СОСТАВЫ АНАЛОГОВ ГЛЮКАГОНОПОДОБНОГО ПЕПТИДА-2 (GLP-2) Российский патент 2025 года по МПК A61K38/26 C07K14/605 A61K47/10 A61K47/12 A61K47/18 A61K47/22 A61K47/26 A61K9/08 A61P1/00 

Область техники

Настоящее изобретение относится к составам аналогов глюкагоноподобного пептида-2 (GLP-2, ГПП-2) и их медицинскому применению, например, в лечении и/или предотвращении нарушений, связанных с желудком и кишечником, а также для уменьшения побочных эффектов химиотерапии и лучевой терапии. Кроме того, также описаны твердые композиции, содержащие ацетатные соли аналогов глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), которые можно применять для получения жидких составов.

Уровень техники

GLP-2 человека представляет собой пептид из 33 аминокислот, имеющий следующую последовательность: Hy-His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-OH. Он образуется в результате специфического посттрансляционного процессинга проглюкагона в энтероэндокринных L-клетках кишечника и в определенных областях ствола мозга. GLP-2 связывается с единственным сопряженным с G-белком рецептором, относящимся к семейству глюкагона-секретина класса II.

Сообщалось, что GLP-2 индуцирует значительный рост эпителия слизистой оболочки тонкого кишечника за счет стимуляции пролиферации стволовых клеток в криптах и ингибирования апоптоза в ворсинках (Drucker et al., 1996, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:7911-7916). GLP-2 также влияет на рост толстой кишки. Кроме того, GLP-2 ингибирует опорожнение желудка и секрецию желудочной кислоты (Wojdemann et al., 1999, J.Clin.Endocrinol.Metab.84:2513-2517), усиливает барьерную функцию кишечника (Benjamin et al., 2000, Gut 47:112-119), стимулирует транспорт гексозы в кишечнике за счет активации транспортеров глюкозы (Cheeseman, 1997, Am.J.Physiol.R1965-71) и увеличивает кровоток в кишечнике (Guan et al., 2003, Gastroenterology, 125:136-147).

В данной области техники признано, что аналоги рецептора глюкагоноподобного пептида-2 обладают терапевтическим потенциалом для лечения заболеваний кишечника. Однако нативный hGLP-2, пептид желудочно-кишечного тракта из 33 аминокислот, не подходит для применения в клинических условиях из-за его очень короткого периода полувыведения у человека, составляющего примерно 7 минут для полноразмерного GLP-2 [1-33] и 27 минут для усеченного GLP-2 [3-33]. Короткий период полувыведения в значительной степени обусловлен разрушением ферментом дипептидилпептидазой IV (DPP-IV). Соответственно, в данной области техники предпринимались попытки разработать агонисты рецептора GLP-2 с лучшими фармакокинетическими характеристиками, в частности, для улучшения периода полувыведения молекул GLP-2. Например, были предложены аналоги GLP-2 с заменами, такие как, например, аналоги GLP-2, содержащие замену Gly в положении 2 ([hGly2] GLP-2, тедуглутид), которая увеличивает период полувыведения с семи минут (нативный GLP-2) до примерно двух часов. Ацилирование пептидных лекарственных средств цепями жирных кислот также оказалось благоприятным для увеличения продолжительности циркуляции в системном кровотоке, а также для повышения ферментативной стабильности без нарушения биологической эффективности. Однако, несмотря на то, что эти попытки улучшили фармакокинетику аналогов GLP-2, и иногда их описывают в данной области техники как «длительно действующие», следует иметь в виду, что это относится к сравнению с нативным hGLP-2, период полувыведения которого составляет порядка нескольких часов, а не минут. В свою очередь, это означает, что аналоги GLP-2 по-прежнему необходимо вводить пациентам один или более раз в сутки.

В US 5789379 раскрыты аналоги GLP-2 для введения путем инъекции. Аналоги были обеспечены в виде порошкообразных пептидов и смешаны с фосфатно-солевым буфером (ФСБ) перед инъекцией при pH 7,3-7,4 с концентрацией GLP-2 130 мг/мл. В некоторых случаях композицию GLP-2/ФСБ смешивали с желатином, чтобы обеспечить депо, образованное из раствора 130 мг/л GLP-2 в ФСБ/15% желатина. В US 5789379 не раскрыты стабильные водные жидкие составы аналогов GLP-2, а аналоги GLP-2 обычно восстанавливают из порошка перед инъекцией.

В WO 97/39031 и US 6184201 раскрыт аналог GLP-2, [Gly²]GLP-2. В данном случае аланин в положении 2 был заменен глицином, чтобы сделать пептид устойчивым к расщеплению DPP IV. Как и в US 5789379, аналог GLP-2 был обеспечен в виде порошкообразного пептида и смешан с физиологическим солевым раствором, ФСБ или 5% декстрозой перед инъекцией, необязательно с добавлением уксусной кислоты в качестве усилителя растворимости.

В WO 02/066511 описаны аналоги GLP-2, имеющие продленный период полувыведения in vivo, и их применение в качестве лекарственных средств в лечении желудочно-кишечных нарушений, таких как воспалительные заболевания кишечника. Аналоги GLP-2 хранили в лиофилизированной форме и восстанавливали для введения в средах, например, с использованием физиологического солевого раствора или ФСБ.

В WO 01/41779 описано применение h[Gly²]GLP-2 в качестве предварительного лечения для ингибирования апоптоза, индуцированного химиотерапией, и стимулирования выживаемости клеток. h[Gly²]GLP-2 доставляют путем подкожной или внутривенной инъекции или инфузии после восстановления аналога в ФСБ.

WO 2001/049314 относится к составам пептидов GLP-2 и их аналогам, которые проявляют превосходную стабильность после хранения и/или воздействия повышенных температур. Композиции GLP-2 содержат пептид GLP-2 или его аналог, фосфатный буфер, L-гистидин и маннит.

В WO 2006/117565 описаны аналоги GLP-2, которые содержат одну из нескольких замен по сравнению с [Gly²]GLP-2 и которые улучшили биологическую активность в условиях in vivo и/или улучшили химическую стабильность, например, согласно оценке в анализах стабильности в условиях in vitro. В частности, описаны аналоги GLP-2, которые содержат замены в одном или более положениях 8, 16, 24 и/или 28 последовательности GLP-2 дикого типа, необязательно в комбинации с дополнительными заменами в положении 2 и одной или более заменами в положениях 3, 5, 7, 10 и 11, и/или делецию одной или более аминокислот с 31 по 33. Эти замены также можно комбинировать с добавлением N-концевой или С-концевой стабилизирующей пептидной последовательности. Также описано введение указанных аналогов GLP-2 один раз в сутки или два раза в сутки. Среди молекул, описанных в WO 2006/117565, описан глепаглутид (ZP1848), который был разработан для придания ему стабильности в жидких составах и который, как правило, вводят путем ежедневного дозирования с использованием шприц-ручки.

В данной области техники все еще существует проблема, касающаяся улучшения состава аналогов GLP-2, в частности, обеспечения стабильных жидких составов, которые способны храниться в течение длительного времени без чрезмерных уровней физического или химического разрушения активной мономерной формы пептида. Химические пути, которые могут функционировать в жидких составах пептидных лекарственных средств, включают образование ковалентно связанных димеров и олигомеров пептида, уменьшение количества активной мономерной формы пептида посредством образования этих ковалентно связанных высокомолекулярных олигомерных продуктов. Закон действия масс означает, что обычно, чем выше концентрация пептидного лекарственного средства в составе, тем выше вероятность образования ковалентно связанных олигомерных продуктов.

В отношении состава аналога GLP-2 цель также будет заключаться в обеспечении составов, в которых вязкость состава контролируют в пределах диапазона, который делает его подходящим для применения в устройствах для доставки, таких как предварительно заполненные шприцы, инфузионные насосы, носимые инъекторы или автоинъекторы.

Краткое описание изобретения

В широком смысле настоящее изобретение основано на исследованиях, описанных в примерах, которые привели к неожиданным результатам, касающимся жидких составов аналогов GLP-2, позволяющие их долгосрочное хранение в виде жидкостей и/или что делает их особенно пригодными для доставки с помощью устройства для доставки лекарственного средства.

В первом исследовании авторы настоящего изобретения обнаружили, что ацетат, присутствующий в составе, который происходит из аналогов GLP-2, влияет на вязкость состава. Это открывает возможность контроля вязкости состава путем изменения и/или контроля концентрации ацетата. Жидкий состав с низким диапазоном вязкости можно применять в клинических условиях, поскольку он обеспечивает преимущества при разработке и получении устройства для доставки лекарственного средства за счет потенциального уменьшения поломок, нарушения дозирования, неточности дозирования и других сбоев во время получения лекарственного продукта и/или использования пациентом. Кроме того, низкая вязкость может обеспечить более быструю инъекцию и/или использование игл с более узким отверстием (т.е. более высокого калибра), что, в свою очередь, может уменьшить дискомфорт при инъекции. Это открывает возможность обеспечения составов аналога GLP-2 в виде устройства для доставки лекарственного средства, такого как предварительно заполненный шприц, автоинъектор с корректируемой дозой, одноразовый автоинъектор, носимый инъектор или инфузионный насос, обеспечивая посредством этого пациентам готовый к применению состав в более простом, более безопасном и более удобном для пациента устройстве. Контроль более высокой вязкости состава может быть подходящим для других устройств для доставки лекарственных средств.

Во втором исследовании авторы настоящего изобретения обнаружили, что во время долгосрочного хранения ZP1848 (глепаглутида) при 2-8°C образование ковалентно связанных олигомеров зависит от концентрации. Однако в отличие от обычной ситуации, в которой закон действия масс подразумевает, что образование ковалентных олигомеров увеличивается с увеличением концентрации пептидного лекарственного средства, авторы настоящего изобретения обнаружили, что концентрационная зависимость для образования олигомеров обратно пропорциональна увеличению концентрации аналога GLP-2. Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией, авторы настоящего изобретения полагают, что уменьшение образования ковалентно связанных олигомеров при увеличении концентрации аналога GLP-2 возникает в результате того, что лизиновый хвост аналога GLP-2 способствует образованию самоассоциированных структурных агрегатов нативного пептида, что препятствует образованию ковалентно связанных олигомеров в составе. Это означает, что слабо самоассоциированные молекулы способны диссоциировать с высвобождением биологически активного мономера после введения пациенту, а не вызывать потерю активных молекул, как это происходит при образовании ковалентно связанных олигомеров.

В третьем исследовании авторы настоящего изобретения обнаружили, что аналоги GLP-2, используемые в составах согласно настоящему изобретению, несовместимы с фосфатным буфером, обычно используемым в предшествующем уровне техники для восстановления порошкообразных или лиофилизированных композиций GLP-2. Это исследование показало, что только некоторые буферы были совместимы с изготовлением аналогов GLP-2 таким образом, чтобы они являлись подходящими для долгосрочного хранения в жидком виде.

Соответственно, согласно первому аспекту настоящего изобретения предложен стабильный жидкий фармацевтический состав, причем указанный состав содержит аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), при этом указанный аналог GLP-2 представлен формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH; и

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

при этом указанный состав содержит:

(а) аналог GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл;

(b) буфер, выбранный из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, при этом указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ;

(c) неионный модификатор тоничности, выбранный из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и

(d) аргинин в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4.

Согласно некоторым вариантам реализации состав содержит 5% или менее аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов. Альтернативно или дополнительно, общая концентрация ацетата, происходящего из аналога GLP-2, в составе менее или равна 11% ацетата на мг аналога GLP-2. Альтернативно или дополнительно, образование ковалентно связанных олигомеров аналога GLP-2 обратно пропорционально концентрации аналога GLP-2 в составе.

Компоненты состава и их количества обеспечивают состав с содержанием аналога GLP-2 по меньшей мере 90% и менее чем 10% продуктов химического разрушения при хранении в течение по меньшей мере 18 месяцев при 2-8°C.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено промышленное изделие или набор, содержащий контейнер, вмещающий стабильный фармацевтический состав согласно настоящему изобретению.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено устройство для доставки, содержащее жидкий состав, содержащий аналог GLP-2 согласно настоящему изобретению.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен состав аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) согласно настоящему изобретению для применения в терапии.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен состав аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) согласно настоящему изобретению для применения в способе лечения и/или предотвращения нарушения, связанного с желудком и кишечником, у пациента-человека.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен способ получения стабильного жидкого фармацевтического состава, содержащего аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), причем указанный аналог GLP-2 представлен формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH;

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

при этом указанный способ включает изготовление (a) аналога GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл, (b) с буфером, выбранным из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ; (c) с неионным модификатором тоничности, выбранным из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, причем указанный неионный модификатор тоничности присутствует в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и (d) с аргинином в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4;

при этом указанный состав содержит 5% или менее аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено применение состава, содержащего аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), причем указанный аналог GLP-2 представлен формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH;

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

для обеспечения жидкого фармацевтического состава, который стабилен в течение 24 месяцев при хранении при 2-8°C, при этом указанный состав содержит:

(a) аналог GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл;

(b) буфер, выбранный из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ;

(c) неионный модификатор тоничности, выбранный из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и

(d) аргинин в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен способ модулирования вязкости стабильного жидкого фармацевтического состава, содержащего аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), причем указанный аналог GLP-2 представлен формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH;

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

при этом указанный способ включает изготовление (a) аналога GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл, (b) с буфером, выбранным из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера или MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ; (c) с неионным модификатором тоничности, выбранным из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, причем указанный неионный модификатор тоничности присутствует в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и (d) с аргинином в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4;

при этом указанная общая концентрация ацетата, происходящего из аналога GLP2, в составе менее или равна 11% ацетата на мг аналога GLP-2, и при этом указанный состав имеет вязкость более 0,8 и ниже или равную 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен способ уменьшения образования ковалентно связанных олигомерных продуктов аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) в стабильном жидком фармацевтическом составе, содержащем аналог GLP-2, представленный формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH;

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

при этом указанный способ включает изготовление (a) аналога GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл, (b) с буфером, выбранным из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера или MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ; (c) с неионным модификатором тоничности, выбранным из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, причем указанный неионный модификатор тоничности присутствует в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и (d) с аргинином в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4;

при этом указанный состав содержит 5% или менее аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов. В некоторых случаях в этом аспекте настоящего изобретения образование ковалентно связанных олигомеров аналога GLP-2 обратно пропорционально концентрации аналога GLP-2 в составе.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено применение состава для уменьшения образования ковалентно связанных олигомерных продуктов аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), причем указанный аналог GLP-2 представлен формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH;

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

в жидком фармацевтическом составе, который стабилен в течение 24 месяцев при хранении при 2-8°C, при этом указанный состав содержит:

(a) аналог GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл;

(b) буфер, выбранный из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ;

(c) неионный модификатор тоничности, выбранный из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и

(d) аргинин в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4;

при этом указанный состав содержит 5% или менее аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов. В некоторых случаях в этом аспекте настоящего изобретения образование ковалентно связанных олигомеров аналога GLP-2 обратно пропорционально концентрации аналога GLP-2 в составе.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено применение состава для модулирования вязкости жидкого фармацевтического состава, содержащего аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), причем указанный аналог GLP-2 представлен формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH;

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

в жидком фармацевтическом составе, который стабилен в течение 24 месяцев при хранении при 2-8°C, при этом указанный состав содержит:

(a) аналог GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл;

(b) буфер, выбранный из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ;

(c) неионный модификатор тоничности, выбранный из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и

(d) аргинин в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4;

при этом указанная общая концентрация ацетата, происходящего из аналога GLP2, в составе менее или равна 11% ацетата на мг аналога GLP-2, и состав имеет вязкость от 0,8 до 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложена твердая композиция, содержащая ацетатную соль аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), имеющую формулу:

(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен стабильный водный фармацевтический состав, причем указанный состав содержит

(a) твердую композицию согласно настоящему изобретению в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл;

(b) буфер, выбранный из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ;

(c) неионный модификатор тоничности, выбранный из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ; и

(d) аргинин в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4;

при этом указанный состав содержит 5% или менее аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов, и при этом указанный состав имеет вязкость от 0,8 до 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C.

Во всех аспектах настоящего изобретения, описанных в настоящей заявке, буфер может быть выбран из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера и ацетатного буфера.

Во всех аспектах настоящего изобретения, описанных в настоящей заявке, неионный модификатор тоничности может быть выбран из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина и сорбита.

Согласно некоторым вариантам реализации состав содержит 5% или менее аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов. Альтернативно или дополнительно, общая концентрация ацетата, происходящего из аналога GLP-2, в составе менее или равна 11% ацетата на мг аналога GLP-2. Альтернативно или дополнительно, образование ковалентно связанных олигомеров аналога GLP-2 обратно пропорционально концентрации аналога GLP-2 в составе.

Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к стабильному жидкому фармацевтическому составу, причем указанный состав содержит аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), при этом указанный аналог GLP-2 представлен формулой:

R¹- His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH; и

Z² представляет собой пептидную последовательность из 6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное причем указанный состав содержит компоненты, указанные в любом из аспектов настоящего изобретения, изложенных в данном документе.

Согласно этому аспекту настоящего изобретения составы, содержащие аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), или его соли, можно применять для лечения и/или предотвращения нарушений, связанных с желудком и кишечником, таких как язвы, нарушения пищеварения, синдромы мальабсорбции, синдром короткой кишки, синдром «слепого мешка», воспалительное заболевание кишечника, спру-целиакия (например, вызванная глютен-индуцированной энтеропатией или целиакией), тропическая спру, гипогаммаглобулинемическая спру, энтерит, регионарный энтерит (болезнь Крона), язвенный колит, повреждение тонкого кишечника или синдром короткой кишки (СКК). Альтернативно или дополнительно, аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) можно применять для лечения и/или предотвращения нарушений, связанных с желудком и кишечником, таких как радиационный энтерит, инфекционный или постинфекционный энтерит или повреждение тонкого кишечника, вызванное токсичными или другими химиотерапевтическими агентами. В этом случае лечение с применением аналога GLP-2 необязательно можно комбинировать с одним или более видами противораковой терапии, и, следовательно, оно может включать введение пациенту одного или более химиотерапевтических агентов или лечение пациента лучевой терапией.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения в приведенной выше формуле X5 представляет собой Thr и/или X11 представляет собой Ala. Примеры этих аналогов глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) включают:

ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO:1)

ZP2949 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKK-OH (SEQ ID NO:2);

ZP2711 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKK-OH (SEQ ID NO:3);

ZP2469 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO:4);

ZP1857 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH₂ (SEQ ID NO:5);

ZP2530 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-OH (SEQ ID NO:6).

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения в приведенной выше формуле X5 представляет собой Ser и/или X11 представляет собой Ser. Примеры этих аналогов глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) включают:

ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH_{2 (}SEQ ID NO:7);

ZP1855 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH₂ (SEQ ID NO: 8);

ZP2242 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO:9).

Варианты реализации настоящего изобретения далее будут описаны с помощью примера, но не с целью ограничения, со ссылкой на прилагаемые фигуры. Однако различные дополнительные аспекты и варианты реализации настоящего изобретения будут понятны специалистам в данной области техники с учетом настоящего раскрытия.

В настоящей заявке «и/или» следует рассматривать как конкретное описание каждого из двух указанных признаков или компонентов, включая другой или без него. Например, «A и/или B» следует рассматривать как конкретное описание каждого из (i) A, (ii) B и (iii) A и B, как если бы каждый из них был указан в настоящей заявке по отдельности.

Если контекст не требует иного, описания и определения признаков, изложенных выше, не ограничиваются каким-либо конкретным аспектом или вариантом реализации настоящего изобретения и в равной степени применимы ко всем аспектам и вариантам реализации, которые описаны.

Краткое описание чертежей

На Фигуре 1 показана типичная хроматограмма, показывающая отделение олигомеров от пептида ZP1848.

На Фигуре 2 показано, как вязкость (квадраты) и гидродинамический радиус (z-среднее) (круги) варьировались как функция концентрации ацетата после получения состава. Данные показывают, что при более чем 11% ацетата вязкость и гидродинамический радиус (z-среднее) начинают увеличиваться.

На Фигуре 3 показана оценка стабильности при 20 мг/мл (нормированная к 100% в начале) с использованием различных буферов при 40° в течение от 0 до 3 недель.

На Фигуре 4 показана стабильность при 2 мг/м (нормированная к 100% в начале) с использованием различных буферов при 40° в течение от 0 до 3 недель.

На Фигуре 5 показана оценка стабильности при 20 мг/мл (нормированная к 100% в начале) с использованием различных агентов для контроля тоничности при 40° в течение от 0 до 3 недель.

На Фигуре 6 показана оценка стабильности при 2 мг/мл (нормированная к 100% в начале) с использованием различных агентов для контроля тоничности при 40° в течение от 0 до 3 недель.

На Фигуре 7 показана чистота Составов с 1 по 5 с использованием различных концентраций ацетатной соли ZP1848, другой солевой формы, другого агента для контроля тоничности и другого буфера.

На Фигуре 8 показана стабильность пептида в комбинации с различными консервантами при 25°C в течение 13 недель.

На Фигуре 9 показана чистота изученных составов по данным ВЭЖХ при 25°C (условия ускоренного исследования).

Подробное описание изобретения

Определения

Если не указано иное, следующие определения предложены для конкретных терминов, которые используются в приведенном выше письменном описании.

Во всем описании и формуле изобретения для природных аминокислот используют обычные однобуквенные и трехбуквенные коды. Все аминокислотные остатки в пептидах согласно настоящему изобретению предпочтительно имеют L-конфигурацию, однако аминокислоты с D-конфигурацией также могут присутствовать.

Предпочтительные соединения согласно настоящему изобретению обладают по меньшей мере одним видом биологической активности GLP-2, в частности, вызывают рост кишечника. Это можно оценить в анализах in vivo, например, как описано в примерах (например) WO 2006/117565, в которых массу кишечника или его части определяют после того, как тестируемое животное лечили или подвергали воздействию аналога GLP-2.

Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения жидкие составы, содержащие аналог GLP-2, имеют общую концентрацию ацетата в составе менее или равную 11% ацетата на мг аналога GLP-2, и более предпочтительно менее или равную 10% ацетата на мг аналога GLP-2, более предпочтительно менее или равную 9% ацетата на мг аналога GLP-2, более предпочтительно менее или равную 8% ацетата на мг аналога GLP-2, более предпочтительно менее или равную 7% ацетата на мг аналога GLP-2, более предпочтительно менее или равную 6% ацетата на мг аналога GLP-2, более предпочтительно менее или равную 5% ацетата на мг аналога GLP-2, более предпочтительно менее или равную 4% ацетата на мг аналога GLP-2, более предпочтительно менее или равную 3% ацетата на мг аналога GLP-2 и более предпочтительно менее или равную 2% ацетата на мг аналога GLP-2. Концентрациюацетата в лиофилизированной лекарственной субстанции можно контролировать, корректируя концентрацию уксусной кислоты в подвижной фазе, используемой на заключительном хроматографическом этапе. В результате будет получена лекарственная субстанция с содержанием ацетата ниже 11%. Таким образом, например, для состава, содержащего 20 мг/мл аналога GLP-2, общая концентрация ацетата будетменее или равна 37 мМ. В качестве справки, общая концентрация ацетата 10% соответствует 34 мМ, 9% соответствует 30 мМ, 8% соответствует 27 мМ, 7% соответствует 24 мМ и 6% соответствует 20 нМ. Общая концентрация ацетата может быть определена с использованием методов, известных в данной области техники, например, ВЭЖХ.

В приведенных ниже примерах показано, что вязкость жидких составов согласно настоящему изобретению зависит от общей концентрации ацетата. Предпочтительно составы имеют вязкость от 0,8 до 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C. В целях удобства вязкость может быть измерена с помощью microVISC™. Гидродинамический радиус может быть измерен одновременно с этим с использованием считывающего устройства для планшетов для оценки динамического рассеяния света, DLS (Wyatt DynaPro II). Были приготовлены образцы, содержащие лекарственную субстанцию (DS) аналога GLP-2, содержащую 6% ацетата, затем для имитации DS, содержащей 7,8-15% ацетата, был добавлен ацетат. Данные по промышленным составам, в которых концентрация ацетата варьировалась от 6,7 до 15%, показаны ниже на Фигуре 2. Эффект контроля общей концентрации ацетата заключается в том, что инъецируемость составов согласно настоящему изобретению можно модулировать, например, уменьшая общую концентрацию ацетата, чтобы обеспечить менее вязкий состав, который легче вводить путем инъекции.

Жидкие составы согласно настоящему изобретению предпочтительно представляют собой изоосмотические жидкие составы. «Изоосмотический» означает, что составы согласно настоящему изобретению имеют осмотическое давление, которое аналогично или сходно с таковым физиологических жидкостей. Предпочтительно составы согласно настоящему изобретению имеют осмоляльность приблизительно 300±60 мОсм, измеренную с помощью осмометра.

Дополнительно или альтернативно, настоящее изобретение демонстрирует, что образование ковалентно связанных олигомеров аналога GLP-2 обратно пропорционально концентрации аналога GLP-2 в составе. Как показано в примерах, это количество ковалентно связанных олигомеров можно определить с использованием эксклюзионной хроматографии и определения площади под пиками для мономерного аналога GLP-2 и олигомеров, соответственно. Это можно сделать с помощью системы ВЭЖХ Dionex Ultimate3000, обеспечивающей линейный градиент, при скорости потока 0,5 мл/мин, использованной для анализа. Подвижная фаза состояла из 0,1% ТФУ в 45% ацетонитриле и 55% воды Milli-Q. Для детектирования использовали длину волны 215 нм. Это означает, что составы согласно настоящему изобретению обычно содержат аналог GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл, более предпочтительно в концентрации от приблизительно 15 мг/мл до приблизительно 25 мг/мл и наиболее предпочтительно в концентрации приблизительно 20 мг/мл. Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение обычно содержит аналог GLP-2 в концентрации приблизительно 2 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл или 20 мг/мл. Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения предпочтительно концентрация аналога GLP-2 выбрана так, что состав содержит 10% или менее, более предпочтительно 5% или менее, более предпочтительно 4% или менее, более предпочтительно 3% или менее и более предпочтительно 2% или менее аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов, предпочтительно после 18 месяцев хранения. В качестве иллюстрации, количество ковалентно связанного олигомерного продукта может находиться в диапазоне от 2% до 5%, более предпочтительно в диапазоне от 2% до 4% и наиболее предпочтительно в диапазоне от 2% до 3%.

В некоторых случаях состав согласно настоящему изобретению можно применять в схеме дозирования один или два раза в сутки. В некоторых случаях состав согласно настоящему изобретению можно применять в схеме дозирования один или два раза в неделю. Альтернативно или дополнительно, схема дозирования аналогов GLP-2 согласно настоящему изобретению может включать множество или курс доз, разделенных во времени на 2 дня, 2,5 дня, 3 дня, 3,5 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней или 12 дней. Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения дозы разделены во времени на 3 дня, 3,5 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней или 8 дней. Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения дозы разделены во времени на 3 дня, 3,5 дня, 4 дня или 7 дней. Как будет понятно в данной области техники, время между дозами может изменяться до некоторой степени так, что любая и каждая доза не отделена точно одинаковым интервалом времени. Интервал часто будет установлен по усмотрению врача. Таким образом, дозы могут быть разделены во времени клинически приемлемым интервалом времени, например, от приблизительно 2 дней до приблизительно 10 дней или от приблизительно 3 или 4 дней до приблизительно 7 или 8 дней.

Составы согласно настоящему изобретению представляют собой стабильные жидкие фармацевтические составы аналогов GLP-2. «Стабильный» состав представляет собой состав, в котором пептид по существу сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность, и/или биологическую активность при хранении. Предпочтительно состав по существу сохраняет свою физическую и химическую стабильность, а также свою биологическую активность при хранении. Период хранения обычно выбран на основании предусмотренного срока годности состава. Составы согласно настоящему изобретению обеспечены в виде стабильных жидких составов, например, стабильных водных жидких составов. В данной области техники доступны различные аналитические методики измерения стабильности белка, которые рассматриваются в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) и Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), например. Согласно настоящему изобретению «стабильные» составы включают составы, в которых по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 96%, более предпочтительно по меньшей мере 97%, более предпочтительно по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% аналога GLP-2 является активным в составе после его хранения при 2-8°C в течение по меньшей мере 18 месяцев.

Стабильность может быть измерена при выбранной температуре в течение выбранного периода времени, например, используя повышенную температуру, чтобы уменьшить период тестирования состава. Обычно хранение при температуре от 2 до 8°C означает хранение в нормальных условиях охлаждения. Согласно определенным вариантам реализации состав стабилен при таких условиях в течение по меньшей мере 12 месяцев, более предпочтительно по меньшей мере 18 месяцев, более предпочтительно по меньшей мере 24 месяцев. Стабильность можно оценить качественно и/или количественно множеством различных способов, включая оценку образования агрегатов (например, с использованием эксклюзионной хроматографии, путем измерения мутности и/или путем визуального осмотра); путем оценки гетерогенности заряда с использованием катионообменной хроматографии, визуализирующей капиллярной изоэлектрической фокусировки (icIEF) или капиллярного зонного электрофореза; анализ аминоконцевой или карбоксиконцевой последовательности; масс-спектрометрический анализ; анализ методом электрофореза в ДСН-ПААГ (SDS-PAGE) для сравнения восстановленного и интактного антитела; анализ пептидной карты (например, триптический или LYS-C); оценку биологической активности или антигенсвязывающей функции антитела; и т.д. Нестабильность может включать любое одно или более из указанных далее: агрегацию, дезамидирование (например, дезамидирование Asn), окисление (например, окисление Met), изомеризацию (например, изомеризацию Asp), расщепление связей (clipping)/гидролиз/фрагментацию (например, фрагментацию шарнирной области), образование сукцинимида, неспаренный (ые) цистеин (ы), N-концевое удлинение, C-концевой процессинг, различия в гликозилировании и т. д.

Пептид «сохраняет свою физическую стабильность» в фармацевтическом составе, если он не показывает признака (или показывает очень незначительный признак) агрегации, преципитации и/или денатурации, например, при визуальном осмотре цвета и/или прозрачности или при измерении с помощью рассеяния УФ-света, динамического рассеяния света, кругового дихроизма или эксклюзионной хроматографии, и считается, что он все еще сохраняет свою биологическую активность.

Пептид «сохраняет свою химическую стабильность» в фармацевтическом составе, если химическая стабильность в конкретный момент времени такова, что считается, что пептид все еще сохраняет свою биологическую активность, как определено ниже. Химическую стабильность можно оценить путем детектирования и количественного определения химически измененных форм пептида. Химическое изменение может включать изомеризацию, окисление, модификацию размера (например, расщепление связей), которые можно оценить с помощью ВЭЖХ или эксклюзионной хроматографии, SDS-PAGE и/или масс-спектрометрии, например. Другие типы химического изменения включают изменение заряда n (например, происходящее в результате дезамидирования), которое можно оценить с помощью ВЭЖХ или ионообменной хроматографии, или icIEF, например.

Аналоги GLP-2

Аналоги GLP-2, присутствующие в составах согласно настоящему изобретению, содержат одну или более замен, делеций, инверсий или добавлений аминокислот по сравнению с нативным GLP-2 и как определено выше. Это определение также включает синонимические термины «миметики GLP-2» и/или «агонисты GLP-2». Кроме того, аналог согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать химическую модификацию одной или более из боковых групп его аминокислот, α-атомов углерода, концевой аминогруппы или концевой карбоксильной группы. Химическая модификация включает, но не ограничивается ими, добавление химических фрагментов, создание новых связей и удаление химических фрагментов. Модификации в боковых группах аминокислот включают, но не ограничиваются указанными, ацилирование ε-аминогрупп лизина, N-алкилирование аргинина, гистидина или лизина, алкилирование карбоксильных групп глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты и дезамидирование глутамина или аспарагина. Модификации концевой аминогруппы включают но не ограничиваются ими, дезаминирование, N-низший алкил, N-ди-низший алкил и N-ацильные модификации. Модификации концевой карбоксильной группы включают, но не ограничиваются ими, амидирование, такие модификации как низший алкиламид, диалкиламид и сложный эфир низшего алкила. Предпочтительно в настоящей заявке низший алкил представляет собой C₁-C₄ алкил. Кроме того, одна или более боковых групп, или концевых групп, могут быть защищены с помощью защитных групп, известных обычному специалисту по химии пептидов. α-Углерод аминокислоты может быть моно- или диметилированным.

Согласно некоторым аспектам в жидких составах согласно настоящему изобретению применяют аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), представленный формулой:

R¹-Z¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²

в которой:

R¹ представляет собой водород, C_1-4-алкил (например, метил), ацетил, формил, бензоил или трифторацетил;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH; и

Z¹ и Z² независимо отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль или производное;

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения в приведенной выше формуле X5 представляет собой Thr и/или X11 представляет собой Ala. Примеры этих аналогов глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) включают:

ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO:1)

ZP2949 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKK-OH (SEQ ID NO:2);

ZP2711 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKK-OH (SEQ ID NO:3);

ZP2469 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO:4);

ZP1857 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH₂ (SEQ ID NO:5);

ZP2530 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-OH (SEQ ID NO:6).

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) представляет собой ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO: 1).

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения в приведенной выше формуле X5 представляет собой Ser и/или X11 представляет собой Ser. Примеры этих аналогов глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) включают:

ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO: 7);

ZP1855 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH₂ (SEQ ID NO: 8); или

ZP2242 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO: 9).

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) представляет собой ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO: 7).

Следует понимать, что пептиды (лекарственные субстанции) согласно настоящему изобретению также могут быть обеспечены в виде соли или другого производного. Соли включают фармацевтически приемлемые соли, такие как кислотно-аддитивные соли или основные соли. Примеры кислотно-аддитивных солей включают гидрохлоридные соли, цитратные соли, хлоридные соли и ацетатные соли. Предпочтительно соль представляет собой ацетат. Предпочтительно соль обычно не является хлоридной солью. Примеры основных солей включают соли, в которых катион выбран из щелочных металлов, таких как натрий и калий, щелочноземельных металлов, таких как кальций, и ионов аммония ⁺N (R³) ₃(R⁴), где R³ и R⁴ независимо обозначают необязательно замещенный C_1-6-алкил, необязательно замещенный C_2-6-алкенил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил. Другие примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в «Remington's Pharmaceutical Sciences», 17 изд. ред. Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, U.S.A., 1985 и в более поздних изданиях, а также в Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology

Согласно предпочтительным вариантам реализации ацетатная соль аналога GLP-2 согласно настоящему изобретению выбрана из группы, состоящей из ZP1848-ацетат, ZP2949-ацетат, ZP2711-ацетат, ZP2469-ацетат, ZP1857-ацетат, ZP2530-ацетат, ZP1846-ацетат, ZP1855-ацетат и ZP2242-ацетат. В данном случае термин «ZP1848-ацетат» относится к молекуле ZP1848, находящейся в виде ацетатной соли. Ацетатные соли аналогов GLP-2 могут быть представлены формулой (аналог GLP-2), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0, т. е. где x представляет собой 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0 или 8,0.В любой композиции ацетатных солей аналогов GLP-2 могут присутствовать молекулы с различным числом молекул ацетата так, что x не обязательно является целым числом. В некоторых случаях x представляет собой от 4,0 до 8,0, x представляет собой от 6,0 до 8,0 или x представляет собой от 4,0 до 6,5. В некоторых случаях x представляет собой от 4,0 до 6,0, x представляет собой от 2,0 до 7,0, x представляет собой от 3,0 до 6,0, x представляет собой от 4,0 до 6,0 или x представляет собой от 4,0 до 8,0.

Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения аналог GLP-2 представляет собой ZP1848-ацетат или H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ ацетат (SEQ ID NO: 1) или (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0.

Соответственно, согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложены твердые композиции, содержащие ацетатную соль аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2). Твердые композиции можно применять для изготовления с использованием вспомогательных веществ, используемых для получения жидких составов согласно настоящему изобретению. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложена твердая композиция, содержащая ацетатную соль аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), имеющую формулу:

(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0.

Верхний предел в 8,0 молекул ацетата на аналог GLP-2 соответствует содержанию ацетата менее 11% и может быть изготовлен так, чтобы вязкость составляла от 0,8 до 2,0 мПа⋅с, как измерено при 25°C.

Диапазон числа молекул ацетата, ассоциированных с каждой молекулой аналогов GLP-2, определяет диапазон молекулярной массы для этого компонента состава. Например, для ацетатных солей ZP1848 диапазон числа молекул ацетата, ассоциированных с каждой молекулой аналогов GLP-2, определяет диапазон молекулярной массы ZP1848-ацетата. В качестве примера,1 эквивалент ацетата с каждой молекулой ZP1848 обеспечивает молекулярную массу = 4316 + 60 = 4376 Да. Соответственно, молекулярные массы для увеличения эквивалентов ацетата с ZP1848 являются следующими: 1 эквивалент ацетата = 4376 Да; 2 эквивалента ацетата = 4436 Да; 3 эквивалента ацетата = 4496 Да; 4 эквивалента ацетата = 4556 Да; 5 эквивалентов ацетата = 4616 Да; 6 эквивалентов ацетата = 4676 Да; 7 эквивалентов ацетата = 4736 Да и 8 эквивалентов ацетата = 4796 Да. Это, в свою очередь, определяет диапазоны молекулярной массы следующим образом: 1-8 эквивалентов ацетата = 4376 Да - 4796 Да; 4-8 эквивалентов ацетата = 4556 Да - 4796 Да и 6-8 эквивалентов ацетата = 4676 Да - 4796 Да.

Другие производные аналогов GLP-2 согласно настоящему изобретению включают координационные комплексы с ионами металлов, такими как Mn²⁺ и Zn²⁺, сложные эфиры, такие как гидролизуемые в условиях in vivo сложные эфиры, свободные кислоты или основания, гидраты, пролекарства или липиды. Сложные эфиры могут образовываться между гидроксильными или карбоксильными группами, присутствующими в соединении, и подходящей карбоксильной кислотой или спиртовым реактивным партнером, используя методики, хорошо известные в данной области техники. Производные в виде пролекарств соединений могут быть превращены в одно из исходных соединений в условиях in vivo или в условиях in vitro. Как правило, в пролекарственной форме соединения по меньшей мере один вид биологической активности соединения будет снижен и может быть активирован путем превращения пролекарства с высвобождением соединения или его метаболита. Примеры пролекарств включают применение защитных групп, которые могут быть удалены в условиях in situ с высвобождением активного соединения или могут служить для ингибирования выведения лекарственного вещества в условиях in vivo.

Z¹ и Z² независимо присутствуют и/или отсутствуют или представляют собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys, т. е. 1, 2, 3, 4, 5 или 6 остатков Lys. Остатки Lys могут иметь D- или L-конфигурацию, однако имеют L-конфигурацию. Особенно предпочтительные последовательности Z представляют собой последовательности из четырех, пяти или шести последовательных остатков лизина и, в частности, шести последовательных остатков лизина. Примерные последовательности Z представлены в WO 01/04156.В определенных вариантах реализации Z¹ отсутствует. В таких случаях Z² может либо присутствовать, либо отсутствовать.

Составы аналогов GLP-2

Состав аналогов GLP-2 представляет собой готовый к применению состав. В настоящей заявке термин «готовый к применению» относится к составу, который не требует восстановления или разбавления назначенным количеством разбавителя, например, водой для инъекций или другим подходящим разбавителем, перед использованием с помощью предусмотренного пути введения.

Как описано в настоящей заявке, жидкие составы аналогов GLP-2 согласно настоящему изобретению включают буфер, неионный модификатор тоничности и аргинин в количестве, достаточном для обеспечения pH готового состава. В соответствии с обычной фармацевтической практикой составы согласно настоящему изобретению стерильны и/или не содержат восстанавливающий агент. В некоторых случаях жидкие составы согласно настоящему изобретению представляют собой водные жидкие составы. В некоторых случаях жидкие составы согласно настоящему изобретению представляют собой неводные жидкие составы.

В настоящей заявке термин «буфер» обозначает фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое стабилизирует pH фармацевтического состава. Подходящие буферы хорошо известны в данной области техники и могут быть найдены в литературе. Скрининговые эксперименты в примерах показывают, что составы согласно настоящему изобретению предпочтительно включают буфер, выбранный из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, поскольку эти буферы обеспечивают стабильные составы, в которых аналоги GLP-2 растворялись и не становились вязкими, мутными или не осаждали пептидное лекарственное средство. Согласно предпочтительным вариантам реализации буфер представляет собой гистидиновый буфер, например, L-гистидин. Обычно буфер будет присутствовать в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ, более предпочтительно в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 25 мМ и наиболее предпочтительно в концентрации приблизительно 15 мМ. На основании экспериментов в настоящей заявке предпочтительно буфер не является фосфатным буфером, цитратным буфером, цитратным/трис буфером и/или сукцинатным буфером.

В настоящей заявке термин «модификатор тоничности» обозначает фармацевтически приемлемые агенты для контроля тоничности, которые используются для модулирования тоничности состава. Составы согласно настоящему изобретению предпочтительно являются изоосмотическими, то есть они имеют осмотическое давление, которое по существу аналогично таковому сыворотки крови человека. Модификаторы тоничности, используемые в составах, предпочтительно являются неионными модификаторами тоничности и предпочтительно выбраны из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы. Предпочтительный неионный модификатор тоничности представляет собой маннит, например, D-маннит. Концентрация модификатора тоничности будет зависеть от концентрации других компонентов состава, в частности, если предусмотрено, что состав должен быть изоосмотическим. Как правило, неионный модификатор тоничности будет применяться в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ, более предпочтительно в концентрации от приблизительно 150 мМ до приблизительно 250 мМ и наиболее предпочтительно в концентрации приблизительно 230 мМ.

Обычно компоненты и количества жидких составов согласно настоящему изобретению выбраны так, чтобы обеспечить состав с pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4, более предпочтительно с pH от приблизительно 6,8 до приблизительно 7,2 и наиболее предпочтительно с pH приблизительно 7,0. Аргинин может быть добавлен в количестве, достаточном (q.s.) для корректировки pH так, чтобы значение находилось в пределах целевого диапазона pH. На основании экспериментов, показанных в примерах, предпочтительно, чтобы корректировка pH не выполнялась с использованием соляной кислоты или гидроксида натрия.

Согласно одному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению состоят из аналога GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл, буфера, выбранного из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ, неионного модификатора тоничности, выбранного из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ, аргинина в количестве, достаточном для обеспечения pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4.

Согласно одному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению состоят из аналога GLP-2 в концентрации от приблизительно 2 мг/мл до приблизительно 30 мг/мл, буфера, выбранного из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера и ацетатного буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от приблизительно 5 мМ до приблизительно 50 мМ, неионного модификатора тоничности, выбранного из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина и сорбита, в концентрации от приблизительно 90 мМ до приблизительно 360 мМ, аргинина в количестве, достаточном для обеспечения pH от приблизительно 6,6 до приблизительно 7,4.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат аналог GLP-2 в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и аргинин в количестве, достаточном для обеспечения pH приблизительно 7,0.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат аналог GLP-2 в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и pH составляет приблизительно 7,0.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат ZP1848-ацетат или H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ ацетат (SEQ ID NO: 1) в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и аргинин в количестве, достаточном для обеспечения pH приблизительно 7,0.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат ZP1848-ацетат или H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ ацетат (SEQ ID NO: 1) в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и pH составляет приблизительно 7,0.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат ацетатную соль аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), имеющую формулу:

(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0, в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и pH составляет приблизительно 7,0.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат ацетатную соль аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), имеющую формулу:

(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0, в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и pH составляет приблизительно 7,0, в схеме дозирования один или два раза в сутки.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат ацетатную соль аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), имеющую формулу:

(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0, в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и pH составляет приблизительно 7,0, в схеме дозирования один или два раза в неделю.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 7);

в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и аргинин в количестве, достаточном для обеспечения pH приблизительно 7,0.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкие составы согласно настоящему изобретению содержат ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO: 7);

в концентрации приблизительно 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации приблизительно 15 мМ, маннит в концентрации приблизительно 230 мМ и pH составляет приблизительно 7,0.

В некоторых случаях жидкие составы согласно настоящему изобретению дополнительно содержат консервант. В некоторых случаях консервант выбран из группы, состоящей из хлорида бензалкония, хлорбутанола, метилпарабена и сорбата калия. Обычно консервант присутствует в концентрации от приблизительно 0,1% до приблизительно 1% от конечного объема состава.

Согласно дополнительному варианту реализации жидкий состав выбран из группы, состоящей из водного жидкого состава, жидкого состава в различных гидрофильных или гидрофобных растворителях, эмульсии и жидкой суспензии. Согласно предпочтительному варианту реализации жидкий состав представляет собой водный жидкий состав.

В качестве примера, жидкие составы согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены путем смешивания исходных растворов аналога GLP-2, буфера, неионного модификатора тоничности и необязательно консерванта в воде, необязательно разбавляя полученный раствор и доводя его до целевого pH. В целях удобства растворы буфера и неионного модификатора тоничности сначала могут быть смешаны, чтобы обеспечить целевую концентрацию каждого вспомогательного вещества. Затем может быть добавлен раствор аналога GLP-2 и, при необходимости, pH можно скорректировать, например, с использованием уксусной кислоты/0,5 М L-аргинина. Вода была добавлена до конечного объема.

Предпочтительно аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) вводят пациентам парентерально, предпочтительно путем инъекции, чаще всего путем подкожной инъекции, внутримышечной инъекции, внутривенной инъекции или внутрибрюшинной инъекции. Предпочтительным является введение путем подкожной инъекции. Инъекция может быть выполнена врачом, медсестрой или другим медицинским работником или может быть введена пациентом самостоятельно. Как изложено в настоящей заявке, в некоторых аспектах, составы согласно настоящему изобретению имеют вязкость, которая облегчает загрузку состава в предварительно заполненный шприц, шприц-ручку или другое устройство для инъекций. Преимущество может заключаться в предварительном определении дозы состава, вводимого пациенту, например, без необходимости отмерять из многоразового флакона. Соответственно, согласно другим аспектам настоящего изобретения предложено промышленное изделие или набор, содержащий контейнер, вмещающий стабильный, такой как, например, водный стабильный фармацевтический состав аналога GLP-2 в соответствии с настоящим изобретением, или предварительно заполненный шприц или устройство для инъекций или шприц-ручку, содержащий водный жидкий состав, содержащий аналог GLP-2 в соответствии с настоящим изобретением.

Медицинские показания

Составы аналога GLP-2 согласно настоящему изобретению можно применять в качестве фармацевтического агента для предотвращения или лечения индивидуума, страдающего желудочно-кишечными нарушениями, включая верхний отдел желудочно-кишечного тракта в области пищевода, путем введения эффективного количества аналога GLP-2 или его соли, описанных в настоящей заявке. Нарушения, связанные с желудком и кишечником, включают язвы любой этиологии (например, пептидные язвы, язвы, индуцированные лекарственными средствами, язвы, связанные с инфекциями или другими патогенами), нарушения пищеварения, синдромы мальабсорбции, синдром короткой кишки, синдром «слепого мешка», воспалительное заболевание кишечника, спру-целиакию (например, вызванную глютен-индуцированной энтеропатией или целиакией), тропическую спру, гипогаммаглобулинемическую спру, энтерит, язвенный колит, повреждение тонкого кишечника и индуцированную химиотерапией диарею/мукозит (CID).

Как упомянуто выше, обычно индивидуумы, которые получат пользу от увеличения массы тонкого кишечника и последствий этого и/или поддержания нормальной структуры и функции слизистой оболочки тонкого кишечника, являются кандидатами для лечения с применением аналогов GLP-2 согласно настоящему изобретению. Конкретные состояния, которые можно лечить с применением аналога GLP-2, включают различные формы спру, включая спру-целиакию, которая развивается в результате токсической реакции на альфа-глиадин из пшеницы и может быть вызвана глютен-индуцированной энтеропатией или целиакией, и характеризуется значительной потерей ворсинок тонкого кишечника; тропическую спру, возникающие в результате инфекции и характеризующиеся частичным уплощением ворсинок; гипогаммаглобулинемическую спру, которая обычно наблюдается у пациентов с неклассифицируемым вариабельным иммунодефицитом или гипогаммаглобулинемией и характеризуется значительным уменьшением высоты ворсинок. Терапевтическую эффективность лечения с применением аналога GLP-2 можно контролировать с помощью кишечной биопсии для исследования морфологии ворсинок, биохимической оценки всасывания питательных веществ, по увеличению массы тела пациента или уменьшению симптомов, ассоциированных с этими состояниями.

Другим конкретным состоянием, которое можно лечить с применением аналогов GLP-2 согласно настоящему изобретению или в отношении которого аналоги GLP-2 можно применять в терапевтических и/или профилактических целях, является синдром короткой кишки (СКК), также известный как синдром короткого кишечника или просто короткая кишка, который возникает в результате хирургической резекции, врожденного дефекта или ассоциированной с заболеванием потери всасывания в кишечнике, при котором пациенты впоследствии не могут поддерживать баланс жидкости, электролитов и питательных веществ при обычном рационе. Несмотря на адаптацию, которая обычно происходит через два года после резекции, пациенты с СКК имеют уменьшенное алиментарное поступление и потерю жидкости.

Другие состояния, которые можно лечить с применением аналогов GLP-2 согласно настоящему изобретению или в отношении которых аналоги GLP-2 можно применять в профилактических целях, включают в дополнение к вышеупомянутому радиационный энтерит, инфекционный или постинфекционный энтерит и повреждение тонкого кишечника, вызванное противораковыми химиотерапевтическими или токсическими агентами.

Аналоги GLP-2 также можно применять для лечения недоедания, например, кахексии и анорексии.

Конкретный вариант реализации настоящего изобретения относится к применению пептидов согласно настоящему изобретению для предотвращения и/или лечения повреждения и дисфункции кишечника. Такое повреждение и дисфункция являются хорошо известным побочным эффектом химиотерапевтического лечения рака. Введение химиотерапии часто ассоциировано с нежелательными побочными эффектами, связанными с желудочно-кишечной системой, такими как мукозит, диарея, транслокация бактерий, мальабсорбция, спазмы в животе, желудочно-кишечные кровотечения и рвота. Эти побочные эффекты являются клиническими последствиями структурного и функционального повреждения эпителия кишечника и часто приводят к необходимости снижения дозы и частоты химиотерапии.

Введение аналогов пептида GLP-2 согласно настоящему изобретению может усиливать трофический эффект в криптах кишечника и быстро обеспечивать новые клетки для замены поврежденного эпителия кишечника после химиотерапии. Конечная цель, достигаемая с помощью введения пептидов согласно настоящему изобретению, заключается в уменьшении заболеваемости, связанной с повреждением желудочно-кишечного тракта пациентов, проходящих химиотерапевтическое лечение, одновременно создавая наиболее оптимальную химиотерапевтическую схему для лечения рака. Сопутствующее профилактическое или терапевтическое лечение может быть предоставлено в соответствии с настоящим изобретением пациентам, проходящим или собирающимся проходить лучевую терапию.

Стволовые клетки слизистой оболочки тонкого кишечника особенно уязвимы в отношении токсических эффектов химиотерапии в связи с высокой скоростью их пролиферации (Keefe et al., Gut, 47: 632-7, 2000). Индуцированное химиотерапией повреждение слизистой оболочки тонкого кишечника клинически часто называется желудочно-кишечным мукозитом и характеризуется нарушениями всасывания и барьерной функции тонкого кишечника. Например, было показано, что широко используемые химиотерапевтические агенты, 5-FU, иринотекан и метотрексат увеличивают апоптоз, приводя к атрофии ворсинок и гипоплазии крипт в тонком кишечнике грызунов (Keefe et al., Gut 47: 632-7, 2000; Gibson et al., J Gastroenterol. Hepatol. Sep;18(9):1095-1100, 2003; Tamaki et al., J. Int. Med. Res. 31(1):6-16, 2003). Было показано, что у человека химиотерапевтические агенты увеличивают апоптоз в криптах кишечника через 24 часа после введения и впоследствии уменьшают площадь ворсинок, длину крипт, митотический индекс на крипту и высоту энтероцитов через три дня после химиотерапии (Keefe et al., Gut, 47: 632-7, 2000). Таким образом, структурные изменения в тонком кишечнике непосредственно приводят к дисфункции кишечника и в некоторых случаях к диарее.

Желудочно-кишечный мукозит после химиотерапии рака является все большей проблемой, которая по существу не поддается лечению после возникновения, хотя он постепенно ослабевает. Исследования, проведенные с обычно используемыми цитостатическими противораковыми лекарственными средствами, 5-FU и иринотеканом, продемонстрировали, что эффективная химиотерапия с применением этих лекарственных средств преимущественно отрицательно влияет на структурную целостность и функцию тонкого кишечника, в то время как толстый кишечник менее чувствителен и в основном отвечает повышенным образованием слизи (Gibson et al., J. Gastroenterol. Hepatol. Sep;18(9):1095-1100, 2003; Tamaki et al., J Int. Med. Res. 31(1):6-16, 2003).

Составы согласно настоящему изобретению, содержащие аналоги GLP-2, можно применять в предотвращении и/или лечении повреждения желудочно-кишечного тракта и побочных эффектов химиотерапевтических агентов. Это потенциально важное терапевтическое применение применимо к используемым в настоящее время химиотерапевтическим агентам, таким как, но не ограничиваясь указанными: 5-FU, альтретамин, блеомицин, бусульфан, капецитабин, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, кладрибин, крисантаспаза, циклофосфамид, цитарабин, дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин, доцетаксел, доксорубицин, эпирубицин, этопозид, флударабин, фторурацил, гемцитабин, гидроксикарбамид, идарубицин, ифосфамид, иринотекан, липосомальный доксорубицин, лейковорин, ломустин, мелфалан, меркаптопурин, месна, метотрексат, митомицин, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, пеметрексед, пентостатин, прокарбазин, ралтитрексид, стрептозоцин, тегафур-урацил, темозоломид, тиотепа, тиогуанин/тиогуанин, топотекан, треосульфан, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин, блеомицин, бусульфан, капецитабин, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, кладрибин, крисантаспаза, циклофосфамид, цитарабин, дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин, доцетаксел, доксорубицин, эпирубицин, этопозид, флударабин, фторурацил, гемцитабин, гидроксикарбамид, идарубицин, ифосфамид, иринотекан, липосомальный доксорубицин, лейковорин, ломустин, мелфалан, меркаптопурин, метотрексат, митомицин, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, пеметрексед, пентостатин, прокарбазин, ралтитрексид, стрептозоцин, тегафур-урацил, темозоломид, тиотепа, тиогуанин/тиогуанин, топотекан, треосульфан, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин.

Доставка составов

Согласно некоторым аспектам настоящее изобретение относится к готовому для применения составу аналогов GLP-2, предназначенному для парентерального введения и подходящему для применения, например, во флаконах, предварительно заполненных шприцах, инфузионных насосах, носимых инъекторах, одноразовых автоинъекторах или автоинъекторах с корректируемой дозой.

Примеры

Следующие примеры приведены для иллюстрации предпочтительных аспектов настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Аналоги GLP-2, вводимые в соответствии со схемами дозирования, описанными в настоящей заявке, могут быть получены в соответствии со способами, такими как твердофазный синтез пептидов, описанный в WO 2006/117565, содержание которого явным образом полностью включено посредством ссылки.

Пример 1. Синтез ZP1848-ацетата и сходных аналогов GLP-2

Пептид ZP1848-ацетат синтезировали с использованием подхода твердофазного пептидного Fmoc-синтеза (SPPS) со стандартными условиями связывания. После завершения синтеза с пептидной последовательности снимали защиту и отщепляли от твердой подложки, и неочищенный пептид очищали с использованием препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой. Пептид превращали в целевую форму ацетатной соли путем внесения подвижной фазы с соответствующей концентрацией уксусной кислоты на заключительном хроматографическом этапе и последующей лиофилизации. Полученный продукт лекарственной субстанции имел содержание ацетата ниже 11% или ниже 8 эквивалентов ацетата: партия 1 (6% ацетата, 4,6 эквивалента ацетата), партия 2 (7% ацетата, 5,4 эквивалента ацетата) и партия 3 (6% ацетата, 4,6 эквивалента ацетата). Этот протокол синтеза и очистки может быть адаптирован для получения других аналогов GLP-2, применяемых в составах согласно настоящему изобретению.

Пример 2. Изучение образования ковалентно связанных олигомеров в фармацевтических составах аналога GLP-2 ZP1848-ацетата

Материалы и методы

Для детектирования ковалентно связанных олигомеров для анализа использовали систему ВЭЖХ Dionex Ultimate3000, обеспечивающую линейный градиент, при скорости потока 0,5 мл/мин. Подвижная фаза состояла из 0,1% ТФУ в 45% ацетонитриле и 55% воды Milli-Q. Для детектирования использовали длину волны 215 нм. Впрыскиваемое количество составило 4 мкг пептида. Колонка, использованная для разделения ковалентно образованных пептидов, представляла собой TSKgel SuperSW2000 (TSK BioScience) с размером частиц 4 мкм и размерами 300*4,6 мм. Общее время анализа составило 25 минут. Для оценки химической стабильности мономера пептида использовали колонку C18 с кислой подвижной фазой и градиентом ацетонитрила.

Готовили исходные растворы маннита (700 мМ), L-гистидина (200 мМ) и пептида ZP1848 (ацетатная соль; 60 мг/мл) в воде (Milli-Q). Растворы маннита и гистидина смешивали в количествах, подходящих для получения 230 мМ маннита и 15 мМ гистидина. Исходный раствор пептида добавляли до конечной концентрации 0,2, 2 и 20 мг/мл, соответственно. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH корректировали до 7, используя 1 М уксусную кислоту/0,5 М L-аргинин. Добавляли воду до конечного объема.

Результаты и обсуждение

В данной области техники известно, что увеличение концентрации пептидных или белковых лекарственных средств в жидком составе увеличивает концентрацию димера, тримеров и олигомеров более высокого порядка в результате эффектов действия масс, что приводит к более высокой вероятности ковалентных реакций (см. van Maarschalkerweerd et al., Intrinsically Disord. Proteins. 2015; 3(1): e1071302). Таким образом, образование ковалентных высокомолекулярных продуктов разрушения (cHMWDP) увеличивается как функция концентрации лекарственной субстанции и оказывает эффект уменьшения количества биологически активного мономерного пептида, доступного в составе. Поэтому это было изучено в составах аналога GLP-2, ZP1848-ацетата.

Типичная хроматограмма отделения олигомеров от мономера ZP1848-ацетата показана на Фигуре 1. Олигомеры ZP1848-ацетата хорошо отделяются от мономера ZP1848-ацетата и все объединены в виде одного пика. Процент площади пиков использовали для количественного определения количества олигомеров, в частности, ковалентно связанных димеров и тримеров.

Составы, содержащие 0,2, 2 и 20 мг/мл ZP1848 в одинаковом составе, анализировали через 24 месяца хранения при 2-8°C. В первую очередь это образование димеров (двух ковалентно связанных молекул ZP1848-ацетата), но также в некоторой степени тримеров (подтверждено с помощью ЖХ-МС). Состав, содержащий 0,2 мг/мл, имеет 2,6% олигомеров, 2 мг/мл имеет 1,91% и 20,0 мг/мл имеет 1,35%. Исходный показатель количества олигомера был менее 0,1%.

Таблица 1: Образование ковалентно связанных олигомеров в долгосрочном исследовании стабильности при 2-8°C через 24 месяца

Концентрация лекарственного продукта, ZP1848-ацетат Ковалентно связанные олигомеры 0,2 мг/мл 2,60% 2 мг/мл 1,91 20 мг/мл 1,35%

Во время долгосрочного хранения ZP1848-ацетата (глепаглутида) при 2-8°C неожиданно было обнаружено, что образование ковалентно связанных олигомеров зависит от концентрации, но, вопреки общему ожиданию, концентрационная зависимость образования олигомеров обратно пропорциональна повышению концентрации аналога GLP-2. Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией, авторы настоящего изобретения полагают, что уменьшение образования ковалентно связанных олигомеров при увеличении концентрации лекарственного средства возникает в результате того, что лизиновый хвост аналога GLP-2 способствует конкурирующей реакции, ведущей к образованию молекул более высокого порядка, в которых молекулы аналога GLP-2 слабо ассоциированы друг с другом, а не ковалентно связаны. Это означает, что эти слабо ассоциированные молекулы способны диссоциировать с высвобождением биологически активного мономера, а не вызывать потерю активных молекул, как это происходит при образовании ковалентно связанных олигомеров.

Пример 3: Скрининг буфера для составов аналога GLP-2 ZP1848-ацетата

Проводили исследование для изучения эффектов различных буферных солей на стабильность составов ZP1848-ацетата (4 мг/мл). Общая концентрация буфера в составах составила 20 мМ.

Материалы и методы

Готовили буферные растворы, перечисленные в Таблице 2 ниже. pH буферов корректировали с использованием 1 М HCl/1 М NaOH. Пептид ZP1848 (ацетатную соль) растворяли в соответствующем буфере при 80% от конечного объема образца с получением 4 мг/мл в конечном составе. При необходимости pH затем корректировали до целевого pH состава, используя либо 200 мМ уксусную кислоту, либо 100 мМ L-аргинин. Буферный раствор добавляли до конечного объема. Каждый состав вносили в соответствующие флаконы (1 мл/флакон) для тестирования стабильности.

Результаты и обсуждение

Внешний вид показал, что все составы, содержащие цитратный буфер, цитратный/трис буфер или сукцинатный буфер, были вязкими и/или мутными (см. Таблицу 2). Ацетатный буфер (20 мМ, pH 5), мезилатный буфер (20 мМ, pH 6), гистидиновый буфер (15 мМ, pH 7) и гистидин-аргинин (15+ 5 мМ, pH 7) позволили получить составы, которые прошли визуальный осмотр как прозрачные и невязкие.

Таблица 2: Составы для скрининга эффекта различных буферов

Состав pH Буфер Концентрация буфера (мМ) Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? 1 4,0 Цитрат-ТРИС 20 Нет 2 5,0 Цитрат-ТРИС 20 Нет 3 6,0 Цитрат-ТРИС 20 Нет 4 7,0 Цитрат-ТРИС 20 Нет 5 8,0 Цитрат-ТРИС 20 Нет 6 5,0 Сукцинат 20 Нет 7 5,0 Ацетат 20 Да 8 5,0 Гистидин 20 Да 9 6,0 Сукцинат 20 Нет 10 6,0 Мезилат 20 Да 11 6,0 Да 20 Да 12 7,0 Цитрат 20 Нет 13 7,0 ТРИС 20 Да 14 7,0 Гистидин + аргинин 15 + 5 Да

Пример 4: Несовместимость фосфатного буфера с аналогом GLP-2 ZP1848-ацетатом

Материал и методы

Готовили исходные растворы маннита (700 мМ), фосфатного буфера (200 мМ) и пептида ZP1848-ацетата (60,2 мг/мл) в воде (Milli-Q). Исходные растворы смешивали в количествах, подходящих для получения составов, показанных в Таблице 3 ниже. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH затем корректировали до целевого pH состава, используя 1 M уксусную кислоту/0,5 M L-аргинин. Добавляли воду до конечного объема. Проводили визуальный осмотр контейнеров с образцами для оценки прозрачности и вязкости через 24 часа при комнатной температуре.

Таблица 3: Составы для тестирования эффекта фосфатного буфера

Концентрация ZP1848 [мг/мл] pH Фосфат
[мМ] Маннит
[мМ] Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? 0 мг/мл 7,0 20 230 Да 20 мг/мл 6,5 20 230 Нет 20 мг/мл 7,0 20 230 Нет 20 мг/мл 7,0 50 230 Нет 20 мг/мл 7,5 20 230 Нет

Результаты и обсуждение

Визуальный осмотр показал, что составы ZP1848-ацетата при 20 мг/мл при pH 6,5-7,5, содержащие 20-50 мМ фосфатный буфер, были мутными и/или сильно вязкими через 24 часа при комнатной температуре. Таким образом, был сделан вывод о несовместимости фосфатного буфера с ZP1848-ацетатом в этих составах.

Пример 5: Эффект содержания ацетата на вязкость составов аналога GLP-2 ZP1848-ацетата

Проводили исследование для определения эффекта содержания ацетата на вязкость состава ZP1848-ацетата.

Материал и методы

Образцы готовили с использованием лекарственной субстанции (DS) аналога GLP-2 ZP1848-ацетата, содержащей 6% ацетата. Ацетат добавляли для изучения эффектов повышенного содержания ацетата в диапазоне 7,8-15% ацетата (см. Таблицу 4).

Готовили исходные растворы маннита (700 мМ), уксусной кислоты (1000 мМ), гистидина (200 мМ) и пептида ZP1848 - ацетата (60 мг/мл) в воде Milli-Q. Исходные растворы смешивали в количествах, подходящих для получения составов, показанных в Таблице 4 ниже. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH затем корректировали до целевого pH состава с использованием 250 мМ аргинина. Добавляли воду до конечного объема. Каждый состав вносили в соответствующие флаконы для тестирования стабильности.

Проводили визуальный осмотр флаконов для оценки прозрачности и вязкости. Вязкость измеряли с использованием вискозиметра microVISC™. Гидродинамический радиус измеряли с помощью считывающего устройства для планшетов для оценки динамического рассеяния света (DLS) Wyatt DynaPro II. Объем образца, загруженный на планшеты, составил 170 мкл.

Таблица 4: Состав, содержащий 20 мг/мл ZP1848-ацетата при pH 7 с различными концентрациями ацетата

Состав # Маннит [мМ] Гистидин [мМ] Ацетат % Ацетат [мМ] 1 230 15 6 20,3 2 230 15 7 23,7 3 230 15 8 27,1 4 230 15 9 30,5 5 230 15 10 33,9 6 230 15 11 37,3 7 230 15 12 40,7 8 230 15 13 44,0 9 230 15 14 47,4 10 230 15 15 50,8

Результаты и обсуждение

Вязкость и гидродинамический радиус составов с варьирующейся концентрацией ацетата показаны на Фигуре 2. Результаты демонстрируют, что вязкость состава ZP1848-ацетата неожиданно нелинейно увеличивается при более высокой концентрации ацетата. Таким образом, это обеспечивает преимущество для контроля вязкости при низком/неизменном уровне, если общая концентрация ацетата в составе менее или равна 11% ацетата на мг аналога GLP-2, поскольку это открывает возможность обеспечения составов аналога GLP-2 в виде устройства для доставки лекарственного средства.

Пример 6: Эффект буферных солей на стабильность составов аналога GLP-2 ZP1848-ацетата при 2 и 20 мг/мл

Проводили исследование для изучения эффектов различных буферных солей на стабильность составов ZP1848-ацетата (2 и 20 мг/мл). Концентрация всех буферов составила 15 мМ.

Материалы и методы

Готовили исходные растворы маннита (700 мМ), L-гистидина (200 мМ), глицина (400 мМ), лизина (200 мМ), ТРИС (200 мМ), бис-ТРИС (200 мМ), MOPS (100 мМ), янтарной кислоты (200 мМ), MES (2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота) (200 мМ), мезилата (200 мМ), фосфата (200 мМ) и пептида ZP1848 (ацетатная соль; приблизительно 50 мг/мл) в воде (Milli-Q). Растворы вспомогательных веществ смешивали в количествах, подходящих для получения составов, показанных в Таблице 5 и Таблице 6 ниже. Все составы содержали 230 мМ маннита и 15 мМ буферного агента. Добавляли исходный раствор пептида. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH корректировали до 7, используя 1 М уксусную кислоту/0,5 М L-аргинин. Добавляли воду до конечного объема. Составы вносили во флаконы и помещали в исследование стабильности при 40°C.

Результаты и обсуждение

В соответствии с наблюдаемыми результатами буферные агенты гистидин, глицин, лизин, ТРИС, Бис-ТРИС, MOPS, мезилат и MES в концентрации 15 мМ были приемлемыми для использования в составах ZP1848-ацетата при 2 мг/мл и 20 мг/мл пептида и pH 7,0.

Таблица 5: Стабильность составов, приготовленных с различными буферами

Состав Пептид
содержание Буфер Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? 0 недель 3 недели (40°C) 1 20 Гистидин Да Да 2 20 Глицин Да Да 3 20 Лизин Нет Да 4 20 ТРИС Да Да 5 20 Бис-ТРИС Да Да 6 2 Гистидин Да Да 7 2 Глицин Да Да 8 2 Лизин Да Да 9 2 ТРИС Да Да 10 2 Бис-ТРИС Да Да 11 20 MOPS Да Да 12 20 Янтарная кислота Нет Нет 13 20 MES Да Да 14 20 Мезилат Да Да 15 20 Фосфат Нет Нет 16 2 MOPS Да Да 17 2 Янтарная кислота Да Нет 18 2 MES Да Да 19 2 Мезилат Да Да 20 2 Фосфат Да Нет

Таблица 6: Образование ковалентно связанных олигомеров в составах с использованием различных буферов

Состав Пептид
содержание Буфер DLS
(Z-среднее, нм) 0 недель 3 недели (40°C) 1 20 Гистидин 1,6 1,7 2 20 Глицин 1,7 1,8 3 20 Лизин 41,9 4,4 4 20 ТРИС 35,2 4,3 5 20 Бис-ТРИС 1,7 1,7 6 2 Гистидин 2,7 3,1 7 2 Глицин 2,4 3,6 8 2 Лизин 3,9 4 9 2 ТРИС 3,8 4,1 10 2 Бис-ТРИС 4,7 4,1 11 20 MOPS 2,3 2,5 12 20 Янтарная кислота 27,4 192,5 13 20 MES 2,3 3,2 14 20 Мезилат 25,5 4 15 20 Фосфат 21,1 244,5 16 2 MOPS 3,3 70,1 17 2 Янтарная кислота 82,5 259,3 18 2 MES 3,8 3,9 19 2 Мезилат 3,7 4,1 20 2 Фосфат 333,9 214,5

Образование ковалентно связанных олигомеров оценивали для различных буферов (Таблица 6). При 20 мг/мл янтарная кислота образовывала гель через 1 неделю и не могла быть оценена через 2 и 3 недели исследования стабильности. 2 мг/мл, тот же буфер показал значительно более сильное образование (2,1%) ковалентно связанных олигомеров. Общая тенденция заключалась в том, что 2 мг/мл составы имеют более сильное образование ковалентно связанных олигомеров по сравнению с 20 мг/мл через 3 недели в ускоренном исследовании хранения при 40°C.

Фосфатный буфер и сукцинатный буфер были несовместимы с ZP1848-ацетатом при 2 и 20 мг/мл в этих составах.

Стабильность мономерного пептида оценивали путем определения чистоты методом ВЭЖХ в течение 3 недель исследования стабильности при 40°С. Результаты представлены на Фигуре 3 и в Таблице 7. Из-за гелеобразования, описанного ранее, при 20 мг/мл возможность оценки янтарной кислоты была только в первых временных точках. Для 2 мг/мл результаты могут быть получены для трех протестированных недель. Между оцененными буферами можно было обнаружить лишь незначительные, несущественные различия. Таким образом, выбор буфера, по-видимому, не влияет на стабильность мономера пептида.

Таблица 7: Образование ковалентно связанных олигомеров с использованием различных буферов при 40° в течение от 0 до 3 недель

Пример 7: Эффект модификаторов тоничности на стабильность составов аналога GLP-2 ZP1848-ацетата при 2 и 20 мг/мл

Проводили исследование для изучения эффектов различных модификаторов тоничности на стабильность составов ZP1848-ацетата (2 и 20 мг/мл).

Материалы и методы

Готовили исходные растворы L-гистидина (200 мМ), сахарозы (730 мМ), глицерина (977 мМ), D-сорбита (801 мМ), D-(+) дегидрата трегалозы (500 мМ), D-маннита (700 мМ) и пептида ZP1848-ацетата (ацетатная соль; приблизительно 50 мг/мл) в воде (Milli-Q). Растворы вспомогательных веществ смешивали в количествах, подходящих для получения составов, показанных в Таблице 8 ниже. Все составы содержали 15 мМ гистидина. По необходимости добавляли исходный раствор пептида, чтобы получить содержание пептида, показанное в Таблице 8. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH корректировали до 7, используя 1 М уксусную кислоту/0,5 М L-аргинин. Добавляли воду до конечного объема. Каждый состав вносили во флаконы и помещали в исследования стабильности при 40°C. Проводили визуальный осмотр контейнеров с образцами для оценки прозрачности и вязкости и анализировали гидродинамический радиус с помощью анализа DLS (динамического рассеяния света).

Результаты и обсуждение

В соответствии с наблюдаемыми результатами, показанными в Таблице 8, маннит, сахароза, глицерин, сорбит и трегалоза были приемлемыми для использования в этих составах с ZP1848-ацетатом при 2 мг/мл и 20 мг/мл и pH 7,0.

Таблица 8: Составы, приготовленные с использованием различных модификаторов тоничности

Состав Содержание пептида Модификатор тоничности Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? 0 недель 3 недели (40°C) 1 20 Маннит Да Да 2 20 Сахароза Да Да 3 20 Глицерин Да Да 4 20 Сорбит Да Да 5 20 Трегалоза Да Да 6 2 Маннит Да Да 7 2 Сахароза Да Да 8 2 Глицерин Да Да 9 2 Сорбит Да Да 10 2 Трегалоза Да Да

Образование ковалентных олигомеров измеряли для состава с 1 по 10 в течение до 3 недель при 40°С. Результаты показаны в Таблице 9. Различия в образовании ковалентных олигомеров для десяти составов можно наблюдать уже после 1 недели тестирования стабильности. Кроме того, скорость (наклон) довольно стабильна на протяжении всего тестируемого периода. Состав 3 (20 мг/мл - глицерин), 7 (2 мг/мл - сахароза), 8 (2 мг/мл - глицерин), 9 (2 мг/мл - сорбит) имеют значительно более сильное образование ковалентно связанных олигомеров, чем другие. Маннит дал самое слабое образование ковалентно связанных олигомеров. Общая тенденция состоит в том, что 2 мг/мл имеют более сильное образование ковалентно связанных олигомеров по сравнению с 20 мг/мл для всех изученных агентов для контроля тоничности.

Таблица 9: Образование ковалентно связанных олигомеров состава 1-10 при 40°C в течение от 0 до 3 недель

  Время/недели при 40°C Состав Агент для контроля тоничности 0 1 2 3 %/нед. 1 20 мг/мл Маннит 0,22 0,40 0,57 0,90 0,22 2 Сахароза 0,27 0,50 0,84 1,3 0,34 3 Глицерин 0,6 2,0 2,8 4,0 1,11 4 Сорбит 0,25 0,60 0,84 1,1 0,28 5 Трегалоза 0,26 0,60 0,90 1,3 0,34 6 2 мг/мл Маннит 0,34 0,70 0,90 1,2 0,28 7 Сахароза 0,37 1,4 2,7 4,3 1,31 8 Глицерин 1,8 12,2 16,4 21,5 6,34 9 Сорбит 0,51 1,9 2,8 3,8 1,08 10 Трегалоза 0,45 1,1 1,9 2,9 0,81

Стабильность мономерного пептида оценивали путем определения чистоты методом ВЭЖХ в течение 3 недель исследования стабильности при 40°С. Подобно ковалентно связанным олигомерам химическая стабильность при использовании глицерина является низкой и отличается от других агентов для контроля тоничности. Результаты представлены на Фигуре 5 и Фигуре 6.

Пример 8: Эффект кислот и оснований, используемых для корректировки pH в составах аналога GLP-2 ZP1848-ацетата, на физическую стабильность

Материал и методы

Готовили исходные растворы маннита, гистидина и пептида ZP1848-ацетата в воде. Исходные растворы маннита и гистидина добавляли в воду и перемешивали, и добавляли раствор пептида, чтобы получить конечное содержание пептида 10 мг/мл. Воду добавляли до 90% от конечного объема. Затем pH корректировали до 7, используя 250 мМ аргинин/1 М АсОН или 1 М NaOH/1 М HCl (см. Таблицу 10). Добавляли воду до конечного объема. Каждый состав вносили во флаконы для тестирования стабильности и помещали в исследования стабильности при 5°C, 25°C и 40°C. Проводили визуальный осмотр контейнеров с образцами для оценки прозрачности и вязкости.

Результаты и обсуждение

Результаты, представленные в Таблице 10, показывают, что использование 1 М NaOH/1 М HCl для корректировки pH оказывает нежелательный эффект на физическую стабильность состава ZP1848-ацетата.

Таблица 10: эффект кислоты/основания на физическую стабильность

Состав агенты для корректировки pH Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? Нулевое время 40°C
4 недели 25°С
26 недель 5°C
52 недели 1 0,25 М L-Arg/1 М AcOH Да Да Да Да 2 1 М NaOH/1 М HCl Да Да Да Нет
(осажден через 13 недель)

Пример 9: Использование ацетатной соли пептида ZP1848 и хлоридной соли пептида ZP1848 для составов аналога GLP-2 пептида ZP1848

Проводили исследование для изучения эффекта солей с использованием ацетатной соли пептида ZP1848 и гидрохлоридной соли пептида ZP1848 в отобранных составах ZP1848. Эффекты типа соли, концентрации, буфера и модификаторов тоничности изучали после ускоренного исследования хранения при 40°C. Была предпринята попытка синтеза натриевой соли пептида ZP1848, но оказалось, что это невозможно.

Материалы и методы

Готовили исходные растворы маннита (700 мМ), гистидина (200 мМ), сорбита (700 мМ), мезилата (200 мМ) и раствор пептида ZP1848 (хлоридная соль; приблизительно 50 мг/мл) в воде Milli-Q. Растворы вспомогательных веществ смешивали в количествах, подходящих для получения составов, показанных в Таблице 11 и Таблице 12 ниже. Исходный раствор пептида добавляли для получения целевого конечного содержания пептида. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH затем корректировали до целевого pH состава, используя 1 M уксусную кислоту/0,5 M L-аргинин. Добавляли воду до конечного объема. Каждый состав вносили во флаконы и помещали в исследования стабильности при 40°C. Проводили визуальный осмотр контейнеров с образцами для оценки прозрачности и вязкости, и анализировали гидродинамический радиус с помощью DLS.

Результаты и обсуждение

Результаты, представленные в Таблицах 11 и 12, показывают, что Z-среднее, вязкость и внешний вид Составов 1, 2, 3 и 4 имели неизменную стабильность через 3 недели при 40°C, согласно оценке по внешнему виду и DLS. Состав 5 показал изменения стабильности с течением времени, согласно оценке по Z-среднему, вязкости и внешнему виду.

Таблица 11: Эффект типа пептидной соли

№ состава Соль пептида Содержание пептида Маннит Гистидин Сорбит Мезилат Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? 0 недель 3 недели (40°C) 1 Ацетатная соль ZP1848 20 230 15 - - Да Да 2 Хлоридная соль ZP1848 20 230 15 - - Да Да 3 Хлоридная соль ZP1848 2 230 15 - - Да Да 4 Хлоридная соль ZP1848 20 - 15 230 - Да Да 5 Хлоридная соль ZP1848 20 230 - - 15 Нет Нет

Таблица 12: Эффект типа пептидной соли

Состав Пептидная соль Содержание пептида Маннит Гистидин Сорбит Мезилат DLS (Z-среднее, нм) 0 недель 3 недели (40°C) 1 Ацетатная соль ZP1848 20 230 15 - - 1,5 2,1 2 Хлоридная соль ZP1848 20 230 15 - - 2,3 3,3 3 Хлоридная соль ZP1848 2 230 15 - - 2,7 2,8 4 Хлоридная соль ZP1848 20 - 15 230 - 2,2 3,3 5 Хлоридная соль ZP1848 20 230 - - 15 24,1 6,9

Химическую стабильность Составов с 1 по 5 контролировали в течение до 4 недель при 40°C. Полученная чистота при высвобождении была нормирована к 100%. Результаты показаны на Фигуре 7. Для Составов 1, 2, 4 и 5 не наблюдали значительного различия в химической стабильности мономера пептида. Состав 3 показал незначительно более низкую, но приемлемую, химическую стабильность через 4 недели, и это, вероятнее всего, вызвано более низкой концентрацией этого состава.

Образование ковалентных олигомеров измеряли для Составов с 1 по 5 в течение до 4 недель при 40°C. Результаты представлены в Таблице 13. Различия в образовании ковалентных олигомеров для пяти составов можно было наблюдать даже после 1 недели тестирования стабильности. Кроме того, скорость (наклон) довольно стабильна на протяжении всего тестируемого периода. Состав 1 (20 мг/мл, ацетатная соль ZP1848, гистидин в качестве агента для контроля тоничности) представлял собой наиболее стабильный состав с образованием приблизительно 1,1% ковалентных олигомеров через 4 недели исследования стабильности при 40°C. Состав 5 (20 мг/мл, хлоридная соль ZP1848, мезилат в качестве агента для контроля тоничности) представлял собой второй наиболее стабильный состав с образованием приблизительно 2,1% ковалентных олигомеров через 4 недели исследования стабильности при 40°C. Третьим наиболее стабильным составом был Состав 3 (2 мг/мл, хлоридная соль ZP1848, гистидин в качестве агента для контроля тоничности). Четвертым наиболее стабильным составом является Состав 2 (20 мг/мл, хлоридная соль ZP1848, гистидин в качестве агента для контроля тоничности). Наименее стабильным составом является Состав 4 (20 мг/мл, хлоридная соль ZP1848, сорбит в качестве агента для контроля тоничности).

Незначительная тенденция к более низкой стабильности при использовании сорбита по сравнению с маннитом наблюдалась ранее для ацетатной соли ZP1848 через 3 недели при 40°C (0,9% для маннита и 1,1% для сорбита), см. Пример 7. Различие между составом, содержащим сорбит и маннит, более выражено при сравнении ацетатной и хлоридной солей, при этом в составе, содержащем хлоридную соль и сорбит, при 20 мг/мл образуется приблизительно 3,9% ковалентных олигомеров. При сравнении 2 мг/мл и 20 мг/мл состава хлоридной соли образование ковалентных олигомеров составило 2,4% для 2 мг/мл (увеличение на 0,53% в неделю) и 3,3% для 20 мг/мл (увеличение на 0,75% в неделю) через 4 недели при 40°C. Это неожиданно, поскольку это не соответствует тому, что наблюдается для ацетатной соли. Для ацетатной соли при 20 мг/мл образование ковалентных олигомеров через 3 недели при 40°C составило 0,9% (увеличение на 0,21% в неделю), тогда как при концентрации 2 мг/мл оно составило 1,2% (увеличение на 0,27% в неделю). Более сильное образование ковалентно связанных олигомеров при более низких концентрациях ацетатной соли также согласуется с тем, что наблюдается во время долгосрочного исследования стабильности. Однако для хлоридной соли ситуация была обратной с более сильным образованием ковалентно связанных олигомеров при увеличении концентрации ZP1848.

Таблица13: Образование ковалентно связанных олигомеров состава 1-5 при 40°C в течение от 0 до 4 недель.

Время/недели при 40°C Скорость 0 1 2 3 4 %/нед. Состав 1 0,13 0,43 0,67 0,89 1,1 0,24 Состав 2 0,22 1,5 2,2 2,8 3,3 0,75 Состав 3 0,22 0,99 1,5 1,9 2,4 0,53 Состав 4 0,23 1,7 2,5 3,4 3,9 0,91 Состав 5 0,22 0,86 1,3 1,6 2,1 0,44

Пример 10: Использование ацетатной соли пептида ZP1848 и консервантов для составов аналога GLP-2 пептида ZP1848 при 20 мг/мл

Проводили исследование для изучения совместимости ацетатной соли пептида ZP1848 и обычно используемых консервантов. Эффекты консерванта и температуры исследовали после ускоренного исследования хранения.

Материалы и методы

Готовили исходные растворы маннита (700 мМ), гистидина (200 мМ) и раствор пептида ZP1848 (ацетатная соль; приблизительно 50 мг/мл) в воде Milli-Q. Конечная концентрация пептида составила 20 мг/мл, маннита - 230 мМ, гистидина -15 мМ. Растворы консервантов смешивали в количествах, подходящих для получения составов, показанных в Таблице 14 ниже. Исходный раствор пептида добавляли для получения целевого конечного содержания пептида. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH корректировали до целевого pH состава с использованием 1 M уксусной кислоты/0,5 M L-аргинина. Добавляли воду до конечного объема. Каждый состав вносили во флаконы. Проводили визуальный осмотр контейнеров с образцами для оценки прозрачности и вязкости, ковалентно связанные олигомеры анализировали с помощью SEC, а стабильность мономера пептида анализировали с помощью ВЭЖХ.

Результаты и обсуждение

Результаты исследования перечислены в Таблице 14, Таблице 15 и на Фигуре 8. По-видимому, добавление консерванта не влияет на составы по сравнению с Составом 1, в который консервант не добавлен.

Химическую стабильность оценивали путем определения ковалентно связанных олигомеров и стабильности (чистоты) мономера пептида. Состав 4 (сорбат калия) имеет более сильное образование ковалентно связанных олигомеров, но находится в приемлемом диапазоне. Все другие составы имеют сходное количество ковалентно связанных олигомеров. Нормированная чистота через 13 недель при 25°C показывает, что ZP1848-ацетат опять имеет стабильность, сходную с таковой состава 4, имеющего незначительно более низкую, но приемлемую, чистоту.

Таблица 14: Эффект скрининга консервантов при 25°C в течение 26 недель

№ состава Бензалконий
хлорид Метилпарабен Сорбат калия Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? 0 недель 26 недель (25°C) 1 - - - Прозрачный Прозрачный 2 0,02% - - Прозрачный Прозрачный 3 - 0,2% - Прозрачный Прозрачный 4 - - 0,2% Прозрачный Прозрачный

Таблица 15 Образование ковалентно связанных олигомеров для различных консервантов при 25°C в течение 13 недель

Время/недели при 25°C Скорость 0 2 4 8 13 %/нед. Состав 1 0,12 0,27 0,35 0,47 0,62 0,04 Состав 2 0,13 0,26 0,35 0,48 0,59 0,03 Состав 3 0,14 0,34 0,49 0,79 1,15 0,08 Состав 4 0,14 0,93 1,73 3,46 5,4 0,41

Пример 11: Использование ацетатной соли пептида ZP1848 и консервантов для составов аналога GLP-2 пептида ZP1848 при 2 и 20 мг/мл

Материалы и методы

Готовили исходные растворы маннита (700 мМ), гистидина (200 мМ) и раствор пептида ZP1848 (ацетатная соль; приблизительно 50 мг/мл) в воде Milli-Q. Конечная концентрация пептида составила 20 и 2 мг/мл, маннита - 230 мМ и гистидина - 15 мМ. Растворы консервантов (м-крезол и фенол) смешивали в количествах, подходящих для получения составов, показанных в Таблице 14 ниже. Воду добавляли до 90% от конечного объема. При необходимости pH корректировали до целевого pH состава (7,0), используя 1 M уксусную кислоту/0,5 M L-аргинин. Добавляли воду до конечного объема. Каждый состав вносили во флаконы. Проводили визуальный осмотр контейнеров с образцами для оценки прозрачности и вязкости, и стабильность мономера пептида анализировали с помощью ВЭЖХ.

Результаты и обсуждение

Результаты исследования перечислены в Таблице 16 ниже. Все составы тестировали на долгосрочную стабильность при5°C в течение 52 недель. Все протестированные растворы оставались прозрачными и невязкими в течение изученного периода времени.

Таблица 16: Составы, протестированные в отношении внешнего вида через 52 недели исследования стабильности при 5°C.

Состав № мг/мл м-крезол (мг/мл) Фенол
(мг/мл) Визуальный осмотр
Прозрачный и невязкий? 0 недель 52 недели (5°C) 1 2 0 0 Прозрачный Прозрачный 2 2 3,2 0 Прозрачный Прозрачный 3 2 0 5,5 Прозрачный Прозрачный

Оценка ZP1848-ацетата после ускоренного исследования стабильности при 25°C с помощью ВЭЖХ показана на Фигуре 9. У состава, содержащего фенол, наблюдалась незначительно более низкая химическая стабильность, и м-крезол имел химическую стабильность, сходную со стабильностью неконсервированного состава. В долгосрочном исследовании стабильности при 5°C не наблюдаются какие-либо видимые различия для образцов через 12 месяцев исследования стабильности, и все образцы имеют нормированную чистоту ZP1848-ацетата выше 94% (данные не показаны). Следовательно, все изученные составы стабильны в течение по меньшей мере 52 недель долгосрочного исследования стабильности.

Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано в отношении вариантов реализации, описанных выше, многие эквивалентные модификации и изменения будут понятны специалистам в данной области техники при рассмотрении настоящего раскрытия. Соответственно, изложенные варианты реализации настоящего изобретения рассматриваются как иллюстративные, а не ограничивающие. Различные изменения в описанных вариантах реализации могут быть сделаны без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения. Все документы, цитируемые в настоящей заявке, полностью включены посредством ссылки для всех целей.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ZEALAND PHARMA A/S

<120> СОСТАВЫ АНАЛОГОВ ГЛЮКАГОНОПОДОБНОГО ПЕПТИДА-2 (GLP-2)

<130> 007551930

<140> PCT

<141> 2019-09-27

<140> EP 18197755.4

<141> 2018-09-28

<160> 11

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 39

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 1

His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Glu Leu Ala Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp Lys Lys Lys Lys Lys Lys

35

<210> 2

<211> 36

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 2

His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Glu Leu Ala Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp Lys Lys Lys

35

<210> 3

<211> 35

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 3

His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Glu Leu Ala Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp Lys Lys

35

<210> 4

<211> 34

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 4

His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Glu Leu Ala Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp Lys

<210> 5

<211> 33

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 5

His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Glu Leu Ala Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp

<210> 6

<211> 33

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 6

His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Glu Leu Ala Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp

<210> 7

<211> 39

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 7

His Gly Glu Gly Ser Phe Ser Ser Glu Leu Ser Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp Lys Lys Lys Lys Lys Lys

35

<210> 8

<211> 33

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 8

His Gly Glu Gly Ser Phe Ser Ser Glu Leu Ser Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp

<210> 9

<211> 34

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<400> 9

His Gly Glu Gly Ser Phe Ser Ser Glu Leu Ser Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp Lys

<210> 10

<211> 33

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 10

His Ala Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp

<210> 11

<211> 33

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая пептидная последовательность

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa = Ser или Thr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa = Ala или Ser

<400> 11

His Gly Glu Gly Xaa Phe Ser Ser Glu Leu Xaa Thr Ile Leu Asp Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Ala Trp Leu Ile Ala Thr Lys Ile Thr

20 25 30

Asp

<---

Группа изобретений относится к составам GLP-2 и их медицинскому применению. Предложены способ понижения вязкости и способ уменьшения образования ковалентно связанных олигомерных продуктов аналога GLP-2 в стабильном жидком фармацевтическом составе, содержащем аналог GLP-2 или его фармацевтически приемлемую соль. Способы включают изготовление ацетатной соли аналога GLP-2 с буфером, неионным модификатором тоничности и с аргинином. Общая концентрация ацетата, происходящего из аналога GLP-2, в составе менее или равна 11% ацетата на мг аналога GLP-2. Состав имеет вязкость от 0,8 до 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C. Состав содержит 5% или менее указанного аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов. Также предложена ацетатная соль аналога GLP-2 для получения жидких составов, имеющая формулу (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂), x(CH₃COOH). Ацетатная соль аналога GLP-2 и составы аналога GLP-2 пригодны для применения в лечении нарушения, связанного с желудком и кишечником. Изобретения обеспечивают долгосрочное хранение жидких составов аналога GLP-2 при 2-8°C и делают их пригодными для доставки с помощью устройства для доставки лекарственного средства. 8 н. и 36 з.п. ф-лы, 9 ил., 16 табл., 11 пр.

1. Способ понижения вязкости стабильного жидкого фармацевтического состава, содержащего аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), причем указанный аналог GLP-2 представлен формулой

R¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH; и

Z² представляет собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль;

при этом указанный способ включает изготовление (a) ацетатной соли указанного аналога GLP-2 в концентрации от 2 мг/мл до 30 мг/мл, (b) с буфером, выбранным из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера или MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от 5 мМ до 50 мМ; (c) с неионным модификатором тоничности, выбранным из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, причем указанный неионный модификатор тоничности присутствует в концентрации от 90 мМ до 360 мМ; и (d) с аргинином в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от 6,6 до 7,4;

при этом общая концентрация ацетата, происходящего из аналога GLP-2, в составе менее или равна 11% ацетата на мг аналога GLP-2, и при этом указанный состав имеет вязкость более 0,8 и ниже или равную 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C.

2. Способ уменьшения образования ковалентно связанных олигомерных продуктов аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) в стабильном жидком фармацевтическом составе, содержащем аналог GLP-2, представленный формулой

R¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

в которой:

R¹ представляет собой водород;

Х5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH; и

Z² представляет собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль;

при этом указанный способ включает изготовление (a) ацетатной соли указанного аналога GLP-2 в концентрации от 2 мг/мл до 30 мг/мл, (b) с буфером, выбранным из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера или MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от 5 мМ до 50 мМ; (c) с неионным модификатором тоничности, выбранным из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, причем указанный неионный модификатор тоничности присутствует в концентрации от 90 мМ до 360 мМ; и (d) с аргинином в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от 6,6 до 7,4;

при этом указанный состав содержит 5% или менее указанного аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что образование ковалентно связанных олигомеров указанного аналога GLP-2 обратно пропорционально концентрации указанного аналога GLP-2 в составе.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что (a) указанный способ включает изготовление состава указанного аналога GLP-2 в концентрации, составляющей 2 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл или 20 мг/мл.

5. Ацетатная соль аналога глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) для лечения нарушения, связанного с желудком и кишечником, имеющая формулу

(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂), x(CH₃COOH), где x представляет собой от 1,0 до 8,0.

6. Ацетатная соль аналога GLP-2 по п. 5, отличающаяся тем, что x представляет собой от 4,0 до 6,0.

7. Ацетатная соль аналога GLP-2 по п. 5, отличающаяся тем, что x представляет собой от 2,0 до 7,0.

8. Ацетатная соль аналога GLP-2 по п. 5, отличающаяся тем, что x представляет собой от 3,0 до 6,0.

9. Ацетатная соль аналога GLP-2 по п. 5, отличающаяся тем, что x представляет собой от 4,0 до 8,0.

10. Стабильный водный фармацевтический состав для применения в способе лечения нарушения, связанного с желудком и кишечником, причем указанный состав содержит

(a) указанную ацетатную соль аналога GLP-2 по пп. 5-9 в концентрации от 2 мг/мл до 30 мг/мл;

(b) буфер, выбранный из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера, ацетатного буфера, глицинового буфера, лизинового буфера, ТРИС буфера, Бис-Трис буфера и MOPS буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от 5 мМ до 50 мМ;

(c) неионный модификатор тоничности, выбранный из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина, сорбита и трегалозы, в концентрации от 90 мМ до 360 мМ; и

(d) аргинин в количестве, достаточном для обеспечения состава, имеющего pH от 6,6 до 7,4;

при этом указанный состав содержит 5% или менее указанного аналога GLP-2 в виде ковалентно связанных олигомерных продуктов, и при этом указанный состав имеет вязкость от 0,8 до 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C.

11. Состав по п. 10, отличающийся тем, что указанный состав стабилен в течение по меньшей мере 18 месяцев при хранении при 2-8°C.

12. Состав по п. 10 или 11, отличающийся тем, что указанный аналог GLP-2 в составе сохраняет по меньшей мере 90% своей биологической активности после 18 месяцев хранения при 2-8°C.

13. Состав по любому из пп. 10-12, отличающийся тем, что указанный состав имеет вязкость от 0,8 до 2,0 мПа⋅с, измеренную при 25°C.

14. Состав по любому из пп. 10-13, отличающийся тем, что указанный аналог GLP-2 присутствует в указанном составе в концентрации от 15 мг/мл до 25 мг/мл.

15. Состав по любому из пп. 10-14, отличающийся тем, что указанный аналог GLP-2 в составе находится в концентрации, составляющей 10 мг/мл.

16. Состав по любому из пп. 10-14, отличающийся тем, что указанный аналог GLP-2 в составе находится в концентрации, составляющей 5 мг/мл.

17. Состав по любому из пп. 10-14, отличающийся тем, что указанный аналог GLP-2 в составе находится в концентрации, составляющей 2 мг/мл.

18. Состав по любому из пп. 10-17, отличающийся тем, что указанный состав представляет собой готовый к применению состав.

19. Состав по любому из пп. 10-14, отличающийся тем, что указанный аналог GLP-2 присутствует в указанном составе в концентрации 20 мг/мл.

20. Состав по любому из пп. 10-19, отличающийся тем, что указанный буфер присутствует в указанном составе в концентрации от 5 мМ до 25 мМ.

21. Состав по любому из пп. 10-20, отличающийся тем, что указанный буфер представляет собой гистидиновый буфер, причем необязательно указанный гистидиновый буфер присутствует в указанном составе в концентрации 15 мМ.

22. Состав по любому из пп. 10-21, отличающийся тем, что указанный неионный модификатор тоничности присутствует в указанном составе в концентрации от 150 мМ до 250 мМ.

23. Состав по любому из пп. 10-22, отличающийся тем, что указанный неионный модификатор тоничности представляет собой маннит, причем необязательно указанный маннит присутствует в указанном составе в концентрации 230 мМ.

24. Состав по любому из пп. 10-23, отличающийся тем, что указанный состав имеет pH от 6,8 до 7,2, причем необязательно указанный состав имеет pH 7,0.

25. Состав по любому из пп. 10-13, отличающийся тем, что указанный состав состоит из указанной ацетатной соли аналога GLP-2 в концентрации от 2 мг/мл до 30 мг/мл, буфера, выбранного из группы, состоящей из гистидинового буфера, мезилатного буфера и ацетатного буфера, причем указанный буфер присутствует в концентрации от 5 мМ до 50 мМ, неионного модификатора тоничности, выбранного из группы, состоящей из маннита, сахарозы, глицерина и сорбита, в концентрации от 90 мМ до 360 мМ, аргинина в количестве, достаточном для обеспечения pH от 6,6 до 7,4.

26. Состав по любому из пп. 10-14 и 25, отличающийся тем, что указанный состав содержит указанный аналог GLP-2 в концентрации 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации 15 мМ, маннит в концентрации 230 мМ и аргинин в количестве, достаточном для обеспечения pH 7,0.

27. Состав по любому из пп. 10-26, отличающийся тем, что указанный гистидиновый буфер представляет собой L-гистидин и/или при этом указанный маннит представляет собой D-маннит, и/или при этом указанный аргинин представляет собой L-аргинин.

28. Состав по любому из пп. 10-27, отличающийся тем, что указанный состав не содержит восстанавливающий агент, и/или который является стерильным.

29. Состав по любому из пп. 10-28, отличающийся тем, что указанный состав вводят субъекту путем инъекции, причем необязательно указанная инъекция представляет собой подкожную инъекцию.

30. Набор для применения в способе лечения нарушения, связанного с желудком и кишечником, содержащий контейнер, вмещающий стабильный фармацевтический состав по любому из пп. 10-29.

31. Устройство для инъекционной доставки, содержащее стабильный водный фармацевтический состав по любому из пп. 10-29, причем указанное устройство для инъекционной доставки выбрано из предварительно заполненного шприца, инъекционного устройства, шприца-ручки, автоинъектора с корректируемой дозой, одноразового автоинъектора, носимого инъектора или инфузионного насоса.

32. Применение стабильного водного фармацевтического состава по любому из пп. 10-29 в лечении нарушения, связанного с желудком и кишечником.

33. Состав по любому из пп. 10-29 для применения в способе лечения нарушения, связанного с желудком и кишечником, у пациента-человека.

34. Состав по п. 33, отличающийся тем, что указанное нарушение, связанное с желудком и кишечником, представляет собой язвы, нарушения пищеварения, синдромы мальабсорбции, синдром короткой кишки, синдром «слепого мешка», воспалительное заболевание кишечника, спру-целиакию, тропическую спру, гипогаммаглобулинемическую спру, энтерит, регионарный энтерит, болезнь Крона, язвенный колит, повреждение тонкого кишечника или синдром короткой кишки (СКК), причем необязательно указанное нарушение, связанное с желудком и кишечником, представляет собой синдром короткой кишки.

35. Состав по п. 33, отличающийся тем, что указанное нарушение, связанное с желудком и кишечником, представляет собой радиационный энтерит, инфекционный или постинфекционный энтерит или повреждение тонкого кишечника, вызванное токсическими или другими химиотерапевтическими агентами, причем необязательно лечение с применением указанного аналога GLP-2 комбинируют с одним или более видами противораковой терапии, причем необязательно лечение с применением противораковой терапии включает введение пациенту одного или более химиотерапевтических агентов или лечение пациента лучевой терапией.

36. Состав по п. 33, отличающийся тем, что указанный состав применяют в лечении побочного эффекта химиотерапии или лучевой терапии, причем необязательно указанный побочный эффект химиотерапии представляет собой диарею, спазмы в животе, рвоту или структурное и функциональное повреждение эпителия кишечника в результате химиотерапевтического лечения.

37. Состав по п. 33 или 34, отличающийся тем, что указанный пациент-человек представляет собой пациента, страдающего СКК-синдромом кишечной недостаточности, причем необязательно указанный пациент-человек представляет собой пациента, состояние которого является промежуточным между СКК-кишечной недостаточностью и СКК-синдромом кишечной недостаточности.

38. Состав по пп. 33-37, отличающийся тем, что указанный способ включает введение указанного аналога GLP-2 указанному пациенту один раз в неделю или указанный способ включает введение указанного аналога GLP-2 указанному пациенту два раза в неделю.

39. Стабильный жидкий фармацевтический состав для применения в способе лечения нарушения, связанного с желудком и кишечником, содержащий аналог глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2), причем указанный аналог GLP-2 представлен формулой

R¹-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z²-R²,

где R¹ представляет собой водород;

X5 представляет собой Ser или Thr;

X11 представляет собой Ala или Ser;

R² представляет собой NH₂ или OH; и

Z² представляет собой пептидную последовательность из 1-6 аминокислотных звеньев Lys;

или его фармацевтически приемлемую соль;

при этом указанный состав содержит аналог GLP-2 в концентрации, составляющей 20 мг/мл, гистидиновый буфер в концентрации, составляющей 15 мМ, маннит в концентрации, составляющей 230 мМ, и аргинин в количестве, достаточном для обеспечения pH 7,0.

40. Состав по п. 39, отличающийся тем, что аналог GLP-2 представляет собой

H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO: 1),

H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKK-OH (SEQ ID NO: 3),

H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO: 4),

H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH₂ (SEQ ID NO: 7) или

H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO: 9).

41. Состав по п. 39 или 40, отличающийся тем, что указанный аргинин представляет собой L-аргинин.

42. Состав по любому из пп. 39-41, отличающийся тем, что указанный состав стабилен при 2-8°C в течение по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев или по меньшей мере 24 месяцев.

43. Состав по п. 42, отличающийся тем, что аналог GLP-2 в составе сохраняет по меньшей мере 90% биологической активности после 18 месяцев хранения при 2-8°C.

44. Состав по любому из пп. 39-43, отличающийся тем, что аналог GLP-2 представлен в виде ацетатной соли.