НОВОЕ ПИРИМИДИНОВОЕ ПРОИЗВОДНОЕ, ОБЛАДАЮЩЕЕ ЭФФЕКТОМ ИНГИБИРОВАНИЯ РОСТА РАКОВЫХ КЛЕТОК, И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 2021 года по МПК C07D403/14 C07D401/14 A61K31/506 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новому пиримидиновому производному, которое эффективно ингибирует рост раковых клеток, и к фармацевтической композиции, содержащей такое производное.

Предпосылки создания изобретения

Было обнаружено, что активирующие мутации в киназной области рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) являются карциногенными генами у некоторых пациентов с немелкоклеточным раком легкого, и гефитиниб, эрлотиниб и т.п. используют в качестве терапевтических средств, т.е. низкомолекулярных ингибиторов киназы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), для их лечения (Science 2004, 304: 1497-500; и New England Journal of Medicine 2004, 350: 2129-39).

Применение гефитиниба и эрлотиниба в качестве терапевтических средств для пациентов с немелкоклеточным раком легкого с идентифицированными EGFR активирующими мутациями приводит к лекарственной резистентности у большинства пациентов в течение одного года (Clinical Cancer Research 2013, 19: 2240-7). Среди этих механизмов резистентности наблюдаемая частота мутации T790M рецептора эпидермального фактора роста составляла до 60%. Поэтому, был разработан ингибитор EGFR третьего поколения, который направленно действует на имеющий мутацию T790M рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) при раке легкого.

Однако сообщалось о резистентности к лекарственным средствам-ингибиторам EGFR третьего поколения, и мутация C797S, MET-амплификация и т.п. указывались как основные механизмы резистентности (J Hematol Oncol. 2016, Jul 22, 9(1): 59; Nature Medicine 2015, 21: 560-562; Lung Cancer 2018, 118: 105-110; и ASCO 2017, abstract 2572, 9020). Мутация C797S и MET-амплификация, как сообщалось, присутствуют по отдельности, но иногда одновременно (https://www.chi-med.com/wp-content/uploads/2017/06/pre170603-met-amp-resistance.pdf).

Соединения, описанные в литературе, которые ингибируют C797S, являются следующими:

Ken Uchibori et al. сообщали, что бригатиниб показал активности при раке с мутацией C797S (nature communications, 13 March 2017). Однако, как сообщалось, это соединение не обладает никакой активностью в отношении MET (Lung Cancer: Targets and Therapy 2017, 8: 169-177).

Yong Jia et al. сообщали об аллостерическом ингибиторе, который демонстрирует активность на L858R-T790M-C797S-экспрессирующей раковой клеточной линии. Однако не сообщалось, является ли это соединение активным на экспрессирующей Del19-T790M-C797S раковой клеточной линии, а также не сообщалось, о является ли это соединение активным в отношении MET (Nature 2016 Vol. 534, 129-132).

Kwang-Ho Lee et al. сообщали о TRE-069, демонстрирующем активность в отношении T790M/C797S-мутантной киназы. Однако не сообщалось, может ли это соединение эффективно ингибировать рост раковых клеток с мутацией T790M/C797S, а также не сообщалось, является ли это соединение активным в отношении MET (Bull. Korean Chem. Soc. 2017, Vol. 38, 1353-1357).

Поэтому существует необходимость в разработке лекарственных средств, которые эффективно ингибируют рост резистентных раковых клеток с мутацией C797S рецептора эпидермального фактора роста (C797S EGFR) и MET-амплификацией, которые являются основными механизмами резистентности к нацеленным на EGFR противораковым средствам третьего поколения, как описано выше.

Документ предшествующего уровня техники

Патентный документ

Международная публикация PCT № WO2009/143389 A1

Сущность изобретения

Техническая задача

Авторы настоящего изобретения искали новое соединение, которое эффективно ингибирует раковые заболевания с мутацией C797S EGFR и MET-амплификацией, которые являются основными механизмами резистентности к нацеленным на EGFR противораковым средствам третьего поколения. В результате было обнаружено, что новое пиримидиновое производное является эффективным для лечения рака. При этом было обнаружено, что новое пиримидиновое производное демонстрирует отличные эффекты в лечении рака легкого.

Поэтому целью настоящего изобретения является предоставление нового пиримидинового производного, которое эффективно для лечения рака.

Кроме того, другой целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции для лечения рака легкого, содержащей пиримидиновое производное.

Кроме того, еще одной целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции для лечения рака легкого с экспрессией C797S-мутантного EGFR и MET-амплификацией, которые являются основными механизмами резистентности к нацеленным на EGFR противораковым средствам третьего поколения, среди раковых заболеваний легких.

Техническое решение

Для достижения указанных выше целей настоящее изобретение предоставляет соединение, представленное следующей химической формулой 1, или его соль:

[Химическая формула 1]

где,

X и Y каждый независимо представляет собой углерод или азот,

Z представляет собой кислород или C1 - C4 алкильную группу,

R₁ представляет собой C1 - C4 алкильную группу, C3 - C6 циклоалкильную группу, CF₃ или диметиламиногруппу,

R₂ представляет собой C1 - C4 алкильную группу,

R₃ представляет собой водород или галогеновую группу,

R₄ представляет собой водород, галогеновую группу, CN, CF₃, C1 - C4 алкильную группу или аминокарбонильную группу,

R₅ представляет собой водород или C1 - C4 алкильную группу,

R₆ представляет собой C1 - C4 алкильную группу,

R₇ представляет собой водород, аминогруппу, замещенную одной или более C1 - C4 алкильными группами, или пиперазинильную группу, незамещенную или замещенную одной или более C1 - C4 алкильными группами,

когда Z представляет собой кислород, Z образует двойную связь с S, который образует простую связь с N, или, когда Z представляет собой C1 - C4 алкильную группу, Z образует простую связь с S, который образует двойную связь с N, и

R₄ и R₅ также могут быть связаны с образованием пиррола, имидазола или тиофена.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет соединение, представленное химической формулой 1, или его соль, которое используют для лечения рака легкого.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для лечения рака легкого, содержащую соединение, представленное химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет способ лечения животного, страдающего раком легкого, включающий введение животному эффективного количества соединения, представленного химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли.

Полезные эффекты

Новое соединение, представляющее собой пиримидиновое производное по настоящему изобретению, обеспечивает отличные эффекты в лечении рака.

Кроме того, фармацевтическая композиция для лечения рака легкого, содержащая пиримидиновое производное по настоящему изобретению, обеспечивает отличные активности в лечении рака легкого и, в частности, эффективно ингибирует рост раковых клеток с мутацией C797S EGFR и амплификацией MET, вызванный основной резистентностью к EGFR противораковым средствам третьего поколения.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает ингибирующий фосфорилирование эффект соединений Примеров 1 и 18 на C797S-экспрессирующую раковую клеточную линию, который определяли в Экспериментальном примере 1.

Лучший способ осуществления

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на варианты осуществления. Однако настоящее изобретение не ограничивается вариантами осуществления, которые представлены в качестве примера, и настоящее изобретение определяется только объемом прилагаемой формулы изобретения. Кроме того, даже если необходима структура для осуществления настоящего изобретения, подробное описание структуры, которую можно легко осуществить, будет опущено.

Если ниже не указано иное, термин “соединение по настоящему изобретению” или “соединение химической формулы 1” используется в качестве понятия, включающего как само соединение, так и его соль.

В контексте настоящей заявки термин “алкильная группа” относится к прямой и разветвленной углеводородной группе, имеющей указанное число атомов углерода. Алкильная группа может представлять собой, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил и т.п.

В контексте настоящей заявки термин "алкилсульфонил" относится к группе алкил-S(O₂)-. Где алкил имеет значение, определенное выше.

Настоящее изобретение относится к соединению, представленному следующей химической формулой 1, или его соли:

[Химическая формула 1]

где,

X и Y каждый независимо представляет собой углерод или азот,

Z представляет собой кислород или C1 - C4 алкильную группу,

R₁ представляет собой C1 - C4 алкильную группу, C3 - C6 циклоалкильную группу, CF₃ или диметиламиногруппу,

R₂ представляет собой C1 - C4 алкильную группу,

R₃ представляет собой водород или галогеновую группу,

R₄ представляет собой водород, галогеновую группу, CN, CF₃, C1 - C4 алкильную группу или аминокарбонильную группу,

R₅ представляет собой водород или C1 - C4 алкильную группу,

R₆ представляет собой C1 - C4 алкильную группу,

R₇ представляет собой водород, аминогруппу, замещенную одной или более C1 - C4 алкильными группами, или пиперазинильную группу, незамещенную или замещенную одной или более C1 - C4 алкильными группами,

когда Z представляет собой кислород, Z образует двойную связь с S, который образует простую связь с N, или когда Z представляет собой C1 - C4 алкильную группу, Z образует простую связь с S, который образует двойную связь с N, и

R₄ и R₅ также могут быть связаны с образованием пиррола, имидазола или тиофена.

Соединение, представленное химической формулой 1, может включать следующие соединения:

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-2-метоксифенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

амид N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N,P,P-триметилфосфоновой кислоты;

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-7H-пурин-6-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-5-метилпиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-циано-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-5-(трифторметил)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-4-((2-(N-метилметилсульфонамидо)фенил)амино)пиримидин-5-карбоксиламид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилэтансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилпропан-2-сульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилциклопропансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-1,1,1-трифтор-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метил(-N',N'-диметил)сульфонамид;

((2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)имино)диметил-λ⁶-сульфанон;

N-(2-((5-циано-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(пиперидин-4-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид; и

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-7H-пирролo[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид.

Более предпочтительно, соединение, представленное химической формулой 1, и его соль может представлять собой соединение химической формулы 1 или его соль, где:

X представляет собой азот,

Y представляет собой углерод

Z представляет собой кислород,

R₁ представляет собой C1 - C4 алкильную группу,

R₂ представляет собой C1 - C4 алкильную группу,

R₃ представляет собой водород или галогеновую группу,

R₄ представляет собой галогеновую группу,

R₅ представляет собой водород,

R₆ представляет собой C1 - C4 алкильную группу,

R₇ представляет собой аминогруппу, замещенную одной или более C1 - C4 алкильными группами, или пиперазинильную группу, незамещенную или замещенную одной или более C1 - C4 алкильными группами.

Еще более предпочтительно, соединение, представленное химической формулой 1, и его соль могут быть выбраны из следующих соединений:

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамид; и

N-(2-((5-хлор-2-((4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-2-метоксифенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид.

Соединение, представленное химической формулой 1, и его соль в соответствии с настоящим изобретением можно использовать для лечения рака. Конкретно, их можно эффективно использовать для лечения рака легкого и их можно эффективно использовать для лечения рака легкого, имеющего резистентные раковые клетки с мутацией C797S рецептора эпидермального фактора роста (C797S EGFR) и амплификацией MET, которые являются основными механизмами резистентности к нацеленным на EGFR противораковым средствам третьего поколения, среди раковых заболеваний легких.

В настоящем изобретении соединение, представленное химической формулой 1, может быть использовано в форме соли, образованной из неорганической кислоты или органической кислоты, и, например, может быть в форме соли, образованной из одной или более кислот, выбранных из группы, состоящей из хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты, уксусной кислоты, гликолевой кислоты, молочной кислоты, пировиноградной кислоты, малоновой кислоты, янтарной кислоты, глутаровой кислоты, фумаровой кислоты, яблочной кислоты, миндальной кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, аскорбиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, малеиновой кислоты, бензойной кислоты, гидроксибензойной кислоты, фенилуксусной кислоты, коричной кислоты, салициловой кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты и т.п.

Кроме того, настоящее изобретение относится к соединению, представленному химической формулой 1, или его соли, которое используют для лечения рака легкого.

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения рака легкого, содержащей соединение, представленное химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения животного, страдающего раком легкого, включающему введение животному эффективного количества соединения, представленного химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли.

Животное может представлять собой человека, и рак легкого может представлять собой рак легкого, имеющий резистентные раковые клетки с мутацией C797S рецептора эпидермального фактора роста (C797S EGFR) и амплификацией MET.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть сформулирована в соответствии с общепринятыми способами и может быть получена в различных пероральных лекарственных формах, таких как таблетки, пилюли, порошки, капсулы, сиропы, эмульсии, микроэмульсии и т.п., или в парентеральных лекарственных формах, таких как как формы для внутривенной инфузии, подкожной инфузии, внутримышечной инфузии, интраперитонеальной инфузии, трансдермальной инфузии и непосредственной инфузии в ткань.

Когда фармацевтическую композицию по настоящему изобретению получают в форме пероральной композиции, ингредиенты, известные в данной области техники, можно использовать без ограничения в качестве фармацевтически приемлемого носителя, при условии, что они не препятствуют проявлению активности активного ингредиента.

Носитель может включать, например, эксципиенты, разбавители, разрыхлители, связующие, глиданты, поверхностно-активные вещества, эмульгаторы, суспендирующие агенты, разбавители и т.п., но не ограничивается этим.

Когда фармацевтическую композицию по настоящему изобретению получают в форме инъекции, ингредиенты, известные в данной области техники, можно использовать без ограничения в качестве фармацевтически приемлемого носителя, при условии, что они не препятствуют проявлению активности активного ингредиента

В частности, носитель может включать, например, воду, физиологический раствор, водный раствор глюкозы, водный раствор псевдосахара, спирт, гликоль, простой эфир (например, полиэтиленгликоль 400), масло, жирную кислоту, эфир жирной кислоты, глицерид, поверхностно-активное вещество, суспендирующий агент, эмульгатор и т.п., но не ограничивается этим.

Дозировку фармацевтической композиции по настоящему изобретению предпочтительно определяют с учетом возраста, пола и состояния пациента, степени абсорбции активного ингредиента в организме, скорости инактивации и лекарственного средства, которое должно использоваться в комбинации, и она может составлять от 0,0001 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела в расчете на соединение химической формулы 1.

Способ осуществления изобретения

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно посредством примеров. Специалистам в данной области техники должно быть понятно, что эти примеры представлены только для более подробной иллюстрации настоящего изобретения, и объем настоящего изобретения не ограничивается этими примерами, в соответствии с сутью настоящего изобретения.

(1) Способ синтеза соединения, представленного химической формулой 1

Соединение, представленное химической формулой 1, в соответствии с настоящим изобретением легко может быть получено, например, в соответствии со способом, показанным на следующей Схеме реакций 1:

[Схема реакций 1]

Пример синтеза: Синтез N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

1-1. Получение N-метил-N-(2-нитрофенил)метансульфонамида

В соответствии с представленной выше Схемой реакций 1, 1-фтор-2-нитробензол (3 г, 21,262 ммоль) структуры 5 растворяли в ацетонитриле (150 мл) и добавляли карбонат цезия (10,4 г, 31,892 ммоль) и N-метилметансульфонамид при комнатной температуре. Затем смесь перемешивали при 80°C в течение 12 часов. После завершения реакции реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, а затем фильтрат упаривали при пониженном давлении с получением N-метил-N-(2-нитрофенил)метансульфонамида (соединение 4). Полученное соединение использовали в следующей реакции без специального способа разделения.

1-2. Получение N-(2-аминофенил)-N-метилметансульфонамида

N-метил-N-(2-нитрофенил)метансульфонамид (4,5 г, 19,545 ммоль) растворяли в метаноле (100 мл) и дихлорметане (50 мл) и добавляли 10% палладий на углероде (0,416 г, 3,909 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 часов в атмосфере водорода. После завершения реакции реакционный раствор фильтровали через целит. Фильтрат упаривали при пониженном давлении и затем отверждали этиловым эфиром и н-пентаном, затем фильтровали с получением N-(2-аминофенил)-N-метилметансульфонамида (соединение 3). Полученное соединение использовали в следующей реакции без специального способа разделения.

1-3. Получение N-(2-((2,5-дихлорпиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

N-(2-аминофенил)-N-метилметансульфонамид (8,3 г, 41,446 ммоль), полученный выше, растворяли в изопропиловом спирте (200 мл) и добавляли 2,4,5-трихлорпиримидин (12,163 г, 66,314 ммоль) и N, N-диизопропилэтиламин (21,428 г, 166 ммоль) при комнатной температуре. Когда реакция прекращалась, после перемешивания при 90°C в течение 12 часов, реакционный раствор упаривали при пониженном давлении и экстрагировали водой и дихлорметаном. Органический слой промывали 2N раствором хлористоводородной кислоты и упаривали при пониженном давлении с получением N-(2-((2,5-дихлорпиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида (соединение 2). Полученное соединение использовали в следующей реакции без специального способа разделения.

1-4. Получение 1-(1-(3-метокси-4-нитрофенил)пиперидин-4-ил)-4-метилпиперазина

4-фтор-2-метокси-1-нитробензол (5 г, 29,218 ммоль) структуры 8 на Схеме реакций 1 выше растворяли в ацетонитриле (100 мл) и добавляли карбонат калия (8,076 г, 58,435 ммоль) и пиперазиновое промежуточное соединение (5,4 г, 29,218 ммоль) при комнатной температуре. Когда реакция прекращалась, после перемешивания при 90°C в течение 12 часов, температуру понижали до комнатной температуры и реакционный раствор фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с получением 1-(1-(3-метокси-4-нитрофенил)пиперидин-4-ил)-4-метилпиперазина (соединение 7). Полученное соединение использовали в следующей реакции без специального способа разделения.

1-5. Получение 2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)анилина

1-(1-(3-Метокси-4-нитрофенил)пиперидин-4-ил)-4-метилпиперазин (8,4 г, 25,118 ммоль), полученный выше, растворяли в смешанном растворителе, состоящем из метанола (250 мл) и дихлорметана (50 мл), и добавляли 10% палладий на углероде (0,802 г, 7,353 ммоль). Когда реакция прекращалась, после перемешивания в течение 2 часов в атмосфере водорода, реакционный раствор фильтровали через целит. Фильтрат упаривали при пониженном давлении, а затем отверждали н-гексаном с получением 2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)анилина (соединение 6). Полученное соединение использовали в следующей реакции без специального способа разделения.

1-6. Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

N-(2-((2,5-дихлорпиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид (11 г, 31,681 ммоль), полученный выше, растворяли в изопропиловом спирте (150 мл) и добавляли 2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)анилин (7,0 г, 23,127 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (6,0 г, 31,681 ммоль) при комнатной температуре. Когда реакция прекращалась, после перемешивания при 90°C в течение 12 часов, реакционный раствор упаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и экстрагировали водой и смешанным раствором 10% метанола/дихлорметан. Отделенный органический слой упаривали при пониженном давлении и подвергали колоночной хроматографии с получением N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида (соединение 1). (5-10% аммиака/метиловый спирт/дихлорметан)

(2) Способ синтеза N-метилалкилсульфонамида

К 2M метиламина (2,6 экв.), растворенного в тетрагидрофуране, медленно добавляли сульфонилхлорид (1,0 экв.) при 0°C. Температуру повышали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 часов при этой температуре. После завершения реакции реакционный раствор упаривали при пониженном давлении и экстрагировали 2N раствором хлористоводородной кислоты и MC. Отделенный органический слой упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения.

(3) Способ получения конечных соединений

<Способ 1>

Пиримидиновое производное (1,37 экв.) растворяли в изопропиловом спирте и добавляли анилиновое производное (1,0 экв.) и пара-толуолсульфоновую кислоту (1,37 экв.) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 90°C в течение 12 часов. После завершения реакции реакционный раствор упаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и экстрагировали водой и смешанным раствором 10% метанола/дихлорметан. Отделенный органический слой упаривали при пониженном давлении и подвергали колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (5-10% аммиака/метиловый спирт/дихлорметан).

<Способ 2>

Пиримидиновое производное (1,0 экв.) растворяли в 1,4-диоксане и добавляли анилиновое производное (1,0 экв.), ацетат палладия (0,14 экв.), 2,2’-бис(дифенилфосфино)-1,1’-бинафтил (BINAP, 0,28 экв.) и карбонат калия (2,3 экв.) при комнатной температуре. Когда реакция прекращалась, после перемешивания при кипячении с обратным холодильником в течение 12 часов, температуру понижали до комнатной температуры. Реакционный раствор фильтровали через целит и затем экстрагировали водой и этилацетатом, отделенный органический слой упаривали при пониженном давлении и подвергали колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (5-10% метилового спирта/дихлорметан).

(4) Способ удаления защиты в соединении, имеющем защитную группу

<Способ 1>

Соединение, имеющее защитную группу, растворяли в растворе 4M хлористоводородной кислоты (1,4-диоксан). Когда реакция прекращалась, после перемешивания в течение 3 часов при комнатной температуре, реакционный раствор нейтрализовали 1N раствором гидроксида натрия и экстрагировали этилацетатом. Отделенный органический слой упаривали при пониженном давлении и подвергали колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения.

<Способ 2> Соединение, имеющее защитную группу, растворяли в смешанном растворителе, состоящем из метанола, 1,4-диоксана и воды (3:3:1). К смеси добавляли карбонат цезия (10,0 экв.) при комнатной температуре и смесь перемешивали при 80°C в течение 3 часов. После того, как реакция прекращалась, температуру понижали до комнатной температуры и затем добавляли воду. Полученное твердое вещество фильтровали и сушили. Твердое вещество разделяли колоночной хроматографией с получением указанного в заголовке соединения.

Пример 1: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 1.

Выход: 48,2%; белое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,41(дд, J=8,3, 1,5 Гц, 1H), 8,28(с, 1H), 8,05(с, 1H), 8,00(д, J=8,8 Гц, 1H), 7,37(ддд, J=8,5, 7,3, 1,5 Гц, 1H), 7,31(дд, J=8,0, 1,5 Гц, 1H), 7,23(с, 1H), 7,16(тд, J=7,6, 1,5 Гц, 1H), 6,53(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,44(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,84(с, 3H), 3,63(д, J=12,0 Гц, 2H), 3,27(с, 3H), 2,98(с, 3H), 2,73-2,63(м, 2H), 2,64(с, 4H), 2,37(тт, J=11,9, 3,8 Гц, 1H), 2,29(с, 3H), 1,94(д, J=12,4 Гц, 2H), 1,70(кв.д, J=12,0, 3,8 Гц, 4H).

Пример 2: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 2.

Выход: 15,9%; белое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 8,34(с, 1H), 8,26(с, 1H), 8,16(ушир.с, 1H), 8,09(с, 1H), 7,59(дд, J=8,9, 5,9 Гц, 1H), 7,23(д, J=8,6 Гц, 1H), 6,90(тд, J=8,3, 3,1 Гц, 1H), 6,58(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,42(дд, J=8,7, 2,5 Гц, 1H), 3,71-3,65(м, 5H), 3,14(с, 3H), 3,08(с, 3H), 2,68-2,56(м, 2H), 2,51-2,42(м, 4H), 2,36-2,18(м, 5H), 2,11(с, 3H), 1,81(д, J=12,2 Гц, 2H), 1,47(м, 2H). MS: ESI m/z 633,2 [M+H]+

Пример 3: Получение N-(2-((5-хлор-2-((4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-2-метоксифенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 2.

Выход: 17,7%; не совсем белое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 8,24(с, 2H), 8,06(д, J=1,9 Гц, 2H), 7,54(дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1H), 7,33(д, J=8,7 Гц, 1H), 7,21(т, J=7,9 Гц, 1H), 7,12(тд, J=7,6, 1,5 Гц, 1H), 6,58(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,42(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,71(с, 3H), 3,66(д, J=12,3 Гц, 2H), 3,14(с, 3H), 3,06(с, 3H), 2,69-2,57(м, 2H), 2,17(м, 7H), 1,81(д, J=12,3 Гц, 2H), 1,46(кв.д, J=11,9, 3,8 Гц, 2H).

Пример 4: Получение амида N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N,P,P-триметилфосфоновой кислоты

Конечное соединение получали Способом 2.

Выход: 18,5%; желтое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 8,41(с, 1H), 8,03-7,96(м, 2H), 7,74(д, J=8,7 Гц, 1H), 7,56(дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1H), 7,48(с, 1H), 7,33(ддд, J=8,2, 7,3, 1,6 Гц, 1H), 7,24(тд, J=7,7, 1,6 Гц, 1H), 7,14(д, J=5,4 Гц, 1H), 6,57(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,38(дд, J=8,9, 2,5 Гц, 1H), 3,75(с, 3H), 3,62(д, J=12,1 Гц, 2H), 3,12(с, 3H), 3,01(с, 3H), 2,59(т, J=11,9 Гц, 2H), 2,51-2,42(м, 4H), 2,29(с, 5H), 2,12(с, 3H), 1,81(д, J=12,6 Гц, 2H), 1,48(кв, J=13,0, 11,8 Гц, 2H). MS: ESI m/z 637,2 [M+H]+

Пример 5: Получение N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-7H-пурин-6-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 1.

Выход: 51,3%; бледно-желтое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,66(дд, J=8,4, 1,5 Гц, 1H), 8,44(с, 1H), 7,99(д, J=8,7 Гц, 1H), 7,44-7,29(м, 2H), 7,10(ддд, J=8,0, 7,3, 1,5 Гц, 1H), 7,04(с, 1H), 6,56(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,48(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,86(с, 3H), 3,63(д, J=12,0 Гц, 2H), 3,28(с, 3H), 3,01(с, 3H), 2,73-2,57(м, 6H), 2,55-2,27(м, 2H), 2,15(с, 3H), 2,11-1,89(м, 6H), 1,69(кв.д, J=12,2, 3,9 Гц, 2H).

Пример 6: Получение N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-5-метилпиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 2.

Выход: 29,3%; твердое вещество бежевого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 8,98(ушир.с, 1H), 8,36(с, 1H), 7,91(ушир.с, 1H), 7,78(с, 1H), 7,51-7,42(м, 1H), 7,16-7,00(м, 3H), 6,61(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,44(дд, J=8,7, 2,5 Гц, 1H), 3,75-3,70(м, 5H), 3,15(с, 3H), 3,01(с, 3H), 2,68(т, J=11,9 Гц, 3H), 2,51-2,42(м, 4H), 2,41(с, 3H), 2,38-2,20(м, 5H), 2,13(с, 3H), 1,81(д, J=12,5 Гц, 2H), 1,48(м, 2H). MS: ESI m/z 595,1 [M+H]+

Пример 7: Получение N-(2-((5-циано-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 2.

Выход: 33,3%; твердое вещество бежевого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 8,96(ушир.с, 1H), 8,37(с, 1H), 8,26(с, 1H), 7,91(ушир.с, 1H), 7,51-7,42(м, 1H), 7,16-7,00(м, 3H), 6,61(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,44(дд, J=8,7, 2,5 Гц, 1H), 3,75(д, J=12,2 Гц, 2H), 3,70(с, 3H), 3,10(с, 3H), 3,02(с, 3H), 2,68(т, J=11,9 Гц, 3H), 2,51-2,42(м, 4H), 2,38-2,20(м, 5H), 2,11(с, 3H), 1,82(д, J=12,5 Гц, 2H), 1,48(м, 2H). MS: ESI m/z 606,2 [M+H]+

Пример 8: Получение N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-5-(трифторметил)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Выход: 20,6%; твердое вещество бежевого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 9,02(ушир.с, 1H), 8,37(с, 1H), 8,26(ушир.с, 1H), 7,90(с, 1H), 7,51-7,42(м, 1H), 7,16-7,00(м, 3H), 6,60(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,47(дд, J=8,7, 2,5 Гц, 1H), 3,77-3,70(м, 5H), 3,10(с, 3H), 3,02(с, 3H), 2,68(т, J=11,9 Гц, 3H), 2,51-2,42(м, 4H), 2,39-2,21(м, 5H), 2,14(с, 3H), 1,81(д, J=12,5 Гц, 2H), 1,49(м, 2H). MS: ESI m/z 649,2 [M+H]+

Пример 9: Получение 2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-4-((2-(N-метилметилсульфонамидо)фенил)амино)пиримидин-5-карбоксиламида

Выход: 17,5%; твердое вещество бежевого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 8,94(ушир.с, 1H), 8,32(с, 1H), 8,28(с, 1H), 7,96(с, 2H), 7,87(ушир.с, 1H), 7,51-7,42(м, 1H), 7,16-7,00(м, 3H), 6,61(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,44(дд, J=8,7, 2,5 Гц, 1H), 3,75(д, J=12,2 Гц, 2H), 3,68(с, 3H), 3,07(с, 3H), 3,00(с, 3H), 2,68(т, J=11,9 Гц, 3H), 2,51-2,42(м, 4H), 2,42-2,22(м, 5H), 2,07(с, 3H), 1,81(м, 2H), 1,48(м, 2H). MS: ESI m/z 624,1 [M+H]+

Пример 10: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилэтансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 1.

Выход: 55,6%; бледно-желтое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,42-8,29(м, 2H), 8,10-7,98(м, 2H), 7,42-7,30(м, 2H), 7,23-7,13(м, 1H), 6,51(т, J=3,0 Гц, 1H), 6,43(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,84(с, 3H), 3,63(д, J=12,1 Гц, 2H), 3,28(с, 3H), 3,15(кв, J=7,4 Гц, 2H), 2,77(с, 3H), 2,74-2,63(м, 5H), 2,45(д, J=12,4 Гц, 1H), 2,40(с, 3H), 1,99(дд, J=19,2, 10,0 Гц, 4H), 1,74(тд, J=12,0, 3,8 Гц, 3H), 1,45(т, J=7,4 Гц, 3H).

Пример 11: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилпропан-2-сульфонамида

Конечное соединение получали Способом 1.

Выход: 54,4%; не совсем белое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,34(с, 1H), 8,32-8,19(м, 1H), 8,10-7,99(м, 2H), 7,43-7,32(м, 2H), 7,28(д, J=7,8 Гц, 7H), 7,24-7,03(м, 2H), 6,54-6,48(м, 1H), 6,41(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,84(с, 3H), 3,78(с, 1H), 3,64(с, 1H), 3,42(п, J=6,8 Гц, 2H), 3,29(с, 3H), 2,88(с, 3H), 2,86-2,76(м, 4H), 2,68(т, J=11,8 Гц, 3H), 2,49(с, 3H), 1,74(д, J=11,6 Гц, 3H), 1,70(ушир.с, 2H), 1,46(д, J=6,8 Гц, 6H).

Пример 12: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилциклопропансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 1.

Выход: 50,7%; бледно-желтое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,40(дд, J=8,3, 1,5 Гц, 1H), 8,32(с, 1H), 8,12-8,00(м, 2H), 7,51-7,36(м, 2H), 7,34(д, J=1,6 Гц, 1H), 7,22-7,04(м, 2H), 6,55-6,41(м, 2H), 3,85(с, 3H), 3,79(с, 1H), 3,64(д, J=12,1 Гц, 2H), 3,28(с, 3H), 3,26(д, J=6,3 Гц, 1H), 2,81(д, J=25,8 Гц, 4H), 2,69(т, J=11,9 Гц, 2H), 2,50(тд, J=8,0, 3,9 Гц, 2H), 2,46(с, 3H), 1,99(дд, J=11,3, 4,7 Гц, 2H), 1,75(т, J=12,1 Гц, 2H), 1,26-1,15(м, 2H), 1,01(с, 2H).

Пример 13: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-1,1,1-трифтор-N-метилметансульфонамида

Выход: 21,3%; светло-желтое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,41(дд, J=8,3, 1,5 Гц, 1H), 8,28(с, 1H), 8,05(с, 1H), 8,00(д, J=8,8 Гц, 1H), 7,37(ддд, J=8,5, 7,3, 1,5 Гц, 1H), 7,31(дд, J=8,0, 1,5 Гц, 1H), 7,23(с, 1H), 7,16(тд, J=7,6, 1,5 Гц, 1H), 6,53(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,44(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,84(с, 3H), 3,63(д, J=12,0 Гц, 2H), 3,51(с, 3H), 2,73-2,63(м, 2H), 2,64(с, 4H), 2,37(тт, J=11,9, 3,8 Гц, 1H), 2,24(с, 3H), 1,94(д, J=12,4 Гц, 2H), 1,70(кв.д, J=12,0, 3,8 Гц, 4H)

Пример 14: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метил(-N',N'-диметил)сульфонамида

Выход: 17,4%; твердое вещество бежевого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,42(дд, J=8,3, 1,5 Гц, 1H), 8,27(с, 1H), 8,01(с, 1H), 7,96(д, J=8,8 Гц, 1H), 7,35(ддд, J=8,5, 7,3, 1,5 Гц, 1H), 7,30(дд, J=8,0, 1,5 Гц, 1H), 7,23(с, 1H), 7,16(тд, J=7,6, 1,5 Гц, 1H), 6,53(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,44(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,84(с, 3H), 3,63(д, J=12,0 Гц, 2H), 2,97(с, 3H), 2,74(с, 6H), 2,73-2,63(м, 2H), 2,64(с, 4H), 2,37(тт, J=11,9, 3,8 Гц, 1H), 2,29(с, 3H), 1,94(д, J=12,4 Гц, 2H), 1,70(кв.д, J=12,0, 3,8 Гц, 4H).

Пример 15: Получение ((2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)имино)диметил--λ⁶-сульфанона

Выход: 12,9%; твердое вещество бежевого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,46(дд, J=8,3, 1,5 Гц, 1H), 8,30(с, 1H), 8,02(с, 1H), 8,00(д, J=8,8 Гц, 1H), 7,37(м, 1H), 7,31(дд, J=8,0, 1,5 Гц, 1H), 7,23(с, 1H), 7,16(тд, J=7,6, 1,5 Гц, 1H), 6,53(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,48(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 3,85(с, 3H), 3,63(д, J=12,0 Гц, 2H), 3,29(с, 6H), 2,73-2,63(м, 2H), 2,64(с, 4H), 2,37(тт, J=11,9, 3,8 Гц, 1H), 2,12(с, 3H), 1,94(д, J=12,4 Гц, 2H), 1,70(м, 4H).

Пример 16: Получение N-(2-((5-циано-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали Способом 2.

Выход: 23,1%; не совсем белое твердое вещество;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 9,14(ушир.с, 1H), 8,41(с, 1H), 8,24(д, J=1,3 Гц, 1H), 7,83(ушир.с, 1H), 7,52(дд, J=8,8, 5,9 Гц, 1H), 7,07(д, J=8,6 Гц, 1H), 6,83(тд, J=8,3, 3,0 Гц, 1H), 6,59(д, J=2,5 Гц, 1H), 6,45(дд, J=8,7, 2,5 Гц, 1H), 3,74-3,70(м, 5H), 3,10(с, 3H), 3,03(с, 3H), 2,65(т, J=11,5 Гц, 2H), 2,51-2,42(м, 4H), 2,27(м, 5H), 2,11(с, 3H), 1,81(д, J=12,4 Гц, 2H), 1,55-1,40(м, 2H).

Пример 17: Получение N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(пиперидин-4-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали, следуя Способу получения 2, и удаляли защиту с использованием способа удаления защиты 2.

Выход: 60,8%; твердое вещество желтовато-коричневого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, Метанол-d4) δ 8,15(дт, J=8,6, 2,2 Гц, 1H), 8,02(д, J=0,5 Гц, 1H), 7,82(д, J=8,3 Гц, 1H), 7,55(дд, J=8,0, 1,5 Гц, 1H), 7,37(ддд, J=9,5, 6,2, 1,6 Гц, 1H), 7,26(тд, J=7,7, 1,6 Гц, 1H), 6,84(д, J=1,9 Гц, 1H), 6,66(дд, J=8,3, 1,9 Гц, 1H), 3,85(с, 3H), 3,22(с, 3H), 3,10(д, J=12,3 Гц, 2H), 3,01(с, 3H), 2,69(тд, J=12,4, 2,6 Гц, 2H), 2,60(тт, J=12,0, 3,6 Гц, 1H), 1,78(д, J=12,8 Гц, 2H), 1,63(кв.д, J=12,5, 4,1 Гц, 2H). MS: ESI m/z 517,1 [M+H]+

Пример 18: Получение N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-7H-пирролo[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамида

Конечное соединение получали, следуя Способу получения 2, и удаляли защиту с использованием способа удаления защиты 2.

Выход: 47,1%; твердое вещество желтовато-коричневого цвета;

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 11,22(с, 1H), 8,21(дд, J=8,2, 1,5 Гц, 1H), 8,17(с, 1H), 7,90(д, J=8,7 Гц, 1H), 7,53(дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1H), 7,36-7,28(м, 1H), 7,19(с, 1H), 7,14(тд, J=7,6, 1,5 Гц, 1H), 6,87(дд, J=3,5, 2,2 Гц, 1H), 6,57(д, J=2,6 Гц, 1H), 6,40(дд, J=8,8, 2,5 Гц, 1H), 6,17(дд, J=3,5, 1,9 Гц, 1H), 3,77(с, 3H), 3,61(д, J=12,1 Гц, 2H), 3,15(с, 3H), 3,05(с, 3H), 2,63-2,53(м, 2H), 2,51-2,40(м, 4H), 2,25(м, 5H), 2,10(с, 3H), 1,81(д, J=10,2 Гц, 2H), 1,55-1,42(м, 2H). MS: ESI m/z 620,2 [M+H]+

Экспериментальный пример 1: Измерение киназа-ингибирующей активности

Ингибирующую активность в отношении содержащей C797S киназы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и MET киназы измеряли для соединения 1, полученного в описанном выше Примере, и результаты показаны в Таблице 1 ниже. Активность, направленную на ингибирование киназы, измеряли следующим способом:

1. Каждую киназу инкубировали с 8 мМ MOPS (pH 7,0), 0,2 мМ EDTA, 250 мкМ KKKGQEEEYVFIE, 1 мМ ортованадата натрия, 5 мМ натрий-6-глицерофосфата, 10 мМ ацетата магния и [ƞ-³³P]-АТФ.

2. Добавляли оцениваемое соединение (раствор в DMSO) и Mg/АТФ для осуществления реакции.

3. По прошествии примерно 40 минут при комнатной температуре реакцию останавливали путем добавления 10 мкл 0,5% раствора фосфорной кислоты.

4. 10 мкл 0,5% реакционного раствора наносили каплями на P30 плоский фильтр.

5. Промывали 4 раза примерно в течение 4 минут в 0,425% растворе фосфорной кислоты. Промывали один раз в метаноле и затем сушили и анализировали методом сцинтилляционного счета для определения значения IC₅₀.

Таблица 1 Пример EGFR
(del19/C797S) EGFR (del19/T790M/C797S) MET (IC₅₀) 1 0,4 нМ 0,08 нМ 1 нМ Бригатиниб - 2 нМ 70 нМ TRE-069 - 6 нМ 120 нМ

Как показывают результаты эксперимента в Таблице 1 выше, было подтверждено, что соединения, полученные в соответствии с Примерами настоящего изобретения, обладали превосходной ингибирующей активностью в отношении содержащей C797S киназы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и MET киназы по сравнению с бригатинибом и TRE-069.

Экспериментальный пример 2: Измерение ингибирующего эффекта на рост раковых клеток

Ингибирующий эффект на рост C797S-экспрессующей трижды мутантной Ba/F3 раковой клеточной линии измеряли для соединений, полученных в приведенных выше примерах. Анализ киназной активности и противораковой эффективности с использованием стабильной клеточной линии Ba/F3 осуществляли следующим методом:

1. Генная конструкция: дикого типа и мутантный EGFR были приобретены у Addgene (дикий тип, # 11011; L858R, # 11012; L858R+T790M, # 32073; del19, # 32062; del19+T790M, # 32072). Все конструкции представляли собой ретровирусные векторы и в конечном итоге формировали вирусные частицы для инфицирования.

2. Конструирование стабильных клеточных линий Ba/F3: Мышиные лимфоидные клетки претерпевают IL-3-зависимый рост. Инфицирование этих клеточных линий каждой конструкцией с мутантным EGFR приводит к склонности к онкогенности вследствие экспрессии мутантного EGFR, давая, таким образом, клеткам выживать без IL-3. Используя этот принцип, стабильную клеточную линию конструировали даже без отбора на основе пуромицина. Вкратце, каждую конструкцию использовали для инфицирования клеточных линий Ba/F3 и через 48 часов IL-3 удаляли путем замены среды и клетки культивировали. Однако отбор на основе пуромицина осуществляли для EGFR дикого типа.

3. Идентификация стабильных клеточных линий Ba/F3: Все стабильные клеточные линии подвергали вестерн-блоттингу для подтверждения экспрессии каждой конструкции и активности EGFR (EGFR дикого типа и L858R были опущены).

4. Подтверждение изменений клеточной киназной активности (вестерн-блоттинг): Клетки получали после 5-часовой обработки лекарственными средствами зависимым от концентрации образом в каждой стабильной клеточной линии. Буфер для лизиса EBC (50 мМ Трис-HCl (pH 8,0), 120 мМ NaCl, 1% Тритон Х-100, 1 мМ EDTA, 1 мМ EGTA, 0,3 мМ фенилметилсульфонилфторида, 0,2 мМ ортованадата натрия, 0,5% NP-40 и 5 Ед/мл апротинина) использовали для получения клеточных лизатов. Антитела, специфичные для EGFR-связанных сигнальных молекул [p-EGFR (Tyr1173), EGFR, Akt, p-Erk, Erk, актин, от SantaCruz; p-Akt от Cell Signaling] использовали для измерения активности.

5. Подтверждение противоракового эффекта с использованием МТТ анализа: 2×10⁵ клеток высевали в 96-луночный планшет. Через 24 часа осуществляли обработку каждым из лекарственных средств дозозависимым образом, инкубировали в течение 72 часов, осуществляли взаимодействие с 15 мкл реагента МТТ в течение 4 часов, а затем добавляли 100 мкл 10% SDS и инкубировали в течение 24 часов. Изменения конечных значений OD считывали при 595 нм. МТТ результаты анализировали путем измерения значений IC₅₀ с использованием программы Prism.

Каждое соединение рассчитывали как значение GI₅₀, которое представляет собой концентрацию для 50% ингибирования роста клеток, и результаты представлены в Таблице 2 ниже. Бригатиниб и TRE-069 использовали в качестве контрольного лекарственного средства.

Таблица 2 Пример DEL19/T790M/C797S (IC₅₀) L858R/T790M/C797S (IC₅₀) 1 210 нМ 160 нМ 2 222 нМ 533 нМ 3 323 нМ 531 нМ *Бригатиниб 560 нМ 860 нМ **TRE-069 5005 нМ 3995 нМ *Бригатиниб: Nat. Commun. 2017 Mar 13, 8: 14768.
**TRE-069: Bull. Korean Chem. Soc. 2017, Vol. 38, 1353-1357

Как показывают результаты эксперимента в Таблице 2 выше, было подтверждено, что соединения, полученные в соответствии с Примером настоящего изобретения, показали замечательную ингибирующую активность в отношении раковых клеточных линий, экспрессирующих C797S-мутантный рецептор эпидермального фактора роста, по сравнению с бригатинибом и TRE-069. С другой стороны, было подтверждено, что бригатиниб и TRE069 значительно менее активны по сравнению с соединениями в соответствии с Примерами настоящего изобретения.

Настоящее изобретение относится к новому пиримидиновому производному, представленному химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли, где X и Y каждый независимо представляет собой углерод или азот, Z представляет собой кислород или C1-C4 алкильную группу, R₁ представляет собой C1-C4 алкильную группу, C3-C6 циклоалкильную группу, CF₃ или диметиламиногруппу, R₂ представляет собой C1-C4 алкильную группу, R₃ представляет собой водород или галогеновую группу, R₄ представляет собой водород, галогеновую группу, CN, CF₃, C1-C4 алкильную группу или аминокарбонильную группу, R₅ представляет собой водород или C1-C4 алкильную группу, R₆ представляет собой C1-C4 алкильную группу, R₇ представляет собой водород, аминогруппу, замещенную одной или более C1-C4 алкильными группами, или пиперазинильную группу, незамещенную или замещенную одной или более C1-C4 алкильными группами, когда Z представляет собой кислород, Z образует двойную связь с S, который образует простую связь с N, или, когда Z представляет собой C1-C4 алкильную группу, Z образует простую связь с S, который образует двойную связь с N, и R₄ и R₅ также могут быть связаны с образованием пиррола, имидазола или тиофена. Также изобретние относится к фармацевтической композиции для лечения рака легкого и содержащей эффективное количество соединения, представленного формулой 1 или его фармацевтически приемлемую соль. Технический результат: получено и описано новое пиримидиновое производное, которое эффективно ингибирует рост раковых клеток с экспрессией C797S-мутантного EGFR и MET-амплификацией, которые являются основными механизмами резистентности к нацеленным на EGFR противораковым средствам третьего поколения, и, таким образом, может эффективно применяться для лечения рака легкого. 2 н. и 5 з.п. ф-лы., 1 ил., 2 табл., 18 пр.

[Химическая формула 1]

1. Соединение, представленное следующей химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль:

[Химическая формула 1]

где

X и Y каждый независимо представляет собой углерод или азот,

Z представляет собой кислород или C1-C4 алкильную группу,

R₁ представляет собой C1-C4 алкильную группу, C3-C6 циклоалкильную группу, CF₃ или диметиламиногруппу,

R₂ представляет собой C1-C4 алкильную группу,

R₃ представляет собой водород или галогеновую группу,

R₄ представляет собой водород, галогеновую группу, CN, CF₃, C1-C4 алкильную группу или аминокарбонильную группу,

R₅ представляет собой водород или C1-C4 алкильную группу,

R₆ представляет собой C1-C4 алкильную группу,

R₇ представляет собой водород, аминогруппу, замещенную одной или более C1-C4 алкильными группами, или пиперазинильную группу, незамещенную или замещенную одной или более C1-C4 алкильными группами,

когда Z представляет собой кислород, Z образует двойную связь с S, который образует простую связь с N, или, когда Z представляет собой C1-C4 алкильную группу, Z образует простую связь с S, который образует двойную связь с N, и

R₄ и R₅ также могут быть связаны с образованием пиррола, имидазола или тиофена.

2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, отличающееся тем, что соединение, представленное химической формулой 1, выбрано из следующих соединений:

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-2-метоксифенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

амид N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N,P,P-триметилфосфоновой кислоты;

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-7H-пурин-6-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-5-метилпиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-циано-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-5-(трифторметил)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-4-((2-(N-метилметилсульфонамидо)фенил)амино)пиримидин-5-карбоксиламид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилэтансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилпропан-2-сульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилциклопропансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-1,1,1-трифтор-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метил(-N',N'-диметил)сульфонамид;

((2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)имино)диметил-λ⁶-сульфанон;

N-(2-((5-циано-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(пиперидин-4-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид; и

N-(2-((2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)-7H-пирролo[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид.

3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, отличающееся тем, что:

X представляет собой азот,

Y представляет собой углерод,

Z представляет собой кислород,

R₁ представляет собой C1-C4 алкильную группу,

R₂ представляет собой C1-C4 алкильную группу,

R₃ представляет собой водород или галогеновую группу,

R₄ представляет собой галогеновую группу,

R₅ представляет собой водород,

R₆ представляет собой C1-C4 алкильную группу,

R₇ представляет собой аминогруппу, замещенную одной или более C1-C4 алкильными группами, или пиперазинильную группу, незамещенную или замещенную одной или более C1-C4 алкильными группами.

4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 3, отличающееся тем, что соединение, представленное химической формулой 1, выбрано из следующих соединений:

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид;

N-(2-((5-хлор-2-((2-метокси-4-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)пиперидин-1-ил)фенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)-4-фторфенил)-N-метилметансульфонамид; и

N-(2-((5-хлор-2-((4-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)-2-метоксифенил)амино)пиримидин-4-ил)амино)фенил)-N-метилметансульфонамид.

5. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, отличающееся тем, что соль представляет собой соль, образованную из одной или более кислот, выбранных из группы, состоящей из хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты, уксусной кислоты, гликолевой кислоты, молочной кислоты, пировиноградной кислоты, малоновой кислоты, янтарной кислоты, глутаровой кислоты, фумаровой кислоты, яблочной кислоты, миндальной кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, аскорбиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, малеиновой кислоты, бензойной кислоты, гидроксибензойной кислоты, фенилуксусной кислоты, коричной кислоты, салициловой кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты и толуолсульфоновой кислоты.

6. Фармацевтическая композиция для лечения рака легкого, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-5 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Фармацевтическая композиция для лечения рака легкого по п. 6, отличающаяся тем, что рак легкого представляет собой рак легкого с экспрессией C797S-мутантного рецептора эпидермального фактора роста или рак легкого с MET-амплификацией.