Штамм Loigolactobacillus coryniformis KubGAU B-020 ВКМ B-3724D - продуцент антибактериальных веществ Российский патент 2024 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано как продуцент антибактериальных веществ с выраженной антимикробной активностью для группы микроорганизмов, а также антибиотикорезистентность к ряду антибиотиков.

Выявление и изучение новых микроорганизмов и их штаммов способных ингибировать рост патогенной микрофлоры, а также продуцировать антибактериальные вещества привлекает все больше внимание к изучению, так как патогенные и условно-патогенные микроорганизмы имеют большое количество факторов патогенности, в связи с чем быстро приобретают резистентность к антибиотикам и уже имеющимся антибактериальным препаратам. Увеличение числа патогенных микроорганизмов приводит к росту заболеваемости инфекциями, в некоторых случаях такие инфекции могут привести к летальному исходу.

Известен штамм микроорганизмов Lactobacillus coryniformis HD-02 (Патент KR 20080114007 А, опубл. 04.03.2009), который имеет пробиотическую активность, а также предотвращает загрязнения плесенью. Недостатком данного штамма является ингибирование роста только Е. coli, тогда как предлагаемый штамм имеет антимикробную активность и к ряду других микроорганизмов.

Известен штамм микроорганизмов Lactobacillus coryniformis ВСН-4 (Salman et all., Molecules, 25, 4685, 2020), который имеет антибактериальную и антифунгальную активность к ряду микроорганизмов. Недостатком данного штамма является среднее ингибирование роста патогенных Escherichia coli, Staphylococcus aureus. Предлагаемый штамм имеет более широкий спектр ингибирования, а также известен своей антибиотикорезистентностью.

Наиболее близким к предлагаемому является штамм бактерий Lactobacillus coryniformis (Wickramaratne and Gunasena, International Multidisciplinary Research Journal, 5, 65-70, 2019). Производилось изучение ингибирования группы молочнокислых бактерий к ряду патогенных микроорганизмов.

Недостатком данного штамма является неспособность ингибировать рост E.faecalis, а также неизвестная степень антибактериальной активности по отношению к изученным патогенным микроорганизмам.

Технический результат данного изобретения является выделение нового штамма микроорганизмов, способного стать продуцентом антибактериальных веществ, характеризующийся антибиотикорезистентностью.

Технический результат достигается предлагаемым штаммом Loigolactobacillus coryniformis В-020, выделенным из слепых отростков желудочно-кишечного тракта Румынского фазана (Phasianus versicolor). Штамм депонирован во Всероссийской коллекции Микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером ВКМ B-3724D

Заявленный штамм имеет следующие характеристики.

Культурально-морфологические свойства:

Клетки штамма Loigolactobacillus coryniformis В-020, в приложении представлено свидетельство и депонировании штамма бактерий, имеют вид изогнутых грушевидных палочек длиной 0,8-1,1×1,0-3,0 мкм, не подвижны. Не образуют спор, окрашиваются грамположительно.

Штамм бактерий выращивали на бифидум-среде (ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск) при температуре 37°С, СО₂ - 5-10% в течение 2 суток в результате колонии выпуклые, белые или слегка желтоватого цвета, непрозрачные, с размером от 1 до 4 мм. Оптимальная температура роста 30-37°С. При значении рН 6,7-7,3.

Физиолого-биохимические:

Штамм Loigolactobacillus coryniformis В-020 имеет высокую кислотообразующую способность, резистентен к фенолу, хлориду натрия, желчи, желудочному соку.

По отношению к углеводам ферментирует фруктозу, глюкозу (без образования газов), галактозу, мальтозу и маннит. Образует молочную кислоту из глюкозы.

По отношению к кислороду - факультативный анаэроб. Метаболизм - гетероферментативный.

Состав среды для культивирования г/л:

Панкреатический гидролизат казеина - 30,0; экстракт пекарных дрожжей - 5,0; глюкоза - 7,5; лактоза - 2,5; цистеин - 0,5; натрий хлористый - 2,5; магний сернокислый - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; натрий уксуснокислый - 0,3; агар - 0,9.

Штамм бактерий Loigolactobacillus coryniformis В-020 хранится в лиофильно-высушенном состоянии.

Более подробно сущность описанного изобретения раскрывается в приведенных ниже примерах.

Пример 1. Антибактериальная активность.

Антибактериальную активность изучали с помощью посева на Бифидум среду методом встречного роста. Тест-культуры инокулировали на расстоянии 30 мм напротив друг друга и инкубировали при температуре 37°С в течение двух суток. По истечении срока инкубации анализировали степень антагонизма по размеру зоны задержки роста (мм).

Антибактериальная активность изучалась на таких патогенных микроорганизмах как Enterococcus faecalis, Staphilococcus aureus, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli и зона задержки роста составляла 20 мм, 19 мм, 15 мм, 11 мм, 11 мм, соответственно.

Пример 2. Антибиотикорезистентность.

Влияние антибиотиков на штамм Loigolactobacillus coryniformis В-020 с помощью посева культуры сплошным газоном на Бифидум среду с последующим нанесением на нее дисков с антибиотиками и инкубацией при температуре 37°С в течение суток. По истечении срока инкубации анализировали степень резистентности по наличию задержки роста.

Антибиотикорезистентность изучалась на оксацилин (группа бета-лактамных антибиотиков), цефтазидин (группа цефалоспаринов 3 поколения), тетрациклин (тетрациклиновая группа), в каждом из них не наблюдалась задержка роста к данному микроорганизму.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в качестве продуцента антибактериальных веществ. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции Микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером ВКМ B-3724D. Штамм является продуцентом антибактериальных веществ, характеризуется антибиотикорезистентностью. 2 пр.

Штамм бактерий Loigolactobacillus coryniformis В-020 ВКМ B-3724D,

проявляющий антибактериальную активность и антибиотикорезистентность.