Регулятор на основе азотсодержащего гетероциклического производного, способ его получения и его применение Российский патент 2024 года по МПК C07D403/04 C07D471/04 C07D487/04 A61K31/517 A61K31/519 A61P35/00 

[1] Данная заявка испрашивает приоритет заявки на патент Китая CN 2019104571616, поданной 29 мая 2019 г., заявки на патент Китая CN 2019109185824, поданной 26 сентября 2019 г., заявки на патент Китая CN 2019110189099, поданной 24 октября 2019 г., заявки на патент Китая CN 2019110901717, поданной 8 ноября 2019 г., заявки на патент Китая CN 2019113821593, поданной 27 декабря 2019 г., заявки на патент Китая CN 202010451270X, поданной 25 мая 2020 г. Настоящее изобретение ссылается на полный текст вышеупомянутых заявок на патент Китая.

Область техники

[2] Настоящее изобретение относится к области синтеза лекарственных средств, конкретно относится к ингибитору на основе азотсодержащего гетероциклического производного, к способу его получения и его применению.

Уровень техники

[3] Белки саркомы крыс (RAS), кодируемые прото-онкогенами HRAS, NRAS и KRAS, подразделены на 4 белка, HRAS, NRAS, KRAS4A и KRAS4B, и являются белками, связывающими GTP (гуанозинтрифосфат). RAS расположен на внутренней поверхности клеточной мембраны, выше по каскаду передачи сигнала, от которого находится рецепторная тирозинкиназа (RTK), после активации он контролирует последующие пути передачи сигнала PI3K, RAF и другие, тем самым регулируя рост клеток, выживание, миграцию и дифференциацию и т. д.

[4] RAS в организме находится в двух основных состояниях: неактивное состояние, объединенное с GDP (гуанозиндифосфатом), и активированное состояние, объединенное с GTP. Его активность регулируется двумя белками, фактор обмена гуаниновых нуклеотидов (GEF) вызывает высвобождение GDP из белка RAS, что позволяет связываться GTP с активацией RAS; белок, активирующий GTPазу (GAP), активирует GTPазную активность белка RAS путем гидролиза GTP, связанного с белком RAS, до GDP и инактивации RAS. В обычных обстоятельствах белок RAS находится в неактивном состоянии, вследствие мутации изменяется конформация, RAS постоянно находится в активированном состоянии, и последующие пути передачи сигнала также являются постоянно активированными, что приводит к возникновению различных видов рака.

[5] Как первый подтвержденный онкоген RAS является онкогеном с наивысшей частотой мутаций, на который приходится в среднем 25% случаев рака у человека. В семействе RAS наиболее распространенной является онкогенная мутация KRAS (85%), в то время как мутации NRAS (12%) и HRAS (3%) являются относительно редкими. Мутации KRAS в основном возникают при ряде видов рака, таких как рак поджелудочной железы (95%), колоректальный рак (52%) и рак легкого (31%) и т. д. Наиболее распространенный механизм мутации KRAS представляет собой точечную мутацию, которая в основном возникает в G12, G13 в p-петле (aa 10-17) и Q61 в участке переключателя II (aa 59-76), где мутация G12 является наиболее распространенной (83%). KRAS G12C является одной из наиболее распространенных мутаций при немелкоклеточном раке легкого (NSCLC) и колоректальном раке.

[6] Несмотря на огромную клиническую потребность, до сих пор не было представлено на рынке ни одного лекарственного средства, которое непосредственно направленно воздействует на KRAS, в настоящее время пациентов с мутациями KRAS при клиническом лечении можно лечить только с помощью химиотерапии. Сложность разработки ингибиторов KRAS в основном связана с двумя факторами: во-первых, структура белка RAS является гладкой, и небольшим молекулам трудно связываться с поверхностью белка; во-вторых, аффинность GTPазы RAS к GTP находится на пикомолярном (пM) уровне, а уровень эндогенного GTP является высоким, поэтому низкомолекулярным лекарственным средствам трудно обеспечивать блокирование объединения этих двух молекул. В недавних исследованиях выяснили, что вследствие мутации глицина (Gly) в цистеин (Cys) в положении 12 KRAS конформация изменяется, и образуется новое углубление для ковалентного связывания небольших молекул, которые необратимо блокируют связывание KRAS G12C с GDP в инактивированном состоянии. Следовательно, ожидают, что ингибиторы KRAS G12C будут первыми лекарственными средствами, которые непосредственно направленно воздействуют на KRAS.

[7] Сейчас многие ингибиторы KRAS G12C вошли в стадию клинического исследования, такие как AMG 510, разработанный Amgen, ARS-3248, разработанный Wellspring Biosciences, и MTRX849, разработанный Mirati, все из которых в настоящее время находятся на стадии клинических исследований I фазы, но ни один из них не был разработан и представлен на рынке в качестве ингибитора KRAS G12C.

[8] Не существует конкретного направленного лекарственного средства для KRAS G12C, но существует большая клиническая необходимость, ингибиторы KRAS G12C с более высокой селективностью, лучшей активностью и большей безопасностью имеют потенциал в лечении различных видов рака и имеют широкие перспективы на рынке.

Сущность изобретения

[9] Целью настоящего изобретения является обеспечение соединения, представленного общей формулой (I), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли, где структура соединения, представленного общей формулы (I), является следующей:

,

[10] где

[11] M выбран из CR_aaR₁ или NR₁;

[12] каждый из X₁ и X₂ независимо выбран из O, S, N, NR₂, CR₂ или CR_aaR₂;

[13] X₃ выбран из N, NR₃ или CR₃;

[14] R₁ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила или -(CH₂)_nC(O)CH=CHR_aa, при этом алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[15] R₂ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[16] R₃ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[17] R^a выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, оксо, тио, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циано-замещенного алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циано-замещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[18] R^b выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, оксо, тио, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циано-замещенного алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циано-замещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[19] или любые два смежных или несмежных R^b соединены с образованием циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[20] R^c выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, оксо, тио, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циано-замещенного алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила, гетероарила, -CH=CH(CH₂)_nR_bb, -CH=CH(CH₂)_nNR_bbR_cc, -O(CH₂)_nR_bb, -OC(R_bbR_cc)_n(CH₂)_mR_dd, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)R_cc,

[21] -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)NR_ccR_dd, -NR_bb(CH₂)_nR_cc, -(CH₂)_n1-, -(CH₂)_nR_bb, -(CH₂)_nOR_bb, -(CH₂)_nSR_bb, -(CH₂)_nC(O)R_bb, -(CH₂)_nC(O)OR_bb, -(CH₂)_n1S(O)_mR_bb, -(CH₂)_nNR_bbR_cc, -(CH₂)_nC(O)NR_bbR_cc, -(CH₂)_nNR_bbC(O)R_cc или -(CH₂)_nNR_bbS(O)_mR_cc, при этом алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циано-замещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероциклил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[22] R_aa выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом амино, алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циано-замещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[23] каждый из R_bb и R_cc независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циано-замещенного алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом амино, алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циано-замещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[24] или R_bb и R_cc вместе со смежными атомами образуют циклоалкил, гетероциклил, арил или гетероарил, при этом циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[25] R_dd выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циано-замещенного алкила циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом амино, алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циано-замещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[26] или R_cc и R_dd вместе со смежными атомами образуют циклоалкил, гетероциклил, арил или гетероарил, при этом циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены;

[27] x представляет собой целое число от 0 до 6;

[28] y представляет собой целое число от 0 до 6;

[29] z представляет собой целое число от 0 до 6;

[30] m равняется 0, 1, 2 или 3;

[31] n равняется 0, 1, 2 или 3;

[32] n1 равняется 0, 1, 2 или 3;

[33] при этом если X₃ представляет собой NR₃, то R^c представляет собой оксо или тио, и R^c присоединен к атому углерода в том же кольце, смежном с X₃, X₁ представляет собой CH₂, и X₂ представляет собой NR₂;

[34] если X₃ представляет собой N, то X₁ представляет собой CH₂, и X₂ представляет собой NR₂; или X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой CR₂.

[35] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, если X₃ представляет собой NR₃, то R^c представляет собой оксо или тио, и R^c присоединен к атому углерода в том же кольце, смежном с X₃, X₁ выбран из N, NR₂ или CH₂; X₂ выбран из N, CR₂ или NH₂;

[36] или если X₃ представляет собой N, то X₁ выбран из N, CH₂ или NR₂, и X₂ выбран из CR₂ или NR₂;

[37] предпочтительно, если X₃ представляет собой NR₃, то R^c представляет собой оксо или тио, X₁ представляет собой CH₂, X₂ представляет собой NR₂;

[38] если X₃ представляет собой N, то X₁ представляет собой CH₂, и X₂ представляет собой NR₂; или X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой CR₂;

[39] кроме того, если X₁ и X₂ одновременно представляют собой CR₂ или NR₂, то R₂ не представляет собой обязательно такую же группу, а может быть независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, алкила, алкенила, алкинила, дейтерированного алкила, галогеналкила, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкила, циклоалкила, гетероциклила, арила или гетероарила, при этом алкил, алкенил, алкинил, дейтерированный алкил, галогеналкил, алкокси, галогеналкокси, гидроксиалкил, циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил могут быть необязательно дополнительно замещены.

[40] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₁ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила или -(CH₂)_nC(O)CH=CHR_aa;

[41] предпочтительно 3-12-членного гетероциклила и -(CH₂)_nC(O)CH=CHR_aa;

[42] более предпочтительно 3-10-членного гетероциклила и -C(O)CH=CR_aa; при этом 3-10-гетероциклил выбран из 5-6-членного гетероциклила, содержащего 1-2 атома азота, атома кислорода или атома серы и необязательно замещенного одним или более заместителями, выбранными из дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, оксо и метиленила;

[43] R_aa выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила; предпочтительно водорода или C_1-3алкила;

[44] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₁ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила или -(CH₂)_nC(O)CH=CHR_aa, при этом C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, оксо, метилена, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила, более предпочтительно , , или ; наиболее предпочтительно , или ;

[45] R_aa выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила; предпочтительно водорода или C_1-3алкила.

[46] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₁ выбран из 3-12-членного гетероциклила или -(CH₂)_nC(O)CH=CHR_aa, и при этом 3-12-членный гетероциклил необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, оксо и метилена.

[47] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₁ выбран из 3-10-членного гетероциклила или -C(O)CH=CHR_aa, и при этом 3-12-членный гетероциклил необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, оксо и метилена.

[48] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₂ выбран из C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино и C_1-6алкила;

[49] предпочтительно фенила, пиридила, нафтила, бифенила, бензогетероарила, пиридофенила или пиразолофенила, при этом фенил, пиридил, нафтил, бифенил, бензогетероарил, пиридофенил и пиразолофенил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино и C_1-6алкила.

[50] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₂ выбран из C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, циано, сульфгидрила, C_1-6гидроксиалкила, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилтиоалкилена, C_1-6галогеналкилтио, C_3-12циклоалкила, C_1-6алкиламино, карбамоила, C_1-6алкилациламино, C_1-6алкилсульфониламино, C_3-12циклоалкиламино, C_3-12циклоалкилсульфонамино, C_1-6алкилкарбамоила, C_1-6алкилсульфинила, C_1-6алкилсульфонила и C_1-6алкила.

[51] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₂ выбран из фенила, пиридила, нафтила, индолила, бифенила, бензогетероарила, пиридофенила или пиразолофенила, при этом фенил, пиридил, нафтил, индолил, бифенил, бензогетероарил, пиридофенил и пиразолофенил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, циано, сульфгидрила, C_1-6гидроксиалкила, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилтиоалкилена, C_1-6галогеналкилтио, C_3-12циклоалкила, C_1-6алкиламино, карбамоила, C_1-6алкилациламино, C_1-6алкилсульфониламино, C_3-12циклоалкиламино, C_3-12циклоалкилсульфонамино, C_1-6алкилкарбамоила, C_1-6алкилсульфинила, C_1-6алкилсульфонила и C_1-6алкила. В частности, C_1-6алкиламино может представлять собой (CH₃)₂N-, (CH₃CH₂)₂NH-, , карбамоил может представлять собой NH₂C(O)-, C_1-6алкилациламино может представлять собой CH₃C(O)NH-, C_1-6алкилсульфонамино может представлять собой CH₃SO₂NH-, C_1-6алкилкарбамоил может представлять собой CH₃CH₂NHC(O)-, (CH₃)₂NC(O)-, CH₃NHC(O)-, C_1-6алкилсульфинил может представлять собой CH₃SO-, C_1-6алкилсульфонил может представлять собой CH₃SO₂- и т. д.

[52] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₃ выбран из C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино и C_1-6алкила;

[53] предпочтительно фенила и пиридила, и при этом фенил и пиридил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино и C_1-6алкила.

[54] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₃ выбран из C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, сульфгидрила, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилтиоалкилена, C_1-6галогеналкилтио, C_1-6алкиламинокарбонила и C_1-6алкила.

[55] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R₃ выбран из фенила, нафтила, индолила или пиридила, при этом фенил, нафтил, индолил и пиридил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, сульфгидрила, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилтиоалкилена, C_1-6галогеналкилтио, C_1-6алкиламинокарбонила и C_1-6алкила.

[56] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^a выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила или циано-замещенного C_1-6алкила.

[57] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^a выбран из водорода, C_1-3алкила или циано-замещенного C_1-3алкила.

[58] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^a выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилсульфинила, C_1-6алкилсульфонила, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилсульфинил, C_1-6алкилсульфонил, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, гидроксила, сульфгидрила, нитро, оксо, метилена, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилсульфинила, C_1-6алкилсульфонила, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила.

[59] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^b выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила или циано-замещенного C_1-6алкила.

[60] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^b выбран из водорода, галогена или C_1-3алкила.

[61] Или два смежных R^b вместе со смежными атомами углерода образуют C_3-8циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил, C_6-14арил или 5-14-членный гетероарил.

[62] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения два смежных R^b вместе со смежными атомами углерода образуют C_3-8циклоалкил.

[63] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения два смежных R^b вместе со смежными атомами углерода образуют циклопропил.

[64] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^c выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила, -CH=CH(CH₂)_nR_bb, -CH=CH(CH₂)_nNR_bbR_cc, -O(CH₂)_nR_bb, -OC(R_bbR_cc)_n(CH₂)_mR_dd, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)R_cc, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)NR_ccR_dd или -NR_bb(CH₂)_nR_cc; при этом C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила;

[65] предпочтительно водорода, оксо, тио, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, -CH=CH(CH₂)_nR_bb, -CH=CH(CH₂)_nNR_bbR_cc, -O(CH₂)_nR_bb или -OC(R_bbR_cc)_n(CH₂)_mR_dd, при этом C_3-12циклоалкил и 3-12-членный гетероциклил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила;

[66] каждый из R_bb и R_cc независимо представляет собой водород, дейтерий, галоген, амино, гидроксил, циано, нитро, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил, 5-12-членный гетероарил, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила;

[67] или R_bb и R_cc вместе со смежными атомами образуют C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[68] R_dd выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, циано, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила;

[69] или R_cc и R_dd вместе со смежными атомами образуют C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены атомом водорода, атомом дейтерия, атомом галогена, амино, гидроксилом, циано, нитро, C_1-6алкилом, C_2-6алкенилом, C_2-6алкинилом, дейтерированным C_1-6алкилом, C_1-6галогеналкилом, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкилом, циано-замещенным C_1-6алкилом, C_3-12циклоалкилом, 3-12-членным гетероциклилом, C_6-12арилом и 5-12-членным гетероарилом.

[70] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^c выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила, -CH=CH(CH₂)_nR_bb, -CH=CH(CH₂)_nNR_bbR_cc, -O(CH₂)_nR_bb, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)R_cc, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)NR_ccR_dd, -OC(R_bbR_cc)_n(CH₂)_mR_dd или -NR_bb(CH₂)_nR_cc; при этом C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила.

[71] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R^c выбран из водорода, C_1-3алкила, C_1-3алкокси, оксо, тио, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, -CH=CH(CH₂)_nR_bb, -CH=CH(CH₂)_nNR_bbR_cc, -O(CH₂)_nR_bb или -O(CR_bbR_cc)_n(CH₂)_mR_dd, при этом C_1-3алкил, C_1-3алкокси, C_3-12циклоалкил и 3-12-членный гетероциклил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила.

[72] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения каждый из R_bb и R_cc независимо представляет собой водород, дейтерий, галоген, амино, гидроксил, циано, нитро, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила;

[73] или R_bb и R_cc вместе со смежными атомами образуют C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила.

[74] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения R_dd выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, гидроксила, галогена, амино, циано, C_1-6алкила и 3-12-членного гетероциклила;

[75] или R_cc и R_dd вместе со смежными атомами образуют C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил, при этом C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила.

[76] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (II), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

,

[77] где

[78] L выбран из связи, -CH=CH(CH₂)_n-, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb-, -O(CH₂)_n-, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)-, -CH=CH(CH₂)_nNR_bb(CH₂)_mC(O)NR_cc-, -OC(R_bbR_cc)_n(CH₂)_m-, -NR_bb(CH₂)_nR_cc-, -(CH₂)_n1-, -(CH₂)_nR_bb-, -(CH₂)_nOR_bb, -(CH₂)_nS-, -(CH₂)_nC(O)-, -(CH₂)_nC(O)O-, -(CH₂)_n1S(O)_m-, -(CH₂)_nNR_bb-, -(CH₂)_nC(O)NR_bb-, -(CH₂)_nNR_bbC(O)- или -(CH₂)_nNR_bbS(O)_m-;

[79] R₄ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила.

[80] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (III), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

.

[81] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (IV), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

.

[82] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (V), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

,

[83] где

[84] кольцо A выбрано из C_3-12циклоалкила, 3-14-членного гетероциклила, C_6-14арила или 5-14-членного гетероарила; предпочтительно C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[85] R_d выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[86] p представляет собой целое число от 0 до 6.

[87] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (VI), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

,

[88] где

[89] кольцо B выбрано из C_3-12циклоалкила, 3-14-членного гетероциклила, C_6-14арила или 5-14-членного гетероарила; предпочтительно C_3-12циклоалкила или 3-12-членного гетероарила;

[90] R^e выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[91] q представляет собой целое число от 0 до 6.

[92] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (VII), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

.

[93] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (VIII), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

,

[94] где

[95] R₅ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила, предпочтительно водорода, галогена или C_1-3алкила;

[96] R₆ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила; предпочтительно водорода.

[97] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (IX), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

,

[98] где

[99] кольцо A выбрано из C_3-12циклоалкила, 3-14-членного гетероциклила, C_6-14арила или 5-14-членного гетероарила; предпочтительно C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила;

[100] R^d выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[101] предпочтительно водорода, галогена, гидроксила, амино или C_1-3алкила;

[102] p представляет собой целое число от 0 до 6.

[103] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (X), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

.

[104] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (X-A), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

,

[105] где

[106] R₇ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[107] предпочтительно C_1-3алкила или C_1-3галогеналкокси;

[108] каждый из R₈ и R₉ независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила.

[109] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное общей формулой (XI), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль,

,

[110] где

[111] M₁ выбран из CR₁₂R₁₃ или NR₁₂; предпочтительно следующих групп:

[112] , , или ;

[113] предпочтительно следующих групп:

[114] , или ,

[115] кольцо C выбрано из C_6-14арила или 5-14-членного гетероарила;

[116] предпочтительно фенила или пиридила,

[117] более предпочтительно следующих групп: , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , или ;

[118] более предпочтительно выбрано из следующих групп:

, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , или ;

[119] кольцо D выбрано из C_6-14арила или 5-14-членного гетероарила;

[120] предпочтительно фенила или пиридила, более предпочтительно следующих групп:

, , , , , , , , , или ;

[121] более предпочтительно выбрано из следующих групп:

, , , , , , или ;

[122] каждый из R₁₀ и R₁₁ независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[123] R₁₂ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, или 5-12-членного гетероарила, или -(CH₂)_n2C(O)CR_ee=CR_ffR_gg, при этом C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, оксо, метилена, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[124] предпочтительно 3-12-членного гетероциклила или -(CH₂)_n2C(O)CR_ee=CR_ffR_gg, и при этом 3-12-членный гетероциклил необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, оксо и метилена;

[125] R₁₃ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[126] R^f выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилсульфинила, C_1-6алкилсульфонила, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила или -(CH₂)_nC(O)CH=CHR_aa, при этом C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилсульфинил, C_1-6алкилсульфонил, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, оксо, метилена, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилсульфинила, C_1-6алкилсульфонила, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[127] R^g выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила, -O(CH₂)_n2R_ee, -OC(R_eeR_ff)_n2(CH₂)_m1R_gg, -NR_ee(CH₂)_n2R_ff, -(CH₂)_n2SR_ee, -(CH₂)_n2R_ee, -(CH₂)_n2OR_ee, -(CH₂)_n2SR_ee, -(CH₂)_n2C(O)R_ee, -(CH₂)_n2C(O)OR_ee, -(CH₂)_n2S(O)_m1R_ee, -(CH₂)_n2NR_bbR_ee, -(CH₂)_n2C(O)NR_eeR_ff, -(CH₂)_n2NR_eeC(O)R_ff или -(CH₂)_n2NR_eeS(O)_m1R_ff, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[128] R^h выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила, 5-12-членного гетероарила, -O(CH₂)_n2R_ee, -OC(R_eeR_ff)_n2(CH₂)_m1R_gg, -NR_ee(CH₂)_n2R_ff, -(CH₂)_n2SR_ee, -(CH₂)_n2R_ee, -(CH₂)_n2OR_ee, -(CH₂)_n2SR_ee, -(CH₂)_n2C(O)R_ee, -(CH₂)_n2C(O)OR_ee, -(CH₂)_n2S(O)_m1R_ee, -(CH₂)_n2NR_bbR_ee, -(CH₂)_n2C(O)NR_eeR_ff, -(CH₂)_n2NR_eeC(O)R_ff или -(CH₂)_n2NR_eeS(O)_m1R_ff, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[129] R_aa выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[130] каждый из R_ee, R_ff и R_gg независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил и 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[131] r представляет собой целое число от 0 до 5;

[132] s представляет собой целое число от 0 до 5;

[133] t представляет собой целое число от 0 до 5;

[134] n2 представляет собой целое число от 0 до 5; и

[135] m1 равняется 0, 1 или 2.

[136] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения выбран из ;

[137] R₁₄ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[138] предпочтительно водорода, галогена, амино, C_1-3алкила или 3-8-членного гетероциклила, при этом амино, C_1-3алкил и 3-8-членный гетероциклил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, галогена, C_1-3алкокси и C_3-8циклоалкила;

[139] более предпочтительно водорода, хлора, фтора, брома, амино, метила, метокси, циклопропила, азетидинила, морфолинила, при этом амино, метил, метокси, циклопропил, азетидинил и морфолинил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, фтора, хлора, брома и циклопропила;

[140] R₁₅ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила;

[141] предпочтительно водорода или C_1-3алкила;

[142] более предпочтительно метила.

[143] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное общей формулой (XI-A), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль,

,

[144] где R^f независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила, предпочтительно C_1-3алкила;

[145] каждый из R₁₀ и R₁₁ независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила или циано-замещенного C_1-3алкила, предпочтительно галогена;

[146] каждый R^g независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила или циано-замещенного C_1-3алкила, предпочтительно гидроксила, амино или галогена;

[147] каждый R^h независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_1-3алкилтио, C_1-3алкокси, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-3алкила, предпочтительно C_1-3алкила или C_1-3алкилтио, более предпочтительно метилтио или изопропила;

[148] r представляет собой целое число от 1 до 3;

[149] s представляет собой целое число от 1 до 3;

[150] t представляет собой целое число от 1 до 3, предпочтительно 2.

[151] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное общей формулой (XI-A), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль,

,

[152] где R^f независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила, предпочтительно C_1-3алкила;

[153] каждый из R₁₀ и R₁₁ независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила или циано-замещенного C_1-3алкила, предпочтительно галогена;

[154] каждый R^g независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила или циано-замещенного C_1-3алкила, предпочтительно гидроксила, амино или галогена;

[155] каждый R^h независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_1-3алкилтио, C_1-3алкокси, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-3алкила, предпочтительно C_1-3алкила или C_1-3алкилтио, более предпочтительно метилтио или изопропила;

[156] r представляет собой целое число от 1 до 3;

[157] s представляет собой целое число от 1 до 4;

[158] t представляет собой целое число от 1 до 3, предпочтительно 2.

[159] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (XI-B), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом структура соединения является следующей:

,

[160] где

[161] где R₁₀ независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила;

[162] предпочтительно фтора или хлора;

[163] R₁₅ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила;

[164] предпочтительно метила;

[165] R₂₀ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила;

[166] предпочтительно водорода или метила;

[167] каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила;

[168] предпочтительно водорода, гидроксила, амино, фтора, метила, трифторметила, метилтио, метиламино, аминоацила или диметиламино;

[169] каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила;

[170] предпочтительно водорода, хлорида, фтора или метила;

[171] R₂₅ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-4алкенила, C_2-4алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3алкилтио, C_1-3алкилсульфинила, C_1-3алкилсульфонила, C_1-3галогеналкокси или C_1-3гидроксиалкила;

[172] предпочтительно водорода, фтора или метила;

[173] q представляет собой целое число от 0 до 2.

[174] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное формулой (XI-B), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, где

[175] R^f выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, метилтио, этилтио, пропилтио, изопропилтио, галогенметокси, галогенэтокси, галогенпропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, гидрокси-изопропила, циклопропила, циклобутила, циклопентила или циклогексила, предпочтительно водорода или метила;

[176] R₁₀ выбран из водорода, дейтерия, фтора, хлора, брома, йода, амино, гидроксила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, галогенметокси, галогенэтокси, галогенпропокси, галоген-изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, гидрокси-изопропила, циклопропила, циклобутила, циклопентила или циклогексила, предпочтительно фтора или хлора;

[177] R₁₅ выбран из метила, этила, пропила, изопропила, циклопропила, циклобутила, циклопентила или циклогексила, предпочтительно метила;

[178] каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из водорода, дейтерия, фтора, хлора, брома, йода, амино, гидроксила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, гидрокси-изопропила, циклопропила, циклобутила, циклопентила или циклогексила, предпочтительно гидроксила, амино, фтора, хлора или метила;

[179] каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода, дейтерия, фтора, хлора, брома, йода, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, гидрокси-изопропила, циклопропила, циклобутила, циклопентила или циклогексила, предпочтительно водорода, фтора, хлора или метила;

[180] R₂₅ выбран из водорода, дейтерия, фтора, хлора, брома, йода, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила или гидрокси-изопропила, циклопропила, циклобутила, циклопентила или циклогексила, предпочтительно водорода, фтора или метила.

[181] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное формулой (XI-B), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, где

[182] R^f выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, метилтио, этилтио, пропилтио, изопропилтио, галогенметокси, галогенэтокси, галогенпропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила или гидрокси-изопропила, предпочтительно водорода или метила;

[183] R₁₀ выбран из водорода, дейтерия, фтора, брома, йода, амино, гидроксила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, галогенметокси, галогенэтокси, галогенпропокси, галоген-изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила или гидрокси-изопропила, предпочтительно фтора или хлора;

[184] R₁₅ выбран из метила, этила, пропила или изопропила, предпочтительно метила;

[185] каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из водорода, дейтерия, фтора, брома, йода, амино, гидроксила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила или гидрокси-изопропила, предпочтительно гидроксила, амино, фтора, хлора или метила;

[186] каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода, дейтерия, фтора, брома, йода, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, C_1-3алкила, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила или гидрокси-изопропила, предпочтительно водорода, фтора, хлора или метила;

[187] R₂₅ выбран из водорода, дейтерия, фтора, брома, йода, амино, гидроксила, сульфгидрила, циано, нитро, метила, этила, пропила, изопропила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, дейтерированного изопропила, галогенметила, галогенэтила, галогенпропила, галоген-изопропила, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила или гидрокси-изопропила, предпочтительно водорода, фтора или метила.

[188] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (XI-C) или (XI-D), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

[189] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения структура соединения, представленного формулой (XI-C) или (XI-D), является следующей:

[190] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрено соединение, представленное (XI-C) или формулой (XI-D), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, где

[191] каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из амино или фтора, и каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, метила, этила, пропила или изопропила;

[192] или каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из гидроксила или фтора, и каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода, фтора, хлора, брома, метила, этила, пропила или изопропила.

[193] Предпочтительно R₂₁ представляет собой амино, R₂₂ выбран из фтора, или R₂₁ представляет собой гидроксил, R₂₂ выбран из фтора.

[194] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения кольцо A выбрано из C_6-10арила или 5-12-членного гетероарила, где 5-12-членный гетероарил выбран из гетероарила, содержащего 1-3 атома азота, предпочтительно 5-7-членного азотсодержащего гетероарила, бензо-5-7-членного азотсодержащего гетероарила или 5-7-членного азотсодержащего гетероарилфенила; более предпочтительно следующих групп:

, , , , , , , или ,

[195] необязательно замещенных одним или более заместителями, выбранными из гидроксила, галогена, амино, сульфгидрила, C_1-6гидроксиалкила, C_1-6алкокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилтиоалкила, C_1-6галогеналкилтио, C_1-6алкилкарбамоила, C_1-6алкилсульфинила, C_1-6алкилсульфонила и C_1-6алкила.

[196] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения кольцо B выбрано из 5-12-членного гетероциклила, содержащего 1-3 атома азота, включающего следующие группы:

[197] , , , , , , , , , , или .

[198] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрено соединение, представленное формулой (XII), его стереоизомер или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конкретная структура соединения является следующей:

,

[199] R₁₆ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[200] предпочтительно водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, C_1-3алкила, C_2-5алкенила, C_2-5алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3гидроксиалкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_3-6циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила;

[201] более предпочтительно водорода, дейтерия, фтора, хлора, брома, амино, гидроксила, циано, метила, этила, пропила, винила, пропенила, аллила, этинила, пропинила, пропаргила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, фторметила, фторэтила, фторпропила, хлорметила, хлорэтила, хлорпропила, бромметила, бромэтила, бромпропила, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, метокси, этокси, пропокси, фторметокси, фторэтокси, фторпропокси, хлорметокси, хлорэтокси, хлорпропокси, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, циклогептила, эпоксипропила, эпоксибутила, эпоксипентила, эпоксигексила, эпоксигептила, азиридинила, азетидинила, азациклопентила, азациклогексила, азепанила, тиофенила, пирролила, пиридила, пиранила, пиперазинила, фенила или нафтила;

[202] R₁₇ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[203] предпочтительно C_3-8циклоалкила, 3-8-членного гетероциклила, C_6-10арила или 5-10-членного гетероарила, при этом C_3-8циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил, C_6-10арил и 5-10-членный гетероарил необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-3алкенила, C_2-3алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-3алкила, C_3-10циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, C_6-10арила и 5-10-членного гетероарила;

[204] более предпочтительно C_3-6циклоалкила, 3-8-членного гетероциклила, содержащего 1-3 атома N, O или S, C_6-10 арила или 5-10-членного гетероарила, содержащего 1-3 атома N, O или S, при этом C_3-6циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил, содержащий 1-3 атома N, O или S, C_6-10арил и 5-10-членный гетероарил, содержащий 1-3 атома N, O или S, необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-3алкенила, C_2-3алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-3алкила, C_3-10циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, C_6-10арила и 5-10-членного гетероарила;

[205] более предпочтительно циклогексила, тетрагидропиранила, фенила, пиримидинила, нафтила, пиридила или бензимидазолила, при этом циклогексил, тетрагидропиранил, фенил, пиримидинил, нафтил, пиридил и бензимидазолил необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, фтора, хлора, амино, гидроксила или метила;

[206] R₁₈ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила;

[207] предпочтительно водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, C_1-3алкила, C_2-5алкенила, C_2-5алкинила, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3гидроксиалкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_3-6циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила;

[208] более предпочтительно водорода, дейтерия, фтора, хлора, брома, амино, гидроксила, циано, метила, этила, пропила, винила, пропенила, аллила, этинила, пропинила, пропаргила, дейтерированного метила, дейтерированного этила, дейтерированного пропила, фторметила, фторэтила, фторпропила, хлорметила, хлорэтила, хлорпропила, бромметила, бромэтила, бромпропила, гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, метокси, этокси, пропокси, фторметокси, фторэтокси, фторпропокси, хлорметокси, хлорэтокси, хлорпропокси, циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, циклогептила, эпоксипропила, эпоксибутила, эпоксипентила, эпоксигексила, эпоксигептила, азиридинила, азетидинила, азациклопентила, азациклогексила, азепанила, тиофенила, пирролила, пиридила, пиранила, пиперазинила, фенила или нафтила;

[209] R₁₉ выбран из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила или 5-12-членного гетероарила, при этом амино, C_1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, дейтерированный C_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкил, циано-замещенный C_1-6алкил, C_3-12циклоалкил, 3-12-членный гетероциклил, C_6-12арил или 5-12-членный гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-6алкила, C_2-6алкенила, C_2-6алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-6алкила, C_1-6галогеналкила, C_1-6алкокси, C_1-6галогеналкокси, C_1-6гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-6алкила, C_3-12циклоалкила, 3-12-членного гетероциклила, C_6-12арила и 5-12-членного гетероарила;

[210] предпочтительно C_3-8циклоалкила, 3-8-членного гетероциклила, C_6-10арила или 5-10-членного гетероарила, при этом C_3-8циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил, C_6-10арил и 5-10-членный гетероарил необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-3алкенила, C_2-3алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-3алкила, C_3-10циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, C_6-10арила и 5-10-членного гетероарила;

[211] более предпочтительно C_3-6циклоалкила, 3-8-членного гетероциклила, содержащего 1-3 атома N, O или S, C_6-10 арила или 5-10-членного гетероарила, содержащего 1-3 атома N, O или S, при этом C_3-6циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил, содержащий 1-3 атома N, O или S, C_6-10арил и 5-10-членный гетероарил, содержащий 1-3 атома N, O или S, необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, дейтерия, галогена, амино, гидроксила, циано, нитро, C_1-3алкила, C_2-3алкенила, C_2-3алкинила, оксо, тио, дейтерированного C_1-3алкила, C_1-3галогеналкила, C_1-3алкокси, C_1-3галогеналкокси, C_1-3гидроксиалкила, циано-замещенного C_1-3алкила, C_3-10циклоалкила, 3-10-членного гетероциклила, C_6-10арила и 5-10-членного гетероарила;

[212] более предпочтительно циклогексила, тетрагидропиранила, фенила, пиримидинила, нафтила, пиридила или бензимидазолила, при этом циклогексил, тетрагидропиранил, фенил, пиримидинил, нафтил, пиридил и бензимидазолил необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, выбранными из водорода, фтора, хлора, амино, гидроксила или метила.

[213] В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения настоящее изобретение включает следующие конкретные соединения:

или .

[214] Предпочтительно, если оно выбрано из следующих структур соединения, соединение может быть дополнительно разделено на энантиомерные аксиальные хиральные соединения,

.

[215] Кроме того, структура аксиального хирального соединения соединений является следующей:

.

[216] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения,

[217] если структура соединения представляет собой

, то соединение включает два аксиальных хиральных изомера 60-1 и 60-2, и соединения 60-1 и 60-2 характеризуются следующими параметрами:

[218] соединение 60-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 60-2, предпочтительно время удерживания соединения 60-1 составляет t_R=1, 92 мин, и время удерживания соединения 60-2 составляет t_R=2, 43 мин,

[219] условия обнаружения являются следующими.

[220] Таблица 1

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 60:40 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[221] или если структура соединения представляет собой

, то соединение включает два аксиальных хиральных изомера 75-1 и 75-2, и соединения 75-1 и 75-2 характеризуются следующими параметрами:

[222] соединение 75-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 75-2, предпочтительно время удерживания соединения 75-1 составляет t_R=1, 97 мин, и время удерживания соединения 75-2 составляет t_R=3,75 мин,

[223] условия обнаружения являются следующими.

[224] Таблица 2

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 60:40 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[225] или если структура соединения представляет собой

, то соединение включает два аксиальных хиральных изомера 114-1 и 114-2, и соединения 114-1 и 114-2 характеризуются следующими параметрами:

[226] соединение 114-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 114-2, предпочтительно время удерживания соединения 114-1 составляет t_R=1, 99 мин, и время удерживания соединения 114-2 составляет t_R=2, 87 мин,

[227] условия обнаружения являются следующими.

[228] Таблица 3

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: этанол [1, 0% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[229] или если структура соединения представляет собой

, то соединение включает два аксиальных хиральных изомера 150-1 и 150-2, и соединения 150-1 и 150-2 характеризуются следующими параметрами:

[230] соединение 150-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 150-2, предпочтительно время удерживания соединения 150-1 составляет t_R=1,87 мин, и время удерживания соединения 150-2 составляет t_R=2,80 мин,

[231] условия обнаружения являются следующими.

[232] Таблица 4

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки OX-H 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[233] или если структура соединения представляет собой

, то соединение включает два аксиальных хиральных изомера 165-1 и 165-2, и соединения 165-1 и 165-2 характеризуются следующими параметрами:

[234] соединение 165-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 165-2, предпочтительно время удерживания соединения 165-1 составляет t_R=1,74 мин, и время удерживания соединения 165-2 составляет t_R=2,49 мин,

[235] условия обнаружения являются следующими.

[236] Таблица 5

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки OX-H 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[237] или если структура соединения представляет собой

, то соединение включает два аксиальных хиральных изомера 166-1 и 166-2, и соединения 166-1 и 166-2 характеризуются следующими параметрами:

[238] соединение 166-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 166-2, предпочтительно время удерживания соединения 166-1 составляет t_R=2,46 мин, и время удерживания соединения 166-2 составляет t_R=3,08 мин,

[239] условия обнаружения являются следующими.

[240] Таблица 6

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки IC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: этанол [1, 0% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 55:45 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[241] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения,

[242] если структура соединения представляет собой

, два аксиальных хиральных изомера 60-1 и 60-2 можно получать в соответствии с условиями разделения хиральных препаратов с помощью SFC, где соединение 60-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 60-2, предпочтительно время удерживания соединения 60-1 составляет t_R=1,92 мин, и время удерживания соединения 60-2 составляет t_R= 2,43 мин, условия SFC для хиральных препаратов были следующими.

[243] Таблица 7

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 60:40 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[244] или если структура соединения представляет собой

, два аксиальных хиральных изомера 75-1 и 75-2 можно получать в соответствии с условиями разделения хиральных препаратов с помощью SFC, где соединение 75-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 75-2, предпочтительно время удерживания соединения 75-1 составляет t_R=1, 97 мин, и время удерживания соединения 75-2 составляет t_R= 3, 75 мин, условия SFC для хиральных препаратов были следующими:

[245] Таблица 8

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 60:40 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[246] или если структура соединения представляет собой

, два аксиальных хиральных изомера 114-1 и 114-2 можно получать в соответствии с условиями разделения хиральных препаратов с помощью SFC, где соединение 114-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 114-2, предпочтительно время удерживания соединения 114-1 составляет t_R=1,99 мин, и время удерживания соединения 114-2 составляет t_R= 2,87 мин, условия SFC для хиральных препаратов были следующими:

[247] Таблица 9

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: этанол [1, 0% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[248] или если структура соединения представляет собой

, два аксиальных хиральных изомера 150-1 и 150-2 можно получать в соответствии с условиями разделения хиральных препаратов с помощью SFC, где соединение 150-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 150-2, предпочтительно время удерживания соединения 150-1 составляет t_R=1,87 мин, и время удерживания соединения 150-2 составляет t_R= 2,80 мин, условия SFC для хиральных препаратов были следующими:

[249] Таблица 10

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки OX-H 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[250] или если структура соединения представляет собой

, два аксиальных хиральных изомера 165-1 и 165-2 можно получать в соответствии с условиями разделения хиральных препаратов с помощью SFC, где соединение 165-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 165-2, предпочтительно время удерживания соединения 165-1 составляет t_R=1,74 мин, и время удерживания соединения 165-2 составляет t_R= 2,49 мин, условия SFC для хиральных препаратов были следующими.

[251] Таблица 11

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки OX-H 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0, 2% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[252] или если структура соединения представляет собой

, два аксиальных хиральных изомера 166-1 и 166-2 можно получать в соответствии с условиями разделения хиральных препаратов с помощью SFC, где соединение 166-1 представляет собой первое аксиально хиральное соединение, вымываемое при меньшем значении времени удерживания, чем соединение 166-2, предпочтительно время удерживания соединения 166-1 составляет t_R=2,46 мин, и время удерживания соединения 166-2 составляет t_R= 3,08 мин, условия SFC для хиральных препаратов были следующими.

[253] Таблица 12

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки IC 4, 6 × 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: этанол [1, 0% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 55:45 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[254] Специалист средней квалификации в данной области техники может понять, что аксиальный хиральный изомер по настоящему изобретению также можно отделять с помощью других общепринятых способов разделения или иных условий разделения, и иные способы или условия разделения могут приводить к изменениям в отношении значения времени удерживания для соединения, специалист средней квалификации в данной области техники может получать аксиальный хиральный изомер соответствующего соединения по настоящему описанию с помощью общепринятых способов разделения, при этом соответствующий рацемат и аксиальный хиральный изомер, полученный путем разделения в иных условиях, подпадает под объем сущностей, охраняемых настоящем изобретением.

[255] В качестве другого варианта осуществления аксиальный хиральный изомер по настоящему изобретению обладает следующими видами ингибирующей активности:

[256] (1) два аксиальных хиральных изомера, соединение 60-1 и 60-2, получают путем хирального разделения соединения 60, где значение IC₅₀ соединения 60-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток NCI-H358 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤50 нМ, более предпочтительно ≤30 нМ, более предпочтительно 28 нМ; или значение IC₅₀ соединения 60-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток Mia PaCa-2 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤80 нМ, более предпочтительно ≤60 нМ, еще предпочтительнее 55 нМ;

[257] или (2) два аксиальных хиральных изомера, соединение 75-1 и 75-2, получают путем хирального разделения соединения 75, где значение IC₅₀ соединения 75-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток NCI-H358 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤50, более предпочтительно ≤30 нМ, более предпочтительно 25 нМ; или значение IC₅₀ соединения 75-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток Mia PaCa-2 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤80 нМ, более предпочтительно ≤60 нМ, еще предпочтительнее ≤60 нМ, наиболее предпочтительно 36 нМ;

[258] или (3) два аксиальных хиральных изомера, соединение 114-1 и 114-2, получают путем хирального разделения соединения 114, где значение IC₅₀ соединения 114-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток NCI-H358 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤50, более предпочтительно ≤40 нМ, более предпочтительно 35 нМ; или значение IC₅₀ соединения 114-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток Mia PaCa-2 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤80 нМ, более предпочтительно ≤60 нМ, еще предпочтительнее ≤50 нМ, еще более предпочтительно ≤30 нМ, наиболее предпочтительно 29 нМ;

[259] или (4) два аксиальных хиральных изомера, соединение 150-1 и 150-2, получают путем хирального разделения соединения 150, где значение IC₅₀ соединения 150-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток NCI-H358 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤50 нМ, более предпочтительно ≤20 нМ, более предпочтительно ≤10 нМ, наиболее предпочтительно 6,6 нМ; или значение IC₅₀ соединения 150-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток Mia PaCa-2 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤50 нМ, более предпочтительно ≤20 нМ, еще предпочтительнее ≤10 нМ, наиболее предпочтительно 3,5 нМ;

[260] или (5) два аксиальных хиральных изомера, соединение 165-1 и 165-2, получают путем хирального разделения соединения 165, где значение IC₅₀ соединения 165-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток NCI-H358 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤50 нМ, более предпочтительно ≤30 нМ, еще предпочтительнее ≤10 нМ, наиболее предпочтительно 6, 6 нМ; или значение IC₅₀ соединения 165-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток Mia PaCa-2 составляет ≤80 нМ, предпочтительно ≤50 нМ, более предпочтительно ≤20 нМ, еще предпочтительнее ≤10 нМ, еще более предпочтительно ≤5 нМ, наиболее предпочтительно 3, 3 нМ;

[261] или (6) два аксиальных хиральных изомера, соединение 166-1 и 166-2, получают путем хирального разделения соединения 166, где значение IC₅₀ соединения 166-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток NCI-H358 составляет ≤50 нМ, предпочтительно ≤30, более предпочтительно ≤20 нМ, более предпочтительно 17 нМ; или значение IC₅₀ соединения 166-1 для ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток Mia PaCa-2 составляет ≤50 нМ, предпочтительно ≤30 нМ, более предпочтительно ≤20 нМ, еще предпочтительнее ≤15 нМ, наиболее предпочтительно 11 нМ.

[262] В качестве предпочтительного варианта осуществления настоящего изобретения способ обнаружения ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток NCI-H358 и ингибирующей активности в отношении пролиферации клеток Mia PaCa-2 является следующим: посредством культуры клеток добавление растворов соединения с разными значениями концентрации в культивируемые клетки, продолжение выращивания культуры в течение определенного периода времени и измерение пролиферации клеток;

[263] кроме того, способ культивирования клеток является следующим: регулирование концентрации клеток до подходящей концентрации клеток с помощью полной среды и распределение суспензии клеток в луночные планшеты для культивирования; предпочтительно условия культивирования представляют собой инкубатор с 37°C, 5% CO₂ в течение ночи; предпочтительно суспензию клеток распределяют в 96-луночные планшеты, 48-луночные планшеты, 24-луночные планшеты, 12-луночные планшеты или 6-луночные планшеты, более предпочтительно 96-луночные планшеты; предпочтительно подходящая концентрация клеток составляет 1500-4000 клеток/лунка, при этом добавляют 90 мкл суспензии клеток в каждую лунку;

[264] кроме того, раствор соединения получают с DMSO и его можно дополнительно разбавлять средой; предпочтительно раствор соединения характеризуется градиентом значений концентрации, начинающимся от 100 мкМ при 4-кратном разбавлении, более предпочтительно начинающимся от 30 мкМ при 4-кратном разбавлении, наиболее предпочтительно начинающимся от 10 мкМ при 4-кратном разбавлении;

[265] кроме того, объем раствора соединения или растворителя, добавляемый в каждую лунку, составляет 1-10 мкл, предпочтительно 10 мкл;

[266] кроме того, после добавления раствора соединения, условия продолжения выращивания культуры представляют собой инкубатор с 37°C, 5% CO₂; предпочтительно время культивирования составляет 24-72 ч, более предпочтительно 72 ч;

[267] кроме того, способ измерения пролиферации клеток представляет собой MTT, CCK8, CellTiter-Glo; предпочтительно способ представляет собой CellTiter-Glo;

[268] кроме того, значение пролиферации клеток считывают с применением считывающего устройства для микропланшетов, более предпочтительно считывающего устройства для микропланшетов BioTek Synergy H1.

[269] В качестве другого варианта осуществления значение IC₅₀ аксиального хирального изомера 114-1 соединения по настоящему изобретению в отношении ингибирования pERK в клетках Mia PaCa-2 составляет ≤100 нМ, предпочтительно ≤50 нМ, более предпочтительно ≤40 нМ и наиболее предпочтительно 38 нМ;

[270] или значение IC₅₀ аксиального хирального изомера 150-1 соединения в отношении ингибирования pERK в клетках Mia PaCa-2 составляет ≤50 нМ, предпочтительно ≤30 нМ, более предпочтительно ≤10 нМ, еще более предпочтительно ≤5 нМ, наиболее предпочтительно 5 нМ;

[271] или значение IC₅₀ аксиального хирального изомера 165-1 соединения в отношении ингибирования pERK в клетках Mia PaCa-2 составляет ≤50 нМ, предпочтительно ≤30 нМ, более предпочтительно ≤10 нМ, более предпочтительно ≤5 нМ, наиболее предпочтительно 4, 2 нМ;

[272] или значение IC₅₀ аксиального хирального изомера 166-1 соединения в отношении ингибирования pERK в клетках Mia PaCa-2 составляет ≤ 50 нМ, предпочтительно ≤30 нМ, более предпочтительно ≤20 нМ, наиболее предпочтительно 20 нМ.

[273] В качестве предпочтительного варианта осуществления настоящего изобретения способ обнаружения уровня ингибирующей активности в отношении фосфорилированного ERK является следующим: посредством культуры клеток добавление растворов соединения с разными значениями концентрации в культивируемые клетки, продолжение выращивания культуры в течение определенного периода времени, осуществление лизиса клеток с последующим центрифугированием и определением аффинности соединения в отношении фермента;

[274] кроме того, способ культивирования клеток является следующим: регулирование концентрации клеток до подходящей концентрации клеток с помощью полной среды, предпочтительно концентрация клеток составляет 1 × 10⁶/мл, и распределение суспензии клеток на луночном планшете для культивирования. предпочтительно условия культивирования представляют собой инкубатор с 37°C, 5% CO₂ в течение ночи; предпочтительно суспензию клеток распределяют в 96-луночные планшеты, 48-луночные планшеты, 24-луночные планшеты, 12-луночные планшеты или 6-луночные планшеты, более предпочтительно 96-луночные планшеты; предпочтительно подходящая концентрация клеток составляет 50000 клеток/лунка;

[275] кроме того, раствор соединения получают с DMSO и его можно дополнительно разбавлять средой; предпочтительно раствор соединения характеризуется градиентом значений концентрации, начинающимся от 100 мкМ при 4-кратном разбавлении, более предпочтительно начинающимся от 30 мкМ при 4-кратном разбавлении, наиболее предпочтительно начинающимся от 10 мкМ при 4-кратном разбавлении;

[276] кроме того, объем раствора соединения или растворителя, добавляемый в каждую лунку, составляет 1-50 мкл, предпочтительно 20-25 мкл, более предпочтительно 25 мкл;

[277] кроме того, после добавления раствора соединения, условия продолжения выращивания культуры представляют собой инкубатор с 37°C, 5% CO₂; предпочтительно время культивирования составляет 1-6 ч, более предпочтительно 2 ч;

[278] кроме того, лизис клеток осуществляют путем добавления лизирующего раствора, или предпочтительно лизирующий раствор добавляют при 50-100 мкл, более предпочтительно 50 мкл; или предпочтительно лизис осуществляют в условиях встряхивания при комнатной температуре, более предпочтительно время лизирования составляет 30 минут;

[279] кроме того, условия центрифугирования являются следующими: центрифугирование при 1000 об/мин в течение 1 минуты;

[280] кроме того, способ определения аффинности между соединением и ферментом является следующим: перенесение надосадочной жидкости в луночный планшет, добавление смеси для обнаружения и измерение с помощью считывающего устройства для микропланшетов после прохождения реакции; предпочтительно объем надосадочной жидкости составляет 10-30 мкл, предпочтительно 15 мкл; предпочтительно смесь для обнаружения представляет собой Eu-меченое антитело к ERK1/2 (T202-Y204) и ULight-меченое антитело у ERK1/2; более предпочтительно смесь для обнаружения представляет собой Eu-меченое антитело к ERK1/2 (T202-Y204) в конечной концентрации 0, 5 нМ и ULight-меченое антитело к ERK1/2 в конечной концентрации для обнаружения, составляющей 5 нМ; более предпочтительно объем смеси для обнаружения составляет 5-10 мкл, более предпочтительно 5 мкл;

[281] кроме того, после лизиса и центрифугирования реакцию надосадочной жидкости и смешанного раствора для обнаружения осуществляют в течение определенного периода времени, предпочтительно в течение ночи при комнатной температуре;

[282] кроме того, значение пролиферации клеток считывают с применением считывающего устройства для микропланшетов, более предпочтительно считывающего устройства для микропланшетов BioTek Synergy H1.

[283] Специалистам средней квалификации в данной области техники будет понятно, что аксиальные хиральные изомеры по настоящему изобретению также можно измерять в отношении ингибирующей активности с помощью других общеизвестных способов анализа активности, и что другие способы обнаружения или регулирование условий обнаружения могут приводить к отклонениям или большим изменениям ингибирующей активности соединений, и что все аксиальные хиральные изомеры, измеренные другими способами обнаружения активности, защищены настоящим изобретением.

[284] Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения, представленного общей формулой (IX-A), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли, который предусматривает следующие стадии, на которых:

[285] удаляют защитную группу из соединения, представленного общей формулой (IX-A5), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-A3), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли;

[286] проводят реакцию конденсации между соединением, представленным общей формулой (IX-A3), и соединением, представленным общей формулой (IX-A4), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-A2), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли;

[287] проводят реакцию сочетания между соединением, представленным общей формулой (IX-A2), и соединением, представленным общей формулой (IX-A1), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-A), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли;

[288] где

[289] Pg представляет собой защитную группу амино, предпочтительно аллилоксикарбонил, трифторацетил, трет-бутилсульфинил, 2,4-диметоксибензил, нитрофенилсульфонил, трифенилметил, флуоренилметилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил, бензил, п-толуолсульфонил, п-метоксибензил, формиат, ацетил, бензилоксикарбонил, фталоил, трет-бутоксикарбонил, бензил или п-метоксифенил; более предпочтительно трет-бутоксикарбонил;

[290] X₁ выбран из галогена; предпочтительно фтора, хлора, брома или йода; более предпочтительно хлора;

[291] R₂₆ выбран из галогена, борной кислоты или сложного эфира борной кислоты; предпочтительно фтора, хлора, брома, йода, -B(OH)₂ или ;

[292] если X₁ представляет собой галоген, то R₂₆ выбран из борной кислоты или сложного эфира борной кислоты;

[293] если X₁ выбран из борной кислоты или сложного эфира борной кислоты, то R₂₆ представляет собой галоген;

[294] R₂₇ выбран из галогена, гидроксила или алкилкарбонилокси; предпочтительно хлора или гидроксила.

[295] Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения, представленного общей формулой (IX-A), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли, который предусматривает следующие стадии, на которых:

[296] удаляют защитную группу из соединения, представленного общей формулой (IX-A7), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-A6), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли;

[297] проводят реакцию конденсации между соединением, представленным общей формулой (IX-A6), и соединением, представленным общей формулой (IX-A4), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-A), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли.

[298] Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения, представленного общей формулой (IX-B), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли, который предусматривает следующие стадии, на которых:

[299] удаляют защитную группу из соединения, представленного общей формулой (IX-B4), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-B3), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли;

[300] проводят реакцию конденсации между соединением, представленным общей формулой (IX-B3), и соединением, представленным общей формулой (IX-A4), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-B2), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли;

[301] проводят реакцию сочетания между соединением, представленным общей формулой (IX-B2), и соединением, представленным общей формулой (IX-B1), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-B), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли.

[302] Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения, представленного общей формулой (IX-B), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли, который предусматривает следующие стадии, на которых:

[303] удаляют защитную группу из соединения, представленного общей формулой (IX-B6), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-B5), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли;

[304] проводят реакцию конденсации между соединением, представленным общей формулой (IX-B5), и соединением, представленным общей формулой (IX-A4), с получением соединения, представленного общей формулой (IX-B), или его стереоизомера и его фармацевтически приемлемой соли.

[305] В настоящем изобретении также предусматривается предпочтительный вариант осуществления и он относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, представленного общей формулой (IX), и его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли и одно или более из фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.

[306] Настоящее изобретение дополнительно относится к применению любого из соединений общей формулы (I), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции в получении лекарственного препарата на основе ингибитора KRAS; предпочтительно к применению в лекарственном препарате, направленном на мутантный KRAS G12C.

[307] В настоящем изобретении также предусматривается предпочтительный вариант осуществления и он относится к способу соединения общей формулы (I), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции в лечении, предупреждении и/или обработке предварительно полученного средства лечения состояния, опосредованного ингибитором KRAS, при этом способ предусматривает введение терапевтически эффективной дозы соединения, представленного общей формулой (I), его стереоизомера или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции пациенту.

[308] В некоторых вариантах осуществления соединение и композицию по настоящему изобретению можно применять в лечении синдрома Нунан, синдрома LEOPARD, лейкоза, нейробластомы, меланомы, рака молочной железы, рака пищевода, опухоли головы и шеи, рака желудка, рака легкого и рака толстой кишки и других заболеваний или состояний.

[309] Соединение и композицию по настоящему изобретению можно применять в способе лечения синдрома Нунан, синдрома LEOPARD, лейкоза, нейробластомы, меланомы, рака молочной железы, рака пищевода, опухоли головы и шеи, рака легкого и рака толстой кишки и других заболеваний или состояний.

[310] В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения ракового состояния, предусматривающий введение соединения или композиции по настоящему изобретению пациенту, страдающему от ракового состояния.

[311] В некоторых вариантах осуществления рак, который лечат соединением и композицией по настоящему изобретению, представляет собой синдром Нунан, синдром LEOPARD, лейкоз, нейробластому, меланому, рак молочной железы, рак пищевода, опухоль головы и шеи, рак желудка, рак легкого и рак толстой кишки; предпочтительно немелкоклеточный рак легкого, рак толстой кишки, рак пищевода, опухоль головы и шеи.

Подробное описание изобретения

[312] Если не указано иное, термины, используемые в описании и формуле изобретения, имеют следующие значения.

[313] Термин «алкил» означает насыщенную алифатическую углеводородную группу, которая представляет собой группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно алкил, содержащий от 1 до 8 атомов углерода, более предпочтительно алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, наиболее предпочтительно алкил, содержащий от 1 до 3 атомов углерода. Неограничивающие примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил, н-гептил, 2-метилгексил, 3-метилгексил, 4-метилгексил, 5-метилгексил, 2,3-диметилпентил, 2,4-диметилпентил, 2,2-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 2-этилпентил, 3-этилпентил, н-октил, 2,3-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 2,2-диметилгексил, 3,3-диметилгексил, 4,4-диметилгексил, 2-этилгексил, 3-этилгексил, 4-этилгексил, 2-метил-2-этилпентил, 2-метил-3-этилпентил, н-нонил, 2-метил-2-этилгексил, 2-метил-3-этилгексил, 2,2-диэтилпентил, н-децил, 3,3-диэтилгексил, 2,2-диэтилгексил и различные разветвленные изомеры. Более предпочтительно неограничивающие примеры низшего алкила, содержащего от 1 до 6 атомов углерода, включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, втор-бутил, н-пентил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, н-гексил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-этилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил и т. д. Алкил может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители могут быть замещены по любой доступной точке присоединения, при этом заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкоксила, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, карбоксила или карбоксилата, предпочтительно представляют собой алкил, замещенный метилом, этилом, изопропилом, трет-бутилом, галогеналкилом, дейтерированным алкилом, алкокси-замещенным алкилом и гидроксил-замещенным алкилом.

[314] Термин «алкилен» означает, что один атом водорода алкильной группы является дополнительно замещенным, например: «метилен» означает -CH₂-, «этилен» означает -(CH₂)₂-, и «пропилен» означает - (CH₂)₃-, «бутилен» означает -(CH₂)₄- и т. д. Термин «алкенил» означает алкил, определенный выше, содержащий по меньшей мере два атома углерода и по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод, такой как винил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-, 2- или 3-бутенил и т. д. Алкенил может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио.

[315] Термин «циклоалкил» означает насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический или полициклический циклический углеводородный заместитель, при этом циклоалкильное кольцо содержит от 3 до 20 атомов углерода, предпочтительно от 3 до 12 атомов углерода, более предпочтительно от 3 до 6 атомов углерода. Неограничивающие примеры моноциклического циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил, циклогексадиенил, циклогептил, циклогептатриенил, циклооктанил и т. д., полициклический циклоалкил включает спиро-, конденсированный и мостиковый циклоалкил, предпочтительно циклопропил, циклобутил, циклогексил, циклопентил и циклогептил.

[316] Термин «спироциклоалкил» означает полициклил, который имеет один общий атом углерода (называемый спиро-атомом) между 5-20-членными моноциклическими кольцами, которые могут содержать одну или более двойных связей, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной системы π-электронов. Предпочтительными являются 6-14-членные, более предпочтительными - 7-10-членные. В зависимости от числа общих спироатомов между кольцами спироциклоалкил классифицируется на моноспироциклоалкил, биспироциклоалкил или полиспироциклоалкил, предпочтительно моноспироциклоалкил и биспироциклоалкил. Более предпочтительным является 3-членный/6-членный, 3-членный/5-членный, 4-членный/4-членный, 4-членный/5-членный, 4-членный/6-членный, 5-членный/5-членный или 5-членный/6-членный моноспироциклоалкил. Неограничивающие примеры спироциклоалкила включают

и т. д.;

[317] также включают спироциклоалкил, в котором моноспироциклоалкил и гетероциклоалкил имеют общий спиро-атом, при этом неограничивающие примеры включают

и и т. д.

[318] Термин «конденсированный циклоалкил» означает 5-20-членную полностью углеродную полициклическую группу, в которой каждое кольцо в системе имеет общую смежную пару атомов углерода с другими кольцами в системе, где одно или более колец могут содержать одну или более двойных связей, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной системы π-электронов. Предпочтительными являются 6-14-членные, более предпочтительными - 7-10-членные. В зависимости от числа содержащихся колец он может быть классифицирован на бициклический, трициклический, тетрациклический или полициклический конденсированный циклоалкил, предпочтительно бициклический или трициклический и более предпочтительно 5-членный/5-членный или 5-членный/6-членный бициклический алкил. Неограничивающие примеры конденсированных циклоалкилов включают

и и т. д.

[319] Термин «мостиковый циклоалкил» означает 5-20-членную полностью углеродную полициклическую группу, в которой любые два кольца имеют два общих атома углерода, которые не являются непосредственно соединенными, они могут содержать одну или более двойных связей, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной системы π-электронов. Предпочтительными являются 6-14-членные, более предпочтительными - 7-10-членные. В зависимости от числа содержащихся колец он может быть классифицирован на бициклический, трициклический, тетрациклический или полициклический мостиковый циклоалкил, предпочтительно бициклический, трициклический или тетрациклический и более предпочтительно бициклический или трициклический. Неограничивающие примеры алкила с мостиковыми кольцами включают

[320] Циклоалкильное кольцо может быть конденсировано с арильным, гетероарильным или гетероциклоалкильным кольцом, где кольцо, присоединенное к исходной структуре, представляет собой циклоалкил, при этом неограничивающие примеры включают инданил, тетрагидронафтил, бензоциклогептанил и т. д. Циклоалкил может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, карбоксила или карбоксилата.

[321] Термин «гетероциклил» означает насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический или полициклический углеводородный заместитель, содержащий от 3 до 20 атомов кольца, где один или более атомов кольца представляют собой гетероатомы, выбранные из азота, кислорода или S(O)_m (где m представляет собой целое число, равное 0-2), но не включают кольцевую часть -O-O-, -O-S- или -S-S-, и оставшиеся атомы кольца представляют собой углерод. Он предпочтительно содержит от 3 до 12 атомов кольца, где от 1 до 4 атомов кольца представляют собой гетероатомы; более предпочтительно содержит от 3 до 8 атомов кольца; наиболее предпочтительно содержит от 3 до 8 атомов кольца; более предпочтительным является 3-8-членный гетероциклил, содержащий от 1 до 3 атомов азота, необязательно замещенный 1-2 атомами кислорода, атомами серы или оксо, в том числе азотсодержащий моноциклический гетероциклил, азотсодержащий спирогетероциклил или азотсодержащий конденсированный гетероциклил.

[322] Неограничивающие примеры моноциклического гетероциклила включают пирролидинил, имидазолидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, дигидроимидазолил, дигидрофуранил, дигидропиразолил, дигидропирролил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, гомопиперазинил, азепил, 1,4-диазепанил, пиранил и т. д., предпочтительно пирролидинил, морфолинил, пиперидинил, азепанил, 1,4-диазепанил и пиперазинил. Полициклический гетероциклил включает спиро-, конденсированный и мостиковый гетероциклил; при этом спиро-, конденсированный и мостиковый гетероциклил необязательно присоединены к другим группам посредством одинарной связи или присоединены к другому циклоалкилу, гетероциклилу, арилу и гетероарилу посредством любых двух или более атомов кольца.

[323] Термин «спирогетероциклил» означает полициклический гетероциклил, имеющей один общий атом (называемый спиро-атомом) между 5-20-членными моноциклическими кольцами, при этом один или более атомов кольца выбраны из гетероатомов, представляющих собой азот, кислород или S(O)_m (где m представляет собой целое число, равное 0-2), и оставшиеся атомы кольца представляют собой углерод. Он может содержать одну или более двойных связей, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной системы π-электронов. Предпочтительными являются 6-14-членные, более предпочтительными - 7-10-членные. В зависимости от числа общих спиро-атомов между кольцами спирогетероциклил классифицируется на моноспирогетероциклил, диспирогетероциклил или полиспирогетероциклил, предпочтительно моноспирогетероциклил и диспирогетероциклил. Более предпочтительным является 3-членный/5-членный, 3-членный/6-членный, 4-членный/4-членный, 4-членный/5-членный, 4-членный/6-членный, 5-членный/5-членный или 5-членный/6-членный моноспирогетероциклил. Неограничивающие примеры спирогетероциклила включают

и т. д.

[324] Термин «конденсированный гетероциклил» означает 5-20-членную полициклическую гетероциклическую группу, в которой каждое кольцо в системе имеет общую смежную пару атомов с другими кольцами в системе, одно или более колец могут содержать одну или более двойных связей, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной системы π-электронов, при этом один или более атомов кольца представляют собой гетероатомы, выбранные из азота, кислорода или S(O)_m (где m представляет собой целое число, равное 0-2), и остальные атомы кольца представляют собой углерод. Предпочтительными являются 6-14-членные, более предпочтительными - 7-10-членные. В зависимости от числа содержащихся колец он может быть классифицирован на бициклический, трициклический, тетрациклический или полициклический конденсированный гетероциклил, предпочтительно бициклический или трициклический и более предпочтительно 5-членный/5-членный или 5-членный/6-членный бициклический конденсированный гетероциклил. Неограничивающие примеры конденсированного гетероциклила включают

и и т. д.

[325] Термин «мостиковый гетероциклил» означает полициклическую гетероциклическую группу, в которой любые два кольца имеют два общих атома, которые не являются непосредственно соединенными, он может содержать одну или более двойных связей, но ни одно из колец не имеет полностью сопряженной системы π-электронов, при этом один или более атомов кольца представляют собой гетероатомы, выбранные из азота, кислорода или S(O)_m (где m представляет собой целое число, равное 0-2), и остальные атомы кольца представляют собой углерод. Предпочтительными являются 6-14-членные, более предпочтительными - 7-10-членные. В зависимости от числа содержащихся колец он может быть классифицирован на бициклический, трициклический, тетрациклический или полициклический мостиковый гетероциклил, предпочтительно бициклический, трициклический или тетрациклический и более предпочтительно бициклический или трициклический. Неограничивающие примеры мостикового гетероциклила включают

и и т. д.

[326] Гетероциклическое кольцо может быть конденсировано с арильным, гетероарильным или циклоалкильным кольцом, где кольцо, соединенное с исходной структурой, представляет собой гетероциклил, при этом неограничивающие примеры включают

и и т. д.

[327] Гетероциклил может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, оксо, карбоксила или карбоксилата.

[328] Термин «арил» означает 6-14-членную полностью углеродную моноциклическую или конденсированную полициклическую группу (то есть кольца имеют смежную пару атомов углерода) с сопряженной системой π-электронов, предпочтительно 6-12-членную, такую как фенил и нафтил. Более предпочтительным является фенил. Арильное кольцо может быть конденсировано с гетероарильным, гетероциклильным или циклоалкильным кольцом, в том числе бензо-5-10-членным гетероарилом, бензо-3-8-членным циклоалкилом и бензо-3-8-членным гетероалкилом, предпочтительно бензо-5-6-членным гетероарилом, бензо-3-6-членным циклоалкилом и бензо-3-6-членным гетероалкилом, где гетероциклил представляет собой гетероциклил, содержащий 1-3 гетероатома, выбранные из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы; или представлять собой 3-членное азотсодержащее конденсированное кольцо, содержащее бензольное кольцо.

[329] Где кольцо, соединенное с исходной структурой, представляет собой арильное кольцо, при этом неограничивающие примеры включают

и и т. д.

[330] Арил может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкоксила, гетероциклоалкоксила, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, карбоксила или карбоксилата.

[331] Термин «гетероарил» означает гетероароматическую систему, содержащую от 1 до 4 гетероатомов и от 5 до 14 атомов кольца, где гетероатомы выбраны из кислорода, серы и азота. Гетероарил предпочтительно является 5-12-членным, более предпочтительно 5- или 6-членным, таким как имидазол, фуранил, тиофенил, тиазолил, пиразолил, оксазолил, пирролил, триазолил, тетразолил, пиридил, пиримидинил, тиадиазол, пиразинил и т. д., предпочтительно триазолил, тиофенил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, пиримидинил или тиазол; более предпочтительно пиразолил, пирролил и оксазолил. Гетероарильное кольцо может быть конденсировано с арильным, гетероарильным или циклоалкильным кольцом, где кольцо, соединенное с исходной структурой, представляет собой арильное кольцо, при этом неограничивающие примеры включают

и и т. д.

[332] Гетероарил необязательно может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкоксила, гетероциклоалкоксила, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, карбоксила или карбоксилата.

[333] Термин «алкокси» означает -O-(алкил) и -O-(незамещенный циклоалкил), где определение алкила является таким, как указано выше. Неограничивающие примеры алкокси включают метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклопропокси, циклобутокси, циклопентилокси, циклогексилокси. Алкокси необязательно может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, карбоксила или карбоксилата.

[334] Термин «алкилтио» означает -S-(алкил) и -S-(незамещенный циклоалкил), где определение алкила является таким, как указано выше. Неограничивающие примеры алкоксигрупп включают метилтио, этилтио, пропилтио, бутилтио, циклопропилтио, циклобутилтио, циклопентилтио, циклогексилтио. Алкилтио необязательно может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, карбоксила или карбоксилата.

[335] «Алкилтио-алкил» означает алкилтио, присоединенный к алкилу, где алкил и алкилтио являются такими, как определено выше.

[336] «Алкиламинокарбонил» означает (алкил)-N-C(O)-, где алкил определен выше.

[337] «Галогеналкил» означает алкил, замещенный одним или более атомами галогена, где алкил определен выше.

[338] «Галогеналкокси» означает алкокси, замещенный одним или более атомами галогена, где алкокси определен выше.

[339] «Галогеналкилтио» означает алкилтио, замещенный одним или более атомами галогена, где алкилтио определен выше.

[340] «Гидроксиалкил» означает алкил, замещенный одним или более гидроксилами, где алкил определен выше.

[341] «Алкенил» означает алкенильную цепь, также известную как олефиновая группа, где алкенил может быть дополнительно замещен другими родственными группами, такими как алкил, алкенил, алкинил, алкокси, алкилтио, алкиламино, галоген, сульфгидрил, гидроксил, нитро, циано, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, карбоксил или карбоксилат.

[342] «Алкинил» означает (CH≡C-), где алкинил может быть дополнительно замещен другими родственными группами, например, алкилом, алкенилом, алкинилом, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогеном, сульфгидрилом, гидроксилом, нитро, циано, циклоалкилом, гетероциклоалкилом, арилом, гетероарилом, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, карбоксилом или карбоксилатом.

[343] Термин «алкенилкарбонил» означает -C(O)-(алкенил), где алкенил определен выше. Неограничивающие примеры алкенилкарбонила включают винилкарбонил, пропенилкарбонил, бутенилкарбонил. Алкенилкарбонил необязательно может быть замещенным или незамещенным; если он является замещенным, то заместители предпочтительно представляют собой одну или более из следующих групп, которые независимо выбраны из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, алкилтио, алкиламино, галогена, сульфгидрила, гидроксила, нитро, циано, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, циклоалкилтио, гетероциклоалкилтио, карбоксила или карбоксилата.

[344] «Гидроксил» означает группу -OH.

[345] «Галоген» означает фтор, хлор, бром или йод.

[346] «Амино» означает -NH₂.

[347] «Циано» означает -CN.

[348] «Нитро» означает -NO₂.

[349] «Карбонил» означает -C(O)-.

[350] «Карбоксил» означает -C(O)OH.

[351] «THF» означает тетрагидрофуран.

[352] «EtOAc» означает этилацетат.

[353] «MeOH» означает метанол.

[354] «DMF» означает N,N-диметилформамид.

[355] «DIPEA» означает диизопропилэтиламин.

[356] «TFA» означает трифторуксусную кислоту.

[357] «MeCN» означает ацетонитрил.

[358] «DMA» означает N,N-диметилацетамид.

[359] «Et₂O» означает диэтиловый эфир.

[360] «DCE» означает 1,2-дихлорэтан.

[361] «DIPEA» означает N,N-диизопропилэтиламин.

[362] «NBS» означает N-бромсукцинимид.

[363] «NIS» означает N-йодсукцинимид.

[364] «Cbz-Cl» означает бензилхлорформиат.

[365] «Pd₂(dba)₃» означает трис(дибензилиденацетон)дипалладий.

[366] «Dppf» означает 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен.

[367] «HATU» означает гексафторфосфат 2-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония.

[368] «KHMDS» означает гексаметилдисилазид калия.

[369] «LiHMDS» означает бис-триметилсилиламид лития.

[370] «MeLi» означает метиллитий.

[371] «N-BuLi» означает н-бутиллитий.

[372] «NaBH(OAc)₃» означает триацетоксиборогидрид натрия.

[373] «X выбран из A, B или C», «X выбран из A, B и C», «X представляет собой A, B или C», «X представляет собой A, B и C» и все другие выражения выражают идентичные значения, что означает, что X может представлять собой любой из одного или более из A, B и C.

[374] Атом водорода, описанный в настоящем изобретении, может быть заменен его изотопом дейтерия, и любой атом водорода в вариантах осуществления соединений по настоящему изобретению также может быть заменен атомом дейтерия.

[375] «Необязательный» или «необязательно» означает, что описанное позже событие или условие может реализоваться, но не обязательно, и описание включает случаи, когда событие или условие реализуется или не реализуется. Например, «гетероциклическая группа, необязательно замещенная алкилом» означает, что алкил может присутствовать, но не обязательно присутствует, и такое описание включает случай, когда гетероциклическая группа не замещена алкилом.

[376] «Замещенный» означает, что один или более атомов водорода в группе, предпочтительно не более 5, более предпочтительно от 1 до 3 атомов водорода замещены соответствующим числом заместителей. Само собой разумеется, что заместители находятся только в своих возможных химических положениях, и специалист в данной области техники может определить (экспериментально или теоретически) возможные или невозможные замещения без чрезмерных усилий. Например, аминогруппа или гидроксил, содержащие свободный водород, могут быть нестабильными в сочетании с атомом углерода, имеющим ненасыщенную (например, олефиновую) связь.

[377] «Фармацевтическая композиция» означает смесь, содержащую одно или более из соединений, описанных в данном документе или их физиологически/фармацевтически приемлемую соль или пролекарство на их основе и другие химические компоненты, и при этом другой компонент представляет собой, например, физиологически/фармацевтически приемлемые носитель и вспомогательное вещество. Целью фармацевтической композиции является способствование введению в организм, облегчение всасывания активного ингредиента и затем проявление его биологической активности.

[378] «Фармацевтически приемлемая соль» означает соль соединения по настоящему изобретению, которая является безопасной и эффективной при применении у млекопитающих и обладает необходимой биологической активностью.

Подробное описание предпочтительного варианта осуществления

[379] Следующие варианты осуществления будут дополнительно описывать настоящее изобретение, но такие варианты осуществления не ограничивают объем настоящего изобретения.

[380] Вариант осуществления

[381] Структуры соединений по настоящему изобретению определяли с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) или/и жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (LC-MS). Химический сдвиг в ЯМР (δ) был приведен в единицах, представляющих собой число частей на миллион (ppm). ЯМР определяли с применением прибора для ЯМР Bruker AVANCE-400 с использованием дейтерированного диметилсульфоксида (DMSO-d₆), дейтерированного метанола (CD₃OD) и дейтерированного хлороформа (CDCl₃) в качестве растворителей и тетраметилсилана (TMS) в качестве внутреннего стандарта.

[382] Определения в ходе жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (LC-MS) осуществляли на масс-спектрометре Agilent 1200 Infinity Series. Определения в ходе HPLC проводили с применением жидкостного хроматографа высокого давления Agilent 1200DAD (колонка Sunfire C18 150 × 4, 6 мм) и жидкостного хроматографа высокого давления Waters 2695-2996 (колонка Gimini C₁₈ 150 × 4, 6 мм).

[383] Силикагелевые пластины Yantai Huanghai HSGF254 или Qingdao GF254 применяли в качестве силикагелевой пластины для тонкослойной хроматографии, спецификация TLC: 0, 15 мм - 0, 20 мм, и спецификация тонкослойного хроматографического разделения и очистки продуктов: 0, 4 мм - 0, 5 мм. Обычно в качестве носителя для колоночной хроматографии применяли силикагель Yantai Huanghai, силикагель фракции 200-300 меш.

[384] Исходные материалы в вариантах осуществления настоящего изобретения известны и коммерчески доступны или могут быть синтезированы путем применения известных из уровня техники способов, либо согласно им.

[385] Если не указано иное, все реакции по настоящему изобретению осуществляли при непрерывном перемешивании магнитной мешалкой в атмосфере сухого азота или аргона, растворитель представлял собой сухой растворитель, и единица для температуры реакции представляла собой градусы Цельсия.

[386] Вариант осуществления 1

[387] Получение(S)-2-(1-акрилоил-4-(7-(8-метилнафталин-1-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-2-ил)ацетонитрила

[388] Стадия 1. Получение 7-(трет-бутил)-2-метил-4-гидрокси-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7(6H)-дикарбоксилата

[389] (трет-Бутил)-4-этил-3-карбонилпиперидин-1,4-дикарбоксилат (10 г, 37 ммоль) и гидрохлорид метил-2-амино-2-иминоацетата (5,1 г, 37 ммоль) растворяли в этаноле (100 мл), и добавляли этоксид натрия (2,7 г, 40 ммоль), смесь нагревали до 75°C и перемешивали в течение 15 часов, затем концентрировали при пониженном давлении с удалением избыточного растворителя, к указанному добавляли воду, и значение pH регулировали до нейтрального с помощью 1 М разбавленной хлористоводородной кислоты, твердое вещество осаждали, и смесь фильтровали и промывали водой, затем твердое вещество высушивали с получением целевого продукта, 7-(трет-бутил)-2-метил-4-гидрокси-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7(6H)-дикарбоксилата (3,8 г, выход: 33%).

[390] MS масса/заряд (ESI): 310, 1 [M+H]⁺.

[391] Стадия 2. Получение 7-(трет-бутил)-2-метил-4-(((трифторметил)сульфонил)оксо)-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7(6H)-дикарбоксилата

[392] 7-(трет-Бутил)-2-метил-4-гидрокси-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7(6H)-дикарбоксилат (3,7 г, 12, 0 ммоль) растворяли в дихлорметане (100 мл), и смесь охлаждали до 0°C, к указанному добавляли DIPEA (2,7 г, 24, 1 ммоль) и Tf₂O (5,1 г, 18, 1 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир = 5:1) с получением целевого продукта, 7-(трет-бутил)-2-метил-4-(((трифторметил)сульфонил)оксо)-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7(6H)-дикарбоксилата (4,5 г, выход: 85%).

[393] Стадия 3. Получение 7-(трет-бутил)-2-метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7-(6H)-дикарбоксилата

[394] 7-(трет-Бутил)-2-метил-4-(((трифторметил)сульфонил)оксо)-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7-(6H)-дикарбоксилат (3,5 г, 7, 9 ммоль) растворяли в DMF (50 мл) и к указанному добавляли бензил-(S)-2-(цианометил)пиперазин-1-карбоксилат (2,5 г, 9, 7 ммоль), DIPEA (2,7 г, 24,1 ммоль), смесь нагревали до 100°C в защитной атмосфере азота и перемешивали в течение 3 часов. Смесь охлаждали, к указанному добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом (3 * 50 мл). Органическую фазу объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, затем очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир = 3:1) с получением целевого продукта, 7-(трет-бутил)-2-метил(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7-(6H)-дикарбоксилата (3,7 г, выход: 85%).

[395] MS масса/заряд (ESI): 551,1 [M+H]⁺.

[396] Стадия 4. Получение метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата

[397] 7-(трет-Бутил)-2-метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-5,8-дигидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,7-(6H)-дикарбоксилат (1,5 г, 2,7 ммоль) растворяли в дихлорметане (30 мл) и к указанному добавляли TFA (2 мл, 27,2 ммоль), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь доводили до нейтральности с помощью насыщенного водного раствора NaHCO₃ и трижды экстрагировали этилацетатом (3 * 50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением целевого продукта, метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата (1,3 г, неочищенный продукт).

[398] MS масса/заряд (ESI): 451,1 [M+H]⁺.

[399] Стадия 5. Получение метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата

[400] Метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилат (1,3 г, 2,7 ммоль) растворяли в толуоле (50 мл); к указанному добавляли 1-бром-8-метилнафталин (1,2 г, 5,4 ммоль), Pd₂(dba)₃ (275 мг, 0,3 ммоль), RuPhos (280 мг, 0,6 ммоль) и Cs₂CO₃ (326 мг, 1,0 ммоль) и реакционную смесь заполняли азотом 3 раза, реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 15 часов. Смесь концентрировали с удалением толуола и экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 30 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир = 3:1) с получением целевого продукта, метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата (550 мг, выход: 35%).

[401] MS масса/заряд (ESI): 591,1 [M+H]⁺.

[402] Стадия 6. Получение метил-(S)-4-(3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата

[403] Аммиак пропускали в MeOH (20 мл) в течение 30 мин при -70°C, затем к указанному добавляли метил-(S)-4-(4-((бензилокси)карбонил)-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилат (500 мг, 0,85 ммоль), Pd/C (250 мг, вода 10%), смесь заполняли водородом и затем перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре в условиях 15 фунтов/кв. дюйм водорода. Реакцию завершали, и смесь фильтровали с удалением катализатора, промывали с помощью MeOH, и органическую фазу концентрировали с получением целевого продукта, метил-(S)-4-(3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата (320 мг, выход: 83%).

[404] MS масса/заряд (ESI): 457,1 [M+H]⁺.

[405] Стадия 7. Получение метил-(S)-4-(4-акрилоил-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата

[406] Метил-(S)-4-(3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилат (300 мг, 0,66 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли DIPEA (220 мг, 2,0 ммоль), затем добавляли по каплям акрилоилхлорид (66 мг, 0,73 ммоль) при комнатной температуре, после добавления перемешивание продолжали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водой и трижды экстрагировали дихлорметаном (10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир = 5:1) с получением целевого продукта, метил-(S)-4-(4-акрилоил-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилата (275 мг, выход: 82%).

[407] MS масса/заряд (ESI): 511,1 [M+H]⁺.

[408] Стадия 8. Получение (S)-4-(4-акрилоил-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоновой кислоты

[409] Метил-(S)-4-(4-акрилоил-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоксилат (270 мг, 0,53 ммоль) растворяли в THF/H₂O (10 мл/5 мл) и к указанному добавляли LiOH-H₂O (220 мг, 5,3 ммоль), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Смесь доводили до нейтральности с помощью 1 М хлористоводородной кислоты, трижды экстрагировали этилацетатом (3 * 20 мл), и органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного целевого продукта, (S)-4-(4-акрилоил-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоновой кислоты (280 мг, неочищенный продукт).

[410] MS масса/заряд (ESI): 497,1 [M+H]⁺.

[411] Стадия 9. Получение (S)-2-(1-акрилоил-4-(7-(8-метилнафталин-1-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-2-ил)ацетонитрила

[412] (S)-4-(4-Акрилоил-3-(цианометил)пиперазин-1-ил)-7-(8-метилнафталин-1-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-карбоновую кислоту (30 мг, 0,05 ммоль) растворяли в DMF (10 мл); к указанному добавляли DIPEA (0,5 мл) и HATU (20 мг, 0,06 ммоль) и смесь перемешивали в течение 0,5 часа при комнатной температуре. Добавляли N-метилпиперазин (10 мг, 0,1 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 3 часов, к указанному добавляли воду, и смесь экстрагировали дихлорметаном (3*20 мл), промывали водой (20 мл) и насыщенным солевым раствором (20 мл), органическую фазу высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl_2/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, (S)-2-(1-акрилоил-4-(7-(8-метилнафталин-1-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-2-ил)ацетонитрила (10 мг, выход: 35%).

[413] MS масса/заряд (ESI): 579,1 [M+H]⁺.

[414] Синтез вариантов осуществления 2-20 проводили согласно варианту осуществления 1.

[415] Вариант осуществления 21

[416] Получение 1-(4-(6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-2-(((S)-1-метилпирролидин-2-ил)метокси)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она

[417] Стадия 1. Получение 2,5,6-трихлорникотинамида

[418] 2,5,6-Трихлорникотиновую кислоту (8 г, 35,5 ммоль) растворяли в 80 мл безводного тетрагидрофурана, в реакционную смесь партиями добавляли N'N-карбонилдиимидазол (6,3 г, 39 ммоль), смесь нагревали до 50°C и перемешивали в течение 1 часа, затем к указанному добавляли толуол, и смесь концентрировали до 50 мл при пониженном давлении. После охлаждения до 0°C в реакционную смесь медленно добавляли по каплям аммиачную воду (9,5 мл, 22 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции смесь концентрировали и трижды экстрагировали смесью этилацетат/петролейный эфир (1/3), органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением белого твердого вещества. Образовывали взвесь белого твердого вещества в смеси этилацетат/петролейный эфир (1/5) с получением целевого продукта, 2,5,6-трихлорникотинамида (5,6 г, выход: 70%).

[419] Стадия 2. Получение N-карбамоил-2,5,6-трихлорникотинамида

[420] 2,5,6-Трихлорникотинамид (5 г, 22,3 ммоль) растворяли в 40 мл безводного тетрагидрофурана, добавляли по каплям оксалилхлорид (2,0 мл, 23,8 ммоль) при -78°C и смесь перемешивали при 60°C в течение 3,5 часа. Затем смесь охлаждали до -78°C, к указанному добавляли триэтиламин (9,7 мл, 68,9 ммоль) и аммиак (22 мл, 51 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, реакцию завершали. Смесь концентрировали, трижды экстрагировали этилацетатом, органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, снова концентрировали и образовывали взвесь со смесью этилацетат/петролейный эфир (1/5) с получением целевого продукта, N-карбамоил-2,5,6-трихлорникотинамида (3,5 г, выход: 58%).

[421] Стадия 3. Получение 6,7-дихлорпиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона

[422] N-карбамоил-2,5,6-трихлорникотинамид (3,2 г, 12,0 ммоль) растворяли в THF (100 мл) в защитной атмосфере азота, и к указанному добавляли по каплям KHMDS (24,0 мл, 1 М раствор в THF, 24,0 ммоль) на бане с ледяной водой, и после добавления постепенно доводили до комнатной температуры, и перемешивали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагировали этилацетатом (3 * 30 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, 6,7-дихлорпиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона (2,1 г, выход: 76%).

[423] MS масса/заряд (ESI): 232,1 [M+H]⁺, 234,1 [M+2+H]⁺.

[424] Стадия 4. Получение 6-хлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4(1H,3H)-диона

[425] 6,7-Дихлорпиридо[2,3-d]пиримидин-2,4(1H,3H)-дион (2 г, 8,6 ммоль) растворяли в диоксане (100 мл), к указанному добавляли 2-фтор-6-метоксифенилбороновую кислоту (2,2 г, 12,9 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий (459 мг, 0,5 ммоль), Xantphos (580 мг, 1 ммоль) и Cs₂CO₃ (8,5 г, 25,9 ммоль) и смесь заменяли азотом. Реакционную смесь нагревали до 110°C и реакцию проводили в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли с помощью 200 мл этилацетата, фильтровали через целит, фильтрат выпаривали до сухого состояния и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH =10:1) с получением целевого продукта, 6-хлор-7-(2-фтор-6)-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона (1,9 г, выход: 68%).

[426] MS масса/заряд (ESI): 322,1 [M+H]⁺, 324,1 [M+2+H]⁺.

[427] Стадия 5. Получение 2,4,6-трихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидина

[428] 6-Хлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4(1H,3H)-дион (1,8 г, 5,6 ммоль) растворяли в POCl₃ (50 мл) в защитной атмосфере азота, смесь перемешивали при 80°C в течение 10 часов. Затем смесь гасили путем капельного добавления ледяной воды, фильтровали с получением твердого продукта, твердый продукт промывали водой и высушивали с получением неочищенного целевого продукта, 2,4,6-трихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидина (1,5 г, выход: 75%).

[429] Стадия 6. Получение трет-бутил-4-(2,6-дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[430] 2,4,6-Трихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин (1,5 г, 4,2 ммоль) растворяли в дихлорметане (30 мл), к указанному добавляли N-трет-бутоксиформил-пиперазин (940 мг, 5,0 ммоль), TEA (1,3 г, 12,9 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Реакционную смесь выливали в ледяную воду и трижды экстрагировали дихлорметаном (30 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир =3:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-4-(2,6-дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата (1,4 г, выход: 65%).

[431] MS масса/заряд (ESI): 508,1 [M+H]⁺, 510,1 [M+2+H]⁺.

[432] Стадия 7. Получение 2,6-дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-4-(пиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидина

[433] трет-Бутил-4-(2,6-дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилат (1,4 г, 2,8 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл), к указанному добавляли TFA (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь доводили до нейтральности с помощью насыщенного водного раствора NaHCO₃ и трижды экстрагировали этилацетатом (3 * 50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением целевого продукта, 2,6-дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-4-(пиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидина (1,4 г, неочищенный продукт).

[434] MS масса/заряд (ESI): 408,1 [M+H]⁺, 410,1 [M+2+H]⁺.

[435] Стадия 8. Получение 1-(4-(2,6-дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она

[436] 2,6-Дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-4-(пиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин (1,4 г, 2,8 ммоль) растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли DIPEA (1,1 г, 8,5 ммоль), затем добавляли по каплям акрилоилхлорид (305 мг, 3,4 ммоль) при комнатной температуре, после добавления перемешивание продолжали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водой и трижды экстрагировали дихлорметаном (10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир =3:1) с получением целевого продукта 1-(4-(2,6-дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (1 г, выход: 77%).

[437] MS масса/заряд (ESI): 462,1 [M+H]⁺, 464,1 [M+2+H]⁺.

[438] Стадия 9. Получение 1-(4-(6-хлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-2-(((S)-1-метилпирролидин-2-ил)метокси)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она

[439] 1-(4-(2,6-Дихлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-он (200 мг, 0,43 ммоль) растворяли в THF (20 мл), к указанному добавляли (S)-(1-метилпирролидин-2-ил)метанол (100 мг, 0,86 ммоль) и трет-бутоксид натрия (124 мг, 1,29 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре в защитной атмосфере азота. Затем реакционную смесь гасили водой и трижды экстрагировали этилацетатом (10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, 1-(4-(6-хлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил))-2-(((S)-1-метилпирролидин-2-ил)метокси)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (40 мг, выход: 18%).

[440] MS масса/заряд (ESI): 541,1 [M+H]⁺, 543,1 [M+2+H]⁺.

[441] Стадия 10. Получение 1-(4-(6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-2-(((S)-1-метилпирролидин-2-ил)метокси)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она

[442] 1-(4-(6-Хлор-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-2-(((S)-1-метилпирролидин-2-ил)метокси)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-он (40 мг, 0,07 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), смесь охлаждали до -40°C, и к указанному добавляли BBr₃ (35 мг, 0,14 ммоль), смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. Затем смесь гасили путем добавления насыщенного водного раствора NaHCO₃ и трижды экстрагировали этилацетатом (10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью препаративного HPLC с получением целевого продукта, 1-(4-(6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-2-(((S)-1-метилпирролидин-2-ил)метокси)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (13 мг, выход: 33%).

[443] MS масса/заряд (ESI): 527,1 [M+H]⁺, 529,1 [M+2+H]⁺.

[444] Синтез вариантов осуществления 22-30 проводили согласно варианту осуществления 21.

[445] Вариант осуществления 31

[446] Получение (S)-1-(4-(7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-4'-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она

[447] Стадия 1. Получение трет-бутил-5-метокси-3-карбонил-3,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата

[448] трет-Бутил-3,5-дикарбонилпиридин-1-карбоксилат (10 г, 46,9 ммоль) и триэтил-ортоформиат (6 мл) растворяли в смеси метанол/толуол (50 мл/150 мл), к указанному добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (400 мг, 2,3 ммоль), и смесь перемешивали при 110°C в течение 5 часов, охлаждали до комнатной температуры, промывали насыщенным водным раствором NaCl с 10% NaOH, органическую фазу высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта, затем очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир = 10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-5-метокси-3-карбонил-3,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (7,8 г, выход: 73%).

[449] Стадия 2. Получение трет-бутил-7-метокси-5-азаспиро[2. 5]окт-7-ен-5-карбоксилата

[450] трет-Бутил-5-метокси-3-карбонил-3,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат (7,6 г, 33,5 ммоль) растворяли в 100 мл эфира, к указанному добавляли оксид тетраизопропилтитана (10 мл), и добавляли по каплям бромид этилмагния (33,5 мл, 3 М раствор в эфире, 100,5 ммоль) при комнатной температуре, и после добавления перемешивание продолжали в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь гасили путем капельного добавления воды, фильтровали через целит, промывали этилацетатом и трижды экстрагировали этилацетатом, органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением целевого продукта, трет-бутил-7-метокси-5-азаспиро[2. 5]окт-7-ен-5-карбоксилата (8,8 г, неочищенный продукт).

[451] Стадия 3. Получение трет-бутил-7-карбонил-5-азаспиро[2. 5]октан-5-карбоксилата

[452] трет-Бутил-7-метокси-5-азаспиро[2. 5]окт-7-ен-5-карбоксилат (8,8 г, 33,5 ммоль) растворяли в THF (50 мл), к указанному добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (2 г, 10,5 ммоль) в защитной атмосфере азота и перемешивали в течение 15 часов при комнатной температуре. Смесь промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, органическую фазу высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (EtOAc/петролейный эфир =10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-7-карбонил-5-азаспиро[2. 5]октан-5-карбоксилата (4,5 г, выход: 60%).

[453] Стадия 4. Получение трет-бутил-(Z)-8-((диметиламино)метилен)-7-карбонил-5-азаспиро[2. 5]октан-5-карбоксилата

[454] трет-Бутил-7-карбонил-5-азаспиро[2. 5]октан-5-карбоксилат (4,3 г, 19,1 ммоль) растворяли в DMF-DMA (10 мл) и смесь перемешивали при 100°C в течение 5 часов в защитной атмосфере азота. Смесь концентрировали с получением неочищенного целевого продукта, трет-бутил-(Z)-8-((диметиламино)метилен)-7-карбонил-5-азаспиро[2. 5]октан-5-карбоксилата (4,5 г), непосредственно применяемого в реакции следующей стадии.

[455] MS масса/заряд (ESI): 281,1 [M+H]⁺.

[456] Стадия 5. Получение трет-бутил-2'-гидрокси-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-7'(8'H)-карбоксилата

[457] трет-Бутил-(Z)-8-((диметиламино)метилен)-7-карбонил-5-азаспиро[2. 5]октан-5-карбоксилат (4,5 г, 19,1 ммоль) растворяли в EtOH (20 мл), к указанному добавляли мочевину (1,7 г, 28,7 ммоль) и перемешивали при 100°C в течение 15 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры, к указанному добавляли воду и трижды экстрагировали этилацетатом (20 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-2'-гидрокси-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-7'(8'H)-карбоксилата (4,6 г, выход: 69%).

[458] MS масса/заряд (ESI): 278,1 [M+H]⁺.

[459] Стадия 6. Получение трет-бутил-(S)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-7'(8'H)-карбоксилата

[460] трет-Бутил-2'-гидрокси-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-7'(8'H)-карбоксилат (1 г, 3,6 ммоль) растворяли в DMF (100 мл), к указанному добавляли (S)-(1-метилпирролидин-2-ил)метил-метансульфонат (1 г, 5,2 ммоль) и K₂CO₃ (1,5 г, 10,8 ммоль) и перемешивали в течение 15 часов при комнатной температуре. К указанному добавляли воду и смесь трижды экстрагировали этилацетатом (30 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта, очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-(S)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-7'(8'H)-карбоксилата (1,1 г, выход: 82%).

[461] MS масса/заряд (ESI): 375,1 [M+H]⁺.

[462] Стадия 7. Получение (S)-7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]

[463] трет-Бутил-(S)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-7'(8'H)-карбоксилат (1 г, 2,7 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл), к указанному добавляли трифторуксусную кислоту (2 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, затем концентрировали с получением неочищенного продукта. Остаток растворяли в толуоле (20 мл), к указанному добавляли 1-бром-8-метилнафталин (1,2 г, 5,4 ммоль), Pd₂(dba)₃ (275 мг, 0,3 ммоль), RuPhos (280 мг, 0,6 ммоль) и Cs₂CO₃ (326 мг, 1,0 ммоль) и 3 раза заполняли азотом, реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 15 часов. Смесь концентрировали с удалением толуола и экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 30 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта, очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, (S)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]///(S)-7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин] (450 мг, выход: 41%).

[464] MS масса/заряд (ESI): 415,1 [M+H]⁺.

[465] Стадия 8. Получение (S)-4'-хлор-7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидина

[466] (S)-7'-(8-Метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин] (400 мг, 0,97 ммоль) растворяли в DMF (10 мл), к указанному добавляли NCS (150 мг, 1,13 ммоль) в защитной атмосфере азота и смесь перемешивали при 80°C в течение 15 часов. К указанному добавляли воду и смесь трижды экстрагировали этилацетатом (20 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта, очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, (S)-4'-хлор-7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин] (180 мг, выход: 41%).

[467] MS масса/заряд (ESI): 449,1 [M+H]⁺.

[468] Стадия 9. Получение трет-бутил-(S)-4-(7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-4'-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[469] (S)-4'-Хлор-7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин] (180 мг, 0,40 ммоль) растворяли в DMF (10 мл); к указанному добавляли N-трет-бутоксиацилпиперазин (224 мг, 1,20 ммоль), DIPEA (155 мг, 1,20 ммоль) и смесь перемешивали при 80°C в течение 3 часов в защитной атмосфере азота. Смесь охлаждали, к указанному добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом (3 * 20 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта, очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-(S)-4-(7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-4'-ил)пиперазин-1-карбоксилата (120 мг, выход: 50%).

[470] MS масса/заряд (ESI): 599,1 [M+H]⁺.

[471] Стадия 10. Получение (S)-7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-4'-(пиперазин-1-ил)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]

[472] трет-Бутил-(S)-4-(7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-4'-ил)пиперазин-1-карбоксилат (110 мг, 0,18 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), к указанному добавляли TFA (0,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь доводили до нейтральности с помощью насыщенного водного раствора NaHCO₃ и трижды экстрагировали дихлорметаном (3 * 20 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением целевого продукта, (S)-7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-4'-(пиперазин-1-ил)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин] (130 мг, неочищенный продукт).

[473] MS масса/заряд (ESI): 499,1 [M+H]⁺.

[474] Стадия 11. Получение (S)-1-(4-(7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-4'-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она

[475] (S)-7'-(8-Метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-4'-(пиперазин-1-ил)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин] (130 мг, 0,18 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), к указанному добавляли DIPEA (71 мг, 0,55 ммоль), затем добавляли по каплям акрилоилхлорид (20 мг, 0,22 ммоль) при комнатной температуре и после добавления перемешивание продолжали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водой и трижды экстрагировали дихлорметаном (10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью препаративной HPLC с получением целевого продукта, (S)-1-(4-(7'-(8-метилнафталин-1-ил)-2'-((1-метилпирролидин-2-ил)метокси)-7',8'-дигидро-6'H-спиро[циклопропан-1,5'-пиридо[3,4-d]пиримидин]-4'-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (32 мг, выход: 32%).

[476] MS масса/заряд (ESI): 553,1 [M+H]⁺.

[477] Синтез вариантов осуществления 32-35 проводили согласно варианту осуществления 31.

[478] Вариант осуществления 36

[479] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-она

[480] Стадия 1. Получение 7-бензил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,4-диола

[481] Этил-1-бензил-3-карбонилпиперидин-4-карбоксилат (10 г, 38,3 ммоль) растворяли в EtOH (100 мл), к указанному добавляли мочевину (3,4 г, 57,5 ммоль) и смесь перемешивали при 100°C в течение 15 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры, к указанному добавляли воду и трижды экстрагировали этилацетатом (20 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, 7-бензил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,4-диола (8,7 г, выход: 89%).

[482] MS масса/заряд (ESI): 258,1 [M+H]⁺.

[483] Стадия 2. Получение 7-бензил-4-хлор-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-ола

[484] 7-Бензил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2,4-диол (8 г, 31,1 ммоль) растворяли в 100 мл диоксана, смесь нагревали до 100°C, добавляли по каплям раствор (20 мл) реагента Лавессона в диоксане (6,3 г, 15,5 ммоль), и после добавления осуществляли реакцию в течение 1 часа; затем температуру уменьшали до комнатной температуры, и смесь концентрировали с удалением растворителя, твердое вещество промывали небольшим количеством уксусной кислоты, затем промывали водой и высушивали, к неочищенному продукту добавляли SOCl₂ (50 мл) на бане с ледяной водой, постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 10 часов, затем концентрировали с удалением избыточного SOCl₂ с получением неочищенного целевого продукта, 7-бензил-4-хлор-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-ола (7,5 г, неочищенный продукт), который применяли непосредственно в следующей реакции.

[485] MS масса/заряд (ESI): 276,1 [M+H]⁺, 278,1 [M+2+H]⁺.

[486] Стадия 3. Получение трет-бутил-(2R,5S)-4-(7-бензил-2-гидрокси-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата

[487] 7-Бензил-4-хлор-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-ол (7,5 г, неочищенный продукт) растворяли в DMF (50 мл); добавляли трет-бутил-(2R,5S)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (8,7 г, 40,8 ммоль) и DIPEA (10,5 г, 81,6 ммоль), затем смесь перемешивали при 80°C в течение 3 часов в защитной атмосфере азота. Смесь охлаждали, к указанному добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом (3 * 50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-(2R,5S)-4-(7-бензил-2-гидрокси-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата (5,3 г, выход за две стадии: 38%).

[488] MS масса/заряд (ESI): 454,1 [M+H]⁺.

[489] Стадия 4. Получение трет-бутил-(2R,5S)-4-(7-бензил-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата

[490] трет-Бутил-(2R,5S)-4-(7-бензил-2-гидрокси-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (1 г, 2,2 ммоль) растворяли в дихлорметане (50 мл); добавляли (4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)борную кислоту (806 мг, 4,4 ммоль), ацетат меди (72 мг, 0,4 ммоль), пиридин (348 мг, 4,4 ммоль) и молекулярное сито, смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в открытом состоянии. Смесь промывали насыщенным водным раствором Na₂CO₃ и водой, органическую фазу высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH =10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-(2R,5S)-4-(7-бензил-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата (650 мг, выход: 50%).

[491] MS масса/заряд (ESI): 591,1 [M+H]⁺.

[492] Стадия 5. Получение трет-бутил-(2R,5S)-4-(1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата

[493] трет-Бутил-(2R,5S)-4-(7-бензил-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (600 мг, 1,0 ммоль) растворяли в EtOH (20 мл), добавляли Pd(OH)₂/C (60 мг), смесь заполняли водородом 3 раза и перемешивали в течение 15 часов при комнатной температуре под действием баллона с водородом. Смесь фильтровали, промывали этанолом и концентрировали с получением целевого продукта, трет-бутил-(2R,5S)-4-(1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата (420 мг, выход: 83%).

[494] MS масса/заряд (ESI): 501,1 [M+H]⁺.

[495] Стадия 6. Получение трет-бутил-(2R,5S)-4-(1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата

[496] трет-Бутил-(2R,5S)-4-(1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (400 мг, 0,8 ммоль) растворяли в толуоле (20 мл), и к указанному добавляли 2-бром-1-фтор-3-метоксибензол (326 мг, 1,6 ммоль), Pd₂(dba)₃ (92 мг, 0,1 ммоль), RuPhos (93 мг, 0,2 ммоль) и Cs₂CO₃ (105 мг, 3,2 ммоль), смесь заполняли азотом 3 раза, и реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 15 часов. Смесь концентрировали с удалением толуола и экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 30 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH =10:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-(2R,5S)-4-(1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата (270 мг, выход: 54%).

[497] MS масса/заряд (ESI): 625,1 [M+H]⁺.

[498] Стадия 7. Получение 4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-она

[499] трет-Бутил-(2R,5S)-4-(1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-2-карбонил-1,2,5,6,7,8-гексагидропиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (250 мг, 0,4 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), к указанному добавляли трифторуксусную кислоту (0,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, затем концентрировали с получением неочищенного целевого продукта, 4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-она (320 мг, неочищенный продукт).

[500] MS масса/заряд (ESI): 525,1 [M+H]⁺.

[501] Стадия 8. Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-она

[502] 4-((2S,5R)-2,5-Диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-он (320 мг, 0,4 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли DIPEA (155 мг, 1,2 ммоль), добавляли по каплям акрилоилхлорид (45 мг, 0,5 ммоль) при комнатной температуре и после добавления перемешивание продолжали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водой и трижды экстрагировали дихлорметаном (10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10:1) с получением целевого продукта, 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-она (170 мг, выход: 74%).

[503] MS масса/заряд (ESI): 579,1 [M+H]⁺.

[504] Стадия 9. Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-она

[505] 4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-он (150 мг, 0,26 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл) и смесь охлаждали до -40°C, добавляли по каплям BBr₃ (650 мг, 2,60 ммоль), затем температуру смеси доводили до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 часа. Смесь гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ и экстрагировали дихлорметаном (3 * 20 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью препаративный HPLC с получением целевого продукта, 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-2-изопропилпиридин-3-ил)-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]пиримидин-2-(1H)-она (52 мг, выход: 36%).

[506] MS масса/заряд (ESI): 565,1 [M+H]⁺.

[507] Синтез вариантов осуществления 37-50 проводили согласно варианту осуществления 36.

[508] Вариант осуществления 51

[509] Получение 6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(4-(3-метил-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[510] Стадия 1. Получение трет-бутил-4-(4-хлорбутанамидо)пиперидин-1-карбоксилата

[511] трет-Бутил-4-аминопиперидин-1-карбоксилат (5 г, 24,9 ммоль) и 4-хлорбутирилхлорид (4,2 г, 29,8 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл), к указанному добавляли DIPEA (6,5 г, 49,8 ммоль) в условиях ледяной бани и смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. К указанному добавляли воду и смесь трижды экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (петролейный эфир/EtOAc = 4:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-4-(4-хлорбутанамидо)пиперидин-1-карбоксилата (7,2 г, выход: 94%).

[512] MS масса/заряд (ESI): 305,2 [M+H]⁺.

[513] Стадия 2. Получение трет-бутил-4-(2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата

[514] трет-Бутил-4-(4-хлорбутанамидо)пиперидин-1-карбоксилат (1,0 г, 3,3 ммоль) растворяли в THF (10 мл), добавляли NaH (0,26 г, 6,6 ммоль) на ледяной бане, температуру повышали до температуры образования флегмы и перемешивали в течение 16 часов, смесь трижды экстрагировали водой и этилацетатом (50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (петролейный эфир/EtOAc = 2:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-4-(2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,85 г, выход: 94%).

[515] MS масса/заряд (ESI): 269,1 [M+H]⁺.

[516] Стадия 3. Получение трет-бутил-4-(3-(этоксикарбонил)-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата

[517] трет-Бутил-4-(2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-2-1-карбоксилат (0,5 г, 1,86 ммоль) растворяли в безводном THF (10 мл) и смесь охлаждали до -78°C в защитной атмосфере азота, затем добавляли LiHMDS (3,8 мл, 3,72 ммоль) и смесь перемешивали в течение 1 часа. К указанному добавляли диэтилкарбонат (0,44 г, 3,72 ммоль) и смесь перемешивали при -78°C в течение 1 часа, затем постепенно доводили до комнатной температуры. Перемешивание продолжали в течение 2 часов. Затем реакционную смесь гасили водой, затем трижды экстрагировали этилацетатом (3 * 10 мл) и водой. Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного продукта, трет-бутил-4-(3-(этоксикарбонил)-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,6 г, неочищенный продукт).

[518] Стадия 4. Получение 1-(1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил)-2-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты

[519] трет-Бутил-4-(3-(этоксикарбонил)-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат (0,6 г, неочищенный продукт) растворяли в MeOH/H₂O (1:1, 20 мл) и добавляли гидроксид лития (89 мг, 2,1 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Значение pH смеси регулировали до 5,0-6,0 путем добавления 20% водного раствора уксусной кислоты. Реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном (3 * 15 мл) и водой. Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного целевого продукта, 1-(1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил)-2-оксопирролидин-3-карбоновой кислоты (0,52 г, выход: 79%).

[520] MS масса/заряд (ESI): 311,1 [M+H]⁺.

[521] Стадия 5. Получение трет-бутил-4-(3-метилен-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата

[522] 1-(1-(трет-Бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил)-2-оксопирролидин-3-карбоновую кислоту (0,5 г, неочищенный продукт), параформальдегид (72 мг, 2,4 ммоль) растворяли в этилацетате (10 мл), в реакционную смесь добавляли диэтиламин (0,14 г, 1,9 ммоль) в условиях ледяной бани, и затем реакционную смесь перемещали в обратный холодильник при нагревании и перемешивали в течение 3 часов. Смесь охлаждали, к указанному добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом (3 * 10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (петролейный эфир/EtOAc = 2:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-4-(3-метилен-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,36 г, выход: 80%).

[523] MS масса/заряд (ESI): 281,1 [M+H]⁺.

[524] Стадия 6. Получение гидрохлорида 3-метилен-1-(пиперидин-4-ил)пирролидин-2-она

[525] трет-Бутил-4-(3-метилен-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-карбоновую кислоту (100 мг, 0,35 ммоль) растворяли в 2 М HCl/EtOH (5 мл), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, концентрировали с удалением растворителя с получением неочищенного продукта, гидрохлорида 3-метилен-1-(пиперидин-4-ил)пирролидин-2-она (80 мг, неочищенный продукт).

[526] MS масса/заряд (ESI): 181,1 [M+H]⁺.

[527] Стадия 7. Получение 7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(4-(3-метил-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[528] N,N-Диизопропилэтиламин (0,14 г, 1,11 ммоль) добавляли в раствор 7-хлор-6-фтор-4-гидрокси-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[4,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (130 мг, 0,37 ммоль) в ацетонитриле (10 мл), затем к указанному добавляли оксихлорид фосфора (167 мг, 1,11 ммоль) и смесь перемешивали при 80°C в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры. N,N-Диизопропилэтиламин (0,14 г, 1,11 ммоль) добавляли в реакционную смесь и перемешивали в течение 5 минут после добавления, добавляли гидрохлорид 3-метилен-1-(пиперидин 4-ил)пирролидин-2-она (80 мг, неочищенный продукт) и перемешивали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водным раствором хлорида аммония (10 мл), экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3), органическую фазу промывали водным раствором хлорида натрия (10 мл) и выпаривали до сухого состояния, затем очищали с помощью препаративной хроматографии [элюент: дихлорметан:метанол = 20: 1] с получением бледно-желтого твердого продукта, 7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(4-(3-метил-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (52 мг, выход: 27%).

[529] MS масса/заряд (ESI): 511,2 [M+H]⁺.

[530] Стадия 7. Получение 6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(4-(3-метил-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[531] 7-Хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(4-(3-метил-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (52 мг, 0,10 ммоль), (2-фтор-6-гидроксифенил)борную кислоту (34 мг, 0,2 ммоль), комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-дихлорпалладия(II) и дихлорметана (9 мг, 0,01 ммоль) и карбонат цезия (97 мг, 0,3 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) и воде (1 мл) и смесь перемешивали при 100°C под микроволновым излучением в течение 1 часа. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и очищали с помощью препаративной HPLC с получением желтого твердого продукта, 6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(4-(3-метил-2-оксопирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (15 мг, выход: 25%).

[532] MS масса/заряд (ESI): 589,3 [M+H]⁺.

[533] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 9,39 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,96 (d, J = 9,0 Гц, 1H), 7,30 (s, 2H), 6,82 - 6,57 (m, 2H), 6,04 (s, 1H), 5,39 (s, 1H), 4,75 (s, 2H), 4,50 (s, 1H), 3,45 (s, 4H), 2,83 (s, 2H), 2,06 (d, J = 29,5 Гц, 7H), 1,29 (s, 3H), 1,12 (s, 3H).

[534] Синтез вариантов осуществления 52 и 58-74 проводили согласно варианту осуществления 51.

[535] Вариант осуществления 60

[536] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он

[537] Стадия 1. Получение 4-хлор-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-3-амина

[538] 2,4-Дихлорпиридин-3-амин (4,5 г, 27,78 ммоль), 4,4,5,5-триметил-2-(проп-1-ен-2-ил)-1,3,2-диоксаборолан (5,13 г, 30,56 ммоль), карбонат калия (11,5 г, 83,34 ммоль), Pd(PPh₃)₄ добавляли в диоксан (120 мл), и реакционную смесь смешивали до однородности и перемешивали в течение ночи в условиях масляной бани при 100°C. Смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью экспрессной колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого соединения, 4-хлор-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-3-амина, в виде бесцветной маслянистой жидкости (4,5 г, выход: 96%).

[539] MS масса/заряд (ESI): 169,1 [M+H]⁺.

[540] Стадия 2. Получение 4-(метилтио)-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-3-амина

[541] 4-Хлор-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-3-амин (2 г, 11,9 ммоль) и тиометоксид натрия (10 мл, 20% водный раствор) добавляли в диоксан (3 мл), реакционную смесь смешивали до однородности, реакционную смесь вводили в реакцию при 100°C в течение 2 дней, охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении, неочищенный продукт отделяли и очищали с помощью экспрессной колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения, 4-(метилтио)-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-3-амина, в виде бледно-желтой жидкости (1,7 г, выход: 79%).

[542] MS масса/заряд (ESI): 181,2 [M+H]⁺.

[543] Стадия 3. Получение 2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-амина

[544] Метанол (50 мл) добавляли к 4-(метилтио)-2-(проп-1-ен-2-ил)пиридин-3-амину (2 г, 11,11 ммоль) и Pd/C (4 г), реакционную смесь смешивали до однородности, и затем реакцию осуществляли в течение ночи при комнатной температуре, и смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате неочищенный продукт добавляли в смешанный раствор метанола (5 мл), N, N-диизопропилэтиламина (0,5 мл) и акрилонитрила (1 мл) и реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью экспрессной колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения, 2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-амина, в виде бесцветной жидкости (500 мг, выход: 25%).

[545] MS масса/заряд (ESI): 183,2 [M+H]⁺.

[546] Стадия 4. Получение 2,6-дихлор-5-фтор-N-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамида

[547] THF (10 мл) добавляли к 2,6-дихлор-5-фторникотинамиду (500 мг, 2,44 ммоль) и оксалилхлориду (1,32 мл, 2,54 ммоль), и реакционную смесь смешивали до однородности, и реакцию осуществляли при 60°C в течение 3 часов, температуру реакции понижали до комнатной температуры, и добавляли триэтиламин (680 мг, 6,6 ммоль) и 2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-амин (400 мг, 2,2 ммоль), и реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа, неочищенный продукт очищали с помощью экспрессной колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения, 2,6-дихлор-5-фтор-N-((2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамида, в виде белого твердого вещества (800 мг, выход: 87%).

[548] MS масса/заряд (ESI): 417,1 [M+H]⁺.

[549] Стадия 5. Получение 7-хлор-6-фтор-4-гидрокси-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[550] 2,6-Дихлор-5-фтор-N-((2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамид (800 мг, 1,92 ммоль) добавляли в THF (20 мл), и реакционную смесь смешивали до однородности, добавляли медленно KHMDS (4,8 мл, 4,8 ммоль) при 0°C, и реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа, неочищенный продукт концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью экспрессной колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения, 7-хлор-6-фтор-4-гидрокси-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она, в виде белого твердого вещества (600 мг, выход: 82%).

[551] MS масса/заряд (ESI): 381,1 [M+H]⁺.

[552] Стадия 6. Получение трет-бутил-(S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата

[553] 7-Хлор-6-фтор-4-гидрокси-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (300 мг, 0,79 ммоль), оксихлорид фосфора (600 мг, 3,95 ммоль), DIPEA (1 г, 7,9 ммоль) добавляли в THF (40 мл), реакционную смесь смешивали до однородности, и реакцию осуществляли при 80°C в течение 1 часа, температуру реакции понижали до комнатной температуры, и в реакционный раствор медленно добавляли трет-бутил-(S)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат (240 мг, 1,19 ммоль), затем реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа, смесь концентрировали при пониженном давлении, и неочищенный продукт отделяли и очищали с помощью экспрессной колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-(S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата в виде белого твердого вещества (400 мг, выход: 90%).

[554] MS масса/заряд (ESI): 563,1 [M+H]⁺.

[555] Стадия 7. Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[556] трет-Бутил-(S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат (400 мг, 0,71 ммоль), TFA (2 мл) добавляли к CH₂Cl₂ (30 мл), реакционную смесь смешивали до однородности, и реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа, затем смесь концентрировали при пониженном давлении, CH₂Cl₂ (20 мл) и DIPEA (0,3 мл) добавляли к неочищенному продукту, температуру реакции понижали до 0°C, к указанному медленно добавляли акрилоилхлорид (0,1 мл), и реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа, затем смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате неочищенный продукт отделяли и очищали с помощью экспрессной колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения, (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она, в виде желтого твердого вещества (200 мг, выход: 55%).

[557] MS масса/заряд (ESI): 517,1 [M+H]⁺.

[558] Стадия 8. Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[559] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (50 мг, 0,1 ммоль), (2-фтор-6-гидроксифенил)борную кислоту (30 мг, 0,2 ммоль), Pd(dppf)Cl₂ (16 мг, 0,02 ммоль) и карбонат цезия (100 мг, 0,3 ммоль) добавляли в диоксан (1,5 мл), реакционную смесь смешивали до однородности, и затем реакцию осуществляли при 100°C под микроволновым излучением в течение 1 часа, затем смесь концентрировали при пониженном давлении, CH₂Cl₂ (20 мл) и DIPEA (0,3 мл) добавляли к неочищенному продукту, и температуру реакции понижали до 0°C, к указанному медленно добавляли акрилоилхлорид (0,1 мл), и реакцию осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа, затем смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате неочищенный продукт отделяли и очищали с помощью препаративной HPLC с получением соединения, 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она, в виде белого твердого вещества (14 мг, выход: 24%).

[560] MS масса/заряд (ESI): 593,1 [M+H]⁺.

[561] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,40 (d, J=5,6 Гц, 1H), 8,22-8,27 (m, 1 H), 7,21-7,27 (m, 2H), 6,79-6,88 (m, 1H), 6,58-6,66 (m, 2H), 6,28-6,34 (m, 1H), 5,84(d, J=12,0 Гц, 1H), 5,06 (s, 1 H), 4,43-4,59 (m, 2H), 4,07-4,23 (s, 1H), 3,57-3,85 (m, 2 H), 3,20-3,48 (m, 1H), 2,79-2,85 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 1,47 (d, J=4,8 Гц, 3H), 1,20 (d, J=6,4 Гц, 3H), 1,06 (d, J=6,8 Гц, 3H).

[562] Вариант осуществления 60-1 и вариант осуществления 60-2

[563] (M/P-4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он)

[564] Вариант осуществления 60 разделяли с помощью SFC с получением двух аксиальных хиральных изомеров, варианта осуществления 60-1 и варианта осуществления 60-2, SFC: условия хирального получения:

[565] Таблица 13

Прибор SFC-150 (Thar, Waters) Тип колонки IC 20 * 250 мм, 10 мкм (Daicel) Давление в колонке 100 бар Подвижная фаза CO₂/метанол (0,2% метаноловый аммиак) = 50/50 Расход 120 г/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 35°C

[566] Условия хирального анализа:

[567] Таблица 14

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4,6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0,2% NH3 (7 М в метаноле)]; A:B = 60:40 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[568] Вариант осуществления 60-1:

[569] t_R=1,92 мин.

[570] MS масса/заряд (ESI): 593,1 [M+H]⁺.

[571] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,40 (d, J=5,6 Гц, 1H), 8,22-8,27 (m, 1 H), 7,21-7,27 (m, 2H), 6,79-6,88 (m, 1H), 6,58-6,66 (m, 2H), 6,28-6,34 (m, 1H), 5,84(d, J=12,0 Гц, 1H), 5,06 (s, 1 H), 4,43-4,59 (m, 2H), 4,07-4,23 (s, 1H), 3,57-3,85 (m, 2 H), 3,20-3,48 (m, 1H), 2,79-2,85 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 1,47 (d, J=4,8 Гц, 3H), 1,20 (d, J=6,4 Гц, 3H), 1,06 (d, J=6,8 Гц, 3H).

[572] Вариант осуществления 60-2:

[573] t_R=2,43 мин.

[574] MS масса/заряд (ESI): 593,1 [M+H]⁺.

[575] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,40 (d, J=5,6 Гц, 1H), 8,25 (t, J=10,8 Гц, 1H), 7,21-7,27 (m, 2H), 6,79-6,90 (m, 1H), 6,58-6,66 (m, 2H), 6,28-6,34 (m, 1H), 5,83 (dd, J=10,8 Гц, 2,0 Гц, 1H), 5,05-5,10 (m, 1H), 4,41-4,57 (m, 2H), 4,07-4,21 (m, 1H), 3,61-3,87 (m, 2H), 3,24-3,36 (m, 1H), 2,77-2,83 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 1,46-1,49 (m, 3H), 1,19 (d, J=6,8 Гц, 3H), 1,06 (d, J=6,8 Гц, 3H).

[576] Синтез вариантов осуществления 70, 81-84, 114-117, 130-134 и 139-141 проводили согласно варианту осуществления 60.

[577] Вариант осуществления 75

[578] Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[579] Стадия 1. Получение (2-фтор-6-(метилтио)фенил)борной кислоты

[580] Диизопропиламин лития (5,3 мл, 10,6 ммоль) добавляли по каплям в раствор (3-фторфенил)(метил)сульфана (500 мг, 3,52 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) при -78°C, после добавления сухую ледяную баню удаляли, и температуру медленно повышали до комнатной температуры, и перемешивали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили хлористоводородной кислотой (2 н., 20 ммоль) и перемешивали в течение еще 30 минут. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (40 мл x 3), органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл), концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: петролейный эфир - этилацетат/петролейный эфир, от 0% до 30%] с получением (2-фтор-6-(метилтио)фенил)борной кислоты (73 мг, выход: 11%) в виде белого твердого вещества.

[581] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,43 - 7,33 (m, 1H), 7,24 (d, J = 8 Гц, 1H), 7,01 - 6,93 (m, 1H), 6,08 (br, 2H), 2,51 (s, 3H).

[582] Стадия 2. Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[583] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (50 мг, 0,103 ммоль), (2-фтор-6-(метилтио)фенил)борную кислоту (55 мг, 0,296 ммоль), комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-дихлорпалладия(II) и дихлорметана (17 мг, 0,0206 ммоль) и карбонат цезия (100 мг, 0,309 ммоль) растворяли в диоксане (2,5 мл) и воде (3 капли) и смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью препаративной хроматографии [элюент: дихлорметан/метанол = 12/1] с получением 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (25 мг, выход: 41%) в виде желтого твердого вещества.

[584] MS масса/заряд (ESI): 591,2 [M+H].

[585] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,42 - 8,24 (m, 2H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,27 - 7,16 (m, 2H), 6,97 (t, J = 12 Гц, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,31 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,83 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,22 - 5,00 (m, 1H), 4,65 - 4,37 (m, 2H), 4,28 - 4,02 (m, 1H), 3,99 - 3,54 (m, 2H), 3,49 - 3,35 (m, 1H), 2,94 - 2,70 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,60 - 1,41 (m, 3H), 1,18 (d, J = 8 Гц, 3H), 1,00 (s, 3H).

[586] Вариант осуществления 75-1 и вариант осуществления 75-2

[587] (M/P-4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он)

[588] Вариант осуществления 75 разделяли с помощью SFC с получением двух аксиальных хиральных изомеров, варианта осуществления 75-1 и варианта осуществления 75-2, SFC: условия хирального получения:

[589] Таблица 15

Прибор SFC-150 (Thar, Waters) Тип колонки IC 20 * 250 мм, 10 мкм (Daicel) Давление в колонке 100 бар Подвижная фаза CO₂/метанол (0,2% метаноловый аммиак) = 45/55 Расход 110 г/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 35°C

[590] Условия хирального анализа:

[591] Таблица 16

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4,6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0,2% NH3 (7 М в метаноле)]; A:B = 60:40 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[592] Вариант осуществления 75-1:

[593] t_R=1,97 мин.

[594] MS масса/заряд (ESI): 591,2 [M+H]⁺.

[595] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,42 - 8,24 (m, 2H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,27 - 7,16 (m, 2H), 6,97 (t, J = 12 Гц, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,31 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,83 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,22 - 5,00 (m, 1H), 4,65 - 4,37 (m, 2H), 4,28 - 4,02 (m, 1H), 3,99 - 3,54 (m, 2H), 3,49 - 3,35 (m, 1H), 2,94 - 2,70 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,60 - 1,41 (m, 3H), 1,18 (d, J = 8 Гц, 3H), 1,00 (s, 3H).

[596] Вариант осуществления 75-2:

[597] t_R=3,75 мин.

[598] MS масса/заряд (ESI): 591,2 [M+H]⁺.

[599] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,40 - 8,23 (m, 2H), 7,48 - 7,38 (m, 1H), 7,25 - 7,16 (m, 2H), 6,96 (t, J = 12 Гц, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,31 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,82 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,20 - 5,00 (m, 1H), 4,64 - 4,36 (m, 2H), 4,28 - 4,02 (m, 1H), 3,99 - 3,54 (m, 2H), 3,48 - 3,34 (m, 1H), 2,93 - 2,70 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,58 - 1,40 (m, 3H), 1,18 (d, J = 8 Гц, 3H), 1,00 (s, 3H).

[600] Вариант осуществления 77

[601] Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилсульфонил-6-фтор)фенил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[602] MS масса/заряд (ESI): 623,1 [M+H]⁺.

[603] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,37 (d, J = 4 Гц, 2H), 7,92 (d, J = 4 Гц, 1H), 7,86 - 7,73 (m, 1H), 7,62 (t, J = 8 Гц, 1H), 7,27 - 7,15 (m, 1H), 6,95 - 6,74 (m, 1H), 6,39 - 6,23 (m, 1H), 5,89 - 5,79 (m, 1H), 5,32 - 5,00 (m, 1H), 4,66 - 4,31 (m, 2H), 4,28 - 4,03 (m, 1H), 3,97 - 3,51 (m, 2H), 3,48 - 3,34 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,60 - 1,37 (m, 3H), 1,17 - 1,09 (m, 3H), 0,92 (d, J = 8 Гц, 3H).

[604] Вариант осуществления 85

[605] Получение 4-(4-акрилоил-2-винилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[606] Стадия 1. Получение трет-бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-(гидроксиметил)пиперазин-1-карбоксилата

[607] N,N-диизопропилэтиламин (1,63 г, 12,9 ммоль) добавляли в раствор 7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4(1H,3H)-диона (1,5 г, 4,3 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) при комнатной температуре, и затем к указанному добавляли оксихлорид фосфора (1,94 г, 12,9 ммоль) и смесь перемешивали при 80°C в течение 1 часа. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры. N,N-Диизопропилэтиламин (1,63 г, 12,9 ммоль) добавляли в реакционную смесь и перемешивали в течение 5 минут, затем к указанному добавляли трет-бутил-3-(гидроксиметил)пиперазин-1-карбоксилат (2,8 г, 12,9 ммоль) и перемешивали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водным раствором хлорида аммония (10 мл), экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3), промывали водным раствором хлорида натрия (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂: MeOH = 10: 1) с получением трет-бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-(гидроксиметил)пиперазин-1-карбоксилата (1,9 г, выход: 81%).

[608] MS масса/заряд (ESI): 547,1 [M+H]⁺, 549,1 [M+H+2]⁺.

[609] Стадия 2. Получение трет-бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-формилпиперазин-1-карбоксилата

[610] трет-Бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-(гидроксиметил)пиперазин-1-карбоксилат (1,8 г, 3,3 ммоль) растворяли в дихлорметане (100 мл), к указанному партиями добавляли окислитель Десса-Мартина DMP (1,7 г, 4,0 ммоль) при комнатной температуре, и перемешивали в течение 3 часов, затем смесь фильтровали через целит, фильтрат промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (30 мл), и затем промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта, и очищали с помощью колоночной хроматографии (петролейный эфир/EtOAc = 5:1-1:1) с получением целевого продукта, трет-бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-формилпиперазин-1-карбоксилата (1,2 г, выход: 67%).

[611] MS масса/заряд (ESI): 545,1 [M+H]⁺, 547,1 [M+H+2]⁺.

[612] Стадия 3. Получение трет-бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-винилпиперазин-1-карбоксилата

[613] Бромид метилтрифенилфосфония (295 мг, 0,83 ммоль) растворяли в безводном THF (20 мл), охлажденном до -78°C в защитной атмосфере азота, к указанному добавляли n-BuLi (3 мл, 0,75 ммоль, 2,5 М в гексане) и перемешивали в течение 10 минут, затем температуру повышали до комнатной температуры и смесь перемешивали в течение 1 часа. Затем смесь охлаждали до -78°C, к указанному добавляли по каплям трет-бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-формилпиперазин-1-карбоксилат (300 мг, 0,55 ммоль) и перемешивали в течение 1 часа. Температуру постепенно повышали до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 2 часов. Затем реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония, затем трижды экстрагировали этилацетатом (3 * 10 мл) и водой. Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (петролейный эфир/EtOAc = 5: 1-1: 1) с получением трет-бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-винилпиперазин-1-карбоксилата (160 мг, выход: 54%).

[614] MS масса/заряд (ESI): 543,1 [M+H]⁺, 545,1 [M+H+2]⁺.

[615] Стадия 4. Получение 7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(2-винилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[616] трет-Бутил-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-винилпиперазин-1-карбоксилат (150 мг, 0, 28 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), к указанному добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, затем смесь концентрировали с получением неочищенного целевого продукта, 7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(2-винилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (220 мг, неочищенное вещество).

[617] MS масса/заряд (ESI): 443,1 [M+H]⁺, 445,1 [M+H+2]⁺.

[618] Стадия 5. Получение 4-(4-акрилоил-2-винилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[619] 7-Хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(2-винилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (220 мг, 0,28 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли DIPEA (108 мг, 0,84 ммоль), затем к указанному добавляли по каплям акрилоилхлорид (30 мг, 0,34 ммоль) при комнатной температуре и перемешивание продолжали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водой и трижды экстрагировали дихлорметаном (10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 10: 1) с получением целевого продукта, 4-(4-акрилоил-2-винилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (75 мг, общий выход за две стадии: 54%).

[620] MS масса/заряд (ESI): 497,1 [M+H]⁺, 499,1 [M+H+2]⁺.

[621] Стадия 6. Получение 4-(4-акрилоил-2-винилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[622] 4-(4-Акрилоил-2-винилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (50 мг, 0,10 ммоль), (2-фтор-6-гидроксифенил)борную кислоту (34 мг, 0,2 ммоль), комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-дихлорпалладия(II) и дихлорметана (9 мг, 0,01 ммоль) и карбонат цезия (97 мг, 0,3 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) и воде (1 мл) и смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью препаративной HPLC с получением продукта, 4-(4-акрилоил-2-винилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (8 мг, выход: 14%).

[623] MS масса/заряд (ESI): 573,1 [M+H]⁺.

[624] Синтез вариантов осуществления 76-80, 85-113 и 118-129 проводили согласно варианту осуществления 75.

[625] Вариант осуществления 114

[626] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[627] Стадия 1. Получение 4,7-дихлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[628] N,N-Диизопропилэтиламин (407 мг, 3,16 ммоль) добавляли в раствор 7-хлор-6-фтор-4-гидрокси-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (200 мг, 0,526 ммоль) в ацетонитриле (10 мл), к указанному добавляли оксихлорид фосфора (242 мг, 1,58 ммоль) и смесь перемешивали при 80°C в течение 1 часа при комнатной температуре. Смесь охлаждали до комнатной температуры и применяли непосредственно для следующей реакции.

[629] Стадия 2. Получение трет-бутил-(2R,5S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата

[630] N,N-диизопропилэтиламин (678 мг, 5,26 ммоль) и трет-бутил-(2R,5S)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (224 мг, 1,005 ммоль) добавляли в реакционную смесь из предыдущей стадии и после добавления перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. К указанному добавляли воду (60 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (40 мл x 3), органическую фазу промывали водным раствором хлорида аммония (40 мл), и затем промывали водным раствором хлорида натрия (30 мл), концентрировали, и затем очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: дихлорметан-метанол/дихлорметан, от 0% до 2,2%] с получением трет-бутил-(2R,5S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата (200 мг, выход за две стадии: 66%) в виде желтого твердого вещества.

[631] MS масса/заряд (ESI): 577,2 [M+H]⁺, 579,2 [M+2+H]⁺.

[632] Стадия 3. Получение трифторацетата 7-хлор-4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[633] Трифторуксусную кислоту (1,2 мл) добавляли в раствор трет-бутил-(2R,5S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата (200 мг, 0,347 ммоль) в дихлорметане (6 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часа. Затем смесь концентрировали при низкой температуре с получением трифторацетата 7-хлор-4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (200 мг) в виде красного масла, который быстро применяли в следующей реакции.

[634] MS масса/заряд (ESI): 477,2 [M+H]⁺, 479,2 [M+H+2]⁺.

[635] Стадия 4. Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[363] N,N-Диизопропилэтиламин (447 мг, 3,47 ммоль) добавляли в раствор трифторацетата 7-хлор-4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (200 мг, 0,347 ммоль) в дихлорметане (15 мл), затем добавляли по каплям акрилоилхлорид (63 мг, 0,694 ммоль) при 0°C и после добавления смесь перемешивали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водным раствором хлорида аммония (30 мл), экстрагировали дихлорметаном (30 мл × 3), фазу дихлорметана промывали насыщенным водным раствором NaCl (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали и затем очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: дихлорметан-метанол/дихлорметан, от 0% до 2,5%] с получением 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (130 мг, выход за две стадии: 71%) в виде желтого твердого вещества.

[637] MS масса/заряд (ESI): 530,2 [M+H]⁺, 532,2 [M+H+2]⁺.

[638] Стадия 5. Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[639 4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (130 мг, 0,246 ммоль), (2-фтор-6-гидроксифенил)борную кислоту (77 мг, 0,491 ммоль), комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-дихлорпалладия(II) и дихлорметана (40 мг, 0,0491 ммоль) и карбонат цезия (240 мг, 0,738 ммоль) добавляли в диоксан (4 мл) и воду (1 мл), смесь заполняли азотом и перемешивали при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Реакционную смесь концентрировали, затем очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: дихлорметан-метанол/дихлорметан, от 0% до 2,5%] с получением 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (90 мг, выход: 60%) в виде желтого твердого вещества.

[640] MS масса/заряд (ESI): 606,2 [M+H]⁺.

[641] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,40 (d, J = 8 Гц, 1H), 8,29-8,18 (m, 1H), 7,30- 7,18 (m, 2H), 6,93-6,73 (m, 1H), 6,70-6,56 (m, 2H), 6,36-6,20 (m, 1H), 5,89-5,75 (m, 1H), 5,15-4,98 (m, 1H), 4,63-4,22 (m, 2H), 4,11-3,82 (m, 2H), 3,68-3,40 (m, 1H), 2,88-2,65 (m, 1H), 2,40 (d, J = 4 Гц, 3H), 1,53 - 1,43 (m, 3H), 1,36 (t, J = 8 Гц, 1H), 1,28 (t, J = 8 Гц, 2H), 1,23 - 1,16 (m, 3H), 1,10 - 1,01 (m, 3H).

[642] Вариант осуществления 114-1 и вариант осуществления 114-2

[643] (M/P-4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он)

[644] Вариант осуществления 114 разделяли с помощью SFC с получением двух аксиальных хиральных изомеров, варианта осуществления 114-1 и варианта осуществления 114-2, SFC: условия хирального получения:

[645] Таблица 17

Прибор SFC-150 (Thar, Waters) Тип колонки IC 20 * 250 мм, 10 мкм (Daicel) Давление в колонке 100 бар Подвижная фаза CO₂/метанол (0,2% метаноловый аммиак) = 60/40 Расход 100 г/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 35°C

[646] Условия хирального анализа:

[647] Таблица 18

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки Celluloe-SC 4,6 × 100 мм, 5 мкм (YMC) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: этанол [1,0% NH3 (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[648] Вариант осуществления 114-1:

[649] t_R=1,99 мин.

[650] MS масса/заряд (ESI): 606,2 [M+H]⁺.

[651] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,40 (d, J = 8 Гц, 1H), 8,29-8,18 (m, 1H), 7,30- 7,18 (m, 2H), 6,93-6,73 (m, 1H), 6,70-6,56 (m, 2H), 6,36-6,20 (m, 1H), 5,89-5,75 (m, 1H), 5,15-4,98 (m, 1H), 4,63-4,22 (m, 2H), 4,11-3,82 (m, 2H), 3,68-3,40 (m, 1H), 2,88-2,65 (m, 1H), 2,40 (d, J = 4 Гц, 3H), 1,53 - 1,43 (m, 3H), 1,36 (t, J = 8 Гц, 1H), 1,28 (t, J = 8 Гц, 2H), 1,23 - 1,16 (m, 3H), 1,10 - 1,01 (m, 3H).

[652] Вариант осуществления 114-2:

[653] t_R=2,87 мин.

[654] MS масса/заряд (ESI): 606,2 [M+H]⁺.

[655] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,40 (d, J = 8 Гц, 1H), 8,27-8,18 (m, 1H), 7,30 - 7,19 (m, 2H), 6,94 - 6,74 (m, 1H), 6,70 - 6,56 (m, 2H), 6,36 - 6,20 (d, J = 16 Гц, 1H), 5,90 - 5,75 (m, 1H), 5,14 - 4,98 (m, 1H), 4,63 - 4,22 (m, 2H), 4,12 - 3,82 (m, 2H), 3,68 - 3,41 (m, 1H), 2,87 - 2,65 (m, 1H), 2,40 (d, J = 4 Гц, 3H), 1,53 - 1,42 (m, 3H), 1,36 (t, J = 8 Гц, 1H), 1,28 (t, J = 8 Гц, 2H), 1,23 - 1,16 (d, J = 4 Гц, 3H), 1,10 - 1,01 (d, J = 4 Гц, 3H).

[656] Вариант осуществления 115

[657] Получение 4-((3S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-3-(1H)-она

[658] 4-((3S,5R)-4-Акрилоил-3,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 114.

[659] MS масса/заряд (ESI): 607,1 [M+H]⁺.

[660] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,39-8,34 (m, 2H), 7,25 - 7,20 (m, 2H), 6,86-6,80 (m, 1H), 6,67-6,58 (m, 2H), 6,32- 6,27 (dd, J = 16,6, 4,0 Гц, 1H), 5,83-5,79 (dd, J = 12,0, 4,0 Гц, 1H), 4,65-4,48 (m, 4H), 3,84-3,72 (m, 2H), 2,82-2,75 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 1,50-1,44 (dd, J = 16,0, 8,0 Гц, 6H), 1,20-1,18 (d, J = 8,0 Гц, 3H), 1,07-1,05 (d, J = 8,0 Гц, 3H).

[661] Вариант осуществления 133

[662] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилсульфонил)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[663] Стадия 1. Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилсульфонил)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[664] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (80 мг, 0,14 ммоль) и комплексную соль пероксимоносульфат калия (520 мг, 0,84 ммоль) добавляли в растворитель (ацетонитрил: вода = 2: 1) (9 мл), и реакцию осуществляли в течение ночи при комнатной температуре, неочищенный продукт отделяли и очищали с помощью препаративной HPLC с получением целевого соединения, 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилсульфонил)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она, в виде белого твердого вещества (13 мг, выход: 15%).

[665] MS масса/заряд (ESI): 625,1 [M+H]⁺.

[666] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,88 (d, J=4,8 Гц, 1H), 8,23-8,29 (m, 1 H), 7,87 (d, J=5,2 Гц, 1H), 7,23 (dd, J₁=14,8 Гц, J₂=8,0 Гц, 1H), 6,78-6,85 (m, 1H), 6,57-6,65 (m, 2H), 6,31 (dd, J₁=16,4 Гц, J₂=3,2 Гц, 1H), 5,83 (dd, J₁=10,8 Гц, J₂=1,6 Гц, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,43-4,55 (m, 2H), 4,06-4,23 (s, 1H), 3,61-3,86 (m, 2H), 3,11-3,40 (m, 1H), 2,94-2,99 (m, 4H), 1,46-1,50 (m, 3H), 1,20-1,22 (m, 3H), 1,07-1,09 (m, 3H).

[667] Вариант осуществления 134

[668] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-6-фторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[669] Стадия 1. Получение N-(4-хлор-3-фторфенил)-2,2,2-трифторацетамида

[670] 4-Хлор-3-фторанилин (1,45 г, 0,01 моль) растворяли в THF (150 мл), к указанному добавляли Na₂CO₃ (3,18 г, 0,03 моль), смесь охлаждали до 0°C в защитной атмосфере азота, к указанному добавляли по каплям трифторуксусный ангидрид (4,2 мл, 0,03 моль) и затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 часов. Реакционную смесь добавляли в воду (150 мл). Затем смесь трижды экстрагировали этилацетатом (100 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта, очищали с помощью колоночной хроматографии (PE/EA = 5: 1) с получением белого твердого целевого продукта, N-(4-хлор-3-фторфенил)-2,2,2-трифторацетамида (2,3 г, выход: 95%).

[671] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 7,70 (dd, J = 11,1, 2,0 Гц, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 2H);

[672] ¹⁹F ЯМР (376 МГц, MeOD-d₄) δ -77,17 (s);

[673] MS масса/заряд (ESI): 242,1 [M+H]⁺.

[674] Стадия 2. Получение (6-амино-3-хлор-2-фторфенил)борной кислоты

[675] N-(4-Хлор-3-фторфенил)-2,2,2-трифторацетамид (2,3 г, 9,5 ммоль) растворяли в THF (40 мл), смесь охлаждали до -78°C в защитной атмосфере азота и добавляли по каплям n-BuLi (7,9 мл, 19,0 ммоль, 2,4 М), затем смесь перемешивали при -50°C в течение 50 минут. Реакционную смесь охлаждали до -78°C, добавляли по каплям триизопропилборат (2,3 г, 9,5 ммоль) (4,8 мл, 20,9 ммоль), смесь перемешивали при этой же температуре в течение 20 минут, сухую ледяную баню удаляли и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли по каплям разбавленную хлористоводородную кислоту (19 мл, 1 М), температуру повышали до 40°C и смесь перемешивали в течение 1 часа. Затем смесь трижды экстрагировали этилацетатом (100 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали с получением неочищенного продукта, очищали с помощью колоночной хроматографии (PE/EA = 4: 1) с получением серого твердого целевого продукта, (6-амино-3-хлор-2-фторфенил)борной кислоты (1,1 г, выход: 56%).

[676] MS масса/заряд (ESI): 190,0 [M+H]⁺.

[677] Стадия 3. Получение (2-амино-6-фторфенил)борной кислоты

[678] (6-Амино-3-хлор-2-фторфенил)борную кислоту (100 мг, 0,53 ммоль) растворяли в MeOH (20 мл), добавляли Pd/C (20 мг), смесь трижды заполняли водородом, затем перемешивали в течение 2 часов при 15 фунт/кв. дюйм и реакцию наблюдали с помощью TLC (PE/EA 1: 1) до завершения реакции. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали с получением желтого твердого целевого продукта, (2-амино-6-фторфенил)борной кислоты (80 мг, выход: 97%), который применяли непосредственно в следующей реакции без очистки.

[679] MS масса/заряд (ESI): 156,0 [M+H]⁺.

[680] Стадия 4. Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-6-фторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[681] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (26 мг, 0,05 ммоль), (6-амино-3-хлор-2-фторфенил)борную кислоту (23,2 мг, 0,15 ммоль) и карбонат цезия (48,87 мг, 0,15 ммоль) растворяли в смеси диоксан/H₂O (1,5 мл/0,3 мл). Смесь заполняли азотом в течение 1 минуты и реакцию осуществляли при 100°C в течение 1 часа в условиях микроволнового облучения. Когда реакция была завершена, реакционную смесь концентрировали, очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 20: 1) и затем очищали с помощью препаративной HPLC с получением желтого твердого целевого продукта, 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-6-фторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (7,0 мг, выход: 24%).

[682] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,46 (d, J = 5,4 Гц, 1H), 8,25 (dd, J = 21,2, 12,0 Гц, 1H), 7,27 (d, J = 5,5 Гц, 1H), 7,11 (dd, J = 14,7, 8,2 Гц, 1H), 6,84 (d, J = 14,2 Гц, 1H), 6,49 (d, J = 8,3 Гц, 1H), 6,41 - 6,27 (m, 2H), 5,83 (dd, J = 10,6, 1,6 Гц, 1H), 4,48 (dd, J = 52,4, 11,6 Гц, 2H), 4,30 - 3,83 (m, 2H), 3,74 (d, J = 9,7 Гц, 2H), 3,22 (s, 1H), 2,98 - 2,80 (m, 1H), 2,43 (d, J = 0,7 Гц, 3H), 1,56 - 1,40 (m, 3H), 1,22 (d, J = 6,6 Гц, 3H), 1,01 (d, J = 6,6 Гц, 3H).

[683] ¹⁹F ЯМР (376 МГц, MeOD-d₄) δ -114,58 - -114,95 (m), -114,95 - -115,34 (m), -125,12 - -126,48 (m).

[684] MS масса/заряд (ESI): 592,2 [M+H]⁺.

[685] Вариант осуществления 136

[686] Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[687] Стадия 1. Получение 6-фтор-7-(2-фторпиридин-3-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона

[688] 7-Хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-дион (200 мг, 0,575 ммоль), 2-фтор-3-(4,4,5,5-триметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин (192 мг, 0,862 ммоль), комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-дихлорпалладия(II) и дихлорметана (47 мг, 0,0575 ммоль) и карбонат цезия (561 мг, 1,725 ммоль) растворяли в диоксане (8 мл) и воде (1 мл) и смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Реакционную смесь концентрировали, затем очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: дихлорметан-метанол/дихлорметан, от 0% до 3%] с получением 6-фтор-7-(2-фторпиридин-3-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона (200 мг, выход: 85%) в виде желтого твердого вещества.

[689] MS масса/заряд (ESI): 410,1 [M+H]⁺.

[690] Стадия 2. Получение 6-фтор-7-(2-фторпиридин-3-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона

[691] 6-Фтор-7-(2-фторпиридин-3-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4(1H,3H)-дион (170 мг, 0,416 ммоль) и 20% водный раствор метилмеркаптида натрия (218 мг, 0,623 ммоль) в диметилсульфоксиде (5 мл) перемешивали при 85°C в течение 4 часов. К указанному добавляли воду (40 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3), органическую фазу промывали водным раствором хлорида натрия (30 мл), концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: дихлорметан-метанол/дихлорметан, от 0% до 2,5%] с получением 6-фтор-7-(2-фторпиридин-3-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона (128 мг, выход: 70%) в виде желтого твердого вещества.

[692] MS масса/заряд (ESI): 438,1 [M+H]⁺.

[693] Стадия 3. Получение 4-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[694] N,N-Диизопропилэтиламин (354 мг, 2,75 ммоль) добавляли в раствор 6-фтор-7-(2-фторпиридин-3-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона (200 мг, 0,458 ммоль) в ацетонитриле (20 мл); к указанному добавляли оксихлорид фосфора (210 мг, 1,37 ммоль) и смесь перемешивали при 80°C в течение 1 часа при комнатной температуре. Смесь охлаждали до комнатной температуры и применяли непосредственно для следующей реакции.

[695] Стадия 4. Получение трет-бутил-(S)-4-(6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата

[696] N,N-Диизопропилэтиламин (588 мг, 4,58 ммоль) и трет-бутил-(2R,5S)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (183 мг, 4,5 ммоль) добавляли в реакционную смесь из предыдущей стадии и после добавления перемешивали в течение 0,5 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили водным раствором хлорида аммония (60 мл), экстрагировали этилацетатом (40 мл × 3), промывали водным раствором хлорида натрия (30 мл), концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: дихлорметан-метанол/дихлорметан, от 0% до 2,8%] с получением трет-бутил-(S)-4-(6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата (220 мг, выход за две стадии: 78%) в виде желтого твердого вещества.

[697] MS масса/заряд (ESI): 620,3 [M+H]⁺.

[698] Стадия 5. Получение трифторацетата (S)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[699] Трифторуксусную кислоту (1 мл) добавляли в раствор трет-бутил-(S)-4-(6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата (75 мг, 0,121 ммоль) в дихлорметане (5 мл), после добавления смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа. Реакционную смесь концентрировали при низкой температуре с получением трифторацетата (S)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (80 мг) в виде желтого масла, который быстро применяли на следующей стадии.

[700] MS масса/заряд (ESI): 520,2 [M+H]⁺.

[701] Стадия 6. Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[702] N,N-Диизопропилэтиламин (156 мг, 1,21 ммоль) добавляли в раствор трифторацетата (S)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-(2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (80 мг, 0,121 ммоль) в дихлорметане (10 мл), затем добавляли по каплям акрилоилхлорид (33 мг, 0,363 ммоль) при 0°C и после добавления перемешивали в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили водным раствором хлорида аммония (30 мл), экстрагировали дихлорметаном (30 мл x 3), промывали насыщенным водным солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и очищали с помощью препаративной хроматографии [элюент: дихлорметан/метанол = 12/1] с получением (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-7-(2-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (26 мг, выход за две стадии: 37%) в виде желтого твердого вещества.

[703] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,50 - 8,45 (m, 1H), 8,40 (d, J = 4 Гц, 1H), 8,36 - 8,24 (m, 1H), 7,67 (d, J = 8 Гц, 1H), 7,26 (d, J = 8 Гц, 1H), 7,18 - 7,09 (m, 1H), 6,94 - 6,76 (m, 1H), 6,38 - 6,26 (m, 1H), 5,89 - 5,79 (m, 1H), 5,23 - 4,93 (m, 2H), 4,63 - 4,36 (m, 2H), 4,28 - 4,02 (m, 1H), 3,99 - 3,52 (m, 2H), 2,90 - 2,72 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 1,58 - 1,40 (m, 3H), 1,18 (d, J = 8 Гц, 3H), 1,01 (d, J = 8 Гц, 3H).

[704] MS масса/заряд (ESI): 574,2 [M+H].

[705] Вариант осуществления 143

[706] Получение 6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-4-((S)-4-(2-фторакрилоил)-2-метилпиперазин-1-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[707] Стадия 1. Получение трет-бутил-(3S)-4-(6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата

[708] трет-Бутил-(S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат (250 мг, 0,472 ммоль), (2-фтор-6-(метилтио)фенил)борную кислоту (132 мг, 0,708 ммоль), комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино))ферроцен-дихлорпалладия(II) и дихлорметана (96 мг, 0,118 ммоль) и карбонат цезия (460 мг, 1,42 ммоль) растворяли в диоксане (8 мл) и воде (1 мл) и смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния, затем очищали с помощью колоночной хроматографии [элюент: дихлорметан/метанол от 0% до 3,5%] с получением трет-бутил-(3S)-4-(6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио) фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата (230 мг, выход: 77%) в виде желтого твердого вещества.

[709] MS масса/заряд (ESI): 637,3 [M+H]⁺.

[710] Стадия 2. Получение трифторацетата 6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-((S)-2-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[711] Трифторуксусную кислоту (1,2 мл) добавляли в раствор трет-бутил-(3S)-4-(6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата (50 мг, 0,0786 ммоль) в дихлорметане (6 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь выпаривали до сухого состояния при низкой температуре с получением трифторацетата 6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-((S)-2-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (51 мг, выход: 100%) в виде красного масла, который быстро применяли в следующей реакции.

[712] Стадия 3. Получение 6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-4-((S)-4-(2-фторакрилоил)-2-метилпиперазин-1-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[713] 2-Фторпропеновую кислоту (21 мг, 0,233 ммоль) и 1-н-пропилфосфорный ангидрид (100 мг, 0,314 ммоль) добавляли в раствор трифторацетата 6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)-4-((S)-2-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (51 мг, 0,0786 ммоль) и N-метилморфолина (55 мг, 0,55 ммоль) в дихлорметане (10 мл) при 0°C, смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. К указанному добавляли воду (20 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (20 мл * 2), органическую фазу концентрировали и очищали с помощью препаративной хроматографии [элюент: дихлорметан/метанол = 12/1] с получением 6-фтор-7-(2-фтор-6-(метилтио)фенил)-4-((S)-4-(2-фторакрилоил)-2-метилпиперазин-1-ил)-1-(2-изопропил-4-метилпиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (35 мг, выход: 61%) в виде желтого твердого вещества.

[714] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,38 (d, J = 4 Гц, 1H), 8,35 - 8,25 (m, 1H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 2H), 6,98 (t, J = 8 Гц, 1H), 5,41 - 5,31 (m, 1H), 5,31 - 5,24 (m, 1H), 5,21 - 4,94 (m, 2H), 4,59 - 3,68 (m, 4H), 3,54 - 3,38 (m, 1H), 2,81 (s, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,59 - 1,42 (m, 3H), 1,18 (d, J = 8 Гц, 3H), 0,99 (brd, 3H).

[715] MS масса/заряд (ESI): 609,2 [M+H]⁺.

[716] Синтез вариантов осуществления 144-149 проводили согласно варианту осуществления 143.

[717] Вариант осуществления 150

[718] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(6-амино-3-хлор-2-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[719] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (26,7 мг, 0,05 ммоль), (6-амино-3-хлор-2-фторфенил)борную кислоту (28,4 мг, 0,15 ммоль) и ацетат калия (15,0 мг, 0,15 ммоль) растворяли в смеси диоксан/H₂O (1,5 мл/0,3 мл). Смесь заполняли азотом в течение 1 минуты и реакцию осуществляли при 100°C в течение 1 часа в условиях микроволнового облучения. Когда реакция была завершена, реакционную смесь концентрировали, очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 20: 1) с получением неочищенного продукта и затем очищали с помощью препаративной HPLC с получением желтого твердого целевого продукта, 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-6-фторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (3,7 мг, выход: 14%).

[720] MS масса/заряд (ESI): 642,1 [M+H]⁺.

[721] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,56 - 8,39 (m, 2H), 7,24 (t, J = 5,3 Гц, 1H), 7,15 (dd, J = 15,4, 6,9 Гц, 1H), 6,84 (d, J = 9,9 Гц, 1H), 6,53 - 6,46 (m, 1H), 6,32 (d, J = 15,9 Гц, 1H), 5,84 (d, J = 12,2 Гц, 1H), 4,68 - 4,36 (m, 3H), 4,10 (dd, J = 45,7, 31,6 Гц, 2H), 3,76 (s, 1H), 2,94 (s, 2H), 2,42 (d, J = 6,2 Гц, 3H), 1,57 - 1,43 (m, 3H), 1,22 (d, J = 6,7 Гц, 3H), 1,06 (dd, J = 42,4, 6,7 Гц, 3H). ¹⁹F ЯМР (376 МГц, MeOD) δ -117,04 - -117,24 (m), -117,24 - -117,51 (m).

[722] Вариант осуществления 150-1 и вариант осуществления 150-2

[723] (M/P-4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-6-фторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он)

[724] Вариант осуществления 150 разделяли с помощью SFC с получением двух аксиальных хиральных изомеров, варианта осуществления 150-1 и варианта осуществления 150-2, SFC: условия хирального получения:

[725] Таблица 19

Прибор SFC-80 (Thar, Waters) Тип колонки IC 20 * 250 мм, 10 мкм (Daicel) Давление в колонке 100 бар Подвижная фаза CO₂/метанол (0,2% метаноловый аммиак) = 45/55 Расход 80 г/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 35°C

[726] Условия хирального анализа:

[727] Таблица 20

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки OX-H 4,6 * 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0,2% NH3 (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[728] Вариант осуществления 150-1:

[729] t_R=1,87 мин.

[730] MS масса/заряд (ESI): 642,1 [M+H]⁺.

[731] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,56 - 8,39 (m, 2H), 7,24 (t, J = 5,3 Гц, 1H), 7,15 (dd, J = 15,4, 6,9 Гц, 1H), 6,84 (d, J = 9,9 Гц, 1H), 6,53 - 6,46 (m, 1H), 6,32 (d, J = 15,9 Гц, 1H), 5,84 (d, J = 12,2 Гц, 1H), 4,68 - 4,36 (m, 3H), 4,10 (dd, J = 45,7, 31,6 Гц, 2H), 3,76 (s, 1H), 2,94 (s, 2H), 2,42 (d, J = 6,2 Гц, 3H), 1,57 - 1,43 (m, 3H), 1,22 (d, J = 6,7 Гц, 3H), 1,06 (dd, J = 42,4, 6,7 Гц, 3H).

[732] ¹⁹F ЯМР (376 МГц, MeOD-d₄) δ -117,04 - -117,24 (m), -117,24 - -117,51 (m).

[733] Вариант осуществления 150-2:

[734] t_R=2,80 мин.

[735] MS масса/заряд (ESI): 642,1 [M+H]⁺.

[736] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,56 - 8,39 (m, 2H), 7,27 - 7,10 (m, 2H), 6,84 (dd, J = 28,3, 17,7 Гц, 1H), 6,50 (d, J = 8,8 Гц, 1H), 6,32 (d, J = 16,9 Гц, 1H), 5,83 (d, J = 11,7 Гц, 1H), 4,63 - 4,41 (m, 2H), 4,23 - 4,02 (m, 1H), 3,79 - 3,57 (m, 2H), 3,36 (s, 2H), 2,99 - 2,86 (m, 1H), 2,41 (d, J = 7,6 Гц, 3H), 1,51 (d, J = 25,9 Гц, 3H), 1,21 (d, J = 6,6 Гц, 3H), 1,05 (dd, J = 44,8, 6,7 Гц, 3H).

[737] Вариант осуществления 151

[738] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(6-амино-3-хлор-2-фторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[739] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (26 мг, 0,05 ммоль), (6-амино-3-хлор-2-фторфенил)борную кислоту (28,4 мг, 0,15 ммоль) и карбонат цезия (48,8 мг, 0,15 ммоль) растворяли в смеси диоксан/H₂O (1,5 мл/0,3 мл). Смесь заполняли азотом в течение 1 минуты и реакцию осуществляли при 100 °C в течение 1 часа в условиях микроволнового облучения. Когда реакция была завершена, реакционную смесь выпаривали до сухого состояния, очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 20: 1) с получением неочищенного продукта и затем очищали с помощью препаративной HPLC с получением желтого твердого целевого продукта, 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-6-фторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (4,4 мг, выход: 14%).

[740] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,47 (d, J = 5,4 Гц, 1H), 8,38 - 8,24 (m, 1H), 7,27 (d, J = 5,4 Гц, 1H), 7,17 (t, J = 8,6 Гц, 1H), 6,85 (d, J = 14,9 Гц, 1H), 6,49 (d, J = 8,9 Гц, 1H), 6,32 (d, J = 16,3 Гц, 1H), 5,84 (d, J = 10,5 Гц, 1H), 4,57 (d, J = 23,5 Гц, 2H), 4,42 (s, 1H), 4,24 - 3,89 (m, 2H), 3,73 (dd, J = 14,4, 7,9 Гц, 1H), 2,92 (s, 1H), 2,43 (s, 3H), 1,54 - 1,40 (m, 3H), 1,22 (d, J = 6,7 Гц, 3H), 1,01 (d, J = 6,6 Гц, 3H).

[741] ¹⁹F ЯМР (376 МГц, MeOD-d₄) δ -116,46 - -116,73 (m), -116,87 (dd, J = 39,0, 8,4 Гц), -126,18 (dd, J = 24,9, 15,2 Гц).

[742] MS масса/заряд (ESI): 626,1 [M+H]⁺.

[743] Вариант осуществления 152

[744] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[745] Стадия 1. Получение 6-бром-2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-амина

[746] 2-Изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-амин (1 г, 5,5 ммоль) растворяли в ацетонитриле (15 мл), к указанному добавляли N-бромсукцинимид (970 мг, 5,5 ммоль) при 0°C и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили путем капельного добавления насыщенного Na₂SO₃, затем экстрагировали водой и дихлорметаном (3 * 10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (петролейный эфир/EtOAc = 10: 1 до 3: 1) с получением целевого продукта, 6-бром-2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-амина (480 мг, выход: 34%).

[747] MS масса/заряд (ESI): 261,1 [M+H]⁺.

[748] Стадия 2. Получение 2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-амина

[749] В защитной атмосфере N₂ 6-бром-2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-амин (480 мг, 1,85 ммоль) растворяли в смеси 1,4-диоксана и воды (3 мл: 0,1 мл), к указанному добавляли метилборную кислоту (560 мг, 9,25 ммоль), Pd(dppf)Cl₂.DCM (100 мг, 0,2 ммоль) и K₂CO₃ (510 мг, 3,7 ммоль) и реакцию осуществляли при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном (3 * 10 мл) и водой. Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (петролейный эфир/EtOAc = 3: 1 до 1: 1) с получением целевого продукта, 2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-амина (200 мг, выход: 55%).

[750] MS масса/заряд (ESI): 197,1 [M+H]⁺.

[751] Стадия 3. Получение 2,6-дихлор-5-фтор-N-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамида

[752] В защитной атмосфере N₂ 2,6-дихлор-5-фторникотинамид (220 мг, 1,05 ммоль) растворяли в THF (20 мл), добавляли по каплям оксалилхлорид (0,6 мл, 1,2 ммоль) (2 моль/л раствор в дихлорметане) при -78°C и смесь перемешивали при -78°C в течение 10 минут, затем перемешивали при 60°C в течение 3 часов, затем охлаждали до 0°C, добавляли по каплям триэтиламин (1 мл, 3,2 ммоль), добавляли по каплям раствор 2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-амина (200 мг, 1,05 ммоль) в THF и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь гасили солевым раствором, экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 50 мл), органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного продукта, затем очищали с помощью колоночной хроматографии (DCM/MeOH = от 100:1 до 70:1) с получением целевого продукта, 2,6-дихлор-5-фтор-N-((2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамида (320 мг, выход: 67%).

[753] MS масса/заряд (ESI): 457,1 [M+H]⁺.

[754] Стадия 4. Получение 7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона

[755] 2,6-Дихлор-5-фтор-N-((2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамид (320 мг, 0,75 ммоль) растворяли в безводном THF (20 мл), охлаждали до 0°C в защитной атмосфере азота, к указанному добавляли по каплям KHMDS (1,5 мл, 1,5 ммоль) и смесь перемешивали в течение 0,5 часа. Затем реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония, затем трижды экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (DCM/MeOH = 200: 1 до 80: 1) с получением целевого продукта, 7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона (270 мг, выход: 91%).

[756] MS масса/заряд (ESI): 395,1 [M+H]⁺.

[757] Стадия 5. Получение 4,7-дихлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[758] 7-Хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-дион (270 мг, 0,57 ммоль) растворяли в ацетонитриле (10 мл); к указанному добавляли DIEA (1,2 мл, 2,3 ммоль) и POCl₃ (0,12 мл, 1,1 ммоль) и смесь перемешивали при 80°C в течение 0,5 часа. Остаток применяли в следующей реакции.

[759] MS масса/заряд (ESI): 413,1 [M+H]⁺.

[760] Стадия 6. Получение трет-бутил-(S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата

[761] DIEA (1,2 мл, 2,3 ммоль) добавляли в раствор 4,7-дихлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (230 мг, 0,57 ммоль) в ацетонитриле (10 мл), к указанному добавляли трет-бутил-(S)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат (230 мг, 1,1 ммоль) и смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили водой, затем трижды экстрагировали этилацетатом (3 * 50 мл) и водой. Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 30: 1) с получением целевого продукта, трет-бутил-(S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилата (290 мг, выход: 88%).

[762] MS масса/заряд (ESI): 577,1 [M+H]⁺.

[763] Стадия 7. Получение (S)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-4-(2-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[764] трет-Бутил-(S)-4-(7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат (290 мг, 0,5 ммоль) растворяли в дихлорметане (6 мл), к указанному добавляли TFA (1 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь концентрировали с получением неочищенного целевого продукта, (S)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-4-(2-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (240 мг, выход: 100%).

[765] MS масса/заряд (ESI): 477,1 [M+H]⁺.

[766] Стадия 8. Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[767] (S)-7-Хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-4-(2-метилпиперазин-1-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (240 мг, 0,5 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), к указанному добавляли DIEA (3 мл, 5 ммоль), затем добавляли акрилоилхлорид (45 мг, 0,5 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем реакционную смесь гасили водой, затем трижды экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 20: 1) с получением целевого продукта, 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (300 мг, выход: 100%).

[768] MS масса/заряд (ESI): 531,1 [M+H]⁺.

[769] Стадия 9. Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[770] В защитной атмосфере N₂ 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-хлор-6-фтор-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3- d]пиримидин-2-(1H)-он (300 мг, 0,57 ммоль) и (2-фтор-6-гидроксифенил)борную кислоту (177 мг, 1,1 ммоль) растворяли в смеси 1,4-диоксана и воды (6 мл: 0,3 мл); к указанному добавляли Pd(dppf)Cl₂.DCM (50 мг, 0,06 ммоль) и Cs₂CO₃ (280 мг, 0,86 ммоль) и реакцию осуществляли при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Затем реакционную смесь гасили водой, затем трижды экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 50 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = от 200:1 до 80: 1) с получением целевого продукта, 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-фтор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (90 мг, выход: 26%).

[771] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,38 (d, J = 5,0 Гц, 1H), 8,30-8,22 (m, 1H), 7,56- 7,41 (m, 3H), 7,25-7,19 (m, 2H), 6,91 - 6,80 (m, 1H), 6,34-6,29 (dd, J = 17,0, 5,6 Гц, 1H), 5,84-5,82 (dd, J = 10,6, 1,8 Гц, 1H), 5,11-5,04 (m, 2H), 4,53-4,46 (m, 2H), 4,23- 4,07 (m, 1H), 3,90-3,73 (m, 2H), 2,81-2,79 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,50-1,46 (m, 3H), 1,19-1,17 (d, J = 6,8 Гц, 3H), 1,01-0,99 (d, J = 6,8 Гц, 3H).

[772] MS масса/заряд (ESI): 573,1 [M+H]⁺.

[773] Вариант осуществления 153

[774] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2,3-дифтор-6-гидроксифенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[775] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2,3-дифтор-6-гидроксифенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 114.

[776] MS масса/заряд (ESI): 611,1 [M+H]⁺.

[777] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,41 (d, J = 5,6 Гц, 1H), 8,32 - 8,25 (m, 1H), 7,25 (d, J = 5,6 Гц, 1H), 7,20 - 7,13 (m, 1H), 6,92 - 6,82 (m, 1H), 6,62 - 6,58 (m, 1H), 6,34 - 6,28 (m, 1H), 5,83 (d, J = 10,4 Гц, 1H), 5,14 - 5,04 (m, 1H), 4,64 - 4,42 (m, 2H), 4,25 - 4,07 (m, 1H), 3,89 - 3,61 (m, 3H), 2,88 - 2,77 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 1,52 - 1,46 (m, 3H), 1,20 (d, J = 6,4 Гц, 3H), 1,05 (d, J = 6,4 Гц, 3H).

[778] Вариант осуществления 154

[779] Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2,6-дифторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[780] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2,6-дифторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 114.

[781] MS масса/заряд (ESI): 595,1 [M+H]⁺.

[782] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,40 - 8,32 (m, 2H), 7,51 (t, J = 7,6 Гц, 1H), 7,22 (d, J = 5,4 Гц, 1H), 7,05 (t, J = 8,4 Гц, 2H), 6,86 - 6,79 (m, 1H), 6,37 - 6,26 (m, 1H), 5,84 (d, J = 10,6 Гц, 1H), 5,08 (m, 2H), 4,56-4,46 (m, 2H), 4,21-4,08 (m, 1H), 3,85-3,62 (m, 2H), 2,86-2,82 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 1,47 (d, J = 6,6 Гц, 3H), 1,21 - 1,19 (d, J = 6,8 Гц, 3H), 1,04 (d, J = 6,8 Гц, 3H).

[783] Вариант осуществления 155

[784] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилсульфонил)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[785] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилсульфонил)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 133.

[786] MS масса/заряд (ESI): 641,1 [M+H]⁺.

[787] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,86 (d, J=5,2 Гц, 1H), 8,44-8,46 (m, 1 H), 7,85 (d, J=4,8 Гц, 1H), 7,20 (dd, J₁=15,2 Гц, J₂=8,4 Гц, 1H), 6,82-6,85 (m, 1H), 6,55-6,64 (m, 2H), 6,31 (d, J=17,2 Гц, 1H), 5,82 (d, J=12,0 Гц, 1H), 5,07 (s, 1 H), 4,43-4,58 (m, 2H), 4,06-4,23 (s, 1H), 3,38-3,86 (m, 3H), 2,94-2,98 (m, 4 H), 1,46-1,51 (m, 3H), 1,18-1,22 (m, 3 H), 1,07-1,09 (m, 3H).

[788] Вариант осуществления 165

[789] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(6-амино-3-хлор-2-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[790] Стадия 1. Получение 2,5,6-трихлор-N-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамида

[791] В защитной атмосфере N₂ 2,5,6-трихлорникотинамид (6,2 г, 27,7 ммоль) растворяли в THF (60 мл), добавляли по каплям оксалилхлорид (15,2 мл, 31,5 ммоль) (2 моль/л раствор в дихлорметане) при -78°C и смесь перемешивали при -78°C в течение 10 минут, затем смесь перемешивали при 60°C в течение 3 часов, затем охлаждали до 0°C, добавляли по каплям триэтиламин (18 мл, 111 ммоль), добавляли по каплям раствор 2-изопропил-6-метил-4-(метилтио)пиридин-3-амина (5 г, 27,7 ммоль) в THF и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь гасили солевым раствором, экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 100 мл), органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного продукта, затем очищали с помощью колоночной хроматографии (DCM/MeOH = от 100:1 до 70:1) с получением целевого продукта, 2,5,6-трихлор-N-((2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамида (8,6 г, выход: 72%).

[792] MS масса/заряд (ESI): 433,1 [M+H]⁺, 435,1 [M+H+2]⁺.

[793] Стадия 2. Получение 6,7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона

[794] 2,5,6-Трихлор-N-((2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)карбамоил)никотинамид (10,4 г, 24,1 ммоль) растворяли в безводном THF (80 мл), охлаждали до 0°C в защитной атмосфере азота, к указанному добавляли по каплям KHMDS (48 мл, 48,2 ммоль) и смесь перемешивали в течение 0,5 часа. Затем реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония, затем трижды экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 100 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и образовывали взвесь с этилацетатом с получением целевого продукта, 6,7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-диона (8 г, выход: 84%).

[795] MS масса/заряд (ESI): 397,1 [M+H]⁺, 399,1 [M+H+2]⁺.

[796] Стадия 3. Получение 4,6,7-трихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2(1H)-она

[797] 6,7-Дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2,4-(1H,3H)-дион (5,2 г, 13,1 ммоль) растворяли в ACN (50 мл); к указанному добавляли DIEA (23 мл, 66 ммоль) и POCl₃ (3 мл, 19,7 ммоль) и смесь перемешивали при 80°C в течение 0,5 часа. Продукт непосредственно применяли в следующей реакции.

[798] MS масса/заряд (ESI): 415,1 [M+H]⁺, 417,1 [M+H+2]⁺.

[799] Стадия 4. Получение трет-бутил-(2R,5S)-4-(6,7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата

[800] трет-Бутил-(2R,5S)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (6,2 г, 26,2 ммоль) добавляли в раствор 4,6,7-трихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она в ацетонитриле (50 мл); к указанному добавляли DIEA (23 мл, 66 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем реакционную смесь гасили водой, затем трижды экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 100 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 30: 1) с получением целевого продукта, трет-бутил-(2R,5S)-4-(6,7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилата (6,1 г, выход: 77%).

[801] MS масса/заряд (ESI): 593,1 [M+H]⁺, 595,1 [M+H+2]⁺.

[802] Стадия 5. Получение 6,7-дихлор-4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[803] трет-Бутил-(2R,5S)-4-(6,7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-2-карбонил-1,2-дигидропиридо[2,3-d]пиримидин-4-ил)-2,5-диметилпиперазин-1-карбоксилат (6,1 г, 10,3 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл), к указанному добавляли TFA (20 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь концентрировали с получением неочищенного целевого продукта, 6,7-дихлор-4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (6,1 г, выход: 100%).

[804] MS масса/заряд (ESI): 493,1 [M+H]⁺, 495,1 [M+H+2]⁺.

[805] Стадия 6. Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6,7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[806] 6,7-Дихлор-4-((2S,5R)-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (6 г, 12,2 ммоль) растворяли в дихлорметане (30 мл); к указанному добавляли DIEA (30 мл, 131 ммоль), акрилоилхлорид (1,08 мл, 13,13 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем реакционную смесь гасили водой, затем трижды экстрагировали водой и этилацетатом (3 * 100 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = 20: 1) с получением целевого продукта, 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6, 7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (1,6 г, выход: 22%).

[807] MS масса/заряд (ESI): 547,1 [M+H]⁺, 549,1 [M+H+2]⁺.

[808] Стадия 7. Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(6-амино-3-хлор-2-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[809] В защитной атмосфере N₂ 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6,7-дихлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он (700 мг, 1,3 ммоль), (6-амино-3-хлор-2-фторфенил)борную кислоту (380 мг, 2,6 ммоль) растворяли в смеси 1,4-диоксана и воды (6 мл: 0,3 мл); и к указанному добавляли и Pd(dppf)Cl₂.DCM (100 мг, 0,1 ммоль) и KOAc (400 мг, 4 ммоль), и реакцию осуществляли при 100°C в течение 1 часа под микроволновым излучением. Затем реакционную смесь гасили водой, затем трижды экстрагировали этилацетатом (3 * 50 мл) и водой. Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали с получением неочищенного продукта и очищали с помощью колоночной хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH = от 200:1 до 80:1) с получением целевого продукта, 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(6-амино-3-хлор-2-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она (400 мг, выход: 48%).

[810] MS масса/заряд (ESI): 656,1 [M+H]⁺, 658,1 [M+H+2]⁺.

[811] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,47 - 8,34 (m, 2H), 7,24-7,20 (m, 1H), 7,10-7,14 (m, 1H), 6,79-6,68 (m, 1H), 6,42 - 6,40 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,24 - 6,17 (m, 1H), 5,75-5,71 (m, 1H), 5,01 -4,94 (m, 2H), 4,46-4,40 (m, 1H), 4,26-4,17 (m, 1H), 4,03-3,99 (m, 1H), 3,84-3,79 (m, 1H), 2,86-2,77 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 1,26-1,19 (m, 9H), 1,14-1,11 (m, 3H).

[812] Вариант осуществления 165-1 и вариант осуществления 165-2

[813] (M/P-4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(6-амино-3-хлор-2-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он)

[814] Вариант осуществления 165 разделяли с помощью SFC с получением двух аксиальных хиральных изомеров, варианта осуществления 165-1 и варианта осуществления 165-2, SFC: условия хирального получения:

[815] Таблица 21

Прибор SFC-150 (Thar, Waters) Тип колонки IC 20 * 250 мм, 10 мкм (Daicel) Давление в колонке 100 бар Подвижная фаза CO₂/метанол (0,2% метаноловый аммиак) = 40/60 Расход 120 г/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 35°C

[816] Условия хирального анализа:

[817] Таблица 22

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки OX-H 4,6 * 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: метанол [0,2% NH3 (7 М в метаноле)]; A:B = 65:35 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[818] Вариант осуществления 165-1:

[819] t_R=1,74 мин.

[820] MS масса/заряд (ESI): 656,1 [M+H]⁺, 658,1 [M+H+2]⁺.

[821] ¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₄) δ 8,47 - 8,34 (m, 2H), 7,24-7,20 (m, 1H), 7,10-7,14 (m, 1H), 6,79-6,68 (m, 1H), 6,42 - 6,40 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,24 - 6,17 (m, 1H), 5,75-5,71 (m, 1H), 5,01 -4,94 (m, 2H), 4,46-4,40 (m, 1H), 4,26-4,17 (m, 1H), 4,03-3,99 (m, 1H), 3,84-3,79 (m, 1H), 2,86-2,77 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 1,26-1,19 (m, 9H), 1,14-1,11 (m, 3H).

[822] Вариант осуществления 165-2:

[823] t_R=2,49 мин.

[824] MS масса/заряд (ESI): 656,1 [M+H]⁺, 658,1 [M+H+2]⁺.

[825] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 8,55 - 8,38 (m, 2H), 7,25-7,20 (m, 1H), 7,18-7,11 (m, 1H), 6,88-6,76 (m, 1H), 6,51- 6,47 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,33 - 6,27 (m, 1H), 5,84-5,80 (m, 1H), 5,12 -5,10 (m, 2H), 4,46-4,23 (m, 2H), 4,15-3,89 (m, 2H), 3,64-3,50 (m, 1H), 2,89-2,82 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 1,51-0,99 (m, 12H).

[826] Вариант осуществления 166

[827] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[828] 4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[829] MS масса/заряд (ESI): 623,1 [M+H]⁺, 625,1 [M+H+2]⁺.

[830] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,47 - 8,34 (m, 2H), 7,21-7,20 (m, 2H), 6,89-6,77 (m, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 2H), 6,32 - 6,26 (m, 1H), 5,84-5,80 (m, 1H), 5,08 -5,03 (m, 2H), 4,56-4,49 (m, 1H), 4,34-4,26 (m, 1H), 4,13-4,04 (m, 1H), 3,92-3,88 (m, 1H), 2,79-2,72 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 1,55 - 1,43 (m, 3H), 1,35-1,27 (m, 3H), 1,20-1,17 (m, 3H), 1,08-1,05 (t, J = 8,0 Гц, 3H).

[831] Вариант осуществления 166-1 и вариант осуществления 166-2

[832] (M/P-4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-фтор-6-гидроксифенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он)

[833] Вариант осуществления 166 разделяли с помощью SFC с получением двух аксиальных хиральных изомеров, варианта осуществления 166-1 и варианта осуществления 166-2, SFC: условия хирального получения:

[834] Таблица 23

Прибор SFC-150 (Thar, Waters) Тип колонки IC 20 * 250 мм, 10 мкм (Daicel) Давление в колонке 100 бар Подвижная фаза CO₂/метанол (0,2% метаноловый аммиак) = 50/50 Расход 120 г/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 35°C

[835] Условия хирального анализа:

[836] Таблица 24

Прибор Установка для способа SFC (Thar, Waters) Тип колонки IC 4,6 * 100 мм, 5 мкм (Daicel) Давление в колонке 120 бар Подвижная фаза A: CO₂; B: этанол [1,0% NH₃ (7 М в метаноле)]; A:B = 55:45 Расход 4 мл/мин Длина волны детектора УФ, 214 нм Температура колонки 40°C

[837] Вариант осуществления 166-1:

[838] t_R=2,46 мин.

[839] MS масса/заряд (ESI): 623,1 [M+H]⁺, 625,1 [M+H+2]⁺.

[840] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,47 - 8,34 (m, 2H), 7,21-7,20 (m, 2H), 6,89-6,77 (m, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 2H), 6,32 - 6,26 (m, 1H), 5,84-5,80 (m, 1H), 5,08 -5,03 (m, 2H), 4,56-4,49 (m, 1H), 4,34-4,26 (m, 1H), 4,13-4,04 (m, 1H), 3,92-3,88 (m, 1H), 2,79-2,72 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 1,55 - 1,43 (m, 3H), 1,35-1,27 (m, 3H), 1,20-1,17 (m, 3H), 1,08-1,05 (t, J = 8,0 Гц, 3H).

[841] Вариант осуществления 166-2:

[842] t_R=3,08 мин.

[843] MS масса/заряд (ESI): 623,1 [M+H]⁺, 625,1 [M+H+2]⁺.

[844] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,48 - 8,34 (m, 2H), 7,23-7,21 (m, 2H), 6,90-6,78 (m, 1H), 6,66 - 6,58 (m, 2H), 6,33 - 6,28 (m, 1H), 5,85-5,82 (m, 1H), 5,10 -5,06 (m, 2H), 4,58-4,50 (m, 1H), 4,34-4,27 (m, 1H), 4,13-4,06 (m, 1H), 3,93-3,88 (m, 1H), 2,79-2,71 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 1,56 - 1,46 (m, 3H), 1,37-1,29 (m, 3H), 1,21-1,18 (m, 3H), 1,07-1,05 (t, J = 8,0 Гц, 3H).

[845] Вариант осуществления 169

[846] Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2,6-дифторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[847] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2,6-дифторфенил)-6-фтор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 114.

[848] MS масса/заряд (ESI): 595,1 [M+H]⁺.

[849] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,40 - 8,32 (m, 2H), 7,51 (t, J = 7,6 Гц, 1H), 7,22 (d, J = 5,4 Гц, 1H), 7,05 (t, J = 8,4 Гц, 2H), 6,86 - 6,79 (m, 1H), 6,37 - 6,26 (m, 1H), 5,84 (d, J = 10,6 Гц, 1H), 5,08 (m, 2H), 4,56-4,46 (m, 2H), 4,21-4,08 (m, 1H), 3,85-3,62 (m, 2H), 2,86-2,82 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 1,47 (d, J = 6,6 Гц, 3H), 1,21 - 1,19 (d, J = 6,8 Гц, 3H), 1,04 (d, J = 6,8 Гц, 3H).

[850] Вариант осуществления 191

[851] Получение 4-((s)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,5-дихлор-6-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[852] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,5-дихлор-6-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[853] MS масса/заряд (ESI): 676,1 [M+H]⁺, 678,1 [M+H+2]⁺.

[854] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,40 - 8,32 (m, 2H), 7,51 (t, J = 7,6 Гц, 1H), 7,22 (d, J = 5,4 Гц, 1H), 7,05 (t, J = 8,4 Гц, 2H), 6,86 - 6,79 (m, 1H), 6,37 - 6,26 (m, 1H), 5,84 (d, J = 10,6 Гц, 1H), 5,08 (m, 2H), 4,56-4,46 (m, 2H), 4,21-4,08 (m, 1H), 3,85-3,62 (m, 2H), 2,86-2,82 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 1,47 (d, J = 6,6 Гц, 3H), 1,21 - 1,19 (d, J = 6,8 Гц, 3H), 1,04 (d, J = 6,8 Гц, 3H).

[855] Вариант осуществления 192

[856] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,5-дихлор-6-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилсульфинил)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[857] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,5-дихлор-6-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилсульфинил)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[858] MS масса/заряд (ESI): 692,1 [M+H]⁺, 694,1 [M+H]⁺.

[859] Вариант осуществления 193

[860] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,5-дихлор-6-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[861] 4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,5-дихлор-6-фторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[862] MS масса/заряд (ESI): 690,1 [M+H]⁺, 692,1 [M+H+2]⁺.

[863] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,46 - 8,34 (m, 2H), 7,25-7,21 (m, 1H), 7,11-7,14 (m, 1H), 6,44 - 6,42 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,23 - 6,16 (m, 1H), 5,73-5,70 (m, 1H), 5,03 -4,97 (m, 2H), 4,47-4,42 (m, 1H), 4,25-4,16 (m, 1H), 4,06-4,02 (m, 1H), 3,86-3,83 (m, 1H), 2,84-2,79 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 1,27-1,19 (m, 9H), 1,16-1,14 (m, 3H).

[864] Вариант осуществления 194

[865] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5-хлор-3,6-дифторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[866] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5-хлор-3,6-дифторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[867] MS масса/заряд (ESI): 660,1 [M+H]⁺, 662,1 [M+H+2]⁺.

[868] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,58 - 8,38 (m, 2H), 7,53 - 7,36 (m, 1H), 7,23 - 7,15 (m, 1H), 6,97 - 6,79 (m, 1H), 6,22 (d, J = 16 Гц, 1H), 5,77 (d, J = 8 Гц, 1H), 5,45 - 5,40 (m, 2H), 5,07 - 4,82 (m, 1H), 4,50 - 3,98 (m, 3H), 3,92 - 3,49 (m, 2H), 3,17 - 3,02 (m, 1H), 2,93 - 2,63 (m, 1H), 2,44 - 2,26 (m, 3H), 1,43 - 1,27 (m, 3H), 1,08 (d, J = 4 Гц, 3H), 1,04 - 0,86 (m, 3H).

[869] Вариант осуществления 195

[870] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5,6-дифтор-3-метилфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[871] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5, 6-дифтор-3-метилфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[872] MS масса/заряд (ESI): 640,1 [M+H]⁺, 642,1 [M+H+2]⁺.

[873] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,57 - 8,35 (m, 3H), 7,25 - 7,04 (m, 2H), 6,96 - 6,79 (m, 1H), 6,29 - 6,14 (m, 1H), 5,77 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,09 - 4,82 (m, 1H), 4,76 - 4,58 (m, 2H), 4,48 - 3,98 (m, 3H), 3,94 - 3,59 (m, 2H), 2,93 - 2,69 (m, 1H), 2,44 - 2,29 (m, 3H), 2,10 - 1,95 (m, 3H), 1,42 - 1,26 (m, 3H), 1,08 (d, J = 4 Гц, 3H), 1,05 - 0,87 (m, 3H).

[874] Вариант осуществления 196

[875] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5-хлор-3,6-дифторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[876] 4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5-хлор-3,6-дифторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[877] MS масса/заряд (ESI): 674,1 [M+H]⁺, 676,1 [M+H+2]⁺.

[878] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,61 - 8,39 (m, 2H), 7,56 - 7,35 (m, 1H), 7,27 - 7,14 (m, 1H), 6,96 - 6,75 (m, 1H), 6,20 (d, J = 16 Гц, 1H), 5,82 - 5,71 (m, 1H), 5,53 - 5,38 (m, 2H), 4,95 - 4,69 (m, 1H), 4,57 - 4,30 (m, 1H), 4,24 - 4,00 (m, 2H), 3,98 - 3,79 (m, 2H), 2,95 - 2,60 (m, 1H), 2,44 - 2,25 (m, 3H), 1,40 - 1,13 (m, 6H), 1,10 - 0,87 (m, 6H).

[879] Вариант осуществления 198

[880] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,6-дифторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[881] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-3,6-дифторфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[882] MS масса/заряд (ESI): 626,1 [M+H]⁺, 628,1 [M+H+2]⁺.

[883] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,58 - 8,34 (m, 2H), 7,26 - 6,99 (m, 2H), 6,95 - 6,77 (m, 1H), 6,47 - 6,27 (m, 1H), 6,26 - 6,13 (m, 1H), 5,77 (d, J = 16 Гц, 1H), 5,22 (s, 2H), 5,09 - 4,80 (m, 1H), 4,50 - 3,99 (m, 3H), 3,95 - 3,53 (m, 2H), 3,20 - 2,98 (m, 1H), 2,94 - 2,65 (m, 1H), 2,42 - 2,24 (m, 3H), 1,43 - 1,25 (m, 3H), 1,09 (d, J = 4 Гц, 3H), 1,04 - 0,82 (m, 3H).

[884] Вариант осуществления 201

[885] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5,6-дифтор-3-метилфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[886] 4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-7-(2-амино-5, 6-дифтор-3-метилфенил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[887] MS масса/заряд (ESI): 654,1 [M+H]⁺, 656,1 [M+H+2]⁺.

[888] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,58 - 8,31 (m, 2H), 7,25 - 7,03 (m, 2H), 6,94 - 6,73 (m, 1H), 6,19 (d, J = 16 Гц, 1H), 5,81 - 5,69 (m, 1H), 4,96 - 4,59 (m, 3H), 4,55 - 4,38 (m, 1H), 4,29 - 3,96 (m, 2H), 3,93 - 3,72 (m, 2H), 3,00 - 2,60 (m, 1H), 2,45 - 2,25 (m, 3H), 2,07 - 1,94 (m, 3H), 1,43 - 1,13 (m, 6H), 1,12 - 0,82 (m, 6H).

[889] Вариант осуществления 206

[890] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-фтор-6-метилфенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[891] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-фтор-6-метилфенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[892] MS масса/заряд (ESI): 607,1 [M+H]⁺, 609,1 [M+H+2]⁺.

[893] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,57 - 8,34 (m, 2H), 7,43 - 7,31 (m, 1H), 7,18 (d, J = 4 Гц, 1H), 7,15 - 7,01 (m, 2H), 6,95 - 6,78 (m, 1H), 6,28 - 6,14 (m, 1H), 5,77 (d, J = 12 Гц, 1H), 5,07 - 4,86 (m, 1H), 4,45 - 4,25 (m, 2H), 4,22 - 3,98 (m, 1H), 3,93 - 3,58 (m, 2H), 3,21 - 3,02 (m, 1H), 2,87 - 2,69 (m, 1H), 2,40 - 2,27 (m, 3H), 1,98 - 1,85 (m, 3H), 1,41 - 1,28 (m, 3H), 1,08 (d, J = 8 Гц, 3H), 1,02 - 0,79 (m, 3H).

[894] Вариант осуществления 208

[895] Получение 4-((S)-4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-хлор-6-фторфенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[896] 4-((S)-4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-7-(2-хлор-6-фторфенил)-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[897] MS масса/заряд (ESI): 627,1 [M+H]⁺, 629,1 [M+H+2]⁺.

[898] ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 8,56- 8,30 (m, 2H), 7,58-7,36 (m, 3H), 7,19 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,24-6,19 (d, J = 20,0 Гц, 1H), 5,79-5,76 (d, J = 12,0 Гц, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,32-4,04 (m, 3H), 3,80-3,49 (m, 3H), 2,72 (s, 1H), 2,35 (s, 3H), 1,34-0,91 (m, 9H).

[899] Вариант осуществления 210

[900] Получение (S)-4-(4-акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-7-(o-фенилметил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[901] (S)-4-(4-Акрилоил-2-метилпиперазин-1-ил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-7-(o-фенилметил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[902] MS масса/заряд (ESI): 589,1 [M+H]⁺, 591,1 [M+H+2]⁺.

[903] Вариант осуществления 213

[904] Получение 4-((2S,5R)-4-акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-7-(o-фенилметил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-она

[905] 4-((2S,5R)-4-Акрилоил-2,5-диметилпиперазин-1-ил)-6-хлор-1-(2-изопропил-4-(метилтио)пиридин-3-ил)-7-(o-фенилметил)пиридо[2,3-d]пиримидин-2-(1H)-он получали согласно варианту осуществления 165.

[906] MS масса/заряд (ESI): 603,1 [M+H]⁺, 605,1 [M+H+2]⁺.

[907] Оценка с помощью биологических тестов

[908] Настоящее изобретение дополнительно описано ниже в сочетании с тестовыми вариантами осуществления для объяснения настоящего изобретения, однако такие варианты осуществления не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

[909] Тестовый вариант осуществления 1. Определение ингибирующего эффекта в отношении пролиферативной активности клеток NCI-H358/Mia PaCa-2

[910] 1.1. Цель эксперимента

[911] Определение ингибирующего эффекта соединений в соответствии с вариантом осуществления в отношении пролиферативной активности клеток мутантных KRAS G12C клеточных линий NCI-H358 и Mia PaCa-2.

[912] 1.2. Экспериментальные приборы и реагенты

[913] 1.2.1. Прибор

[914] Считывающее устройство для микропланшетов (BioTek Synergy H1)

[915] Пипетка (Eppendorf и Rainin).

[916] 1.2.2. Реагенты

[917] NCI-H358 приобретали у Nanjing Cobioer Biotechnology Co., Ltd.;

[918] Mia PaCa-2 приобретали у ATCC;

[919] клетки Cell Titer-Glo приобретали у Promega Company, номер товара: G7573;

[920] RPMI 1640 приобретали у Gibco, номер товара: 22400089;

[921] DMEM приобретали у Gibco, номер товара: 11995065;

[922] FBS приобретали у Gibco, номер товара: 10091148;

[923] PBS приобретали у Gibco, номер товара: 10010023;

[924] трипсин приобретали у GIBCO, номер товара: 25200056;

[925] планшет для культивирования клеток приобретали у Corning Company, номер товара: 3610.

[926] 1.3. Способы проведения эксперимента

[927] Когда клетки NCI-H358 или Mia PaCa-2 в ходе культивирования достигали подходящего уровня слияния, клетки NCI-H358 или Mia PaCa-2 собирали и регулировали концентрацию клеток до подходящей концентрации клеток с применением полной среды, и суспензию клеток распределяли в 96-луночный планшет, 90 мкл на лунку, и помещали в инкубатор с 37°C, 5% CO₂ в течение ночи; и растворы соединений разных концентраций получали с применением DMSO и культуральной среды; и подготавливали контроль с растворителем, раствор соединения добавляли в 96-луночный планшет, 10 мкл на лунку, при 37°C в инкубаторе с 5% CO₂ в течение 72 часов; к указанному добавляли раствор CellTiter-Glo и смесь тщательно смешивали путем встряхивания, инкубировали в течение 10 мин в темноте, и считывали с помощью считывающего устройства для микропланшетов BioTek Synergy H1.

[928] 1. 4. Способы обработки экспериментальных данных

[929] Значения люминесцентного сигнала применяли для расчета степени ингибирования, концентрацию и степень ингибирования аппроксимировали к кривой нелинейной регрессии с применением программного обеспечения Graphpad Prism, затем получали значение IC₅₀.

[930] 1. 5. Результаты эксперимента

[931] В таблице 25 показаны результаты эксперимента, значения IC₅₀ ингибирующей активности соединения в соответствии с вариантами осуществления в отношении пролиферации клеток NCI-H358 и Mia PaCa-2.

[932] Таблица 25

Номер варианта осуществления NCI-H358
IC₅₀ (нМ) Mia PaCa-2
IC₅₀ (нМ) Вариант осуществления 60 40 60 Вариант осуществления 60-1 28 55 Вариант осуществления 75 24 34 Вариант осуществления 75-1 25 36 Вариант осуществления 77 117 120 Вариант осуществления 114 50 43 Вариант осуществления 114-1 35 29 Вариант осуществления 118 89 82 Вариант осуществления 130 14 41 Вариант осуществления 131 48 47 Вариант осуществления 133 25 46 Вариант осуществления 134 23 30 Вариант осуществления 138 67 104 Вариант осуществления 150 5,4 8,6 Вариант осуществления 150-1 6,6 3,5 Вариант осуществления 151 39 59 Вариант осуществления 152 45 91 Вариант осуществления 153 68 76 Вариант осуществления 154 79 68 Вариант осуществления 155 24 26 Вариант осуществления 156 95 86 Вариант осуществления 165 5,9 7,6 Вариант осуществления 165-1 6,6 3,3 Вариант осуществления 166 16 23 Вариант осуществления 166-1 17 11 Вариант осуществления 169 79 68 Вариант осуществления 191 32 16 Вариант осуществления 192 29 13 Вариант осуществления 193 н. т. 18 Вариант осуществления 194 н. т. 7 Вариант осуществления 195 н. т. 5,2 Вариант осуществления 196 н. т. 5,3 Вариант осуществления 198 н. т. 6,0 Вариант осуществления 201 н. т. 4,9 Вариант осуществления 206 н. т. 14 Вариант осуществления 208 н. т. 59

[933] Примечание: «н. т.» означает не тестировали.

[934] 1.6. Заключение по итогам эксперимента

[935] В соответствии с данными соединения в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения обладают высоким ингибирующим эффектом в отношении пролиферации клеток NCI-H358 и Mia PaCa-2.

[936] Тестовый вариант осуществления 2. Определение способности соединения по настоящему изобретению улучшать стабильность связывания (температура плавления) белка KRAS G12C

[937] 2.1. Цель эксперимента

[938 Определение способности соединения улучшать стабильность белка KRAS G12C (степень повышения температуры плавления белка может применяться для характеристики способности соединения связываться с белком KRAS G12C).

[939] 2.2. Экспериментальные реагенты и приборы

[940] 2.2.1. Экспериментальные приборы

[941] Прибор для количественной PCR (Quantstudio6 Flex) приобретали у Life Company;

[942] пипетки приобретали у Eppendorf или Rainin Company.

[943] 2.2.2. Экспериментальные реагенты

[944] Набор для окрашивания Protein Thermal Shift™ приобретали у Thermofisher Company, номер товара: 4461146;

[945] белок KRAS G12C приобретали у Beijing SinoBiological Co., Ltd., номер товара: 12259-H07E2;

[946] HEPES, 1 М буферный раствор приобретали у Thermofisher Company, номер товара: 15630080;

[947] DTT приобретали у Sigma Company, номер товара: 43816-50mL;

[948] NaCl приобретали у Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., номер товара: 10019318.

[949] 2.3. Способы проведения эксперимента

[950] В данном эксперименте способ термического сдвига применяли для тестирования степени изменения температуры плавления (Tm) белка KRAS G12C до и после связывания соединения с целью охарактеризовать способность соединения улучшать стабильность белка KRAS G12C.

[951] Конкретная экспериментальная процедура была следующей.

[952] Получали раствор, содержавший 20 мкм HEPES (pH 7,5), 1 мМ DTT, 5X SYPRO оранжевый и 150 мМ NaCl, в качестве буфера для эксперимента и к указанному добавляли белок KRAS G12C человека в конечной концентрации 5,37 мкМ. Реакционную смесь разделяли на 8 рядов пробирок для PCR, по 19,5 мкл в каждую, и добавляли по 0,5 мкл тестируемого соединения или DMSO соответственно так, что общая реакционная система представляла собой 20 мкл, конечная концентрация соединения составляла 10 мкМ, и 2,5% DMSO применяли в качестве контроля с растворителем. После инкубирования при комнатной температуре в темноте в течение 1 часа пробирки для PCR помещали в прибор для PCR, открывали программное обеспечение QuantStudio версии 1.3 и определяли температуру плавления белка KRAS G12C в разных группах обработки с помощью функции кривой плавления (нагревание от 25°C до 95°C, 0,03°C/с).

[953] 2.4. Способы обработки экспериментальных данных

[954] Файл с экспериментальными данными с прибора для PCR импортировали в программное обеспечение для определения термического сдвига, и получали температуру плавления (Tm) для каждой группы обработки, и получали изменение значения температуры плавления (δTm) путем вычитания Tm контрольной группы с растворителем DMSO.

[955] 2.5. Результаты эксперимента

[956] В соответствии со схемой выше, соединение по настоящему изобретению демонстрирует способность повышать температуру плавления белка, как показано в таблице 26, в эксперименте в отношении улучшения стабильности связывания белка KRAS G12C.

[957] Таблица 26

Номер варианта осуществления Tm (°C) DMSO Tm (°C) δTm (°C) Вариант осуществления 60 48,6 60,2 11,6 Вариант осуществления 73 48,6 55,5 6,9 Вариант осуществления 75 50,6 61,2 10,6 Вариант осуществления 77 50,6 60,4 9,8 Вариант осуществления 114 48,7 57,2 8,5 Вариант осуществления 115 48,6 55,2 6,6 Вариант осуществления 118 50,6 59,0 8,4 Вариант осуществления 130 50,6 61,5 10,9 Вариант осуществления 131 49,5 61,2 11,7 Вариант осуществления 134 48,6 64,4 15,8 Вариант осуществления 136 48,6 57,3 8,7 Вариант осуществления 138 50,6 59,4 8,8 Вариант осуществления 150 46,8 60,2 13,4 Вариант осуществления 152 48,6 60,0 11,4 Вариант осуществления 155 49,8 60,9 11,1 Вариант осуществления 156 49,8 61,4 11,6 Вариант осуществления 165 47,0 58,0 11,0

[958] 2.6. Заключение по итогам эксперимента

[959] Данные выше демонстрируют, что соединение в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения обладает высокой способностью к связыванию белка KRAS G12C.

[960] Тестовый вариант осуществления 3. Ингибирующая активность соединения по настоящему изобретению в отношении P-ERK клеток Miapaca-2

[961] 3.1. Цель эксперимента

[962] Определение ингибирующей активности соединений в соответствии с вариантами осуществления в отношении уровня фосфорилированного ERK в мутантных по KRAS G12C клетках Mia PaCa-2.

[963] 3.2. Экспериментальные приборы

[964] 3.2.1. Прибор

[965] Считывающее устройство для микропланшетов (BioTek Synergy H1);

[966] пипетка (Eppendorf и Rainin).

[967] 3.2.2. Реагенты

[968] Набор для обнаружения фосфорилированного ERK1/2 (T202-Y204) LANCE Ultra Cellular приобретали у PerkinElmer Company, номер товара: TRF4000M;

[969] планшет для культивирования клеток приобретали от Corning, номер товара: 3610;

[970] белый матовый планшет OptiPlate™-384 приобретали у PerkinElmer, номер товара: 6007290.

[971] 3.3. Способы проведения эксперимента

[972] Когда клетки Mia PaCa-2 в ходе культивирования достигали подходящего уровня слияния, клетки Mia PaCa-2 собирали, и плотность клеток регулировали до 1 × 10⁶/мл с применением полной культуральной среды, суспензию клеток распределяли в 96-луночный планшет, 50 мкл на лунку, и помещали с прилеганием к стенке в инкубатор с 37°C, 5% CO₂ в течение ночи, получали растворы соединения с разными значениями концентрации с применением DMSO и полной культуральной среды, подготавливали контроль с растворителем, раствор соединения добавляли в 96-луночный планшет, 25 мкл на лунку, и помешали в инкубатор с 37°C, 5% CO₂ на 2 часа непрерывного культивирования, надосадочную жидкость удаляли из планшета для культивирования клеток, добавляли 50 мкл лизирующего раствора в каждую лунку и лизирование осуществляли в течение 30 минут путем встряхивания при комнатной температуре, затем смесь центрифугировали при 1000 об/мин в течение 1 минуты, 15 мкл надосадочной жидкости переносили в 384-луночный планшет, добавляли 5 мкл смеси для обнаружения (Eu-меченное антитело к ERK1/2 (T202-Y204) в конечной концентрации 0,5 нМ и ULight-меченное антитело к ERK1/2 в конечной концентрации 5 нМ) в каждую лунку, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 1 минуты и равномерно смешивали, реакцию осуществляли в течение ночи при комнатной температуре, планшеты считывали с помощью BioTek Synergy H1 и значения сигнала определяли при значениях длины волны излучения 620 нМ и 665 нМ с помощью программы для флуоресценции с временным разрешением.

[973] 3.4. Способы обработки экспериментальных данных

[974] Рассчитывали соотношение значений сигнала при длине волны излучения 665 нм и 620 нм и соотношение применяли для расчета степени ингибирования, концентрацию и степень ингибирования аппроксимировали к кривой нелинейной регрессии с применением программного обеспечения Graphpad Prism, затем получали значение IC₅₀.

[975] 3.5. Результаты эксперимента

[976] Таблица 27. Значения IC₅₀ ингибирования в отношении pERK в клетках Mia PaCa-2

Номер варианта осуществления pERK Mia PaCa-2
IC₅₀ (нМ) Вариант осуществления 114-1 38 Вариант осуществления 134 30 Вариант осуществления 150-1 5,0 Вариант осуществления 165-1 4,2 Вариант осуществления 166-1 20

[977] 3.6. Заключение по итогам эксперимента

[978] Данные выше демонстрируют, что соединение в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения обладает надлежащим ингибирующим эффектом в отношении pERK в клетках Mia PaCa-2.

[979] Тестовый вариант осуществления 4. Определение фармакокинетики в организмах мышей

[980] 4.1. Цель исследования

[981] Исследование фармакокинетического поведения соединения в организмах мышей (плазме) после перорального введения с применением мышей Balb/c в качестве тестируемых животных.

[982] 4.2. Схема теста

[983] 4.2.1. Тестируемые лекарственные средства

[984] Соединение в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения получали самостоятельно;

[985] 4.2. 2. Тестируемые животные

[986] Мышей Balb/c, самцов, приобретали у Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., Ltd, лицензия на разведение животных № (SCXK (Шанхай) 2013-0006 N0. 311620400001794).

[987] 4.2.3. Получение лекарственного средства

[988] Взвешивали 5 г гидроксиэтилцеллюлозы (HEC, CMC-Na, вязкость: 800-1200 сП), растворяли в 1000 мл очищенной воды и добавляли 10 г Tween 80. Смесь тщательно смешивали с образованием прозрачного раствора.

[989] Соединения в соответствии с вариантами осуществления отвешивали и добавляли в соответствующие стеклянные сосуды объемом 4 мл, добавляли 2,4 мл раствора и проводили обработку ультразвуком в течение 10 минут с получением бесцветного прозрачного раствора с концентрацией 1 мг/мл.

[990] 4.2.4. Введение

[991] Мыши Balb/C, самцы; PO, после ночи без приема пищи, соответственно, в дозе 10 мг/кг, введенной в объеме 10 мл/кг.

[992] 4.2.5. Сбор образцов

[993] Образцы крови собирали до введения и через 0,083 ч, 0,25 ч, 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч и 8 ч после введения, кровь помещали в пробирки с EDTA-2K, центрифугировали при 4°C, 6000 об/мин в течение 6 мин с отделением плазмы и хранили при -80°C; пищу предоставляли через 4 часа после введения лекарственного средства.

[994] 4.3. Результаты эксперимента

[995] Результаты конечного определения, полученные путем применения способа LCMS/MS, показаны в таблице 28.

[996] Таблица 28. Фармакокинетические параметры соединений в организмах мышей

Номер варианта осуществления Tmax
(ч) Cmax
(нг/мл) AUC_0-∞
(нг/мл × ч) T_1/2
(ч) MRT
(ч) Вариант осуществления 114 0,25 1529 1287 0,6 0,7 Вариант осуществления 114-1 0,25 1823 1373 0,6 0,7 Вариант осуществления 165-1 0,25 264 347 1,0 1,5 Вариант осуществления 165-FA 0,25 1064 1018 0,5 0,8 Вариант осуществления 165-1-FA 0,25 641 900 0,8 1,2

[997] 4.4. Заключение по итогам эксперимента

[998] Данные выше демонстрируют, что соединения в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения обладают надлежащими фармакокинетическими параметрами в организмах мышей.

[999] Тестовый вариант осуществления 5. Эксперимент в отношении подавления опухоли на трансплантированной модели опухоли MiaPaca 2

[1000] 5.1. Цель эксперимента

[1001] «Голых» мышей BALB/c применяли в качестве тестируемых животных и модель на основе ксенотрансплантата клеток рака поджелудочной железы человека MiaPaca 2 (CDX) применяли для фармакодинамических экспериментов in vivo для оценки противоопухолевых эффектов тестируемых соединений.

[1002] 5.2. Экспериментальные приборы и реагенты

[1003] 5.2.1. Прибор

[1004] Сверхчистый ламинарный бокс (BSC-1300II A2, Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment Factory);

[1005] CO₂-инкубатор (Thermo-311, Thermo);

[1006] центрифуга (центрифуга 5720R, Eppendorf);

[1007] полностью автоматический цитометр (Countess II, Life Technologies);

[1008] пипетка (10-20 мкл, Eppendorf);

[1009] микроскоп (Ts 2, Nikon);

[1010] штангенциркуль с нониусом (CD-6''AX, Mitutoyo Japan);

[1011] колба для культивирования клеток (T25/T75/T225, Corning);

[1012] бак с водой с постоянной температурой (HWS12, Shanghai Yiheng Science).

[1013] 5.2.2. Реагенты

[1014] DMEM (11995-065, Gibco);

[1015] фетальная бычья сыворотка (FBS) (10091-148, Gibco);

[1016] 0,25% трипсин (25200-056, GIBCO);

[1017] двойной антибиотик пенициллин (P/S) (SV30010, GE);

[1018] фосфатный буфер (PBS) (10010-023, Gibco);

[1019] Matrigel (356234, Corning);

[1020] Gln (25030-081, Gibco).

[1021] 5.3. Экспериментальная процедура

[1022] Клетки MiaPaca 2 извлекали из банка клеток, восстанавливали их жизненные функции и добавляли в среду DMEM (содержавшую 10% FBS, 1% Glu, 1% P/S) и инкубировали в CO₂-инкубаторе (температура в инкубаторе составляла 37°C, концентрация CO₂ составляла 5%). После того, как клетки распределялись на 80-90% дна колбы для культивирования, продолжали культивирование клеток в CO₂-инкубаторе. Процесс повторяли до тех пор, пока число клеток не удовлетворяло требования для проведения фармакологической инокуляции in vivo, и клетки на логарифмической стадии роста собирали и подсчитывали с помощью автоматического цитометра, ресуспендировали с помощью PBS и Matrigel (объемное соотношение 1: 1) в соответствии с результатами подсчета, превращали в суспензию клеток (плотность составляла 8 × 10⁷/мл) и помещали в холодильную камеру для дальнейшего применения.

[1023] «Голые» мыши BALB/c, самки, возрастом 6-8 недель, вес которых составлял приблизительно 18-22 г. Мышей содержали в среде, не содержавшей специальных патогенов, и в отдельной вентилированной клетке, при этом в каждой клетке было 5 мышей. Все клетки, подстилку и воду стерилизовали перед применением, и все животные имели свободный доступ к стандартному сертифицированному коммерческому лабораторному корму. Перед началом эксперимента «голых» мышей метили одноразовыми универсальными ушными бирками для мышей и крыс, и перед инокуляцией кожу в месте инокуляции дезинфицировали с помощью 75% медицинского спирта, 0,1 мл (содержавший 8 × 10⁶ клеток) опухолевых клеток MiaPaca 2 инокулировали подкожно в задней правой части тела каждой мыши. Когда объем опухоли достигал 100-200 мм³, в группах начинали введение. Тестируемые соединения вводили ежедневно путем перорального внутрижелудочного введения, дозировка/частота (6 мг/кг QD × 3 недели), и эффективность в каждой группе в конце эксперимента показана в таблице 29.

[1024] 5.4. Обработка данных

[1025] Объем опухоли (мм³) измеряли с помощью штангенциркуля с нониусом дважды в неделю, расчетная формула представляла собой V = 0,5×D×D×D, где D и d представляли собой диаметр опухоли по длинной и короткой стороне, соответственно. Противоопухолевую эффективность определяли путем деления среднего значения увеличения объема опухоли у обработанных соединением животных на среднее значение увеличения объема опухоли у необработанных животных. Формула степени подавления опухоли: TGI (%) = 1-[(Vt-V0) группа введения/(Vt-V0) контрольная группа с растворителем] × 100%. После эксперимента всех животных умерщвляли.

[1026] 5.5. Результаты эксперимента

[1027] Таблица 29. Фармакодинамические параметры соединений в организмах мышей с трансплантированной опухолью

Разделение на группы 100,80 ± 31,28
(мм³, среднее значение ± SD) ΔT/ΔC (%) TGI (%) День 0 День 21 День 21 День 21 Носитель QD × 3 недели 178 ± 30 868 ± 234 - - Вариант осуществления 114-1 177 ± 38 67 ± 34 -62,36 162,36 Вариант осуществления 150-1 178 ± 40 72 ± 18 -59,56 159,56 Вариант осуществления 165-1 178 ± 34 41 ± 19 -76,76 176,76

[1028] 5.6. Заключение по итогам эксперимента

[1029] Данные выше демонстрируют, что после перорального введения в течение 21 дня соединение в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения может в значительной степени подавлять рост трансплантированной опухоли в организмах «голых» мышей с MiaPaca 2 в условиях перорального введения 6 мг/кг каждый день.

[1030] Тестовый вариант осуществления 6. Фармакодинамическое исследование in vivo на модели рака легкого человека, полученной на основе ксенотрансплантатной опухоли из клеток NCI-H358

[1031] 6.1. Цель эксперимента

[1032] Определение эффективности соединения in vivo на модели ксенотрансплантатной опухоли из клеток рака легкого человека NCI-H358.

[1033] 6.2. Экспериментальные приборы и реагенты

[1034] 6.2.1. Прибор

[1035] Бокс биологической безопасности (BSC-1300II A2, Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd., Medical Equipment Factory);

[1036] сверхчистый ламинарный бокс (CJ-2F, Suzhou Fengshi Laboratory Animal Equipment Co.)

[1037] CO₂-инкубатор (Thermo-311, Thermo);

[1038] центрифуга (центрифуга 5720R, Eppendorf);

[1039] полностью автоматический цитометр (Countess II, Life Technologies);

[1040] штангенциркуль с нониусом (CD-6''AX, Mitutoyo Japan);

[1041] колба для культивирования клеток (T75/T225, Corning);

[1042] электронные весы (CPA2202S, Sartorius);

[1043] электронные весы (BSA2202S-CW, Sartorius);

[1044] электронные весы (BS124S, Sartorius).

[1045] 6.2.2. Реагенты

[1046] Среда RPMI-1640 (22400-089, Gibco);

[1047] среда DMEM (11995-065, Gibco);

[1048] фетальная бычья сыворотка (FBS) (10099-141C, Gibco);

[1049] фосфатный буфер (PBS) (10010-023, Gibco);

[1050] Tween 80 (30189828, Sinopharm Reagent);

[1051] карбоксиметилцеллюлоза натрия (30036365, Sinopharm Reagent).

[1052] 6.3. Экспериментальная процедура и обработка данных

[1053] 6.3.1. Тестируемые животные

[1054] «Голые» мыши BALB/c, возрастом 6-8 недель, самки, приобретенные у Shanghai Xipuer-Bikai Experimental Animal Co., Ltd.

[1055] 6.3.2. Получение культуры клеток и суспензии клеток

[1056] 1) Клетки MiaPaca-2 извлекали из банка клеток и восстанавливали их жизненные функции с помощью среды DMEM (DMEM + 10% FBS), клетки с восстановленными жизненными функциями помещали в колбу для культивирования клеток (на которой указывали тип клеток, дату, имя человека, осуществлявшего культивирование, и т. д.) и культивировали в CO₂-инкубаторе (температура в инкубаторе составляла 37°C, концентрация CO₂ составляла 5%) (способ восстановления жизненных функций клеток NCI-H358 был таким же, как для клеток MiaPaca-2 в тестовом варианте осуществления 5, и культуральная среда была изменена на среду RPMI-1640).

[1057] 2) Перенос клеток на свежую среду проводили каждые три - пять дней и после переноса продолжали культивирование клеток в CO₂-инкубаторе. Процесс повторяли до тех пор, пока количество клеток не удовлетворяло требованиям для фармакодинамических исследований in vivo.

[1058] 3) Клетки MiaPaca-2 собирали и подсчитывали помощью автоматического цитометра, в соответствии с результатами подсчета клетки ресуспендировали с помощью PBS и Matrigel (соотношение составляло 1: 1) с получением суспензии клеток (плотность клеток составляла 5 × 10⁷/мл), затем помещали в холодильную камеру для дальнейшего применения (клетки NCI-H358 ресуспендировали с помощью PBS без добавления Matrigel, плотность клеток составляла 1 × 10⁸/мл).

[1059] 6.3.3. Получение образцов

[1060] 1) Растворитель: растворитель (0,5% CMC-Na + 1% Tween 80), условия хранения: 4°C.

[1061] Отвешивали 0,5 г CMC-Na, растворяли в ddH₂O, затем добавляли 1,0 мл Tween 80 и смесь перемешивали до тщательного смешивания, и в конце объем доводили до 100 мл.

[1062] 2) Получали соединение, подлежащее испытанию (10 мг/кг):

[1063] отвешивали 8,42 мг соединения AMG510, добавляли 8,260 мл растворителя, получали однородный раствор с помощью ультразвука, перемешивания на вортекс-мешалке и перемешивания.

[1064] Отвешивали 7,81 мг соединения в соответствии с вариантом осуществления 165-1, добавляли 7,654 мл растворителя, получали однородный раствор с помощью ультразвука, перемешивания на вортекс-мешалке и перемешивания.

[1065] 6.3.3. Инокуляция клеток

[1066] 1) Перед инокуляцией «голых» мышей метили одноразовыми универсальными ушными бирками для крыс и мышей;

[1067] 2) во время инокуляции суспензию клеток тщательно смешивали, отбирали 0,1-1 мл суспензии с помощью шприца объемом 1 мл, удаляли пузырьки и затем шприц помещали на пакет со льдом для дальнейшего применения;

[1068] 3) «голых» мышей держали левой рукой, заднюю правую часть тела «голых» мышей возле правого плеча (место инокуляции) дезинфицировали с помощью 75% спирта и начинали инокуляцию через 30 секунд;

[1069] 4) экспериментальных «голых» мышей в свою очередь инокулировали (каждую мышь инокулировали с помощью 0,1 мл суспензии клеток).

[1070] 6.3.4. Несущих опухоль мышей измеряли, разделяли на группы и им осуществляли введение.

[1071] 1) В соответствии с ростом опухоли опухоль измеряли на 18-й день после инокуляции и рассчитывали размер опухоли.

[1072] Расчет объема опухоли: объем опухоли (мм³) = длина (мм) × ширина (мм) × ширина (мм)/2

[1073] 2) Несущих опухоль мышей разделяли на группы в соответствии с их весом тела и размером опухоли с применением способа рандомизированного разделения на группы.

[1074] 3) В соответствии с результатами разделения на группы начинали введение тестируемого лекарственного средства (способ введения: пероральное введение; вводимая доза: 10 мг/кг; вводимый объем: 10 мл/кг; частота введения: один раз в день; период введения: 21 день; растворители: 0,5% CMC/1% Tween 80).

[1075] 4) Опухоль измеряли и взвешивали дважды в неделю после начала предоставления тестируемого лекарственного средства.

[1076] 5) После эксперимента всех животных умерщвляли.

[1077] 6) Данные обрабатывали с помощью программного обеспечения, такого как Excel.

[1078] 6.4. Обработка данных

[1079] Расчет степени подавления опухоли соединением TGI (%): если регрессия опухоли отсутствует, TGI(%) = [(1-(средний объем опухоли в конце введения в группе обработки - средний объем опухоли в начале введения в группе обработки)) / (средний объем опухоли в конце обработки в контрольной группе с растворителем - средний объем опухоли в начале обработки в контрольной группе с растворителем)] × 100%. В случаях, когда регрессия опухоли присутствовала, TGI(%) = [1-(средний объем опухоли в конце введения доз в группе обработки - средний объем опухоли в начале введения доз в группе обработки) / средний объем опухоли в начале введения доз в группе обработки] × 100%.

[1080] 6.5. Результаты эксперимента

[1081] Таблица 30. Фармакодинамические параметры соединений в организмах мышей с трансплантированной опухолью

Разделение на группы 100,80 ± 31,28
(мм³, среднее значение ± SD) ΔT/ΔC (%) TGI (%) День 0 День 15 День 15 День 15 Носитель QD × 3 недели 202 ± 58 400 ± 111 - - Вариант осуществления 165-1
10 мг/кг 203 ± 74 267 ± 155 32,59 67,41 AMG-510
10 мг/кг 202 ± 72 324 ± 204 61,98 38,02

[1082] 6.6. Заключение по итогам эксперимента

[1083] Данные выше демонстрируют, что через 15 дней непрерывного перорального введения соединения в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения в значительной степени подавляли рост опухолей у «голых» мышей, которым трансплантировали клетки рака человека NCI-H358, в условиях перорального введения 10 мг/кг ежедневно, что было в значительной степени лучшим, чем в данных из источников.

[1084] Тестовый вариант осуществления 7. Тест ингибирующей активности в отношении калиевого канала hERG

[1085] 7.1. Получение клеток

[1086] 7.1.1. Клетки CHO-hERG культивировали в колбе размером 175 см², когда плотность клеток достигала 60-80%, культуральную среду удаляли, клетки промывали с помощью 7 мл PBS и затем расщепляли с помощью 3 мл Detachin.

[1087] 7.1.2. После полного расщепления добавляли 7 мл культуральной среды для нейтрализации, затем смесь центрифугировали, надосадочную жидкость откачивали и затем добавляли 5 мл культуральной среды с ресуспендированием, что обеспечивало плотность клеток 2-5 × 10⁶/мл.

[1088] 7.2. Получение раствора

[1089] Таблица 31. Состав внутриклеточной жидкости и внеклеточной жидкости

Реагент Внеклеточная жидкость (мМ) Внутриклеточная жидкость (мМ) CaCl₂ 2 5,374 MgCl₂ 1 1,75 KCl 4 120 NaCl 145 - Глюкоза 10 - HEPES 10 10 EGTA - 5 Na-ATP - 4 pH 7,40 (регулировали с помощью NaOH), осмолярность ~305 мОсмоль 7,25 (регулировали с помощью KOH), осмолярность ~290 мОсмоль

[1090] 7.3. Способ электрофизиологической регистрации

[1091] Процесс изолирования отдельных клеток посредством высокого значения сопротивления и переход в режим «целая клетка» осуществляли автоматически с помощью прибора Qpatch, после перехода в регистрирующий режим «целая клетка», клетки фиксировали при -80 мВ, затем подавали 5-секундный деполяризационный стимул, составляющий +40 мВ, сначала подавали 50 миллисекундное предварительное напряжение, составляющее -50 мВ и затем реполяризировали до -50 мВ в течение 5 секунд, затем обеспечивали возвращение до -80 мВ. Данную стимуляцию напряжением применяли каждые 15 секунд и регистрировали в течение 2 минут, затем обеспечивали регистрацию для внеклеточной жидкости в течение 5 минут и затем начинали процесс введения, концентрацию соединений подавали от самой меньшей тестируемой концентрации, каждую тестируемую концентрацию подавали в течение 2,5 минут и соединение для положительного контроля, 0,1 мкМ Cisapride, подавали после того, как непрерывно были поданы все концентрации. Тестировали по меньшей мере 3 клетки (n ≥3) при каждой концентрации.

[1092] 7.4. Тестируемое соединение

[1093] 7.4.1. 20 мМ исходного раствора соединения разбавляли внеклеточной жидкостью, добавляли 5 мкл 20 мМ исходного раствора соединения в 2495 мкл внеклеточной жидкости и 500-кратно разбавляли до 40 мкМ, и затем получали конечную подлежащую испытанию концентрацию путем последовательных 3-кратных серийных разбавлений во внеклеточном растворе, содержавшем 0,2% DMSO.

[1094] 7.4.2. Наибольшая тестируемая концентрация составляла 40 мкМ, в общем 6 концентраций соответственно представляли собой 40, 13,33, 4,44, 1,48, 0,49 и 0,16 мкМ.

[1095] 7.4.3. Содержание DMSO в конечной тестируемой концентрации составляло не более 0,2%, и данная концентрация DMSO не обеспечивала эффекта на калиевый канал hERG.

[1096] 7.5. Анализ данных

[1097] Экспериментальные данные анализировали с помощью программного обеспечения XLFit.

[1098] 7.6. Контроль качества

[1099] Внешние условия: влажность 20-50%, температура ~22-25°C.

[1100] Реагент: применяемый экспериментальный реагент приобретали у Sigma Company, и его чистота составляла > 98%.

[1101] Экспериментальные данные в отчете должны соответствовать следующим критериям:

[1102] значение сопротивления для изолирования целых клеток >100 МОм;

[1103] амплитуда следового тока >400 пА

[1104] Фармакологические параметры:

[1105] Ингибирующий эффект нескольких концентраций Cisapride в отношении канала hERG устанавливали в качестве положительного контроля.

[1106] 7.7. Результаты эксперимента

[1107] Таблица 32. Результаты ингибирования, осуществляемого вариантами осуществления настоящего изобретения, при нескольких значениях концентрации в отношении тока в hERG

Номер варианта осуществления hERG (мкМ) Вариант осуществления 114-1 >30 Вариант осуществления 150-1 >30 Вариант осуществления 165-1 >30 Вариант осуществления 166-1 >30

[1108] 7.8. Заключение по итогам эксперимента

[1109] Ингибирование, осуществляемое лекарственными средствами, в отношении сердечного калиевого канала hERG в основном было обусловлено синдромом удлиненного интервала QT, вызываемым лекарственными средствами. Из результатов эксперимента можно увидеть, что соединение в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения не имело очевидного ингибирующего эффекта в отношении сердечного калиевого ионного канала hERG и позволяет избежать токсического и побочного действия на сердце при высокой дозе.

[1110] Тестовый вариант осуществления 8. Схема теста в отношении стабильности в плазме крови

[1111] 8.1. Цель эксперимента

[1112] Цель данного эксперимента представляла собой изучение стабильности соединений в соответствии с вариантами осуществления в плазме крови мыши, крысы, собаки и человека.

[1113] 8.2. Цель эксперимента

[1114] 8.2.1. Получение раствора

[1115] 1) Получение плазмы

[1116] Собирали цельную кровь животных или человека, затем кровь помещали в пробирку для теста, содержавшую противосвертывающее средство, центрифугировали при 3500 об/мин в течение 10 мин и собирали верхний слой бледно-желтой плазмы крови.

[1117] 2) 10 мкМ тестируемого соединения (m/M/V=C)

[1118] Соединение отвешивали, получали исходный раствор с DMSO и получали рабочий раствор с 100 мМ фосфатного буфера.

[1119] 3) 10 мМ положительного контроля

[1120] (1) Пропантелин (пропантелин Mr = 449,4 Да)

[1121] Отвешивали 2,36 мг пропантелина и разбавляли до 10 мМ исходного раствора с помощью 1 мл DMSO; отмеряли пипеткой 10 мкл 10 мМ исходного раствора в 1 мл 100 мМ фосфатного буфера до конечной концентрации 100 мкМ.

[1122] (2) Мевинолин (ловастатин Mr = 404,5 Да)

[1123] Отвешивали 4,05 мг ловастатина и разбавляли до 10 мМ исходного раствора с помощью 1 мл DMSO; отмеряли пипеткой 10 мкл 10 мМ исходного раствора в 1 мл 100 мМ фосфатного буфера до конечной концентрации 100 мкМ.

[1124] 8.2.2. Способ осуществления эксперимента

[1125] 1) добавляли в свою очередь 285 мкл плазмы крови и 15 мкл 10 мкМ соединения (тестируемое соединение) в 96-луночный планшет и инкубировали при 37°C.

[1126] 2) отбирали 40 мкл в момент времени, составлявший 0, 15, 30, 60, 90, 120 мин соответственно, и добавляли 160 мкл прерывающего раствора на основе ацетонитрила, содержавшего внутренний стандарт.

[1127] 3) После центрифугирования (3500 об/мин, 10 мин) извлекали 50 мкл надосадочной жидкости и затем разбавляли с помощью 50 мкл DDH2O и вводили в LC-MS/MS.

[1128] 8.3. Условия хроматографии

[1129] Прибор: Shimadzu LC-20 AD;

[1130] хроматографическая колонка: Phenomenex Gemiu® C18 (50 × 4,6 мм, размер частиц 5 мкМ);

[1131] подвижная фаза: A: ацетонитрил, B: 0,1% раствор муравьиной кислоты, 0-8 мин: 5% A → 95% A, 2,0-2,1 мин: 90% A → 5% A; расход: 0,8 мл/мин; время осуществления: 5,0 мин; объем введения: 5 мкл.

[1132] 8.4. Условия масс-спектрометрии

[1133] Прибор: жидкостная хроматография с масс-спектрометрией API4000, AB, США;

[1134] источник ионов представлял собой источник ионизации электрораспылением (ESI);

[1135] температура сухого газа (N₂) составляла 500°C;

[1136] напряжение электрораспыления составляло 5500 В;

[1137] способ обнаружения представлял собой обнаружение в режиме положительных ионов;

[1138] режим сканирования представлял собой мониторинг селективного отклика (MRM);

[1139] время сканирования составляло 0,1 с.

[1140] 8.4. Результаты эксперимента

[1141] Таблица 33. Результаты в отношении стабильности в плазме крови соединений в соответствии с вариантами осуществления

Вид и род Номер Остаточное содержание (%) t_1/2 (мин) 0 мин 15 мин 30 мин 60 мин 120 мин Человек Пропантелин 100,00 79,98 50,52 14,65 0,72 21,03 Вариант осуществления 114-1 100,00 97,39 98,79 94,50 87,91 660,77 Вариант осуществления 150-1 100,00 97,95 100,46 97,37 93,81 1383,71 Вариант осуществления 166-1 100,00 99,15 94,74 89,14 78,85 338,58 Вариант осуществления 165-1 100,00 102,34 100,28 90,27 87,22 500,87 AMG 510 100,00 93,77 85,72 82,51 64,44 198,80 Крыса Ловастатин 100,00 21,15 1,77 0,36 0,30 6,69 Вариант осуществления 114-1 100,00 99,04 101,03 97,16 84,63 489,40 Вариант осуществления 150-1 100,00 97,08 94,54 90,84 82,91 453,73 Вариант осуществления 166-1 100,00 93,20 98,32 99,08 96,46 6505,51 Вариант осуществления 165-1 100,00 95,57 96,73 93,97 91,93 1159,17 AMG 510 100,00 100,85 93,03 77,54 56,77 137,24 Мышь Пропантелин 100,00 79,79 48,66 23,39 6,66 27,74 Вариант осуществления 114-1 100,00 102,67 98,51 95,49 84,58 453,87 Вариант осуществления 150-1 100,00 103,68 104,44 97,95 88,36 551,41 Вариант осуществления 166-1 100,00 105,42 100,02 99,12 85,55 465,04 Вариант осуществления 165-1 100,00 100,58 99,52 99,64 92,32 1015,92 AMG 510 100,00 97,50 82,58 81,82 63,23 184,89 Собака Ловастатин 100,00 95,25 95,45 75,66 36,25 80,22 Вариант осуществления 114-1 100,00 97,87 96,23 92,42 85,48 534,11 Вариант осуществления 150-1 100,00 96,78 94,25 92,45 89,54 830,19 Вариант осуществления 166-1 100,00 99,98 98,79 93,69 86,16 532,60 Вариант осуществления 165-1 100,00 97,71 96,32 94,86 92,49 1173,33 AMG 510 100,00 98,88 101,14 93,43 91,92 884,42

[1142] 8.6. Заключение по итогам эксперимента

[1143] Данные выше демонстрируют, что стабильность в плазме крови соединений в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения является высокой с небольшим различием в зависимости от вида.

[1144] Тестовый вариант осуществления 9. Тест в отношении одномоментного ингибирования фермента CYP

[1145] 9.1. Цель эксперимента

[1146] С применением системы микросомальной инкубации печени человека ингибирование подтипов фермента CYP450 соединениями было быстро предсказано с помощью одномоментного способа.

[1147] 9.2. Цель эксперимента

[1148] 9.2.1. Получение раствора

[1149] 2,5 мМ NADPH: добавляли 100 мМ фосфатный буфер к 4,165 мг NADPH (восстановленный никотинамидадениндинуклеотидфосфат) до 2 мл. 0,25 мг/мл микросом: добавляли 4 мл 100 мМ фосфатного буфера к 50 мкл 20 мг/мл микросом и тщательно смешивали.

[1150] Получение реакционной смеси для соединений, подлежащих испытанию

[1151] Соединение в соответствии с вариантом осуществления, подлежащее испытанию, отвешивали и разбавляли до 10 мМ с помощью DMSO и затем разбавляли до 100 мкМ с помощью 100 мМ фосфатного буфера.

[1152] 9.2.2. Способ осуществления эксперимента

[1153] 1. В 96-луночном планшете предварительно инкубировали 40 мкл микросом печени, 10 мкл субстрата, 10 мкл соединения, подлежащего испытанию, в течение 3 мин.

[1154] 2. Добавляли 40 мкл NADPH.

[1155] 3. Добавляли 300 мкл прерывающего раствора на основе ацетонитрила, содержавшего внутренний стандарт, на 20 мин.

[1156] 4. Введение с применением центробежной силы.

[1157] 9.3. Результаты эксперимента

[1158] Таблица 34. Результаты в отношении одномоментного ингибирования фермента CYP, осуществляемого соединениями в соответствии с вариантами осуществления

Номер IC₅₀ (нМ) 1A2 2C9 2C19 2D6 3A4-M 3A4-T Контроль 0,064 0,459 0,293 0,099 0,089 0,117 Вариант осуществления 114-1 >100 84,6 >100 >100 19,0 >100 Вариант осуществления 150-1 48,9 59,3 43,2 44,5 4,6 18,0 Вариант осуществления 165-1 66,7 58,8 28,8 21,2 4,7 9,1

[1159] Примечание:

[1160] высокая степень ингибирования: IC₅₀ <1 мкМ; средняя степень ингибирования: 1 мкМ <IC₅₀ <10 мкМ; низкая степень ингибирования: IC₅₀ >10 мкМ

[1161] 9.4. Заключение по итогам эксперимента

[1162] Данные выше демонстрируют, что соединение в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения не обладает высокой степенью ингибирования в отношении каждого из подтипов фермента CYP, и риск DDI является небольшим.

[1163] Тестовый вариант осуществления 10. Тест в отношении степени связывания с белками плазмы крови

[1164] 10.1. Цель эксперимента

[1165] Цель данного экспериментального способа представляла собой определение связывания соединений в соответствии с вариантами осуществления с белками плазмы крови в плазме крови.

[1166] 10.2. Экспериментальные приборы и материалы

[1167] Жидкофазный масс-спектрометр, центрифуга, вортекс-мешалка, пипетка, устройство непрерывной подачи жидкости, 96-луночный планшет, гомогенизатор ткани (для анализа образцов ткани), 50% водный раствор метанола, раствор ацетонитрила со внутренним стандартом, холостая матрица (плазма крови, моча или гомогенат ткани и т. д.)

[1168] 10.3. Стадии эксперимента

[1169] 10.3.1. Получение исходного раствора A для тестируемого вещества

[1170] Соединение в соответствии с вариантом осуществления получали в виде 1 мМ раствора A с DMSO.

[1171] 10.3.2. Получение раствора B плазмы крови

[1172] Раствор A добавляли в раствор плазмы крови и получали в виде 5 мМ раствора B.

[1173] 10.3.3. Способ обработки

[1174] 1) Добавляли 200 мкл раствора B внутрь мембраны.

[1175] 2) Добавляли 350 мкл PBS в пространство вне мембраны.

[1176] 3) Инкубирование на водной бане с температурой 37°C в течение 6 часов.

[1177] 4) Образцы обрабатывали с разбавлением и осуществляли обнаружение с помощью масс-спектрометрии.

[1178] 10.4. Условия хроматографии

[1179] Прибор: Shimadzu LC-20 AD;

[1180] хроматографическая колонка: Phenomenex Gemiu® C18 (50 × 4,6 мм, размер частиц 5 мкМ);

[1181] Подвижная фаза: A: ацетонитрил, B: 0,1% раствор муравьиной кислоты, 0-0,5 мин: 5% A → 90% A, 2,0-2,1 мин: 90% A → 5% A; расход: 0,8 мл/мин; время осуществления: 5,0 мин; объем введения: 5 мкл.

[1182] 10.5. Условия масс-спектрометрии

[1183] Прибор: жидкостная хроматография с масс-спектрометрией API4000, AB, США;

[1184] источник ионов представлял собой источник ионизации электрораспылением (ESI);

[1185] температура сухого газа (N₂) составляла 500°C;

[1186] напряжение электрораспыления составляло 5500 В;

[1187] способ обнаружения представлял собой обнаружение в режиме положительных ионов;

[1188] режим сканирования представлял собой мониторинг селективного отклика (MRM); время сканирования составляло 0,1 с.

[1189] 10.6. Результаты эксперимента

[1190] Таблица 35. Степень связывания соединения в соответствии с вариантом осуществления с белками плазмы крови

Номер Человек Крыса Мышь Собака Вариант осуществления 114-1 98,0 90,5 88,4 82,6 Вариант осуществления 150-1 99,8 94,9 90,1 98,7 Вариант осуществления 165-1 99,7 97,9 93,9 98,7 Вариант осуществления 166-1 96,8 95,4 96,3 92,5

[1191] 10.7. Заключение по итогам эксперимента

[1192] Данные выше демонстрируют, что соединения в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения проявляют высокую степень связывания с белками плазмы крови с небольшим различием в зависимости от вида.

[1193] Тестовый вариант осуществления 11. Определение фармакокинетики в организмах мышей, несущих опухоль

[1194] 11.1. Цель исследования

[1195] Фармакокинетическое поведение соединения в соответствии с вариантом осуществления 165 и соединения AMG-510, вводимых перорально при дозе 6 мг/кг в организмах мышей (плазма крови, опухолевая ткань и кишечник) изучали с применением мышей, несущих опухоль MiaPaca 2, в качестве тестируемых животных.

[1196] 11.2. Схема теста

[1197] 11.2.1. Тестируемые лекарственные средства

[1198] Вариант осуществления 165-1 по настоящему изобретению, соединение AMG-510, собственного изготовления.

[1199] 11.2.2. Тестируемые животные

[1200] 24 мыши, несущие опухоль MiaPaca 2, самки. По 3 для каждого момента времени (0 ч, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 16 ч, 24 ч). Shanghai xipuer-bikai Laboratory Animal Co., Ltd, лицензия на разведение животных № (SCXK (Шанхай) 2018-0006.

[1201] 11.2.3. Состав лекарственного средства

[1202] Отвешивали 5 г гидроксиметилцеллюлозы, растворяли в 1000 мл очищенной воды и добавляли 10 г Tween 80. Смесь тщательно смешивали с образованием прозрачного раствора.

[1203] Соединение в соответствии с вариантом осуществления 165-1 и соединение AMG-510 отвешивали и растворяли в растворе, смесь тщательно встряхивали и осуществляли обработку ультразвуком в течение 15 минут с получением однородной суспензии с концентрацией 0,6 мг/мл.

[1204] 11.2.4. Введение

[1205] Мышам, несущим опухоль MiaPaca 2, осуществляли введение при дозе 6 мг/кг в объеме 10 мл/кг, соответственно, на основе веса тела перорально после периода без пищи (животным не осуществляли введение в момент времени, представлявший собой 0 ч).

[1206] 11.2.5. Сбор образцов

[1207] Перед введением и после введения мышей умерщвляли с помощью CO₂, отбирали 0,5 мл крови из сердца и помещали в пробирку с EDTA-2K, центрифугировали при 4°C, 6000 об/мин в течение 6 мин с отделением плазмы крови и хранили при -80°C; после взвешивания опухолевых тканей их помещали в пробирки для центрифугирования объемом 2 мл и хранили при -80°C. Ткани двенадцатиперстной кишки, подвздошной кишки и толстой кишки отрезали ножницами, их содержание удаляли и дважды очищали с помощью PBS, затем поглощали воду фильтровальной бумагой, их взвешивали, помещали в пробирки для центрифугирования объемом 2 мл и хранили при -80°C.

[1208] 11.3. Результаты эксперимента: результаты конечного определения, полученные путем применения способа LCMS/MS, показаны в таблице 36.

[1209] Таблица 36. Фармакокинетические параметры соединений по настоящему изобретению в организмах мышей

Номер соединения Соотношение
(T/P) T_1/2
(ч) MRT
(ч) AMG-510 Плазма крови 0,42 0,3 0,8 Опухоль 0,3 0,7 Вариант осуществления 165-1 Плазма крови 0,57 0,5 0,9 Опухоль 0,9 1,5

[1210] 11.4. Заключение по итогам эксперимента

[1211] При дозе 6 мг/кг соотношение концентрации соединений в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения в опухоли мыши и концентрации в крови было более высоким, чем таковое для AMG-510, с большим T_1/2 и MRT.

[1212] Хотя выше описаны конкретные варианты осуществления настоящего изобретения, специалисту в данной области техники следует понимать, что они являются исключительно иллюстративными вариантами осуществления, и что в эти варианты осуществления может быть внесен ряд изменений или модификаций без отступления от принципов и сути настоящего изобретения. Следовательно, объем защиты настоящего изобретения определяется прилагаемой формулой изобретения.

Изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (XI), или его фармацевтически приемлемой соли,

где M1 представляет собой кольцо С представляет собой фенил; выбрано из R14 выбран из водорода или амино, R15 представляет собой С1-3алкил; R10 представляет собой галоген; R11 представляет собой водород, Rf выбран из водорода или С1-6алкила, Rg выбран из водорода, галогена, амино, гидроксила, С1-6алкила, -(CH2)n2SRee или -(CH2)n2C(O)NReeRff; каждый из Ree и Rff выбран из водорода; r представляет собой целое число от 1 до 2; s представляет собой целое число от 1 до 4; n2 представляет собой 0; и q равняется 0, 1 или 2, а также к фармацевтической композиции и применению соединения в получении лекарственных препаратов на основе ингибиторов KRAS. Технический результат: получены новые соединения, которые могут быть использованы для лечения синдрома Нунан, синдрома LEOPARD, лейкоза, нейробластомы, меланомы, рака пищевода, опухоли головы и шеи, рака молочной железы, рака легкого и рака толстой кишки и других заболеваний или состояний, опосредованных мутантным KRAS G12C. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 36 табл.

1. Соединение, представленное общей формулой (XI), или его фармацевтически приемлемая соль,

где

M₁ представляет собой

кольцо С представляет собой фенил;

выбрано из

R₁₄ выбран из водорода или амино,

R₁₅ представляет собой С_1-3алкил;

R₁₀ представляет собой галоген;

R₁₁ представляет собой водород,

R^f выбран из водорода или С_1-6алкила,

R^g выбран из водорода, галогена, амино, гидроксила, С_1-6алкила, -(CH₂)_n2SR_ee или -(CH₂)_n2C(O)NR_eeR_ff;

каждый из R_ee и R_ff выбран из водорода;

r представляет собой целое число от 1 до 2;

s представляет собой целое число от 1 до 4;

n2 представляет собой 0; и

q равняется 0, 1 или 2.

2. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где кольцо С выбрано из следующих групп:

или

R₁₅ представляет собой метил.

3. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение дополнительно представлено общей формулой (XI-B),

где

R^f выбран из водорода или метила;

R₁₀ выбран из фтора или хлора;

R₁₅ выбран нз метила;

каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из гидроксила, амино, фтора, хлора или метила;

каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода, фтора, хлора или метила;

R₂₅ представляет собой водород или фтор.

4. Соединение по п. 3 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение дополнительно представлено общей формулой (XI-С) или (XI-D),

где

R^f выбран из водорода или метила;

R₁₀ выбран из водорода, фтора, хлора, брома или метила;

каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из амино или фтора, и каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода, фтора, хлора или метила;

или каждый из R₂₁ и R₂₂ независимо выбран из гидроксила или фтора, и каждый из R₂₃ и R₂₄ независимо выбран из водорода или фтора;

R₂₅ выбран из водорода или фтора.

5. Соединение по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где структура соединения является следующей:

или

6. Соединение по любому из пп. 1-5 или его фармацевтически приемлемая соль, где если соединение выбрано из следующих структур соединений, то соединение может быть дополнительно разделено на энантиомерные аксиально хиральные изомеры:

или

7. Соединение по п. 6 или его фармацевтически приемлемая соль, где структура аксиально хирального изомера соединения является следующей:

или

8. Способ получения соединения по п. 3, представленного общей формулой (XI-B), или его фармацевтически приемлемой соли, который предусматривает следующие стадии, на которых:

удаляют защитную группу из соединения, представленного общей формулой (XI-B4), в присутствии кислоты с получением соединения, представленного общей формулой (XI-B 3), или его фармацевтически приемлемой соли;

проводят реакцию конденсации между соединением, представленным общей формулой (XI-B3), и соединением, представленным общей формулой (XI-А4), в присутствии основания с получением соединения, представленного общей формулой (XI-B2), или его фармацевтически приемлемой соли;

проводят реакцию сочетания между соединением, представленным общей формулой (XI-B2), и соединением, представленным общей формулой (XI-B1), в присутствии катализатора, выбранного из Pd(dppf)Cl₂, и основания, выбранного из КОАс или Cs₂CO₃ с получением соединения, представленного общей формулой (XI-B), или его фармацевтически приемлемой соли;

Pg представляет собой трет-бутоксикарбонил;

R₂₆ представляет собой -В(ОН)₂;

R₂₇ представляет собой галоген.

9. Способ получения соединения по п. 3, представленного общей формулой (XI-B), или его фармацевтически приемлемой соли, который предусматривает следующие стадии, на которых:

удаляют защитную группу из соединения, представленного общей формулой (XI-B6), в присутствии кислоты с получением соединения, представленного общей формулой (XI-B5), или его фармацевтически приемлемой соли;

проводят реакцию конденсации между соединением, представленным общей формулой (XI-B5), и соединением, представленным общей формулой (XI-A4), в присутствии основания с получением соединения, представленного общей формулой (XI-B), или его фармацевтически приемлемой соли;

Pg представляет собой трет-бутоксикарбонил;

R₂₇ представляет собой галоген.

10. Фармацевтическая композиция для ингибирования активности KRAS, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-7 или его фармацевтически приемлемой соли и одно или более из фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.

11. Применение соединения по любому из пп. 1-7 или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции по п. 10 в получении лекарственных препаратов на основе ингибиторов KRAS.

12. Применение по п. 11, отличающееся тем, что ингибитор KRAS представляет собой мутантный KRAS G12C.

13. Применение соединения по любому из пп. 1-7 или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции по п. 10 в получении лекарственных препаратов, предназначенных для лечения синдрома Нунан, синдрома LEOPARD, лейкоза, нейробластомы, меланомы, рака пищевода, опухоли головы и шеи, рака молочной железы, рака легкого и рака толстой кишки и других заболеваний или состояний, опосредованных мутантным KRAS G12C.

14. Применение по п. 13, отличающееся тем, что заболевание или состояние выбрано из немелкоклеточного рака легкого, рака толстой кишки, рака пищевода и опухоли головы и шеи.