 3,03-2,93 (м, 1H), 2,89-2,75 (м, 1H), 2,69-2,60 (м, 0,3H), 2,53-2,43 (м, 0,7H), 1,88 (с, 6H), 1,55 (д, J=5,1 Гц, 3H), 1,36 (д, J=6,6 Гц, 6H)

ESI-MS m/z 517 (MH+)

[0227] Пример 16

Пример 16(1)

Трет-бутил-(2R,4S)-4-(бензилокси)-2-((тозилокси)метил)пирролидин-1-карбоксилат

Трет-бутил-(2R,4S)-4-(бензилокси)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилат (2,0 г) растворяли в метиленхлориде (20 мл), а затем полученный раствор охлаждали до 0°C. Затем в реакционный раствор добавляли 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (2,2 г) и тозилат хлорид (1,9 г), а затем температуру смеси повышали до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 4 часов. Затем в реакционную смесь добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, а затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения интересующего продукта (4,32 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,78(д, J=8,1 Гц, 2H), 7,42-7,29 (м, 7H), 4,57-4,41 (м, 2H), 4,39-3,96 (м, 4H), 3,61-3,20 (м, 2H), 2,46 (с, 3H), 2,27-2,02 (м, 2H), 1,48-1,31 (м, 9H)

ESI-MS m/z 462 (MH⁺)

[0228] Пример 16(2)

Трет-бутил-(2S,4S)-4-(бензилокси)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат

В атмосфере азота йодид меди (2,04 г) суспендировали в диэтиловом простом эфире (12 мл), а затем полученный суспензия охлаждали до 0°C. Затем добавляли раствор 1,04 M метиллития в диэтиловом простом эфире (0,36 мл), а затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем в реакционную смесь добавляли раствор соединения из примера 16(1) (1,98 г) в метиленхлориде (4,0 мл), а затем температуру полученной смеси повышали до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 1 часа. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°C, а затем в реакционную смесь добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения интересующего продукта (707 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,42-7,25 (м, 5H), 4,66-4,40 (м, 2H), 4,17-4,03 (м, 1H), 4,00-3,26 (м, 3H), 2,24-2,09 (м, 1H), 1,96-1,71 (м, 2H), 1,48 (с, 9H), 1,45-1,31(м, 1H), 0,86 (т, J=7,4 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 306 (MH⁺)

[0229] Пример 16(3)

Трет-бутил-(2S,4S)-2-этил-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилат

Соединение из примера 16(2) (1,06 г) и 10% катализатор гидроксида палладия на углероде (160 мг) суспендировали в этаноле (11 мл) и THF (11 мл) с последующим замещением водородом, а затем полученное перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Затем реакционную смесь фильтровали через целит, а затем промывали этанолом, а затем фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения интересующего продукта (709 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 4,46-4,36 (м, 1H), 4,02-3,81 (м, 1H), 3,71-3,35 (м, 2H), 2,15-1,99 (м, 1H), 1,95-1,72 (м, 2H), 1,49 (с, 9H), 1,46-1,35 (м, 1H), 0,86 (т, J=7,5 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 216 (MH⁺)

[0230] Пример 16(4)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат

Соединение из примера 16(3) (709 мг) и 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (1,11 г) растворяли в THF (7,1 мл), а затем полученный раствор охлаждали до 0°C. Затем добавляли трифенилфосфин (1,3 г) и диизопропилазодикарбоксилат (1,00 мл), а затем температуру полученной смеси повышали до комнатной температуры с последующим перемешиванием смеси в течение 1 часа. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, а затем полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения соответствующей основы для реакции сочетания. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки. В устойчивую к давлению пробирку добавляли полученную основу для реакции сочетания, THF (5,4 мл) и водный аммиак (5,4 мл), а затем полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 14 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, а затем наливали в воду (12,8 мл), а затем смешанный раствор экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения интересующего продукта (797 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,29 (с, 1H), 7,14 (с, 1H), 5,67 (ш. с., 2H), 5,32-5,09 (м, 1H), 4,24-4,08 (м, 1H), 3,95-3,79 (м, 1H), 3,46 (дд, J=9,3, 11,0 Гц, 1H), 2,70-2,55 (м, 1H), 2,06-1,95 (м, 1H), 1,59-1,51 (м, 2H), 1,49 (с, 9H), 0,91 (т, J=7,5 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 458 (MH⁺)

[0231] Пример 16(5)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-6-бром-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат

Соединение из примера 16(4) (797 мг), дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладия (25 мг) и (R)-(+)-1-фенилэтиламин (0,55 мл) суспендировали в DMF (8,0 мл) с последующим замещением монооксидом углерода, а затем полученное перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем в нее добавляли воду, а затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения соответствующей амидной формы. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки. Полученную амидную форму растворяли в ацетонитриле (8,2 мл), а затем полученный раствор охлаждали до -10°C. Затем в раствор по каплям медленно добавляли раствор N-бромсукцинимида (457 мг) в ацетонитриле (8,2 мл), а затем реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут. Затем в реакционную смесь добавляли водный раствор сульфита натрия и водный раствор гидрокарбоната натрия, а затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения интересующего продукта (650 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,23 (с, 1H), 7,49-7,29 (м, 5H), 6,98 (д, J=7,4 Гц, 1H), 5,41-5,28 (м, 1H), 5,24-5,04 (м, 1H), 4,38-4,22 (м, 1H), 4,07-3,68 (м, 1H), 3,19-2,83 (м, 1H), 2,43-2,29 (м, 1H), 2,25-1,67 (м, 3H), 1,66 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,51 (с, 9H), 0,98 (т, J=7,4 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 557,559 (MH⁺)

[0232] Пример 16(6)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению из примера 16(5) (650 мг) добавляли ацетонитрил (9,7 мл), а затем полученную смесь охлаждали до 0°C. Затем добавляли йодид натрия (1,05 г) и триметилсилилхлорид (0,89 мл), а затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Затем в реакционную смесь последовательно добавляли этанол (9,7 мл), изопропилэтиламин (2,0 мл) и ангидрид акриловой кислоты (0,16 мл), а затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем в реакционную смесь добавляли водный аммиак и воду, а затем полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным физиологическим раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:ацетон) для получения интересующего продукта (256 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,27-8,16 (м, 1H), 7,47-7,29 (м, 5H), 6,98 (д, J=7,3 Гц, 1H), 6,61-6,29 (м, 2H), 5,84-5,63 (м, 1H), 5,43-5,26 (м, 1H), 5,22-5,01 (м, 1H), 4,80-3,82 (м, 3H), 3,23-2,92 (м, 1H), 2,58-2,30 (м, 1H), 2,22-1,79 (м, 2H), 1,66 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,07-0,96 (м, 3H)

ESI-MS m/z 511,513 (MH⁺)

[0233] Пример 16(7)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению из примера 16(6) (120 мг) добавляли раствор 1,0 M пропина в DMF (0,70 мл), ацетонитрил (1,2 мл), триэтиламин (0,10 мл), PdCl₂(PPh₃)₂ (8,2 мг) и йодид меди (I) (0,4 мг) с последующим замещением азотом, а затем смесь перемешивали при 60°C в течение 2 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и в смесь добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом и собранный органический слой промывали водой, а затем насыщенным физиологическим раствором. Полученное сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (этилацетат:метанол) для получения интересующего продукта (102 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,26 (с, 1H), 7,79 (ш.д., J=7,0 Гц, 1H), 7,46-7,30 (м, 5H), 6,58-6,31 (м, 2H), 5,80-5,65 (м, 1H), 5,33-5,15 (м, 2H), 4,59-3,85 (м, 3H), 3,03-2,33 (м, 2H), 2,25-1,70 (м, 5H), 1,65 (д, J=6,8 Гц, 6H), 1,09-0,91 (м, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH⁺)

[0234] Пример 17

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 16, за исключением того, что использовали циклопропилацетилен вместо раствора 1,0 M пропина в DMF в примере 16(7).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,31-8,16 (м, 1H), 7,84 (д, J=7,4 Гц, 1H), 7,46-7,30 (м, 5H), 6,64-6,32 (м, 2H), 5,82-5,67 (м, 1H), 5,39-5,17 (м, 2H), 4,67-3,81 (м, 3H), 3,02-2,80 (м, 1H), 2,62-1,71 (м, 3H), 1,65 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,58-1,47 (м, 1H), 1,06-0,92 (м, 5H), 0,85-0,70 (м, 2H)

ESI-MS m/z 497 (MH⁺)

[0235] Пример 18

7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(метоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 16, за исключением того, что использовали трет-бутил-(2R,4S)-4-гидрокси-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбоксилат вместо соединения из примера 16(3) в примере 16(4), и что использовали циклопропилацетилен вместо раствора 1,0 M пропина в DMF в примере 16(7).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,29-8,22 (м, 1H), 7,86-7,80 (м, 1H), 7,36-7,44 (м, 4H), 7,34-7,28 (м, 1H), 6,48-6,37 (м, 2H), 5,78-5,69 (м, 1H), 5,29-5,15 (м, 2H), 4,55-4,30 (м, 2H), 3,96-3,65 (м, 3H), 3,42 (с, 3H), 3,18-3,06 (м, 0,3H), 2,90-2,80 (м, 0,3H), 2,64-2,58 (м, 0,3H), 2,47-2,35 (м, 0,7H), 1,64 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,58-1,47 (м, 1H), 1,04-0,94 (м, 2H), 0,87-0,69 (м, 2H)

ESI-MS m/z 513 (MH⁺)

[0236] Пример 19

7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(этоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 16, за исключением того, что использовали трет-бутил-(2R,4S)-2-(этоксиметил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксамид вместо соединения из примера 16(3) в примере 16(4), и что использовали циклопропилацетилен вместо раствора 1,0 M пропина в DMF в примере 16(7).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,28-8,18 (м, 1H), 7,84 (ш.д., J=7,0 Гц, 1H), 7,47-7,29 (м, 5H), 6,82-6,35 (м, 2H), 5,79-5,68 (м, 1H), 5,40-5,14 (м, 2H), 4,63-3,53 (м, 7H), 3,20-2,79 (м, 1H), 2,69-2,40 (м, 1H), 1,67-1,63 (м, 3H), 1,59-1,47 (м, 1H), 1,22 (т, J=7,0 Гц, 3H), 1,05-0,92 (м, 2H), 0,87-0,72 (м, 2H)

ESI-MS m/z 527 (MH⁺)

[0237] Сравнительный пример 1

4-амино-N-(4-(метоксиметил)фенил)-7-(1-метилциклопропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали способом, описанным в примере 95 международной публикации № WO 2017/146116.

ESI-MS m/z 390 (MH⁺)

[0238] Сравнительный пример 2

1-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(4-(2-(диметиламино)-2-оксоэтил)-2,3-диметилфенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-карбоксамид

Титульное соединение получали способом, описанным в примере 79 международной публикации № WO 2017/038838.

ESI-MS m/z 505 (MH⁺)

[0239] Сравнительный пример 3

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(циклогексилметил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали циклогексилметанамин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ: 8,68-8,31 (м, 1H), 8,20-8,10 (м, 1H), 8,09-7,97 (м, 1H), 7,59-7,20 (м, 1H), 6,74-6,49 (м, 1H), 6,25-6,09 (м, 1H), 5,78-5,60 (м, 1H), 5,40-5,20 (м, 1H), 4,44-4,29 (м, 1H), 4,23-3,92 (м, 2H), 3,25-3,12 (м, 2H), 2,76-2,40 (м, 2H) 2,25 (с, 3H), 1,81-1,45 (м, 5H), 1,43-1,34 (м, 3H), 1,30-0,90 (м, 6H)

ESI-MS m/z 449 (MH⁺)

[0240] Сравнительный пример 4

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-метилбензил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали o-толилметанамин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ: 8,37-8,27 (м, 1H), 8,19-8,09 (м, 1H), 7,39-7,30 (м, 1H), 7,26-7,11 (м, 4H), 6,68-6,48 (м, 1H), 6,24-6,07 (м, 1H), 5,80-5,60 (м, 1H), 5,36-5,17 (м, 1H), 4,52 (д, J=5,7 Гц, 2H), 4,42-4,28 (м, 1H), 4,22-3,92 (м, 2H), 2,73-2,42 (м, 2H), 2,33 (с, 3H), 2,02 (с, 3H), 1,43-1,32 (м, 3H)

ESI-MS m/z 457 (MH⁺)

[0241] Сравнительный пример 5

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-метил-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Титульное соединение получали аналогично описанному в примере 1, за исключением того, что использовали (R)-N-метил-1-фенилэтан-1-амин вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,23 (д, J=5,9 Гц, 1H), 7,50-7,28 (м, 4H), 7,09-6,88 (м, 1H), 6,57-6,34 (м, 2H), 5,79-5,64 (м, 1H), 5,22 (т, J=9,3 Гц, 1H), 4,48 (т, J=9,7 Гц, 0,6H), 4,39-4,20 (м, 1,9H), 3,90 (т, J=8,6 Гц, 0,5H), 2,85 (с, 4H), 2,66-2,63 (м, 0,4H), 2,51-2,44 (м, 0,6H), 2,07 (с, 2H), 1,66 (д, J=4,8 Гц, 3H) 1,52 (д, J=5,9 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH⁺)

[0242] Сравнительный пример 6

Сравнительный пример 6(1)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат

К соединению из примера 11(1) (230 мг) добавляли раствор 1,0 M пропина в DMF (2,1 мл), ацетонитрил (4,6 мл), триэтиламин (0,29 мл), PdCl₂(PPh₃)₂ (5,9 мг) и йодид меди (I) (1,6 мг) с последующим замещением азотом, а затем полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 1 часа. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, а затем в смесь добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом и собранный органический слой промывали водой, а затем насыщенным физиологическим раствором. Полученное сушили над безводным сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат) для получения интересующего продукта (193 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,23 (с, 1H), 7,79 (д, J=6,8 Гц, 1H), 7,46-7,27 (м, 5H), 5,40-5,17 (м, 2H), 4,28-3,64 (м, 3H), 2,85-2,68 (м, 1H), 2,46-2,36 (м, 1H), 2,15-1,97 (м, 3H), 1,62 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,56-1,32 (м, 12H)

ESI-MS m/z 503 (MH+)

[0243] Сравнительный пример 6(2)

Гидрохлорид 4-амино-7-((3R,5S)-5-метилпирролидин-3-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида

К соединению из сравнительного примера 6(1) (530 мг) добавляли раствор 4 M соляной кислоты в 1,4-диоксане (5 мл), а затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для получения интересующего продукта (420 мг).

ESI-MS m/z 403 (MH⁺)

[0244] Сравнительный пример 6(3)

4-амино-7-((3R,5S)-1-((E)-бут-2-еноил)-5-метилпирролидин-3-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению из сравнительного примера 6(2) (18 мг) добавляли ацетонитрил (0,5 мл), а затем полученную смесь охлаждали до 0°C. Затем в реакционную смесь добавляли акрилоилхлорид (0,004 мл) и диизопропилэтиламин (0,036 мл), а затем полученную таким образом смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, а затем подвергали препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ (вода: ацетонитрил (0,1% муравьиной кислоты)) для получения интересующего продукта (8,7 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,31 (с, 1H) 8,14 (д, J=6,2 Гц, 1H), 7,77 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,39-7,36 (м, 4H), 7,33-7,31 (м, 1H), 7,03-6,90 (м, 1H), 6,06 (дд, J=14,3 Гц, 1H), 5,28-5,17 (м, 2H) 4,48 (т, J=10,1 Гц, 1H), 4,35-4,20 (м, 2H), 3,88 (т, 8,8 Гц, 1H), 2,84-2,76 (м, 1H), 2,64-2,40 (м, 1H), 2,05 (д, J=10,6 Гц, 3H), 1,92 (д, J=6,6 Гц, 1H), 1,85(д, J=7,0 Гц, 2H), 1,62 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,55 (дд, J=9,0, 5,7 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH⁺)

[0245] Соединения, синтезированные в описанных выше примерах и сравнительных примерах, приведены ниже.

[0246]

[Таблица 1] № примера Структурная формула № примера Структурная формула 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19

[0247]

[Таблица 2] № сравнит. примера Структурная формула № сравнит. примера Структурная формула 1 2 3 4 5 6

[0248] Тестовый пример 1. Измерение эффекта ингибирования активности фосфорилирования (in vitro) в отношении EGFR дикого типа и мутантного EGFR

Измерение ингибиторной активности in vitro соединения против EGFR дикого типа и мутантного EGFR передавали на аутсорсинг в Carna Biosciences, Inc. (Kinase Profiling Book, https://www.carnabio.com/japanese/product/search.cgi?mode=profiling).

[0249] В частности, сначала пиримидиновое соединение по изобретению постепенно разводили диметилсульфоксидом (DMSO). Затем белок EGFR, пептид-субстрат (Srctide, конечная концентрация: 1 мкМ), хлорид магния (конечная концентрация: 5 мМ), хлорид марганца (конечная концентрация: 1 мМ), АТФ (конечная концентрация: приблизительно Km каждого EGFR) и раствор пиримидинового соединения по изобретению в DMSO (конечная концентрация DMSO: 1%) добавляли в буфер для киназной реакции (20 мМ HEPES (pH 7,5), 1 мМ дитиотреитол и 0,01% Triton X-100), а затем полученную смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа, таким образом, что осуществляли киназную реакции. В реакционный раствор добавляли терминирующий буфер для прекращения киназной реакции. В конечном итоге, используя LabChip(TM) EZ Reader II (PerkinElmer), разделяли нефосфорилированный пептид-субстрат (S) и фосфорилированный пептид (P) и определяли с помощью микроканального капиллярного электрофореза. Из высот пиков S и P получали степень реакции фосфорилирования, и концентрацию соединения, способную ингибировать реакцию фосфорилирования на 50%, определяли как значение IC₅₀ (нМ). Результаты приведены в следующей таблице.

[0250]

[Таблица 3] Киназы IC₅₀ (нмоль/л) Пример соединения 11 EGFR 0,47 EGFR [d746-750] 0,25 EGFR [d746-750/T790M] 6,8 EGFR [L858R] 0,36 EGFR [T790M/L858R] 6,6 EGFR [D770_N771insNPG] 0,55

[0251] Учитывая описанные выше результаты, обнаружено, что пиримидиновое соединение по изобретению обладает исключительной ингибиторной активностью против EGFR дикого типа и мутантного EGFR.

[0252] Тестовый пример 2. Измерение активности ингибирования роста против EGFR-гиперэкспрессирующей линии клеток и линии клеток, экспрессирующей мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20

Активность ингибирования роста против EGFR-гиперэкспрессирующей линии клеток и линии клеток, экспрессирующей мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20, оценивали с использованием клеток MCF10A_EGFR, клеток MCF10A_EGFR/V769_D770insASV, клеток MCF10A_EGFR/D770_N771insSVD и клеток MCF10A_EGFR/H773_V774insNPH (Fukushima Medical University), где клетки получали посредством встраивания гена EGFR (WT, мутантного D769_N770insASV, мутантного D770_N771insSVD, мутантного H773_V774insNPH) в клетки MDA-MB-468 (ATCC) в качестве EGFR-гиперэкспрессирующей линии клеток рака молочной железы человека, клетки NCI-H1975 (ATCC) в качестве мутантных по L858R и T790M EGFR-положительных клеток рака легких человека и клеток MCF10A в качестве нормальных клеток молочной железы человека.

[0253] Клетки MDA-MB-468 суспендировали в среде Лейбовица L-15, содержащей 10%-ную инактивированную эмбриональную телячью сыворотку. Клетки NCI-H1975 суспендировали в среде RPMI-1640 содержащий 10%-ную инактивированную эмбриональную телячью сыворотку. Клетки MCF10A_EGFR, клетки MCF10A_EGFR/V769_D770insASV, клетки MCF10A_EGFR/D770_N771insSVD или клетки MCF10A_EGFR/H773_V774insNPH суспендировали в среде DMEM/Хэма F-12 (содержащей L-глутамин, феноловый красный, HEPES и пируват натрия), содержащей 10 мкг/мл инсулина, 500 нг/мл гидрокортизона, 5 мкмоль/л форсколина и 5%-ную инактивированную лошадиную сыворотку в терминах их конечных концентраций. Каждую суспензию клеток высевали в каждую лунку 96-луночного плоскодонного планшета так, чтобы количество клеток на лунку составляло 500, а затем культивировали в культуральном сосуде без газообразного диоксида углерода для клеток MDA-MB-468 и в культуральном сосуде, содержащем 5%-ный газообразный диоксид углерода, для других клеток при 37°C в течение 1 дня. Соединение по изобретению подготавливали в концентрации 1 мМ в DMSO,а затем разводили 1/200 средой для получения 5 мкМ раствора. Затем раствор соединения по изобретению в DMSO разводили средой, используемой в суспензии клеток, а затем полученный раствор добавляли в каждую лунку так, чтобы конечная наибольшая концентрация тестируемого соединения составляла 1000 нМ. Полученную смесь дополнительно культивировали в культуральном сосуде без газообразного диоксида углерода для клеток MDA-MB-468 и в культуральном сосуде, содержащем 5%-ный газообразный диоксид углерода, для других клеток при 37°C в течение 3 дней.

[0254] Клетки в начале культивирования (день 0) и после культивирования (день 3) подсчитывали с использованием реагента CellTiter-Glo® 2.0 (Promega Corp.) по инструкциям производителя. Процент ингибирования роста вычисляли по приведенному ниже уравнению для определения 50%-ной ингибирующей концентрации (GI₅₀ (нМ)) тестируемого соединения. Результаты приведены в таблице 4.

[0255] 1) В случае T_{день 3}≥C_{день 0}

Процент роста (%)=(T_{день 3}-C_{день 0})/(C_{день 3}-C_{день 0})×100

T: Интенсивность излучения из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение

C: Интенсивность излучения из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение

день 0: День, в который добавляли тестируемое соединение

день 3: День оценки

[0256] 2) В случае of T_{день 3}<C_{день 0}

Процент роста (%)=(T_{день 3}-C_{день 0})/(C_{день 0})×100

T: Интенсивность излучения из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение

C: Интенсивность излучения из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение

день 0: День, в который добавляли тестируемое соединение

день 3: День оценки

[0257]

[Таблица 4] Ингибиторная активность в отношении роста клеток, значение GI₅₀ (нМ) MDA-MB-468 NCI-H1975 Клетка MCF10A_EGFR (EGFR-WT) Клетка MCF10A_EGFR/V769_D770insASV Клетка MCF10A_EGFR/D770_N771insSVD Клетка MCF10A_EGFR/H773_V774insNPH Пример соединения 2 81 77 55 6,7 8,2 16 Пример соединения 11 99 87 81 7,3 10 18 Пример соединения 12 221 153 206 24 27 50

[0258] Учитывая описанные выше результаты, обнаружено, что группа соединений по настоящему изобретению также обладает исключительной ингибиторной активностью в отношении роста клеток против гиперэкспрессирующей EGFR дикого типа линии клеток, клеток MCF10A_EGFR, экспрессирующих встроенный ген EGFR дикого типа, мутантных по L858R и T790M EGFR-положительных клеток NCI-H1975 и линий клеток, экспрессирующие мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20 (клеток MCF10A_EGFR/V769_D770insASV, клеток MCF10A_EGFR/D770_N771insSVD и клеток MCF10A_EGFR/H773_V774insNPH).

[0259] Тестовый пример 3 Измерение активности ингибирования роста против линии клеток, экспрессирующей мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20

Активность ингибирования роста против мутантного EGFR с инсерцией в экзоне 20 оценивали с использованием клеток H1975-EGFRinsSVD, полученных посредством генетической модификации клеток NCI-H1975 для экспрессии мутантного EGFR D770_N771insSVD и нокаута эндогенного EGFR (T790M/L858R), и клеток LXF 2478 (Charles River Laboratories, Inc.) з полученной из пациента, положительной по V769_D770insASV мутантному EGFR опухоли рака легких человека.

[0260] Клетки H1975-EGFRinsSVD получали посредством встраивания вектора PB-CMV-MCS-EF1-RFP+Puro, кодирующего D770_N771insSVD (insSVD), вместе с вектором, экспрессирующим транспозазу Super PiggyBac, в клетки NCI-H1975 посредством электропорации с использованием набора R Amaxa® Cell Line Nucleofector®, затем селекции клеток с использованием пуромицина (Sigma-Aldrich Co. LLC.), а затем встраивания в него сайт-специфических нуклеаз TALEN XTN® (Transposagen Bio) посредством электропорации с использованием набора R Amaxa® Cell Line Nucleofector® и селекции посредством секвенирования клеток, в которых эндогенный EGFR (T790M/L858R) подвергнут нокауту.

[0261] При оценке ингибиторного эффекта в отношении роста клеток клетки каждой линии суспендировали в среде RPMI-1640. Суспензию клеток высевали в каждую лунку 96-луночного плоскодонного планшета так, чтобы количество клеток на лунку составляло 3000, а затем культивировали в культуральном сосуде, содержащем 5%-ный газообразный диоксид углерода при 37°C в течение 1 дня. Соединение по изобретению или сравнительный пример соединения растворяли в концентрации 1 мМ в DMSO, а затем добавляли в каждую лунку с использованием цифрового диспенсера Tecan D300e (Tecan Trading AG) так, чтобы конечная наибольшая концентрация тестируемого соединения составляла 1000 нМ, и общее соотношение составляло 3. Клетки культивировали в культуральном сосуде, содержащем 5%-ный газообразный диоксид углерода, при 37°C в течение 3 дней. Клетки в начале культивирования (день 0) и после культивирования (день 3) подсчитывали с использованием реагента CellTiter-Glo® 2.0 (Promega Corp.) по инструкциям производителя. Процент ингибирования роста вычисляли по приведенному ниже уравнению для определения 50%-ной ингибирующей концентрации (GI₅₀ (нМ)) тестируемого соединения. Результаты приведены в таблице 5.

[0262] 1) В случае T_{день 3}≥C_{день 0}

Процент роста (%)=(T_{день 3}-C_{день 0})/(C_{день 3}-C_{день 0})×100

T: Интенсивность излучения из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение

C: Интенсивность излучения из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение

день 0: День, в который добавляли тестируемое соединение

день 3: День оценки

[0263] 2) В случае T_{день 3}<C_{день 0}

Процент роста (%)=(T_{день 3}-C_{день 0})/(C_{день 0})×100

T: Интенсивность излучения из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение

C: Интенсивность излучения из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение

день 0: День, в который добавляли тестируемое соединение

день 3: День оценки

[0264]

[Таблица 5] Ингибиторная активность в отношении роста клеток, значение GI_- (нМ) Клетка H1975-EGFRinsSVD Клетка LXF 2478 Пример соединения 1 44 29 Пример соединения 2 9,5 11 Пример соединения 3 77 24 Пример соединения 4 13 15 Пример соединения 5 33 24 Пример соединения 6 29 29 Пример соединения 7 33 33 Пример соединения 8 25 26 Пример соединения 9 65 34 Пример соединения 10 39 40 Пример соединения 11 17 19 Пример соединения 12 52 48 Пример соединения 13 48 46 Пример соединения 14 30 27 Пример соединения 15 101 58 Сравнительный пример 1 >1000 >1000 Сравнительный пример 2 >1000 >1000

[0265] Учитывая описанные выше результаты, обнаружено, что группа соединений по настоящему изобретению также обладает исключительной ингибиторной активностью в отношении роста клеток против линий клеток, экспрессирующих мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20 (H1975-EGFRinsSVD и LXF 2478).

[0266] Тестовый пример 4. Оценка пероральной всасываемости

Соединение по изобретению суспендировали или растворяли в 0,5% водном растворе HPMC и 0,1 Н соляной кислоте и полученную суспензию или раствор вводили перорально мышам BALB/cA (CLEA Japan, Inc.) в дозе 50 мг/кг/сутки. Через 0,5, 1, 2, 4 и 6 часов после завершения перорального введения собирали кровь из лицевой вены для получения плазмы с течением времени. Концентрацию соединения в полученной плазме измеряли посредством LC-MS/MS и оценивали пероральную всасываемость соединения по изобретению.

Результаты приведены в следующей таблице 6.

[0267]

[Таблица 6] № примера AUC 0-6 ч. (мкМ⋅ч.) № примера AUC 0-6 ч. (мкМ⋅ч.) 1 50 2 15 3 24 4 12 5 20 6 17 7 15 8 15 9 51 10 50 11 31 12 36 13 18 14 27 15 34 16 15 17 21 18 15 19 6,1 Сравнит. пример 2 1,5

[0268] Учитывая описанные выше результаты, обнаружено, что соединение по изобретению содержалось в плазме в достаточной концентрации, таким образом, что соединение по изобретению демонстрировало благоприятную пероральную всасываемость. В отличие от него, соединение из сравнительного примера 2 имело пероральную всасываемость в более чем 4 раза ниже, чем у соединения по изобретению.

[0269] Тестовый пример 5. Оценка свойств проникновения в головной мозг

Соединение по изобретению суспендировали или растворяли в 0,5% водном растворе HPMC и 0,1 Н соляной кислоте и полученную суспензию или раствор вводили перорально мышам BALB/cA (CLEA Japan, Inc.) в дозе 50 мг/кг/сутки. Через 0,5 часов после завершения перорального введения собирали кровь из лицевой вены, а затем удаляли целый мозг для получения образцов плазмы и головного мозга. В полученный образец головного мозга добавляли воду в 3-кратном объеме образца головного мозга, а затем полученное гомогенизировали с использованием ультразвукового гомогенизатора для получения гомогената головного мозга. Концентрацию соединения в полученной плазме и гомогенате головного мозга измеряли посредством LC-MS/MS и оценивали свойства проникновения в головной мозг соединения по изобретению по концентрации соединения в головном мозге/плазме.

Результаты приведены в следующей таблице 7.

[0270]

[Таблица 7] № примера Концентрация соединения в плазме (мкМ) Концентрация соединения в головном мозге (мкМ) Значение Kp (концентрация соединения в головном мозге/плазме) 1 9,1 1,4 0,15 2 6,6 1,8 0,27 3 11 1,4 0,13 4 8,3 2,8 0,34 5 15 2,2 0,15 6 7,5 1,3 0,17 7 7,9 1,1 0,14 8 9,9 3,3 0,33 9 13 2,4 0,18 10 13 2,4 0,18 11 12 2,7 0,23 12 11 3,2 0,29 13 13 2,8 0,22 14 9,9 2,1 0,21 15 8,1 1,2 0,15 16 12 4,4 0,35 17 17 6,5 0,39 18 7,7 1,6 0,22 19 4,9 0,7 0,14 Сравнит. пример 2 1,6 0,008 0,005

[0271] Учитывая описанные выше результаты, обнаружено, что соединение по изобретению имело высокую концентрацию соединения в головном мозге/плазме (значение Kp) и, таким образом, демонстрировало благоприятные свойства проникновения в головной мозг. С другой стороны, концентрация соединения из сравнительного примера 2 в головном мозге была в более чем 80 раз ниже, чем у соединения по изобретению.

[0272] Тестовый пример 6. Тест для подтверждения противоопухолевого эффекта (in vivo) на моделях подкожной трансплантации, в которых трансплантировали линию клеток H1975-EGFRinsSVD

Линию клеток H1975-EGFRinsSVD культивировали в среде RPMI-1640 (содержащий 4,5 г/л глюкозы, 10 мМ HEPES и 1 мМ пирувата натрия) (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation), содержащей 10%-ную инактивированную эмбриональную телячью сыворотку (FBS) в инкубаторе при 5% CO₂ и 37°C.

[0273] Клетки H1975-EGFRinsSVD ресуспендировали в концентрации 8×10⁷ клеток/мл в PBS. Суспензию клеток подкожно трансплантировали в количестве 8×10⁶ клеток/0,1 мл в правую часть грудной клетки каждой 6-недельной бестимусной мыши (BALB/cAJcl-nu/nu, CLEA Japan, Inc.) с использованием шприца для туберкулина 1 мл и инъекционной иглы 25G.

[0274] Когда объемы опухолей у бестимусных мышей, имеющих трансплантат опухоли, достигали порядка от 100 до 200 мм³, мышей приписывали к группам, каждая из которых включала 6 животных, посредством случайной стратификации так, чтобы средний объем опухоли был равным среди групп.

[0275] Используемое тестируемое соединение представляло собой соединения из примеров 2, 11 и 12, и в качестве контроля использовали 0,5% водный раствор HPMC. Соединения из примеров 2, 11 и 12 вводили перорально в дозах 25 мг/кг/сутки, 25 мг/кг/сутки и 50 мг/кг/сутки, соответственно.

[0276] Каждое тестируемое соединение или контроль вводили перорально ежедневно в течение 14 дней (дни 1-14) со дня после группирования.

[0277] Для сравнения преобразования роста опухоли с течением времени посредством введения каждого тестируемого соединения измеряли объем опухоли (также обозначаемый как "TV" ниже) с частотой дважды в неделю с течением времени. Для измерения массы тела использовали электронные весы для животных. A процент изменения массы тела также обозначают как "BWC" below. A процент изменения массы тела в n-ый день (BWCn) вычисляли из массы тела в n-ый день (BWn) по приведенному ниже уравнению. Преобразование средних значений TV и BWC индивидуумов показано на фигурах 1 и 2.

[0278] BWCn (%)=((масса тела в n-ый день)-(масса тела в день группирования)]/[(масса тела в день группирования)×100

[0279] Если среднее значение TV в группе, которой вводили соединение, в день конечной оценки (день 15) было ниже, чем в контрольных группах, и демонстрировало статистически значимое различие (критерий Даннета для множественных сравнений), это соединение считали эффективным (P<0,001), и оно указано символом "*" на чертеже. Результаты показаны на фигуре 1.

[0280] В результате проведения анализа с помощью критерия Даннета для множественных сравнений было показано, что объем опухоли являлся статистически значимо низким (P<0,001) для всех соединений по настоящему изобретению по сравнению с контрольной группой. Учитывая результаты этого теста, обнаружено, что соединения из примеров 2, 11 и 12 обладают исключительными противоопухолевыми эффектами против линии клеток, экспрессирующей мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20 (H1975-EGFRinsSVD), трансплантированной в грудную клетку бестимусных мышей. Кроме того, не наблюдали снижения массы тела на 20% или более у всех мышей, которым вводили каждое соединение.

[0281] Тестовый пример 7 Тест для подтверждения противоопухолевого эффекта (in vivo) на моделях прямой трансплантации в головной мозг, в которых напрямую трансплантировали линию клеток, экспрессирующую мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20 с встроенным геном люциферазы (H1975-EGFRinsSVD-Luc)

Противоопухолевые эффекты и эффекты увеличения продолжительности жизни соединения по изобретению на моделях прямой трансплантации в головной мозг оценивали с использованием линии H1975-EGFRinsSVD-Luc, полученной посредством встраивания люциферазы в линию клеток H1975-EGFRinsSVD, в которую встроен мутантный EGFR человека.

[0282] Используемые клетки H1975-EGFRinsSVD-Luc получали посредством встраивания вектора pJTI® FAST DEST, кодирующего люциферазу, вместе с экспрессирующим интегразу PhiC31 вектором pJTI® в клетки NCI-H1975-EGFRinsSVD посредством электропорации с использованием набора R Amaxa® Cell Line Nucleofector® с последующей селекцией с использованием гигромицина B (Nacalai Tesque, Inc.).

[0283] Линию клеток H1975-EGFRinsSVD-Luc культивировали в среде RPMI-1640 (содержащей 4,5 г/л глюкозы, 10 мМ HEPES и 1 мМ пирувата натрия) (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation), содержащей 10%-ную инактивированную эмбриональную телячью сыворотку (FBS), в инкубаторе при 5% CO₂ и 37°C.

[0284] Клетки H1975-EGFRinsSVD-Luc ресуспендировали в концентрации 12,5×10⁷ клеток/мл в PBS.

[0285] Используя ушной фиксатор для мышей, a бестимусную мышь возрастом от 6 до 7 недель (BALB/cAJcl-nu/nu, CLEA Japan, Inc.) фиксировали в стереотаксическом аппарате для головного мозга, и кожу на макушке головы дезинфицировали посредством нанесения содержащего изодин антисептического раствора стерильным ватным тампоном, а затем иссекали хирургическим ножом.

[0286] Для получения отверстия в черепе использовали микросверло, а затем, используя иглу, манипулятор и шприцевой насос, 2 мкл суспензии клеток трансплантировали в головной мозг со скоростью 0,8 мкл/мин.

[0287] В качестве референса количества материала опухоли головного мозга через 26 дней после трансплантации измеряли общий поток (фотонов/сек) во всех выживших случаях с использованием IVIS (PerkinElmer, Inc., модель: Lumina II). Учитывая полученные результаты, 10 животных приписывали в каждую группу посредством случайной стратификации ак, чтобы средний общий поток был равным среди групп.

[0288] Используемое тестируемое соединение являлось соединением из примера 11, и в качестве контроля использовали 0,5% водный раствор HPMC. Соединение из примера 11 вводили в дозе 12,5 мг/кг/сутки или 25 мг/кг/сутки.

[0289] Соединение по изобретению или контроль вводили перорально раз в сутки, каждый день в течение 38 дней (дни 27-64) со следующего дня после группирования.

[0290] Для оценки наличия или отсутствия противоопухолевых эффектов использовали значение (Log10), полученное посредством логарифмического преобразования общего потока в день оценки противоопухолевого эффекта (день 47) после 3-недельного введения лекарственного средства со следующего дня (день 27) после группирования.

[0291] Строили график с использованием значения, полученного с помощью среднего общего потока каждой группы в качестве вертикальной оси и количества дней (день) после трансплантации в качестве горизонтальной оси. Наблюдали преобразование общего потока с течением времени в период введения лекарственного средства.

[0292] Для оценки наличия или отсутствия o эффектов увеличения продолжительности жизни количество дней выживания в конечный день оценки эффекта увеличения продолжительности жизни от момента после трансплантации клеток (дни 0-65) в группе тестируемого соединения по сравнению с контрольной группой анализировали с помощью логарифмического рангового критерия.

[0293] Результаты показаны на фигурах 3 и 4 ниже. Значение, полученное посредством логарифмического преобразования (Log10) общего потока в день 47 в каждой группе, анализировали с помощью критерия Даннета для множественных сравнений. В результате было показано, что указанное выше значение в группе тестируемого соединения было статистически значимо ниже значения в контрольной группе (уровень значимости (двухсторонний): 5%) (P<0,001). Учитывая результаты этого теста, обнаружено, что соединение по изобретению имеет противоопухолевые эффекты против линии клеток, экспрессирующей мутантный EGFR с инсерцией в экзоне 20 (H1975-EGFRinsSVD-Luc), трансплантированной в головной мозг бестимусной мыши.

[0294] Кроме того, количество дней выживания в конечный день оценки эффекта увеличения продолжительности жизни от момента после трансплантации клеток (дни 0-65) в группе тестируемого соединения по сравнению с контрольной группой анализировали с помощью логарифмического рангового критерия. В результате, наблюдали статистически значимые эффекты увеличения продолжительности жизни по сравнению с контрольной группой (P<0,05).

[0295] Как описано выше, соединение по изобретению или его соль имеет EGFR-ингибиторную активность и свойства проникновения в головной мозг и, в связи с этим, его можно использовать в качестве ингибитора EGFR или терапевтического средства для EGFR-положительной опухоли.

Изобретение относится к применению соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в лечении заболевания, ассоциированного с EGFR, где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу; R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу; R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей; R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора. Изобретение также относится к способу лечения EGPR-опосредованных заболеваний, в особенности EGPR-положительной опухоли на основе соединения формулы (I). Изобретение обеспечивает лечение EGPR-опосредованных заболеваний и может найти применение в медицине. 6 н. и 24 з.п. ф-лы, 4 ил., 7 табл., 19 пр.

1. Применение соединения, представленного следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в лечении заболевания, ассоциированного с EGFR:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

2. Применение соединения, представленного следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для производства терапевтического средства для применения в лечении заболевания, ассоциированного с EGFR:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

3. Применение соединения, представленного следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в лечении EGFR-положительной опухоли:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

4. Применение соединения, представленного следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для производства терапевтического средства для применения в лечении EGFR-положительной опухоли:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

5. Применение по любому из пп. 1-4, где пиримидиновое соединение представляет собой соединение, представленное следующей формулой (II):

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₂ является C1-C6-алкильной группой, необязательно имеющей от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп в качестве заместителей.

7. Применение по любому из пп. 1-6, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₃ является C1-C4-алкильной группой, необязательно имеющей от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей.

8. Применение по любому из пп. 1-7, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₅ является фенильной группой, необязательно имеющей 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

9. Применение по любому из пп. 1-8, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₁ является метильной группой, трет-бутильной группой или циклопропильной группой.

10. Применение по любому из пп. 1-9, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₂ является метильной группой, этильной группой, метоксиметильной группой или этоксиметильной группой.

11. Применение по любому из пп. 1-10, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₃ является метильной группой.

12. Применение по любому из пп. 1-11, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₄ является атомом водорода.

13. Применение по любому из пп. 1-12, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₅ является фенильной группой.

14. Применение по любому из пп. 1-13, где пиримидиновое соединение является соединением, выбранным из следующего (1)-(3):

(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида,

(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида и

(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида.

15. Применение по любому из пп. 1-14, где пиримидиновое соединение является 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамидом.

16. Применение по любому из пп. 1, 2, 5-15, где заболевание, ассоциированное с EGFR, является злокачественной опухолью, имеющей гиперэкспрессию EGFR, амплификацию гена EGFR или мутацию EGFR.

17. Способ лечения заболевания, ассоциированного с EGFR, включающий введение эффективного количества соединения, представленного следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

18. Способ лечения EGFR-положительной опухоли, включающий введение эффективного количества соединения, представленного следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом индивидууму:

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

19. Способ по п. 17 или 18, где пиримидиновое соединение представляет собой соединение, представленное следующей формулой (II):

где R₁ представляет собой C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую C1-C4-алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4-циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителей, или C1-C6-алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу, необязательно имеющую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей;

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4-алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно имеющую от 1 до 3 заместителей, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

20. Способ по любому из пп. 17-19, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₂ является C1-C6-алкильной группой, необязательно имеющей от 1 до 5 C1-C4-алкоксигрупп в качестве заместителей.

21. Способ по любому из пп. 17-20, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₃ является C1-C4-алкильной группой, необязательно имеющей от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителей.

22. Способ по любому из пп. 17-21, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₅ является фенильной группой, необязательно имеющей 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

23. Способ по любому из пп. 17-22, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₁ является метильной группой, трет-бутильной группой или циклопропильной группой.

24. Способ по любому из пп. 17-23, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₂ является метильной группой, этильной группой, метоксиметильной группой или этоксиметильной группой.

25. Способ по любому из пп. 17-24, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₃ является метильной группой.

26. Способ по любому из пп. 17-25, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₄ является атомом водорода.

27. Способ по любому из пп. 17-26, где пиримидиновое соединение является соединением, представленным формулой (I) или (II), где

R₅ является фенильной группой.

28. Способ по любому из пп. 17-27, где пиримидиновое соединение является соединением, выбранным из следующего (1)-(3):

(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида,

(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида и

(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида.

29. Способ по любому из пп. 17-28, где пиримидиновое соединение является 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамидом.

30. Способ по любому из пп. 17, 19-29, где заболевание, ассоциированное с EGFR, является злокачественной опухолью, имеющей гиперэкспрессию EGFR, амплификацию гена EGFR или мутацию EGFR.