Область техники
Настоящее изобретение относится к жидкой композиции конъюгата пептида длительного действия, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), и к способу ее получения.
Предшествующий уровень техники
Вследствие экономического роста и изменения привычного рациона питания и так далее быстро возрастает частота возникновения заболеваний, связанных с метаболическим синдромом, включая различные заболевания, такие как ожирение, гиперлипидемия, гипертензия, артериосклероз, гиперинсулинемия, диабет или заболевания печени. Эти заболевания могут возникать независимо, но, как правило, чаще они возникают в тесной связи друг с другом, сопровождаясь различными симптомами. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) более миллиарда взрослых людей во всем мире имеют избыточный вес, и среди них более чем у трех миллионов диагностировано ожирение, и, в частности, 250 000 человек в Европе и более 2,5 миллионов людей во всем мире ежегодно умирают из-за заболеваний, связанных с избыточным весом или ожирением. Ожирение признано серьезным заболеванием, встречающимся повсеместно, и является причиной различных заболеваний, но существует мнение, что от него можно избавиться благодаря собственным усилиям. Однако, ожирение трудно поддается лечению, поскольку представляет собой комплексное заболевание, связанное с механизмами регулирования аппетита и энергетического обмена. Соответственно, лечение ожирения требует не только собственных усилий пациента, но также и способа, позволяющего нормализовать патологически измененные механизмы, связанные с регулированием аппетита и энергетическим обменом. Поэтому предпринимались попытки разработать лекарственные средства для лечения таких патологически измененных механизмов.
В результате этих усилий были разработаны такие лекарства против ожирения, как римонабант® (Sanofi-Aventis), сибутрамин® (Abbott), контрейв® (Takeda), орлистат® (Roche) и другие, однако их недостатком являются серьезные побочные эффекты или слабое влияние на ожирение. Соответственно, проводилось множество обширных исследований для разработки новых терапевтических агентов против ожирения, которые способны решить проблемы традиционных лекарств против ожирения. В последнее время большое внимание привлек оксинтомодулин, который обладает активностью в отношении всех рецепторов GLP-1 и рецепторов глюкагона. Оксинтомодулин представляет собой пептид, продуцируемый из предшественника глюкагона, пре-глюкагона, и проявляет эффективность в качестве терапевтического средства против ожирения, поскольку он подавляет потребление пищи подобно GLP-1, способствует насыщению и обладает липолитической активностью подобно глюкагону. Основываясь на этой двойной функции пептида оксинтомодулина, его активно исследуют в качестве лекарственного средства для лечения ожирения. Например, в патенте Кореи №925017 описана фармацевтическая композиция, включающая оксинтомодулин в качестве активного ингредиента, для лечения людей с избыточным весом, которую вводят перорально, парентерально, через слизистые оболочки, ректально, подкожно или трансдермально. Однако сообщалось, что это лекарственное средство против ожирения, включающее оксинтомодулин, имеет короткий период полувыведения in vivo и слабую терапевтическую эффективность даже при введении в высокой дозе три раза в сутки. Поэтому было предпринято много усилий для увеличения периода полувыведения in vivo или терапевтического эффекта оксинтомодулина при ожирении путем его модификации. При этом, ранее разработанный оксинтомодулин или его производные по-прежнему имеют два основных недостатка, заключающихся в том, что их необходимо вводить ежедневно из-за короткого периода полувыведения и низкой эффективности, и что необходимо вводить избыточное количество данного лекарственного средства.
Раскрытие изобретения
Техническая задача
Необходимо поддерживать фармацевтическую эффективность лекарственного средства in vivo, в то же время сдерживая физико-химические изменения данного лекарственного средства при длительном хранении путем добавления стабилизатора к белку или пептиду в растворенном состоянии.
Техническое решение
Одной из задач настоящего изобретения является предложение жидкой композиции конъюгата пептида длительного действия, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1 (глюкагоноподобного пептида-1), в которой пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны.
Другой задачей настоящего изобретения является предложение способа получения жидкой композиции конъюгата пептида длительного действия, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1.
Полезные эффекты
Жидкая композиция конъюгата пептида длительного действия, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, представляет собой новую композицию, характеризующуюся присутствием сахарида и отсутствием сахарного спирта, и обеспечивает превосходные эффекты в стресс-тестах и/или ускоренных испытаниях, которые определяют стабильность лекарственных средств, а также стабильность при длительном хранении, и, таким образом, может быть использована в качестве новой жидкой композиции, которая может стабильно храниться без разложения лекарственного средства. Кроме того, поскольку жидкая композиция по настоящему изобретению имеет диапазон осмотического давления, сходный с диапазоном осмотического давления крови, она не вызывает боли при введении пациенту, тем самым повышая удобство введения для пациента.
Подробное описание изобретения
В одном аспекте осуществления настоящего изобретения предложена жидкая композиция конъюгата пептида длительного действия, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1 (глюкагоноподобного пептида-1), в которой пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны. Конъюгат длительного действия может относиться к веществу, в котором пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, ковалентно связан с Fc-фрагментом иммуноглобулина посредством линкера.
В одном воплощении жидкая композиция представляет собой жидкую композицию конъюгата пептида, включающую конъюгат пептида Химической Формулы 1 ниже, буферный агент, сахарид и неионогенное поверхностно-активное вещество:
[Химическая Формула 1]
в Химической Формуле 1 выше:
Q представляет собой пептид Общей Формулы 1 ниже;
Z представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина; и
n представляет собой натуральное число, где значение n определено таким образом, чтобы средняя молекулярная масса области [ОСН2СН2]n в конъюгате пептида составляла 10 кДа:
[Общая Формула 1]
His-Хаа2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Xaa12-Tyr-Leu-Asp-Xaa16-Lys-Arg-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Cys (SEQ ID NO: 1),
в Общей Формуле 1 выше,
Хаа2 представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib), Хаа12 представляет собой лизин (K), Хаа16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), Хаа20 представляет собой лизин (K); и
лактамное кольцо может или не может быть образовано между остатками Хаа12 и Хаа16 или Хаа16 и Хаа20.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она представляет собой жидкую композицию конъюгата пептида, включающую: от 18 до 940 нмоль/мл конъюгата пептида Химической Формулы 1 ниже; буферный агент в количестве для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,5 до 7,5; от 1 до 20% (масс./об.) сахарида; и от 0,001 до 0,2% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений пептид характеризуется тем, что он включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 3 или 4.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Q характеризуется тем, что он включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Q характеризуется тем, что он амидирован по своему С-концу.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Q характеризуется тем, что он присоединен через атом серы цистеина в пептиде.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-фрагмент иммуноглобулина характеризуется тем, что он имеет происхождение из IgG4.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Z характеризуется тем, что он представляет собой структуру, в которой две полипептидные цепи связаны дисульфидной связью и связаны только через атом азота в одной из двух цепей.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Z характеризуется тем, что он включает мономер с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Z характеризуется тем, что он присоединен через атом азота пролина по своему N-концу.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-фрагмент иммуноглобулина и Q характризуются тем, что они не гликозилированы.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она не содержит сахарный спирт.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция может включать или не включать изотонический агент.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений буферный агент характеризуется тем, что он выбран из группы, состоящей из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений буферный агент характеризуется тем, что он представляет собой уксусную кислоту и ее соль.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений значение рН жидкой композиции характеризуется тем, что оно составляет от 4,8 до 6,0.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений значение рН жидкой композиции характеризуется тем, что оно составляет от 4,9 до 5,3.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений концентрация буферного агента характеризуется тем, что она составляет от 5 до 100 мМ для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,5 до 7,5.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений сахарид характеризуется тем, что он представляет собой глюкозу, фруктозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу или их комбинацию.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений сахарид характеризуется тем, что он представляет собой сахарозу.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений сахарид характеризуется тем, что он присутствует в жидкой композиции в концентрации от 1 до 20% (масс./об.).
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений неионогенное поверхностно-активное вещество характеризуется тем, что оно представляет собой полоксамер, полисорбат или их комбинацию.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений неионогенное поверхностно-активное вещество характеризуется тем, что оно выбрано из группы, состоящей из полоксамера 188, полисорбата 20, полисорбата 40, полисорбата 60, полисорбата 80 и их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений неионогенное поверхностно-активное вещество характеризуется тем, что оно присутствует в жидкой композиции в концентрации от 0,001 до 0,2% (масс./об.).
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений конъюгат пептида Химической Формулы 1 выше характеризуется тем, что он присутствует в жидкой композиции в концентрации от 18 нмоль/мл до 940 нмоль/мл.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она дополнительно включает стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аргинина, глицина, метионина и их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она включает: конъюгат пептида Химической Формулы 1; буферный агент, выбранный из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации; сахарид, выбранный из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, галактозы, лактозы, мальтозы, сахарозы или их комбинации; и неионогенное поверхностно-активное вещество, выбранное из полоксамера, полисорбата и их комбинации, где значение рН жидкой композиции составляет от 4,8 до 6,0.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она включает: конъюгат пептида Химической Формулы 1; от 5 мМ до 100 мМ буферного агента, выбранного из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации, для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 6,0; от 1 до 20% (масс./об.) сахарида, выбранного из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, галактозы, лактозы, мальтозы, сахарозы или их комбинации; и от 0,001 до 0,2% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата и их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она включает: конъюгат пептида Химической Формулы 1; от 5 мМ до 100 мМ буферного агента для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 6,0; от 1 до 20% (масс./об.) сахарозы; и от 0,001 до 0,2% (масс./об.) полисорбата.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-область иммуноглобулина характеризуется тем, что она представляет собой Fc-фрагмент, имеющий происхождение из IgG, IgA, IgD, IgE или IgM.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-область иммуноглобулина характеризуется тем, что она выбрана из группы, состоящей из (а) СН1 домена, СН2 домена, СН3 домена и СН4 домена, (б) СН1 домена и СН2 домена, (в) СН1 домена и СН3 домена, (г) СН2 домена и СН3 домена, (д) комбинации из одного или двух или более доменов из: СН1 домена, СН2 домена, СН3 домена и СН4 домена и шарнирной области иммуноглобулина или части шарнирной области) и (е) димера между каждым доменом константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений каждый домен Fc-фрагмента иммуноглобулина характеризуется тем, что он представляет собой гибрид из доменов, имеющих разное происхождение, полученных из иммуноглобулинов, выбранных из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-фрагмент иммуноглобулина характеризуется тем, что он присутствует в форме димера или мультимера, состоящего из одноцепочечных иммуноглобулинов, состоящих из доменов одинакового происхождения.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-фрагмент иммуноглобулина характеризуется тем, что он представляет собой Fc-фрагмент IgG4.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-фрагмент иммуноглобулина характеризуется тем, что он представляет собой агликозилированный Fc-фрагмент IgG4 человека.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений Fc-фрагмент иммуноглобулина характеризуется тем, что он представляет собой производное нативного Fc, включающее: модификацию, где удален сайт, способный образовывать межцепочечную дисульфидную связь; модификацию, где у нативного Fc удалено несколько N-концевых аминокислот; модификацию, где к N-концу нативного Fc добавлен остаток метионина; модификацию, где удалены сайты связывания комплемента; модификацию, где удалены сайты антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) или их комбинацию.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она включает: конъюгат пептида Химической Формулы 1, включающей Q, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, 3 или 4; от 5 мМ до 100 мМ буферного агента, выбранного из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации, для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 6,0; от 1 до 20% (масс./об.) сахарида, выбранного из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, галактозы, лактозы, мальтозы, сахарозы или их комбинации; и от 0,001% до 0,2% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата и их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она включает: конъюгат пептида Химической Формулы 1, включающей Q, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, 3 или 4; от 5 мМ до 100 мМ буферного агента, выбранного из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации, для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 6,0; от 1 до 20% (масс./об.) сахарозы; и от 0,001% до 0,2% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата и их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она включает: от 93 нмоль/мл до 565 нмоль/мл конъюгата пептида Химической Формулы 1, в которой Q, имеющий амидированный С-конец, присоединен через атом серы цистеина; от 5 мМ до 25 мМ буферного агента, выбранного из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации, так чтобы значение рН жидкой композиции составляло от 4,8 до 5,5; от 4 до 10% (масс./об.) сахарида; и от 0,01 до 0,1% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата или их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она включает: от 93 нмоль/мл до 565 нмоль/мл конъюгата пептида Химической Формулы 1, в которой Q, имеющий амидированный С-конец, присоединен через атом серы цистеина, и Z присоединен через атом азота пролина по его N-концу; от 5 мМ до 25 мМ буферного агента, выбранного из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации, так чтобы значение рН жидкой композиции составляло от 4,8 до 5,5; от 4 до 10% (масс./об.) сахарида; и от 0,01 до 0,1% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата или их комбинации.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений концентрация конъюгата пептида Химической Формулы 1 выше в жидкой композиции характеризуется тем, что она составляет от 274 нмоль/мл до 474 нмоль/мл.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений концентрация конъюгата пептида Химической Формулы 1 выше в жидкой композиции характеризуется тем, что она составляет от 320 нмоль/мл до 430 нмоль/мл.
В жидкой композиции согласно любому из предшествующих воплощений жидкая композиция характеризуется тем, что она имеет прозрачный вид при хранении в течение одной недели в условиях стресс-теста при 40°С±2°С и относительной влажности 75%±5%.
В другом аспекте осуществления настоящего изобретения предложен способ получения жидкой композиции конъюгата пептида, которая представляет собой жидкую композицию согласно любому из предшествующих воплощений, включающий: смешивание (а) конъюгата пептида Химической Формулы 1 с (б) (1) буферным агентом, (2) сахаридом и (3) поверхностно-активным веществом.
Способ осуществления изобретения
Далее данное изобретение будет описано более подробно.
При этом каждое из пояснений и воплощений, приведенных в данном документе в качестве примера, может быть применено к каждому из других пояснений и приведенных в качестве примера воплощений. Таким образом, все комбинации различных факторов, изложенных в данном документе, входят в объем данного изобретения. Более того, объем данного изобретения не должен ограничиваться конкретным описанием, приведенным ниже.
Кроме того, специалистам в данной области будут очевидны или найдены в ходе рутинных экспериментов множество эквивалентов частных аспектов изобретения, описанных в данном документе. Кроме того, предполагается, что данное изобретение будет охватывать такие эквиваленты.
По ходу описания данного изобретения используют не только стандартные однобуквенные и трехбуквенные коды для аминокислот естественного происхождения, но также и трехбуквенные коды, общепринятые для других аминокислот, таких как α-аминоизомасляная кислота (Aib) и др. Кроме того, аминокислоты, упомянутые в данном документе, обозначают следующими аббревиатурами согласно правилам номенклатуры IUPAC-IUB:
В одном аспекте осуществления настоящего изобретения предложена жидкая композиция конъюгата пептида длительного действия, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1 (глюкагоноподобного пептида-1), в котором пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны.
В частности, в настоящем изобретении предложена жидкая композиция, включающая конъюгат пептида Химической Формулы 1 ниже, буферный агент, сахарид и неионогенное поверхностно-активное вещество:
[Химическая Формула 1]
в Химической Формуле 1 выше:
Q представляет собой пептид Общей Формулы 1 ниже; Z представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина; и
n представляет собой натуральное число, где значение n определено таким образом, чтобы средняя молекулярная масса области [ОСН2СН2]n в конъюгате пептида составляла 10 кДа:
[Общая Формула 1]
His-Хаа2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Xaa12-Tyr-Leu-Asp-Xaa16-Lys-Arg-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Cys (SEQ ID NO: 1),
в Общей Формуле 1 выше,
Хаа2 представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib), Хаа12 представляет собой лизин (K), Хаа16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), Хаа20 представляет собой лизин (K); и
лактамное кольцо может или не может быть образовано между остатками Хаа12 и Хаа16 или Хаа16 и Хаа20.
Конъюгат пептида Химической Формулы 1 имеет структуру, в которой пептид Q с SEQ ID NO: 1 и Fc-фрагмент иммуноглобулина человека Z ковалентно связаны через повторяющееся звено этиленгликоля, где каждый Q может быть присоединен к сукцинимидному кольцу Химической Формулы 1, и Z может быть присоединен к оксипропиленовой группе Химической Формулы 1.
Q конъюгата пептида может представлять собой пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1.
В одном воплощении группировка, посредством которой Q присоединен к сукцинимидному кольцу Химической Формулы 1, может представлять собой атом серы С-концевого цистеина в Q.
Z представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина человека, и Fc-фрагмент иммуноглобулина в данном описании охватывает не только нативную последовательность, полученную в результате расщепления иммуноглобулина папаином, но также и ее производные, например последовательности, в которых один или более аминокислотных остатков нативной последовательности модифицированы в результате делеции, вставки, неконсервативной или консервативной замены или их комбинации, и поэтому последовательность отличается от нативной последовательности, и так далее.
Группировка, связанная с оксипропиленовой группой в Z, конкретно не ограничена. В одном воплощении настоящего изобретения группировка Z, присоединенная к оксипропиленовой группе, может представлять собой N-концевой азот или атом азота остатка в Z (например, эпсилон-азот лизина). В одном конкретном воплощении настоящего изобретения группировка, в которой Z присоединен к оксипропиленовой группе Химической Формулы 1, может представлять собой N-концевой пролин Z.
Z может иметь структуру, в которой две полипептидные цепи связаны посредством межцепочечной дисульфидной связи, или структуру, в которой две полипептидные цепи связаны через атом азота только в одной из двух цепей, но не ограничиваясь этим. Связывание через атом азота может быть осуществлено через эпсилон амино-атом или N-концевую аминогруппу лизина посредством восстановительного аминирования.
Реакция восстановительного аминирования относится к реакции, при которой аминогруппа вещества, участвующего в реакции, вступает в реакцию с альдегидной группой другого вещества, участвующего в реакции (то есть функциональной группой, способной к восстановительному аминированию) с образованием амина, и затем посредством реакции восстановления образуется аминная связь. Реакция восстановительного аминирования представляет собой реакцию органического синтеза, широко известную в данной области техники.
В одном воплощении Z может быть присоединен через атом азота своего N-концевого пролина, но не ограничиваясь этим.
В одном воплощении Fc-фрагмент иммуноглобулина и Q могут быть агликозилированными, но не ограничиваясь этим. В настоящем изобретении конъюгат пептида Химической Формулы 1 выше называют «конъюгатом длительного действия». В настоящем изобретении конъюгат длительного действия может быть использован взаимозаменяемо с «конъюгатом производного оксинтомодулина длительного действия» или «конъюгатом пептида».
В данном описании термин «жидкая композиция» относится к лекарственному средству, изготовленному в виде препарата в жидкой форме, и включает все жидкие композиции для приема внутрь и композиции для наружного применения.
Жидкая композиция по настоящему изобретению включает конъюгат пептида Химической Формулы 1, демонстрирующий фармакологический эффект, и вещество, способное стабильно поддерживать и/или сохранять в течение определенного периода времени конъюгат пептида, демонстрирующий фармакологический эффект, когда он изготовлен в виде препарата в жидкой форме.
В жидкой композиции конъюгата пептида Химической Формулы 1 по настоящему изобретению стабильность при хранении важна для обеспечения точного введения.
Жидкая композиция может включать буферный агент, сахарид и неионогенное поверхностно-активное вещество. Такая жидкая композиция может представлять собой композицию в виде раствора, способную стабильно сохранять конъюгат пептида длительного действия, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1.
Кроме того, жидкая композиция может дополнительно включать стабилизатор, который представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аргинина, глицина, метионина и их комбинации, но не ограничиваясь ими.
Например, жидкая композиция может по существу включать буферный агент, сахарид и неионогенное поверхностно-активное вещество в качестве состава данной жидкой композиции, в дополнение к конъюгату пептида Химической Формулы 1, который проявляет фармакологический эффект, или она может по существу включать буферный агент, сахарид и неионогенное поверхностно-активное вещество, а также аминокислотный стабилизатор в качестве дополнительного компонента, но конкретно не ограничены этим. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что состав данной жидкой композиции пептида демонстрирует превосходную стабильность без аминокислотного стабилизатора, когда сахарный спирт заменен сахаридом, по сравнению с обычной композицией, содержащей буферный агент, сахарный спирт, неионогенное поверхностно-активное вещество и аминокислоту. Кроме того, в случае композиции предшествующего уровня техники, содержащей буферный агент, сахарный спирт, неионогенное поверхностно-активное вещество и аминокислоту, существовала проблема, состоящая в том, что осмотическое давление композиции было выше, чем осмотическое давление крови при концентрации ингредиентов, которые могут обеспечить стабильность композиции. Напротив, композиция по настоящему изобретению имеет преимущества, заключающиеся в том, что осмотическое давление может быть снижено до уровня, аналогичного осмотическому давлению крови, и что стабильность может быть по меньшей мере равной или повышенной по сравнению с композицией предшествующего уровня техники. В частности, вышеописанная стабильность и осмотическое давление, подобные таковым в крови, могут быть достигнуты путем замены сахарного спирта на сахарид и частичной корректировки значения рН по сравнению с композицией предшествующего уровня техники.
В общем, в случае крови осмотическое давление составляет приблизительно 300 мОсм/кг. Композиция по настоящему изобретению может иметь диапазон, аналогичный осмотическому давлению крови, например, 300 мОсм/кг ± 50 мОсм/кг. Как описано выше, композиция по настоящему изобретению, имеющая осмотическое давление, подобное осмотическому давлению крови, не вызывает боли при введении пациенту, тем самым повышая удобство введения.
При этом, в случае метионина, представляющего аминокислоту, которая может быть дополнительно включена в композицию по настоящему изобретению, присутствие или отсутствие метионина не влияет на стабильность, поэтому его можно исключить.
Согласно одному конкретному воплощению настоящего изобретения, жидкая композиция может стабильно сохранять вышеупомянутый конъюгат длительного действия даже в течение вплоть до 12 месяцев, поэтому она обладает превосходной долговременной стабильностью и превосходным остаточным содержанием вплоть до 6 месяцев даже в условиях ускоренных испытаний и сохраняет прозрачный вид вплоть до 4-й недели в условиях стресс-теста.
В одном воплощении жидкая композиция по настоящему изобретению может не включать сахарный спирт.
В одном воплощении жидкая композиция по настоящему изобретению может включать или не включать изотонический агент. Например, жидкая композиция по настоящему изобретению может не включать хлорид натрия, сульфат натрия или цитрат натрия, но не ограничивается этим.
Изотонический агент относится к веществу, которое может контролировать осмотическое давление. Изотонический агент может служить для надлежащего поддержания осмотического давления, когда жидкую композицию по настоящему изобретению вводят в организм.
Репрезентативные примеры изотонического агента могут включать хлорид натрия, сульфат натрия или цитрат натрия в виде водорастворимой неорганической соли, в частности хлорида натрия, но конкретно не ограничены этим.
Концентрация изотонического агента в жидкой композиции по настоящему изобретению может составлять от 0 мМ до 200 мМ, от 0 мМ до 150 мМ, от 0 мМ до 100 мМ, от 10 мМ до 200 мМ, от 10 мМ до 150 мМ, от 10 мМ до 100 мМ, от 10 мМ до 50 мМ, от 20 мМ до 100 мМ, от 20 мМ до 80 мМ, от 20 мМ до 50 мМ, от 20 мМ до 30 мМ или от 40 мМ до 50 мМ, но конкретно не ограничиваются ими. Такой изотонический агент может быть необязательным компонентом, дополнительно включенным в вышеописанную жидкую композицию, и конкретно не ограничивается этим.
В частности, очевидно, что все содержание, описанное ниже, относится к типу, концентрации или рН каждого компонента, входящего в состав жидкой композиции.
Буферный агент, являющийся одним из компонентов, включенных в жидкую композицию по данному изобретению, может поддерживать значение рН раствора таким образом, чтобы значение рН жидкой композиции не подвергалось быстрому изменению, чтобы придать стабильность конъюгату пептида Химической Формулы 1. Буферный агент также может относиться к буферной системе, и такие буферный агент или буферная система служат для поддержания значения рН жидкой композиции. Может быть использован любой буферный агент, без ограничения, способный поддерживать значение рН, которое может стабилизировать конъюгат пептида Химической Формулы 1, представляющий собой целевое вещество для стабилизации.
Буферный агент может представлять собой буфер для поддержания рН, включающий фосфорную кислоту и ее сопряженное основание (то есть соль щелочного металла, такую как фосфат: фосфат натрия, фосфат калия, или их одно- или двузамещенную соль), лимонную кислоту и ее соль (например, цитрат натрия), уксусную кислоту и ее соль (например, ацетат натрия) или гистидин и его соль, а также можно использовать смесь этих буферов, однако буферный агент не ограничивается ими.
Жидкая композиция по настоящему изобретению может включать буферный раствор, содержащий буферный агент в качестве растворителя жидкой композиции, и в частности, буферный раствор может быть выбран из группы, состоящей из раствора цитратного буфера (например, натрий-цитратного буферного раствора), раствора ацетатного буфера (например, натрий-ацетатного буферного раствора), раствора фосфатного буфера (например, натрий-фосфатного буферного раствора), раствора гистидинового буфера и их комбинации. Кроме того, буферный раствор или буферный агент в жидкой композиции (лимонная кислота и ее соль, уксусная кислота и ее соль, гистидин и его соль, фосфорная кислота и ее соль или их комбинация) могут содержаться в концентрации, достаточной для поддержания целевого значения рН жидкой композиции.
Значение рН жидкой композиции может находиться в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,5, например от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,0, от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5, от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,3, от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,0, от приблизительно 4,5 до приблизительно 5,9, от приблизительно 4,6 до приблизительно 5,8, от приблизительно 4,7 до приблизительно 5,8, от приблизительно 4,8 до приблизительно 6,0, от приблизительно 4,8 до 5,8, от приблизительно 4,8 до приблизительно 5,7, от приблизительно 4,8 до 5,6, от приблизительно 4,8 до приблизительно 5,5, от приблизительно 4,8 до приблизительно 5,4, от приблизительно 4,8 до приблизительно 5,3, от приблизительно 4,9 до приблизительно 5,3, от приблизительно 4,9 до приблизительно 5,2, от приблизительно 5,0 до приблизительно 5,2 или приблизительно 5,1, но конкретно этим не ограничивается.
Концентрация жидкой композиции для достижения целевого значения рН может составлять от приблизительно 1 мМ до приблизительно 200 мМ, более предпочтительно от приблизительно 5 мМ до приблизительно 100 мМ, от приблизительно 5 мМ до приблизительно 80 мМ, от приблизительно 5 мМ до приблизительно 40 мМ, от приблизительно 8 мМ до приблизительно 40 мМ, от приблизительно 5 мМ до приблизительно 30 мМ или от приблизительно 5 мМ до приблизительно 25 мМ, но конкретно этим не ограничивается.
Сахарид, который является одним из компонентов, включенных в жидкую композицию по настоящему изобретению, относится к моносахаридам, дисахаридам, полисахаридам, олигосахаридам и т.д. и может повышать стабильность конъюгата пептида длительного действия, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1. Конкретные примеры могут включать моносахариды, такие как манноза, глюкоза, фруктоза, галактоза, фукоза и ксилоза; дисахариды, такие как лактоза, мальтоза и сахароза; и полисахариды, такие как раффиноза и декстран, но не ограничиваются ими.
Сахарид может присутствовать в концентрации от приблизительно 1 до приблизительно 20% (масс./об.), от приблизительно 1 до 15% (масс./об.), от приблизительно 2 до приблизительно 15% (масс./об.), от приблизительно 2 до приблизительно 12% (масс./об.), от приблизительно 2 до приблизительно 12% (масс./об.), от приблизительно 3 до приблизительно 10% (масс./об.), от приблизительно 4 до приблизительно 10% (масс./об.), от приблизительно 5 до приблизительно 10% (масс./об.), от приблизительно 6 до приблизительно 10% (масс./об.), от приблизительно 7 до приблизительно 10% (масс./об.), от приблизительно 7 до приблизительно 9% (масс./об.), от приблизительно 8 до приблизительно 9% (масс./об.) или приблизительно 8,5% (масс./об.) относительно общего раствора данной жидкой композиции, но конкретно этим не ограничивается.
Неионогенное поверхностно-активное вещество, которое является одним из компонентов, включенным в жидкую композицию, уменьшает поверхностное натяжение белкового раствора, тем самым предупреждая адсорбцию или агрегацию белка на гидрофобной поверхности, хотя и без конкретного ограничения.
Конкретные примеры неионогенного поверхностно-активного вещества, которое может быть использовано в настоящем изобретении, могут включать полисорбаты (например, полисорбат 20 (полиоксиэтилена (20) сорбитанмонолаурат), полисорбат 40 (полиоксиэтилена (20) сорбитанмонопальмитат), полисорбат 60 (полиоксиэтилена (20) сорбитанмоностеарат), полисорбат 80 (полиоксиэтилена (20) сорбитанмоноолеат); численное значение 20 после полиоксиэтиленовой группы означает общее количество оксиэтиленовых групп -(СН2СН2О)-), полоксамер (сополимер РЕО-РРО-РЕО; РЕО: поли(этиленоксид), РРО: поли(пропиленоксид)), полиэтилен-полипропиленгликоль, полиоксиэтиленовые соединения (например, полиоксиэтилен-стеарат, алкиловые эфиры полиоксиэтилена (алкил: С1-С30), моноаллиловый эфир полиоксиэтилена, сополимер алкилфенила и полиоксиэтилена (алкил: C1-С30) и так далее), додецилсульфат натрия (SDS) и так далее, или полисорбат или полоксамер. Они также могут быть использованы в отдельности или в виде комбинации двух или более из них.
В частности, неионогенное поверхностно-активное вещество может представлять собой полисорбат 80, полисорбат 60, полисорбат 40, полисорбат 20 или полоксамер 188, и они могут быть использованы в комбинации, без конкретного ограничения.
В настоящем изобретении предпочтительно, чтобы неионогенное поверхностно-активное вещество не содержалось в высокой концентрации, и в частности, оно может содержаться в концентрации от приблизительно 0,2% (масс./об.) или менее, например от приблизительно 0,001 до приблизительно 0,2% (масс./об.), от приблизительно 0,001 до приблизительно 0,1% (масс./об.), от приблизительно 0,001 до приблизительно 0,05% (масс./об.), от приблизительно 0,005 до приблизительно 0,08% (масс./об.), от приблизительно 0,002 до приблизительно 0,05% (масс./об.), от приблизительно 0,005 до приблизительно 0,05% (масс./об.), от приблизительно 0,01.) до приблизительно 0,05% (масс./об.), от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,04% (масс./об.), от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,03 или приблизительно 0,02% (масс./об.), однако концентрация не ограничивается этими конкретными значениями.
Аминокислота, представляющая собой тип стабилизатора в качестве необязательного компонента, который может быть добавлен к жидкой композиции, может представлять собой метионин, аргинин, глицин или их комбинацию, но не ограничивается этим. Кроме того, аминокислота может быть в L-форме, но конкретно этим не ограничивается.
Аминокислота может подавлять образование примесей, которые могут возникать вследствие реакции окисления белка, но без конкретного ограничения.
Аминокислота может присутствовать в композиции в концентрации от приблизительно 0,01 до приблизительно 1 мг/мл, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,8 мг/мл, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,5 мг/мл, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,5 мг/мл или от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,4 мг/мл, но без конкретного ограничения.
При этом жидкая композиция по настоящему изобретению, в дополнение к сахариду, буферному агенту и неионогенному поверхностно-активному веществу, которые являются существенными компонентами вышеупомянутой жидкой композиции; и аминокислоте, которая является необязательным компонентом, возможно может дополнительно включать другие компоненты или вещества, известные в данной области техники, в диапазоне, который не отражается негативным образом на эффектах настоящего изобретения, без ограничения.
Конъюгат пептида Химической Формулы 1 может присутствовать в фармацевтически эффективном количестве. Например, концентрация конъюгата пептида Химической Формулы 1 может составлять от приблизительно 18 до приблизительно 940 нмоль/мл, от приблизительно 18,7 до приблизительно 935 нмоль/мл, от приблизительно 18 до приблизительно 842 нмоль/мл, от приблизительно 18 до приблизительно 748 нмоль/мл, от приблизительно 18 до приблизительно 655 нмоль/мл, от приблизительно 18 до приблизительно 561 нмоль/мл, от приблизительно 18 до приблизительно 468 нмоль/мл, от приблизительно 18 до приблизительно 374 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 940 нмоль/мл, от приблизительно 93,5 до приблизительно 561 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 842 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 748 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 655 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 565 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 561 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 468 нмоль/мл, от приблизительно 150 до приблизительно 468 нмоль/мл, от приблизительно 200 до приблизительно 468 нмоль/мл, от приблизительно 250 до приблизительно 468 нмоль/мл, от приблизительно 274 до приблизительно 474 нмоль/мл, от приблизительно 280 до приблизительно 468 нмоль/мл, от приблизительно 300 до приблизительно 468 нмоль/мл, от приблизительно 300 до приблизительно 450 нмоль/мл, от приблизительно 320 до приблизительно 430 нмоль/мл, от приблизительно 320 до приблизительно 440 нмоль/мл, от приблизительно 340 до приблизительно 420 нмоль/мл, от приблизительно 340 до приблизительно 400 нмоль/мл, от приблизительно 350 до приблизительно 400 нмоль/мл, от приблизительно 360 до приблизительно 390 нмоль/мл, от приблизительно 365 до приблизительно 385 нмоль/мл, от приблизительно 370 до приблизительно 380 нмоль/мл, от приблизительно 93 до приблизительно 374 нмоль/мл или приблизительно 374 нмоль/мл, но без конкретного ограничения.
В данном описании термин «приблизительно» относится к диапазону, включающему все из ±0,5, ±0,4, ±0,3, ±0,2, ±0,1 и так далее, и включает все значения, которые являются эквивалентными или близкими значениям, указанным после этого термина, однако диапазон ими не ограничивается.
В одном воплощении жидкая композиция может включать конъюгат пептида Химической Формулы 1; буферный агент, выбранный из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации; сахарид, выбранный из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, галактозы, лактозы, мальтозы, сахарозы или их комбинации; и неионогенное поверхностно-активное вещество, выбранное из полоксамера, полисорбата и их комбинации, и значение рН жидкой композиции может составлять от 4,8 до 6,0.
В одном воплощении жидкая композиция может включать от 18 до 940 нмоль/мл конъюгата пептида Химической Формулы 1; от 5 до 100 мМ буферного агента, выбранного из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации, для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 6,0; от 1 до 20% (масс./об.) сахарида, выбранного из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, галактозы, лактозы, мальтозы, сахарозы или их комбинации; и от 0,001 до 0,2% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата и их комбинации.
В одном воплощении жидкая композиция может включать от 18 940 нмоль/мл конъюгата пептида Химической Формулы 1; от 5 до 100 мМ уксусной кислоты или ее соли для поддержания значения рН жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 6,0; от 1 до 20% (масс./об.) сахарозы; и от 0,001 до 0,2% (масс./об.) полисорбата, но без ограничения.
В одном воплощении жидкая композиция может представлять собой жидкую композицию, содержащую: от 93 до 565 нмоль/мл конъюгата пептида Химической Формулы 1, в которой Q, имеющий амидированный С-конец, присоединен через атом серы цистеина; от 5 до 25 мМ буферного агента, выбранного из лимонной кислоты и ее соли, уксусной кислоты и ее соли, гистидина и его соли, фосфорной кислоты и ее соли и их комбинации, так чтобы значение рН жидкой композиции составляло от 4,8 до 5,5; от 4 до 10% (масс./об.) сахарида; и от 0,01 до 0,1% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата или их комбинации, но без ограничения.
Жидкая композиция может иметь прозрачный вид при хранении в течение одной недели в условиях стресс-теста при температуре 40±2°С и относительной влажности 75±5%.
В одном воплощении жидкая композиция может иметь прозрачный вид при хранении в течение приблизительно 1 недели или более, приблизительно 2 недель или более, приблизительно 3 недель или более, приблизительно 4 недель или более в условиях стресс-теста 40±2°С и относительной влажности 75±5%.
В соответствии с воплощением настоящего изобретения было подтверждено, что жидкая композиция, состоящая из буферного агента, сахарида и неионогенного поверхностно-активного вещества, в дополнение к конъюгату пептида Химической Формулы 1, обладает высокой стабильностью вплоть до 6 месяцев в условиях ускоренных испытаний 25±2°С и относительной влажности 60±5% по сравнению с жидкой композицией, состоящей из буферного агента, сахарного спирта, аминокислоты и неионогенного поверхностно-активного вещества, и что жидкая композиция показала прозрачный вид при хранении в течение одной недели в условиях стресс-теста при 40±2°С и относительной влажности 75±5% и по-прежнему демонстрировала прозрачный вид даже через 4 недели (Таблицы 6-9).
Используемый в настоящем документе термин «ускоренное испытание» относится к тесту, предназначенному для усиления химического разложения или физического изменения лекарственного вещества или лекарственного препарата путем принятия некоторых чрезмерных условий хранения официального теста на стабильность лекарственного препарата. В дополнение к тесту на долговременную стабильность ускоренный тест оценивает химические эффекты в течение длительного периода времени в неускоренных условиях с использованием данных ускоренного теста и может оценивать эффекты, когда условия отклоняются от указанных условий хранения в течение короткого периода времени, например как ситуации, которые могут возникнуть во время транспортировки. Кроме того, он представляет собой тест, предназначенный для увеличения скорости химического разложения или физического изменения сырья или лекарственных средств в условиях избыточной температуры или влажности по сравнению с нормальными условиями хранения.
Используемый здесь термин «стресс-тест» относится к тесту, предназначенному для определения основных характеристик стабильности лекарственного средства. Он проводится во время разработки лекарств и проводится в более стрессовых условиях, чем ускоренные испытания, и помогает выявить ожидаемые продукты разложения и физические изменения лекарства.
Q конъюгата пептида Химической Формулы 1 может представлять собой пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1 (глюкагоноподобного пептида-1). «Пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1 (глюкагоноподобного пептида-1)» включает различные вещества, обладающие значительным уровнем активности в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, такие как различные пептиды.
Хотя конкретно не ограничивается этим, пептид, обладающий значительным уровнем активности в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, может быть использован взаимозаменяемо с «двойным агонистом рецепторов GCG/GLP-1», «двойным агонистом», «производным оксинтомодулина».
Более конкретно, пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, может представлять собой пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, включающий последовательность Общей Формулы 1 ниже:
[Общая Формула 1]
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Xaa12-Tyr-Leu-Asp-Xaa16-Lys-Arg-Ala-Xaa20-Glu-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Cys (SEQ ID NO: 1),
в Общей Формуле 1 выше,
Хаа2 представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту (Aib), Хаа12 представляет собой лизин (K), Хаа16 представляет собой глутаминовую кислоту (Е), Хаа20 представляет собой лизин (K); и
лактамное кольцо может или не может быть образовано между остатками Хаа12 и Хаа16 или Хаа16 и Хаа20.
В настоящем документе «Aib» может быть использовано взаимозаменяемо с «2-аминоизомасляной кислотой» или «аминоизомасляной кислотой», и 2-аминоизомасляная кислота и аминоизомасляная кислота могут быть использованы взаимозаменяемо друг с другом.
Пептид может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 3 или 4 или состоять (по существу) из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 3 или 4, но не ограничиваясь этим.
Кроме того, хотя в настоящем изобретении он описан как «пептид, состоящий из конкретной SEQ ID NO», в нем не исключена мутация, которая может возникнуть в результате добавления бессмысленной последовательности выше или ниже аминокислотной последовательности соответствующей SEQ ID NO, или мутация, которая может встречаться в природе, или ее молчащая мутация, при условии что пептид обладает активностью, такой же или соответствующей активности пептида, который состоит из аминокислотной последовательности соответствующей SEQ ID NO, и даже когда присутствует добавление последовательности или мутация, это очевидно входит в объем настоящего изобретения.
При этом, пептид может быть не встречающимся в природе.
С-конец пептида может быть амидированным пептидом или пептидом, имеющим свободную карбоксильную группу (-СООН), или может включать пептид, имеющий немодифицированный С-конец, но не ограничиваясь этим.
В одном воплощении Q может быть амидирован на С-конце, но не ограничивается этим.
В одном воплощении Q может быть негликозилированным, но не ограничивается этим.
Кроме того, пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, может включать внутримолекулярный мостик, например, ковалентный мостик или нековалентный мостик, и, в частности, может быть в форме, включающей кольцо. Кольцо может быть образовано между 12-й аминокислотой и 16-й аминокислотой или 16-й аминокислотой и 20-й аминокислотой, но конкретно не ограничивается этим. Неограничивающие примеры кольца могут включать лактамный мостик (или лактамное кольцо).
Кроме того, пептид по настоящему изобретению может включать все эти соединения в форме самого пептида, его соли (например фармацевтически приемлемой соли пептида) или его сольвата. Кроме того, пептид может быть в любой фармацевтически приемлемой форме.
Тип соли не ограничивается каким-либо конкретным. Однако, соль предпочтительно является безопасной и эффективной для субъекта (например млекопитающего), без конкретного ограничения.
Термин «фармацевтически приемлемый» относится к веществу, которое можно эффективно применять по целевому назначению в рамках медико-фармацевтического решения, не вызывая избыточной токсичности, раздражения или аллергических ответов и так далее.
В данном описании термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли, получаемой с фармацевтически приемлемыми неорганическими кислотами, органических кислот или оснований. Примеры подходящих солей могут включать соляную кислоту, бромноватую кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, перхлорную кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, фосфорную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, янтарную кислоту, толуол-пара-сульфоновую кислоту, винную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту и так далее. Примеры солей, получаемых с подходящими основаниями, могут включать щелочные металлы, такие как натрий, калий и так далее; щелочно-земельные металлы, такие как магний; аммоний и так далее.
В данном описании термин «сольват» относится к комплексу, образованному между пептидом по настоящему изобретению или его солью и молекулой растворителя.
Используемый здесь термин «конъюгат пептида Химической Формулы 1», являющийся активным ингредиентом, включенным в жидкую композицию по настоящему изобретению, может быть включен в жидкую композицию в фармакологически эффективном количестве. В частности, конъюгат находится в форме, в которой пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, и Fc-область иммуноглобулина связаны друг с другом посредством линкера и могут проявлять повышенную продолжительность эффективности по сравнению с пептидом, обладающим активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, с которым Fc-область иммуноглобулина не связана. В настоящем изобретении такой конъюгат упоминается как «конъюгат длительного действия». В настоящем изобретении конъюгат длительного действия используют взаимозаменяемо с «конъюгатом производного оксинтомодулина длительного действия» или «конъюгатом пептида».
При этом, конъюгат может быть не встречающимся в природе.
Кроме того, в конъюгате пептида Химической Формулы 1 связь между Q, пептидом, обладающим активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, и Fc-фрагментом иммуноглобулина может быть достигнута за счет физической или химической связи, нековалентной или ковалентной связи и, в частности, ковалентной связи, но не ограничиваясь этим.
Кроме того, в конъюгате пептида Химической Формулы 1 способ связывания Q, пептида, обладающего активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, и Fc-фрагмента иммуноглобулина конкретно не ограничен, но пептид, обладающий активностью в отношении рецептора глюкагона и рецептора GLP-1, и Fc-фрагмент иммуноглобулина могут быть связаны друг с другом через линкер.
В частности, конъюгат длительного действия, включенный в жидкую композицию по настоящему изобретению, может представлять собой конъюгат, представленный Химической Формулой 1 выше.
Способ получения конъюгата пептида описан в патенте Кореи №10-725315, и его полное описание включено в данное описание в качестве ссылки.
В данном документе термин «Fc-фрагмент иммуноглобулина» относится к константной области тяжелой цепи, не включающей вариабельные области тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина. В частности, Fc-фрагмент иммуноглобулина может включать части 2 константной области тяжелой цепи (СН2) и/или 3 константной области тяжелой цепи (СН3) и, более конкретно, может дополнительно включать шарнирную область (всю или часть шарнирной области).
Fc-фрагмент иммуноглобулина может представлять собой элемент, составляющий группировку конъюгата пептида Химической Формулы 1 по настоящему изобретению. В частности, он может соответствовать Z в Химической Формуле 1 выше.
Такой Fc-фрагмент иммуноглобулина может включать шарнирную область в константной области тяжелой цепи, без ограничения.
В настоящем изобретении Fc-фрагмент иммуноглобулина может включать определенную шарнирную последовательность на N-конце.
В данном описании термин «шарнирная последовательность» относится к области, которая расположена в тяжелой цепи и образует димер Fc-фрагментов иммуноглобулина благодаря межцепочечной дисульфидной связи.
В настоящем изобретении шарнирная последовательность может быть модифицирована таким образом, что имеется делеция части шарнирной последовательности, имеющей следующую аминокислотную последовательность, и поэтому в последовательности имеется только один остаток цистеина, без ограничения:
Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 6).
Шарнирная последовательность может быть такой, в которой имеется делеция 8-го или 11-го остатка цистеина в шарнирной последовательности SEQ ID NO: 6, и поэтому в последовательность включен только один остаток цистеина. Шарнирная последовательность по настоящему изобретению может состоять из 3-12 аминокислот, включая только один остаток цистеина, однако шарнирная последовательность не ограничивается указанной. Более конкретно, шарнирная последовательность по данному изобретению может иметь следующие последовательности: Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 7), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser-Pro (SEQ ID NO: 8), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser (SEQ ID NO: 9), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro (SEQ ID NO: 10), Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser (SEQ ID NO: 11), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys (SEQ ID NO: 12), Glu-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys (SEQ ID NO: 13), Glu-Ser-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 14), Glu-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 15), Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 16), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 17), Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 18), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 19), Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys (SEQ ID NO: 20), Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro (SEQ ID NO: 21), Glu-Ser-Lys-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 22), Glu-Ser-Pro-Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 23), Glu-Pro-Ser-Cys (SEQ ID NO: 24), Ser-Cys-Pro (SEQ ID NO: 25). Более конкретно, шарнирная последовательность может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 (Ser-Cys-Pro) или SEQ ID NO: 16 (Pro-Ser-Cys-Pro), без ограничения.
Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может находиться в форме, в которой две молекулы Fc цепи иммуноглобулина образуют димер благодаря наличию в них шарнирной последовательности и, кроме того, конъюгат пептида Химической Формулы 1 по настоящему изобретению может находиться в форме, в которой один конец линкера связан с одной цепью димеризованных Fc-фрагментов иммуноглобулина, однако Fc-фрагмент иммуноглобулина и конъюгат не ограничиваются указанными.
В данном описании термин «N-конец» относится к амино-концу белка или полипептида, и он может включать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более аминокислот от самого конца или самый конец амино-конца. Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может включать шарнирную последовательность на N-конце, без ограничения.
Кроме того, Fc-фрагмент по настоящему изобретению может представлять собой удлиненный Fc-фрагмент, который включает всю или часть 1 константной области тяжелой цепи (СН1) и/или 1 константной области легкой цепи (CL1), не включая вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи иммуноглобулина, при условии что он обладает по существу эквивалентным или улучшенным эффектом по сравнению с нативным типом. Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может представлять собой область, в которой удалена относительно большая часть аминокислотной последовательности, соответствующей СН2 и/или СН3.
Например, Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может представлять собой 1) СН1 домен, СН2 домен, СН3 домен и СН4 домен, 2) СН1 домен и СН2 домен, 3) СН1 домен и СН3 домен, 4) СН2 домен и СН3 домен, 5) комбинацию (1) одного, двух или более доменов из: СН1 домена, СН2 домена, СН3 домена и СН4 домена и (2) шарнирной области иммуноглобулина (или части шарнирной области) или 6) димер каждого домена константной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи, однако Fc-область не ограничивается перечисленными.
Кроме того, в одном воплощении Fc-фрагмент иммуноглобулина может иметь димерную форму, и одна молекула пептида Общей Формулы 1 может быть ковалентно присоединена к одной Fc-области в димерной форме, в частности, Fc иммуноглобулина и пептид Общей Формулы 1 могут быть ковалентно связаны друг с другом посредством линкера, содержащего повторяющееся звено этиленгликоля. При этом также возможно, что обе молекулы пептида Общей Формулы 1 симметрично присоединены к одной Fc-области в димерной форме. В частности, Fc иммуноглобулина и пептид Общей Формулы 1 могут быть связаны друг с другом посредством линкера, содержащего повторяющееся звено этиленгликоля, без ограничения воплощениями, описанными выше.
Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению включает нативные аминокислотные последовательности, а также производные этой последовательности. Производное аминокислотной последовательности означает, что последовательность отличается от нативной аминокислотной последовательности вследствие делеции, вставки, неконсервативной или консервативной замены одного или более чем одного аминокислотного остатка нативной аминокислотной последовательности или их комбинации.
Например, в качестве сайтов, подходящих для модификации, могут быть использованы аминокислотные остатки Fc IgG в положениях 214-238, 297-299, 318-322 или 327-331, которые, как известно, важны для связывания.
Кроме того, доступны различные типы производных, например, такое, в котором удален сайт, способный образовывать межцепочечную дисульфидную связь; такое в котором удалены несколько N-концевых аминокислот нативного Fc; такое, в котором к N-концу нативного Fc добавлен остаток метионина, и так далее. Кроме того, для устранения эффекторной функции могут быть удалены сайты связывания комплемента (например, сайты связывания Clq) или сайты антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC). Методики получения производных последовательности таких Fc-фрагментов иммуноглобулина изложены в международных публикациях WO 97/34631 и WO 96/32478 и других.
В данной области техники хорошо известны аминокислотные замены белка или пептида, которые не изменяют общую активность молекулы (Н. Neurath, R.L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). Наиболее часто встречающимися заменами являются замены аминокислотных остатков Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu и Asp/Gly. В некоторых случаях аминокислоты могут быть модифицированы путем фосфорилирования, сульфатирования, акрилирования, гликозилирования, метилирования, фарнезилирования, ацетилирования, амидирования и так далее.
Производные Fc, описанные выше, могут демонстрировать такую же биологическую активность, как и Fc-фрагмент по настоящему изобретению, и обладать повышенной структурной стабильностью Fc-фрагмента в отношении нагревания, рН и так далее.
Кроме того, Fc-фрагмент может быть получен из нативного типа, выделенного у человека или животных (например, коров, овец, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс, морских свинок и так далее), или может быть их рекомбинантными формами или производными, полученными из трансформированных клеток животных или микроорганизмов. В частности, Fc-область может быть получена из нативного иммуноглобулина путем выделения целого иммуноглобулина из организма живого человека или животного и обработки выделенного иммуноглобулина протеазой. Когда целый иммуноглобулин обрабатывают папаином, он расщепляется на фрагменты Fab и Fc, тогда как при обработке пепсином он расщепляется на фрагменты pF'c и F(ab)2. Fc или pF'c могут быть выделены при помощи эксклюзионной хроматографии и так далее. В более конкретном воплощении Fc-фрагмент может представлять собой Fc-фрагмент иммуноглобулина человека, где Fc-фрагмент человеческого происхождения получен из микроорганизма.
Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина может быть представлен формой с нативными гликанами, увеличением или уменьшением гликанов по сравнению с нативным типом или дегликозилированной формой. Увеличение, уменьшение или удаление гликанов Fc иммуноглобулина может быть достигнуто стандартными способами, такими как химический способ, ферментативный способ и генноинженерный способ с использованием микроорганизмов. В частности, Fc-фрагмент иммуноглобулина, у которого удалены гликаны Fc, демонстрирует существенное снижение аффинности связывания с комплементом (Clq) и снижение или потерю антитело-зависимой цитотоксичности или комплемент-зависимой цитотоксичности, и, следовательно, не вызывает ненужных иммунных ответов in vivo. В связи с этим, Fc-фрагмент иммуноглобулина в дегликозилированной или агликозилированной форме может быть более подходящим в качестве носителя лекарственного средства для решения исходной задачи настоящего изобретения.
В данном описании термин «дегликозилирование» относится к Fc-фрагменту, в котором гликаны удалены при помощи фермента, а термин «агликозилирование» относится к негликозилированному Fc-фрагменту, который продуцируется в прокариотах, более конкретно, в Е. coli.
При этом, Fc-фрагмент иммуноглобулина может иметь человеческое или животное происхождение (например, из коров, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс, морских свинок и так далее), и в более конкретных воплощениях он может иметь человеческое происхождение.
Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина может происходить из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM, или быть их комбинацией или гибридом. В более конкретном воплощении Fc-фрагмент иммуноглобулина может происходить из IgG или IgM, которые являются наиболее распространенными белками в крови человека и, в еще более конкретном воплощении он может происходить из IgG, что, как известно, увеличивает время полужизни лиганд-связывающих белков. В еще более конкретном воплощении Fc-фрагмент иммуноглобулина может представлять собой Fc-фрагмент IgG4, а в наиболее конкретном воплощении он может представлять собой агликозилированный Fc-фрагмент, происходящий из IgG4 человека, без ограничения.
Кроме того, в одном воплощении Fc-фрагмент иммуноглобулина, представляющий собой Fc-фрагмент человеческого IgG4, может находиться в форме гомодимера, в котором два мономера связаны друг с другом посредством межцепочечной дисульфидной связи (межцепочечная форма) между цистеинами, которые являются 3-ей аминокислотой каждого мономера. В частности, гомодимер может иметь две дисульфидные связи (межцепочечная форма), а именно внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами в положениях 35 и 95 в одном мономере и внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами в положениях 141 и 199 в другом мономере; и/или каждый мономер может состоять из 221 аминокислоты, и аминокислоты, образующие гомодимер, могут в сумме составлять 442 аминокислоты, однако количество аминокислот не ограничивается указанным. В частности, Fc-фрагмент иммуноглобулина может быть таким, в котором два мономера, имеющие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 (состоящую из 221 аминокислоты), образуют гомодимер благодаря межцепочечной дисульфидной связи между цистеинами, которые представляют собой 3-ю аминокислоту каждого мономера, и где мономеры гомодимера независимо образуют внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами в положениях 35 и 95 и внутреннюю дисульфидную связь между цистеинами в положениях 141 и 199, однако Fc-фрагмент иммуноглобулина не ограничивается указанным. В одном примере Fc-фрагмент иммуноглобулина может представлять собой гомодимер, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (состоящую из 442 аминокислот), без ограничения.
При этом, в данном документе термин «комбинация» означает, что полипептиды, кодирующие одноцепочечные Fc-фрагменты иммуноглобулинов одного происхождения, связаны с одноцепочечным полипептидом другого происхождения с образованием димера или мультимера.
Это означает, что димер или мультимер могут быть образованы из двух или более фрагментов, выбранных из группы, состоящей из IgG Fc-фрагмента, IgA Fc-фрагмента, IgM Fc-фрагмента, IgD Fc-фрагмента и IgE Fc-фрагмента.
В данном описании термин «гибрид» означает, что последовательности, соответствующие двум или более Fc-фрагментам различного происхождения, находятся в составе одной цепи константной области иммуноглобулина. В настоящем изобретении возможны различные формы гибридов. Например, гибридный домен может состоять из 1-4 доменов, выбранных из группы, состоящей из CH1, СН2, СН3 и СН4 Fc-области IgG, Fc-области IgM, Fc-области IgA, Fc-области IgE и Fc-области IgD, и может дополнительно включать шарнирную область.
При этом, IgG можно также подразделить на подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и настоящее изобретение может охватывать их комбинации или гибриды. Предпочтительными являются подклассы IgG2 и IgG4, а наиболее предпочтительным является Fc-фрагмент IgG4, который редко обладает эффекторными функциями, такими как комплемент-зависимая цитотоксичность (CDC).
В другом аспекте осуществления настоящего изобретения предложен способ получения жидкой композиции конъюгата пептида Химической Формулы 1, включающий: смешивание (а) конъюгата пептида Химической Формулы 1 с (б) 1) буферным агентом, 2) сахаридом и 3) неионогенным поверхностно-активным веществом.
Конъюгат, буферный агент, сахарид, неионогенное поверхностно-активное вещество и жидкая композиция являются такими, как описано выше.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения ожирения или диабета, включающей жидкую композицию.
Используемый здесь термин «предупреждение» относится ко всем действиям, которые ингибируют или задерживают развитие целевого заболевания. Используемый здесь термин «предупреждение» означает введение конъюгата по настоящему изобретению для ингибирования или замедления развития диабетических состояний, таких как аномальные уровни глюкозы в крови или аномальная секреция инсулина, или состояний ожирения, таких как увеличение массы тела или жировой массы тела.
Используемый здесь термин «лечение» относится ко всем действиям, которые облегчают, улучшают или ослабляют симптомы развившегося заболевания. Используемый здесь термин «лечение» означает введение конъюгата по настоящему изобретению для облегчения, улучшения или ослабления вышеуказанных диабетических состояний или состояний ожирения для нормализации уровней глюкозы в крови и секреции инсулина и снижения массы тела или жировой массы тела.
Используемый здесь термин «ожирение» относится к избыточному количеству жировой ткани в организме. Индекс массы тела (= вес (кг), деленный на рост (м)) 25 или более определяется как ожирение. Ожирение обычно возникает в результате энергетического дисбаланса, при котором потребление энергии превышает расход энергии с течением времени. Ожирение представляет собой метаболическое заболевание, которое поражает весь организм и с высокой вероятностью может привести к диабету и гиперлипидемии. Кроме того, ожирение связано с сексуальной дисфункцией, артритом и повышенным риском развития сердечно-сосудистых заболеваний, а также в некоторых случаях связано с развитием рака.
Используемый здесь термин «диабет» относится к виду метаболического заболевания, при котором секреция инсулина недостаточна или нормальные функции не выполняются. Диабет характеризуется гипергликемией, которая представляет собой повышенный уровень глюкозы в крови, что вызывает различные симптомы, и, таким образом, глюкоза выводится с мочой.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый» означает количество, достаточное для проявления терапевтических эффектов и не вызывающее побочных эффектов. Доза активного ингредиента фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть легко определена специалистами в данной области в зависимости от типа заболевания, возраста пациента, массы тела, состояния здоровья, пола и чувствительности к лекарственному средству, пути введения, способа введения, частоты введения, продолжительности лечения, лекарственных средств, применяемых в комбинации или совпадающих с данной композицией, и других факторов, известных в области медицины.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу предупреждения или лечения ожирения или диабета, включающему введение субъекту жидкой композиции.
Жидкая композиция, ожирение и диабет являются такими, как описано выше.
Используемый здесь термин «субъект» относится к субъекту с подозрением на ожирение или диабет и означает млекопитающих, включая людей, крыс и домашних животных, у которых имеется указанное выше заболевание или существует риск его развития. Однако субъектом может быть любой субъект, которого можно лечить жидкой композицией по настоящему изобретению.
Способ лечения по настоящему изобретению может включать введение фармацевтической композиции, включающей жидкую композицию в фармацевтически эффективном количестве. Соответствующая общая суточная доза может быть определена практикующим врачом в рамках правильного медицинского заключения и может быть введена один или несколько раз в разделенных дозах. Однако для целей настоящего изобретения предпочтительно, чтобы конкретная терапевтически эффективная доза для каждого конкретного пациента применялась по-разному в зависимости от вида и степени ответа, который должен быть достигнут, конкретных композиций, включая то, используются ли иногда с ними другие агенты, возраст пациента, масса тела, общее состояние здоровья, пол и диета, время введения, путь введения, скорость выведения композиции, продолжительность лечения, различные факторы, включая лекарственные средства, используемые в комбинации или одновременно с конкретными композициями, и подобные факторы, хорошо известные в области медицины.
Далее данное изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие Примеры. Однако, данные Примеры приведены исключительно в иллюстративных целях и не ограничивают объем изобретения.
Пример 1: Получение двойного агониста рецепторов GLP-1/глюкагона
Для измерения стабильности двойного агониста рецепторов GLP-1/глюкагона, который проявляет активность как в отношении рецептора GLP-1, так и в отношении рецептора глюкагона, в жидкой композиции по настоящему изобретению синтезировали двойные агонисты рецепторов GLP-1/глюкагона, имеющие следующие аминокислотные последовательности (Таблица 1). В настоящем изобретении двойной агонист рецепторов GLP-1/глюкагона можно использовать взаимозаменяемо с производным оксинтомодулина.
Аминокислоты, выделенные жирным шрифтом в Таблице 1, означают, что такие аминокислоты, выделенные жирным шрифтом, образуют кольцо друг с другом. Кроме того, Aib означает аминоизомасляную кислоту, которая является неприродной аминокислотой.
Пример 2: Получение монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина
Пример 2-1. Получение монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина
Для получения монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина, имеющего структуру, в которой один из двух N-концов Fc-фрагмента иммуноглобулина является пегилированным, Fc-область иммуноглобулина (49,8 кДа, гомодимер SEQ ID NO: 5), имеющую шарнирную область с последовательностью Pro-Ser-Cys-Pro на N-конце, подвергали взаимодействию с ПЭГ-линкером Химической Формулы 2 (среднечисленная молекулярная масса 10 кДа) в молярном соотношении (Fc-область иммуноглобулина : ПЭГ-линкер) 1:1 с концентрацией 50 г/л Fc-области иммуноглобулина при 6°С±4°С в течение приблизительно 4 часов.
[Химическая Формула 2]
В частности, реакцию проводили в композиции, включающей 5 мМ буфера Bis-Tris (рН 6,5) и фосфат калия, и к ней добавляли 10 мМ NaCNBH3 (цианоборгидрид натрия) в качестве восстановителя. Для получения монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина реакционный раствор разбавляли буфером Bis-Tris и очищали.
Здесь монопегилированный Fc-фрагмент иммуноглобулина очищали на колонке CaptoQ ImpRes (GE Healthcare, анионообменная хроматография) с использованием буфера, содержащего Bis-Tris, и градиента концентрации хлорида натрия.
Пример 2-2. Анализ структуры монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина
Монопегилированный Fc-фрагмент иммуноглобулина, полученный в Примере 2-1, структурно анализировали с помощью MALDI-TOF (время-пролетная ионизация лазерной десорбцией с использованием матрицы) и картирования пептидов. По результатам MALDI-TOF, полученный результат был идентичен ожидаемой молекулярной массе монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина, а в результате картирования пептидов было подтверждено, что более 90% ПЭГ было пегилировано на N-конце Fc-фрагмента иммуноглобулина.
При этом, в результате анализа Fc-фрагмента монопегилированного иммуноглобулина (Химическая Формула 3), полученного в Примере 2-1 выше, с использованием анализов SE-HPLC (эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография), RP-HPLC (обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография) и IE-HPLC (ионообменная высокоэффективная жидкостная хроматография), было подтверждено, что чистота составляет 90% или более в SE-HPLC, 90% или более в RP-HPLC и 80% или более в IE-HPLC.
[Химическая Формула 3]
Пример 3: Получение конъюгата путем связывания пегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина с производным оксинтомодулина
Конъюгат длительного действия получали, как описано ниже, путем связывания монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина, полученного в Примере 2-1, с производным оксинтомодулина SEQ ID NO: 3 (амидированное на С-конце), выбранным в качестве репрезентативного производного оксинтомодулина.
Монопегилированный Fc-фрагмент иммуноглобулина подвергали взаимодействию с производным оксинтомодулина посредством конъюгации пептидов без проведения ультрафильтрации/диафильтрации. В частности, конъюгат длительного действия (Fc-фрагмент иммуноглобулина ПЭГ-содержащий линкер производное оксинтомодулина) получали путем пептидной конъюгации производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 3), которое является двойным агонистом рецепторов GLP-1/глюкагона, после анионообменной хроматографии Примера 2-1 без проведения ультрафильтрации/диафильтрации. В настоящем изобретении термин «конъюгат длительного действия» может быть использован взаимозаменяемо с термином «конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия».
Здесь, чтобы связать реакционноспособную малеимидную группу на одном конце ПЭГ монопегилированного Fc-фрагмента иммуноглобулина с цистеином производного оксинтомодулина, монопегилированный Fc-фрагмент иммуноглобулина подвергали взаимодействию с производным оксинтомодулина в молярном соотношении 1:1 с концентрацией белка производного оксинтомодулина 0,2 г/л при 6±4°С в течение приблизительно 2 часов. В частности, реакционный раствор поддерживали в Tris-Cl-буфере (6±4°С), включающем изопропанол. В результате анализа продукта после реакции с использованием методов SE-HPLC, RP-HPLC и IE-HPLC было подтверждено, что чистота конъюгата Fc-фрагмент иммуноглобулина - ПЭГ-содержащий линкер - производное оксинтомодулина (Химическая Формула 4) составляет 90% или более в SE-HPLC, 80% или более в RP-HPLC и 80% или более в IE-HPLC.
После этого продукт реакции однократно подвергали гидрофобной хроматографии с использованием колонки Source 15ISO (GE Healthcare). В ходе этого процесса побочные продукты удалялись, и был получен конъюгат Fc-фрагмент иммуноглобулина ПЭГ-содержащий линкер производное оксинтомодулина. Здесь конъюгат очищали с использованием буфера, содержащего цитрат натрия, и градиента концентрации сульфата аммония.
Элюированный конъюгат Fc-фрагмент иммуноглобулина ПЭГ-содержащий линкер производное оксинтомодулина (Химическая Формула 4) анализировали методами MALDI-TOF, SE-HPLC, RP-HPLC и IE-HPLC. По результатам анализа MALDI-TOF было подтверждено, что полученный результат идентичен ожидаемой молекулярной массе конъюгата Fc-фрагмент иммуноглобулина ПЭГ-содержащий линкер производное оксинтомодулина. Кроме того, было подтверждено, что конъюгат был получен с высокой степенью чистоты: 90% или более по данным SE-HPLC, 90% или более по данным RP-HPLC и 90% или более по данным IE-HPLC.
[Химическая Формула 4]
Пример 4: Приготовление жидких композиций и оценка осмотического давления
Для подтверждения стабильности жидкой композиции, которая представляет собой вновь приготовленную композицию конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученную в Примере 3, в качестве сравнительного примера жидкий состав (Пример сравнения) композиции, раскрытой в международной публикации WO 2014-073842, и жидкий состав (Пример) новой композиции по настоящему изобретению готовили в соответствии с композициями, показанными в Таблице 2 ниже. Для композиции по Примеру, в качестве репрезентативных примеров буферного агента, сахарида и неионогенного поверхностно-активного вещества, которые представляют собой композицию стабилизатора по настоящему изобретению, были выбраны уксусная кислота и ее натриевая соль в качестве буферного агента, сахароза в качестве сахарида и полисорбат 20 в качестве неионогенного поверхностно-активного вещества.
Композиция по Примеру сравнения, который представляет собой традиционный состав, имела более высокое осмотическое давление, чем кровь, и в дополнение был приготовлен новый состав для дальнейшего повышения стабильности. Маннит был заменен на сахарозу при одновременном снижении рН традиционного состава для повышения стабильности. Соответственно, было подтверждено, что осмотическое давление также снижалось до уровня, аналогичного давлению крови, а присутствие или отсутствие добавки метионина не влияло на стабильность, и, таким образом, он был исключен в Примерах по настоящему изобретению. В результате измерения осмотического давления композиция по Примеру сравнения имела осмотическое давление 494 мОсм/кг, а композиция по Примеру имела осмотическое давление 305 мОсм/кг, что было на уровне, аналогичном осмотическому давлению крови (приблизительно 300 мОсм/кг).
Пример 5: Оценка долговременной стабильности жидкой композиции по Примеру
Для подтверждения долговременной стабильности жидкой лекарственной композиции (Пример) конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного в Примере 4, ее хранили при температуре 5±3°С в течение от 0 до 12 месяцев, а затем стабильность анализировали с использованием ионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографии (IE-HPLC), эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (SE-HPLC) и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (RP-HPLC). В Таблицах 3, 4 и 5 IE-HPLC (%), RP-HPLC (%) и SE-HPLC (%) указывают в каждой точке анализа % площади пика, соответствующего конъюгату производного оксинтомодулина длительного действия.
Как видно из приведенных выше результатов, было подтверждено, что состав жидкой композиции по настоящему изобретению обладает высокой стабильностью вплоть до 12 месяцев, и, таким образом, можно сделать вывод, что она является оптимальной композицией для длительного хранения.
Пример 6: Ускоренная оценка стабильности
Чтобы подтвердить стабильность в ускоренных испытаниях жидкой композиции по Примеру, приготовленной в Примере 4, и жидкой композиции по Примеру сравнения, указанные жидкие композиции хранили от 0 до 6 месяцев при 25±2°С и 60±5°С.% относительной влажности, а затем стабильность анализировали с помощью IE-HPLC, RP-HPLC и SE-HPLC. Ускоренный тест на стабильность представляет собой тест, предназначенный для ускорения химического разложения или физического изменения лекарственного вещества или лекарственного препарата за счет применения чрезмерных условий хранения. В дополнение к тесту на долговременную стабильность, ускоренный тест на стабильность оценивает химические эффекты в течение длительного периода времени в неускоренных условиях посредством ускоренной оценки стабильности и может оценивать эффекты, когда условия отклоняются от указанных условий хранения в течение короткого периода времени, например, ситуации, которые могут возникнуть во время транспортировки. В Таблицах 6, 7 и 8 IE-HPLC (%), RP-HPLC (%) и SE-HPLC (%) указывают в каждой точке анализа % площади пика, соответствующего конъюгату производного оксинтомодулина длительного действия.
Как видно из результатов Таблиц 6, 7 и 8, было подтверждено, что состав жидкой композиции, в котором отсутствовал сахарный спирт по настоящему изобретению и присутствовала сахароза, показал высокую стабильность в ускоренных условиях вплоть до 6 месяцев по сравнению с Примером сравнения. Эти результаты свидетельствуют о том, что состав жидкой композиции по настоящему изобретению обладает высокой стабильностью.
Пример 7: Оценка стабильности в стресс-тесте
Для подтверждения стабильности в стресс-тесте жидкой композиции (Пример) конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного в Примере 4, его хранили от 0 до 4 недель в условиях 40±2°С и 75±5% относительной влажности, и внешний вид анализировали отдельно от жидкой композиции по Примеру сравнения.
Стресс-тест представляет собой испытание, направленное на определение влияния изменения условий на продукт, когда продукт подвергается воздействию условий, отличных от применяемых условий хранения, а также на выявление картины разложения и физико-химической стабильности лекарственного вещества и/или лекарственного средства. В Таблице 9 показан внешний вид жидких композиций по Примеру сравнения и Примеру в стрессовых условиях.
Как видно из результатов в Таблице 9, в случае состава жидкой композиции по Примеру сравнения в стрессовых условиях, внешний вид конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия становился непрозрачным через 1 неделю, а осаждение происходило через 3 недели. Напротив, композиция по Примеру, которая представляет состав жидкой композиции по настоящему изобретению, в которой отсутствовал сахарный спирт и присутствовала сахароза в качестве сахарида, сохраняла прозрачный внешний вид даже до 4 недель, подтверждая, что конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия, являющийся целью для стабилизации, является стабильным без осаждения. Эти результаты свидетельствуют о том, что жидкая композиция по настоящему изобретению обладает более высокой стабильностью, чем известная композиция, и, таким образом, может быть предложена в виде жидкой лекарственной формы фармацевтических препаратов.
На основании вышеизложенного специалистам в области техники, к которой относится данное изобретение, будет понятно, что настоящее изобретение возможно осуществлять в других частных воплощениях без изменения технической концепции или существенных признаков данного изобретения. В этой связи, репрезентативные воплощения, изложенные в данном документе, служат исключительно в целях иллюстрации и не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения. Напротив, настоящее изобретение охватывает не только репрезентативные воплощения, но также и различные альтернативы, модификации, эквиваленты и другие воплощения, которые могут быть включены в сущность и объем настоящего изобретения, который определяется прилагаемой формулой изобретения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> HANMI PHARM. CO., LTD.
<120> Жидкая композиция
<130> OPA21220
<150> KR 10-2020-0061879
<151> 2020-05-22
<160> 26
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Формула 1 производного оксинтомодулина
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)
<223> Xaa представляет собой лизин
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)
<223> Xaa представляет собой глутаминовую кислоту
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)
<223> Xaa представляет собой лизин
<400> 1
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Xaa
1 5 10 15
Lys Arg Ala Xaa Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 2
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное оксинтомодулина
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту
<400> 2
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 3
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное оксинтомодулина
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(20)
<223> аминокислоты по положению 16 и положению 20 образуют кольцо
<400> 3
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 4
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> производное оксинтомодулина
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)
<223> Xaa представляет собой 2-аминоизомасляную кислоту
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(16)
<223> аминокислоты по положению 12 и положению 16 образуют кольцо
<400> 4
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 5
<211> 221
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 5
Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
1 5 10 15
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
20 25 30
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
50 55 60
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
65 70 75 80
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
85 90 95
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
100 105 110
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
115 120 125
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
145 150 155 160
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
165 170 175
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215 220
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 6
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 7
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 8
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Pro
1 5 10
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 9
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser
1 5 10
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 10
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 11
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser
1 5
<210> 12
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 12
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
1 5
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 13
Glu Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
1 5
<210> 14
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 14
Glu Ser Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 15
Glu Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 16
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 16
Pro Ser Cys Pro
1
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 17
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 18
Lys Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 19
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 20
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
1 5
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 21
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 22
Glu Ser Lys Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 23
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 23
Glu Ser Pro Ser Cys Pro
1 5
<210> 24
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 24
Glu Pro Ser Cys
1
<210> 25
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Вариант шарнирной области
<400> 25
Ser Cys Pro
1
<210> 26
<211> 442
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(442)
<223> Аминокислоты по положению с 1 по 442 образуют Fc-фрагмент
иммуноглобулина человека G4 (гомодимер)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(221)
<223> Аминокислоты по положению с 1 по 221 образуют один мономер
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (222)..(442)
<223> Аминокислоты по положению с 222 по 442 образуют один мономер
<220>
<221> DISULFID
<222> (3)..(224)
<223> Аминокислоты по положению 3 и положению 224 образуют
межцепочечную дисульфидную связь
<220>
<221> DISULFID
<222> (35)..(95)
<223> Аминокислоты по положению 35 и положению 95 образуют
межцепочечную дисульфидную связь
<220>
<221> DISULFID
<222> (141)..(199)
<223> Аминокислоты по положению 141 и положению 199 образуют
межцепочечную дисульфидную связь
<220>
<221> DISULFID
<222> (256)..(316)
<223> Аминокислоты по положению 256 и положению 316 образуют
межцепочечную дисульфидную связь
<220>
<221> DISULFID
<222> (362)..(420)
<223> Аминокислоты по положению 362 и положению 420 образуют
межцепочечную дисульфидную связь
<400> 26
Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
1 5 10 15
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
20 25 30
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
50 55 60
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
65 70 75 80
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
85 90 95
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
100 105 110
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
115 120 125
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
145 150 155 160
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
165 170 175
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Pro Ser Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
260 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320
Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
325 330 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu
340 345 350
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400
Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
405 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<---
Изобретение относится к медицине. Предложена жидкая композиция для стабилизации конъюгата пептида двойного агониста рецептора GLP-1(глюкагоноподобный пептид-1)/глюкагона длительного действия, содержащая от 18 до 940 нмоль/мл конъюгата пептида двойного агониста рецептора GLP-1/глюкагона длительного действия Химической Формулы 1; от 5 до 25 мМ уксусной кислоты и ее соли в количестве для поддержания значения pH жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 5,5; от 4 до 10% (масс./об.) сахарозы; и от 0,01 до 0,1% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата и их комбинации. Технический результат заявленного изобретения заключается в получении стабильной жидкой композиции, обеспечивающей хранение длительно действующего конъюгата пептида. 16 з.п. ф-лы, 9 табл., 7 пр.
1. Жидкая композиция для стабилизации конъюгата пептида двойного агониста рецептора GLP-1(глюкагоноподобный пептид-1)/глюкагона длительного действия, содержащая:
от 18 до 940 нмоль/мл конъюгата пептида двойного агониста рецептора GLP-1/глюкагона длительного действия Химической Формулы 1;
от 5 до 25 мМ уксусной кислоты и ее соли в количестве для поддержания значения pH жидкой композиции в диапазоне от 4,8 до 5,5;
от 4 до 10% (масс./об.) сахарозы; и
от 0,01 до 0,1% (масс./об.) неионогенного поверхностно-активного вещества, выбранного из полоксамера, полисорбата и их комбинации;
где Химическая Формула 1 имеет структуру
,
где Q представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 2, 3 или 4;
Z представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина; и
n представляет собой натуральное число, где значение n определено таким образом, чтобы средняя молекулярная масса области [OCH2CH2]n в конъюгате пептида составляла 10 кДа;
и где указанная жидкая композиция не содержит сахарный спирт.
2. Жидкая композиция по п. 1, где Q представлен аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3.
3. Жидкая композиция по п. 1, где Q амидирован по своему C-концу.
4. Жидкая композиция по п. 1, где Q присоединен через атом серы цистеина.
5. Жидкая композиция по п. 1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина имеет происхождение из IgG4.
6. Жидкая композиция по п. 1, где Z представляет собой структуру, в которой две полипептидные цепи связаны посредством дисульфидной связи и связаны только через атом азота в одной из двух цепей.
7. Жидкая композиция по любому из пп. 1-6, где Z представляет собой гомодимер, содержащий два мономера, где каждый мономер содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
8. Жидкая композиция по п. 7, где Z присоединен через атом азота пролина на N-конце одного из двух мономеров.
9. Жидкая композиция по п. 1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина и Q не гликозилированы.
10. Жидкая композиция по п. 1, где значение pH жидкой композиции составляет от 4,9 до 5,3.
11. Жидкая композиция по п. 10, где значение pH жидкой композиции составляет от 5,0 до 5,2.
12. Жидкая композиция по п. 1, где неионогенное поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из полоксамера 188, полисорбата 20, полисорбата 40, полисорбата 60, полисорбата 80 и их комбинации.
13. Жидкая композиция по п. 1, дополнительно содержащая стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из аргинина, глицина, метионина и их комбинации.
14. Жидкая композиция по п. 8, содержащая:
от 274 до 474 нмоль/мл конъюгата пептида двойного агониста рецептора GLP-1/глюкагона длительного действия Химической Формулы 1, в которой Q, имеющий амидированный С-конец, присоединен через атом серы цистеина;
от 5 до 25 мМ уксусной кислоты и ее соли в количестве для поддержания значения pH жидкой композиции в диапазоне от 4,9 до 5,3;
8,5% (масс./об.) сахарозы; и
0,02% (масс./об.) полисорбата 20.
15. Жидкая композиция по п. 14, имеющая прозрачный вид при хранении в течение одной недели в условиях стресс-теста при 40±2°C и относительной влажности 75±5%.
16. Жидкая композиция по п. 1, где конъюгат белка двойного агониста рецептора GLP-1/глюкагона длительного действия содержит формулу, показанную ниже,
,
где производное оксинтомодулина представлено аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 2, 3 или 4, и n представляет собой натуральное число, где значение n определено таким образом, чтобы средняя молекулярная масса области [OCH2CH2]n в конъюгате пептида составляла 10 кДа.
17. Жидкая композиция по п. 16, где Fc-область иммуноглобулина имеет происхождение из IgG4.
| US 2009186819 A1, 23.07.2009 | |||
| KR 20120139579 A, 27.12.2012 | |||
| KR 20140098607 A, 08.08.2014. |
