Изобретение относится к медицине, в частности к ревматологии, и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики системной красной волчанки (СКВ) и болезни Шегрена (БШ).
Для дифференциальной диагностики CКВ и БШ используют классификационные критерии EULAR/ACR (European League Against Rheumatism/American College of Rheumatology) 2019 г. [Martin Aringer, Karen Costenbader, David Daikh et al., 2019 European League Against Rheumatism/American College of Rheumatology Classifcation Criteria for Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis & Rheumatology, 71,9, September 2019, 1400–1412] и EULAR/ACR 2016 г. [Caroline H. Shiboski, Stephen C. Shiboski, Raphaèle Seror et al. 2016 ACR-EULAR Classification Criteria for primary Sjögren’s Syndrome: A Consensus and Data-Driven Methodology Involving Three International Patient Cohorts. Arthritis Rheumatol. 2017 Jan; 69(1): 35–45] соответственно.
В связи со схожестью клинических проявлений, отсутствием патогномоничных иммунологических анализов, диагностика с помощью классификационных критериев не всегда позволяет верно поставить диагноз.
Технический результат изобретения заключается в повышении точности дифференциальной диагностики СКВ и БШ в реальной клинической практике.
Заявленный технический результат достигается в способе дифференциальной диагностики СКВ и БШ, согласно которому в периферической крови пациента определяют относительные значения субпопуляций В-лимфоцитов, вычисляют значения F1 и F2 по формулам:
F1=−0,143+1,005L1+1,579L2+3,287L3−1,546L4−1,697L5−1,014L6
F2=−0,551−4,256L1+2,838L2+1,346L3+0,505L4−1,504L5+1,656L6,
где:
L1 - относительное значение клеток с фенотипом IgDdimCD27dim;
L2 - относительное значение клеток с фенотипом IgDdimCD38low;
L3 - относительное значение клеток с фенотипом CD27lowCD38hi;
L4 – относительное значение клеток с фенотипом IgDlowCD38hi;
L5 - относительное значение клеток с фенотипом IgDhiCD38hi;
L6 – относительное значение клеток с фенотипом IgDdimCD38dim,
и при F1<0 и F2>0 диагностируют СКВ, а при F1<0 и F2<0 диагностируют БШ.
Применение результатов иммунофенотипирования В-лимфоцитов периферической крови у пациентов с СКВ и БШ позволяет повысить точность дифференциальной диагностики этих заболеваний, а также персонифицировать тактику лечения, повысить эффективность и безопасность проводимой терапии.
На фиг. 1 графически представлены результаты дискриминантного анализа для относительных значений субпопуляций В-лимфоцитов по классификациям IgD/CD38, IgD/CD27 и CD27/CD38;
на фиг. 2 - ROC анализ диагностической значимости расчетных значений дискриминантной функции для определения больных и здоровых пациентов;
на фиг. 3 - ROC анализ диагностической значимости расчетных значений дискриминантной функции для дифференциальной диагностики СКВ и БШ.
Для разработки заявленного способа было проведено исследование, которое включало 27 пациентов с СКВ, 41 пациента с БШ, контрольную группу составили 49 здоровых добровольцев. Диагноз СКВ был поставлен на основании классификационных критериев EULAR/ACR 2019г., диагноз БШ – на основании критериев EULAR/ACR 2016г. Критериями исключения были наличие текущего онкологического, воспалительного или инфекционного заболевания, беременность, а также проведение терапии основного заболевания алкилирующими препаратами (циклофосфамид) или генно-инженерными биологическими препаратами в течение года перед проведением исследования. В группе пациентов с СКВ средний возраст составил 39 лет (32;50), в группе БШ – 55 лет (45;64), в группе контроля – 44 (42;49) года.
Всем исследуемым выполняли забор крови путем пункции кубитальной вены с использованием вакуумных пробирок с содержанием K3ЭДТА.
Для определения относительных значений В-лимфоцитов периферической крови использовали антитела против CD45- и CD19-APC-AF750. Для анализа распределения В-лимфоцитов по основным субпопуляциям применяли антитела против поверхностных IgD, CD38 и CD27. Анализ образцов проводили на проточном цитофлуориметре «Navios™» («Beckman Coulter», США). Обработку цитофлуориметрических данных проводили при помощи программ «Navios Software v.1.2» и «Kaluza™ v.1.3» («Beckman Coulter», США).
Для абсолютных и относительных значений всех субпопуляций лимфоцитов были вычислены десятичные логарифмы, а затем для всех классификаций поочередно и совместно применен метод дискриминантного анализа. Модель, построенная на основании относительных значений всех субпопуляций, оказалась наиболее эффективной в разделении групп пациентов с СКВ, БШ и здоровых добровольцев. В этой дискриминантной модели относительное содержание клеток c фенотипами IgDdimCD27dim, IgDdimCD38low, CD27lowCD38hi, IgDlowCD38hi, IgDhiCD38hi и IgDdimCD38dim занимали наиболее значимое положение (Таблица).
Таблица
значимость
Графические результаты дискриминантного анализа представлены на фиг. 1. Достоверность модели составила 75,2% (p <0,05).
Основываясь на данных исследования были получены дискриминантные функции F1 – для определения больных и здоровых пациентов и F2 – для дифференциальной диагностики СКВ и БШ.
F1=−0,143+1,005L1+1,579L2+3,287L3−1,546L4−1,697L5−1,014L6, при этом F1>0 соответствует контролю, а F1<0 – болезни - СКВ или БШ. Чувствительность 70,6%, специфичность 85,7%, площадь под кривой AUC=0,91, p<0,001 (Фиг. 2).
F2=−0,551−4,256L1+2,838L2+1,346L3+0,505L4−1,504L5+1,656L6, при F1<0 и F2>0 диагностируют СКВ, при F1<0 и F2<0 – БШ. Чувствительность 81,5%, специфичность 80,5%, площадь под кривой AUC=0,84, p<0,001 (Фиг. 3).
Способ осуществляют, например, следующим образом.
Выполняют забор крови у пациента путем пункции кубитальной вены с использованием вакуумных пробирок с содержанием K3ЭДТА.
Для определения относительных значений В-лимфоцитов периферической крови используются антитела против CD45- и CD19-APC-AF750. Для анализа распределения В-лимфоцитов по основным субпопуляциям применяют антитела против поверхностных IgD, CD38 и CD27. Анализ образцов проводят на проточном цитофлуориметре, например, «Navios™» («Beckman Coulter», США). Обработку цитофлуориметрических данных проводят при помощи программ, например «Navios Software v.1.2» и «Kaluza™ v.1.3» («Beckman Coulter», США).
Вычисляют значения дискриминантных функций F1 и F2 по формулам
F1=−0,143+1,005L1+1,579L2+3,287L3−1,546L4−1,697L5−1,014L6,
F2=−0,551−4,256L1+2,838L2+1,346L3+0,505L4−1,504L5+1,656L6,
и при F1<0 и F2>0 диагностируют СКВ, а при F1<0 и F2<0 - БШ.
Способ подтверждается следующими клиническими примерами.
1. Пациентка В, жен., 48 лет, в течение последнего года предъявляет жалобы на изменение цвета кончиков пальцев при воздействии низких температур (проявления синдрома Рейно), эпизоды геморрагической сыпи на коже голеней, фотосенсебилизацию. Также пациентка стала отмечать снижение толерантности к физической нагрузке. Семейный анамнез отягощен, мать пациентки болеет системной красной волчанкой, вторичным синдромом Шегрена, регулярно наблюдается у ревматолога.
При дообследовании выявлено: по данным МСКТ органов грудной клетки выявлено интерстициальное заболевание легких, поражение по типу «матового стекла» базальных и средних отделов легочной паренхимы. Минимальный гидроперикард (выпот до 5 мм). В лабораторном контроле обращает на себя внимание повышение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) до 56 мм/час, повышение антинуклеарного фактора (АНФ) 1:320, антитела к двуспиральной ДНК – 45 МЕ/мл, ревматоидный фактор 107 МЕ/мл.
Пациентка не жалуется на проявления сухого синдрома в глазах или во рту. Тест Ширмера отрицательный.
Согласно критериям EULAR/ACR 2016 г, пациентка не отвечает критериям наличия БШ по результатам опросника. Применяя классификационные критерии СКВ EULAR/ACR 2019 г, пациентка набирает 11 баллов, что классифицируется как СКВ.
Были определены относительные значения субпопуляций В-лимфоцитов, которые составили: L1=0,81, L2=0,071, L3=0,368, L4=1,378, L5=0,83, L6=1,293.
F1=−0,143+1,005×0,81+1,579×0,071+3,287×0,368−1,546×1,378−1,697×0,83−1,014×1,293=
−2,854. F1<0.
F2=−0,551−4,256×0,81+2,838×0,071+1,346×0,368+0,505×1,378−1,504×0,83+1,656×1,293=
−1,761. F2<0, классифицируем как БШ.
Таким образом, заявленный способ дифференциальной диагностики помог в сложном клиническом случае, что позволило назначить верное лечение интерстициального заболевания легких и избежать назначения аминохинолиновых производных (гидроксихлорохин). Диагноз БШ был также подтвержден биопсией малой слюнной железы, а отсутствие клинических проявлений сухого синдрома можно объяснить недавним дебютом заболевания.
2. Пациент Н. мужчина, 36 лет, жалуется на сухость в глазах, ротовой полости. Также беспокоят боли в мелких суставах кистей, скованность в кистях в течение 30 минут после сна. В течение последнего года пациента беспокоят жалобы на высыпания на коже, пациент был проконсультирован дерматологом, диагноз - хроническая кожная (дискоидная) волчанка.
В лабораторном контроле АНФ менее 1:160, иммуноблот антинуклеарных антител, ревматоидный фактор, антитела к циклическому цитруллинированному пептиду, антитела к двуспиральной ДНК - отрицательные, СОЭ 31 мм/час, С-реактивный белок 15 мг/л. Так как АНФ отрицательный, пациента нельзя классифицировать как СКВ как по критериям ACR/EULAR 2019г. По критериям ACR/EULAR 2016 года пациент также не набирал баллов для постановки диагноза БШ.
Были определены относительные значения субпопуляций В-лимфоцитов, которые составили: L1=1,244, L2=1,274, L3=0,288, L4=0,434, L5=0,601, L6=7,722. F1=−0,143+1,005×1,244+1,579×1,274+3,287×0,288−1,546×0,434−1,697×0,601−1,014×7,722=−5,653. Таким образом, F1<0.
F2=−0,551−4,256×1,244+2,838×1,274+1,346×0,288+0,505×0,434−1,504×0,601+1,656×7,722=10,18. F2>0, классифицируем как СКВ.
Пациенту было назначено лечение низкими дозами преднизолона и гидроксихлорохином с положительным эффектом.
Спустя 1 год, при контроле АНФ, показатель составил 1:320, иммуноблот антинуклеарных антител - Sm1+. Таким образом, выполнение анализа субпопуляций В-лимфоцитов по заявленному способу позволило поставить точный диагноз раньше, чем это возможно при использовании классификационных критериев, и назначить верное лечение, получить положительный клинический результат.
Использование заявленного способа позволяет повысить точность дифференциальной диагностики СКВ и БШ, а также персонифицировать тактику лечения, повысить эффективность и безопасность проводимой терапии.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ ранней диагностики ревматоидного артрита | 2019 |
|
RU2735738C1 |
| Способ дифференциальной диагностики системной красной волчанки и острого бактериального воспаления | 1990 |
|
SU1788468A1 |
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОРАЖЕНИЯ ПОЧЕК ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ | 2017 |
|
RU2677325C1 |
| Способ диагностики выраженного фиброза печени у больных хроническим гепатитом С с 1 генотипом | 2017 |
|
RU2639480C1 |
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ ВИБРАЦИОННОЙ БОЛЕЗНИ | 2007 |
|
RU2337363C1 |
| Способ диагностики цирроза печени (стадии F4) в исходе хронического вирусного гепатита С | 2019 |
|
RU2724595C1 |
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И НЕ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ В ГЛОТОЧНОЙ МИНДАЛИНЕ У ДЕТЕЙ | 2014 |
|
RU2567033C1 |
| Способ прогнозирования продолжительности жизни больных с метастатическими формами опухолей | 2023 |
|
RU2821659C1 |
| КЛЕТОЧНО-СВЯЗАННЫЕ ПРОДУКТЫ АКТИВАЦИИ КОМПЛЕМЕНТА В КАЧЕСТВЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ БИОМАРКЕРОВ ВОЛЧАНКИ В ДОКЛИНИЧЕСКОЙ СТАДИИ | 2014 |
|
RU2680270C2 |
| Способ прогнозирования развития метастазов у больных нерезектабельным трижды негативным раком молочной железы | 2023 |
|
RU2802141C1 |
Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики системной красной волчанки (СКВ) и болезни Шегрена (БШ). В периферической крови пациента определяют относительные значения субпопуляций В-лимфоцитов IgDdimCD27dim (L1), IgDdimCD38low (L2), CD27lowCD38hi (L3), IgDlowCD38hi (L4), IgDhiCD38hi (L5), IgDdimCD38dim (L6). Вычисляют значения F1 и F2 по формулам: F1 = −0,143 + 1,005L1 + 1,579L2 + 3,287L3 − 1,546L4 − 1,697L5 − 1,014L6, F2 = −0,551 − 4,256L1 + 2,838L2 + 1,346L3 + 0,505L4 − 1,504L5 + 1,656L6. При F1<0 и F2>0 диагностируют СКВ. При F1<0 и F2<0 диагностируют БШ. Способ обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики СКВ и БШ за счет иммунофенотипирования В-лимфоцитов периферической крови пациента. 3 ил., 1 табл., 2 пр.
Способ дифференциальной диагностики системной красной волчанки и болезни Шегрена, заключающийся в том, что в периферической крови пациента определяют относительные значения субпопуляций В-лимфоцитов, вычисляют значения F1 и F2 по формулам:
F1=−0,143+1,005L1+1,579L2+3,287L3−1,546L4−1,697L5−1,014L6,
F2=−0,551−4,256L1+2,838L2+1,346L3+0,505L4−1,504L5+1,656L6,
где:
L1 - относительное значение клеток с фенотипом IgDdimCD27dim;
L2 - относительное значение клеток с фенотипом IgDdimCD38low;
L3 - относительное значение клеток с фенотипом CD27lowCD38hi;
L4 – относительное значение клеток с фенотипом IgDlowCD38hi;
L5 - относительное значение клеток с фенотипом IgDhiCD38hi;
L6 – относительное значение клеток с фенотипом IgDdimCD38dim,
и при F1<0 и F2>0 диагностируют системную красную волчанку, а при F1<0 и F2<0 диагностируют болезнь Шегрена.
| WO 2020052546 A1, 19.03.2020 | |||
| БУДКОВА А.И | |||
| и др | |||
| Субпопуляционный состав В-клеток периферической крови у больных системной красной волчанкой | |||
| Медицинская иммунология | |||
| Автомобиль-сани, движущиеся на полозьях посредством устанавливающихся по высоте колес с шинами | 1924 |
|
SU2017A1 |
| BENEVOLENSKAYA S | |||
| et al | |||
| Способ сопряжения брусьев в срубах | 1921 |
|
SU33A1 |
| Annals of | |||
