ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка испрашивает преимущество и приоритет заявки на патент Китая № 201810772374.3, поданной 13 июля 2018 г в Национальное управление интеллектуальной собственности КНР, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящая заявка относится к трициклическому соединению в качестве двойного ингибитора PDE3/PDE4, к способу его получения, фармацевтической композиции, содержащей данное соединение, и к его применению в лечении заболеваний, связанных с PDE3/PDE4, в частности, хронического обструктивного заболевания легких (COPD).
ПРЕДПОСЫЛКИ К СОЗДАНИЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Фосфодиэстеразы (PDE) представляют собой суперсемейство ферментных систем и включают 11 семейств, каждое из которых вовлечено в работу различных систем передачи сигналов и контролирует различные физиологические процессы. Среди них PDE3 представляет собой основную фосфодиэстеразу в гладкомышечных дыхательных путях (ASM) человека, и ингибирование PDE3 увеличивает внутриклеточную концентрацию cAMP и, таким образом, расслабляет бронхиальную гладкую мышцу. PDE4 играет главную регуляторную роль в экспрессии провоспалительных и противовоспалительных медиаторов, и ингибитор PDE4 может ингибировать высвобождение вредных медиаторов из воспалительных клеток. Таким образом, в принципе, ингибитор, который ингибирует как PDE3, так и PDE4, будет характеризоваться как бронходилатацией агониста бета-адренорецептора, так и противовоспалительным действием при ингаляции глюкокортикоида. Комплементация функций двойного нацеливания теоретически является более эффективной, чем одиночное нацеливание, и лечебный эффект, который в настоящее время может быть достигнут только путем комбинированного медикаментозного лечения, достигается одним лекарственным препаратом, таким образом, обеспечивается устранение недостатка, заключающегося в том, что физико-химические свойства ингредиентов лекарственных препаратов, применяемых в комбинированном медикаментозном лечении, не могут быть полностью совместимы, при этом упрощается способ введения и облегчается определение дозы введения.
В Victoria Boswell et al., J. Pharmaco. Experi. Therap. 2006, 318, 840-848 и WO 0058308 А1 сообщалось, что соединения RPL554 и RPL565 характеризуются длительной бронходилатацией и противовоспалительным действием, а также физико-химическими свойствами, такими как недостаточная растворимость и высокий клиренс плазмы, и они являются пригодными для ингаляционного введения. Однако, данные также показывают, что их ингибирующая активность в отношении PDE4 является неудовлетворительной, и противовоспалительный эффект также является не наилучшим. Следовательно, существует необходимость в разработке соединения, характеризующегося ингибирующей активностью в отношении PDE3/4.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
В одном аспекте в настоящей заявке предусмотрено соединение формулы (I), его изомер или его фармацевтически приемлемая соль,
где
кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из 5-членного гетероциклила и 5-членного гетероарила, где 5-членный гетероциклил или 5-членный гетероарил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, =O, галоген, циано, C1-12алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6алкил), -C(O)N(C1-6алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-6алкил) или C1-12алкокси, где C1-12алкил или C1-12алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси;
атомы кольца в кольце Cy предусматривают по меньшей мере один атом азота;
L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)-, -O-, -S-, -OC(O)-, -C(O)O-, -CH2N(R6)C(O)-, -CH2C(O)N(R6)-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2- и одинарной связи;
n равняется 1, 2, 3 или 4;
E1 представляет собой -(CH2)m-, где m равняется 1, 2 или 3;
E2 выбран из группы, состоящей из -O-, -NH-, -S- и одинарной связи;
каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена и C1-6алкила, где C1-6алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; и
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси.
В некоторых вариантах осуществления кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из 5-членного гетероциклила и 5-членного гетероарила, где 5-членный гетероциклил или 5-членный гетероарил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, =O, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3 алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-3алкил), C1-6алкокси или C1-6алкил, замещенный одним или более галогенами; в некоторых вариантах осуществления кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из 5-членного гетероциклила и 5-членного гетероарила, где 5-членный гетероарил необязательно замещен одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-3алкил), C1-6алкокси или C1-6алкил, замещенный одним или более галогенами, где 5-членный гетероциклил необязательно замещен одним или более =O; в некоторых вариантах осуществления кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из оксазолидин-2-она, имидазолила, пиразолила, оксазолила, триазолила, оксадиазолила, тетразолила, тиадиазолила и изоксазолила, где имидазолил, пиразолил, оксазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиадиазолил или изоксазолил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-3алкил), C1-6алкокси или C1-6алкил, замещенный одним или более галогенами.
В некоторых вариантах осуществления кольцо Cy представляет собой 5-членный гетероарил, где 5-членный гетероарил необязательно замещен одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, бром, йод, циано, C1-3алкил, -C(O)NH2, -C(O)O(C1-3алкил), C1-3алкокси или C1-3алкил, замещенный одним или более галогенами; в некоторых вариантах осуществления кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из имидазолила, пиразолила, оксазолила, триазолила, оксадиазолила, тетразолила, тиадиазолила и изоксазолила, где имидазолил, пиразолил, оксазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиадиазолил или изоксазолил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, бром, йод, циано, C1-3алкил, -C(O)NH2, -C(O)O(C1-3алкил), C1-3алкокси или C1-3алкил, замещенный одним или более галогенами.
В некоторых вариантах осуществления кольцо Cy представляет собой 5-членный гетероарил, где 5-членный гетероарил необязательно замещен одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, циано, метил, -C(O)NH2, -C(O)OCH3, метокси или трифторметил; в некоторых вариантах осуществления кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из имидазолила, пиразолила, оксазолила, триазолила, оксадиазолила, тетразолила, тиадиазолила и изоксазолила, где имидазолил, пиразолил, оксазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиадиазолил или изоксазолил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, циано, метил, -C(O)NH2, -C(O)OCH3, метокси или трифторметил.
В некоторых вариантах осуществления кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из структурных звеньев 
и 
; где
представляет собой одинарную связь или двойную связь;
каждый из T1, T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1), C(R1)2, O, N(R2), N и S;
каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-12алкила, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6алкил), -C(O)N(C1-6алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-6алкил) и C1-12алкокси, где C1-12алкил или C1-12алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; и
каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси.
В некоторых вариантах осуществления кольцо Cy представляет собой структурное звено , где
представляет собой одинарную связь или двойную связь;
каждый из T1, T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C(R1), C(R1)2, O, N(R2), N и S;
каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-12алкила, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6алкил), -C(O)N(C1-6алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-6алкил) и C1-12алкокси, где C1-12алкил или C1-12алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; и
каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси. В некоторых вариантах осуществления кольцо Cy представляет собой структурное звено ; где
каждый из T1, T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1)2, O, N(R2) и S;
каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-12алкила, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6алкил), -C(O)N(C1-6алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-6алкил) и C1-12алкокси, где C1-12алкил или C1-12алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; и
каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси. В некоторых вариантах осуществления T1 выбран из группы, состоящей из C(R1), C(R1)2 и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1), C(R1)2, O, N(R2), N и S.
В некоторых вариантах осуществления T1 выбран из группы, состоящей из C(R1) и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1), O, N(R2), N и S.
В некоторых вариантах осуществления T1 выбран из группы, состоящей из C(R1) и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C(R1), O, N(R2), N и S.
В некоторых вариантах осуществления в структурном звене T1 выбран из группы, состоящей из C(R1) и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C(R1), O, N(R2) и N.
В некоторых вариантах осуществления в структурном звене по меньшей мере один из T1, T2, T3, T4 выбран из группы, состоящей из N(R2) и N.
В некоторых вариантах осуществления в структурном звене T1 представляет собой C(R1)2, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1)2 и O.
В некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-6алкила, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-3алкил) и C1-6алкокси, где C1-6алкил или C1-6алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-6алкила, -C(O)NH2, -C(O)O(C1-3алкил) и C1-3алкокси, где C1-6алкил или C1-3алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-6алкила, -C(O)NH2, -C(O)O(C1-3алкил) и C1-3алкокси, где C1-6алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-3алкила, -C(O)NH2, -C(O)OCH3 и C1-3алкокси, где C1-3алкил или C1-3алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-3алкила, -C(O)NH2, -C(O)OCH3 и C1-3алкокси, где C1-3алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-3алкила, -C(O)NH2, -C(O)OCH3 и C1-3алкокси, где C1-3алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 галогенами, амино, или гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, фтора, хлора, циано, метила, -C(O)NH2, -C(O)OCH3, метокси и трифторметила.
В некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, C1-6алкила и C1-6алкокси, где C1-6алкил или C1-6алкокси необязательно замещены одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, C1-3алкила и C1-3алкокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, метила и метокси.
В некоторых вариантах осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен одним или более галогенами, амино или гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 галогенами, амино или гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и метила; в некоторых вариантах осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода и метила.
В некоторых вариантах осуществления структурное звено 
представляет собой 
; предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из 
и 
; более предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
еще более предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
и еще более предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
В некоторых вариантах осуществления структурное звено представляет собой 
; предпочтительно структурное звено представляет собой 
; и более предпочтительно структурное звено представляет собой 
.
В некоторых вариантах осуществления L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)-, -CH2N(R6)C(O)-, -CH2C(O)N(R6)-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2- или одинарной связи; в некоторых вариантах осуществления L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)-, -CH2N(R6)C(O)-, -S(O)2NH- и одинарной связи; в некоторых вариантах осуществления L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)- и -S(O)2NH-; в некоторых вариантах осуществления L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)- и -C(O)N(R6)-; в некоторых вариантах осуществления L выбран из группы, состоящей из -NH-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -C(O)N(OH)-, -S(O)2NH- и одинарной связи; в некоторых вариантах осуществления L выбран из группы, состоящей из -NH-, -NHC(O)-, -C(O)NH- и -C(O)N(OH)-.
В некоторых вариантах осуществления n выбран из группы, состоящей из 1, 2 и 3; в некоторых вариантах осуществления n выбран из группы, состоящей из 1 и 2; в некоторых вариантах осуществления n равняется 2.
В некоторых вариантах осуществления структурное звено 
представляет собой 
; предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
более предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
еще более предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
еще более предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
и еще более предпочтительно структурное звено выбрано из группы, состоящей из
В некоторых вариантах осуществления структурное звено представляет собой ; предпочтительно структурное звено представляет собой ; и более предпочтительно структурное звено представляет собой .
В некоторых вариантах осуществления структурное звено выбрано из группы, состоящей из
В некоторых вариантах осуществления каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 галогенами, амино или гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из галогена и метила, где метил необязательно замещен 1, 2 или 3 галогенами, амино или гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из метила.
В некоторых вариантах осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и метила, где метил необязательно замещен 1, 2 или 3 галогенами, амино или гидрокси; в некоторых вариантах осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и метила; в некоторых вариантах осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода и гидрокси.
В некоторых вариантах осуществления E1 выбран из группы, состоящей из -(CH2)2- и -(CH2)3-.
В некоторых вариантах осуществления E2 выбран из группы, состоящей из -O- и связи.
В некоторых вариантах осуществления структурное звено -E1-E2- выбрано из группы, состоящей из -(CH2)2-, -(CH2)3- и -(CH2)2-O-.
В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки соединение формулы (I), его изомер или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой соединение формулы (II), его изомер или его фармацевтически приемлемую соль,
где
T1, T2, T3, T4, E1, E2, L и структурное звено 
являются такими, как определено выше.
В некоторых вариантах осуществления структурное звено 
соединения формулы (II) является таким, как определено выше.
В некоторых вариантах осуществления структурное звено -E1-E2- соединения формулы (II) является таким, как определено выше.
В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки соединение формулы (II), его изомер или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой соединение формулы (II-1), соединение формулы (II-2) или соединение формулы (II-3), их изомер или их фармацевтически приемлемую соль,
где
R6 выбран из группы, состоящей из водорода и гидрокси;
T1, T2, T3, T4, E1, E2 и структурное звено 
являются такими, как определено в формуле (II), раскрытой в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления структурные звенья 
, 
и 
соединения формулы (II-1), формулы (II-2) или формулы (II-3) являются такими, как определено выше.
В некоторых вариантах осуществления структурное звено -E1-E2- соединения формулы (II-1), формулы (II-2) или формулы (II-3) является таким, как определено выше.
В другом аспекте в настоящей заявке также предусмотрено соединение формулы, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение данной формулы выбрано из группы, состоящей из:
его изомера или его фармацевтически приемлемой соли.
В другом аспекте в настоящей заявке также предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I), соединение формулы (II), соединение формулы (II-1), соединение формулы (II-2), соединение формулы (II-3) или конкретное соединение, описанное выше, его изомер или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция, раскрытая в данном документе, также содержит фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель или разбавитель.
В другом аспекте в настоящей заявке также предусмотрен способ лечения заболевания, связанного с PDE3 и/или PDE4, у млекопитающего, предусматривающий введение млекопитающему, предпочтительно человеку, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), соединения формулы (II), соединения формулы (II-1), соединения формулы (II-2), соединения формулы (II-3) или конкретного соединения, описанного выше, его изомера или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции на его основе.
В другом аспекте в настоящей заявке также предусмотрено применение соединения формулы (I), соединения формулы (II), соединения формулы (II-1), соединения формулы (II-2), соединения формулы (II-3) или конкретного соединения, его изомера, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции на его основе, описанных выше, в получении лекарственного препарата для предупреждения или лечения заболевания, связанного с PDE3 и/или PDE4.
В другом аспекте в настоящей заявке также предусмотрено применение соединения формулы (I), соединения формулы (II), соединения формулы (II-1), соединения формулы (II-2), соединения формулы (II-3) или конкретного соединения, описанного выше, его изомера или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции на его основе в предупреждении или лечении заболевания, связанного с PDE3 и/или PDE4.
В другом аспекте в настоящей заявке также предусмотрено соединение формулы (I), соединение формулы (II), соединение формулы (II-1), соединение формулы (II-2), соединение формулы (II-3) или конкретное соединение, описанное выше, его изомер, или его фармацевтически приемлемая соль, или фармацевтическая композиция на его основе для предупреждения или лечения заболевания, связанного с PDE3 и/или PDE4.
В некоторых вариантах осуществления в настоящей заявке заболевание, связанное с PDE3 и/или PDE4, выбрано из астмы или хронического обструктивного заболевания легких (COPD).
ТЕХНИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ
Соединение, раскрытое в данном документе, характеризуется значительным двойным ингибирующим действием в отношении PDE3 и PDE4, характеризуется значительным ингибирующим действием в отношении TNF-α в мононуклеарных клетках периферической крови человека (hPBMC), а также показывает превосходное противовоспалительное действие в модели острого повреждения легкого крысы, индуцированного липополисахаридом (LPS). Соединение характеризуется высоким клиренсом плазмы in vivo, низким системным воздействием в плазме при пероральном введении и низкой пероральной биологической доступностью, а также хорошей безопасностью при местном введении. Оно оказывает слабое ингибирующее действие в отношении 5 изоферментов (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 и CYP3A4) микросомального цитохрома P450 в печени человека и не характеризуется риском лекарственного взаимодействия. Кроме того, соединение обеспечивает снижение общего количества лейкоцитов у BALF, характеризуется значительным противовоспалительным эффектом, действует при низкой дозе и обеспечивает уменьшение индекса сопротивления дыхательных путей Penh.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ И ОПИСАНИЕ
Если не указано иное, следующие термины и фразы, применяемые в данном документе, имеют следующие значения. Конкретный термин или фраза, если конкретно не указано другое, не следует считать неопределенным или неясным, а следует понимать в соответствии с его общепринятым значением. При ссылке на торговое наименование, оно относится к его соответствующему коммерческому продукту или его активному ингредиенту.
В соединении, образованном путем присоединения каждой группы, валентность каждого атома является нормальной, и образованное соединение может существовать стабильно.
Перечисленные связывающие группы в настоящей заявке характеризуются направлением связывания. Например, в 
, если связывающая группа L представляет собой -N(R6)C(O)-, то -N(R6)C(O)- связывает два конца в направлении, аналогичному порядку прочтения слева направо, с образованием 
, и если L представляет собой -C(O)N(R6)-, то -C(O)N(R6)- связывает два конца в направлении, аналогичному порядку прочтения слева направо, с образованием 
. Комбинация связывающей группы, заместителя и/или их варианта допускается, только если комбинация приведет к получению стабильного соединения.
Термин «фармацевтически приемлемый» применяется в данном документе в отношении тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые, в пределах объема тщательной медицинской оценки, являются подходящими для применения в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, и соизмеримы с приемлемым соотношением польза/риск.
Фармацевтически приемлемая соль, например, может представлять собой соль металла, соль аммония, соль, образованную с органическим основанием, соль, образованную с неорганической кислотой, соль, образованную с органической кислотой, соль, образованную с основной или кислотной аминокислотой и т. д.
Фармацевтически приемлемые соли, раскрытые в данном документе, могут быть синтезированы из исходного соединения, имеющего кислотную или основную группу, с помощью традиционных химических способов. В целом, такие соли получают с помощью следующего способа: осуществление реакции соединения в форме свободной кислоты или основания со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде, или органическом растворителе, или их смеси.
Соединения, раскрытые в данном документе, могут быть в форме геометрического изомера или стереоизомера. Все такие соединения предусмотрены в данном документе, в том числе цис-изомеры и транс-изомеры, (-)- и (+)-энантиомеры, (R)- и (S)-энантиомеры, диастереомеры, (D)-изомеры, (L)-изомеры и их рацемические смеси и другие смеси, такие как обогащенные энантиомерами или диастереомерами смеси, все из которых включены в объем настоящей заявки. Заместители, такие как алкил, могут иметь дополнительный асимметричный атом углерода. Все такие изомеры и их смеси находятся в пределах объема настоящей заявки.
Соединения и промежуточные соединения, раскрытые в данном документе, могут также существовать в различных таутомерных формах, и все такие формы включены в объем настоящей заявки. Термин «таутомер» или «таутомерная форма» относится к структурным изомерам разных энергий, которые являются взаимопревращаемыми при переходе через низкоэнергетический барьер. Например, протонный таутомер (также известный как прототропный таутомер) предусматривает взаимопревращение с помощью переноса протона, такое как изомеризация кето-енола и изомеризация имин-енамина. Конкретный пример данного протонного таутомера представляет собой имидазольный фрагмент, где протон может переноситься между двумя азотами в кольце. Валентный таутомер включает взаимопревращение путем рекомбинации некоторых связывающих электронов.
Соединение, раскрытое в данном документе, может быть асимметричным, например, иметь один или более стереоизомеров. Если не указано иное, все стереоизомеры, например, энантиомеры и диастереоизомеры, включены в настоящую заявку. Соединение с асимметрическими атомами углерода, раскрытые в данном документе, может быть выделено в оптически чистой форме или рацемической форме. Оптически чистая форма может быть выделена из рацемической смеси или может быть синтезирована с применением хирального исходного материала или хирального реагента.
Оптически активные (R)- и (S)-изомеры и D- и L-изомеры можно получать посредством хирального синтеза, или хиральных реагентов, или других традиционных методик. Энантиомер определенного соединения, раскрытого в данном документе, может быть получен посредством асимметричного синтеза или дериватизации с применением хирального вспомогательного средства, где полученную диастереомерную смесь отделяют и вспомогательную группу отщепляют таким образом, чтобы обеспечить получение требуемого чистого энантиомера. В качестве альтернативы, если молекула содержит основную функциональную группу (такую как амино) или кислотную функциональную группу (такую как карбоксил), соединение реагирует с подходящей оптически активной кислотой или основанием с образованием соли диастереоизомера, которая далее подвергается диастереомерному разделению посредством общепринятых в данной области техники способов с получением чистого энантиомера. Кроме того, энантиомер и диастереомер в целом выделяют с помощью хроматографии с применением хиральной неподвижной фазы, необязательно в комбинации с химической дериватизацией (например, образованием карбамата из аминов).
Настоящая заявка также содержит меченные изотопом соединения, которые идентичны тем, что перечислены в данном документе, но один или более атомов которых заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличные от атомной массы или массового числа, которые обычно встречаются в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения, раскрытые в данном документе, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, йода и хлора, такие как 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 123I, 125I и 36Cl.
Соединение, раскрытое в данном документе, может содержать не встречающуюся в природе пропорцию атомных изотопов на одном или более атомов, которые образуют соединение. Например, соединение может быть мечено радиоактивным изотопом, таким как тритий (3H), йод-125 (125I) или C-14 (14C). В качестве другого примера, водород может быть замещен дейтерием с образованием дейтерированного лекарственного средства, и связь, образованная между дейтерием и углеродом, более жесткая, чем связь, которая образована между обычным водородом и углеродом. По сравнению с недейтерированным лекарственным средством дейтерированное лекарственное средство имеет преимущества в виде пониженного токсического побочного эффекта, повышенной стабильности, повышенной эффективности, увеличенного биологического периода полужизни и т. п. Все изотопные варианты соединения, описанного в данном документе, являются они радиоактивными или нет, включены в объем настоящего изобретения.
Кроме того, замещение с помощью более тяжелых изотопов, таких как дейтерий (т. е. 2H), может обеспечить определенные терапевтические преимущества (например, увеличенный период полувыведения in vivo или снижение требований к дозировке), связанные с более высокой метаболической стабильностью, и, следовательно, может быть предпочтительно при некоторых обстоятельствах, в которых замещение дейтерием может быть частичным или полным, при этом частичное замещение дейтерием относится к замещению по меньшей мере одного водорода по меньшей мере одним дейтерием.
«Необязательный» или «необязательно» означает, что может, но не обязательно, возникнуть последовательно описанное событие или обстоятельство, и описание включает случаи, при которых событие или обстоятельство возникает, и случаи, при которых не возникает.
Термин «замещенный» означает, что один или более атомов водорода при конкретном атоме замещены заместителями, которые могут включать варианты дейтерия и водорода, при условии, что валентность конкретного атома является нормальной, и соединение после замещения является стабильным. Если заместитель представляет собой кислород (т. е. =O), это означает, что замещены два атома водорода. Замещение кислородом не происходит в ароматических группах.
Термин «необязательно замещенный» означает, что атом может быть замещен заместителем или может быть не замещен заместителем. Если не указано иное, тип и количество заместителей могут быть произвольными до тех пор, пока это достижимо химически.
Если любая переменная (например, R) встречается более одного раза в составе или структуре соединения, определение переменной в каждом случае является независимым. Таким образом, например, если группа замещена 0-2 R, группа может быть необязательно замещена не более чем двумя R, и определение R в каждом случае является независимым. Кроме того, комбинация заместителей и/или их вариантов допускается, только если комбинация приводит к получению стабильного соединения.
Если одна из переменных представляет собой одинарную связь, это означает, что две группы соединены непосредственно. Например, если L в A-L-Z представляет собой одинарную связь, это означает, что структура на самом деле представляет собой A-Z.
Если связь в заместителе представляет собой поперечную связь между двумя атомами на кольце, то данный заместитель может быть связан с любым атомом на кольце. Например, структурное звено 
указывает, что замещение может происходить в любом положении циклогексила или циклогексадиенила.
Термин «галогено» или «галоген» относится к фтору, хлору, брому и йоду.
Термин «гидрокси» относится к группе -OH.
Термин «циано» относится к группе -CN.
Термин «амино» относится к группе -NH2.
Если заместитель отсутствует, это означает, что заместителя не существует. Например, если X в A-X отсутствует, то структура A-X на самом деле представляет собой A. Если не указано, посредством какого атома указанный заместитель связан с замещаемой группой, то данный заместитель может быть связан посредством любого из атомов группы. Например, пиридинил в качестве заместителя может быть связан с группой, замещенной посредством любого атома углерода на пиридиновом кольце.
Термин «алкил» относится к гидрокарбилу с общей формулой CnH2n+1. Алкил может быть линейным или разветвленным. Например, термин «C1-6алкил» относится к алкилу, содержащему 1-6 атомов углерода (например, метилу, этилу, н-пропилу, изопропилу, н-бутилу, изобутилу, втор-бутилу, трет-бутилу, н-пентилу, 1-метилбутилу, 2-метилбутилу, 3-метилбутилу, неопентилу, гексилу, 2-метилпентилу и т. д.). Алкильные фрагменты (т. е. алкил) алкокси, алкиламино, диалкиламино, алкилсульфонил и алкилтио имеют такое же определение, как указано выше.
Термин «алкокси» относится к -O-алкилу.
Если не указано иное, Cn-n+m или Cn-Cn+m включают любой из конкретных случаев атомов углерода от n до n+m; например, C1-12 включает C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 и C12; Cn-n+m или Cn-Cn+m также включают любой диапазон от n до n+m; например, C1-12 включает C1-3, C1-6, C1-9, C3-6, C3-9, C3-12, C6-9, C6-12, C9-12 и т. д. Подобным образом, «n-n+m-членный» означает, что число атомов в кольце составляет от n до n+m; например, 3-12-членное кольцо включает 3-членное кольцо, 4-членное кольцо, 5-членное кольцо, 6-членное кольцо, 7-членное кольцо, 8-членное кольцо, 9-членное кольцо, 10-членное кольцо, 11-членное кольцо и 12-членное кольцо; «n-n+m-членный» также предусматривает любой диапазон от n до n+m; например, 3-12-членное кольцо включает 3-6-членное кольцо, 3-9-членное кольцо, 5-6-членное кольцо, 5-7-членное кольцо, 6-7-членное кольцо, 6-8-членное кольцо, 6-10-членное кольцо и т. д.
Термин «гетероциклил» относится к полностью насыщенной или частично ненасыщенной (но не полностью ненасыщенной гетероароматической группе) неароматического кольца, которое может присутствовать в виде моноциклической, мостиковой циклической структуры или спироструктуры. Если не указано иное, гетероциклил обычно представляет собой 3-7-членное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома (предпочтительно от 1 до 2 гетероатомов), независимо выбранных из группы, состоящей из серы, кислорода и/или азота. Неограничивающие примеры гетероциклила включают без ограничения оксиранил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, пирролидинил, N-метилпирролидинил, дигидропирролил, пиперидинил, пиперазинил, пиразолидинил, 4H-пиранил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидротиенил, дигидропиридазинил, дигидропиримидинил, дигидропиридинил, дигидроимидазолил, дигидроизоксазолил, дигидротриазолил и дигидропиридазинил. Предпочтительно, гетероциклил представляет собой моноциклический гетероциклил с 5 атомами кольца.
Термин «гетероарил» относится к моноциклической или конденсированной полициклической системе, которая содержит по меньшей мере один атом кольца, выбранный из группы, состоящей из N, O и S, при этом оставшиеся атомы в кольце представляют собой C, и которая содержит по меньшей мере одно ароматическое кольцо. Предпочтительно гетероарил содержит одно 4-8-членное кольцо, в частности, 5-8-членное кольцо, или множество конденсированных колец, содержащих 6-14 атомов кольца, в частности 6-10 атомов кольца. Неограничивающие примеры гетероарила включают без ограничения пирролил, фуранил, тиенил, имидазолил, оксазолил, пиразолил, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, хинолил, изохинолил, тетразолил, триазолил, триазинил, бензофуранил, бензотиенил, индолил, изоиндолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиадиазолил и тиазолил.
Термин «лечение» относится к введению соединения или состава, описанного в данном документе, с целью предотвращения, облегчения или устранения симптомов заболевания или одного или более симптомов, связанных с заболеванием, и включает:
(i) предотвращение возникновения заболевания или болезненного состояния к млекопитающего, в частности, когда такое млекопитающее предрасположено к болезненному состоянию, но еще не диагностировано его наличие;
(ii) подавление заболевания или болезненного состояния, т. е. остановка его развития; и
(iii) облегчение заболевания или болезненного состояния, т. е. вызывание ремиссии.
Термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству соединения, раскрытого в данном документе, для (i) лечения или предупреждения конкретного заболевания, состояния или нарушения; (ii) облегчения, улучшения или устранения одного или более симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения или (iii) предупреждения или замедления начала одного или более симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения, описанных в данном документе. Количество соединения, раскрытого в данном документе, содержащего «терапевтически эффективное количество», изменяется в зависимости от соединения, болезненного состояния и его тяжести, пути введения и возраста млекопитающего, подлежащего лечению, но его обычно могут определить специалисты в данной области, исходя из их собственных знаний и раскрытия настоящей заявки.
Термин «фармацевтическая композиция» относится к смеси, состоящей из одного или более соединений или их фармацевтически приемлемых солей, раскрытых в данном документе, и фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества. Фармацевтическая композиция предназначена для облегчения введения соединения, раскрытого в данном документе, в организм.
Термин «фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества» относится к тем вспомогательным веществам, которые не вызывают значительного раздражающего воздействия в организме и не ухудшают биологическую активность и свойства активного соединения. Подходящие вспомогательные вещества широко известны специалистам в данной области, такие как углевод, воск, водорастворимые и/или набухающие в воде полимеры, гидрофильные или гидрофобные материалы, желатин, масло, растворитель, вода.
Слово «содержат» и его варианты такие как «содержит» или «содержащий» будут пониматься в открытом, неисключительном смысле, т. е. «включающие без ограничения».
Фармацевтическая композиция, раскрытая в данном документе, может быть получена путем объединения соединения, раскрытого в данном документе, с подходящим фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, а также она может быть составлена. Например, ее можно составлять в виде твердого, полутвердого, жидкого или газообразного состава, такого как таблетка, пилюля, капсула, порошок, гранула, мазь, эмульсия, суспензия, суппозиторий, инъекция, средство для ингаляции, гель, микросфера и аэрозоль.
Типичные пути введения соединения или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции на его основе, раскрытых в данном документе, включают без ограничения пероральный, ректальный, местный, ингаляционный, парентеральный, сублингвальный, интравагинальный, интраназальный, интраокулярный, интраперитонеальный, внутримышечный, подкожный и внутривенный пути введения.
Фармацевтическая композиция, раскрытая в данном документе, может быть изготовлена с помощью способов, широко известных в уровне техники, таких как традиционное смешивание, растворение, гранулирование, дражирование, измельчение, эмульгирование и лиофилизирование.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в пероральной форме. В случае перорального введения фармацевтическую композицию можно составлять путем смешивания активных соединений с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, широко известным в уровне техники. Такие вспомогательные вещества могут обеспечивать возможность составления соединений в соответствии с настоящей заявкой в виде таблеток, пилюль, пастилок, драже, капсул, жидкостей, гелей, взвесей, суспензий и т. п. для перорального введения пациентам.
Твердая композиция для перорального ведения может быть получена с помощью традиционного смешивания, наполнения или таблетирования. Например, ее можно получать с помощью следующего способа: смешивание активного соединения с твердыми вспомогательными веществами, необязательное размалывание полученной смеси, добавление при необходимости дополнительных пригодных вспомогательных веществ, а затем формирование смеси в гранулы с получением ядер таблеток или ядер драже. Подходящие вспомогательные вещества включают без ограничения связующие, разбавители, разрыхлители, смазочные средства, вещества, способствующие скольжению, подсластители или ароматизирующие средства.
Фармацевтическая композиция может также быть пригодной для парентерального введения, например, в виде стерильных растворов, суспензий или лиофилизированных продуктов в подходящей единичной лекарственной форме.
Во всех способах введения соединения общей формулы I, описанного в данном документе, суточная доза введения составляет от 0,01-200 мг/кг веса тела.
Соединения, раскрытые в данном документе, могут быть получены с помощью разнообразных способов синтеза, хорошо известных специалистам в данной области, в том числе конкретных вариантов осуществления, перечисленных ниже, вариантов осуществления, полученных путем их комбинирования с другими способами химического синтеза, и их эквивалентов, известных специалистам в данной области техники. Предпочтительные варианты осуществления включают без ограничения примеры, раскрытые в данном документе.
Химические реакции согласно вариантам осуществления, раскрытым в данном документе, проводятся в подходящем растворителе, который должен быть пригодным для химических реакций в настоящей заявке, а также с реагентами и материалами, необходимыми для химических реакций. Иногда для того, чтобы получить соединения по настоящему изобретению, специалисту в данной области необходимо модифицировать или выбрать стадии синтеза или схему реакций на основе представленных вариантов осуществления.
Ключевым аспектом при планировании пути синтеза в данной области является выбор соответствующих защитных групп для реакционноспособных функциональных групп (например, аминогрупп в настоящем изобретении). Например, можно ссылаться на Greene's Protective Groups in Organic Synthesis (4th Ed.) Hoboken, New Jersey: John Wiley & Sons, Inc. Все ссылочные материалы, цитируемые в данном документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I), раскрытое в данном документе, может быть получено специалистом в области органического синтеза с применением стандартных в данной области способов по следующему пути:
Получение промежуточных соединений
Получение соединений формулы (I)
<Путь 1>
<Путь 2>
<Путь 3>
<Путь 4>
.
Растворители, применяемые в данном документе, могут быть коммерчески доступными. В данном документе применяются следующие сокращения: HATU обозначает гексафторфосфат O-(7-азабензoтриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония; DMF обозначает N,N-диметилформамид; DMSO обозначает диметилсульфоксид; Boc обозначает трет-бутоксикарбонил, защитную группу для аминогруппы; DIPEA обозначает диизопропилэтиламин; Me обозначает метил; SEM обозначает Me3SiCH2CH2OCH2; LHMDS обозначает бис(триметилсилил)амид лития; препаративная TLC обозначает препаративную тонкослойную хроматографию; T3P обозначает 1-н-пропилфосфоновый ангидрид; Трис-HCl обозначает трис(гидроксиметил)аминометанхлористоводородную кислоту; AMP обозначает адениловую кислоту; GMP обозначает гуаниловую кислоту; TNF-кислота обозначает фактор некроза опухолей α; EDTA обозначает этилендиаминтетрауксусную кислоту; THP обозначает тетрагидропиранил; OTs обозначает п-толуолсульфонил; NMP обозначает N-метилпирролидон; THF обозначает тетрагидрофуран; MeCN обозначает ацетонитрил; PyBop обозначает гексафторфосфат бензoтриазол-1-ил-oкситрипирролидинoфосфония и Et обозначает этил.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На фиг. 1 показано общее количество лейкоцитов в жидкости, полученной с помощью бронхоальвеолярного лаважа (BALF); и
на фиг. 2 показаны результаты исследования функции легких (индекс сопротивления дыхательных путей Penh) с индуцированием метахолином (Mch).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Настоящее изобретение подробно описано ниже следующими примерами. Однако это не означает ограничения объема настоящего изобретения, приводящего к неблагоприятным последствиям. Хотя настоящее изобретение было подробно описано в данном документе, и также были раскрыты конкретные примеры, специалистам в данной области будет очевидно, что могут быть сделаны различные изменения и модификации в отношении конкретных примеров без отступления от сущности и объема настоящего изобретения.
Пример 1. Синтез соединения BB-1
Смесь соединения BB-1-1 (21,10 г) и этилцианоацетата (11,00 г, 10,38 мл) перемешивали при 100°C течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до 70°C и этанол (30 мл) медленно по каплям добавляли, и осаждалось большое количество твердого вещества. Полученную смесь фильтровали, и осадок на фильтре высушивали при пониженном давлении с получением продукта BB-1-2.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ = 8,26 (t, J = 5,2 Гц, 1H), 6,86 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,79 (br s, 1H), 6,71 (d, 8,0 Гц, 1H),4,00 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 3,31-3,23 (m, 2H), 2,64 (t, J = 7,2 Гц, 2H), 1,32 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 263,1 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения BB-1-3
Оксихлорид фосфора (379,50 г, 230,00 мл) нагревали до 85°C в атмосфере азота и добавляли порциями соединение BB-1-2 (26,00 г). Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 2 часов. После завершения реакции большую часть оксихлорида фосфора удаляли с помощью дистилляции при пониженном давлении. К остатку добавляли дихлорметан (200 мл) и смесь промывали водой (100 мл × 2). Органическую фазу высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали путем суспендирования с этилацетатом (20 мл) с получением соединения BB-1-3.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 7,16 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,12 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,35 (d, J = 6,4 Гц, 2H), 2,84 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 1,44 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 245,1 [M+H]+.
Стадия 3. Синтез соединения BB-1-4
Соединение BB-1-3 (1,00 г) добавляли порциями к 98% концентрированной серной кислоте (12,88 г, 128,69 ммоль, 7,00 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 27°C в течение 3 часов. После завершения реакции смесь добавляли в холодную воду (15 мл) и затем водный раствор гидроксида натрия (4 моль/л, 32 мл) добавляли по каплям для регулирования pH до нейтрального значения с последующей экстракцией этилацетатом (100 мл × 3). Затем органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения BB-1-4.
MS-ESI масса/заряд: 263,1 [M+H]+.
Стадия 4. Синтез соединения BB-1-5
Натрий (2,42 г) добавляли порциями в этанол (80 мл) при 0°C. После перемешивания смеси при 28°C в течение 0,5 часа соединение BB-1-4 (6,90 г) добавляли порциями к раствору и смесь перемешивали при 80°C в течение 0,5 часа. Затем добавляли одной порцией диэтилкарбонат (9,32 г, 9,51 мл) и смесь перемешивали в течение дополнительных 5 часов при 80°C. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, медленно добавляли ледяную воду (30 мл) и затем добавляли разбавленную хлористоводородную кислоту (2 моль/л, 53 мл) для регулирования pH до нейтрального значения. Осаждалось большое количество твердого вещества. Смесь фильтровали и полученный осадок на фильтре очищали путем суспендирования с этанолом (10 мл) с получением соединения BB-1-5.
1H ЯМР (400 MГц, DMSO-d6) δ = 11,22 (br s, 1H), 7,35 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,22 (s, 1H), 4,09 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,90 (br s, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,89 (br s, 2H), 1,35 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 289,1 [M+H]+.
Стадия 5. Синтез соединения BB-1-6
Соединение BB-1-5 (5,00 г) растворяли в оксихлориде фосфора (30 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции большую часть растворителя удаляли путем дистилляции при пониженном давлении. Добавляли воду (100 мл) и полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (150 мл × 2). Затем органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения BB-1-6. MS-ESI масса/заряд: 306,9 [M+H]+.
Стадия 6. Синтез соединения BB-1
Соединение BB-1-6 (925,67 мг) растворяли в изопропаноле (8 мл) при комнатной температуре и затем добавляли 2,4,6-триметиланилин (2,10 г). Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали путем суспендирования с этанолом (6 мл) с получением соединения BB-1.
1H ЯМР (400 MГц, DMSO-d6) δ = 8,85 (br s, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 6,45 (s, 1H), 4,10 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,90 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,87 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,11 (s, 6H), 1,37 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 406,2 [M+H]+.
Пример 2. Синтез соединения BB-2
Соединение BB-2-1 (8 г) и мочевину (9,18 г) растворяли в воде (80 мл) при комнатной температуре, и затем добавляли по каплям концентрированную хлористоводородную кислоту (12 моль/л, 9,56 мл) и смесь перемешивали при 110°C в течение 24 часов. После завершения реакции реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Затем осадок на фильтре промывали водой (50 мл × 2) и высушивали в вакууме с получением соединения BB-2-2.
1H ЯМР (400 MГц, DMSO-d6) δ = 6,84 (br d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,78 (br s, 1H), 6,69 (br d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,02 (br t, J = 5,2 Гц, 1H), 5,43 (br s, 2H), 4,04-3,94 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 2,95 (q, J = 6,4 Гц, 2H), 2,50-2,40 (m, 2H), 1,66-1,59 (m, 2H), 1,35-1,25 (m, 3H). MS-ESI масса/заряд: 253,2[M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения BB-2-3
Натрий (6,38 г) добавляли порциями в безводный этанол (150 мл) в атмосфере азота и смесь перемешивали до полного растворения натрия с получением свежеприготовленного раствора этоксида натрия. Добавляли соединение BB-2-2 (7 г) и диэтилмалонат (11,11 г) и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 16 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении с удалением этанола. Добавляли воду для растворения остатка и затем добавляли по каплям 2 моль/л хлористоводородную кислоту на ледяной бане для регулирования pH до 5. Смесь фильтровали с помощью диатомовой земли и фильтрат экстрагировали этилацетатом (150 мл × 2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (150 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 5/1-1/1; дихлорметан/метанол = 50/1-20/1) с получением соединения BB-2-3.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 6,90-6,82 (m, 2H), 6,78-6,72 (m, 1H), 4,07 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,89-3,84 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,37 (s, 2H), 2,62 (t, J = 7,2 Гц, 2H), 1,94 (q, J = 7,2 Гц, 2H), 1,39 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд:321,2[M+H]+.
Стадия 3. Синтез соединения BB-2-4
Соединение BB-2-3 (2,4 г) добавляли в оксихлорид фосфора (26,40 г) в атмосфере азота и смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 12 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении с удалением оксихлорида фосфора таким образом, чтобы получить соединение BB-2-4, которое применяли непосредственно на следующей стадии. MS-ESI масса/заряд: 321,1 [M+H]+.
Стадия 4. Синтез соединения BB-2
В раствор соединения BB-2-4 (2,4 г) в THF (24 мл) добавляли по каплям раствор 2,4,6-триметиланилина (2,02 г) в THF (10 мл) при 20°C. Смесь перемешивали при 20°C в течение 3 часов и затем нагревали до 50°C и перемешивали в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением большей части растворителя. Остаток растворяли в этилацетате (50 мл) и смесь последовательно промывали водой (50 мл) и насыщенным солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный осадок очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол = 100/1-20/1) с получением соединения BB-2.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD)δ = 7,26 (s, 1H), 7,11 (br s, 2H), 6,97 (s, 1H), 6,31 (s, 1H), 4,20-4,14 (m, 2H), 4,03-4,01 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 2,84-2,82 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,29 (s, 6H), 1,90-1,78 (m, 2H), 1,49-1,42 (m, 3H). MS-ESI масса/заряд: 420,3 [M+H]+.
Пример 3. Синтез соединения BB-3
Соединение BB-3-1 (2 г) растворяли в 1,2-дихлорэтане (20 мл) при комнатной температуре, затем добавляли по каплям триметилсилилизоцианат (3,82 г) и смесь нагревали до 90°C и перемешивали в течение 18 часов. После завершения реакции реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток суспендировали трет-бутилметиловым эфиром (10 мл) с получением соединения BB-3-2.
MS-ESI масса/заряд: 255,1 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения BB-3-3
Натрий (1,13 г) добавляли порциями в безводный этанол (85 мл) в атмосфере азота и смесь перемешивали до полного растворения натрия с получением свежеприготовленного раствора этоксида натрия. Добавляли соединение BB-3-2 (2,5 г) и диэтилмалонат (3,94 г) и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 12 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали с удалением этанола. Добавляли воду для растворения остатка и затем добавляли по каплям 2 моль/л хлористоводородную кислоту на ледяной бане для регулирования pH до 5. Смесь фильтровали с помощью диатомовой земли и фильтрат экстрагировали этилацетатом (50 мл × 2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения BB-3-3.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 6,83 (dd,J = 8,8 Гц, 2,4 Гц, 1H), 6,58 (d, J = 3,2 Гц,1H), 6,44 (dd,J = 8,8 Гц, 3,2 Гц, 1H), 4,19-4,15 (m, 2H), 4,11-4,09 (m, 2H), 4,04-4,00 (m, 2H), 3,76 (s, 3H),3,35 (s, 2H), 1,39 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 323,1 [M+H]+.
Стадия 3. Синтез соединения BB-3-4
Соединение BB-3-3 (1,3 г) добавляли в оксихлорид фосфора (12,37 г) в атмосфере азота и смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 12 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении с удалением оксихлорида фосфора таким образом, чтобы получить соединение BB-3-4, которое применяли непосредственно на следующей стадии. MS-ESI масса/заряд: 323,1 [M+H]+.
Стадия 4. Синтез соединения BB-3
В раствор соединения BB-3-4 (1,2 г) в THF (20 мл) добавляли по каплям раствор 2,4,6-триметиланилина (1,01 г) в THF (20 мл) при 20°C. Смесь перемешивали при 25°C в течение 12 часов и затем нагревали до 40°C и перемешивали в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением большей части растворителя. Остаток растворяли в этилацетате (50 мл) и смесь последовательно промывали водой (50 мл) и насыщенным солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный осадок очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол = 200/1-30/1) с получением соединения BB-3.
1H ЯМР (400 MГц, DMSO-d6) δ = 8.89 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 6,92 (br s, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,05 (s, 1H), 4,28 (t, J = 5,6 Гц, 2H), 4,11-4,04 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,13 (br s, 6H), 1,38-1,32 (m, 3H). MS-ESI масса/заряд: 422,2 [M+H]+.
Пример 4. Синтез соединения BB-4
Соединение BB-1 (1,00 г) растворяли в 2-бутаноне (35 мл) при комнатной температуре и последовательно добавляли 2-(2-бромэтил)изоиндолин-1,3-дион (3,76 г), карбонат калия (3,07 г) и йодид натрия (2,22 г). Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 72 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь концентрировали с удалением большей части органического растворителя и затем добавляли воду (30 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (25 мл × 3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и затем фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 15/1-3/1) с получением соединения BB-4-1.
MS-ESI масса/заряд: 579,3 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения BB-4
Соединение BB-4-1 (500,00 мг) растворяли в трихлорметане (3 мл) и этаноле (3 мл) при комнатной температуре и добавляли гидразингидрат (152,67 мг, чистота 85%). Смесь перемешивали при 28°C в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь концентрировали с удалением большей части органического растворителя и затем добавляли воду (15 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (15 мл × 3). Затем органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения BB-4.
1H ЯМР (400 MГц, DMSO-d6) δ = 6,95 (s, 1H), 6,85 (br s, 2H), 6,66 (s, 1H), 5,31 (s, 1H), 4,14 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 4,05 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,91 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 3,62 (s, 3H), 2,90-2,86 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,95 (br s, 6H), 1,33 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 449,2 [M+H]+.
Примеры в следующей таблице синтезировали с помощью ссылки на способ синтеза из примера 4.
Пример 7. Синтез соединения BB-7
Соединение BB-1 (1,0 г) растворяли в 2-бутаноне (50 мл) при комнатной температуре и затем последовательно добавляли метил-3-бромпропионaт (2,47 г), йодид натрия (2,22 г) и фосфат калия (4,71 г). Реакционный раствор нагревали до 95°C и перемешивали в течение 40 часов. Затем реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (50 мл) и этилацетат (50 мл) и смесь подвергали жидкостному разделению. Органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и затем фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-2/1) с получением соединения BB-7.
1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ = 6,85 (br s, 2H), 6,72 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 5,44 (s, 1H), 4,58-4,51 (m, 2H), 4,13-4,06 (m, 2H), 4,03-4,00 (m, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 2,90-2,83 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,02 (s, 6H), 1,46 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 492,1 [M+H]+.
Пример 8. Синтез соединения WX001
Соединение BB-1 (100,00 мг) растворяли в DMF (2 мл) при комнатной температуре и последовательно добавляли сложный эфир 4-метилбензолсульфоновой кислоты и 2-(2-оксазолидинон-3-ил)этила (422,19 мг), карбонат калия (306,76 мг) и йодид натрия (221,79 мг). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 72 часов в атмосфере азота. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали, разбавляли водой (6 мл) и экстрагировали этилацетатом (6 мл × 3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) с получением соединения WX001.
1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ = 6,93 (s, 2H), 6,62 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,31 (s, 1H), 4,27 (br s, 2H), 4,15-4,01 (m, 6H), 3,91 (br s, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,52 (br s, 2H), 2,84 (br s, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,15 (br s, 6H), 1,41 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 519,0 [M+H]+.
Пример 9. Синтез соединения WX002
Соединение BB-1 (4,5 г) растворяли в 2-бутаноне (120 мл) при комнатной температуре и последовательно добавляли 3-бромпропионитрил (8,92 г), карбонат калия (13,8 г) и йодид калия (11,05 г). Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 60 часов в атмосфере азота. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали. Добавляли воду (100 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (150 мл × 3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и затем фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 3/1-1/1) с получением соединения WX002-1.
1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ = 6,79 (br s, 2H), 6,66 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,39 (s, 1H), 4,51 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 4,24 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,98 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 3,70 (s, 3H), 2,90 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 2,84 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,98 (br s, 6H), 1,41 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 459,5 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения WX002
Соединение WX002-1 (160,00 мг) растворяли в толуоле (4 мл) при комнатной температуре и последовательно добавляли триметилсилилметилазид (120,60 мг) и оксид дибутилолова (300,00 мг). Реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до 25°C и концентрировали. Добавляли воду (5 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (5 мл × 3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX002.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 7,18 (br s, 2H), 7,00 (s, 1H), 6,83 (br s, 1H), 5,70 (br s, 1H), 4,76 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 4,19-4,12 (m, 4H), 3,72 (s, 3H), 3,60 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 3,06 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,30 (br s, 6H), 1,45 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 502,1 [M+H]+.
Пример 10. Синтез соединения WX003
Соединение BB-4 (500,00 мг) и WX003-1 (413,91 мг) растворяли в трет-бутаноле (20 мл) при комнатной температуре и в вышеуказанный раствор добавляли трис(дибензилиденацетон)дипалладий (81,66 мг), 2-ди-трет-бутилфосфино-3,4,5,6-тетраметил-2,4,6-триизопропил-1,1-бифенил (85,74 мг) и безводный фосфат калия (378,58 мг). Реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и медленно добавляли воду (30 мл) и этилацетат (50 мл) для гашения реакции. Смесь подвергали жидкостному разделению с получением органической фазы, которую промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол = 50/1-10/1) с получением соединения WX003-2.
MS-ESI масса/заряд: 600,3 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения WX003
Соединение WX003-2 (0,22 г) и раствор хлористоводородной кислоты в этилацетате (3 мл, 4 моль/л) растворяли в этилацетате (20 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 1 часа в атмосфере азота. Смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX003.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD -d4) δ = 8.26 (br s, 1H), 7,19 (s, 2H), 7,00 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 4,62 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 4,21-4,16 (m, 4H), 3,86 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,07 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,31 (s, 6H), 1,45 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 516,2 [M+H]+.
Примеры в следующей таблице синтезировали с помощью ссылки на способ синтеза из примера 10.
Пример 12. Синтез соединения WX005
Соединение BB-1 (3,22 г) растворяли в DMF (30 мл) при комнатной температуре и последовательно добавляли WX005-1 (9,00 г), карбонат калия (9,88 г) и йодид натрия (7,14 г). Реакционную смесь перемешивали при 83°C в течение 72 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь концентрировали с удалением большей части органического растворителя и затем добавляли воду (70 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (70 мл × 3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и затем фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 4/1-3/2) с получением соединения WX005-2. MS-ESI масса/заряд: 494,3 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения WX005-3
Соединение WX005-2 (0,42 г) и концентрировали хлористоводородной кислотой (1 мл, 12 моль/л) растворяли в 1,4-диоксане (3 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 12 часов в атмосфере азота. В смесь добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия (3 мл) для регулирования pH до 7-8 с последующим добавлением воды (3 мл) и экстрагировали этилацетатом (5 мл × 3). Затем органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения WX005-3, которое применяли непосредственно на следующей стадии.
MS-ESI масса/заряд: 448,0 [M+H]+.
Стадия 3. Синтез соединения WX005
Соединение WX005-3 (100,00 мг) и 2-амино-1,3,4-тиадиазол (45,19 мг) растворяли в этаноле (2 мл) при комнатной температуре. Затем после перемешивания при 78°C в течение 12 часов в атмосфере азота смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли NaBH4 (67,62 мг) и метанол (0,5 мл) и полученную смесь нагревали до 78°C и перемешивали в течение дополнительных 12 часов. Добавляли воду (1 мл) для гашения реакционной смеси и затем смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX005.
1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ = 8,26 (s, 1H), 6,92 (br s, 1H), 6,82 (s, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,41 (s, 1H), 4,61-4,54 (m, 2H), 4,08-3,94 (m, 4H), 3,81-3,73 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,82 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 6H), 1,41 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 533,0 [M+H]+.
Примеры в следующей таблице синтезировали с помощью ссылки на способ синтеза из примера 12.
Пример 17. Синтез соединения WX010
Соединение BB-1 (5,00 г) растворяли в 2-бутаноне (100 мл) при комнатной температуре и последовательно добавляли 2-(3-бромпропил)изоиндолин-1,3-дион (13,22 г), карбонат калия (10,23 г) и йодид натрия (7,39 г). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 30 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь концентрировали с удалением большей части органического растворителя и затем добавляли воду (50 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и затем фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 5/1-1/1) с получением соединения WX010-1. MS-ESI масса/заряд: 593,2 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения WX010-2
Соединение WX010-1 (1,30 г) растворяли в трихлорметане (10 мл) и этаноле (10 мл) при комнатной температуре и добавляли гидразингидрат (5,15 г, 85% чистоты). Смесь перемешивали при 70°C в течение 10 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь концентрировали с удалением большей части органического растворителя и затем добавляли воду (30 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (15 мл × 2). Затем органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения WX010-2. MS-ESI масса/заряд: 463,2 [M+H]+.
Стадия 3. Синтез соединения WX010-4
Соединение WX010-2 (900,00 мг) и WX003-1 (903,06 мг) растворяли в трет-бутаноле (5 мл) при комнатной температуре и в вышеуказанный раствор добавляли трис(дибензилиденацетон)дипалладий (356,32 мг), 2-ди-трет-бутилфосфино-3,4,5,6-тетраметил-2,4,6-триизопропил-1,1-бифенил (187,07 мг) и безводный фосфат калия (825,98 мг). Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 20/1-1/1) с получением соединения WX010-4. MS-ESI масса/заряд: 614,1 [M+H]+.
Стадия 4. Синтез соединения WX010
Соединение WX010-4 (1,00 г) и раствор хлористоводородной кислоты в этилацетате (5 мл, 4 моль/л) растворяли в этилацетате (5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 10 минут в атмосфере азота. Смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX010.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 8,27 (s, 1H), 7,18 (s, 2H), 6,99 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), 5,68 (s, 1H), 4,49 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 4,25-4,13 (m, 4H), 3,71 (s, 3H), 3,63 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 3,08 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,32-2,16 (m, 8 H), 1,45 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 530,1 [M+H]+.
Пример 18. Синтез соединения WX015
Соединение BB-4 (50,0 мг) и 4H-1,2,4-триазол-3-карбоновую кислоту (12,6 мг) растворяли в DMF (2 мл) при комнатной температуре и затем добавляли HATU (50,86 мг) и DIPEA (28,81 мг). Смесь перемешивали при 25°C в течение 24 часов. После завершения реакции смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX015.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD ) δ = 8,39 (br s, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,85 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 5,50 (s, 1H), 4,54-4,51 (m, 2H), 4,11 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 3,98 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 3,90 (t, J=5,6 Гц, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,91 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,03 (s, 6H), 1,42 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 544,5 [M+H]+.
Примеры в следующей таблице синтезировали с помощью ссылки на способ синтеза из примера 18.
Пример 57. Синтез соединения WX054
Соединение WX054-1 (174,4 мг) растворяли в THF (4 мл) при комнатной температуре и затем смесь охлаждали до 0°C с последующим добавлением по каплям LHMDS (1 моль/л, 1,02 мл). Полученную смесь выдерживали при 0°C и перемешивали в течение 0,5 часа и затем добавляли по каплям раствор соединения BB-7 (200 мг) в THF (2 мл). Затем, после добавления, обеспечивали нагревание смеси естественным путем до 30°C и перемешивали ее в течение дополнительных 2 часов. Реакционную смесь гасили водой (10 мл) и добавляли этилацетат (10 мл ×3) для экстракции. Органические фазы объединяли, последовательно промывали водой (10 мл) и насыщенным солевым раствором (10 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX054-2.
MS-ESI масса/заряд: 674,6 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения WX054
Соединение WX054-2 (20 мг) растворяли в дихлорметане (5 мг) в атмосфере азота и затем добавляли трифторуксусную кислоту (1,54 г) и смесь перемешивали при 25°C в течение 3 часов. После завершения реакции смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением большей части растворителя и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX054.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 8,75 (br s, 1H), 7,14 (s, 2H), 6,96 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 5,65 (s, 1H), 4,70-4,62 (m, 2H), 4,20-4,10 (m, 4H), 3,68 (s, 3H), 3,20-3,10 (m, 2H), 3,04 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,26 (s, 6H), 1,41 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 544,3 [M+H]+.
Примеры в следующей таблице синтезировали с помощью ссылки на способ синтеза из примера 57.
Пример 61. Синтез соединения WX058
Соединение BB-1 (5,00 г) растворяли в 2-бутаноне (20 мл) при комнатной температуре и затем последовательно добавляли этил-2-бромацетат (4,12 г), йодид натрия (0,37 г) и карбонат калия (3,41 г). Реакционный раствор перемешивали при 80°C в течение 12 часов. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, разбавляли дихлорметаном (50 мл) и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 100/1-10/1) с получением соединения WX058-1.
1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ = 6,77 (s, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,58 (s, 1H), 5,42 (s, 1H), 4,93 (br s, 2H), 4,16 (q, J = 7,2 Гц, 2H), 4,05-3,96 (m, 4H), 3,69 (s, 3H), 2,82 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 2,19 (s, 3H), 1,93 (s, 6H), 1,40 (t, J = 7,2 Гц, 3H), 1,21 (t, J = 7,2 Гц, 3H).
Стадия 2. Синтез соединения WX058-2
Соединение WX058-1 (0,30 г) растворяли в этаноле (10 мл), воде (4 мл) и тетрагидрофуране (6 мл) при комнатной температуре и затем добавляли моногидрат гидроксида лития (0,10 г). Реакционный раствор перемешивали при 25°C в течение 8 часов. Затем реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении с последующим добавлением воды (10 мл). Водную фазу доводили до pH = 3-4 с помощью 4 моль/л HCl и твердый остаток осаждали. Смесь фильтровали и высушивали с получением соединения WX058-2. MS-ESI масса/заряд: 464,2 [M+H]+.
Стадия 3. Синтез соединения WX058-3
Соединение 58-1A (2,50 г) растворяли в этилацетате (20 мл) при комнатной температуре с последующим добавлением (Boc)2O (9,19 г), ледяной уксусной кислоты (8 мл) и Pd/C (0,25 г, чистота 10%) и реакционный раствор перемешивали при 30°C в течение 12 часов при 25 фунтах/кв. дюйм в атмосфере водорода. Затем реакционный раствор фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-2/1) с получением соединения 58-2A.
1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ = 8,20 (s, 1H), 5,42-5,39 (m, 1H), 5,24 (br s, 1H), 4,44 (d, J = 5,2 Гц, 2H), 4,08-4,06 (m, 1H), 3,74-3,70 (m, 1H), 2,10-2,04 (m, 4H), 1,70-1,63 (m, 2H), 1,46 (s, 9H).
Соединение 58-2A (0,60 г) и раствор хлористоводородной кислоты в этилацетате (1 мл, 4 моль/л) растворяли в этилацетате (2 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 30°C в течение 30 минут в атмосфере азота. Твердый остаток осаждали. Смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали этилацетатом (2 мл) и высушивали с получением соединения WX058-3. 1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 9,06 (s, 1H), 4,39 (s, 2H).
Стадия 4. Синтез соединения WX058
Соединение WX058-2 (0,15 г) и WX058-3 (0,43 г) растворяли в DMF (2 мл) при комнатной температуре с последующим добавлением триэтиламина (0,1 мл) и HATU (0,18 г) и реакционный раствор перемешивали при 30°C в течение 10 часов, затем выливали в воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали с удалением высушивающего средства и концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX058.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 8,64 (s, 1H), 7,14 (s, 2H), 6,99 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,18 (s, 2H), 4,69 (s, 2H), 4,28-4,11 (m, 4H), 3,71 (s, 3H), 3,07 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,22 (br s, 6H), 1,53-1,39 (m, 3H). MS-ESI масса/заряд: 544,1 [M+H]+.
Пример 62. Синтез соединения WX059
Соединение BB-4 (30 мг) и 1H-1,2,3-триазол-5-сульфонилхлорид (22,42 мг) растворяли в DMF (1 мл) при комнатной температуре с последующим добавлением триэтиламина (13,54 мг) и смесь перемешивали при 20°C. После завершения реакции смесь выливали в насыщенный солевой раствор (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (15 мл × 3). Органические фазы объединяли, последовательно промывали один раз водой (50 мл) и насыщенным солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали с удалением высушивающего средства. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX059.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 8,29 (br s, 1H), 7,14 (br s, 2H), 6,98 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 5,66 (s, 1H), 4,51 (br s, 2H), 4,24-4,10 (m, 4H), 3,70 (s, 3H), 3,64 (br s, 2H), 3,06 (br s, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,29 (s, 6H), 1,43 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 580,0 [M+H]+.
Примеры в следующей таблице синтезировали с помощью ссылки на способ синтеза из примера 62.
Пример 64. Синтез соединения WX064
Соединение WX064-1 (20 г) растворяли в DMF (300 мл) при комнатной температуре и затем добавляли гидрид натрия (4,30 г, чистота 60%). Затем смесь перемешивали в течение 0,5 часа, быстро добавляли 1,2-дибромэтан (100,97 г) и затем смесь нагревали до 60°C и перемешивали в течение 11,5 часа. Смесь охлаждали до комнатной температуры, реакционную смесь гасили насыщенным солевым раствором (600 мл) и добавляли этилацетат (200 мл × 3) для экстракции. Органические фазы объединяли, последовательно промывали водой (600 мл) и насыщенным солевым раствором (600 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 20/1-50/1), с получением соединения WX064-2.
MS-ESI масса/заряд: 231,8 [M-100+2+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения WX064-3
Соединение WX064-2 (3,66 г) и соединение BB-1 (1,5 г) растворяли в DMF (20 мл) в атмосфере азота и затем добавляли безводный фосфат калия (4,71 г) и йодид натрия (3,33 г). Реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 48 часов. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры, реакционную смесь гасили насыщенным солевым раствором (100 мл) и затем добавляли этилацетат (40 мл × 3) для экстракции. Органические фазы объединяли, промывали с помощью воды (200 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток перемешивали в этилацетате (25 мл) в течение 5 минут, нерастворимые вещества удаляли путем фильтрации и фильтрат концентрировали и очищали с помощью препаративной TLC (элюент: дихлорметан/метанол = 10/1), с получением соединения WX064-3.
MS-ESI масса/заряд: 655,6 [M+H]+.
Стадия 3. Синтез соединения WX064-4
Соединение WX064-3 (700 мг) растворяли в растворе хлороводорода в этилацетате (4 М, 7,67 мл) при комнатной температуре и смесь перемешивали при 40°C в течение 3 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл) и реакционный раствор экстрагировали дихлорметаном (10 мл × 4). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором (40 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения WX064-4, которое применяли непосредственно на следующей стадии.
MS-ESI масса/заряд: 555,1 [M+H]+.
Стадия 4. Синтез соединения WX064-5
Соединение WX064-4 (410 мг) растворяли в метаноле (10 мл) в атмосфере азота и затем добавляли влажный палладий на угле (200 мг, чистота 10%). Смесь затем перемешивали в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм) с применением баллона с водородом при комнатной температуре в течение 8 часов. Реакционный раствор фильтровали (фильтрация с помощью диатомовой земли) с удалением катализатора и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт перемешивали в смешанном растворителе из петролейного эфира (15 мл) и этилацетата (0,5 мл) в течение 30 минут и смесь фильтровали с получением соединения WX064-5.
MS-ESI масса/заряд: 465,3 [M+H]+.
Стадия 5. Синтез соединения WX064
Соединение WX064-5 (100 мг), 1,2,3-триазол-5-карбоновую кислоту (48,68 мг) и триэтиламин (65,35 мг) растворяли в дихлорметане (2 мл) при комнатной температуре и затем добавляли T3P (273,97 мг). Смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 6 часов. Реакционный раствор разбавляли дихлорметаном (13 мл), промывали водой (20 мл × 3), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью HPLC с получением соединения WX064.
1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ = 8,25 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 6,71 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,24 (t, J = 5,6 Гц, 2H), 4,14 (q, J = 6,8 Гц, 2H), 4,04-3,97 (m, 2H), 3,80 (br s, 2H), 3,74 (s, 3H), 2,94 (t, J = 6,0 Гц, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,17 (br s, 6H), 1,49 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 560,3 [M+H]+.
Пример 65. Синтез соединения WX065
В раствор соединения 65-1A (2,00 г) и п-толуолсульфоновой кислоты (1,10 г) в тетрагидрофуране (50 мл) добавляли по каплям DHP (2,15 г) при комнатной температуре и затем смесь перемешивали при 20°C в течение 12 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и концентрат растворяли в этилацетате (100 мл), последовательно промывали один раз насыщенным бикарбонатом натрия (80 мл) и насыщенным солевым раствором (80 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 65-2A. MS-ESI масса/заряд: 241,2 [M+H]+.
В смесь соединения 65-2A (0,80 г) и карбоната калия (2,30 г) в DMF (10 мл) добавляли по каплям метилиодид (0,95 г) при 0°C и затем полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 12 часов. Реакционный раствор выливали в воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (10 мл × 2). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и затем концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 65-3A. MS-ESI масса/заряд: 255,2 [M+H]+.
В раствор соединения 65-3A (0,80 г) в тетрагидрофуране (4 мл) добавляли по каплям раствор гидроксида натрия (0,38 г) в воде (8 мл) при 0°C и затем смесь перемешивали при 25°C в течение 12 часов. Реакционный раствор регулировали до pH = 4 с помощью 2 моль/л хлористоводородной кислоты на ледяной бане и затем экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и затем концентрировали при пониженном давлении с получением соединения WX065-5. MS-ESI масса/заряд: 227,0 [M+H]+.
Стадия 2. Синтез соединения WX065-6
Соединения WX064-5 (60,0 мг), WX065-5 (58,44 мг) и триэтиламин (65,35 мг) растворяли в DMF (1 мл) при комнатной температуре и затем добавляли PyBOP (201,64 мг). Затем смесь перемешивали при 20°C в течение 12 часов. Смесь очищали с помощью HPLC с получением соединения WX065-6. MS-ESI масса/заряд: 673,4 [M+H]+.
Стадия 5. Синтез соединения WX065
Соединение WX065-6 (40 мг) растворяли в растворе хлороводорода в этилацетате (4 М, 1 мл) и смесь перемешивали при 20°C в течение 1 часа. Реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и концентрат очищали с помощью HPLC с получением соединения WX065.
1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ = 7,95 (s, 1H), 7,12 (s, 2H), 6,98 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 5,68 (s, 1H), 4,69-4,66 (m, 2H), 4,45 (br s, 2H), 4,21 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 4,16 (q, J = 7,2 Гц, 2H), 3,99 (br s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,07 (t, J = 6,4 Гц, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,24 (s, 6H), 1,43 (t, J = 7,2 Гц, 3H). MS-ESI масса/заряд: 589,1 [M+H]+.
Примеры в следующей таблице синтезировали с помощью ссылки на способ синтеза из примера 65.
Данные ЯМР и MS примеров
Экспериментальный пример 1. Обнаружение in vitro ингибирующей активности соединений в отношении фермента PDE 3A
Цель эксперимента: определение экспрессии AMP/GMP на основе поляризации флуоресценции, т. е. отслеживание связывания AMP/GMP к антителу для обозначения активности фермента.
Реагенты
Экспериментальный буферный раствор: 10 мM трис-HCl (pH 7,5), 5 мM MgCl2, 0,01% Brij 35, 1 мM дитиотреитол (DTT) и 1% DMSO.
Фермент: рекомбинантная PDE3A человека (регистрационный номер гена: NM_000921; 669 конец аминокислоты) экспрессировалась бакуловирусом в клетках насекомых Sf9 с применением GST-метки на N-конце с молекулярной массой 84 кДа.
Субстрат фермента: 1 мкМ cAMP.
Обнаружение: антитело к AMP2/GMP2 Transcreener® и метка AlexaFluor633 для AMP2/GMP2.
Процедура
1. Каждый из ферментов в виде фермента рекомбинантной PDE3A человека и субстрата фермента (1 мкМ cAMP) растворяли в свежеприготовленном экспериментальном буферном растворе.
1. Буферный раствор фермента PDE3A переносили в реакционные лунки.
2. Соединение, которое растворяли в 100% DMSO, добавляли в реакционные лунки, содержащие буферный раствор фермента PDE3A, с помощью акустической методики (Echo 550; нанолитровый объем) и смесь инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре.
3. Буферный раствор субстрата фермента добавляли в вышеуказанные реакционные лунки для инициации реакции.
4. Полученную смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа.
5. Смесь для обнаружения (антитело к AMP2/GMP2 Transcreener® и метка AlexaFluor633 для AMP2/GMP2) добавляли для остановки реакции и полученную смесь инкубировали в течение 90 минут при медленном перемешивании. Измеряемый диапазон поляризации флуоресценции составлял Ex/Em = 620/688.
Анализ данных: сигнал поляризации флуоресценции преобразовывали в нМ по стандартной кривой AMP/GMP и рассчитывали процентное значение активности фермента относительно контроля DMSO с помощью Excel. Применяли GraphPad Prism для аппроксимации кривой (построение медицинских графиков). Результаты экспериментов показаны в таблице 1.
Экспериментальный пример 2. Обнаружение in vitro ингибирующей активности соединений в отношении фермента PDE 4B
Цель эксперимента: определение экспрессии AMP/GMP на основе поляризации флуоресценции, т. е. отслеживание связывания AMP/GMP к антителу для обозначения активности фермента.
Реагенты
Экспериментальный буферный раствор: 10 мM трис-HCl (pH 7,5), 5 мM MgCl2, 0,01% Brij 35, 1 мM DTT и 1% DMSO.
Фермент: рекомбинантная PDE4B человека (регистрационный номер гена: NM_002600; 305 конец аминокислоты) экспрессировалась бакуловирусом в клетках насекомых Sf9 с применением GST-метки на N-конце с молекулярной массой 78 кДа.
Субстрат фермента: 1 мкМ cAMP.
Обнаружение: антитело к AMP2/GMP2 Transcreener® и метка AlexaFluor633 для AMP2/GMP2.
Процедура
1. Каждый из ферментов в виде фермента рекомбинантной PDE4B человека и субстрата фермента (1 мкМ cAMP) растворяли в свежеприготовленном экспериментальном буферном растворе.
2. Буферный раствор фермента PDE4B переносили в реакционные лунки.
3. Соединение, которое растворяли в 100% DMSO, добавляли в реакционные лунки, содержащие буферный раствор фермента PDE4B, с помощью акустической методики (Echo 550; нанолитровый объем) и смесь инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре.
4. Буферный раствор субстрата фермента добавляли в вышеуказанные реакционные лунки для инициации реакции.
5. Полученную смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа.
6. Смесь для обнаружения (антитело к AMP2/GMP2 Transcreener® и метка AlexaFluor633 для AMP2/GMP2) добавляли для остановки реакции и полученную смесь инкубировали в течение 90 минут при медленном перемешивании. Измеряемый диапазон поляризации флуоресценции составлял Ex/Em = 620/688.
Анализ данных: сигнал поляризации флуоресценции преобразовывали в нМ по стандартной кривой AMP/GMP и рассчитывали процентное значение активности фермента относительно контроля DMSO с помощью Excel. Применяли GraphPad Prism для аппроксимации кривой (построение медицинских графиков).
Результаты экспериментов показаны в таблице 1.
Таблица 1. Результаты скринингового теста in vitro для соединений
Экспериментальный пример 3. Обнаружение in vitro ингибирующей активности соединений в отношении TNF-α в мононуклеарных клетках периферической крови человека
Цель эксперимента: демонстрация противовоспалительной активности на клеточном уровне тестируемого соединения на основе уровня TNF-α в мононуклеарных клетках периферической крови человека (hPBMCs).
Процедура
1. Цельную кровь здорового человека собирали в пробирку с антикоагулянтом EDTA.
2. PBMC разделяли путем центрифугирования в градиенте плотности фикола и затем подсчитывали. Концентрацию клеток регулировали до 2 × 106/мл.
3. В каждую лунку 96-луночного планшета с U-образным дном добавляли 2 × 105 клеток, 1 нг/мл LPS и растворы соединения в DMSO при концентрациях 100 мкM, 10 мкM, 1 мкM, 100 нM, 10 нM, 1 нM, 100 пM и 10 пM, 200 мкл на лунку.
4. Смесь инкубировали в течение 24 часов и затем собирали супернатант.
5. Уровень TNF-α в супернатанте определяли с помощью ELIZA, применяли программное обеспечение Graphpad Prism для построения кривых ингибирования и рассчитывали IC50.
Результаты экспериментов показаны в таблице 2.
Таблица 2. Результаты эксперимента in vitro для соединений
Экспериментальный пример 4. Фармакокинетический эксперимент в отношении собак породы бигль
В данном исследовании самцы собак породы бигль были выбраны в качестве тестируемых животных, и использовали способ с применением жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (LC-MS/MS) для количественного измерения концентрации лекарственного средства в плазме крови собак породы бигль в разные моменты времени после внутривенной инъекции или перорального введения соединения WX036 так, чтобы оценить фармакокинетические характеристики соединения WX036 у собак породы бигль.
Прозрачный раствор соединения WX036 вводили путем инъекции двум собакам породы бигль массой 10-12 кг через головную вену или подкожную вену и раствор тестируемого соединение вводили внутрижелудочно двум собакам породы бигль массой 10-12 кг (в течение ночи). Всех животных каждый раз подвергали сбору крови из периферических вен в объеме приблизительно 500 мкл через 0,0333, 0,0833, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы, и кровь переносили в коммерческие пробирки для центрифугирования, содержащие 0,85-1,15 мг антикоагулянта в виде K2 EDTA*2H2O, и плазму отбирали путем центрифугирования при 3000 g в течение 10 минут при 4°C. Концентрацию плазмы измеряли с помощью способа LC-MS/MS и рассчитывали относительные фармакокинетические параметры с помощью фармакокинетического программного обеспечения WinNonlin™™ Version 6.3 (Pharsight, Маунтин-Вью, Калифорния) с использованием линейно-логарифмического метода трапеций с некомпартментной моделью.
Таблица 3. Фармакокинетические параметры соединения WX036 у собак породы бигль
Экспериментальный пример 5. Ингибирующий эффект в отношении активности изоферментов (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 и CYP3A4) микросомального цитохрома P450 печени человека
В общей сложности каждый из 5 специфических субстратов зондов для 5 изоферментов CYP, а именно фенацетина (CYP1A2), диклофенака (CYP2C9), (S)-мефенитоина (CYP2C19), декстрометорфана (CYP2D6) и мидазолама (CYP3A4) совместно инкубировали с микросомами печени человека и тестируемым соединением, и затем добавляли никотинамидадениндинуклеотидфосфат (NADPH) для инициации реакции. После завершения реакции образцы обрабатывали и концентрации 5 метаболитов (ацетаминофена, 4'-гидроксидиклофенака, 4'-гидроксимефенитоина, декстрорфана и 1'-гидроксимидазолама) получали с помощью конкретных субстратов, которые количественно обнаруживали с помощью LC-MS/MS, для расчета соответствующей концентрации полумаксимального ингибирования (IC 50).
Таблица 4. Ингибирование пяти ферментов CYP соединениями WX026 и WX036
Экспериментальный пример 6. Фармакодинамическое исследование на модели острого повреждения легкого у крыс, индуцированного сигаретным дымом
Экспериментальные животные
Самцы крыс линии Спраг-Доули (поставляемые Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.), категории SPF, приблизительно 200 г.
Процедура проведения эксперимента
1. Животные случайным образом разделили на 3 группы по весу после недельного адаптивного кормления.
2. На 1-3 день эксперимента соответствующее соединение для каждой группы распыляли в течение 30 минут. Затем животных в модельной группе и каждой группе с обработкой соединением подвергали воздействию сигаретного дыма в течение 1 часа, и после 4-часового интервала животных снова подвергали воздействию сигаретного дыма в течение 1 часа. Животные подвергались воздействию сигаретного дыма дважды в день в течение 3 дней подряд. Контрольные животные подвергались воздействию комнатного воздуха.
3. На 4 день эксперимента соответствующее соединение для каждой группы распыляли в течение 30 минут, и затем животные в модельной группе и каждой группе с обработкой соединением вдыхали 150 мкг/мл распыленного LPS в течение 15 минут. Через три часа (с момента начала распыления) животных подвергали воздействию сигаретного дыма в течение 1 часа и затем исследовали функцию легких (Penh) у животных; собирали жидкость бронхоальвеолярного лаважа (BALF) для подсчета клеток после того, как животных подвергали эвтаназии с помощью CO2.
4. Введение
Способ введения: распыление тестируемого соединения при максимальной скорости распыления (приблизительно 12 мл) с помощью распыляющего устройства с воздействием на все тело в течение 30 минут.
Частота введения: распыление лекарственного средства или растворителя в течение 30 минут в день утром перед воздействием сигаретного дыма, и проведение введения перед ингаляцией распыленного LPS на 4 день.
5. Измерения фармакодинамических конечных точек
(1) Общее количество лейкоцитов в BALF.
(2) Исследование функции легких (индекс сопротивления дыхательных путей Penh) с индуцированием метахолином (Mch).
Таблица 5. Экспериментальные группы
Результаты экспериментов показаны на фиг. 1 и фиг. 2.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| БОРАТНОЕ ПРОИЗВОДНОЕ АЗЕТИДИНА | 2019 |
|
RU2802287C2 |
| СОЕДИНЕНИЕ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЕ СОБОЙ ПРОЛЕКАРСТВО ЛАНОСТЕРИНА, А ТАКЖЕ СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2018 |
|
RU2720677C1 |
| ТИОФЕНОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ | 2017 |
|
RU2709473C1 |
| БЕНЗОКСАЗИНИЛ-АМИДОЦИКЛОПЕНТИЛ-ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ МОДУЛЯТОРЫ ХЕМОКИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ | 2004 |
|
RU2301802C2 |
| N-7 ЗАМЕЩЕННЫЕ ПУРИНЫ И ПИРАЗОЛОПИРИМИДИНЫ, ИХ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2010 |
|
RU2515541C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛА, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ КОМПОЗИЦИИ, ИХ ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ | 2004 |
|
RU2346938C2 |
| ИНГИБИТОРЫ МАТРИКСНОЙ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ (MMP) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2820540C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ТРИАЗОЛА КАК ИНГИБИТОРЫ 11-БЕТА-ГИДРОКСИСТЕРОИДДЕГИДРОГЕНАЗЫ-1 | 2003 |
|
RU2360910C2 |
| ТРИЦИКЛИЧЕСКИЕ КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИДИН-2-ОНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ BRD4 | 2016 |
|
RU2734959C2 |
| НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ МИМЕТИКИ ОБРАТНОГО ПОВОРОТА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2008 |
|
RU2457210C2 |
Группа изобретений относится к органической химии и включает конденсированное трициклическое соединение формулы (I), его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемую соль, фармацевтическую композицию, его содержащую, применение и способ лечения. В формуле (I) кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из 5-членного гетероциклила, содержащего 1-3 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и 5-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один атом кольца, выбранный из группы, состоящей из N, O и S, где 5-членный гетероциклил или 5-членный гетероарил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, =O, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -C(O)O(C1-3алкил) или C1-6алкокси, где C1-6алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогенов, амино и гидрокси; атомы кольца в кольце Cy включают по меньшей мере один атом азота; L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)-, -O-, -S-, -CH2N(R6)C(O)-, -CH2C(O)N(R6)-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2- и одинарной связи; n равняется 1, 2, 3 или 4; E1 представляет собой -(CH2)m-, где m равняется 1, 2 или 3; E2 выбран из группы, состоящей из -O-, -NH-, -S- и одинарной связи; каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена и C1-6алкила; каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода и гидрокси. Технический результат – соединение формулы (I) в качестве двойного ингибитора PDE3/PDE4. 5 н. и 50 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 71 пр.
1. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль:
где кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из 5-членного гетероциклила, содержащего 1-3 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и 5-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один атом кольца, выбранный из группы, состоящей из N, O и S, где 5-членный гетероциклил или 5-членный гетероарил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, =O, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -C(O)O(C1-3алкил) или C1-6алкокси, где C1-6алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогенов, амино и гидрокси;
атомы кольца в кольце Cy включают по меньшей мере один атом азота;
L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)-, -O-, -S-, -CH2N(R6)C(O)-, -CH2C(O)N(R6)-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2- и одинарной связи;
n равняется 1, 2, 3 или 4;
E1 представляет собой -(CH2)m-, где m равняется 1, 2 или 3;
E2 выбран из группы, состоящей из -O-, -NH-, -S- и одинарной связи;
каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена и C1-6алкила; и
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода и гидрокси.
2. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из 5-членного гетероциклила, содержащего 1-3 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и 5-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один атом кольца, выбранный из группы, состоящей из N, O и S, где 5-членный гетероциклил или 5-членный гетероарил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, =O, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -C(O)O(C1-3алкил), C1-6алкокси или C1-6алкил, замещенный одним или более галогенами.
3. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 2, где кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из 5-членного гетероциклила, содержащего 1-3 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и 5-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один атом кольца, выбранный из группы, состоящей из N, O и S, где 5-членный гетероарил необязательно замещен одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -C(O)O(C1-3алкил), C1-6алкокси или C1-6алкил, замещенный одним или более галогенами, где 5-членный гетероциклил необязательно замещен одним или более =O.
4. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 3, где кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из оксазолидин-2-она, имидазолила, пиразолила, оксазолила, триазолила, оксадиазолила, тетразолила, тиадиазолила и изоксазолила, где имидазолил, пиразолил, оксазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиадиазолил или изоксазолил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, галоген, циано, C1-6алкил, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -COOH, -C(O)O(C1-3алкил), C1-6алкокси или C1-6алкил, замещенный одним или более галогенами.
5. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 2, где кольцо Cy представляет собой 5-членный гетероарил, где 5-членный гетероарил необязательно замещен одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, бром, йод, циано, C1-3алкил, -C(O)NH2, -C(O)O(C1-3алкил), C1-3алкокси или C1-3алкил, замещенный одним или более галогенами.
6. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 4, где кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из имидазолила, пиразолила, оксазолила, триазолила, оксадиазолила, тетразолила, тиадиазолила и изоксазолила, где имидазолил, пиразолил, оксазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиадиазолил или изоксазолил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, бром, йод, циано, C1-3алкил, -C(O)NH2, -C(O)O(C1-3алкил), C1-3алкокси или C1-3алкил, замещенный одним или более галогенами.
7. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 5, где кольцо Cy представляет собой 5-членный гетероарил, содержащий по меньшей мере один атом кольца, выбранный из группы, состоящей из N, O и S, где 5-членный гетероарил необязательно замещен одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, циано, метил, -C(O)NH2, -C(O)OCH3, метокси или трифторметил.
8. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 6, где кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из имидазолила, пиразолила, оксазолила, триазолила, оксадиазолила, тетразолила, тиадиазолила и изоксазолила, где имидазолил, пиразолил, оксазолил, триазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиадиазолил или изоксазолил необязательно замещены одной или более из следующих групп: амино, гидрокси, фтор, хлор, циано, метил, -C(O)NH2, -C(O)OCH3, метокси или трифторметил.
9. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где кольцо Cy выбрано из группы, состоящей из структурных звеньев 
и 
;
где 
представляет собой одинарную связь или двойную связь;
каждый из T1, T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1), C(R1)2, O, N(R2), N и S;
каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-6алкила, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -C(O)O(C1-3алкил) и C1-6алкокси, где C1-6алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси;
каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси.
10. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где T1 выбран из группы, состоящей из C(R1), C(R1)2 и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1), C(R1)2, O, N(R2), N и S.
11. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 10, где T1 выбран из группы, состоящей из C(R1) и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1), O, N(R2), N и S.
12. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 11, где T1 выбран из группы, состоящей из C(R1) и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C(R1), O, N(R2), N и S.
13. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где в структурном звене 
T1 выбран из группы, состоящей из C(R1) и N, и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C(R1), O, N(R2) и N.
14. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где в структурном звене 
T1 представляет собой C(R1)2 и каждый из T2, T3 и T4 независимо выбран из группы, состоящей из C=O, C(R1)2 и O.
15. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-6алкила, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-3алкил), -C(O)N(C1-3алкил)2, -C(O)O(C1-3алкил) и C1-6алкокси, где C1-6алкил необязательно замещен одним или более галогенами.
16. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-6алкила, -C(O)NH2, -C(O)O(C1-3алкил) и C1-3алкокси, где C1-6алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси.
17. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 16, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-3алкила, -C(O)NH2, -C(O)OCH3 и C1-3алкокси, где C1-3алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси.
18. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 17, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, галогена, циано, C1-3алкила, -C(O)NH2, -C(O)OCH3 и C1-3алкокси, где C1-3алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 галогенами, амино или гидрокси.
19. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 17, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, фтора, хлора, циано, метила, -C(O)NH2, -C(O)OCH3, метокси и трифторметила.
20. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, C1-6алкила и C1-6алкокси, где C1-6алкил необязательно замещен одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, амино и гидрокси.
21. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 20, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, C1-3алкила и C1-3алкокси.
22. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 21, где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, амино, гидрокси, метила и метокси.
23. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен одним или более галогенами, амино или гидрокси.
24. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 23, где каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и C1-3алкила, где C1-3алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 галогенами, амино или гидрокси.
25. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 24, где каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и метила.
26. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 25, где каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода и метила.
27. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 9, где структурное звено 
представляет собой 
.
28. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 27, где структурное звено 
выбрано из группы, состоящей из 
и 
.
29. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 28, где структурное звено 
выбрано из группы, состоящей из:
30. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 29, где структурное звено 
выбрано из группы, состоящей из:
31. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 30, где структурное звено 
выбрано из группы, состоящей из:
32. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-31, где L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)-, -CH2N(R6)C(O)-, -CH2C(O)N(R6)-, -S(O)2NH-, -NHS(O)2- и одинарной связи.
33. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 32, где L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)-, -CH2N(R6)C(O)-, -S(O)2NH- и одинарной связи.
34. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 33, где L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)-, -C(O)N(R6)- и -S(O)2NH-.
35. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 34, где L выбран из группы, состоящей из -N(R6)-, -N(R6)C(O)- и -C(O)N(R6)-.
36. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 32, где L выбран из группы, состоящей из -NH-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -C(O)N(OH)-, -S(O)2NH- и одинарной связи.
37. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 36, где L выбран из группы, состоящей из -NH-, -NHC(O)-, -C(O)NH- и -C(O)N(OH)-.
38. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-31, где n выбран из группы, состоящей из 1, 2 и 3.
39. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 38, где n выбран из группы, состоящей из 1 и 2.
40. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 39, где n равняется 2.
41. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-31, где каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C1-3алкила.
42. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 41, где каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из галогена и метила.
43. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 42, где каждый из R3, R4 и R5 независимо выбран из метила.
44. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-31, где каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и метила.
45. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 44, где каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси и метила.
46. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 45, где каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из водорода и гидрокси.
47. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-31, где E1 выбран из группы, состоящей из -(CH2)2- и -(CH2)3-.
48. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-31, где E2 выбран из группы, состоящей из -O- и связи.
49. Соединение формулы (I), его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (II)
где E1, E2 и L определены в любом из п. 1, 32-37, 47 и 48; и
T1, T2, T3, T4 и структурное звено 
определены в любом из пп. 9-26 и 27-31.
50. Соединение, выбранное из:
его стереоизомер или таутомер или его фармацевтически приемлемая соль.
51. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с PDE3 и/или PDE4, содержащая терапевтически эффективное количество соединения, его стереоизомера или таутомера или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-50 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель или разбавитель.
52. Применение соединения, его стереоизомера или таутомера или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-50 или фармацевтической композиции по п. 51 для получения лекарственного препарата для лечения заболевания, связанного с PDE3 и/или PDE4.
53. Применение по п. 52, где заболевание, связанное с PDE3 и/или PDE4, выбрано из хронического обструктивного заболевания легких и астмы.
54. Способ лечения заболевания, связанного с PDE3 и/или PDE4, у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения, его стереоизомера или таутомера или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-50 или его фармацевтической композиции по п. 51.
55. Способ по п. 54, где заболевание, связанное с PDE3 и/или PDE4, выбрано из хронического обструктивного заболевания легких и астмы.
| US 4482556 A1, 13.11.1984 | |||
| Устройство для автоматического останова уточно-перемоточных и тому подобных головок с двумя и более веретенами в головке | 1939 |
|
SU58308A1 |
| Переходник Г.Н. Снежко | 1959 |
|
SU124893A1 |
| Frank Kienzle et al., Die synthese von 6,7-dihydro-2H-pyrimido[6, 1-a]isochinolin-4(3H)-onen und analogen verbindungen und deren wirkung als blutplattchenaggregationshemmer | |||
| Helvetica chimica acta, 1986, vol.69, no.7, pp.1671-1680 | |||
| КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ ФОРМА СОЕДИНЕНИЯ ПИРИМИДО [6, 1-а]ИЗОХИНОЛИН-4-ОНА | 2011 |
|
RU2577541C2 |
