СПОСОБ КОНТРОЛЯ ОБСЕМЕНЁННОСТИ ПОВЕРХНОСТИ ТЕЛА ЖИВЫХ МЕДОНОСНЫХ ПЧЁЛ И ПЧЕЛИНОЙ МАТКИ В ПЕРЕСЫЛОЧНОЙ КЛЕТОЧКЕ С ДЕЗИНФЕКЦИЕЙ ЖИВЫХ МЕДОНОСНЫХ ПЧЁЛ И ПЧЕЛИНОЙ МАТКИ Российский патент 2025 года по МПК A01K51/00 

Изобретение относится к области ветеринарии и пчеловодства, в частности к дезинфекции поверхностных покровов живых медоносных пчёл и плодных маток в пересылочных клеточках. Данный способ может использоваться ветеринарными специалистами и пчеловодами-любителями для профилактики заразных болезней пчел, при проведении ветеринарно-санитарных мероприятий на пасеках при ликвидации инфекционных заболеваний.

В настоящее время в области ветеринарии и пчеловодства происходит трансграничная торговля живым биологическим материалом, к которому, в частности, относят: сотовые и бессотовые пакеты пчел, плодных пчелиных маток в пересылочных клеточках, шмелиные семьи и шмелиных маток.

В больных инфекционными заболеваниями пчелиных семьях взрослые насекомые проводят очистку ячеек сотов от погибших личинок, куколок, имаго насекомых, контактируя своим телом с патогенами. Поверхность тела у пчёл покрыта волосками, в которых задерживаются не только пыльцевые зерна цветущих растений, но и патогены. В связи с этим, медоносные пчелы могут участвовать в передаче патогенов, являясь факторами передачи инфекции.

В связи с разработкой биологическими лабораториями недружественных России стран высокопатогенных штаммов возбудителей заболеваний, опасных для человека и животных, а также способов их доставки на территории других стран с использованием перелетных птиц и кровососущих насекомых (комаров) (по данным СМИ), не исключено и использование для аналогичных целей медоносных пчел, шмелей при трансграничной торговле.

Уровень техники

Способов с аналогичным или похожим назначением в доступных литературных источниках не обнаружено.

Способы контроля обсеменённости микроорганизмами осуществляются в соответствии с действующими методическими рекомендациями MP 4.2.0220-20 «Методы санитарно-бактериологического исследования микробной обсеменённости объектов внешней среды», [https.//www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_377036/] и в действующих методических рекомендациях, и в научной литературе отсутствуют сведения о дезинфекции и контроле обсеменённости живых медоносных пчел, трутней и пчелиных маток.

Технической проблемой является необходимость расширения арсенала средств и способов контроля обсеменённости поверхности тела живых медоносных пчёл и пчелиных маток в пересылочной клеточке, а также дезинфекции живых медоносных пчёл и пчелиных маток.

Раскрытие сущности изобретения

Технический результат - является дезинфекция поверхности живых медоносных пчёл и пчелиных маток в пересылочных клеточках, контроль обсеменённости поверхности живых медоносных пчёл и расширение арсенала средств и способов контроля обсеменённости поверхности тела живых медоносных пчёл и пчелиных маток в пересылочной клеточке.

Цель исследований - разработка способа контроля обсеменённости поверхности тела живых медоносных пчёл и плодной пчелиной матки в пересылочной клеточке и их дезинфекции.

Предлагаемый способ дезинфекции - химический - заключается в уничтожении болезнетворных микроорганизмов и разрушении токсинов антисептиками и дезинфицирующими веществами на поверхности живых объектов - пчел.

Порядок проведения:

1. Делают смыв с поверхности тела живых медоносных пчёл и пчелиной матки: пересылочную клеточку с живыми медоносными пчелами и пчелиной маткой внутри помещают в стерильный целлофановый пакет, заполненный стерильной дистиллированной водой объемом 20-25 мл.

2. Осуществляют отбор проб и патологического материала для проведения следующих видов исследований:

2.1. бактериологических

2.2. микологических

2.3. ПЦР на вирусные заболевания

3. Проводят учет результатов посевов и ПЦР-диагностики, и при отрицательных результатах исследований клеточку с пчелами и пчелиной маткой отправляют на пасеку.

Предложенный способ контроля обсеменённости поверхности тела живых медоносных пчёл с плодной маткой в пересылочной клеточке и их дезинфекции заключается в следующем: в ветеринарной лаборатории пересылочную клеточку с живыми пчелами и плодной маткой помещают в целлофановый стерильный пакет содержащий 20-25 мл стерильной дистиллированной воды; встряхивая и переворачивая клеточку с пчелами внутри этого пакета в течение 1 мин, осуществляют смыв, после чего клеточку с маткой и пчелами помещают на 15 мин в стакан, содержащий 200-250 мл (количество жидкости должно быть таким, чтобы клеточка с маткой и пчелами была полностью погружена в дезраствор) 3%-ного водного раствора перекиси водорода при температуре +15…+25 градусов С, затем промывают проточной водой комнатной температуры в течение 1 мин и помещают на 15 мин в следующий стакан, содержащий 200-250 мл (количество жидкости должно быть таким, чтобы клеточка с маткой и пчелами была полностью погружена в дезраствор) 0,005%-ного водного раствора хлоргексидина биглюконата при температуре +15…+25 градусов С, затем смывают проточной водой комнатной температуры 20±2 градусов С, и помещают в целлофановый пакет со стерильной дистиллированной водой объемом 20-25 мл на 1 мин, встряхивая и переворачивая; затем клеточку с пчелами и плодной пчелиной маткой достают из пакета с водой и просушивают на фильтровальной бумаге при комнатной температуре до возвращения нормальных физиологических функций особей пчёл и плодной матки. Смывы высевают на универсальную твердую питательную среду до дезинфекции и после для выявления бактериальных патогенов; на среду Сабуро для выявления микологических патогенов. Учет результатов проводят по росту колоний через 48 часов. Смывы используют в ПЦР реакциях с праймерами на вирусные заболевания пчёл или другие вирусы. Хранят смывы в пакетах в морозильнике при температуре -18 град. С.

Осуществление изобретения иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Пластмассовую пересылочную клеточку с плодной маткой породы Карника и живыми 8 пчелами поместили в прозрачный целлофановый пакет с 20 мл стерильной дистиллированной водой на 1 минуту, постоянно встряхивая пакет, после чего пересылочную клеточку достали из пакета и поместили в прозрачный стеклянный стакан объемом 200 мл с 3%-ным водным раствором перекиси водорода, выдержали 15 минут при температуре +15 град. С, каждые пять минут встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. По окончании нахождения в 3%-ном растворе перекиси водорода клеточку с пчелами и плодную матку достали из дезраствора и промыли в течение 1 мин под проточной холодной водой; затем клеточку с пчелами и пчелиной маткой погружали в стакан, содержащий 200 мл 0,005%-ного раствора хлоргексидина биглюконата на 15 минут при температуре +15 град. С, каждые пять минут, встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. Пчелы и пчелиная матка становятся временно обездвиженными. После этого пересылочную клеточку доставали из раствора хлоргексидина, промывали под проточной струей воды из-под крана в течение 1 мин и помещали на 1 мин в целлофановый пакет с 20 мл стерильной дистиллированной воды для получения смыва, который высевали на твердые питательные среды - колумбийский кровяной агар (М 144 Himedia) с добавлением 5% стерильной дефибринированной крови барана к общему объему, сусло агар Сабуро, а также проводили ПЦР-исследование на вирус мешотчатого расплода пчел.

При посеве смыва с пчёл и матки на кровяной агар в результате бактериологических исследований выявили 26 колоний микроорганизмов, одна из которых гемолитическая; в результате микологических исследований при посеве на агар Сабуро выявили рост Aspergillus fumigatus 10³ КОЕ, в результате вирусологических ПЦР исследований не выявили вирус мешотчатого расплода пчел.

При посеве смыва после дезинфекции роста бактерий нет, роста грибов - нет. ПЦР на вирус мешотчатого расплода отрицательный.

Пример 2. Пластмассовую пересылочную клеточку с плодной маткой породы Карника и живыми 10 пчелами поместили в прозрачный целлофановый пакет с 20 мл стерильной дистиллированной водой на 1 минуту, постоянно встряхивая пакет, после чего пересылочную клеточку достали из пакета и поместили в прозрачный стеклянный стакан объемом 200 мл с 3%-ным водным раствором перекиси водорода, выдержали 15 минут при температуре +20 град. С, каждые пять минут встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. По окончании нахождения в 3%-ном растворе перекиси водорода клеточку с пчелами и плодную матку достали из дезраствора и промыли в течение 1 мин под проточной холодной водой; затем клеточку с пчелами и пчелиной маткой погружали в стакан, содержащий 200 мл 0,005%-ного раствора хлоргексидина биглюконата на 15 минут при температуре +20 град. С, каждые пять минут встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. Пчелы и пчелиная матка становятся временно обездвиженными. После этого пересылочную клеточку доставали из раствора хлоргексидина, промывали под проточной струей воды из-под крана в течение 1 мин и помещали на 1 мин в целлофановый пакет с 20 мл стерильной дистиллированной воды для получения смыва, который высевали на твердые питательные среды - колумбийский кровяной агар (М 144 Himedia) с добавлением 5% стерильной дефибринированной крови барана к общему объему, сусло агар Сабуро, а также проводили ПЦР-исследование на вирус мешотчатого расплода пчел.

При посеве смыва с пчёл и матки на кровяной агар в результате бактериологических исследований выявили 3 колонии микроорганизмов, одна из которых гемолитическая; в результате микологических исследований при посеве на агар Сабуро выявили рост Aspergillus fumigatus 10³ КОЕ, дрожжевые клетки Candid 10⁴ КОЕ; в результате вирусологических ПЦР исследований не выявили вирус мешотчатого расплода пчел.

При посеве смыва после дезинфекции роста бактерий нет, роста грибов - нет. ПЦР на вирус мешотчатого расплода отрицательный.

Пример 3. Пластмассовую пересылочную клеточку с плодной маткой породы Карника и живыми 9 пчелами поместили в прозрачный целлофановый пакет с 25 мл стерильной дистиллированной водой на 1 минуту, постоянно встряхивая пакет, после чего пересылочную клеточку достали из пакета и поместили в прозрачный стеклянный стакан объемом 250 мл с 3%-ным водным раствором перекиси водорода, выдержали 15 минут при температуре +25 град. С, каждые пять минут встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. По окончании нахождения в 3%-ном растворе перекиси водорода клеточку с пчелами и плодную матку достали из дезраствора и промыли в течение 1 мин под проточной холодной водой; затем клеточку с пчелами и пчелиной маткой погружали в стакан, содержащий 250 мл 0,005%-ного раствора хлоргексидина биглюконата на 15 минут при температуре +25 град. С, каждые пять минут встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. Пчелы и пчелиная матка становятся временно обездвиженными. После этого пересылочную клеточку доставали из раствора хлоргексидина, промывали под проточной струей воды из-под крана в течение 1 мин и помещали на 1 мин в целлофановый пакет с 25 мл стерильной дистиллированной воды для получения смыва, который высевали на твердые питательные среды - колумбийский кровяной агар (М 144 Himedia) с добавлением 5% стерильной дефибринированной крови барана к общему объему, сусло агар Сабуро, а также проводили ПЦР исследование на вирус мешотчатого расплода.

При посеве смыва с пчёл и пчелиной матки на кровяной агар в результате бактериологических исследований выявили 12 колоний микроорганизмов, гемолитических нет; в результате микологических исследований при посеве на агар Сабуро выявили рост Aspergillus fumigatus 10³ КОЕ, в результате вирусологических ПЦР исследований не выявили вирус мешотчатого расплода пчел.

При посеве смыва после дезинфекции роста бактерий нет, роста грибов - нет. ПЦР на вирус мешотчатого расплода отрицательный.

Пример 4. Пластмассовая пересылочная клеточка с плодной маткой породы Карника и живыми 9 пчелами поместили в прозрачный целлофановый пакет с 25 мл стерильной дистиллированной водой на 1 минуту, постоянно встряхивая пакет, после чего пересылочную клеточку достали из пакета и поместили в прозрачный стеклянный стакан объемом 250 мл с 3%-ным водным раствором перекиси водорода, выдержали 15 минут при температуре +4 град. С, каждые пять минут встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. По окончании нахождения в 3%-ном растворе перекиси водорода клеточку с пчелами и плодную матку достали из дезраствора и промыли в течение 1 мин под проточной холодной водой; затем клеточку с пчелами и пчелиной маткой погружали в стакан, содержащий 250 мл 0,005%-ного раствора хлоргексидина биглюконата на 15 минут при температуре +4 град. С, каждые пять минут встряхивая и перемещая в растворе клеточку с пчелами и маткой, чтобы удалить образовавшиеся пузырьки воздуха на поверхности их тела. Пчелы и пчелиная матка становятся временно обездвиженными. После этого пересылочную клеточку доставали из раствора хлоргексидина, промывали под проточной струей воды из-под крана в течение 1 мин и помещали на 1 мин в целлофановый пакет с 25 мл стерильной дистиллированной воды для получения смыва, который высевали на твердые питательные среды - колумбийский кровяной агар (М 144 Himedia) с добавлением 5% стерильной дефибринированной крови барана к общему объему, сусло агар Сабуро, а также проводили ПЦР исследование на вирус мешотчатого расплода.

При посеве смыва с пчёл и матки на кровяной агар в результате бактериологических исследований выявили 28 колоний микроорганизмов, две из которых гемолитические; в результате микологических исследований при посеве на агар Сабуро выявили рост дрожжей 10⁴ КОЕ, Candid sp. + Aspergillus fumigatus 10³ КОЕ, в результате вирусологических ПЦР исследований выявили вирус мешотчатого расплода пчел.

При посеве смыва после дезинфекции выявили 24 колонии микроорганизмов, гемолитических нет, роста грибов - нет. ПЦР на вирус мешотчатого расплода положительный.

Пример №4 приведен в подтверждение того, что способ дезинфекции живых медоносных пчёл является эффективным только в указанном интервале температур - 15-25 град. С. При низкой температуре эффективность дезинфекции значительно снижается, что согласуется с современными литературными данными по дезинфекции объектов ветеринарного надзора.

Изобретение относится к области ветеринарии и пчеловодства, в частности к дезинфекции поверхностных покровов живых медоносных пчёл и плодных маток в пересылочных клеточках. Способ контроля обсеменённости тела живых медоносных пчёл и пчелиной матки в пересылочной клеточке с дезинфекцией живых медоносных пчёл и пчелиной матки заключается в получении смыва с поверхности тела медоносных пчёл и пчелиной матки в пересылочной клеточке стерильной дистиллированной водой объёмом 20-25 мл в целлофановом пакете с последующим высевом на твердые питательные среды и ПЦР исследование. Для дезинфекции клеточку с маткой и пчёлами помещают на 15 мин в стакан, содержащий 200-250 мл 3% водного раствора перекиси водорода при температуре +15…+25°С, перемещая клеточку в этом растворе с целью удаления пузырьков воздуха, образовавшихся на волосках пчёл. Затем клеточку с пчёлами и маткой промывают в проточной воде комнатной температуры в течение 1 мин, затем помещают в 200-250 мл 0,005% раствора хлоргексидина биглюконата на 15 мин при температуре +15…+25°С. Причём количество жидкости должно быть таким, чтобы клеточка с маткой и пчёлами была полностью погружена в дезраствор. Затем промывают клеточку с пчёлами и пчелиной маткой в течение 1 мин под проточной водой 20±2°С температуры, с целью получения смыва помещают в целлофановый пакет со стерильной дистиллированной водой объемом 20-25 мл на 1 мин, встряхивая и переворачивая. После клеточку с пчёлами и плодной пчелиной маткой достают из пакета с водой и просушивают на фильтровальной бумаге при комнатной температуре до возвращения нормальных физиологических функций особей пчёл и плодной матки, а смыв высевают на твердые питательные среды и проводят ПЦР исследования на вирусные заболевания пчёл. Учёт результатов исследования проводят через 48 часов и при отрицательных результатах исследований клеточку с пчёлами и пчелиной маткой отправляют на пасеку. Изобретение обеспечивает дезинфекцию поверхности живых медоносных пчёл и пчелиных маток в пересылочных клеточках, контроль обсемененности поверхности живых медоносных пчёл и расширение арсенала средств и способов контроля обсемененности поверхности тела живых медоносных пчёл и пчелиных маток в пересылочной клеточке. 1 з.п. ф-лы, 4 пр.

1. Способ контроля обсеменённости тела живых медоносных пчёл и пчелиной матки в пересылочной клеточке с дезинфекцией живых медоносных пчёл и пчелиной матки, заключающийся в получении смыва с поверхности тела медоносных пчёл и пчелиной матки в пересылочной клеточке стерильной дистиллированной водой объёмом 20-25 мл в целлофановом пакете с последующим высевом на твёрдые питательные среды и ПЦР исследование, для дезинфекции клеточку с маткой и пчёлами помещают на 15 мин в стакан, содержащий 200-250 мл 3% водного раствора перекиси водорода при температуре +15…+25°С, перемещая клеточку в этом растворе с целью удаления пузырьков воздуха, образовавшихся на волосках пчёл, затем клеточку с пчёлами и маткой промывают в проточной воде комнатной температуры в течение 1 мин, затем помещают в 200-250 мл 0,005% раствора хлоргексидина биглюконата на 15 мин при температуре +15…+25°С, причём количество жидкости должно быть таким, чтобы клеточка с маткой и пчёлами была полностью погружена в дезраствор, затем промывают клеточку с пчёлами и пчелиной маткой в течение 1 мин под проточной водой 20±2°С температуры, с целью получения смыва помещают в целлофановый пакет со стерильной дистиллированной водой объемом 20-25 мл на 1 мин, встряхивая и переворачивая, затем клеточку с пчёлами и плодной пчелиной маткой достают из пакета с водой и просушивают на фильтровальной бумаге при комнатной температуре до возвращения нормальных физиологических функций особей пчёл и плодной матки, а смыв высевают на твёрдые питательные среды и проводят ПЦР исследования на вирусные заболевания пчёл, учёт результатов исследования проводят через 48 часов и при отрицательных результатах исследований клеточку с пчёлами и пчелиной маткой отправляют на пасеку.

2. Способ контроля обсеменённости тела живых медоносных пчёл и пчелиной матки по п. 1, отличающийся тем, что в качестве твердой питательной среды используют агар Сабуро.