ИНГИБИТОРЫ HDAC ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИДИОПАТИЧЕСКОГО ЛЕГОЧНОГО ФИБРОЗА И ДРУГИХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ ЛЕГКИХ Российский патент 2025 года по МПК A61K31/404 A61P11/00 A61P1/16 A61P9/00 A61P13/12 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0001] Настоящее изобретение относится к ряду соединений для лечения состояний, выбранных из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких, связанных с цитокиновым штормом, таких как острое повреждение легких, острый респираторный дистресс-синдром (ARDS), и хронических нарушений легких, таких как идиопатический легочный фиброз, и других фиброзных нарушений, таких как фиброз печени, фиброз сердца и фиброз почек.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] В настоящее время не существует эффективных профилактических или постконтактных видов терапии. Было описано, что у пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, тяжесть заболевания и исходы связаны с характеристиками иммунного ответа. Интерлейкин IL-6 и другие компоненты (TNFα, IFNγ, MIP1α, IL-10, IL-1β, IL-12p40, IL-17A, IL-2 и IL8) воспалительного каскада способствуют защите организма от инфекций.

[0003] Данные из литературы^1-4 свидетельствуют о том, что инфекции, вызванные некоторыми смертельными вирусами (например, β-коронавирусом), приводят к развитию легочного фиброза и ARDS. Основной механизм ассоциирован с цитокиновым штормом (ARDS), когда такие цитокины, как интерлейкины^2,7,10, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, интерферон-γ-индуцибельный белок, моноцитарный хемоаттрактантный белок, макрофагальный воспалительный белок-a, фактор некроза опухоли а продуцируются в избытке^3,4, и было известно, что все эти маркеры сильно активируются при фиброзе (образовании рубцовой ткани). Со временем фиброзная ткань может разрушить нормальное легкое и затруднить оксигенацию крови.

[0004] Интерлейкин (IL)-6 и другие компоненты воспалительного каскада способствуют защите хозяина от инфекций. Однако чрезмерный синтез IL-6 может привести к острому тяжелому системному воспалительному ответу, известному как синдром высвобождения цитокинов (CRS). В исследовании патогенеза вызванной SARS-CoV-2 пневмонии, было обнаружено, что при CRS происходит значительное высвобождение провоспалительных цитокинов, в том числе IL-6, IL-12 и фактора некроза опухоли α (TNF-α). Согласно имеющимся данным, острые или хронические инфекции, вызванные бактериями или вирусами, приводят к тяжелым поражениям, сопровождающимся ARDS (острым респираторным дистресс-синдромом) и легочным фиброзом.

[0005] Идиопатический легочный фиброз (IPF) представляет собой тип легочного нарушения, при котором происходит рубцевание легких по неустановленной причине. IPF является формой интерстициального заболевания легких, в первую очередь вызывающей воспаление в легочной ткани и пространстве, окружающем воздушные мешки легких, в конечном итоге вызывая образование уплотненной, жесткой ткани, что ведет к затруднению дыхания. Помимо плохого прогноза, сообщалось также, что выживаемость после диагностики IPF составляет 2-5 лет⁵. Недавние данные в отношении COVID-19 позволили предположить, что после инфицирования SARS-CoV-2 могут наблюдаться существенные фиброзные последствия^2,3. Учитывая масштабы пандемии, бремя IPF после инфицирования SARS-CoV-2, вероятно, будет высоким, поэтому разработка новых антифибротических средств может помочь в таких ситуациях. Поэтому существует настоятельная необходимость в разработке эффективного лечения IPF.

[0006] ARDS представляет собой опасное для жизни воспалительное поражение легких, характеризующееся тяжелой острой гипоксемией, дыхательной респираторным дистресс-синдромом и легочным отеком. Несмотря на достижения в области вентиляторной и циркуляторной терапии, смертность пациентов с ARDS остается высокой (более 50%). В связи с недоступностью лечения первой линии при ARDS глюкокортикоидные противовоспалительные стероиды, которые являются очень мощными иммуносупрессивными средствами, применяют при ARDS уже несколько десятилетий, и их результаты не были доказаны как благоприятные^6,8. Даже высокодозная глюкокортикоидная терапия пациентов с риском развития ARDS не улучшила клинический исход и не обратила прогрессирование ARDS^7,8.

Роль ингибиторов HDAC в IPF и других нарушениях легких

[0007] Ингибиторы гистондеацетилазы (HDACi) являются терапевтическими средствами, применяемыми против рака и многих других заболеваний, включая фиброзные нарушения⁹. Легкие с IPF демонстрируют различные паттерны экспрессии HDAC, особенно HDAC8 и HDAC6. В легких с IPF экспрессия HDAC8/HDAC6 отмечается в миофибробластах, сосудистых гладких и бронхиолярных эпителиальных клетках. Сообщалось, что уровни HDAC-8 и HDAC-6 сильно повышены в образцах пациентов с IPF^10,11. Настоящее изобретение предусматривает терапевтический потенциал ингибиторов HDAC против легочного фиброза, ARDS и других поражений легких, вызванных инфекциями, действуя посредством снижения уровня проявления цитокинового шторма, уровней про воспалительных цитокинов, воспаления и перехода эпителия в мезенхиму (ЕМТ), продуцирования внеклеточного матрикса (ЕСМ), отложения коллагена и модулирования нарушенной (утолщенные альвеолярные стенки и интерстициальное воспаление) архитектуры легких.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0008] Настоящее изобретение предусматривает соединения, представляющие собой HDACi, относящиеся к сульфонилгидроксаминовой кислоте на основе индола формулы 1 (ниже), применимые для предупреждения или лечения ARDS. Настоящее изобретение предусматривает новое применение соединений HDACi для предупреждения или лечения IPF, ARDS и поражения легких.

[0009] Настоящее изобретение предусматривает профилактическое или терапевтическое средство для лечения IPF и ARDS, которое предусматривает соединения HDACi.

[0010] Настоящее изобретение предусматривает соединение формулы 1 для лечения нарушения функции легкого, уменьшения отложения коллагена и уменьшения легочного фиброза.

[0011] В одном аспекте настоящего изобретения представлены соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты общей формулы 1,

где кольца А и В независимо выбраны из арила, гетероарила, циклоалкила, конденсированного арила или конденсированной алкильной группы; R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆ и R₇ независимо выбраны из водорода, алкокси, арилокси, гидрокси, сложного эфира, амида, амино, алкила, арила, гетероарила, галогена, нитро, циано и альдегида; и X представляет собой О,

для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений.

[0012] Во втором аспекте настоящего изобретения представлены соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты, раскрываемые в данном документе, для применения при состоянии, выбранном из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких (ARDS и острое повреждение легких) и фиброзных нарушениях (легочный фиброз), при этом структурные формулы иллюстративных соединений предусматривают соединение-107, соединение-108, соединение-109 и соединение-110:

[0013] В третьем аспекте настоящего изобретения представлен способ лечения состояния, выбранного из группы, состоящей из IPF, фиброза печени, нарушенных функций легкого и печени, соединениями на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты, раскрываемыми в данном документе, и/или их составами с другими ингредиентами или без таковых.

[0014] Эти и другие признаки, аспекты и преимущества заявляемого в настоящем изобретении объекта станут более понятными из следующего описания и прилагаемой формулы изобретения. Данное краткое описание приведено для того, чтобы представить ряд концепций в упрощенной форме. Данное краткое описание не предназначено для определения ключевых или существенных признаков заявляемого объекта, а также не предназначено для ограничения объема заявляемого объекта.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0015] На фигуре 1 показана жизнеспособность клеток при применении тестируемых соединений против клеток NHLF, DHLF и LL29. Показана IC₅₀ соединения-109, соединения-108 и соединения-107.

[0016] На фигуре 2 показаны уровни экспрессии HDAC-8 и HDAC-6 при обработке с помощью IIC-T109, соединения-108 и соединения-107 в присутствии и в отсутствие TGF-β1 в клетках NHLF, DHLF и LL29.

[0017] На фигуре 3 показаны уровни экспрессии маркеров ЕМТ (Snail, Vimentin и a-SMA) при обработке с помощью соединения-109, соединения-108 и соединения-107 в присутствии и в отсутствие TGF-β1 в клетках NHLF, DHLF и LL29.

[0018] На фигуре 4 показаны уровни экспрессии маркеров ЕСМ (LOX-L2, Timp1 и Timp3) при обработке с помощью соединения-109, соединения-108 и соединения-107 в присутствии и в отсутствие TGF-β1 в клетках NHLF, DHLF и LL29.

[0019] На фигуре 5 показаны уровни экспрессии ассоциированных с коллагеном маркеров (коллаген 1α1 и коллаген 3α1) при обработке с помощью соединения-109, соединения-108 и соединения-107 в присутствии и в отсутствие TGF-β1 в клетках NHLF, DHLF и LL29.

[0020] На фигуре 6 представлен схематический план индуцированного BLM легочного фиброза на крысиной модели.

[0021] На фигуре 7 показано влияние соединений-108 и -109 на маркеры воспаления, индуцированного BLM, и инфильтрацию нейтрофилов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа крыс.

[0022] На фигуре 8 показано влияние соединений-108 и -109 на повышенное отложение коллагена при BLM и индекс легких.

[0023] На фигуре 9 показано влияние соединений-108 и -109 на индуцированные BLM повышенные уровни mRNA TGF-β, коллагена 1α1, коллагена 3α1 и CTGF в тканях легких крыс.

[0024] На фигуре 10 показано влияние соединений-108 и -109 на индуцированные BLM повышенные уровни mRNA α-SMA, Timp1 и фибронектина-1 (FN1) в тканях легких крыс.

[0025] На фигуре 11 показано влияние соединений-108 и -109 на индуцированные BLM воспалительные изменения в тканях легких (окрашивание с помощью Н&Е и трихрома Массона).

[0026] На фигуре 12 показано влияние соединений-108 и -109 на индуцированные BLM воспалительные изменения в тканях легких (окрашивание с помощью Н&Е и трихрома Массона).

[0027] На фигуре 13 показано влияние соединения-108 на индуцированное липополисахаридом (LPS) повышение числа нейтрофилов в крови, WBC и инфильтрацию нейтрофилов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа в легких крыс.

[0028] На фигуре 14 показано влияние соединения-108 на индуцированные LPS повышения индексов легких и селезенки.

[0029] На фигуре 15 показано влияние соединения-108 на индуцированные LPS повышенные уровни mRNA IL-6, IL-1beta, CCL-2, Cox-2, CXCL-6, CXCL-10, CCL-7 и CXCL-1 (суррогатный маркер IL-8) в тканях легких крыс.

[0030] На фигуре 16 показано влияние соединения-108 на индуцированные LPS повышенные уровни mRNA CXCL-1 l,TLR-3 и INF-γ в тканях легких крыс.

[0031] На фигуре 17 показано влияние соединения-108 на индуцированные LPS повышенные уровни IL-6 в образцах плазмы крови крыс.

[0032] На фигуре 18 показано влияние соединения-108 на индуцированные LPS воспалительные изменения в тканях легких (окрашивание с помощью Н&Е).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0033] Далее настоящее изобретение будет подробно описано в связи с некоторыми предпочтительными и необязательными вариантами осуществления, чтобы различные его аспекты стали более понятны и оценены.

Определения

[0034] Для удобства перед дальнейшим описанием настоящего изобретения здесь приведены определения некоторых терминов, используемых в описании и примерах. Эти определения должны быть прочитаны в свете остального раскрытия и поняты специалистом в данной области. Термины, используемые в данном документе, имеют значения, признанные и известные специалистам в данной области, однако для удобства и полноты изложения ниже приведены конкретные термины и их значения.

[0035] Единственное число используется в отношении одного или более чем одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматического объекта статьи.

[0036] Термины "включать" и "включающий" используются в инклюзивном, открытом смысле, означая, что могут быть включены дополнительные элементы. Они не должны толковаться как "состоит только из".

[0037] По всему данному описанию, если контекст не требует иного, слово "включать" и его вариации, такие как "включает" и "включающий", следует понимать как подразумевающие включение указанного элемента или стадии, или группы элементов или стадий, но не исключение любого другого элемента или стадии, или группы элементов или стадий.

[0038] Термин "алкил" относится к насыщенной углеводородной цепи, имеющей указанное число атомов углерода. Например, без ограничения алкильная группа имеет 1-6 атомов углерода или 1-4 атома углерода. Алкильные группы могут быть группами с прямой или разветвленной цепью. Иллюстративные разветвленные алкильные группы имеют одну, две или три ветви. Предпочтительные алкильные группы включают без ограничения метил, этил, н-пропил, изопропил, бутил, изобутил и трет-бутжл.

[0039] Термин "алкокси" относится к алкильной группе, присоединенной через кислородную связь к остальной части молекулы. Например, без ограничения алкокси относится к алкильной группе, имеющей 1-6 атомов углерода или 1-4 атома углерода, присоединенных через кислородную связь к остальной части молекулы. Предпочтительные алкокси группы включают без ограничения -ОСН₃ (метокси), -ОС₂Н₅ (этокси) и т.п.

[0040] Термин "галоген" относится к радикалу галогена, например фтору, хлору, брому или йоду.

[0041] Термин "арил" относится к ароматическому кольцу, имеющему определенное число атомов углерода. Например, ар ильная группа имеет от 6 до 15 атомов-членов или 6 атомов-членов. Предпочтительные арильные группы включают без ограничения фенил, нафтил и т.п.

[0042] Термин "гетероарил" относится к ароматическим кольцам, содержащим от 1 до 5 гетероатомов в кольце. "Гетероарильные" группы могут быть замещены одним или несколькими заместителями, если это определено в данном документе. Например, без ограничения гетероарильные кольца, имеющие 1-15 углеродов в качестве атомов-членов. "Гетероарил" включает пиридинил, тетразолил или пиразолил. Тетероатом" относится к атому азота, серы или кислорода, например к атому азота или атому кислорода.

[0043] Термин "циклоалкил" относится к насыщенному углеводородному кольцу с определенным числом атомов углерода, которое может быть моноциклическим или полициклическим. Например, без ограничения С_3-15циклоалкил относится к циклоалкильной группе, имеющей от 3 до 15 атомов-членов. Например, без ограничения циклоалкильная группа имеет от 3 до 15 атомов-членов. Предпочтительные циклоалкильные группы включают без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклооктанил и т.п.

[0044] Термин "амид" относится к группе C(О)NH, присоединенной посредством карбонильной связи к остальной части молекулы.

[0045] Термин "гидрокси" относится к мотиву О-Н, присоединенному посредством кислородной связи к остальной части молекулы.

[0046] Объем настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления, описанными в данном документе, которые предназначены исключительно для иллюстративных целей. Функционально эквивалентные продукты, композиции и способы однозначно входят в объем настоящего изобретения, описываемого в данном документе.

[0047] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1,

формула 1,

где кольца А и В независимо выбраны из арила, гетероарила, циклоалкила, конденсированного арила или конденсированной алкильной группы; R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆ и R₇ независимо выбраны из водорода, алкокси, арилокси, гидрокси, сложного эфира, амида, амино, алкила, арила, гетероарила, галогена, нитро, циано и альдегида; и X представляет собой О, для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений.

[0048] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких (ARDS и острое повреждение легких) и фиброзных нарушений (легочный фиброз), где структурные формулы иллюстративного соединения предусматривают

[0049] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты предусматривают 4-(N-(3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1-метил-1H-индол-5-ил)сульфамоил)-N-гидроксилбензамид (107), 4-(N-(3-(3-хлорфенил)-1-метил-1Н-индол-5-ил)сульфамоил)-N-гидроксибензамид (108), 4-(N-(3-(6-этоксипиридин-3-ил)-1-метил-1Н-индол-5-ил)сульфамоил)-N-гидроксибензамид (109), N-гидрокси-4-(N-(1-метил-3-(2,4,5-трифторфенил)-1H-индол-5-ил)сульфамоил)бензамид (110).

[0050] В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, для применения при состоянии, выбранном из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты предусматривает 4-(N-(3-(3-хлорфенил)-1-метил-1Н-индол-5-ил)сульфамоил)-N-гидроксибензамид (108).

[0051] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, при этом воспалительные нарушения легких связаны с цитокиновым штормом, как, например, острое повреждение легких, острый респираторный дистресс-синдром (ARDS), идиопатический легочный фиброз, и фиброзных нарушений, таких как фиброз печени, фиброз сердца и фиброз почек.

[0052] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает значительное ослабление индуцированной липополисахаридами (LPS) инфильтрации WBC и нейтрофилов.

[0053] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает значительное уменьшение индуцированного LPS объема легких (индекса) и индексов селезенки.

[0054] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает значительное снижение экспрессии маркеров воспаления, состоящих из провоспалительных цитокинов (IL-6, IL-1β и IL-8) и хемокинов (CCL2 и CCL-7) вместе с лигандами хемокинов (CXCL-6, CXCL-10 и CXCL-11) и генов TLR3.

[0055] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает уменьшение индуцированных LPS уровней IL-6 в образцах плазмы крови.

[0056] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение-108 наиболее эффективно облегчает патологические состояния легких.

[0057] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает значительное снижение экспрессии белков внеклеточного матрикса, коллагена и эпителиально-мезенхимальных маркеров в клетках LL29, DHLF и NHLF, стимулированных TGF-β.

[0058] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает значительное снижение экспрессии маркеров воспаления и инфильтрации нейтрофилов у сенсибилизированных с помощью BLM крыс.

[0059] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает значительное снижение индекса легких и уровня гидроксипролина у сенсибилизированных с помощью BLM крыс.

[0060] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение обеспечивает значительное снижение экспрессии маркеров фиброза у сенсибилизированных с помощью BLM крыс.

[0061] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где соединение-108 наиболее эффективно облегчает фиброзные изменения в тканях легких сенсибилизированных с помощью BLM крыс.

[0062] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено соединение на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в эффективной дозе для применения в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, где эффективная доза находится в диапазоне от 2 мг/кг до 4 мг/кг массы тела.

[0063] В одном варианте осуществления настоящего изобретения представлено применение соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1, раскрываемое в данном документе, в лечении состояния, выбранного из воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений.

ПРИМЕРЫ

[0064] Следующие примеры приведены в качестве иллюстрации и поэтому не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения.

МЕТОДИКА

Клеточные линии и культура клеток

[0065] Клетки LL29 (фибробласты легких пациента с IPF) приобретали в АТСС и культивировали в среде Хэма F-12K, дополненной 15% FBS. Первичные клетки фибробластов легких NHLF и DHLF-IPF приобретали у LONZA и культивировали в среде FGF-2 с FGF, инсулином и FBS. Все клетки поддерживали в увлажненной атмосфере 95% воздуха с 5% СО₂ при 37°С.

Анализ с сульфородамином-В (анализ в отношении цитотоксичности)

[0066] Клетки (LL29, NHLF и DHLF-IPF) высевали в 96-луночный планшет (8×103 клеток/лунка) и обрабатывали ингибиторами HDAC (соединение-109, соединение-108 и соединение-107), растворенными в DMSO, в различных концентрациях (0, 0,78, 1,56, 3,12, 6,25, 12,5, 25, 50, 100 мкМ) и DMSO (носитель в качестве контроля). Далее клетки инкубировали в течение 72 часов. Затем определяли процент гибели клеток с помощью анализа с сульфородамином-В (Sigma Aldrich, Сент-Луис, штат Миссури, США). Значения IC₅₀ рассчитывали способом подгонки кривой с использованием программного обеспечения GraphPad Prism-8.

Стимуляция TGF-β/индукция гипоксии

[0067] Клетки предварительно обрабатывали HDAC-ингибиторами (соединение-109, соединение-108 и соединение-107) в течение 2 часов в бессывороточной среде, а затем добавляли человеческий рекомбинантный TGF-β (R&D Systems, Миннеаполис, штат Миннесота. США) при концентрации 5 нг/мл и культивировали в течение 72 часов для всех экспериментов.

Выделение РНК, синтез cDNA и q-RT-PCR

[0068] Выделение РНК проводили с использованием тризола, как описано^12,13. РНК выделяли способом с применением тризол-хлороформа, общую РНК количественно определяли с использованием нанокапли, 1 мкг РНК использовали для синтеза cDNA с использованием набора для синтеза cDNA Primescript (Takara bio) в соответствии с инструкциями производителя. Праймеры для маркеров ЕМТ (фибронектин-1 (FN1), виментин, α-SMA и Snail), маркеров ЕСМ (Timp1, Timp3 и LoxL2), маркеров коллагена (коллаген 1α1 (Col1) и коллаген 3α1 (col1) и маркеров домашнего хозяйства (β2М и β-актин) разрабатывали с использованием программного обеспечения Primer 3, последовательности всех праймеров приведены в таблице 1.

Количественную ПЦР в режиме реального времени (qRT-PCR) проводили с использованием мастер-смеси SYBR green, а различия в экспрессии mRNA всех уровней генов рассчитывали как изменение в кратности по формуле 2-ΔΔct. На всех графиках данных Q-RT-PCR изменение в кратности с носителем в качестве контроля нормализовали по 1.

Экспериментальные животные

[0069] Взрослые самки крыс Wistar (180-200 г, n=50) возрастом 8-10 недель использовали для создания модели индуцированного блеомицином фиброза легких. Всех животных содержали в постоянных условиях окружающей среды и питания в течение всего экспериментального периода. Протокол исследования соответствует этическим принципам экспериментального исследования; "Институциональный комитет по этике обращения с животными" (CPSCEA, регистрационный №97/GO/RBi/S/1999/CPCSEA и одобрение исследования № ПСТ/056/2019), CSIR-IICT, Хайдарабад.

Индукция легочного фиброза

[0070] Кроме 8 животных (подвергаемый имитационной обработке контроль), у всех остальных животных (32 крысы Wistar) легочный фиброз индуцировали интратрахеальной инсталляцией BLM (5 мг/кг) в виде сульфатной соли, растворенной в 1 мл нормального солевого раствора. Крыс анестезировали с использованием кетамина и ксилазина (80 мг/кг и 15 мг/кг, соответственно, в расчете на массу тела, I.P.). BLM вводили интратрахеально в легкие крыс.

Распределение животных по группам и обработка

[0071] Легочный фиброз индуцировали однократной интратрахеальной инсталляцией BLM (5 мг/кг) группе животных (n=40), исключая подвергаемых имитационной обработке контрольных животных (n=8)¹⁴. BLM растворяли в солевом растворе до достижения концентрации 5 мг/мл. Животных анестезировали кетамином (80 мг/кг) и ксилазином (10 мг/кг). BLM вводили интратрахеально (5 мг/кг) анестезированным крысам Wistar, а солевой раствор вводили подвергаемым имитационной обработке контрольным животным. После введения BLM рассчитывали снижение массы тела (на 14^й день) и животных, у которых наблюдали снижение массы тела (около 10%), включали в исследование. Далее этих животных рандомизировали в четыре группы (как описано в таблице 2), кроме подвергаемого имитационной обработке контроля (8 крыс/группа).

[0072] Как описано в паттерне распределения животных по группам из таблиц 2 и 3, животных распределяли по группам и вводили соединения перорально в форме суспензии акациевой камеди (0,25%) ежедневно в течение 14 дней. Подвергаемых имитационной обработке контрольных (без блеомицина) животных использовали в качестве контроля для обрабатываемого блеомицином контроля (контроля с заболеванием) и ежедневно перорально вводили 0,5 мл солевого раствора в течение 14 дней. После окончания периода лечения у 4 животных в каждой группе собирали жидкость BALF, а у еще 4 животных собирали легкие для экспериментов ex-vivo и гистопатологических наблюдений.

Лечение соединением-108 и индукция ARDS у самцов крыс SD

[0073] Животных группы лечения лечили с помощью HDACi (соединение-108) в течение 7 дней в дозах (1,5 мг/кг и 3 мг/кг), после периода лечения животных подвергали интратрахеальной инсталляции для индукции ARDS. Крыс анестезировали с использованием кетамина и ксилазина (80 мг/кг и 20 мг/кг, соответственно, в расчете на массу тела, LP.). Кроме 8 животных (подвергаемый имитационной обработке контроль), у всех остальных животных (24 крысы SD) ARDS индуцировали интратрахеальной инсталляцией липополисахарида (5 мг/кг), растворенной в нормальном солевом растворе.

Сбор BALF и анализ параметров

[0074] 4 животным из каждой группы вскрывали грудную полость, обнажали трахеи, канюлировали и медленно вливали в легкие 3 мл стерильного 0,9% солевого раствора. BALF центрифугировали при 2000 оборотах в минуту, 4°С в течение 10 минут с использованием охлаждающей центрифуги. Осевшие сгустки клеток объединяли и повторно суспендировали в 500 мкл стерильного солевого раствора для количественного определения числа воспалительных клеток; надосадочную жидкость BLAF исследовали в отношении параметров ALP и LDH с использованием авто анализатора.

Анализ гидроксипролина

[0075] Отложение коллагена определяли путем измерения общего содержания гидроксипролина во влажной легочной ткани, которое измеряли с помощью набора для анализа гидроксипролина (abeam) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, легкие гомогенизировали в стерильной дистиллированной воде, подщелачивали с использованием 10 н. NaOH и нагревали при 120°С в течение 1 часа. После щелочного гидролиза образцы нейтрализовали с использованием 10 н. концентрированной HCL. Затем образцы помещали в 96-луночный планшет вместе со стандартами и выдерживали для выпаривания при 65°С. Затем образцы окисляли путем добавления окислительной смеси с последующим добавлением проявителя и инкубировали при 37°С в течение 5 минут. Затем добавляли DMAB, инкубировали при 65°С в течение 45 минут и измеряли оптическую плотность поглощения при 560 нм с использованием устройства для считывания микропланшетов. Рассчитывали концентрацию общего гидроксипролина (мкг/мкл) в тестовых образцах¹³.

Гистопатология

[0076] Часть доли легкого собирали, промывали ледяным забуференным фосфатом солевым раствором, фиксировали 10% нейтрально забуференным формалином, помещали в парафин, нарезали срезы (6 мкм) и окрашивали с помощью Н&Е и трихрома Массона. Три серийных среза толщиной 3 мкм на расстоянии 50 мкм друг от друга обеих долей легкого окрашивали трихромом Массона. Срезы анализировали с помощью микроскопа в случайном порядке с использованием объектива (10 ×). Тяжесть фиброза и альвеолита в тканях легких (с использованием окрашивания с помощью Н&Е и трихрома Массона) полуколичественно оценивал патологоанатом в слепом режиме по балльной системе Эшкрофта¹⁵. Структурные изменения ткани оценивали по степени кровоизлияния, эмфиземы, утолщения стенок альвеол, воспалительных поражений и отложения коллагена или фиброза¹⁶. Статистический анализ

[0077] Статистическую значимость определяли с помощью t-критерия Стьюдента, ANOVA и двухстороннего ANOVA. Для анализа значения IC₅₀ применяли способ подгонки кривой. Для всех статистических тестов и построения графиков использовали программное обеспечение Graph-pad prism версии 8. Результаты представлены как среднее ± S.E.M. Планки ошибок представляют собой S.E.M., n = 3. "р<0,05, **р<0,01, ***р<0,001. NS, не значимый.

РЕЗУЛЬТАТЫ НА МОДЕЛИ ЛЕГОЧНОГО ФИБРОЗА

ПРИМЕР 1. Определение терапевтической дозы для ингибиторов HDAC

[0078] In vitro влияние ингибиторов HDAC (соединение-109, соединение-108 и соединение-107) на жизнеспособность клеток исследовали на клетках NHLF, DHLF и LL29; значения IC₅₀ находились в диапазоне 6,3±0,3, 74,74±0,22 мкМ во всех трех клеточных линиях. Подробные значения IC₅₀ приведены на фигуре 1А, 1В и 1С. На основании результатов анализа жизнеспособности клеток, проведенного при различных концентрациях, окончательно определяли наиболее безопасные дозы для каждой клеточной линии (таблица 4) и проводили повторное тестирование. Как и ожидалось, гибели клеток не наблюдали при выбранных дозах ингибиторов HDAC.

ПРИМЕР 2. Ингибиторы HDAC аннулировали опосредованную TGF-p чрезмерную экспрессию уровней HDAC-8 и HDAC-6

[0079] Известно, что уровни HDAC-8 и HDAC-6 повышаются при активации TGF-pl, индуцированном BLM легочном фиброзе и в образцах пациентов с IPF (эталон). Поскольку молекулы являются селективными в отношении HDAC-8 или -6, тестировали влияние ингибиторов HDAC в отношении экспрессии генов HDAC-8 и -6 (фигура 2). Стимуляция TGF-β1 усиливала (фигура 2A-2F) экспрессию генов HDAC-8 и HDAC-6 в клетках NHLF, DHLF и LL29. После лечения ингибиторами HDAC (соединения-109, -108 и -107) уровни HDAC-8 снижали с помощью соединения-108 (концентрация 2,5 мкМ) в клетках NHLF и LL29. Другие концентрации соединений 108, или 109, или 107 не модулировали уровни HDAC-8. В отличие от данных по экспрессии гена HDAC-8, уровни экспрессии гена HDAC-6 сильно снижались в NHLF и LL29 почти при всех концентрациях. Однако уровни HDAC-6 были немного снижены в клетках DHLF при самых высоких концентрациях ингибиторов HDAC.

[0080] Таким образом, результаты показали, что соединение-108 потенциально ингибирует уровни mRNA HDCA-6 (2а) и HDAC-8 (2b), но соединение-109 и соединение-107 могут ингибировать только уровни mRNA HDAC-6 (2а). Таким образом, это продемонстрировало, что соединение-108 может быть двойным ингибитором HDAC-8 и HDAC-6. Несколько исследований показали, что двойные или многоцелевые ингибиторы HDAC лучше нацеливаются на IPF по сравнению с одиночными/специфическими ингибиторами HDAC¹⁷.

ПРИМЕР 3. Ингибиторы HDAC обеспечивают снижение экспрессии генов индуцированного TGF-β ЕМТ в клеточных линиях

[0081] В исследованиях in-vitro TGF-β1 играет важную роль в индуцировании ЕМТ, что является движущей силой для превращения миофибробластов¹⁸. Поэтому исследовали влияние Соединения-109 в отношении экспрессии генов маркеров ЕМТ в клетках, стимулированных TGF-β (фигура 3е). В клетках, обработанных TGF-β1, наблюдали значительное усиление экспрессии генов ЕМТ (Vimentin, Snail и α-SMA) (фигура 3A-3I). Уровни Snail были сильно снижены в клетках LL29 при обработке соединением-108 (5 и 10 мкМ) и соединением-107 (10 и 20 мкМ). Обработка соединениями 109, 108 или 107 показала, что уровни виментина и α-SMA были сильно снижены в клетках NHLF и LL29, стимулированных TGF-β1 (фигура 3А-С и 3G-I), но уровни виментина не модулировались соединением-109 (фигура 3). В отличие от вышеуказанных результатов ингибиторы HDAC не модулировали уровни экспрессии генов ЕМТ (Snail, виментин и α-SMA) в клетках DHLF (фигура 3D-3F). В целом, ингибиторы HDAC потенциально ингибируют экспрессию маркеров ЕМТ в нормальных клетках и клетках IPF (LL29).

ПРИМЕР 4. Ингибиторы HDAC аннулировали экспрессию генов продуцирования ЕСМ, индуцированного TGF-β

[0082] ЕСМ играет важную роль в организации архитектуры ткани и регуляции функции клеток. Эта динамическая активность частично контролируется матриксной металлопротеиназой (ММР) и тканевыми ингибиторами металлопротеиназы (TIMPS). Поэтому исследовали маркеры ЕСМ (Timp1 и Timp3) и вспомогательные маркеры, такие как Lox-L2 (фигура 4). Стимуляция TGF-β1 усиливала (фигура 4А-4Н) экспрессию генов маркеров ЕСМ. В соответствии с экспрессией маркеров ЕМТ обработка ингибиторами HDAC обеспечивала ослабление экспрессии Timp1, Timp3 и LoxL2 в клетках NHLF (фигура 4А-С), DHLF (фигура 4D-4F) и LL29 (фигура 4G-4H) зависимым от дозы образом. В целом, обработка ингибиторами HDAC потенциально обеспечивала снижение экспрессии маркеров ЕСМ в клетках-фибробластах, стимулированных TGF-β1.

ПРИМЕР 5. Ингибиторы HDAC обеспечивают снижение индуцированной TGF-β экспрессии маркеров коллагена в клеточных линиях

[0083] Далее исследовали влияние ингибиторов HDAC в отношении генов отложения коллагена, таких как Col1 и Col3. Обработка TGF-β1 сильно повышала экспрессию генов Col1 и col3 в клетках NHLF, DHLF и L129 (фигура 5A-5F). Интересно, что обработка ингибиторами HDAC также обеспечивала ослабление экспрессии маркеров отложения коллагена, опосредованной TGF-β, во всех типах клеток (фигура 5A-5F) зависимым от дозы образом.

ПРИМЕР 6. Ингибиторы HDAC обеспечивают ослабление индуцированного BLM легочного фиброза у крыс Wistar

[0084] Индуцированный блеомицином легочный фиброз является широко используемой in-vivo моделью для оценки антифибротической активности в отношении IPF. В этом исследовании ингибиторы HDAC и стандартные лекарственные средства (согласно таблицам 2 и 3) вводили перорально в течение 14 дней после интратрахеального введения блеомицина, как описано в схематическом плане (фигура 6). Провоспалительные маркеры, такие как уровни ALP и LDH, были значительно повышены в образцах обработанного BLM контроля, при лечении соединениями-108 и -109 уровни ALP и LDH снижались в зависимости от дозы (фигура 7А и 7В). Кроме того, во всех образцах BALF измеряли число инфильтрирующих нейтрофилов и число WBC, при этом повышенные уровни нейтрофилов (фигура 7С) и WBC (фигура 7D) наблюдали в группе заболевания BLM, и эти уровни значительно снижались с помощью ингибиторов HDAC. Лечение Соединением 109 обеспечивало значительное уменьшение индуцированного BLM повышения уровней коллагена в легких (фигура 8А и 8В) и индекса легких (фигура 8С).

ПРИМЕР 7. Ингибиторы HDAC обеспечивали снижение экспрессии маркера коллагена путем модуляции уровней TGF-β in-vivo

[0085] Известно, что обработка BLM увеличивает воспаление и факторы роста в тканях легких, в частности, индукция TGF-β1 при обработке BLM приводит к стимуляции внеклеточных матричных белков и образованию коллагена. Обработки ингибиторами HDAC обеспечивают значительное снижение индуцированной BLM экспрессии гена TGF-β (фигура 9А и 9Е) и экспрессии других маркеров коллагена зависимым от дозы образом (фигура 9В, 9С, 9D и 9F).

ПРИМЕР 8. Ингибиторы HDAC обеспечивали уменьшение экспрессии маркеров фиброза (ЕМТ и ЕСМ) в модели легочного фиброза, индуцированного BLM

[0086] Наряду с уровнями коллагена тестировали влияние ингибиторов HDAC в отношении маркеров ЕМТ и ЕСМ. Лечение ингибиторами HDAC обеспечивало значительное ослабление индуцированных BLM уровней α-SMA (фигура 10А), FN1 (фигура 10 В) и TIMP1 (фигура 10С) в тканях крыс.

ПРИМЕР 9. Ингибиторы HDAC обеспечивают защиту от патологических изменений в легких, индуцированных блеомицином

[0087] Гистопатологический анализ с помощью Н&Е (шкала фиброза) и окрашивания по Массону (шкала Эшкрофта) показал, что ингибиторы HDAC (соединения-108 и -109) уменьшали индуцированное BLM утолщение альвеолярных стенок, уменьшали инфильтрацию воспалительных клеток, уменьшали отложение коллагеновых волокон по сравнению с группой, обработанной только BLM (фигура 11А, 11В, 11С и 12А, 12В, 12С). Совместно результаты in-vivo показали, что соединение-108 и соединение-109 могут эффективно защищать от индуцированного BLM воспаления, экспрессии маркеров фиброза и патологических изменений в тканях легких.

РЕЗУЛЬТАТЫ НА МОДЕЛИ ARDS ПРИМЕР 10

Лечение соединением-108 обеспечивало уменьшение инфильтрации нейтрофилов в BALF

[0088] LPS индуцировал значительное увеличение числа нейтрофилов в крови в группе контроля с заболеванием. Лечение 3 мг/кг соединения-108 обеспечивало значительное уменьшение индуцированного LPS числа нейтрофилов в крови (фигура 13А). LPS индуцировал значительное увеличение числа нейтрофилов и WBC в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF) в группе контроля с заболеванием. Лечение соединением-108 обеспечивало значительное уменьшение индуцированной LPS инфильтрации WBC (фигура 13 В) и нейтрофилов (фигура 13С).

ПРИМЕР 11

HDACi (соединение-108) обеспечивало уменьшение отека легких и индекса селезенки

[0089] Индукция LPS обеспечивала значительное увеличение индексов легких и селезенки в контроле с заболеванием. Лечение соединением-108 обеспечивало значительное уменьшение индуцированного LPS объема (индекса) легких (Фигура 14А) и индексов селезенки (фигура 14 В).

ПРИМЕР 12

Соединение-108 обеспечивало значительное снижение экспрессии провоспалительных цитокинов и хемокинов

[0090] Интратрахеальное (IT) введение LPS обеспечивало значительное усиление экспрессии IL-6, IL-1β, СС12, Сох-2, CXCL-6, CCL-7, CXCL-1 (суррогатного маркера IL-8) и CXCL-10 в тканях легких контрольных животных. Лечение соединением-108 обеспечивало значительное снижение повышения индуцированной LPS экспрессии маркеров воспаления у получавших лечение животных зависимым от дозы образом (фигуры 15 А-Н).

ПРИМЕР 13

Соединение-108 обеспечивало значительное снижение экспрессии хемокинов и генов TLR3

[0091] IT введение LPS обеспечивало значительное повышение экспрессии CXCL-11, TLR-3 и INF-γ в тканях легких контрольных животных с заболеванием. Лечение соединением-108 обеспечивало значительное уменьшение индуцированной LPS экспрессии маркеров воспаления зависимым от дозы образом (фигуры 16 А-С).

ПРИМЕР 14

Лечение соединением-108 уменьшало индуцированные LPS уровни IL-6 в образцах плазмы крови

[0092] Сенсибилизация с помощью LPS значительно повышала уровни IL-6 в плазме крови. Соединение-108 (3 мг/кг) обеспечивало снижение уровни IL-6 в плазме крови в обеих временных точках (фигуры 17 А-В).

ПРИМЕР 15

Соединение-108 обеспечивает обращение повреждения легких и легочного отека у крыс, сенсибилизированных LPS

[0093] В группе животных, которым инсталлировали LPS, наблюдали тяжелые патологические изменения (альвеолярные кровоизлияния/конгестия, альвеолярный/интерстициальный отек/дегенерация, альвеолярная/ интерстициальная инфильтрация воспалительных клеток, в частности, нейтрофилов, плазматических клеток, утолщение альвеолярной стенки с альвеолярным/бронхоальвеолярным воспалением), а также дисфункцию эндотелиального барьера. Как видно из результатов окрашивания с помощью Н&Е (фигура 18), наблюдали инфлюкс воспалительных клеток, таких как нейтрофилы, в альвеолярные пространства, что привело к утолщению межальвеолярной перегородки (фигура 18А). Более того, предварительная обработка соединением-108 значительно подавляла патологические последствия (индуцированные LPS) при дозах 1,5 и 3 мг/кг. В целом, гистопатологическое наблюдение показало, что в получавшей LPS + 1,5 мг/кг соединения и LPS + 3 мг/кг соединения (18 В) группе наблюдали значительное (р<0,01) уменьшение повреждения легких и инфильтрации воспалительных клеток.

ПРЕИМУЩЕСТВА ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0094] Настоящее изобретение предусматривает соединения, представляющие собой HDACi, формулы 1 на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты, которые применимы для предупреждения или лечения ARDS.

[0095] Настоящее изобретение также предусматривает соединения, представляющие собой HDACi, на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты для применения в предупреждении или лечении IPF, ARDS и поражения легких.

[0096] Настоящее изобретение также предусматривает профилактическое или терапевтическое средство для применения в предупреждении или лечении IPF и ARDS, которое предусматривает соединения, представляющие собой HDACi, на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты.

[0097] Соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты по настоящему изобретению применимы в лечении воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений, включая острое повреждение легких, острый респираторный дистресс-синдром (ARDS), идиопатический легочный фиброз, фиброз печени, фиброз сердца и фиброз почек.

Ссылки на литературные источники

1. George, P.M., Wells, A.U., Jenkins, R.G., Pulmonary fibrosis and COVID-19: the potential role for antifibrotic therapy. The Lancet Respir. Med.2020 pages 807-815.

2. Spagnolo, P., Balestro, E., Aliberti, S., Cocconcelli, E., Biondini, D., Casa, G.D., Sverzellati, N., Maher, T.M., 2020. Pulmonary fibrosis secondary to COVID-19: a call to arms? The Lancet Respir. Med pages 750-752.

3. Wu C, Chen X, Cai Y, et al. Risk Factors Associated With Acute Respiratory Distress Syndrome and Death in Patients With Coronavirus Disease 2019 Pneumonia in Wuhan, China [published online ahead of print, 2020 Mar 13]. JAMA Intern Med. 2020; 180(7) pages 1-11. doi:10.1001/jamainternmed.2020.0994

4. Uckun, F M, Hwang L, Trieu V, Selectively targeting TGF-p with Trabedersen/OT-101 in treatment of evolving and mild ARDS in COVID-19 Clin. Invest. (Lond.) (2020) 10(2), pages 167-17.

5. Richeldi L, Collard H R, Jones M G, Idiopathic pulmonary fibrosis, The Lancet, 389(10082)2017, Pages 1941-1952

6. P.J. Barnes, I. Adcock, Anti-inflammatory actions of steroids: molecular mechanisms Trends Pharmacol Sci., 14 (1993), pages 436-441

7. Roy C. St. J, orinsky P M, Immunologic Therapy for ARDS, Septic Shock, and Multiple-Organ Failure, Clinical Implications of Basic Research 103(3), 1993, Pages 932-943

8. Khilnani, G C,Hadda, V,. "Corticosteroids and ARDS: A review of treatment and prevention evidence." Lung India: official organ of Indian Chest Society, 28 (2) (2011): 114-9. doi:10.4103/0970-2113.80324

9. Tang, J, Yan, H, Zhuang, S, Histone deacetylases as targets for treatment of multiple diseases. Clinical science (London, England: 1979) 124 (11) (2013)pages 651-62. doi: 10.1042/CS20120504

10. Saito, S et al. Tubastatin ameliorates pulmonary fibrosis by targeting the TGFp-PI3K-Akt pathway. PloS one, 12,10 e0186615.2017, doi: 10.1371/journal.pone.0186615

11. Saito, S et al. HDAC8 inhibition ameliorates pulmonary fibrosis. Am. J of Physiol. Lung cellular molecular physiology 316(1) (2019): L175-L186. doi:10.1152/ajplung.00551.2017

12. Balaji, S A, Udupa N, Rao M C, Gupta V, Rangarajan A, Role of the Drug Transporter ABCC3 in Breast Cancer Chemoresistance. PloS one, 11(5) e0155013. doi:10.1371/journal.pone.0155013

13. Balaji S A, Karthik G, Krishna T S, Shaikh R B, Ramakrishna S, Biochanin-A ameliorates pulmonary fibrosis by suppressing the TGF-p mediated EMT, myofibroblasts differentiation and collagen deposition in in vitro and in vivo systems. Phytomedicine, l%, 2020, 153298

14. Akgedik,R. Akgedik, §. Karamanli, H.Uysal, S. Bozkurt, B.Ozol, D. Armutcu, F.Yil dinmZ.Effect of Resveratrol on Treatment of Bleomycin-Induced Pulmonary Fibrosis in Rats, Inflammation, 35 (2012), pp.1732-1741

15. Ashcroft T, Simpson JM, Timbrell V Simple method of estimating severity of pulmonary fibrosis on a numerical scale. J Clin Pathol 41: (1988) 467-470.

16. Zaghloul, M.S. Abdel-Salam, R.A. Said, E. Suddek, G.M. SalemH.A.-R Attenuation of Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats by flavocoxid treatment Egypt. J. Basic Appl. SciA (2017), pages 256-263

17. Korfei M, Stelmaszek D, MacKenzie B, Skwarna S, Chillappagari S, Bach AC, et al. (2018) Comparison of the antifibrotic effects of the pan-histone deacetylase-inhibitor panobinostat versus the IPF-drug pirfenidone in fibroblasts from patients with idiopathic pulmonary fibrosis. PLoS ONE 13(11): e0207915. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0207915

18. Shu, D. Y., & Lovicu, F. J. (2017). Myofibroblast transdifferentiation: The dark

force in ocular wound healing and fibrosis. Progress in retinal and eye research, 60, 44-65. https://doi.org/10.1016/j.preteyeres.2017.08.001.

Группа изобретений относится к области фармацевтики. Раскрыты применения соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты для лечения воспалительных нарушений легких и для лечения фиброзных нарушений. Группа изобретений обеспечивает лечение воспалительных нарушений легких и фиброзных нарушений за счет ингибирования HDAC. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 18 ил., 4 табл., 15 пр.

1. Применение соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1

где

кольца A и B независимо выбраны из арила или пиридинила;

R₁ представляет собой метил;

R₂, R₃, R₄, независимо выбраны из водорода, алкокси, гидрокси, галогена;

R₅, R₆ и R₇ независимо представляют собой водород;

и X представляет собой O,

для лечения воспалительных нарушений легких.

2. Применение соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты формулы 1

где

кольца A и B независимо выбраны из арила или пиридинила;

R₁ представляет собой метил;

R₂, R₃, R₄ независимо выбраны из водорода, алкокси, гидрокси, галогена;

R₅, R₆ и R₇ независимо представляют собой водород;

и X представляет собой O,

для лечения фиброзных нарушений.

3. Применение по п. 1 или 2, где структурные формулы соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты предусматривают

4. Применение по п. 1 или 2, где соединения на основе сульфонилгидроксаминовой кислоты предусматривают 4-(N-(3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1-метил-1H-индол-5-ил)сульфамоил)-N-гидроксилбензамид (107), 4-(N-(3-(3-хлорфенил)-1-метил-1H-индол-5-ил)сульфамоил)-N-гидроксибензамид (108), 4-(N-(3-(6-этоксипиридин-3-ил)-1-метил-1H-индол-5-ил)сульфамоил)-N-гидроксибензамид (109), N-гидрокси-4-(N-(1-метил-3-(2,4,5-трифторфенил)-1H-индол-5-ил)сульфамоил)бензамид (110).

5. Применение по любому из пп. 1, 3 или 4, где указанное соединение используют в эффективной дозе, и где воспалительные нарушения легких, связанные с цитокиновым штормом, представляют собой острое повреждение легких, острый респираторный дистресс-синдром (ARDS), идиопатический легочный фиброз.

6. Применение по любому из пп. 2-4, где указанное соединение используют в эффективной дозе, и где фиброзные нарушения предусматривают фиброз печени, фиброз сердца и фиброз почек.

7. Применение по любому из пп. 5 или 6, где эффективная доза находится в диапазоне от 2 мг/кг до 4 мг/кг массы тела.