ПРИМЕНЕНИЕ ИНГИБИТОРА КАСПАЗЫ ДЛЯ ОБЛЕГЧЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ОСТЕОАРТРИТА Российский патент 2024 года по МПК A61K9/00 A61K31/197 A61K31/4725 A61P19/00 A61P19/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к применению ингибитора каспазы для облегчения или лечения остеоартрита.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Каспазы представляют собой цистеиновые протеазы, которые существуют в форме тетрамера α2β2. Каспаза-1 (ICE), одна из них, является разновидностью цитокинов и участвует в превращении неактивного проинтерлейкина-1β в активный интерлейкин-1β. Интерлейкин-1 включает интерлейкин-1α и интерлейкин-1β, оба из которых синтезируются в моноцитах в форме предшественника с молекулярной массой 31 кДа. Только проинтерлейкин-1β активируется ICE. Положения, гидролизуемые каспазой-1, представляют собой Asp²⁷-Gly²⁸ и Asp¹¹⁶-Ala¹¹⁷. Гидролиз последнего положения дает интерлейкин-1β. Сообщалось, что интерлейкин-1β действует как важный медиатор, вызывающий воспаление. Каспаза-1 была впервые обнаружена в 1989 г., и двумя независимыми исследовательскими группами была определена ее трехмерная структура кристаллографическим анализом с использованием рентгеновских лучей.

Каспаза-3 (СРР-32) широко изучается на предмет ее роли или механизма действия, и ее трехмерная структура была определена в 1996 г. Каспаза-3 (апопаин), активированная из прокаспазы-3, гидролизует мотив (P4)Asp-X-X-Asp(P1), и известные субстраты включают поли (ADP-рибоза) полимеразу, малый ядерный рибонуклеопротеин U1 70000 Mr и каталитическую субъединицу 460000 Mr ДНК-зависимой протеинкиназы, и т.д. Сообщалось, что рентгеновская структура каспазы-7 очень похожа на структуру каспазы-3.

Каспазы-8 и 9 находятся выше каспазы-3, 6 и 7, и известно, что эти каспазы участвуют в каскаде апоптоза. Рентгеновская структура каспазы-8 была определена в 1999 г., и, в частности, ее ингибиторы могут успешно использоваться для лечения заболеваний, связанных с апоптозом.

К ингибиторам каспазы относятся те соединения, которые ингибируют активность каспазы и таким образом контролируют такие симптомы, как воспаление, апоптоз и т. д., вызванные активностью каспазы. Известно, что среди ингибиторов каспаз необратимый ингибитор проявляет более эффективную ингибирующую активность, поскольку он необратимо инактивирует фермент для контроля апоптоза. В качестве заболеваний, ассоциированных с каспазами, известны слабоумие, инсульт, диабет, язва желудка, ишемическая болезнь сердца и т.д.

Остеоартрит представляет собой заболевание, вызванное разрушением суставного хряща и подлежащей костной ткани, и частыми симптомами являются боль в суставах и тугоподвижность. Вначале боль ощущается только при движении, но по мере того, как она становится хронической, боль ощущается постоянно. До сих пор не существует фундаментального лечения остеоартрита, и в качестве симптоматической терапии используют внутрисуставные стероиды для облегчения боли, пероральные или местные нестероидные противовоспалительные препараты (NSAID) и подобные. Однако в случае со стероидами их применение ограничено из-за различных побочных эффектов, влияющих на обмен веществ в организме, и при повторном применении постепенно развивается резистентность к действию. Недавно был одобрен состав стероида с пролонгированным высвобождением, но безопасность при длительном применении тщательно контролируется. Кроме того, в случае пероральных NSAID, их использование ограничено из-за побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта и повышенного сердечно-сосудистого риска.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА

Соответственно, технической проблемой настоящего изобретения является создание композиции для облегчения или лечения остеоартрита, для которого не существует фундаментального лечения, а только симптоматическое лечение для облегчения боли, которая может демонстрировать долгосрочный обезболивающий эффект и улучшать функцию и структуру хряща при однократном введении без риска побочных эффектов или резистентности к действию традиционно используемых терапевтических агентов.

РЕШЕНИЕ ПРОБЛЕМЫ

Для решения вышеуказанной технической проблемы, настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию для облегчения или лечения остеоартрита, обладающую длительным эффектом при однократном введении, которая содержит терапевтически эффективное количество ингибитора каспазы вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

Кроме того, настоящее изобретение предлагает способ облегчения или лечения остеоартрита в течение длительного времени, включающий введение терапевтически эффективного количества ингибитора каспазы субъекту, нуждающемуся в этом, путем однократного введения.

Кроме того, настоящее изобретение предлагает применение ингибитора каспазы для облегчения или лечения остеоартрита в течение длительного времени при однократном введении.

Далее настоящее изобретение описано подробно.

Настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию для облегчения или лечения остеоартрита, обладающую длительным эффектом при однократном введении, которая содержит терапевтически эффективное количество ингибитора каспазы вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

Ингибиторы каспазы привлекли внимание в качестве гепатоцит-протекторных лекарственных средств или терапевтических агентов для заболеваний, связанных с воспалением, путем вмешательства в активность каспаз, которые играют существенную роль в апоптозе, некрозе и воспалении. Авторы настоящего изобретения завершили настоящее изобретение, подтвердив неожиданный результат, заключающийся в том, что при применении ингибитора каспазы при остеоартрите он может проявлять не только долгосрочный обезболивающий эффект, но также эффект улучшения структуры хряща только при однократном введении.

В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящего изобретения, ингибитор каспаз выбран из группы, состоящей из нивокасана, IDN-1965, эмрикасана, MX-1013, пралнакасана, RU-36384, белнакасана и их фармацевтически приемлемой соли, но не ограничен ими.

Нивокасан представляет собой (R)-N-((2S,3S)-2-(фторметил)-2-гидрокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил]-5-изопропил-3-(изохинолин-1-ил)-4,5-дигидроизоксазол-5-карбоксамид следующей формулы 1.

[Формула 1]

IDN-1965 представляет собой 3-[2(S)-(1,3-диметил-1H-индол-2-илкарбоксамидо)-3-метилбутанамидо]-5-фтор-4-оксопентановую кислоту следующей формулы 2.

[Формула 2]

Эмрикасан (IDN-6556) представляет собой N-(2-трет-бутилфенил)-2-оксоглицил-N-[1(S)-(карбоксиметил)-2-оксо-3-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пропил]-L-аланинамид следующей формулы 3.

[Формула 3]

MX-1013 представляет собой N-(бензилоксикарбонил)-L-валил-DL-аспартилфторметан следующей формулы 4.

[Формула 4]

Пралнакасан представляет собой N-[2(R)-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3(S)-ил]-9(S)-(1-изохинолинилкарбоксамидо)-6,10-диоксооктагидро-6H-пиридазино[1,2-a][1,2]диазепин-1(S)-карбоксамид следующей формулы 5.

[Формула 5]

RU-36384 представляет собой 3(S)-[9(S)-(1-изохинолинилкарбоксамидо)-6,10-диоксооктагидро-6H-пиридазино[1,2-a][1,2]диазепин-1(S)-илкарбоксамидо]-4-оксобутановую кислоту следующей формулы 6.

[Формула 6]

Белнакасан представляет собой N-(4-амино-3-хлорбензоил)-3-метил-L-валил-N-[2(R)-этокси-5-оксопергидрофуран-3(S)-ил]-L-пролинамид следующей формулы 7.

[Формула 7]

По другому варианту осуществления настоящего изобретения, ингибитором каспазы является нивокасан или его фармацевтически приемлемая соль. Способ приготовления нивокасана подробно описан в международной публикации № WO 2006/090997 A1 (дата публикации: 31 августа 2006 г.), которая включена в настоящий документ посредством ссылки.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, примеры фармацевтически приемлемой соли нивоксана включают, но не ограничены ими, неорганические кислоты, такие как хлористоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота; органические карбоновые кислоты, такие как винная кислота, муравьиная кислота, лимонная кислота, уксусная кислота, трихлоруксусная кислота, трифторуксусная кислота, глюконовая кислота, бензойная кислота, молочная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота; кислотно-аддитивные соли, образованные сульфоновыми кислотами, такими как метансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота или нафталинсульфоновая кислота.

В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения, ингибитором каспазы является эмрикасан или его фармацевтически приемлемая соль.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, продолжительный эффект представляет собой анальгезирующий или болеутоляющий эффект.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, долгосрочный эффект представляет собой эффект улучшения структуры хряща.

Соединения по настоящему изобретению могут быть составлены в виде различных дозированных форм для фармацевтического введения. При приготовлении фармацевтической композиции по настоящему изобретению, активный ингредиент, в частности, ингибитор каспазы или его фармацевтически приемлемую соль, смешивают с выбранными фармацевтически приемлемыми носителями с учетом приготавливаемой дозированной формы. Например, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть составлена в виде препаратов для инъекций, пероральных препаратов и подобных, если это необходимо.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, фармацевтическая композиция представляет собой состав для инъекций. В настоящем изобретении, составы для инъекций, например, стерилизованную суспензию на водной или масляной основе для инъекций, могут быть приготовлены в соответствии с известными методами с использованием соответствующего диспергирующего агента, смачивающего агента или суспендирующего агента. Растворители, подходящие для этой цели, включают воду, раствор Рингера и изотонический раствор NaCl, и стерилизованные иммобилизованные масла также обычно используют в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно использовать любые иммобилизованные масла, не вызывающие раздражения, включая моно- и диглицериды, и жирные кислоты, такие как олеиновая кислота или полисорбат 80 (Tween 80), можно использовать для состава для инъекций.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, состав для инъекций предназначен для местного применения.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, состав для инъекций вводят в полость сустава.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, эффект от введения фармацевтической композиции может сохраняться в течение длительного времени, например, 1 месяц или более, 2 месяца или более, 3 месяца или более, 4 месяца или более, 5 месяцев или более. или 6 месяцев и более.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, фармацевтическую композицию можно вводить с интервалом 4 недели или более, 5 недель или более, 6 недель или более, 7 недель или более, 8 недель или более, 9 недель или более, 10 недель или более, 11 недель или более, 12 недель или более, 13 недель или более, 14 недель или более, 15 недель или более, 16 недель или более, 17 недель или более, 18 недель или более, 19 недель или более, 20 недель или более, 21 неделя или более, 22 недели или более, 23 недели или более, 24 недели или более, или 25 недель или более.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, фармацевтическая композиция может быть приготовлена для введения млекопитающему. В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, млекопитающее представляет собой человека.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, «терапевтически эффективное количество» для отдельного субъекта относится к количеству, достаточному для достижения вышеуказанного фармакологического эффекта, т.е., терапевтического эффекта, как описано выше. Количество соединения может варьироваться в зависимости от состояния и тяжести состояния субъекта, способа введения и возраста субъекта, подлежащего лечению, но может быть определено специалистами в данной области техники на основании их знаний.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, нивокасан можно вводить человеку в дозе от 1 до 50 мг в пересчете на форму свободного основания. В другом варианте осуществления по настоящему изобретению, нивокасан можно вводить человеку в дозе 1 мг или более, 2 мг или более, 3 мг или более, 4 мг или более, 5 мг или более, 6 мг или более, 7 мг или более, 8 мг или более, 9 мг или более, 10 мг или более, 11 мг или более, 12 мг или более, 13 мг или более, 14 мг или более, 15 мг или более, 16 мг или более, 17 мг или более, 18 мг или более, 19 мг или более, 20 мг или более, 30 мг или менее, 31 мг или менее, 32 мг или менее, 33 мг или менее, 34 мг или менее, 35 мг или менее, 36 мг или менее, 37 мг или менее, 38 мг или менее, 39 мг или менее, 40 мг или менее, 41 мг или менее, 42 мг или менее, 43 мг или менее, 44 мг или менее, 45 мг или менее, 46 мг или менее, 47 мг или менее, 48 мг или менее, 49 мг или менее, 50 мг или менее, или их комбинация, в пересчете на форму свободного основания.

В настоящем изобретении, «фармацевтическая композиция» может включать другие компоненты, такие как носители, разбавители, эксципиенты и т.д., в дополнение к активному ингредиенту по настоящему изобретению. Соответственно, фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемые носители, разбавители, эксципиенты или их комбинации, если это необходимо. Фармацевтическая композиция облегчает введение соединений в организм.

В настоящем документе «носитель» означает соединение, которое облегчает добавление соединений в клетку или ткань. Например, диметилсульфоксид (ДМСО) является традиционным носителем, облегчающим введение многих органических соединений в живые клетки или ткани.

В настоящем документе «разбавитель» означает соединение, которое не только стабилизирует биологически активную форму, но и растворяется в растворителе, растворяющем соединения. В качестве разбавителя в этой области используется растворенная в буфере соль. Традиционно используемый буфер представляет собой фосфатно-солевой буферный раствор, имитирующий солевую форму в жидкости организма. Поскольку буферный раствор может контролировать рН раствора при низкой концентрации, буферный разбавитель практически не модифицирует биологическую активность соединений.

В настоящем документе «фармацевтически приемлемый» означает такое свойство, которое не ухудшает биологическую активность и физические свойства соединений.

В настоящем документе термин «облегчение» относится к полному или частичному облегчению заболевания и /или сопровождающих его симптомов.

В настоящем документе термин «лечение» используется для обозначения сдерживания, замедления или улучшения течения заболеваний у субъекта, демонстрирующего симптомы заболеваний.

ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может эффективно облегчать или лечить остеоартрит, не вызывая риска побочных эффектов и демонстрируя эффект улучшения функции и структуры хряща, а также обезболивающий эффект в течение длительного периода времени только при однократном введении, без резистентности к действию. В частности, в случае состава для инъекций с высокой инвазивностью и сильной болью или дискомфортом, испытываемым субъектом, настоящая фармацевтическая композиция, однократное введение которой может обеспечить долгосрочное облегчение остеоартрита или терапевтическую эффективность, поэтому интервал между введениями может быть длительным, таким как 12 недель или более, может уменьшить боль у пациентов и сократить расходы.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1 представляет собой график, показывающий результаты измерения супрессивной эффективности в отношении секреции IL-1β, индуцированной LPS/нигерицином в клетках THP-1.

Фигура 2 представляет собой график, показывающий результаты измерения супрессивной эффективности в отношении секреции IL-1β, индуцированной LPS, в мононуклеарных клетках периферической крови человека.

Фигура 3 представляет собой график, показывающий результаты измерения профилактического действия TNF-α на апоптоз в хондроцитах, полученных от человека.

Фигура 4 представляет собой график, показывающий результаты измерения эффективности улучшения способности ходить после внутрисуставного введения нивокасана на животной модели остеоартрита.

Фигура 5 представляет собой график, показывающий результаты измерения эффективности улучшения способности ходить после однократного внутрисуставного введения эмрикасана на животной модели остеоартрита по сравнению с нивокасаном.

Фигура 6 представляет собой график, показывающий результаты оценки влияния нивокасана и эмрикасана на структуру сустава после однократного внутрисуставного введения на животной модели остеоартрита, с помощью МРТ.

Фигура 7 представляет собой график, показывающий результаты гистопатологической оценки воздействия на сустав после вскрытия в животной модели остеоартрита.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее настоящее изобретение поясняется более подробно на следующих примерах. Однако следует понимать, что объем защиты настоящего изобретения не ограничивается примерами.

Пример 1: Супрессивное действие на индуцированную LPS/нигерицином секрецию IL-1β в клетках THP-1

Чтобы оценить действие нивокасана на блокирование воспаления, секрецию IL-1β измеряют в клетках THP-1 в условиях, в которых воспаление индуцируют обработкой липополисахаридом (LPS)/нигерицином. За день до обработки LPS, клетки THP-1 высевают в количестве 2,5×10⁵ клеток/лунку (24-луночный планшет) в среду RPMI-1640 и обрабатывают 0,5 мкМ форбол-12-миристат-13-ацетатом (PMA) для дифференциации макрофагов во время культивирования в течение ночи. Затем среду заменяют средой Opti-MEM и клетки инкубируют с LPS 100 нг/мл (первый сигнал воспаления для повышающей регуляции про-IL-1β) в течение 24 часов. Затем клетки дважды промывают PBS и обрабатывают нивокасаном или ДМСО в течение 30 минут в среде Opti-MEM с последующей инкубацией с 5 мкМ нигерицина и 1 мМ АТФ в течение 1 часа для активации инфламмасомы (активация NLRP3 и секреция IL-1β). Секретируемый IL-1β измеряют в клеточной среде с помощью R&D Systems Quantikine для IL-1β человека (предел обнаружения: 7,8 пг/мл), и результаты представлены на фигуре 1. Как видно из фигуры 1, было подтверждено, что нивокасан подавляет индуцированную LPS/нигерицином секрецию IL-1β в клетках THP-1 дозозависимым образом.

Пример 2: Супрессивное действие на LPS-индуцированную секрецию IL-1β в PBMC, полученных от человека

Ингибирующее действие нивокасана на активацию воспалительных процессов в мононуклеарных клетках периферической крови человека (РВМС) оценивают путем измерения LPS-индуцированной секреции IL-1β. Свежевыделенные РВМС высевают в количестве 2,5×10⁵ клеток/лунку (24-луночный планшет) в среду RPMI-1640 и обрабатывают нивокасаном или ДМСО в течение 30 минут с последующей инкубацией с 100 нг/мл LPS в течение 24 часов, чтобы вызвать воспаление. Уровни IL-1β в супернатантах РВМС измеряют с помощью ELISA (R&D Systems Quantikine для IL-1β человека; предел обнаружения: 7,8 пг/мл), и результаты представлены на фигуре 2. Как видно из фигуры 2, подтверждено, что нивокасан подавляет LPS-индуцированную секрецию IL-1β из РВМС дозозависимым образом, проявляя максимальный эффект при 0,3 мкМ.

Пример 3: Защитное действие на апоптоз, индуцированный TNF-α, в хондроцитах, полученных от человека

Защитное действие нивокасана на апоптоз, индуцированный TNF-α, оценивают на хондроцитах человека. Нормальные хондроциты человека высевают в количестве 1×10⁵ клеток/лунку (24-луночный планшет, покрытый коллагеном) в среде для хондроцитов (среда Pgrow IV, Applied Biological Materials Inc.) и инкубируют в течение ночи. Клетки обрабатывают нивокасаном или ДМСО в течение 30 минут с последующей инкубацией с 10 нг/мл рекомбинантного TNF-α человека и 1 мкг/мл актиномицина D в течение 18 часов для индукции апоптоза. Апоптоз измеряют с использованием набора ELISA для обнаружения гибели клеток, и результаты представлены на фигуре 3. Как видно из фигуры 3, подтверждено, что нивокасан дозозависимым образом предотвращает апоптоз, индуцированный TNF-α, в хондроцитах человека.

Пример 4: Оценка эффективности в улучшении способности ходить на животной модели остеоартрита

Собак бигль покупают у Orient Bio, и для эксперимента используют здоровых животных после недельного карантинного цикла.

Через 1 неделю восстановления после хирургического рассечения передней крестообразной связки с медиальной менискэктомией для индукции остеоартрита проводят принудительные физические упражнения в течение 30 минут каждый день. Операцию по индуцированию остеоартрита проводят под анестезией после депиляции животных на обоих коленях. После широкой дезинфекции места разреза повидоном и 70% этанолом, производят разрез кожи правого колена. Путем тупого рассечения окружающих тканей обнажают суставную поверхность дистального конца бедренной кости. На медиальной суставной поверхности создают инструментальный портал, иссекают мениск и переднюю крестообразную связку. Закрытие раны выполняют нейлоновой нитью 4-0. В случае левого колена, выполняют только иссечение передней крестообразной связки. В случае животных в нормальной (имитационной) группе, оба колена разрезают и сшивают без иссечения мениска или передней крестообразной связки. Антибиотики и анальгетики назначают в течение 7 дней после операции. С 7 дня после операции, осуществляют принудительную физическую нагрузку по 30 минут каждый день до дня, предшествующего введению тестируемого вещества.

Оценку способности к ходьбе для оценки болевого статуса и функционального уровня животных с остеоартритом проводят по методике, предложенной Pashuck et al. (Troy D. Pashuck et al., J Orthop Res, 2016, 34(10): 1772-1779), и показатель хромоты, представленный в таблице 1, регистрируют до конца эксперимента.

[Таблица 1]

Оценка Параметры 0 Нет заметной хромоты 1 Прерывистая легкая хромота при нагрузке на ногу с незначительными изменениями походки 2 Умеренная хромота при весовой нагрузке - очевидная хромота с заметным изменением походки 3 Сильная хромота при весовой нагрузке - только «прикосновение пальцев ног» 4 Неспособность держать вес

Когда оценка хромоты, вызванной остеоартритом, у собак бигль в среднем составляет 3,5 или выше, собак делят на группы по 5 собак в группе до единообразного среднего значения для каждой группы. Эффективность нивокасана на животной модели остеоартрита измеряют путем оценки степени хромоты два раза в неделю после однократного внутрисуставного введения. Инъекционный раствор для внутрисуставного введения готовят путем растворения 0,1, 0,3, 1, 3 или 10 мг тестируемого вещества в 1 мл 100 мМ фосфатного буферного раствора, содержащего 0,4% (в массовом соотношении) полисорбат 80 (Tween 80) и 0-25 мМ раствор NaOH, и конечный рН составляет 7,0-7,4. Каждому животному в полость сустава вводят среду или раствор нивокасана в дозах 0,1, 0,3, 1, 3 и 10 мг/колено. После анестезии животных, инъекционный раствор нивокасана вводят в полость сустава правого колена с помощью С-дуги ( Siemens).

Оценку эффективности нивокасана для улучшения способности ходить при однократном внутрисуставном введении на животной модели остеоартрита проводят два раза в неделю в течение 3 месяцев, и результаты представлены на фигуре 4. Как видно из фигуры 4, подтверждено, что нивокасан демонстрируют эффективность улучшения способности ходить в зависимости от дозы, и эффективность сохраняется до 3 месяцев.

В модели остеоартрита у собак, вызванного принудительными физическими упражнениями в течение 30 минут каждый день после 1 недели восстановления после хирургического рассечения передней крестообразной связки с медиальной менискэктомией, как видно из фигуры 5, однократное внутрисуставное введение 10 мг эмриказана, ингибитора панкаспазы, демонстрирует улучшение способности ходить, аналогичное таковому при введении 10 мг нивокасана.

Пример 5: МРТ оценка влияния на структуру суставов в животной модели остеоартрита

В модели остеоартрита, вызванного ежедневными принудительными физическими упражнениями у собак бигль, после хирургического рассечения передней крестообразной связки с медиальной менискэктомией, влияние на структуру сустава оценивают с помощью МРТ (SIGNA Pioneer 3.0T MR, GE Healthcare Co., USA) сустава до однократного внутрисуставного введения и через 3 месяца после него. Влияние тестируемого вещества на структуру сустава оценивают по методу, предложенному Hunter et al. (David J. Hunter et al., Osteoarthritis and Cartilage 2011, 19, 990-1002), как представлено в таблице 2. Нивокасан и эмрикасан, которые являются ингибиторами панкаспазы, демонстрируют уменьшение поражения костного мозга и синовиита при проведении МРТ по сравнению до и через 3 месяца после однократного внутрисуставного введения в животной модели остеоартрита.

[Таблица 2] Показатель МРТ структуры сустава

Параметры Степени Результаты 1) BML и кисты Нет 0 <33% субрегионального объема 1 33-66% субрегионального объема 2 >66% субрегионального объема 3 2) Остеофиты Нет 0 Незначительное количество 1 Умеренное количество 2 Значительное количество 3 3) Синовит - выпот Физиологическое количество 0 Небольшое количество - сплошная жидкость в ретропателлярном пространстве 1 Среднее количество - сплошная жидкость в ретропателлярном пространстве 2 Большое количество - признаки вздутия капсулы 3

Пример 6: Гистопатологическая оценка воздействия на сустав в животной модели остеоартрита

В модели остеоартрита у собак бигль, вызванного ежедневными принудительными физическими упражнениями после хирургического рассечения передней крестообразной связки с медиальной менискэктомией, через 3 месяца после однократного внутрисуставного введения, проводят вскрытие, сустав собирают и фиксируют. Фиксированную ткань подвергают обычной обработке ткани, такой как деминерализация, обрезка, обезвоживание, заливка парафином, получение срезов и подобные, чтобы подготовить образец для гистопатологического исследования с последующим окрашиванием гематоксилином-эозином и сафранином-о. Для наблюдения за гистопатологическими изменениями используют оптическую микроскопию (Olympus BX53, Japan).

Гистопатологическую оценку проводят путем сравнения групп с подсчетом баллов, как показано в таблицах 3-8, в соответствии со способом, предложенным Cook et al. (Cook et al., Osteoarthritis Cartilage. 2010;18 Suppl 3: S66-S79), и результаты представлены на фигуре 7.

[Таблица 3] Оценка структуры хряща

Характеристики тяжести патологии Площадь пораженного участка Нет Местное
(приблиз. 1/3) Мультифокальное (приблиз. 2/3) Глобальное
(>2/3) А Нормальный объем, гладкая поверхность, все зоны не повреждены. 0 0 0 0 В Неровности поверхности, включая трещины на поверхности/в верхней зоне и/или образование ткани паннуса на поверхности 0 1 2 3 С Трещины в средней зоне и/или эрозия поверхности/верхней зоны 0 2 4 6 D Трещины, которые распространяются на глубокую зону и/или эрозию через среднюю зону 0 3 6 9 Е Полная потеря толщины хряща 0 4 8 12

[Таблица 4] Оценка патологии хондроцитов

Характеристики тяжести патологии Площадь пораженного участка Нет Местное
(приблиз. 1/3) Мульти фокальное (приблиз. 2/3) Глобальное
(>2/3) А Норма 0 0 0 0 В Потеря клеток в поверхностной зоне или относительное увеличение плотности со случайными поверхностными скоплениями 0 1 2 3 С Преобладают мелкие скопления клеток (2-4 клетки/кластер). 0 2 4 6 D Преобладают крупные кластеры клеток (≥5 клеток/кластер). 0 3 6 9 Е Преобладает потеря клеток (некроз/апоптоз). 0 4 8 12

[Таблица 5] Оценка окрашивания протеогликана

Характеристики тяжести патологии Площадь пораженного участка Нет Местное
(приблиз. 1/3) Мульти фокальное (приблиз. 2/3) Глобальное
(>2/3) А Норма 0 0 0 0 В Снижение содержания протеогликанов в поверхностной/верхней зоне 0 1 2 3 С Снижение содержания протеогликанов в средней зоне 0 2 4 6 D Снижение содержания протеогликанов в глубокой зоне 0 3 6 9 Е Полное снижение содержания протеогликанов 0 4 8 12

[Таблица 6] Классификация характеристик клеток оболочки

Характеристики тяжести патологии Площадь пораженного участка Нет Местное
(приблиз. 1/3) Мульти фокальное (приблиз. 2/3) Глобальное
(>2/3) А 1-2 слоя клеток 0 0 0 0 В 3-6 слоев клеток 0 1 2 3 С >6 слоев клеток 0 2 4 6

[Таблица 7] Оценка характеристик клеточной инфильтрации

Характеристики тяжести патологии Площадь пораженного участка Нет Местное
(приблиз. 1/3) Мульти фокальное (приблиз. 2/3) Глобальное
(>2/3) А Нет клеточной инфильтрации 0 0 0 0 В Инфильтраты воспалительных клеток легкой и средней степени тяжести, включая мелкие лимфоидные фолликулы 0 1 2 3 С Выраженные диффузные воспалительные клеточные инфильтраты, включая крупные лимфоидные фолликулы 0 2 4 6

[Таблица 8 ] Классификация характеристик гиперплазии

Характеристики тяжести патологии Площадь пораженного участка Нет Местное
(приблиз. 1/3) Мульти фокальное (приблиз. 2/3) Глобальное
(>2/3) А Нет гиперплазии ворсин 0 0 0 0 В Короткие ворсинки 0 1 2 3 С Пальцевидная гиперплазия 0 2 4 6

Как видно из фигуры 7, было подтверждено, что дозозависимое гистопатологическое улучшение демонстрируется при гистопатологической оценке суставов, полученных при вскрытии через 3 месяца после однократного внутрисуставного введения нивокасана.

Из приведенных выше результатов примеров 4-6 подтверждено, что нивокасан не только эффективен в улучшении способности ходить, что отражает обезболивающий эффект в течение длительного периода, по меньшей мере, 3 месяца или более, даже при однократном введении без повторного введения или в форме пролонгированного действия, но также эффективен для улучшения структуры хряща за счет противовоспалительного действия.

Настоящее изобретение относится к применению ингибитора каспазы для изготовления лекарственного средства для облегчения или лечения остеоартрита, обладающего длительным эффектом при однократном введении, где ингибитор каспазы выбран из группы, состоящей из нивокасана и его фармацевтически приемлемой соли. Настоящее изобретение обеспечивает эффективное облегчение или лечение остеоартрита, не вызывая риска побочных эффектов и демонстрируя эффект улучшения функции и структуры хряща, а также обеспечивает обезболивающий эффект в течение длительного периода времени только при однократном введении, без резистентности к действию. 16 з.п. ф-лы, 7 ил., 8 табл., 6 пр.

1. Применение ингибитора каспазы для изготовления лекарственного средства для облегчения или лечения остеоартрита, обладающего длительным эффектом при однократном введении, где ингибитор каспазы выбран из группы, состоящей из нивокасана и его фармацевтически приемлемой соли.

2. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемая соль нивокасана выбрана из группы, состоящей из хлористоводородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты, бромистоводородной кислоты, йодистоводородной кислоты, винной кислоты, муравьиной кислоты, лимонной кислоты, уксусной кислоты, трихлоруксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, глюконовой кислоты, бензойной кислоты, молочной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты, метансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты и нафталинсульфоновой кислоты.

3. Применение по п.1, где длительный эффект представляет собой анальгезирующий или болеутоляющий эффект.

4. Применение по п.1, где длительный эффект представляет собой эффект улучшения структуры хряща.

5. Применение по п.1, где лекарственное средство представляет собой состав для инъекции.

6. Применение по п.5, где состав для инъекций предназначен для местного введения.

7. Применение по п.6, где состав для инъекций вводят в полость сустава.

8. Применение по п.1, где эффект от введения длится 1 месяц или более.

9. Применение по п.8, где эффект от введения длится 3 месяца или более.

10. Применение по п.9, где эффект от введения длится 6 месяцев или более.

11. Применение по п.1, где лекарственное средство вводят с интервалом 4 недели или более.

12. Применение по п.11, где лекарственное средство вводят с интервалом 8 недель или более.

13. Применение по п.12, где лекарственное средство вводят с интервалом 12 недель или более.

14. Применение по п.12, где лекарственное средство вводят с интервалом 24 недели или более.

15. Применение по п.1, где лекарственное средство предназначено для введения млекопитающему.

16. Применение по п.15, где млекопитающее представляет собой человека.

17. Применение по п.1, где нивокасан вводят человеку в дозе от 1 до 50 мг в пересчете на форму свободного основания.