Способ прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей Российский патент 2024 года по МПК G01N33/68 G01N33/573 

Изобретение относится к области медицины, а именно, к детским инфекционным болезням, педиатрии, и предназначено для прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей.

В настоящее время большую актуальность приобрели проблемы персистирующих инфекций, в частности, обусловленных вирусом Эпштейна-Барр, относящимся к семейству герпесвирусов 4 типа (Баранова И.П. Роль инфекционного мононуклеоза в формировании частых заболеваний у детей / И.П. Баранова, О.Н. Лесина, Д.Ю. Курмаева // Инфекционные болезни. Приложение №1. - 2011. - Т. 9. - С.36; Касымова Е.Б. Динамика герпесвирусных инфекций у детей Астраханской области по данным ПЦР-диагностики / Е.Б. Касымова, О.А. Башкина, Х.М. Галимзянов, Р.Ш. Зулькарнеев // Астраханский медицинский журнал. - 2012. - Т. 7. - №2. - С. 116-119; Касымова Е.Б. Ключевые вопросы диагностики и лечения инфекционного мононуклеоза / Е.Б. Касымова, О.А. Башкина, Х.М. Галимзянов // Астраханский медицинский журнал. - 2016. - Т. 11. - №3. - С.38-44; Chan C.W. Epstein-Barr virus-associated infectious mononucleosis in Chinese children / C.W. Chan, A.K. Chiang, K.H. Chan, A.S. Lau // The Pediatric Infectious Disease Journal. - Baltimore, Md.: Williams & Wilkins, 2003. - Vol.22. - №11. _ p.974-978).

После попадания в организм вирусная ДНК может встраиваться в геном В-лимфоцитов и реплицироваться вместе с ДНК клетки-хозяина, что является причиной латентной инфекции, которая длится пожизненно. По современным оценкам инфицированность населения вирусом Эпштейна-Барр очень высока и приближается к 99% (Chan C.W. Epstein-Barr virus-associated infectious mononucleosis in Chinese children / C.W. Chan, A.K. Chiang, K.H. Chan, A.S. Lau // The Pediatric Infectious Disease Journal. - Baltimore, Md.: Williams & Wilkins, 2003. - Vol.22. -№11. - P. 974-978; Crawford D.H. Sexual history and Epstein-Barr virus infection / D.H. Crawford, A.J. Swerdlow, C. Higgins et al. // The Journal of Infectious Diseases: An office, publ. of the Infections diseases s-ty of America. - Chicago: Univ. of Chicago press, 2002. - Vol.186. - №6. - P. 731-736). Обычно, первичное инфицирование вирусом Эпштейна-Барр происходит в возрасте до 5 лет и, в большинстве случаев, протекает бессимптомно, либо под маской острой респираторной вирусной инфекции. При инфицировании в более старшем возрасте может развиться клиническая картина инфекционного мононуклеоза. У иммунокомпетентных лиц вирус сохраняется в организме в латентной форме, у иммунокомпрометированных возможно развитие хронического мононуклеоза, увеита, гепатита, тяжелых лимфопролиферативных, злокачественных, аутоиммунных заболеваний и других. Вследствие иммуносупрессии различного происхождения может происходить реактивация латентной инфекции (Иванова О.Н. Лечение хронической инфекции вируса Эпштейна-Барр у детей / О.Н. Иванова // Якутский медицинский журнал. - 2017. - Т. 60. - №4. - С.63-64; Симованьян Э.Н. Эффективность применения инозина пранобекс у часто болеющих детей с хронической Эпштейна-Барр вирусной инфекцией: результаты рандомизированного исследования / Э.Н. Симованьян, В.Б. Денисенко, А.В. Григорян // Вопросы современной педиатрии. - 2011. - Т. 10. - №2. - С.16-21; Касымова Е.Б. Эпштейна-Барр вирусная инфекция / Е.Б. Касымова, О.А. Башкина, К.Ж. Енгибарян, Н.В. Петрова, А.А. Шилова, Х.И. Арсанова. - Учебное пособие. - Астрахань, Астраханский ГМУ, 2021. - 153 с; Перадзе Х.Д. Клинике-лабораторные особенности острых и хронических форм Эпштейна-Барр вирусной инфекции (инфекционного мононуклеоза) у подростков и лиц молодого возраста: автореф. дис. … канд. мед. наук / Перадзе Хатума Джемалиевна. - СПб. 2003, 23 с).

Неблагоприятное течение Эпштейна-Барр вирусной инфекции с формированием полиорганных поражений, переходом в хроническую форму, индукцией онкологической, аутоиммунной и другой патологии является основанием для разработки способов прогнозирования рецидивов этой вирусной инфекции. Это позволяет своевременно провести комплексную терапию с использованием препаратов, воздействующих на различные этапы жизненного цикла вируса, проведения этапной реабилитации пациентов.

На сегодняшний день для прогнозирования развития рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции используют лабораторные показатели (специфические и/или неспецифические), использование которых обосновано современными представлениями об иммунопатогенезе этой инфекции.

Известен способ прогнозирования тяжелого течения инфекционного мононуклеоза у детей (Букина А.А. Клинико-этиологические аспекты и новые подходы к терапии инфекционного мононуклеоза у детей: автореф. дис. … канд. мед. наук / Букина Алла Андреевна. - СПб. 2000, 22 с).

Недостатком данного способа является сложность разработанного алгоритма, включающего большое количество параметров; необходимость использовать 4 варианта количественной РСК (реакции связывания комплемента), основанной на количественном учете показателя лизиса эритроцитов барана; длительность выполнения и его сложность, обусловленная необходимостью специально обученного персонала.

Описан способ прогнозирования тяжести инфекционного мононуклеоза различной этиологии у детей (Патент RU 2360255 С1 от 27.06.2009. Бюл. №18).

Недостатком предложенного способа является невозможность эффективного использования для прогноза рецидивирования Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

Известен способ прогнозирования течения инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр, у детей (Патент RU 2285262 С1 от 10.10.2006. Бюл. №28).

Недостатки способа заключаются в том, что он не дает возможности отследить рецидивирующее течение заболевания; требует дополнительных финансовых затрат на исследование цитокинов, что в широкой практике не везде применимо.

За прототип предлагаемого изобретения выбран способ прогнозирования рецидивирования Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей («Способ прогнозирования рецидивирования Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей» Антонова М.В., Кашуба Э.А., Дроздова Т.Г., Козлов Л.Б., патент на изобретение №2708460 от 09.12.2019 г.), который предусматривает оценку иммунологических параметров методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что при наличии антител к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр класса IgG и в указанных пределах абсолютного количества показателей CD3⁺2,1-6,2×10⁹/л, CD7⁺2,0-4,3×10⁹/л CD8⁺0,2-0,8×10⁹/л осуществляют прогнозирование развития клинических проявлений рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

Цитотоксические Т-лимфоциты с фенотипом CD3+CD7+CD8+ играют ведущую роль в защите от внутриклеточных патогенов, в т.ч. вируса Эпштейна-Барр, что позволяет рассматривать данную популяцию клеток периферической крови в качестве основной мишени для терапевтических воздействий. Однако, вирус Эпштейна-Барр может вступать в сложные взаимодействия с иммунной системой, манипулируя каскадом иммунопатологических реакций, и, в конечном итоге, приводить к формированию вторичного иммунодефицитного состояния. На этом фоне нарушаются эффекторные свойства лимфоцитов CD3+CD7+CD8+. В этой связи определение цитотоксических Т-лимфоцитов становится малоинформативным.

Недостатками указанного прототипа является и его сложность, обусловленная сравнительно большим числом определяемых показателей; многоступенчатость обработки образцов клеток; необходимость в специальном оборудовании и соответствующих специалистов; высокая стоимость проведения исследования.

Предлагаемое изобретение отвечает критерию изобретения «новизна», так как в процессе проведения патентно-информационных исследований не выявлено технических решений, порочащих новизну предлагаемого способа.

Изобретение позволяет упростить прогнозирование рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей, оптимизировать тактику ведения больного на этапах динамического наблюдения и лечения.

Технический результат достигается тем, что у детей определяют в плазме крови антитела класса IgG к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр методом иммуноферментного анализа и концентрацию неоптерина методом энзим-связанного иммуносорбентного анализа, и при наличии антител класса IgG к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр и концентрации неоптерина боле 4,2 нмоль/л прогнозируют рецидив Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

Для установления наличия инфекции важная роль отведена серологическому исследованию - выявлению иммунных антител к Эпштейну-Барр вирусу. Наличие антител к ядерному антигену IgG свидетельствует о том, что вирус Эпштейна-Барр в организме давно - более 4 месяцев. Данные антитела синтезируются последними и остаются в организме пожизненно. Поэтому их выявление при неоднозначных симптомах позволяет говорить, что причиной заболевания является вирус Эпштейна-Барр, длительно персистирующий в организме или период его реактивации (Малашенкова И.К. Клинические формы хронической Эпштейн-Барр-вирусной инфекции: вопросы диагностики и лечения / И.К. Малашенкова, Н.А. Дидковский, Ж.Ш. Сарсания и др. // Лечащий врач. - 2003. - №9. - С.8-10; Касымова Е.Б. Ключевые вопросы диагностики и лечения инфекционного мононуклеоза / Е.Б. Касымова, О.А. Башкина, Х.М. Галимзянов // Астраханский медицинский журнал. -2016. - Т. 11. - №3. - С.38 - 44). Исследование проводят методом имму но ферментного анализа на тест-системах фирмы «Вектор-Бест» (г.Новосибирск, РФ).

В данной связи особо актуально определять концентрацию неоптерина при таком варианте инфекции. Неоптерин - биологически устойчивый метаболит, что свидетельствует о преимуществе его определения для оценки активности иммунного ответа (Capuron L., Geisler S., Kurz К. et al. Activated immune system and inflammation in healthy ageing: relevance for tryptophan and neopterin metabolism // Curr. Pharm. Des. - 2014. - Vol.20, №38. -P. 6048-6057; Chan C.P., Choi J.W., Cao K.Y. et al. Detection of serum neopterin for early assessment of dengue virus infection // J. Infect. - 2006. - Vol.53, №3. - P. 152-158; Cok G., Parildar Z., Basol G. et al. Pleural fluid neopterin levels in tuberculous pleurisy // Clin. Biochem. - 2007. - Vol.40, №12. - P. 876-880; DemirturkN., Demirdal Т., Aktepe O.C. et al. Serum neopterin levels in patients with HBV infection at various stages // Hepatogastroenterology. -2007. - Vol.54, №75. - P. 903-905).

Для определения концентрации неоптерина в образцах плазмы крови использовался метод энзим-связанного иммуносорбентного анализа (ELI-SA - enzyme-linked immunosorbent assay). При постановке реакции применялись коммерческие тест-наборы «Neopterin ELISA» (фирмы «IBL» Германия). У детей с Эпштейна-Барр вирусной инфекцией проводили забор венозной крови стандартным способом: в утренние часы, натощак, в пробирки объемом 5 мл. Свежесобранные образцы немедленно помещались на лед. Плазма выделялась путем центрифугирования со скоростью 2000 оборот/минуту в течение 15 минут и помещалась в силиконовые пробирки.

Образцы замораживали и доставляли в специальном холодильнике в лаборатории, где хранились при температуре -20°С до проведения анализа.

Все данные, полученные в ходе исследования, обработали методами параметрической статистики с помощью программы Microsoft Excel с опцией «Анализ данных». Вычисляли М (среднее арифметическое), m (ошибку средней), SD (стандартное отклонение), Me (медиану), 25% Q1 (25 прецентиль), 75% Q3 (75 прецентиль). Для оценки различий средних тенденций между группами использовали критерий Манна-Уитни (U). Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Различия значений считали достоверными при уровне вероятности более 95% (р<0,05).

Предлагаемый способ прошел успешную апробацию на базе ГБУЗ АО «Областная инфекционная клиническая больница им. Ничоги А.М.» и детских поликлиник г. Астрахани.

Промышленная применимость способа и его работоспособность подтверждена на материале обследования и лечения 100 детей с Эпштейна-Барр вирусной инфекцией.

Ниже приводятся результаты апробации.

Клинический пример 1

Эвелина И., 3 года 3 мес.Диагноз при поступлении: ОРВИ. Лакунарная ангина. Из анамнеза: 8 месяцев назад перенесла инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр (стационарное лечение).

Для реализации нашей задачи исследования, пациентку обследовали на возможность рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

При осмотре: общее состояние средней степени тяжести. Кожные покровы бледно-розовые, чистые, умеренной влажности. Пальпируется вся группа шейных лимфоузлов до 1,5 см, мягкоэластичной консистенции, подвижные, безболезненные, не спаянные между собой и окружающими тканями. Носовое дыхание умеренно затруднено, отделяемое из носовых ходов скудное, слизистое. Аускультативно в легких пуэрильное дыхание, хрипов нет, ЧДД 24 в мин. Тоны сердца ясные, громкие, ритмичные, шумов нет, ЧСС 118 уд. в мин. В зеве разлитая гиперемия, миндалины до 2 размера, рыхлые, гипертрофированные, гнойного выпота нет. Язык обложен белым налетом. Живот мягкий, безболезненный, доступен глубокой пальпации во всех отделах. Печень +1,5 см из-под правого края реберной дуги. Селезенка+0,5 см. Стул оформленный. Мочится свободно, безболезненно.

Лабораторно: Общий анализ крови: эр - 4,18×10¹²/л, Hb - 127 г/л, ЦП 0,9, Тр - 243 г/л, Ле - 8,1×10⁹/л, с/я - 10%, лимф - 75%, м - 9%, СОЭ 17 мм/час. В биохимии крови: об. билирубин - 10,4 мкмоль/л, АлТ - 28,8 Е/л, АсТ - 26,5 Е/л, креатинин - 73 мкмоль/л, мочевина - 4,8 ммоль/л, тимоловая проба - 3,0 Ед. Методом ИФА обнаружены EBV nuclear antigen (EBNA) IgG. Концентрация неоптерина в плазме крови - 6,4 нмоль/л.

После получения результата ПЦР крови на ДНК к ВПГ 1,2 типа - отрицательно. ПЦР крови на ДНК ЦМВ - отрицательно. ПЦР крови на ДНК ВЭБ - положительно.

Таким образом, у данной пациентки прогнозирован рецидив Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

Окончательный диагноз: Эпштейна-Барр вирусный инфекционный мононуклеоз, рецидив, средней степени тяжести.

Клинический пример 2

Рафаэль К., 4 года 5 мес.Диагноз при поступлении: ОРВИ. О. тон-зиллофарингит.Из анамнеза: около 18 месяцев назад перенес инфекционный мононуклеоз Эпштейна-Барр вирусной этиологии (подтвержден клин.+ИФА+ПЦР). Пациента обследовали на возможность рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

При осмотре: общее состояние ребенка средней степени тяжести. Лихорадит до 39°С. Кожные покровы и видимые слизистые чистые, обычной окраски. Дыхание через нос затруднено, скудное серозное отделяемое из носовых ходов. Пальпируются передне- и заднешейные лимфатические узлы до 2 размера в виде «цепочки», плотновато-эластичной консистенции, безболезненные, не спаянные между собой и окружающими тканями. Задняя стенка глотки гиперемированная, зернистая. Миндалины до 3 размера, рыхлые, гипертрофированные, желтые налеты, которые легко снимаются шпателем, не кровоточат. Перкуторно над легкими легочный звук неизменен, аускультативно - везикулярное дыхание, ЧДД 22 в мин. Сердечные тоны умеренно приглушены, ритмичные, ЧСС 120 уд/мин. Печень +2,0 см из-под правого края реберной дуги. Селезенка не пальпируется. Стул оформленный. Мочится свободно.

Лабораторно: Общий анализ крови: эр - 3,38×10¹²/л, Ле - 7,4×10⁹/л, п/я - 4%, с/я - 56%, лимф - 37%, м - 3%, СОЭ 11 мм/час. В биохимии крови: о. белок - 75 мкмоль/л, глюкоза - 5,0 ммоль/л, об. билирубин - 6,2 мкмоль/л, АлТ - 26,8 Е/л, АсТ - 24,5 Е/л, креатинин - 75 мкмоль/л, мочевина - 4,0 ммоль/л, тимоловая проба - 2,2 Ед.

Методом ИФА обнаружены EBV nuclear antigen IgG. Концентрация неоптерина в плазме крови - 7,1 нмоль/л.

После получения результата ПЦР крови на ДНК к ВПГ 1,2 типа - отрицательно. ПЦР крови на ДНК ЦМВ - отрицательно. ПЦР крови на ДНК ВЭБ - положительно.

В результате обследования данные прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции были подтверждены.

Окончательный диагноз: Эпштейна-Барр вирусный инфекционный мононуклеоз, рецидив, средней степени тяжести.

Клинический пример 3

Андрей А., 7 лет, Диагноз при поступлении: ОРВИ. Из анамнеза известно, что 2 года назад перенес Эпштейна-Барр вирусный инфекционный мононуклеоз (подтвержден. клин.+ИФА).

Пациент обследован на возможность развития рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

При осмотре: общее состояние ребенка средней степени тяжести. Кожные покровы и видимые слизистые чистые, бледноватые, умеренной влажности. Передне- и заднешейные лимфоузлы до 1 см, мягкие, эластичные, подвижные, не спаянные между собой и окружающими тканями, безболезненные. Носовое дыхание умеренно затруднено, отделяемого из носовых ходов нет. Дыхание везикулярное, проводится по всем легочным полям, хрипы не выслушиваются, ЧДД 20 в минуту. Тоны сердца ясные, громкие, ритмичные, шумов нет. ЧСС 108 минуту. АД 120/70 мм.рт.ст. В зеве - яркая разлитая гиперемия, миндалины до 1 размера, рыхлые, гипертрофированные, в лакунах налетов нет. Язык чистый, влажный. Живот мягкий, безболезненный, доступен глубокой пальпации во всех отделах. Печень и селезенка не пальпируются. Стул, мочеиспускание без особенностей.

Лабораторно: Общий анализ крови: эр - 3,48×10¹²/л, Ле - 10,6×10⁹/л, п/я - 6%, с/я - 56%, лимф - 26%, м - 4%, СОЭ 12 мм/час. В биохимии крови: о. белок - 66 мкмоль/л, глюкоза - 3,5 ммоль/л, об. билирубин - 8,4 мкмоль/л, АлТ - 14,4 Е/л, АсТ - 8,7 Е/л, креатинин - 75 мкмоль/л, мочевина - 4,2 ммоль/л, тимоловая проба - 2 Ед.

Методом ИФА обнаружены EBV nuclear antigen IgG. Концентрация неоптерина в плазме крови -1,6 нмоль/л.

После получения результата ПЦР крови на ДНК к ВПГ 1,2 типа - отрицательно. ПЦР крови на ДНК ЦМВ - отрицательно. ПЦР крови на ДНК ВЭБ - отрицательно.

Таким образом, у пациента нет данных за развитие рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции.

Пациенту был поставлен окончательный диагноз: Острая респираторная вирусная инфекция средней степени тяжести.

Клинические примеры иллюстрируют возможность применения предложенного способа для прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей.

Достоинствами предлагаемого способа прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей является его простота исполнения, невысокая стоимость исследования, снижает затраты на необоснованное лечение, может использоваться в амбулаторно-поликлинических отделениях и специализированных инфекционных стационарах.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, инфектологии, и может быть использовано для прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей. Проводят исследование крови. В плазме крови определяют антитела класса IgG к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр методом иммуноферментного анализа и концентрацию неоптерина методом энзим-связанного иммуносорбентного анализа. При наличии антител класса IgG к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр и концентрации неоптерина более 4,2 нмоль/л прогнозируют рецидив Эпштейна-Барр вирусной инфекции. Способ обеспечивает возможность упрощения прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей, оптимизирования тактики ведения больного на этапах динамического наблюдения и лечения, за счет определения в крови наличия антител класса IgG к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр и концентрации неоптерина. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования рецидива Эпштейна-Барр вирусной инфекции у детей, включающий исследование крови, отличающийся тем, что определяют в плазме крови антитела класса IgG к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр методом иммуноферментного анализа и концентрацию неоптерина методом энзим-связанного иммуносорбентного анализа, и при наличии антител класса IgG к нуклеарному антигену вируса Эпштейна-Барр и концентрации неоптерина более 4,2 нмоль/л прогнозируют рецидив Эпштейна-Барр вирусной инфекции.