Способ прогнозирования исходов послеродовых осложнений у коров Российский патент 2024 года по МПК G01N33/50 A61B5/00 

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно лабораторной диагностике и пропедевтике. Изобретение может быть использовано в ветеринарной практике при анализе крови для экспресс-диагностики и прогнозирования генерализации сепсиса у коров. Известно, что послеродовые осложнения у коров наносят значительный ущерб животноводству, складывающийся из потерь от гибели коров, снижения молочной и мясной продуктивности, потери репродуктивных качеств. В настоящее время самой распространенной патологией послеродового периода является эндометрит, заболеванию которым подвержены высокопродуктивные животные. Это обусловливает задержку восстановления репродуктивной способности у коров, а также снижается вероятность удачного оплодотворения, в связи с чем период от отела до оплодотворения может удлиниться до нескольких месяцев. Также значительный ущерб молочной и мясной промышленности приносит симптоматическое бесплодие у переболевших животных вследствие отсутствия приплода и ремонтного потенциала стада. Молоко от переболевших животных также теряет свои биологические качества [1].

Клинические проявления острого эндометрита характеризуются катаральной, гнойно-катаральной, фибринозной формой, наиболее часто регистрируется гнойно-катаральная форма острого эндометрита. В тяжелых случаях патологический процесс распространяется на все слои матки. Микробиологическая диагностика требует длительного времени, кроме того на результаты исследований влияет проведенная антибиотикотерапия. По этой причине для ранней диагностики сепсиса и прогнозирования генерализации процесса с целью принятия ветеринарных и технологических решений на ферме предлагается использовать предложенную нами модель исследования.

Модель SAPS (Simplified Acute Physiology Score) - упрощенная шкала оценки физиологических расстройств, представляет собой концептуальную основу для понимания сепсиса [2]. Данная модель непосредственно протестирована как в исследовательской лаборатории, так и в ходе клинических испытаний для определения практической ценности и клинической значимости этой новой схемы. Модифицированная формула SAPS может использоваться в прогностике гнойно-септических послеродовых осложнений у животных [3].

Целью заявленного изобретения является: повышение точности прогнозирования развития генерализации послеродовых гнойно-септических осложнений у коров. Оценку состояния коров проводят на основе модели SAPS (Simplified Acute Physiology Score) в комбинации с определением среднего цитохимического коэффициента (СЦК) катионных белков (КБ) нейтрофилов. Шкала оценки физиологических расстройств позволяет рассчитать баллы, используя имеющуюся клиническую информацию. В ней отражены биологические и клинические показатели, в высокой степени отражающих риск падежа. Комбинация показаний SAPS и СЦК позволяет определить осторожный или неблагоприятный прогноз при гнойно-септических послеродовых осложнениях у коров и прибегнуть к адекватным технологическим и ветеринарным мероприятиям.

Техническим результатом заявленного изобретение является составление точного прогноза генерализации гнойно-септических осложнений у коров на основании предложенного способа. Заявленный технический результат достигается за счет того, что в соответствие с заявленной формулой были рассчитаны показатели SAPS, после чего подсчитаны данные по СЦК по изученным в приготовленных мазках-препаратах степени окрашивания и количеству гранул с катионными белками нейтрофилов.

У больных животных - коров в послеродовой период (0-40 дней после отела) в остром периоде эндометрита средний цитохимический коэффициент катионных белков нейтрофилов (СЦК) повышен относительно здоровых животных, вместе с тем SAPS остается в пределах нормы (0-2 балла) или повышается незначительно (не более 3-4 баллов), прогноз считается осторожным. При прогрессировании заболевания СЦК снижается, а SAPS повышается, в данном случае прогноз считаем неблагоприятным. Лечение будет неэффективным и/или экономически нецелесообразным. В случае выздоровления животного, оно не сможет быть использовано для репродукции в связи со структурными изменениями органов полового аппарата.

Для определения SAPS (Simplified Acute Physiology Score) проводят общее клиническое исследование, включающее в себя осмотр, ректальную пальпацию, определение частоты дыхания, частоты сердечных сокращений, температуры тела, а также проводят общий и биохимический анализ крови. Отклонение от нормы высчитываем в процентах относительно размера шага указанных в таблице 1 данных.

Критериями для подсчета SAPS являются изменение общего состояния, гнойные выделения при ректальной пальпации, частота дыхания, частота сердечных сокращений, температура тела, развитие токсического лейкоцитоза и концентрация глюкозы, общего белка в крови, альбуминов и активность аланинаминотрансферазы. Отклонение от нормы высчитывается в процентах относительно размера шага. Размер шага высчитывается как разность наибольшего и наименьшего референсного значения нормативного показателя. За норму принимается отклонение от 0 до 1 балла, выше нормы от 1 до 24 %, ниже нормы от 1 до 10 % считаются как 1 балл. Показатели, повышенные относительно нормы на 25-50 % и сниженные на 11-24 % считаются в определении SAPS как 2 балла. Повышение на 51-100 % и снижение на 25-50 % - 3 балла, повышение более 100 % и снижение более 50 % - 4 балла по шкале SAPS. У глюкозы и АЛТ пониженные показатели не имеют клинического значения. Угнетенное общее состояние (апатия, ступор, сопор с анорексией и адинамией) оценивается дополнительно в 3 балла. Выделения из влагалища при ректальной пальпации дополнительно оцениваются в 2 балла, ощутимое увеличение матки и флюктуация при пальпации дополнительно оцениваются в 2 балла.

Соответственно определяется балл данного показателя.

Катионные белки содержатся в цитоплазматических гранулах нейтрофилов и оцениваются по показателю среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Для определения СЦК готовят мазки стабилизированной крови, которые окрашивают по методу Пигаревского в модификации Нестеровой. Мазки микроскопируют, подсчитывают нейтрофилы с учетом степени интенсивности окраски гранул. Учет результатов содержания катионных белков нейтрофилов вычисляют по формуле:

где Н1, Н2, Н3 - количество нейтрофилов с низким (1), средним (2) и высоким (3) содержанием катионных белков.

При совместном рассмотрении всех полученных показателей прогноз определяется в соответствие с таблицей 1.

В качестве переменных для расчета индекса SAPS послужили некоторые показатели клинического обследования, общего и биохимического анализа крови. Увеличение баллов SAPS было связано с высоким уровнем падежа больных животных. Критериями для подсчета SAPS являются изменение общего состояния, гнойные выделения при ректальной пальпации, частота дыхания, частота сердечных сокращений, температура тела, развитие токсического лейкоцитоза и концентрация глюкозы, общего белка в крови, альбуминов и активность аланинаминотрансферазы. Отклонение от нормы высчитывается в процентах относительно размера шага. Размер шага высчитывается как разность наибольшего и наименьшего референсного значения нормативного показателя. За норму принимается отклонение от 0 до 1 балла, выше нормы от 1 до 24 %, ниже нормы от 1 до 10 % считаются как 1 балл. Показатели, повышенные относительно нормы на 25-50 % и сниженные на 11-24 %, считаются в определении SAPS как 2 балла. Повышение на 51-100 % и снижение на 25-50 % - 3 балла, повышение более 100 % и снижение более 50 % - 4 балла по шкале SAPS. У глюкозы и АЛТ пониженные показатели не имеют клинического значения. Угнетенное общее состояние (апатия, ступор, сопор с анорексией и адинамией) оценивается дополнительно в 3 балла. Выделения из влагалища при ректальной пальпации дополнительно оцениваются в 2 балла, увеличение матки и флюктуация при пальпации дополнительно оцениваются в 2 балла.

Например, при частоте дыхания в норме у коровы 15-30 дыхательных движений, шаг равен 30-15=15. Если частота дыхания составляет 34 дыхательных движения, то соответственно превышение размера шага составит 26,7 %. Данное превышение по шкале SAPS оценивается в 2 балла (превышение от 25 до 50 %).

При оценке показателей SAPS в прогностике развития септических процессов в организме учитывают каждый из показателей. При максимальной оценке каждого показателя в бальной системе от 0 до 3 формула прогноза SAPS определялась при суммировании всех показателей.

Принцип метода определения катионных белков. При значениях рН 8,1-8,2 катионные белки являются единственным биополимером, с которым молекулы диахромного лимонного красителя прочного зеленого реагируют с образованием стойких ионных связей [3]. На хорошо обезжиренное предметное стекло наносят каплю гепаринизированной крови и делают тонкий мазок. Высушивают на воздухе. Проводят окрашивание в течение 15 мин готовым забуференным спиртовым раствором прочного зеленого: 100 мг сухого красителя прочного зеленого растворяют в 100 мл трис-HCl буфера на метаноле. рН доводят до 8,1-8,2 несколькими каплями 0,1 Н раствора КОН или HCl. Значения рН контролируют еще в течение нескольких дней. Состав раствора трис-HCl буфера на метаноле (200 мл общего объема):

- 0,2 М раствор трис-буфера (24,2 г сухого трис-буфера на 1 л дистиллированной воды) - 50 мл;

- 0,1 Н раствор соляной кислоты (1 мл концентрированной HCl на 120 мл дистиллированной воды) - 45 мл;

- метанол - 105 мл.

Готовый раствор прочного зеленого хранится в течение полугода при +4°С в темноте. Требует контроля рН перед применением (8,1-8,2).

После инкубации мазки ополаскивают в дистиллированной воде. Помещают в 0,25%-ный раствор азура А на 15-30 секунд для докрашивания ядер. Промывают дистиллированной водой, снова высушивают и микроскопируют под масляной иммерсией (увеличение 90×15) и подсчитывают нейтрофилы с учетом степени интенсивности окраски гранул. Нейтрофилы, у которых цитоплазма заполнена на 0-20 % гранулами с катионными белками, как правило, светло-бирюзового цвета, относятся к нейтрофилам с низким содержанием катионных белков (Н1). Нейтрофилы, у которых цитоплазма заполнена на 21 % и более гранулами с катионными белками светло-бирюзового цвета, относятся к нейтрофилам со средним содержанием катионных белков (Н2). Нейтрофилы, у которых цитоплазма заполнена более, чем наполовину яркими гранулами с катионными белками бирюзового цвета, относятся к нейтрофилам с высоким содержанием катионных белков (Н3).

После этого выводят средний цитохимический коэффициент (СЦК), который вычисляют по формуле:

где Н1, Н2, Н3 - количество нейтрофилов с низким (1), средним (2) и высоким (3) содержанием катионных белков.

При совместном рассмотрении всех полученных показателей прогноз определяется в соответствии с таблицей 1:

Таблица 1. Учет результатов для определения прогноза генерализации послеродовых гнойно-некротических осложнений у коров

Оценка SAPS Индекс СЦК Прогноз 0-6 балла 1,1-
1,9 благоприятный 0-6 балла 2-2,8 благоприятный 7-10 1,1-1,9 сомнительный, осторожный, необходимо лечение; 7-10 2-2,8 сомнительный, осторожный, необходимо лечение; 7-13 0-1 неблагоприятный

Пример 1. Результаты проведенного анализа коровы, обследованной в СПК «Большевик» расположенном в д. Ивановка Москаленского района Омской области. На 20 день после отела поставлен диагноз острый эндометрит, состояние коровы удовлетворительное, наблюдались выделения при ректальной пальпации, матка увеличена в размерах. Проведенные исследования, согласно формуле патента, позволили получить данные для подсчета критерия SAPS (представлены в таблице 2).

Отклонение от нормы высчитывается в процентах относительно размера шага, который высчитывается как разность наибольшего и наименьшего референсного значения нормативного показателя.

Таблица 2. Критерии оценки по шкале SAPS (Simplified Acute Physiology Score)

Показатель Баллы 4 3 2 1 0 1 2 3 4 Ниже нормы норма Выше нормы Отклонение он нормы, % Более 50 25-50 11-24 1-10 0 1-24 25-50 51-100 Более 100 Общее состояние естественное Выделения при пальпации отсутствуют Увеличение матки и флюктуация при ректальной пальпации ощутимы Температура тела, % (°С); норма: 37,5-39,0°С 0 (37,7) Частота дыхания, % (дых. движений в минуту (ДД/мин.)); норма 15-30 ДД/мин. 0 (15) Пульс, % (пульсовых волн в минуту или числоьсердечных сокращений в минуту: ЧСС/мин.); норма 50-80 ЧСС/мин 0 (60) Лейкоциты, % (абс.); норма 4-12 ×10⁹/л 0 (7,1) Палочкоядерные и юные нейтрофилы, % (абс.); норма 0-0,12 ×10⁹/л 0 (0,00) Сегментоядерные нейтрофилы, % (абс.); норма 0,6-4 ×10⁹/л 79 (6.01) Глюкоза, % (ммоль/л); норма 2,3-4,1 ммоль/л 0 (3,484) Общий белок, % (г/л); норма 62-82 г/л 3,6 (82,731) Альбумины, % (г/л); норма 28-39 г/л 0 (33,085) АЛТ, % (ЕД/л); норма 6,9-35 ЕД/л 11,4 (39,1)

У данной коровы увеличение матки и флюктуация - 2 балла. Сегментоядерные нейтрофилы - 6.01 ×10^9/л при клинической норме 0,6-4 ×10⁹/л. Шаг составил 4-0,6=3,4. Превышение в процентах относительно размера шага составило 2,61, то есть на 79 %, следует оценивать в 3 балла. Общий белок при норме 62-82 г/л - 82,731 г/л. Шаг в данном случае составил 20 (82-62). Отклонение от нормы - 0,731, то есть на 3,6 %, считается как 1 балл. Показатель аланинаминотрансферазы (АЛТ) при норме 6,9-35 ЕД/л составил 39,1, при размере шага 28,1 отклонение от нормы превысило 11,4 %, считается в 1 балл. Таким образом, индекс SAPS у коровы составил: 0+0+2+0+0+0+0+0+3+0+1+0+1=7 баллов.

При исследовании катионных белков количество нейтрофилов с низким содержанием составило 9, нейтрофилов со средним содержанием составило - 51 и высоким содержанием катионных белков - 40. Средний цитохимический показатель (средний цитохимический коэффициент, СЦК) содержания КБ в нейтрофилах составил:

Таким образом, при соотношении SAPS 7 баллов и СЦК 2,31 у данной коровы с признаками острого эндометрита прогноз установили сомнительный, осторожный, требующий лечения (см. таблицу 1). Данный прогноз использован в ветеринарно-технологических мероприятиях: корову изолировали и назначили ей комплексное лечение с внутриматочными таблетками Сепранол (3 дня), инъекцией антибиотика Лексофлон (5 дней). За коровой наблюдали в течение года. Клиническое оздоровление наступило через 8 суток - матка уменьшилась в объемах, прекратились выделения слизисто-гнойного характера, отсутствовал специфический запах. Благополучное осеменение прошло со второго раза, задержка сервис-периода составила 80 дней.

Пример 2. В соответствии с разработанной формулой в ЗАО «Племрепродуктор «Васильевское» Московской области Сергиево-Посадского района в послеродовой период были обследованы 20 голов коров второго-четвертого отела черно-пестрой породы высокой степени голштинизации через 20 дней после родов. В соответствие с заявленной формулой были проанализированы показатели для расчета по шкале SAPS (см. табл. 3).

Таблица 3. Показатели клинико-гематологического исследования коров ЗАО «Племрепродуктор «Васильевское»), используемые в шкале SAPS

Номер коровы Состояние Выделения при ректальной пальпации / увеличение и флюктуация матки Температура 37,5-39 Пульс 50-80 Частота дыхания -15-30 Лейкоциты палочкоядерные нейтрофиы сегментоядерные нейтрофилы 0,6-4 x10^9/л Глюкоза 2,3-4,1 ммоль/л Общий белок 62-82 г/л Альбумины 24-38 г/л АЛТ 6,9-35 ед/л 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1 естеств да /да 39,1 71 39 8,3 0,00 3,30 3,463 86,753 33,085 42,1 2 естеств да/да 38,5 50 18 8,1 0,00 2,84 3,789 88,605 32,22 33,8 3 естеств да/да 38,6 58 38 11,7 0,12 5,50 3,077 84,189 29,423 24,7 4 естеств да/да 38,9 55 18 9,5 0,00 4,66 3,635 86,302 33,08 33,6 5 естеств да/да 39,0 70 38 8,2 0,00 3,20 3,457 87,147 33,118 43,8 6 естеств да/да 38,7 69 39 10,9 0,00 4,14 3,786 84,409 32,487 41,8 7 естеств да/да 37,9 50 36 6,7 0,00 2,48 3,769 73.178 27,187 13,3 8 естеств да/да 38.5 60 39 10,5 0,00 5,15 4,144 92,52 31,792 33,3 9 естеств да/да 39,0 60 35 12,8 0,00 8,06 3,923 99,009 23,21 11,7 10 естеств да/да 39,9 70 50 12,4 0,00 6,57 2,962 85,017 32,215 39,8 11 естеств да/да 39,1 60 18 8,5 0,00 2,72 3,661 91,286 30,113 51,0 12 естеств да/да 38,5 55 32 9,8 0,00 4,41 3353 86,251 33,594 41,5 13 Естеств да/да 38,4 60 37 7,5 0,15 3,83 3,059 80,787 31,095 26,2 14 естеств да/да 38,3 57 39 5,7 0,00 1,20 3,128 95,956 29,184 22,2 15 естеств да/да 38,7 59 39 6,7 0,00 3,87 3,545 83,806 32,937 37,4 16 тяжелое да/да 37,5 70 55 8,3 0,00 7,03 3,246 80,548 30,125 28,4 17 тяжелое да/да 38,3 65 54 9,5 0,00 7,56 2,897 80,569 31,256 20,4 18 удовл да/да 39,4 72 49 7,8 0,00 6,45 3,547 83,856 29,458 15,5 19 естеств да/нет 38,7 56 20 5,7 0,00 2,7 3,484 72,851 34-26 37,0 20 естеств да/да 37,9 59 15 8,2 0,00 2,78 3,792 88,245 31,25 32,7

В соответствие с заявленной формулой были рассчитаны показатели SAPS, после чего подсчитаны данные СЦК по изученным в приготовленных мазках-препаратах степени окрашивания и количеству клеток с катионными белками нейтрофилов. На основании предложенного способа составлен прогноз генерализации гнойно-септических осложнений у коров, данные представлены в таблице 4.

Таблица 4. - Показатели SAPS, СЦК и прогноз генерализации гнойно-септических осложнений у коров ЗАО «Племрепродуктор «Васильевское»

Корова SAPS СЦК Прогноз 1 7 2,1 сомнительный, осторожный, необходимо лечение 2 3 1,9 благоприятный 3 5 2,3 благоприятный 4 6 2,6 благоприятный 5 7 2,2 сомнительный, осторожный, необходимо лечение 6 8 2,2 сомнительный, осторожный, необходимо лечение 7 3 2 благоприятный 8 8 2 сомнительный, осторожный, необходимо лечение 9 8 2,2 сомнительный, осторожный, необходимо лечение 10 9 1,1 неблагоприятный 11 7 2,23 сомнительный, осторожный, необходимо лечение 12 6 1,83 благоприятный 13 6 2,16 благоприятный 14 6 2,2 благоприятный 15 8 2,1 сомнительный, осторожный, необходимо лечение 16 10 0,9 неблагоприятный 17 10 1,0 неблагоприятный 18 9 1,0 неблагоприятный 19 2 1,76 благоприятный 20 3 1,9 благоприятный

В течение 40-дневного срока последующего наблюдения прогноз подтвердился: коровы с неблагоприятным прогнозом №16,17, не смотря на проводимое лечение пали, №10,18 были подвергнуты вынужденному убою в критическом состоянии, все остальные коровы, при комплексном лечении, включавшем промыв матки антисептиками, инъекции антибиотиков и стимуляторов миометрия (цефтиосан, кетоджект) выздоровели.

Таким образом, предлагаемый способ прост в выполнении, обладает высокой диагностической эффективностью, может выполняться в любой лаборатории. Как видно из представленных данных, способ прогностики сепсиса может использоваться для исследования и оценки состояния животных для принятия дальнейшего технологического решения о целесообразности лечения больных острым эндометритом коров и стратегии терапевтической тактики.

Источники информации

1. Глазунов, Е.А. Изучение профилактической эффективности препарата бактериофагов при эндометритах у коров в условиях молочно-товарной фермы / Е.А. Глазунов, Н.В. Пименов, Л.Ф. Сотникова // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2016, №5(53). - P. 90-96.

2. Александрович, Ю.С., Гордеев В.И. Оценочные и прогностические шкалы в медицине критических состояний Изд-во «Сотис». - 2007. - C.37.

3. Воронина, О.А., Царькова, М.С., Брылина, В.Е. Оценка активности антимикробных пептидов гранулоцитов здоровых собак //Ветеринария, зоотехния и биотехнология. 2018. №12. С.102-105.

4. Нестерова, И.В. и др. Методы комплексной оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов в норме и патологии (методические рекомендации) //Методические рекомендации. Краснодар. - 2017. - Т. 50.

Изобретение относится к области ветеринарии и касается прогнозирования исходов послеродовых осложнений у коров. Способ включает оценку состояния животного в соответствии с критериями для подсчёта SAPS, такими как изменение общего состояния, гнойные выделения при ректальной пальпации, частота дыхания, частота сердечных сокращений, температура тела, развитие токсического лейкоцитоза и концентрация глюкозы, общего белка в крови, альбуминов и активность аланинаминотрансферазы, где отклонение от нормы высчитывается в процентах относительно размера шага, при этом размер шага высчитывается как разность наибольшего и наименьшего референсного значения нормативного показателя. Присваивают каждому определяемому критерию соответствующий балл. При оценке показателей SAPS в прогностике развития септических процессов в организме учитывают каждый из показателей, при максимальной оценке каждого показателя в балльной системе от 0 до 3 формула прогноза SAPS определяется при суммировании всех показателей. При значении SAPS 0-6 баллов и индекса СЦК 1,1-1,9 или 2-2,8 прогнозируют благоприятный исход послеродовых осложнений у коров. При значении SAPS 7-10 баллов и индекса СЦК 1,1-1,9 или 2-2,8 прогнозируют сомнительный исход послеродовых осложнений у коров. При значении SAPS 7-13 баллов и индекса СЦК 0-1 прогнозируют неблагоприятный исход послеродовых осложнений у коров. Изобретение позволяет определить благоприятный, осторожный или неблагоприятный прогноз при гнойно-септических послеродовых осложнениях у коров и прибегнуть к адекватным технологическим и ветеринарным мероприятиям. 4 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования исходов послеродовых осложнений у коров, характеризующийся тем, что оценку состояния животного проводят в соответствии с критериями для подсчёта SAPS, такими как изменение общего состояния, гнойные выделения при ректальной пальпации, частота дыхания, частота сердечных сокращений, температура тела, развитие токсического лейкоцитоза и концентрация глюкозы, общего белка в крови, альбуминов и активность аланинаминотрансферазы, где отклонение от нормы высчитывается в процентах относительно размера шага, при этом размер шага высчитывается как разность наибольшего и наименьшего референсного значения нормативного показателя, при этом за норму принимается отклонение от 0 до 1 балла, выше нормы от 1 до 24%, ниже нормы от 1 до 10% считаются как 1 балл, а показатели, повышенные относительно нормы на 25-50% и сниженные на 11-24%, считаются в определении SAPS как 2 балла, повышение на 51-100% и снижение на 25-50% - 3 балла, повышение более 100% и снижение более 50% - 4 балла по шкале SAPS; угнетённое общее состояние - апатия, ступор, сопор с анорексией и адинамией, оценивается дополнительно в 3 балла, выделения из влагалища при ректальной пальпации дополнительно оцениваются в 2 балла, увеличение матки и флюктуация при пальпации дополнительно оцениваются в 2 балла, при частоте дыхания в норме у коровы 15-30 дыхательных движений, шаг равен 30-15=15, если частота дыхания составляет 34 дыхательных движения, то, соответственно, превышение размера шага составит 26,7 %, данное превышение по шкале SAPS оценивается в 2 балла; при оценке показателей SAPS в прогностике развития септических процессов в организме учитывают каждый из показателей, при максимальной оценке каждого показателя в балльной системе от 0 до 3 формула прогноза SAPS определяется при суммировании всех показателей, при значении SAPS 0-6 баллов и индекса СЦК 1,1-1,9 или 2-2,8 прогнозируют благоприятный исход послеродовых осложнений у коров; при значении SAPS 7-10 баллов и индекса СЦК 1,1-1,9 или 2-2,8 прогнозируют сомнительный исход послеродовых осложнений у коров; при значении SAPS 7-13 баллов и индекса СЦК 0-1 прогнозируют неблагоприятный исход послеродовых осложнений у коров.