Способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью Российский патент 2023 года по МПК G01N33/68 G01N33/543 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и позволяет прогнозировать преждевременные роды у беременных женщин с истмико-цервикальной недостаточностью в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки в сроке гестации с 13 по 22 неделю.

Истмико-цервикальная недостаточность (ИЦН) (код по Международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем, десятого пересмотра (МКБ-10) - О34.3) - укорочение длины шейки матки ≤25 мм и/или дилатация цервикального канала ≥10 мм на всем протяжении ранее 37 недель беременности без клинической картины угрожающего выкидыша или преждевременных родов [Истмико-цервикальная недостаточность: клинические рекомендации / Н.К. Тетруашвили, Н.В. Долгушина, И.И. Баранов и др. – М., 2021. – 54 с.].

Согласно статистическим данным распространенность ИЦН в настоящее время составляет 0,8-1%, однако, при наличии в анамнезе выкидыша во втором триместре беременности возрастает до 20%, а ранних преждевременных родов – до 30% [Истмико-цервикальная недостаточность: клинические рекомендации / Н.К. Тетруашвили, Н.В. Долгушина, И.И. Баранов и др. – М., 2021. – 54 с.; Thakur M., Mahajan K. Cervical incompetence // StatPearls [Internet]. – StatPearls Publishing, 2021; American College of Obstetricians and Gynecologists. ACOG Practice Bulletin No.142: Cerclage for the management of cervical insufficiency // Obstet Gynecol. – 2014. – Vol. 123, Pt. 1. – P. 372–379; Cervical insufficiency and cervical cerclage / R. Brown, R. R. Gagnon, M.-F. Delisle et al.// J. Obstet. Gynaecol. Can. – 2013. – Vol. 35, № 12. – P. 1115–1127].

ИЦН в 7,2-13,5% случаев является причиной формирования невынашивания беременности [Особенности течения беременности, родов и перинатальные исходы у беременных с истмико-цервикальной недостаточностью / О. В. Носкова, А. В. Чурилов, В. В. Свиридова, Е. В. Литвинова // Вестник гигиены и эпидемиологии. – 2019. – Т. 23, № 3. – С. 247–250]. Известно, что 30% беременностей, осложненных ИЦН, завершаются преждевременными родами [Петров Ю.А., Оздоева М.Б. Истмико-цервикальная недостаточность как этиологический фактор преждевременных родов // Научное обозрение. Медицинские науки. – 2019. – №2. – С. 26–30].

Одним из хирургических методов лечения ИЦН в сроке гестации с 12 недель до 26 недель и 6 дней является трансвагинальное наложение швов на шейку матки (серкляж) [Истмико-цервикальная недостаточность: клинические рекомендации // Н.К. Тетруашвили, Н.В. Долгушина, И.И. Баранов и др. – М., 2021. – 54 с.]. Этому методу отдают предпочтение при наличии в акушерском анамнезе 2 и более поздних выкидышей и преждевременных родов. Как экстренный метод лечения, он применяется при укорочении шейки матки менее или равном 15 мм или при раскрытии цервикального канала до 10 мм и более [Истмико-цервикальная недостаточность: клинические рекомендации // Н.К. Тетруашвили, Н.В. Долгушина, И.И. Баранов и др. – М., 2021. – 54 с.].

Преждевременные роды (ПР) (код по Международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем, десятого пересмотра (МКБ-10) – О60) - это роды, наступившие в сроки беременности от 22 до 36 недель, при этом установление срока беременности определяется на основании данных о 1-м дне последней менструации (при регулярном менструальном цикле) и УЗИ плода, выполненном в 1-м триместре [Преждевременные роды: клинические рекомендации / З.С. Ходжаева, Р.Г. Шмаков, Л.В. Адамян и др. – М., 2020. – 42 с.].

Преждевременные роды являются причиной неонатальной и младенческой смертности, детской заболеваемости и инвалидности [Фомина А.С. Преждевременные роды, современные реалии // Научные результаты биомедицинских исследований. – 2020. – Т. 6, №3. – С. 434–436. – DOI 10.18413/2658-6533-2020-6-3-0-12].

Таким образом, актуальной является задача по разработке способа прогнозирования преждевременных родов у женщин с ИЦН в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки в сроке гестации с 13 по 22 неделю для проведения своевременных лечебно-профилактических мероприятий с целью снижения перинатальных осложнений для матери и ребенка.

Известен способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с угрожающими преждевременными родами [Патент №2132069 Российская Федерация. Способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах / Крошкина Н.В., Сотникова Н.Ю., Букина Е.А., Анциферова Ю.С., Кудряшова А.В. // Изобретения. 1999. – №17, Ч. II. – С. 407]. Способ заключается в определении в периферической крови беременных женщин с угрозой преждевременных родов содержания CD16+ и CD3+ клеток и вычислении показателя их соотношения по формуле CD16+/CD3+. При значении показателей меньше или равных 0,11 прогнозируют преждевременное наступление родов.

1. Отсутствуют данные о возможности применения данного способа у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки, что ограничивает его использование у данной категории пациенток.

2. Данный способ позволяет прогнозировать преждевременные роды в более поздние сроки беременности – начиная с 24 недель гестации.

3. Способ сложен в исполнении, так как предполагает исследование нескольких показателей и проведение математических расчетов.

4. Способ имеет более низкую точность - 78,26%, по сравнению с заявляемым способом.

Известен способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с угрозой прерывания беременности [Патент №2710244 Российская Федерация. Способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с угрозой прерывания беременности / Левкович М.А., Крукиер И.И., Авруцкая В.В., Ерджанян Р.Р., Дертярева А.С. // Изобретения. Полезные модели. – 2019. – №36]. У женщин с угрозой прерывания беременности в сроке 18-22 недели проводят определение иммуноферментным методом в сыворотке крови уровня интерлейкина 33 (ИЛ-33). При значении уровня ИЛ-33 в сыворотке крови 0,98 пг/мл и выше прогнозируют высокий риск развития преждевременных родов.

1. Отсутствуют данные о возможности применения данного способа у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки, что ограничивает его использование у данной категории пациенток.

2. Более узкий диапазон срока гестации (18-22 недели), при котором выполняется прогнозирование преждевременных родов.

Наиболее близким к заявленному способу является способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью [Патент №2779363 Российская Федерация. Способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью / Долгушин И.И., Долгушина В.Ф., Алиханова Е.С., Асташкина М.В., Курносенко И.В. // Изобретения. Полезные модели. – 2022. – №25]. Способ заключается в определении концентрации HMGB1 в цервикальной слизи женщин с ИЦН в сроках гестации 14-28 недель методом иммуноферментного анализа. При уровне HMGB1 более 10 нг/мл прогнозируют высокий риск преждевременных родов.

1. Отсутствуют данные о возможности применения данного способа у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки, что ограничивает его использование у данной категории пациенток.

2. В способе нет указания на методы лечения ИЦН и их возможное влияние на исход беременности.

3. Способ имеет более низкую чувствительность (78,3%) и специфичность (80%), по сравнению с заявляемым способом.

Технический результат направлен на прогнозирование преждевременных родов у женщин с ИЦН в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки в сроке гестации с 13 по 22 неделю.

Заявляемый технический результат достигается тем, что у женщин с ИЦН до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови в сроке гестации 13–22 недели методом иммуноферментного анализа определяют концентрацию белка 4, связывающего жирные кислоты (FABP4), и при ее значении в пределах от 8,7 нг/мл до 25,57 нг/мл в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки прогнозируют своевременные роды, а при ее значении менее 8,7 нг/мл или более 25,57 нг/мл прогнозируют преждевременные роды с точностью 92%.

Способ осуществляется следующим образом:

1. У беременной женщины с ИЦН в сроке гестации с 13 по 22 недели до трансвагинального наложения швов на шейку матки забирают 1 мл периферической венозной крови из кубитальной вены в сухую пробирку.

2. Кровь отстаивают до образования сгустка, а потом центрифугируют в течение 10 минут при скорости 1500 об/мин для получения плазмы.

3. В лунки стрипов с иммобилизированными на внутренней поверхности моноклональными антителами к FABP4 вносят по 100 мкл стандартов и исследуемых образцов сывороток, разбавленных в 10 раз. Инкубируют стрипы при температуре 25°С в течение 60 мин на микропланшетном встряхивателе. По окончании инкубации лунки стрипов промывают пять раз промывочным буфером.

4. Вносят во все лунки по 100 мкл меченых биотином антител. Инкубируют стрипы при температуре 25°С в течение 60 мин со встряхиванием. По окончании инкубации лунки стрипов промывают пять раз промывочным буфером.

5. Добавляют во все лунки стрипов по 100 мкл конъюгата стрептавидин-HRP и инкубируют стрипы при температуре 25°С в течение 30 мин на микропланшетном встряхивателе. По окончании инкубации лунки стрипов промывают пять раз промывочным буфером.

6. Вносят в каждую лунку по 100 мкл субстратного раствора. Инкубируют стрипы в течение 10 мин при комнатной температуре, избегая прямых солнечных лучей.

7. Добавляют во все лунки по 100 мкл «Стоп-реагента» для остановки ферментной реакции.

8. Измеряют оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере Multiscan FC (Labsystems, China).

9. На основании калибровочной кривой, построенной микропланшетным ридером Multiscan FC (Labsystems, China), определяют предварительное значение концентрации FABP4 в исследуемых образцах. Полученный результат необходимо умножить на 10 (коэффициент разведения).

10. При значении концентрации FABP4 в сыворотке крови беременных женщин с ИЦН в сроке гестации с 13 по 22 недели в пределах от 8,7 нг/мл до 25,57 нг/мл в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки прогнозируют своевременные роды, а при ее значении менее 8,7 нг/мл или более 25,57 нг/мл прогнозируют преждевременные роды.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать исход беременности у женщин с ИЦН в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки в сроке гестации с 13 по 22 неделю по определению концентрации FABP4 в сыворотке крови.

Белок FABP4 располагается в зрелых жировых клетках, наиболее известен как маркер, регулирующий транспорт жирных кислот, участвует в превращении жирных кислот в эйкозаноиды и стабилизации лейкотриена [Fatty Acid-Binding Protein 4 (FABP4): pathophysiological insights and potent clinical biomarker of metabolic and cardiovascular diseases / M. Furuhashi, S. Saitoh, K. Shimamoto, T. Miura // Clin. Med. Insights Cardiol. – 2015. – Vol. 8, Suppl. 3. – P. 23–33].

Известно, что FABP4 запускает процесс протеосомной дегидратации одного из факторов транскрипции, вовлеченного в регуляцию липогенеза, PPAR-γ, подавляя его функцию [Взаимосвязь липидного обмена и инсулинорезистентности при гестационном сахарном диабете / В.А. Афонина, Н.В. Батрак, А.И. Малышкина, Н.Ю. Сотникова // Акушерство и гинекология. – 2022. – №7. – С. 13–20; FABP4 attenuates PPAR-γ and adipogenesis and is inversely correlated with PPAR-γ in adipose tissues / T. Garin-Shkolnik, A. Rudich, G.S. Hotamisligil, M. Rubinstein // Diabetes. – 2014. – Vol. 63, №3. – P. 900–911. doi: 10.2337/db13-0436].

Доказано, что экспрессия PPAR-γ подавляет воспалительный ответ, формирующийся при развитии преждевременных родов, посредством его ингибирования провоспалительных цитокинов [Korbecki J., Bajdak-Rusinek K. The effect of palmitic acid on inflammatory response in macrophages: an overview of molecular mechanisms // Inflammation research: official journal of the European Histamine Research Society. – 2019. – Vol. 68, №11. – P. 915–932. https://doi.org/10.1007/s00011-019-01273-5]. Низкие уровни PPAR-γ ведут к росту концентрации свободных жирных кислот плазмы крови [PPARs: regulators of metabolism and as therapeutic targets in cardiovascular disease. Part II: PPAR-β/δ and PPAR-γ / H. Lu, S. Wen-Jun, S. Bittner et al. // Future Cardiol. – 2017. – Vol. 13, №3. – P. 279–296. doi: 10.2217/fca-2017-0019]. Насыщенные жирные кислоты активируют toll-подобный рецептор-4 (TLR-4), тем самым запуская выработку провоспалительных цитокинов, среди которых интерлейкин 1 (Il-1) [Sobczak I.S.A., A Blindauer C., J Stewart A. Changes in Plasma Free Fatty Acids Associated with Type-2 Diabetes // Nutrients. – 2019. – Vol. 11, №9. – P. 2022. doi: 10.3390/nu11092022; Взаимосвязь липидного обмена и инсулинорезистентности при гестационном сахарном диабете / В.А. Афонина, Н.В. Батрак, А.И. Малышкина, Н.Ю. Сотникова // Акушерство и гинекология. – 2022. – №7. – С. 13–20]. Доказана роль Il-1 в формировании преждевременных родов, выявлена прямая корреляция этого медиатора воспаления с частотой встречаемости преждевременных родов [Preterm Birth and Neonatal Injuries: Importance of Interleukin-1 and Potential of Interleukin-1 Receptor Antagonists / M. Nadeau-Vallee, D. Obari, A. Beaudry-Richard et al. // Curr. Pharm. Des. – 2017. – Vol. 23, №40. – P. 6132–6141. doi:10.2174/1381612823666170825145114].

Возможно, что повышение концентрации FABP4 в сыворотке крови может привести к снижению функции PPAR-γ и развитию воспалительных реакций плаценты и преждевременных родов.

Известно, что активация miR-27b (микроРНК 27b) подавляет экспрессию PPAR-γ и FABP4 [Persimmon tannin represses 3T3-L1 preadipocyte differentiation via up-regulating expression of miR-27 and down-regulating expression of peroxisome proliferator-activated receptor-γ in the early phase of adipogenesis / B. Zou, Z. Ge, W. Zhu et al. // Eur. J. Nutr. – 2015. – Vol. 54, №8. – P. 1333–1343. doi:10.1007/s00394-014-0814-9]. MiR-27b является репрессором адипогенеза и подавляет накопление триглицеридов клетками [microRNA miR-27b impairs human adipocyte differentiation and targets PPARgamma / M. Karbiener, C. Fischer, S. Nowitsch et al. // Biochem Biophys Res Commun. – 2009. – Vol. 390, №2. – P. 247–251. doi:10.1016/j.bbrc.2009.09.098]. Вероятно, снижение концентрации FABP4 может быть связано с активацией miR-27b, которое приводит к снижению функциональных возможностей плаценты и жизнеспособности плода, провоцируя тем самым преждевременные роды.

Отличительные признаки способа:

до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови беременных женщин в сроке гестации 13–22 недели методом иммуноферментного анализа определяют концентрацию белка 4, связывающего жирные кислоты (FABP4), и при ее значении в пределах от 8,7 нг/мл до 25,57 нг/мл в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки прогнозируют своевременные роды, а при ее значении менее 8,7 нг/мл или более 25,57 нг/мл прогнозируют преждевременные роды.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1

Пациентка А., 30 лет, беременность третья (в анамнезе два самопроизвольных выкидыша в сроке гестации 9 и 14 недель), запланированная. В сроке 14 недель гестации пациентка обратилась в женскую консультацию на плановый прием к акушеру-гинекологу, откуда после осмотра экстренно госпитализирована в гинекологический стационар с диагнозом: Беременность 14 недель. ИЦН.

По результатам УЗИ, проведенного в стационаре, ширина цервикального канала составила 14 мм, в связи с чем было принято решение о трансвагинальном наложении швов на шейку матки.

Согласно предложенному способу, до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови определена концентрация FABP4, которая составила 26,56 нг/мл.

Заключение: прогноз – преждевременные роды.

Трансвагинально наложены швы на шейку матки, назначена сохраняющая терапия с положительным эффектом, через 14 дней женщина выписана под наблюдение женской консультации с диагнозом: Беременность 16 недель. ИЦН. Трансвагинальные швы на шейке матки.

В сроке 33 недели развилась родовая деятельность, произошли первые преждевременные роды. Родилась живая недоношенная девочка 1870 г, 44 см, с оценкой по шкале Апгар 6/7 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2

Пациентка У., 19 лет, беременность вторая, запланированная (1 беременность – медицинский аборт). В сроке 18 недель гестации пациентка обратилась в женскую консультацию на плановый прием к акушеру-гинекологу, откуда после осмотра экстренно госпитализирована в стационар с диагнозом: Беременность 18 недель. ИЦН.

По результатам УЗИ, выполненного в стационаре, ширина цервикального канала составила 11 мм, в связи с чем было принято решение о трансвагинальном наложении швов на шейку матки.

Согласно предложенному способу до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови определена концентрация FABP4, которая составила 25,57 нг/мл.

Заключение: прогноз – своевременные роды.

Трансвагинально наложены швы на шейку матки, назначена сохраняющая терапия с положительным эффектом, через 14 дней женщина выписана под наблюдение женской консультации с диагнозом: Беременность 20 недель. ИЦН. Трансвагинальные швы на шейке матки. Анемия легкой степени.

В 38 недель 5 дней произошли первые своевременные роды. Родился живой доношенный мальчик 3270 г, 52 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3

Пациентка К., 25 лет, беременность третья (1 беременность - самопроизвольный выкидыш в 10 недель, 2 беременность - преждевременные роды в сроке 30 недель). В сроке 19 недель гестации обратилась в женскую консультацию на плановый прием к акушеру-гинекологу, откуда после осмотра экстренно госпитализирована в стационар с диагнозом: Беременность 19 недель. ИЦН. Тазовое предлежание плода.

По результатам УЗИ, проведенного в стационаре, ширина цервикального канала составила 13 мм, в связи с чем было принято решение о трансвагинальном наложении швов на шейку матки.

Согласно предложенному способу до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови определена концентрация FABP4, которая составила 15,15 нг/мл.

Заключение: прогноз – своевременные роды.

Трансвагинально наложены швы на шейку матки, назначена сохраняющая терапия с положительным эффектом, через 14 дней женщина выписана под наблюдение женской консультации с диагнозом: Беременность 21 неделя. ИЦН. Трансвагинальные швы на шейке матки. Миопия легкой степени.

В 39 недель 2 дня произошли вторые своевременные роды. Родился живой доношенный мальчик 3320 г, 51 см, с оценкой по шкале Апгар на 8/9 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 4

Пациентка М., 32 года, беременность вторая, запланированная (1 беременность – преждевременные роды в сроке 28 недель). В сроке 13 недель гестации пациентка обратилась в женскую консультацию на плановый прием к акушеру-гинекологу, откуда после осмотра экстренно госпитализирована в стационар с диагнозом: Беременность 13 недель. ИЦН.

По результатам УЗИ, проведенного в стационаре, ширина цервикального канала составила 10 мм, в связи с чем было принято решение о трансвагинальном наложении швов на шейку матки.

Согласно предложенному способу до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови определена концентрация FABP4, которая составила 8,7 нг/мл.

Заключение: прогноз – своевременные роды.

Трансвагинально наложены швы на шейку матки, назначена сохраняющая терапия с положительным эффектом, через 14 дней женщина выписана под наблюдение женской консультации с диагнозом: Беременность 15 недель. ИЦН. Трансвагинальные швы на шейке матки. Хронический гастрит, стадия ремиссии.

В 37 недель 3 дня произошли вторые своевременные роды. Родилась живая доношенная девочка 3370 г, 50 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 5

Пациентка Я., 28 лет, беременность третья (1 беременность – самопроизвольный выкидыш, 2 – преждевременные роды в 34 недели). В сроке 17 недель гестации пациентка обратилась в женскую консультацию на плановый прием к акушеру-гинекологу, откуда после осмотра экстренно госпитализирована в стационар с диагнозом: Беременность 17 недель. ИЦН.

По результатам УЗИ, проведенного в стационаре, ширина цервикального канала составила 15 мм, в связи с чем было принято решение о трансвагинальном наложении швов на шейку матки.

Согласно предложенному способу до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови определена концентрация FABP4, которая составила 6,358 нг/мл.

Заключение: прогноз – преждевременные роды.

Трансвагинально наложены швы на шейку матки, назначена сохраняющая терапия с положительным эффектом, через 14 дней женщина выписана под наблюдение женской консультации с диагнозом: Беременность 19 недель. ИЦН. Трансвагинальные швы на шейке матки.

В сроке гестации 32 недели развилась родовая деятельность, произошли вторые преждевременные роды. Родилась живая недоношенная девочка 1720 г, 42 см, с оценкой по шкале Апгар на 6/7 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 25 беременных женщин с ИЦН. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1

Показатель Число женщин Всего обследовано 25 Истинно-положительный результат 11 Ложно-положительный результат 2 Истинно-отрицательный результат 12 Ложно-отрицательный результат 0 Точность 92,0% Чувствительность 100% Специфичность 85,7%

Преимущества данного способа:

1. Способ обладает высокой точностью (92,0%), чувствительностью (100%) и специфичностью (85,7%).

2. Способ позволяет применить персонифицированный подход к ведению пациенток с ИЦН в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки в сроке гестации 13–22 недели, своевременно провести профилактические мероприятия и оптимальную маршрутизацию с целью снижения риска развития преждевременных родов, что позволит снизить частоту и тяжесть перинатальной патологии.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования преждевременных родов у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью (ИЦН). До трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови беременных женщин в сроке гестации 13–22 недели методом иммуноферментного анализа определяют концентрацию белка FABP4. При ее значении в пределах от 8,7 до 25,57 нг/мл в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки прогнозируют своевременные роды. При значении менее 8,7 нг/мл или более 25,57 нг/мл прогнозируют преждевременные роды. Способ обеспечивает возможность прогнозирования преждевременных родов у женщин с ИЦН в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки в сроке гестации с 13 по 22 неделю за счет предварительного определения концентрации белка FABP4 в периферической венозной крови. 1 табл., 5 пр.

Способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с истмико-цервикальной недостаточностью, характеризующийся тем, что до трансвагинального наложения швов на шейку матки в периферической венозной крови беременных женщин в сроке гестации 13–22 недели методом иммуноферментного анализа определяют концентрацию белка 4, связывающего жирные кислоты (FABP4), и при ее значении в пределах от 8,7 нг/мл до 25,57 нг/мл в случае трансвагинального наложения швов на шейку матки прогнозируют своевременные роды, а при ее значении менее 8,7 нг/мл или более 25,57 нг/мл прогнозируют преждевременные роды.