СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ДЛИНЫ ТЕЛОМЕР ЛЕЙКОЦИТОВ НА ФОНЕ ПРИЁМА ЗАМЕСТИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ПОЛОВЫМИ СТЕРОИДАМИ У ПАЦИЕНТОК С СИНДРОМОМ ТЕРНЕРА ИЛИ ПРЕЖДЕВРЕМЕННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ ЯИЧНИКОВ Российский патент 2024 года по МПК G01N33/49 C12Q1/6841 C12Q1/6851 C12Q1/686 C12Q1/6883 

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, акушерству и гинекологии, геронтологии, и может быть использовано для вычисления у пациенток длины теломер лейкоцитов - маркера клеточного старения пациенток в зависимости от длительности получаемой заместительной терапии половыми стероидами.

Уровень техники

Проблема биологического старения женщин вкупе с разработкой способов анти-ageing диагностики, профилактики и лечения на протяжении многих лет занимает ключевое положение в области охраны женского здоровья. Наиболее перспективной и научно обоснованной синергической теорией старения представляется синергизм эндокринной и теломеразной теорий. Согласно эндокринной теории, интенсивность старения связана со снижением числа и аффинности эстрогеновых рецепторов ERα и ERβ на органах-мишенях: эндотелиальной выстилки кровеносных сосудов, костной ткани, урогенитальном тракте, головном мозге и т.д. (Gravholt СН, Andersen NH, Conway GS, et al. Clinical practice guidelines for the care of girls and women with Turner syndrome: proceedings from the 2016 Cincinnati International Turner Syndrome Meeting. Eur J Endocrinol. 2017;177(3):G1-G70. https://doi.org/10.1210/endo-23-5-566.10.1530/EJE-17-0430). Согласно теломеразной теории в основе старения лежит процесс дисфункции фермента теломеразы и ускоренного возраст-ассоциированного укорочения теломер (от др.-греч. «τέλος» - конец + «μέρος» - часть) - концевых структур ДНК, состоящих из тандемных повторов нуклеотидных последовательностей TTAGGG на 3' -конце (Keefe DL, Marquard К, Liu L. The telomere theory of reproductive senescence in women. Curr Opin Obstet Gynecol. 2006;18(3):280-285. https://doi.org/10.1210/endo-23-5-566.10.1097/0l.gco.0000193019.05686.49). Стабильность'ДНК теломер обеспечивается за счет присутствия белков-шелтеринов (ТРР1) (Liu В, Не Y, Wang Y, Song Н, Zhou ZH, Feigon J. Structure of active human telomerase with telomere shelterin protein TPP1. Nature. 2022;604(7906):578-583. doi:10.1038/s41586-022-04582-) и ревертазно-активного высокорегулируемого клеточного фермента теломеразы, защищающих хромосомную ДНК от различных повреждений в течение всего клеточного цикла. Результаты фундаментальных исследований Gaydosh, Lauren et al. (2020), указывают на статистически значимый протективный эффект действия эстрогенов на длину теломер у женщин к концу пубертата по сравнению с мужчинами in vitro (исходно при рождении: 7,01±0,03 kb (женщины) против 6,87±0,04 (мужчины); наблюдение: 6,79±0,03 (женщины) против 6,65±0,03 (мужчины), р=0,005) (Gaydosh, Lauren et al. "Demographic and developmental patterns in telomere length across adolescence." Biodemography and social biology vol. 66,3-4 (2020): 208-219. doi:10.1080/19485565.2021.1983758). Особый интерес для клиницистов представляют пациентки с эстрогенным дефицитом в исходе дисгенетических (синдром Тернера, СТ) и аутоиммунных (преждевременная недостаточность яичников, ПНЯ) репродуктивных нарушений.

Синдром Тернера (СТ) - это врожденное заболевание, характеризующееся внутриутробной дисгенезией гонад, апоптозом и заменой на волокнистую соединительную ткань (т.н. «гонадный тяж») предшественников половых клеток. Первопричиной является наличие у пациентки классического (45, Х0) и мозаичных кариотипов (46,X,i(Xq)+мозаики с линиями клеток i(Xq); 46,X,del (Xq)+мозаики с линиям клеток del(Xq); 45X0/46XY; 45Х/46ХХ) (Gravholt СН, Andersen NH, Conway GS, et al. Clinical practice guidelines for the care of girls and women with Turner syndrome: proceedings from the 2016 Cincinnati International Turner Syndrome Meeting. Eur J Endocrinol. 2017;177(3):G1-G70. https://doi.org/l0.1210/endo-23-5-566.10.1530/EJE-17-0430).

Преждевременная недостаточность яичников (ПНЯ) - это малоизученная патология, вероятно аутоиммунного характера, для которой характерно сочетание симптомов дефицита эстрогенов (вазомоторные проявления, генитоуринарный синдром) и гипергонадотропного гипогонадизма (повышение фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов) с манифестацией до 40 лет у ранее репродуктивно-сохранных женщин (Piedade КС, Spencer Н, Persani L, Nelson LM. Optimizing Fertility in Primary Ovarian Insufficiency: Case Report and Literature Review. Front Genet. 2021;12:676262. Published 2021 Jun 23. doi:10.3389/fgene.2021.676262). Процесс апоптоза (гибели) фолликулов приводит к цепной реакции, ведущей к снижению уровня антимюллерова гормона (АМГ) и эстрогенов, в конечном счете - к бесплодию.

Наличие первичной (в исходе синдрома Тернера) или вторичной (в исходе преждевременной недостаточности яичников) аменореи у пациенток является прямым показанием к назначению пожизненной заместительной терапии половыми стероидами [Gaydosh, Lauren et al. "Demographic and developmental patterns in telomere length across adolescence." Biodemography and social biology vol. 66,3-4 (2020): 208-219. doi:10.1080/19485565.2021.1983758]. Игнорирование такого рода терапии приводит к развитию заболеваний, тесно ассоциированных со старением: артериальная гипертония, дислипидемия, сахарный диабет 2 типа, ишемическая болезнь сердца, цереброваскулярная болезнь, хроническая болезнь почек, остеопороз, саркопения. [Roake CM, Artandi SE. Regulation of human telomerase in homeostasis and disease. Nat Rev Mol Cell Biol. 2020;21(7):384-397. doi:10.1038/s41580-020-0234-z].

Известен способ прогностического определения длины теломер (Патент СА №2845047), отражающий наличие прогрессирование заболевания (старение, болезнь Альцгеймера; инфаркт головного мозга; болезнь сердца; хроническая ВИЧ-инфекция; хронический гепатит; кожные заболевания; хроническое воспалительное заболевание кишечника; язвенный колит; анемия; атеросклероз; синдром Барретта, рак), характеризующихся укорочением теломер и включающий: анализ длины теломер с высоким разрешением для определения наибольшего среднего значения длины теломер методом секвенирования, при котором обнаруживается слипание концов теломер в образцах тканей, полученных от индивидуумов с одинаковым заболеванием для дальнейшего определения порогового значения средней длины теломер, при котором теломеры становятся нефункциональными и способными к слиянию, определение прогностической средней длины теломер в образах тканей от индивидуумов с одинаковым заболеванием путем учета средних значений длин теломер, меньших, чем установленная пороговая длина, и усреднением средней длины теломер в этих образцах, определение среднего тестового значения длины теломер в образцах пациентов, у которых предполагается вышеупомянутое заболевание и в которых вышеопределенное тестовое значение длины теломер меньше, чем указанное в п. 1 прогностическое значение средней длины теломер, из чего следует, что первое введение препарата недостаточно и/или ответ на препарат слабый и/или выживаемость в целом снижена, определение средней тестовой длины теломер в образцах, полученных от пациентов с предположительным заболеванием, когда вышеуказанное среднее тестовое значение длины теломер выше, чем указанное прогностическое значение длины теломер, из чего следует, что первая обработка препаратом действенна и/или ответ на препарат положительный и/или выживаемость в целом повышена.

Недостатками известного способа являются отсутствие четких алгоритмов взятия и обработки пула образцов различных тканей организма в рамках подготовки к клиническому исследованию. Следует констатировать невозможность использования известного способа в рамках отдельно взятого амбулаторного приема (минимальное время подготовки 1 час); необходимость непосредственного участия специалиста-биоинформатика для правильного внесения, расчета и трактовки результатов; невозможность осуществления контроля влияния биохимических маркеров воспаления (С-реактивный белок) на теломеразу - фермента, обеспечивающего стабильность длины теломер лейкоцитов в зависимости от получения какой-либо медикаментозной терапии.

Наиболее близким к заявляемому является способ прогнозирования длины теломер клеток лейкоцитов у пациентов с нейродегенеративными заболеваниями: болезнью Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнью Пика (лобно-височная деменция), боковым амиотрофическиим склерозом и прогрессирующим супрануклеарным парезом взора (Rodriguez-Fernandez В, Gispert JD, Guigo R, Navarro A, Vilor-Tejedor N, Crous-Bou M. Genetically predicted telomere length and its relationship with neurodegenerative diseases and life expectancy. Comput Struct Biotechnol J. 2022;20:4251-4256. Published 2022 Aug 6. doi: 10.1016/j.csbj.2022.08.006). Данный способ основан на сопоставлении 21 вариантов однонуклеотидных полиморфизмов, которые по данным биоинформатических эпидемиологических регистров и полнгеномного поиска ассоциаций статистически значимо (p<5×10^-8) ассоциированы с определенной длиной теломер лейкоцитов периферической крови и частотой заболевания нейродегенеративных заболеваний. По данным европейских эпидемиологических регистров (охват 78 592 человек).

Недостатком данного способа является невозможность применения данного способа среди выборки пациенток с ПНЯ/СТ; сниженная точность результатов за счет отсутствия в алгоритме этапа флуоресцентной гибридизации in situ; потенциальными факторами снижения точности также выступают потенциально имеющиеся коморбидные состояния (воспалительные реакции, несоблюдение правил тощакового забора, нередко сопутствующие ПНЯ/СТ метаболические нарушения (гипертриглицеридемия, дислипидемия, гипергликемия). Кроме того, невозможно осуществить прогноз и коррекцию влияния получаемой терапии (половыми стероидами) на теломеразу -фермента, обеспечивающего стабильность длины теломер в зависимости от получения какой-либо медикаментозной терапии (например, заместительной терапии половыми стероидами).

Технической проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, являются: отсутствие способов персонифицированного клинико-генетического контроля лечебного процесса у пациенток с СТ или ПНЯ с учетом получаемой ЗГТ, отсутствие пациент-ориентированной интерпретации полученных результатов и методов коррекции получаемой ЗГТ с использованием технологий искусственного интеллекта, неэффективность современных известных лабораторно-генетических технологий применительно к пациенткам с СТ или ПНЯ.

Раскрытие сущности изобретения

Техническим результатом, на достижение которого направлено заявленное изобретение, является прогнозирование репликативного клеточного потенциала (длины теломер лейкоцитов) у пациенток с СТ или ПНЯ (ранее никогда не принимавших ЗГТ) как целевого персонифицированного показателя эффективности приема ЗГТ в начальной точке (момент инициации ЗГТ) и конечной точке (5 лет от момента инициации ЗГТ) с целью профилактики возраст-ассоциированных заболеваний человека, с целью обеспечение сохранности активности теломеразы посредством геропротективного влияния ЗГТ и периодичностью мониторинга 1 раз в год (контрольная точка) путем венозного забора и лабораторного исследования биологического материала пациентки. Полученный прогноз играет ключевую роль при оценке эффективности терапии профилактической терапии возраст-дефицит-ассоциированных заболеваний в рамках "окна терапевтических возможностей" (сохранение аффинности эстрогеновых рецепторов ERa и ERp в течение 5 лет от начала менопаузы) в контрольных точках. Имеет высокую точность: чувствительность - 98,2465%, специфичность - 92,6314%.

Технический результат достигается за счет реализации способа, включающего определение следующих показателей: прогнозируемая длительность приема ЗГТ половыми стероидами базальная длина теломер в момент наступления менопаузы, далее вычисляют значение по формуле:

.

Способ характеризуется тем, что базальную длину теломер определяют как среднее арифметическое между длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью количественной ПЦР в реальном времени и длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью цитогенетической флуоресцентной гибридизации in situ.

Способ оценки эффективности заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме у пациенток с синдромом Тернера или Преждевременной недостаточностью яичников, включает определение длины теломер на дату оценки через лет и сравнение со спрогнозированной длиной теломер на дату начала приема ЗГТ с использованием длительности приема если оказывается выше, идентичной или менее, чем на 15% ниже терапию считают эффективной; если оказывается на 15% или более ниже, чем терапию считаю неэффективной и направляют женщину на консультацию врача-гериатра для коррекции терапии.

Способ характеризуется тем, что длину теломер определяют как среднее арифметическое между длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью количественной ПЦР в реальном времени и длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью цитогенетической флуоресцентной гибридизации in situ.

Способ также характеризуется тем, что сравнение со спрогнозированной длиной теломер проводят 1 раз в год в течение 5 лет после момента наступления менопаузы и начала заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме.

Определение потенциально достижимой длины теломер (в килобазах, [кБ]) в зависимости от длительности получения 17β-эстрадиола в составе эстроген-гестагенной терапии в циклическом режиме (1 или 2 мг 17β-эстрадиола +5 или 10 мг дидрогестерона) по поводу преждевременной недостаточности яичников или синдрома Тернера. Результат основан на способности 17β-эстрадиола сохранять и стимулировать активность фермента теломеразы, обеспечивая протективное влияние на длину теломер лейкоцитов -репликативный маркер клеточного старения: чем выше длина теломер, тем больше ожидаемая продолжительность жизни. Действие дидрогестерона способствует предотвращению риска развития гиперплазии эндометрия и/или канцерогенеза, а также сохранению благоприятного действия эстрогенов на липидный спектр (общий холестерин, липопротеиды низкой/высокой плотности, триглицериды).

Прогнозирование пациентам ожидаемой длины теломер - определяется за счет таких параметров, как начальная (базальная) длина теломер на момент наступления менопаузы, длительность приема заместительной терапии половыми стероидами (в частности, в циклическом режиме с дозой эстрогенового компонента 1 или 2 мг и прогестагенового компонента в дозе 5 или 10 мг). Контроль процесса достижения конечной (целевой) длина теломер на 5 год приема заместительной терапии половыми стероидами осуществляется ежегодно с периодичностью 1 раз в год.

Заявляемый способ измерением базальной длины теломер при помощи выведения средней арифметической величины между длиной теломер лейкоцитов по данным количественной полимеразной цепной реакции с проточной цитометрией и аналогичного показателя по результатам цитогенетической флуоресцентной гибридизации in situ (Flow-FISH) геномной ДНК, экстрагированной из ДНК лейкоцитов крови пациенток (полученных путем венозного забора из кубитальной вены), а также использованием числовых коэффициентов в соответствии с методикой математического линейного регрессивного анализа. Применение заявляемого способа способствует улучшению контроля эффективности инициируемой ЗГТ в целях персонализированной профилактики развития возраст-ассоциированных заболеваний у женщин с СТ или ПНЯ. Осуществление изобретения

Во время первичного амбулаторно-поликлинического/стационарного приема врач в обязательном порядке проводит сбор анамнеза жизни (лат.anamnesis vitae), акушерско-гинекологического и лекарственного анамнеза со слов пациентки и предоставленной медицинской документации. При осмотре пациенток с синдромом Тернера уточняют хронологический возраст, данные кариотипа, соматический статус, и его длительность. При осмотре пациенток с преждевременной недостаточностью яичников уточняют возраст пациентки, возраст наступления аменореи, факт приема ЗГТ и его длительность. Перед предполагаемым началом заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме (начальная доза: 1 мг 17β-эстрадиол +5 мг прогестагенового компонента) пациентке предлагается при условии подписания информированного согласия пройти венозный забор крови из кубитальной вены с целью последующей оценки базальной длины теломер (нулевая точка) методом лабораторно-генетического исследования. При условии получения письменного согласия пациентки в момент предполагаемого наступления менопаузы у пациенток из группы с преждевременной недостаточностью яичников (клинически - вазомоторные проявления в виде потливости, жара + лабораторно - уровень ФСГ сыворотки> 22 МЕ/л), и группы находящихся перед вступлением в хронологический период пубертата пациенток с синдромом Тернера производится забор из кубитальной вены биологического материала (цельной крови) натощак для определения начальной (базальной - в 0 точке) длины теломер лейкоцитов (лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов). В течение не менее 2 часов (во избежание свертывания) биоматериал для надлежащего выделения цельных клеток разбавляют в соотношении 1:1 либо фосфатно-буферным физиологическим раствором (PBS, без Са²⁺, Mg²⁺), либо фосфатно-солевым буфером Дульбекко (DPBS, без Са²⁺, Mg²⁺). Применение буферов с фосфатным компонентом наиболее эффективно имитирует реологические свойства жидкой части крови и предотвращает нежелательного свертывания. Разбавленная кровь смешивается с раствором полисахарозы 400 с диатризоатом натрия (из расчета 1,5 объема крови на 1 объем раствора с плотностью 1,077 г/мл) с последующим центрифугированием в течение 30 мин при ускорении 400 g, скорости 10000 об/мин) и температуре 18-20°С. После центрифугирования собирают мононуклеарную фракцию клеток крови, образующую белесый мениск на границе «кровь-PBS/DPBS». Экстракция (выделение) ДНК из отмытого лейкоцитарного осадка проводится на спин-колонках с мембраной из диоксида кремния как вручную, так и автоматически. Далее проводится оценка относительной длины теломер (ДТЛ) лейкоцитов на геномной ДНК; данный процесс может проводиться 2 методами: либо количественной полимеразной цепной реакцией (ПНР) либо по алгоритму Flow-FISH (Flow Fluorence in Situ Hybridization). Применение количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет определять среднюю длину теломер, метод Flow-FISH - как среднюю длину теломер клеточного образца, так и количество наиболее коротких теломер в образце. Наиболее эффективным является сочетанное проведение вышеуказанных методик. Вначале пробирка с образцом экстрагированной ДНК помещается в амплификатор с последующим выполнением 35 циклов обработки, каждый из которых состоит из трех стадий: денатурации, элонгации и терминации. Двухцепочечная ДНК-матрица нагревается до 94-96°С на 0,5 - 2 минуты, с целью разрыва водородных связей между цепями 5'→3' и 3'→5'. После разделения температура амплификатора проводится отжиг материала при температуре 45°С в течение 0,5-2 минут. Затем в образец вводятся праймер (олигонуклеотид) и рекомбинантный препарат фермента Taq-полимеразы (термостабильная ДНК-зависимая-ДНК-полимераза бактерии Thermus aquaticus), которая реплицирует матричную цепь при температуре 72°С, используя праймер в качестве затравки (10-15 мин). После завершения количественной ПЦР проводится флуоресцентная гибридизация in situ. Проводят флуоресцентное окрашивание полученных фрагментов ДНК. В рамках данной технологии используются меченые флуоресцеином (для окрашивания теломерных повторов) пептидо-нуклеиновокислотные зонды с нуклеотидной последовательностью 3'-СССТААСССТААСССТАА-5'. В качестве субстрата применяются метафазные хромосомы, подвергающиеся обработке колцемидом (синтетический аналог колхицина), гипотоническому шоку с использованием раствором калия/натрия, фиксации на предметных стеклах посредством обработки метанолом/уксусной кислотой и окраске красителями. В качестве флуоресцентного красителя можно использовать йодистый пропидий, бромистый этидий, гетеродимер этидий-акридина, диазидоэтидий, гомодимер-1 этидия, гомодимер-2 этидия, моноазид этидия, Hoechst33342, Hoechst33258, 4',6-диамидино-2-фенилиндол дигидрохлорид (D API), тетраиоди д, триметилен-бис [[3 - [[4- [[(3 -метилбензотиазол-3 -ий)-2-ил]метилен] -1,4-дигидрохинолин]-1ил]пропил]диметиламиния] (ТОТО-1), дииодид 4-[(3-метилбензотиазол-2(3 Н)-илиден)метил] -1 - [3 -(триметиламино)пропил]хинолиния (ТО- PRO-1), тетраиодид N,N,N',N'-тeтpaмeтил-N,N'-бис[3-[4-[3-[(3-метилбензотиазол-3-ий)-2-ил]-2-пропенилиден]-1,4-. Следующим этапом проводится проточная цитометрия. При измерении с помощью проточного цитометра измеряемый образец, содержащий окрашенные и фиксированные клетки, вводят в проточную кювету проточного цитометра. Проходящие через проточную кювету клетки облучаются светом, с получением в результате оптической информации, испускаемой соответствующими клетками (флуоресцентная информация и информация светового рассеяния). В качестве источника света могут применяться красный полупроводниковый лазер, синий полупроводниковый лазер, аргоновый лазер, гелий-неоновый лазер или ртутная дуговая лампа. Флуоресцентная информация отражает количество нуклеиновых кислот в фиксированных клетках. Изображения полученных флуоресцентных пятен затем могут быть проанализированы с использованием специализированной компьютерной программы (способ и программное обеспечение, Flintbox Network, США), с получением точных цифровых данных о фактической длине теломер за счет определения среднего арифметического между длиной теломер лейкоцитов после выполненной ПЦР-методики и одноименного показателя после флуоресцентной гибридизации in situ.

По мере получения результатов оценки базальной длины теломер лейкоцитов (начальная точка) пациентка приглашается на повторную консультацию врача-акушера-гинеколога. В ходе приема специалистом-медиком производится вычисление прогнозируемой длины теломер лейкоцитов для пациенток с синдромом Тернера или преждевременной недостаточностью яичников проводят при помощи формулы, полученной методом математического регрессионного анализа (IBM SPSS Statistics (версия 26,0 для Windows), а именно: путем умножения числа лет длительности приема заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме на коэффициент 0,216, прибавлением базальной длины теломер в момент наступления менопаузы и слагаемого 9,49:

.

В ходе повторной консультации на основании наличия жалоб пациентки (приливы, повышенная потливость, сухость влагалища, менструальноподобные реакции, отечность, болезненность набухание молочных желез) помимо титрации заместительной терапии половыми стероидами (в сторону увеличения эстрогенового компонента с 1 мг до 2 мг 17β-эстрадиола по 1 таблетке 1 раз в день в течение 14 дней и/или в сторону увеличения прогестагенового компонента до 10 мг дидрогестерона по 1 таблетке 1 раз в день в течение последующих 14 дней) пациентке предлагается проходить ежегодно 1 раз в год и до достижения 5 лет (конечная точка) для исследования достигнутой длины теломер лейкоцитов. На каждом приеме полученные результаты длины теломер, сравнивают с рассчитанными на момент начала терапии, так через 1 год длины теломер сравнивают с рассчитанной для через 2 года и так далее до В случае, если на дату обследования результаты оказываются выше ожидаемых/идентичными ожидаемым/менее, чем на 15% ниже ожидаемых - терапия считается эффективной и может быть продолжена. В случае, если в полученном результате отмечается снижение на 15% и более от ожидаемой величины, пациентка направляется на амбулаторную консультацию врача-гериатра, по результатам которой инициируется комплексное амбулаторное/стационарное обследование на предмет наличия/прогрессирования возраст-ассоциированных заболеваний (артериальная гипертония, дислипидемия, сахарный диабет 2 типа, ишемическая болезнь сердца, цереброваскулярная болезнь, хроническая болезнь почек, остеопороз, саркопения). Таким образом, подразумевается, что полученный результат анализ на длину теломер лейкоцитов будет способствовать осуществлению профилактического персонифицированного подхода к контролю заболеваний, ассоциированных со старением среди женщин высокого соматического риска.

Пример 1.

Пациентка Е., 36 лет, обратилась в марте 2022 года к акушеру-гинекологу с жалобами на отсутствие менструаций в течение 9 последних месяцев, ежедневные эпизоды «приливов» в вечернее время суток, сопровождающиеся ощущением жара, потливости, покраснения кожных покровов, головными болями височно-затылочной локализации. По данным анамнеза: менархе с 13 лет; с 14 лет - длительность менструального цикла 28 дней, длительность периода кровотечения 3 дня, беременностей - 1, роды - 1 (через естественные родовые пути), аборты - 0. С момента прекращения менструаций к акушеру-гинекологу не обращалась, заместительную терапию половыми стероидами не получала. При бимануальном исследовании данных за патологию не получено. При УЗИ органов малого таза: объем левого яичника 10 см³, объем правого яичника -10 см³; по краям обоих яичников - множество мелких фолликулов диаметром до 6 мм. По данным анализов: фолликулостимулирующий гормон>25 МЕ/л (референсный интервал<22 МЕ/л), лютеинизирующий гормон 13,0 мЕд/л (референсный интервал 2,6-12,0 мЕд/л), антимюллеров гормон 0,01 нг/мл (референсный интервал 0.03-7.15 нг/мл), эстрадиол (Е2) 30,2 пМ/л (референсный интервал перед овуляцией 685-1404 пМ/л), Прогестерон 0,1 нМ/л (референсный интервал 0,4 -5,4 нМ/л), пролактин 200 мЕд/л (референсный интервал 127-637 мЕд/л). По данным биохимического анализа - общий холестерин 5,7 мМ/л (референсный интервал <5,0 ммоль/л), триглицериды 1,9 мМ/л (референсный интервал <1,7 мМ/л), липопротеиды низкой плотности 3,4 ммоль/л (референсный интервал <3 мМ/л), липопротеиды высокой плотности 0,9 мМ/л (референсный интервал <1 мМ/л). На основании жалоб пациентки, результатов лабораторно-инструментального обследования, выставлен диагноз - вторичная аменорея яичникового генеза, показана инициация эстроген-гестагенной терапии в циклическом режиме по схеме: 1 мг 17β-эстрадиола по 1 таблетке 1 раз в день в течение 14 дней+5 мг дидрогестерона по 1 таблетке 1 раз в день в течение последующих 14 дней. С целью повышение комплаентности пациентке с манифестацией эстрогенного дефицита перед началом приема терапии было назначено проведение последующего лабораторно-генетического исследования базальной длины теломер лейкоцитов для оценкой базальной длины теломер лейкоцитов, результат - 8,0 кБ (референсный интервал >10,0 кБ). С целью поддержания комплаентности достижения эуэстрогенемии врачом-акушером-гинекологом был проведен расчет прогнозируемой длины теломер лейкоцитов, результат - 17,706 кБ. В целях контроля также была назначена повторная консультация на март 2023 г. с повторным генетическим исследованием длины теломер лейкоцитов. По результатам повторного обследования на 2023 года, результат - 17,7 кБ, что практически соответствует ранее рассчитанным по формуле значениям (на 0,04% ниже ожидаемого). Дальнейшая терапия - без изменений. Пример 2.

Пациентка Ж., 16 лет, обратилась в апреле 2022 г. за консультацией в федеральный центр с жалобами на низкий рост, отставание полового развития, избыточную массу тела. По данным цитогенетического исследования у пациентки - кариотип 45, Х0, что говорит о наличии синдрома Тернера. Инициирована терапия аналогами ДНК-рекомбинантным гормона роста. В ходе консультации от апреля 2022 г. в связи с дисгенетичным эстрогенным дефицитом пациентке с манифестацией перед началом приема эстроген терапии было назначено проведение лабораторно-генетического исследования базальной длины теломер лейкоцитов методом количественной ПЦР, флуоресцентной гибридизации in situ проточной цитометрии для оценки базальной длины теломер лейкоцитов, результат - 6,9 кБ (референсный интервал >10,0 кБ). С целью поддержания комплаентности достижения эуэстрогенемии врачом-акушером-гинекологом был проведен расчет прогнозируемой длины теломер лейкоцитов, результат - 16,606 кБ. Немедленно инициирована эстроген-гестагенная терапия в циклическом режиме по схеме: (1 мг 17β-эстрадиола по 1 таблетке 1 раз в день в течение 14 дней+5 мг дидрогестерона по 1 таблетке 1 раз в день в течение последующих 14 дней. В целях контроля также была назначена повторная консультация на март 2023 г. с повторным генетическим исследованием длины теломер лейкоцитов методом количественной ПЦР, флуоресцентной гибридизации in situ и проточной цитометрии, результат - 12,304 кБ, что ниже на 25,96% ранее рассчитанных по формуле значений. Проведена коррекция эстроген-гестагенной терапии с повышением до 2 мг 17β-эстрадиола+10 мг дидрогестерона. Пациентка направлена на плановую амбулаторно-поликлиническую консультацию врача-гериатра, где ей было предложено комплексное стационарное обследование. На основании информированного согласия пациентка была госпитализирована в стационар, где в течение 10 койко-дней она прошла лабораторное (общий анализ крови, биохимический анализ крови, 25(ОН)-витамин D, фолликулостимулирующий, лютеинизирующий и тиреотропный гормоны, гликированный гемоглобин), инструментальное (электрокардиография, эхокардиография, денситометрия поясничного отдела позвоночника и проксимального отдела бедренной кости; ультрасонография щитовидной железы, почек, органов малого таза) обследования. По результатам консилиума специалистов в составе кардиолога, нефролога, эндокринолога, акушера-гинеколога. Диагноз: «Нарушенная гликемия натощак. Гипертоническая болезнь II стадии, 4 степени, риск 3. Дефицит витамина D. Остеопения шейки левой бедренной кости со снижением МПК до -1,5SD по Z-критерию». Назначена гипотензивная, кальций-витамин D-насыщающая терапия. Эстроген-гестагенная терапия в прежнем режиме. Пациентка выписана с рекомендациями под наблюдение специалистами по м/ж.

Группа иобретений относится к медицине, а именно к эндокринологии, акушерству и гинекологии, геронтологии, и может быть использована для прогнозирования длины теломер на фоне приема заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме у пациенток с синдромом Тернера или преждевременной недостаточностью яичников и оценки эффективности заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме у пациенток. Определяют следующие показатели: прогнозируемую длительность приема заместительной гормональной терапии (ЗГТ) половыми стероидами базальную длину теломер в момент наступления менопаузы. Вычисляют значение по формуле: . Базальную длину теломер можно определять, как среднее арифметическое между длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью количественной ПЦР в реальном времени и длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью цитогенетической флуоресцентной гибридизации in situ. При оценке эффективности заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме у пациенток с синдромом Тернера или преждевременной недостаточностью яичников осуществляют определение длины теломер на дату оценки через лет и сравнение со спрогнозированной длиной теломер на дату начала приема ЗГТ с использованием длительности приема лет . Если оказывается выше, идентичной или менее, чем на 15% ниже - терапию считают эффективной. Если оказывается на 15% или ниже, чем - терапию считают неэффективной и направляют женщину на консультацию врача-гериатра для коррекции терапии. Длину теломер можно определять, как среднее арифметическое между длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью количественной ПЦР в реальном времени и длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью цитогенетической флуоресцентной гибридизации in situ. Сравнение со спрогнозированной длиной теломер можно проводить 1 раз в год в течение 5 лет после момента наступления менопаузы и начала заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме. Способ обеспечивает возможность прогнозирования репликативного клеточного потенциала - длины теломер лейкоцитов у пациенток с синдромом Тернера или преждевременной недостаточностью яичников, ранее никогда не принимавших ЗГТ, с целью профилактики возраст-ассоциированных заболеваний человека, за счет оценки целевого персонифицированного показателя эффективности приема ЗГТ в начальной точке - момент инициации ЗГТ, и конечной точке - 5 лет от момента инициации ЗГТ, с периодичностью мониторинга 1 раз в год путем венозного забора и лабораторного исследования биологического материала пациентки. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Способ прогнозирования длины теломер на фоне приема заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме у пациенток с синдромом Тернера или преждевременной недостаточностью яичников, включающий определение следующих показателей: прогнозируемая длительность приема заместительной гормональной терапии (ЗГТ) половыми стероидами базальная длина теломер в момент наступления менопаузы, далее вычисляют значение по формуле:

.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что базальную длину теломер определяют как среднее арифметическое между длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью количественной ПЦР в реальном времени и длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью цитогенетической флуоресцентной гибридизации in situ.

3. Способ оценки эффективности заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме у пациенток с синдромом Тернера или преждевременной недостаточностью яичников, включающий определение длины теломер на дату оценки через лет и сравнение со спрогнозированной по п. 1 длиной теломер на дату начала приема ЗГТ с использованием длительности приема лет если оказывается выше, идентичной или менее, чем на 15% ниже - терапию считают эффективной; если оказывается на 15% или ниже, чем - терапию считают неэффективной и направляют женщину на консультацию врача-гериатра для коррекции терапии.

4. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что длину теломер определяют как среднее арифметическое между длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью количественной ПЦР в реальном времени и длиной теломер лейкоцитов, вычисленной с помощью цитогенетической флуоресцентной гибридизации in situ.

5. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что сравнение со спрогнозированной длиной теломер проводят 1 раз в год в течение 5 лет после момента наступления менопаузы и начала заместительной терапии половыми стероидами в циклическом режиме.