АКТИВНЫЙ КОМПОНЕНТ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА С ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНОЙ, АНТИГИПОКСИЧЕСКОЙ И АНТИАМНЕСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/45 A61K31/765 A61K36/15 B01D11/02 A61P25/28 A61P25/00 

Область применения

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для профилактики и для фармакологической коррекции нарушений ВНД при заболеваниях ЦНС и касается лекарственных средств, которые могут быть использованы для лечения нейродегенеративных заболеваний, связанных с нарушением мнестических и когнитивных функций, а именно болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, деменции, бокового амиотрофического склероза, рассеянного склероза, болезни Хантингтона, болезни Гентингтона, множественной системной атрофии, а также может быть использовано для фармакологической терапии гипоксических/ишемических повреждений.

Предшествующий уровень техники

Проблема церебральной и цереброваскулярной патологии в современном мире является актуальной. В связи с ростом продолжительности жизни увеличивается и частота развития энцефалопатий, а также деменций различной природы. В настоящее время этой патологией страдает более 157 млн человек в мире, а за последние 5 лет на 17% увеличилось количество нейродегенеративных заболеваний. Психический, когнитивный и неврологический дефициты после перенесенных тяжелых нейроинфекций формируются с частотой до 45%.

Поэтому актуальность решения проблемы адекватной фармакотерапии заболеваний, сопровождающихся расстройствами мнестических и когнитивных функций, является важной задачей, требующей для ее решения объединенных усилий специалистов разных профилей. Одновременно ограниченный ассортимент средств терапии данной патологии, служит основанием для разработки новых лекарственных препаратов, обладающих церебропротекторным действием при нарушениях когнитивных и мнестических функций.

Важным источником новых оригинальных соединений, в частности для лечения церебральной патологии, могут служить индивидуальные вещества, выделенные из лекарственных растений. Последние являются богатым источником новых оригинальных соединений, ранее не используемых в медицине.

Роль нарушений холинергической регуляции в формировании неврологической патологии обусловлена распространенностью холинергических синапсов в структурах нервной системы с образованием массивных нейронных сетей и целого комплекса разноуровневых проводящих путей.

Нарушение комплексности работы этих систем и возникновение дисбаланса между заинтересованными системами на любом уровне приводит к возникновению неврологической симптоматики различной степени выраженности с тенденцией к прогрессированию и глобализации возникающих нарушений. Высокая представленность холинергических нейронов в структурах головного мозга, играющих ключевую роль в формировании когнитивных функций, включая неокортекс, обуславливает критическую важность холинергической передачи для временной и декларативной памяти, обучения и внимания. С учетом биохимии мозга, в которой ацетилхолин (АХ) имеет широкую представленность, есть также основания предполагать, что этот медиатор обеспечивает сложные двигательные функции - инициацию движений, двигательные стереотипы. Кроме того, АХ-система обеспечивает спонтанную активность, эмоциональное поведение, память и волевые акты [1].

Основная психофизиологическая роль АХ связана с обеспечением запоминания новой информации. Дефицит АХ нарушает процесс перевода кратковременной памяти в долговременную. Было установлено, что при нейродегенеративных заболеваниях, проявляющихся деменцией, в центральной нервной системе снижается количество медиатора АХ [2]. В результате этого возникает нарушение именно механизма избирательной активации, опосредующее дефицит когнитивных функций [3, 4]. При болезни Альцгеймера (БА) возникает атрофия базальных ядер переднего мозга, что приводит к недостаточности всей холинергической системы. Было показано, что нейродегенеративый процесс при БА, тесно связан именно с ацетилхолинергическими структурами. Наиболее ранние и, как правило, самые грубые изменения при этом заболевании наблюдаются в структурах гиппокампова круга и медиобазальной лобной коре [5].

Одним из самых эффективных и перспективных путей профилактики и терапии гипоксических/ишемических повреждений, следовательно, лечения различной тяжелой патологии в практике интенсивной терапии представляется применение антигипоксантов - фармакологических средств, ослабляющих или ликвидирующих гипоксические нарушения (гипоэргоз) путем поддержания и повышения энергопродукции в системе митохондриального окислительного фосфорилирования. Однако активность препаратов этой группы недостаточна. Этим объясняется актуальность поиска новых антигипоксических препаратов среди веществ растительного происхождения, обладающих оригинальной химической структурой и низкой токсичностью, и уровнем побочного действия.

Древесная зелень хвойных пород (сосна, ель, пихта, кедр) являются одним из самых богатых источников полипренолов.

Из патента RU2631887, опубл. 28.09.2017, известно лекарственное средство для лечения заболеваний живого организма, связанных с воспалительной демиелинизацией, представляющее собой полипренолы, полученные из древесной зелени хвойных пород, содержащих 8-20 изопреновых звеньев. Изобретение относится к средствам для лечения и профилактики демиелинизирующих заболеваний, в том числе рассеянного склероза и состояний, связанных с демиелинизацией, полинейропатией и/или симптомов или признаков таких состояний, и оказывает ремиелинизирующее действие, ускоряет процесс нейрогенеза, а также обладает иммуномодулирующим метаболическим действием, к тому же позволяет получить минимальный побочный эффект при применении лекарственного средства растительного происхождения.

Известна композиция для коррекции нарушений при заболеваниях нервной системы (патент RU2667647, опубл. 21.09.2018). Изобретение относится к композициям из растительного сырья и является комплексной добавкой для оздоровления сосудистой и нервной системы. Композиция включает фосфолипиды, полипренолы пихты сибирской, представляющие собой группу биополимеров, содержащих 8-18 изопреновых звеньев, глицин, токоферола ацетат и наполнитель. Композиция обеспечивает улучшение кровоснабжения мозга, что повышает умственную работоспособность и ассоциативность процессов.

Известен активный ингредиент лекарственного средства (патент RU2327480, опубл. 27.06.2008), в котором используют полипренолы, содержащие 8-20 изопреновых звеньев, в качестве активного ингредиента лекарственного средства для лечения больных с дементным синдромом, больных, страдающих болезнью Альцгеймера, а так же фармацевтическая композиция для лечения больных с дементным синдромом, в том числе болезнью Альцгеймера.

Из патента RU2238291, опубл. 20.10.2004, известен способ получения полипренолов, заключающиеся в экстракции древесной зелени хвойных пород органическим растворителем, последующем выделении отстаиванием при охлаждении и фильтровании восков, отделении свободных кислот от полученного раствора экстрактивных веществ в углеводородном растворителе раствором щелочи, разделении полученного нейтрализованного раствора на раствор нейтральных веществ в углеводородном растворителе и водно-щелочной раствор солей органических кислот. Для этого нейтральные вещества последовательно экстрагируют ацетоном и низшим спиртом при определенном соотношении. При экстракции ацетоном нейтральные вещества разделяются на осадок, содержащий сложные эфиры высших жирных кислот с тритерпеновыми спиртами, стеринами, высшими жирными спиртами и остаток, растворимый в ацетоне. При переработке остатка спиртом отделяют сумму дитерпеновых спиртов от нерастворимых в спирте ацетатов полипренолов, омылением которых спиртовым раствором щелочи получают концентрат полипренолов.

Недостатком известных решений является трудоемкий и затратный способ экстрагирования полипренолов из сырья, обусловленный применением хромотографии на силикагеле для их выделения, а также не обеспечивает более полное экстрагирование пренолов из растительного сырья с требуемой чистотой.

Описание изобретения

Задачей данного изобретения является расширение арсенала новых лекарственных средств из отечественного растительного сырья для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний, обладающий церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью, активный компонент лекарственного средства с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью при гипоксически-ишемических поражениях ЦНС, способный улучшать мнестические и когнитивные функции мозга за счет церебропротекторного действия, а так же фармацевтическая композиция на основе активного компонента и способ профилактики и лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, Паркинсона, деменция бокового амиотрофического склероза, рассеянного склероза, болезни Хантингтона, Гентингтона, множественная системная атрофии, а также может быть использовано для фармакологической терапии гипоксических/ишемических повреждений с минимальными побочными эффектами, сократить количество принимаемого средства за счет его высокой эффективности.

Задачей изобретения является так же способ получения активного компонента лекарственного средства с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью менее трудоемкого и затратного в сравнении с известными, а также с более полным экстрагированием пренолов из древесной зелени хвойных пород с чистотой 95 - 98 %.

Поставленную задачу решают за счет нового активного компонента лекарственного средства с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью, представляющего собой смесь олигомеров полипренола, полученную из древесной зелени хвойных пород общей формулы:

где n=6-22.

Воздействие на холинергическую систему всегда представлялось важной терапевтической задачей. Расширение спектра неврологической патологии, в основе которой лежит холинергическая дисфункция, дополнительно подчеркивает актуальность поиска возможных путей ее коррекции. Средствами, обладающими доказанной эффективностью в отношении холинергических нарушений, обусловливающих когнитивные расстройства, считаются ингибиторы ацетилхолинэстеразы [6]. Экспериментальные исследования показали, что со снижением активности ацетилхолинэстеразы коррелирует уменьшение выраженности когнитивных расстройств [3]. Для восполнения дефицита церебрального ацетилхолина в комбинации сацетилхолинэстеразными средствами могут быть использованы препараты холина альфосцерата [7]. Эти препараты в течение длительного времени изучались в международных рандомизированных плацебо-контролируемых исследованиях, в которых отмечена их эффективность в отношении восстановления когнитивных функций при нейродегенеративных и сосудистых заболеваниях, а также относительная безопасность применения [8].

Поставленную задачу решают способом получения активного компонента лекарственного средства с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью путем экстракции древесной зелени хвойных пород, в котором сырье высушивают и измельчают до частиц не более 5 мм, нагревают в дистиллированной воде в соотношении 1:1 до 75°С в течение одного часа, жидкость сливают, проводят экстракцию сырья органическим растворителем в течение 12-14 часов при соотношении сырье : растворитель 1:(2,5-3), фильтруют, к фильтрату при перемешивании добавляют сначала 5%-ный спиртовой раствор NaOH в соотношении сырье : раствор 1:1, затем дистиллированную воду в соотношении сырье : вода 1:2, после расслаивания водно-щелочной слой сливают, экстракт промывают в дистиллированной воде до нейтральной реакции, отгоняют растворитель и полученный экстракт промывают в дистиллированной воде.

В качестве растворителя используют бензин (нефрас С2-80/120 или С3-80/120), n-гексан, хлороформ.

Фармацевтическая композиция для лечения нейродегенеративных заболеваний включает эффективное количество активного компонента в виде самостоятельного препарата или в виде фармацевтической композиции с фармацевтически приемлемыми носителями, растворителями и вспомогательными средствами.

Примеры фармацевтических композиций включают любые твердые (таблетки, пили, капсулы, гранулы и т.д.) или жидкие (растворы, суспензии, эмульсии) лекарственные формы для приема внутрь, традиционные формы для парентерального введения или для ректального (в виде свеч) введения. Композиции для приема внутрь могут содержать традиционные для них наполнители; их можно готовить в твердой или жидкой форме: в виде таблеток, капсул, раствора, суспензии или сиропа; они могут содержать любые приемлемые эксципиенты, такие как связующие агенты (например, сахар, желатин, сорбитол, трагакант или поливинилпирролидон), наполнители (лактоза, сахар, крахмал, фосфат кальция, сорбитол), таблетирующие лабриканты (например, стеарат магния), дезинтеграторы (например, крахмал, поливинилпирролидон, микрокристаллическую целлюлозу, карбоксиметилцеллюлозу), увлажнители (например, натрия лаурил сульфат), поверхностно-активные или диспергирующие вещества. Жидкие формы для приема внутрь могут включать растворители (вода, растительные или животные масла, минеральное масло), декстрозу, иные растворы сахаридов, гликоли. Указанные композиции готовят традиционными общепринятыми методами. Такие методы включают смешивание активного ингредиента с носителем, который может включать один или более вспомогательных ингредиентов и получение из смеси готового к продаже продукта.

При этом следует отметить, что конкретная доза для каждого конкретного пациента будет зависеть от многих факторов, включая активность данного используемого соединения, возраст, вес тела, пол, общее состояние здоровья и режим питания пациента, время и способ введения лекарственного средства, скорость его выведения из организма, конкретно используемую комбинацию лекарственных средств, а также тяжесть заболевания у данного пациента, подвергаемого лечению.

Осуществление изобретения

Пример 1

К 10 кг высушенной и измельченной до частиц не более 5 мм древесной зелени пихты сибирской добавляют 10 кг воды дистиллированной, перемешивают и нагревают смесь до температуры 75°С в течение одного часа. Затем жидкость сливают, а к остатку сырья добавляют 30 кг органического растворителя бензин (нефрас С2-80/120 или С3-80/120) с периодическим перемешиванием в течение 12 часов. Затем фильтруют, к фильтрату добавляют 10 кг 5%-ного спиртового раствора NaOH, перемешивают в течение 20 минут. Затем добавляют 20 кг воды дистиллированной. После тщательного перемешивания и расслаивания нижний водно-щелочной слой сливают. Бензиновый слой промывают водой дистиллированной до нейтральной реакции. Из бензинового экстракта отгоняют растворитель. Полученный экстракт промывают 5 кг воды дистиллированной. Полученный концентрат полипренолов составляет 1% от исходного сырья древесной зелени пихты сибирской, с чистотой 95-98%.

Пример 2

К высушенной и измельченной до частиц не более 5 мм древесной зелени ели (10 кг) 10 кг воды дистиллированной, перемешивают и нагревают смесь до температуры 75°С в течение одного часа. Затем жидкость сливают, а к остатку сырья добавляют 25 кг органического растворителя n-гексан с периодическим перемешиванием в течение 14 часов. Затем фильтруют, к фильтрату добавляют 10 кг 5%-ного спиртового раствора NaOH, перемешивают в течение 20 минут. Затем добавляют 20 кг воды дистиллированной. После тщательного перемешивания и расслаивания нижний водно-щелочной слой сливают. Гексановый слой промывают водой дистиллированной до нейтральной реакции. Из гексанового экстракта отгоняют растворитель. Полученный экстракт промывают 5 кг воды дистиллированной. Полученный концентрат полипренолов составляет 1% от исходного сырья древесной зелени ели, с чистотой 95-98%.

Пример 3

К 10 кг высушенной и измельченной до частиц не более 5 мм древесной зелени хвойных пород (хвоя кедра) добавляют 10 кг воды дистиллированной, перемешивают и нагревают смесь до температуры 75°С в течение одного часа. Затем жидкость сливают, а к остатку сырья добавляют 25 кг органического растворителя хлороформа с периодическим перемешиванием в течение 14 часов. Затем фильтруют, к фильтрату добавляют 10 кг 5%-ного спиртового раствора NaOH, перемешивают в течение 20 минут. Затем добавляют 20 кг воды дистиллированной. После тщательного перемешивания и расслаивания нижний водно-щелочной слой сливают. Хлороформный слой промывают водой дистиллированной до нейтральной реакции. Из хлороформного экстракта отгоняют растворитель. Полученный экстракт промывают 5 кг воды дистиллированной. Полученный концентрат полипренолов составляет 1% от исходного сырья древесной зелени хвойных пород, с чистотой 95-98 %.

Структуры полипренолов устанавливали с помощью метода ВЭЖХ в условиях: хроматографическая колонка YMC-Pack Polyamine II (4,6 мм*250 мм); подвижная фаза - смесь гексана и изопропилового спирта в соотношении 99:1; скорость подачи элюента - 1,0 см³/мин; температура термостата колонки - 30°С. Соответствие полипренолов устанавливали по времени удерживания и хроматографическому спектру (рисунки 1,2).

Время удерживания: 1,583 (n=6); 1,774 (n=7); 1,928 (n=8); 2,090 (n=9); 2,219 (n=10); 2,428 (n=11); 2,506 (n=12); 2,797 (n=13); 2,887 (n=14); 2,959 (n=15); 3,104 (n=16); 3,705 (n=17); 3,941 (n=18); 4,303 (n=19); 6,412 (n=20); 6,781 (n=21); 7,381 (n=22).

Авторами настоящего изобретения было изучено и исследовано действие заявленного активного компонента на антиамнестические и антигипоксические свойства, ниже представлены результаты этой работы.

Результаты исследований

1. Исследование антиамнестической активности компонента

Эксперименты выполнены на 108 аутбредных половозрелых мышах-самцах стока СDI массой тела 28-30 г (в возрасте 5 недель) конвенциональных, 1 категории, полученных из отдела экспериментального биомоделирования НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ. Дизайн экспериментов и содержание животных были одобрены Этическим комитетом НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ. Мыши перед началом эксперимента были адаптированы в виварии в отдельной комнате в течение 3 дней до начала введения.

Заказчиком был представлен новый лекарственный компонент - сумма олигомеров полипренолов, полученный из древесной зелени хвойных пород (сосна, ель, пихта, лиственница, кедр, можжевельник, кипарис, секвойя, тис и др.). Был использован Скополамин (СК, Sigma, США), холина альфосцерат (Глиатилин, Каталент Италия С.П.А.).

Антиамнестическая активность компонента исследовалась в диапазоне доз 5, 20, 50, 100, 200, 500 мг/кг. Экспериментальная модель болезни Альцгеймера создавалась внутрибрюшинным введением скополамина в дозе 2 мг/кг [10] в течение 20 дней. Все животные были разбиты на 9 групп по 12 особей в каждой. Первой группе (интактному контролю) вводили внутрибрюшинно физраствор на протяжении всего эксперимента. Остальным группам вводили также внутрибрюшинно скополамин на протяжении 20 дней, а с 21 по 30 день внутрибрюшинно - физраствор. Второй группе в добавление к физраствору вводили в желудок воду в объеме 0,4 мл (отрицательный контроль). Третья группа с 21 по 30 день получала препарат сравнения глиатилин в дозе 90 г/кг (положительный контроль) [11]. Группы с четвертой по девятую получали заявляемое средство соответственно указанным дозам. На 31 день эксперимента через 1 час после введения веществ у всех животных вырабатывали условный рефлекс пассивного избегания (УРПИ). Проверку рефлекса осуществляли через 24 часа и 7 суток после выработки. Методика условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, имеющегося у грызунов [9]. Экспериментальная установка представляла собой камеру, состоящую из двух отсеков: большого - освещенного и малого - темного. Животное помещалось в светлый отсек и вскоре (через 10-20 секунд), в силу врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, переходило в малый отсек, после чего дверка, соединяющая оба отсека, перекрывалась и на пол темного отсека, состоящего из параллельных чередующихся электродов, подавали электрический ток импульсами продолжительностью 50 мс, частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА. Через 10 секунд дверку открывали, и животное могло выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животных вырабатывался условный рефлекс избегания темного пространства. При проверке воспроизводимости рефлекса животных помещали в светлый отсек в угол антиположный от входа в темный отсек и наблюдали в течение 3-х минут. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода), суммарное время пребывания в темном отсеке. Для всех данных исследования применена описательная статистика: подсчитаны среднее значение и стандартная ошибка среднего, которые вместе со значением n (количество вариант в группе) представлены в итоговых таблицах. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета программ «Statistica 6,0» для Windows. Проверка на соответствие выборок нормальному закону распределения проводилась критерием Шапиро-Уилка. Равенство выборочных средних, имеющих нормальный закон распределения, проверяли с помощью t-критерия Стьюдента (Pt), имеющих ненормальный закон распределения, оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (Pu) и углового преобразования Фишера (ϕ). Различия определены при 0,05% уровне достоверности [12].

В таблице 1 приведены результаты влияние курсового введения заявленного компонента на выработку УРПИ через по результатам проверки воспроизводимости рефлекса через 24 часа и 7 суток после выработки у мышей CDI с нарушением когнитивных и мнестических процессов, вызванного хроническим (20 дней) введением скополаминана в дозе 2 мг/кг (Х±m; n=12).

В ходе проведенных исследований установлено, что скополамин, введенный однократно в дозе 2 мг/кг в течение 20 дней вызывал отчетливое нарушение выработки и воспроизводимости УРПИ. При этом курсовое в течение 5 дней введение заявленного компонента оказало улучшающее действие на воспроизводимость рефлекса превышающее эффект препарата сравнения Глиатилина. Снижение эффекта вещества в больших дозах, против его эффекта в малых, явление, достаточно распространенное в фармакологии рецепторных препаратов. Заявленный активный компонент оказывает антиамнестическое действие на экспериментальной модели болезни Альцгеймера, вызванной хроническим (в течение 20 дней) введением скополамина при скополаминовой амнезии. Наиболее выраженный максимальный эффект наблюдался в дозах 20 и 50 мг/кг.

2. Исследование антигипоксической активности компонента

Антигипоксические свойства заявляемого средства были исследованы на двух моделях гипоксических состояний - гиперкапнической гипоксии в условиях гермокамеры и тканевой гипоксии, вызванной введением нитропруссида натрия.

Исследования антигипоксического действия заявленного активного компонента на модели тканевой гипоксии, вызванной введением нитропруссида натрия в дозе 25 мг/кг, выполнены на 50 мышах-самцах CD1 массой тела 29-34 г. Активный компонент вводили зондом в желудок в течение 5 дней, предшествовавших исследованию и последний 5-й раз за 1 час до введения нитропруссида. Исследовалось 3 дозы активного вещества - 7, 20 и 50 мг/кг. Натрия нитропруссид вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг. Критерием антигипоксантной активности служило статистически значимое увеличение продолжительности жизни животных по сравнению с контрольной группой [14]. Данные исследования влияние курсового (5 дней) введения активного компонента на продолжительность жизни мышей-самцов линии CDI в условиях тканевой гипоксии, вызываемой введением нитропруссида натрия в дозе 25 мг/кг приведены в таблице 2. Данные исследования влияния заявленного активного компонента в дозах 7,0; 20,0 и 50,0 мг/кг на латентный период терминальной стадии гипоксической травмы мышей СВА CaLac в условиях гиперкапнической гипоксии (гипоксия гермобъема) в сравнении с глиатилином в дозе 90 мг/кг Х±m представлены в Таблице 3.

Для всех данных применена описательная статистика: подсчитаны медиана, первый и третий квартили, среднее арифметическое и стандартное отклонение, которые вместе со значением n (количество вариант в группе) представлены в итоговых таблицах. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета программ «Statistica 6,0» для Windows. Проверка на соответствие выборок нормальному закону распределения проводилась критерием Шапиро-Уилка. Равенство выборочных средних, имеющих нормальный закон распределения, проверяли с помощью t-критерия Стьюдента, а имеющих ненормальный закон распределения - с помощью непараметрического критерия Крускала-Уоллиса. Статистическая значимость определялась при p <0,05 [13].

Из данных таблиц 2 и 3 следует, что заявленный активный компонент в дозе 50 мг/кг на модели тканевой гипоксии проявляет выраженное антигипоксическое действие. При этом глиатилин не продемонстрировал сколько-нибудь значимой активности.

Исследование антигипоксической активности на модели гиперкапнической гипоксии проводилось в условиях методики гермобъема. Эксперимент был выполнен на 50 мышах самцах СВА CaLa c массой тела 25-30 г. Заявленный активный компонент вводили зондом в желудок в течение 5 дней, предшествовавших исследованию и последний 5-й раз за 1 час до первого помещения в гермокамеру. Исследовалось 3 дозы вещества - 7, 20 и 50 мг/кг. Препарат сравнения Глиатилин исследовался в дозе 90 мг\кг. Гермокамера представляла собой стеклянный сосуд с выверенным объемом в 500 мл (±<1,0%) и герметически закрывающейся крышкой. Животных помещали в гермокамеру, после чего ее крышка плотно закрывалась. Мыши находились там до появления предсмертного судорожного припадка или первого агонального вдоха, после чего их извлекали и давали «раздышаться». Методика начиналась спустя час после введения исследуемого вещества. По истечении часа, после извлечения мыши, проводилось повторное помещение в гермокамеру, по вышеописанной методике. Критерием антигипоксантной активности служило статистически значимое увеличение продолжительности жизни животных по сравнению с контрольной группой [14]. Статистическая обработка результатов проводилась аналогично вышеприведенной. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Из данных таблицы следует, что при первом сеансе гипоксического воздействия ни глиатилин, ни заявленный активный компонент не изменяли величины латентного времени гипоксии. При повторном воздействии гипоксии отмечалось увеличение латентного времени гипоксии как контрольной, так и в опытных группах. Однако у мышей, получавших новый активный компонент в дозе 50 мг/кг и глиатилин, это увеличение статистически значимо отличалось от значения показателя в соответствующей контрольной группы. Активный компонент в дозе 50 мг/кг обеспечил увеличение продолжительности жизни животных при гипоксической травме, вызываемой нитропруссидом натрия в 1,75 раза в сравнении с группой контроля, и в 1,77 раза - по сравнению с препаратом сравнения глиатилином. Активный компонент также проявляет антигипоксическую активность в условиях тканевой гипоксии, где глиатилин был неактивен.

Список цитированных источников

1. Дзяк Л.А., Цуркаленко Е.С. Роль холинергического дефицита в патогенезе психоневрологических заболеваний // Международный неврологический журнал. - 2019. - Т. 105, № 3. - С. 39-47.

2. Bartus R.T. The cholinergic hypothesis of geriatric memory disfunction / R.T. Bartus, R.L. Dean, B. Beer, A. Lippa. // Science. - 1982. - Vol. 217, № 4558. - P. 408-414.

3. Bullock R. New drugs for Alzheimer’s disease and other dementias // Br. J. Psychiatry. - 2002. - Vol. 180. - P. 135-139.

4. Galasko D. New approaches to diagnose and treat Alzheimer’s disease: a glimpse of the future // Clin. Geriatr. Med. - 2001. - Vol. 17, № 2. - P. 393-410.

5. Doggrell S.A. Treatment of dementia with neurotransmission modulation / S.A. Doggrell, S. Evans // Expert opin. Investig. Drugs. - 2003. - Vol. 12. - P. 1633-1654.

6. Bond M. The effectiveness and cost-effectiveness of donepezil, galantamine, rivastigmine and memantine for the treatment of Alzheimer's disease / M. Bond, G, Rogers, J. Peters, R Anderson, et al. (review of Technology Appraisal № 111): a systematic review and economic model // Health technology assessment (Winchester, England). - 2012. - Vol. 16, № 21. - P. 1-470.

7. Amenta F., Tayebati S.K., Vitali D., Di Tullio M.A. Association with the cholinergic precursor choline alphoscerate and the cholinesterase inhibitor rivastigmine: an approach for enhancing cholinergic neurotransmission // Mech. Ageing. Dev. - 2006. -Vol. 127. -P. 173-179.

8. Sato N., Sakamori M., Haga K., Takehara S., Setoguchi M. Antagonistic activity of Y-25130 on 5-HT3 receptors // Jpn. J. Pharmacol. - 1992. -Vol. 59, № 4. - 443-448.

9. Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. (пер. с англ. под ред. проф. А. С. Батуева) / Я Буреш, О. Бурешова, Дж. П. Хьюстон). М.: Высшая Школа, 1991. -398 С.

10. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - Москва: Гриф и К, 2012. - С. 291.

11. Hyun Mi Kim Effects of Choline Alfoscerate and Memantine on Memory Improvement of Scopolamine-induced Memory Impairment animal Model of Alzheimer’s Disease / Hyun Mi Kim, SeongHee Kang, Seong-Wan Cho, Bo Sun Kang // YakhakHoeji. - 2017. - Vol. 61 № 6. - P. 292-300.

12. Лакин Г. Ф. Биометрия: Учеб. пособие для биол. спец. вузов. Москва: Высш. шк., 1990. - С. 352.

13. Гмурман, В. Е. Руководство к решению задач по теории вероятностей и математической статистике: учеб. пособие / В.Е. Гмурман - 11-е изд., перераб. и доп. - М.: Издательство Юрайт, 2011. - 404 с.

14. Аксиненко, С. Г. Тканевая гипоксия, вызванная нитропруссидом натрия и ее коррекция растительными средствами /С.Г. Аксиненко, Т.Н. Поветьева, Н.В. Провалова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2007. Прилож. 1. С. 49-53.

Таблица 1 Группа Через 24 часа после выработки Через 7 суток после выработки Латентное время захождения в темный отсек при выработке рефлекса, с Латентное время захождения в темный отсек при проверке рефлекса, с % животных с выработанным рефлексом Латентное время захождения в темный отсек при проверке рефлекса, с % животных с выработанным рефлексом 1. Контроль интактный 11,4±15,4* 164,6±16,9 83,3* 128,3±12,7 66,7* 2. Контроль + СК 78,4±18,1 45,2±19,8 8,3 88,6±11,5 8,3 3. Активный компонент, 5 мг/кг + СК 83,8±26,5 112,3±11,5* 25,0 * 128,3±14,8 16,7 4. Активный компонент, 20 мг/кг + СК 36,0±13,6 132,2±0,6* 58,3 * 145,3±29,1* 42,7* 5. Активный компонент, 50 мг/кг + СК 29,6±9,1 144,8±23,4* 66,7 * 89,3±14,5 33,3 * 6. Активный компонент, 100 мг/кг + СК 49,8±10,9 109,5±9,1 16,7 75,3±12,9 8,3 7. Активный компонент, 200 мг/кг + СК 79,1±6,2 128,1±13,9 25,0* 118,6±16,8 16,7 8. Активный компонент, 500 мг/кг + СК 96,5±11,4 83,4±12,7 8,3 122,4±18,9 16,7 9. Глиатилин 90 мг/кг + СК 41,5±11,8 142,8±14,5* 50,0* 129,8±19,1 33,3* Примечание. * - вероятность нулевой гипотезы менее 0,05 по сравнению с группой 2 (скополаминовый контроль)

Таблица 2 № п/п Группа наблюдения, доза, мг/кг, n = 10 Продолжительность жизни, мин. 1 Контроль 11,5±0,7 2 Глиатилин, 90 11,4±1,5* 3 Активный компонент, 7 12,5±1,5 4 Активный компонент, 20 12,1±1,1 5 Активный компонент, 50 20,2±2,3*& Примечание: *- достоверно по сравнению с контролем, & - по сравнению с глиатилином при Рt <0,05.

Таблица 3 № п/п Препарат, группа, доза Продолжительность латентного периода гипоксии, мин. 1-й эпизод гипоксии 1-й эпизод гипоксии 1 Гипоксический контроль 48,3±2,6 62,7±2,6 2 Активный компонент, 7,0 мг/кг 51,3±3,1 68,4±4,7 3 Активный компонент, 20 мг/кг 42,3±2,2 55,9±3,0 4 Активный компонент, 50 мг/кг 53,8±4,5 80,2±7,4 * 5 Глиатилин, 90,0 мг/кг 47,4±3,7 81,5±7,7 * Примечание: * - различия достоверны с гипоксическим контролем при Р ≥0,05

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности и может быть использована для профилактики и лечения нейродегенеративных заболеваний, связанных с нарушением мнестических и когнитивных функций, а также для фармакологической терапии гипоксических/ишемических повреждений. Активный ингредиент лекарственного средства с церебропротекторной, антиамнестической и антигипоксической активностью для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний, который представляет собой смесь олигомеров полипренола, полученную из древесной зелени хвойных пород общей формулы:

где n=6-22. Способ получения активного компонента лекарственного средства с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний путем экстракции древесной зелени хвойных пород органическим растворителем, согласно которому измельченное до частиц не более 5 мм и высушенное сырье - древесную зелень хвойных пород нагревают в дистиллированной воде до 75°С в течение одного часа, жидкость сливают и проводят экстракцию сырья органическим растворителем в течение 12-14 часов при соотношении сырье : растворитель 1:(2,5-3), фильтруют, к фильтрату при перемешивании последовательно добавляют 5%-ный спиртовой раствор NaOH при соотношении сырье : раствор 1:1 и дистиллированную воду при соотношении сырье : вода 1:2, после расслаивания водно-щелочной слой сливают, экстракт промывают в дистиллированной воде до нейтральной реакции, отгоняют растворитель и промывают в дистиллированной воде, при этом в качестве органического растворителя используют нефрас С2-80/120 или нефрас С3-80/120, n-гексан, хлороформ. Фармацевтическая композиция с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний, которая включает эффективное количество вышеописанного активного компонента и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества-носители, и/или растворители, и/или добавки, и/или лубриканты. Вышеописанный способ позволяет получить активный ингредиент с более полным экстрагированием пренолов из древесной зелени хвойных пород с чистотой 95-98%. Активный ингредиент имеет следующий состав смеси полипренолов, определенный методом ВЭЖХ при времени удерживания: 1,583 (n=6); 1,774 (n=7); 1,928 (n=8); 2,090 (n=9); 2,219 (n=10); 2,428 (n=11); 2,506 (n=12); 2,797 (n=13); 2,887 (n=14); 2,959 (n=15); 3,104 (n=16); 3,705 (n=17); 3,941 (n=18); 4,303 (n=19); 6,412 (n=20); 6,781 (n=21); 7,381 (n=22). Активный ингредиент и композиция на его основе обладают церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 3 пр.

1. Активный ингредиент лекарственного средства с церебропротекторной, антиамнестической и антигипоксической активностью для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний, отличающийся тем, что представляет собой смесь олигомеров полипренола, полученную из древесной зелени хвойных пород общей формулы:

где n=6-22.

2. Активный компонент лекарственного средства по п.1, отличающийся тем, что имеет следующий состав полипренолов, определенный методом ВЭЖХ при времени удерживания: 1,583 (n=6); 1,774 (n=7); 1,928 (n=8); 2,090 (n=9); 2,219 (n=10); 2,428 (n=11); 2,506 (n=12); 2,797 (n=13); 2,887 (n=14); 2,959 (n=15); 3,104 (n=16); 3,705 (n=17); 3,941 (n=18); 4,303 (n=19); 6,412 (n=20); 6,781 (n=21); 7,381 (n=22).

3. Активный компонент лекарственного средства по п.1, отличающийся тем, что в качестве древесной зелени используют древесную зелень Пихты сибирской.

4. Способ получения активного компонента лекарственного средства с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний путем экстракции древесной зелени хвойных пород органическим растворителем, охарактеризованного в п.1, отличающийся тем, что измельченное до частиц не более 5 мм и высушенное сырье - древесную зелень хвойных пород нагревают в дистиллированной воде до 75°С в течение одного часа, жидкость сливают и проводят экстракцию сырья органическим растворителем в течение 12-14 часов при соотношении сырье : растворитель 1:(2,5-3), фильтруют, к фильтрату при перемешивании последовательно добавляют 5%-ный спиртовой раствор NaOH при соотношении сырье : раствор 1:1 и дистиллированную воду при соотношении сырье : вода 1:2, после расслаивания водно-щелочной слой сливают, экстракт промывают в дистиллированной воде до нейтральной реакции, отгоняют растворитель и промывают в дистиллированной воде, при этом в качестве органического растворителя используют нефрас С2-80/120 или нефрас С3-80/120, n-гексан, хлороформ.

5. Фармацевтическая композиция с церебропротекторной, антигипоксической и антиамнестической активностью для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний, отличающаяся тем, что включает эффективное количество активного компонента по п.1 и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества-носители, и/или растворители, и/или добавки, и/или лубриканты.