ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ДВУХНИТЕВУЮ РИБОНУКЛЕИНОВУЮ КИСЛОТУ, ПОДАВЛЯЮЩУЮ ЭКСПРЕССИЮ КОМПОНЕНТА КОМПЛЕМЕНТА C5 Российский патент 2025 года по МПК A61K31/713 A61K9/127 A61K47/28 A61K47/69 C12N15/113 A61P13/02 

[Область техники]

[0001] Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей двухнитевую рибонуклеиновую кислоту (dsRNA), способную подавлять экспрессию компонента комплемента C5. Более конкретно, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей липидный комплекс, содержащий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, способную подавлять экспрессию компонента комплемента С5, способу получения фармацевтической композиции и способу стабилизации фармацевтической композиции.

[Уровень техники]

[0002] Группа белков, называемая системой комплемента, включает белки, обозначенные как C1-C9, и эти белки последовательно активируются в трех различных путях (классический путь, лектиновый путь, альтернативный путь) с развитием иммунного ответа. Пятый компонент комплемента, C5, расщепляется на C5a и C5b под действием C5-конвертазы. C5a называется анафилатоксином и индуцирует воспалительный ответ в различных клетках посредством C5aR (CD88) и C5L2 (GPR77). C5b последовательно реагирует с C6-C9, в конечном итоге превращаясь в мембраноатакующий комплекс (MAC), который вызывает бактериолиз патогенов или клеточный лизис. Если система комплемента не контролируется надлежащим образом или чрезмерно активирована, то система комплемента может вызывать сильную цитотоксичность в отношении клеток-хозяев.

[0003] На основании предыдущих исследований известно, что компонент комплемента C5 ассоциирован с различными заболеваниями, включая пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH), атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS), тяжелую миастению (MG), оптиконевромиелит (NMO), опосредованное антителами отторжение при трансплантации почки, синдром Гийена-Барре, васкулит, ассоциированный с антителами к цитоплазме нейтрофилов (ANCA-ассоциированный васкулит), боковой амиотрофический склероз (ALS), болезнь Паркинсона (PD), аутоиммунный энцефалит, заболевания, связанные с IgG4, астму синдром антител к фосфолипидам, ишемически-реперфузионное повреждение, типичный гемолитико-уремический синдром (tHUS), мультифокальную моторную нейропатию (MMN), рассеянный склероз (MS), тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (TTP), самопроизвольный аборт, привычный выкидыш, черепно-мозговую травму, болезнь холодовых агглютининов, дерматомиозит, гемолитико-уремический синдром, ассоциированный с продуцирующей шигатоксин Escherichia coli (E. coli), дисфункцию трансплантата, инфаркт миокарда, сепсис, атеросклероз, септический шок, повреждение спинного мозга, псориаз, аутоиммунную гемолитическую анемию (AIHA), антифосфолипидный синдром (APS), миокардит, геморрагический васкулит, болезнь Такаясу и болезнь Кавасаки (артериит). Таким образом, ожидается, что ингибирование или подавление экспрессии компонента комплемента C5 приведет к успешному лечению этих заболеваний. В частности, предполагается, что ингибирование компонента комплемента C5 является эффективным для лечения или предупреждения пароксизмальной ночной гемоглобинурии (непатентный литературный источник 1), атипичного гемолитико-уремического синдрома (непатентный литературный источник 2), тяжелой миастении (непатентный литературный источник 3), оптиконевромиелита (непатентный литературный источник 4) и опосредованных антителами отторжений трансплантата почки (непатентный литературный источник 5).

[0004] Моноклональное антитело к C5, экулизумаб (Soliris (зарегистрированная торговая марка)), проявляет высокую аффинность к компоненту комплемента C5 и подавляет чрезмерную активацию системы комплемента за счет ингибирования расщепления C5 на C5a/C5b и сопутствующего образования мембраноатакующего комплекса. Следовательно, экулизумаб проявляет ингибирующий эффект в отношении гемолиза и, таким образом, известен как терапевтическое средство для применения при пароксизмальной ночной гемоглобинурии и атипичном гемолитико-уремическом синдроме. Кроме того, экулизумаб известен как терапевтическое средство для применения при генерализованной тяжелой миастении (gMG). Однако экулизумаб является очень дорогостоящим, и поэтому требуется разработка альтернативных средств, применимых для лечения и предупреждения заболеваний, опосредованных компонентом комплемента C5.

[0005] Примеры способов подавления экспрессии компонента комплемента C5 включают способы, в которых используется РНК-интерференция (также называемая далее в данном документе "RNAi"). Например, известно средство на основе двухнитевой рибонуклеиновой кислоты (dsRNA), которое индуцирует расщепление РНК-транскрипта гена компонента C5 посредством РНК-индуцированного комплекса сайленсинга (RISC) (патентный литературный источник 1).

[Список использованной литературы]

[Патентная литература]

[0006] [Патентный литературный источник 1] WO 2014/160129

[Непатентные литературные источники]

[0007] [Непатентный литературный источник 1] Непатентный литературный источник 1: Peter Hillmen et al., The New England Journal of Medicine 2004 Feb 5; 350(6): 552-559.

[Непатентный литературный источник 2] Legendre C.M. et al., The New England Journal of Medicine 2013 Jun 6; 368(23): 2169-2181.

[Непатентный литературный источник 3] Howard J.F. Jr et al., Muscle Nerve 2013 Jul; 48(1): 76-84.

[Непатентный литературный источник 4] Pittock S.J. et al., The Lancet Neurology 2013 Jun; 12(6): 554-562.

[Непатентный литературный источник 5] Stegall M.D. et al., American Journal of Transplantation 2011 Nov; 11(11): 2405-2413.

[Сущность изобретения]

[Техническая задача]

[0008] Целью настоящего изобретения является получение новой фармацевтической композиции, содержащей липидный комплекс, содержащий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, для подавления экспрессии компонента комплемента С5, способ получения фармацевтической композиции и способ стабилизации фармацевтической композиции.

[Решение задачи]

[0009] В настоящем изобретении предусмотрены, например, следующие пункты от <1> до <81>.

<1> Фармацевтическая композиция, содержащая

липидный комплекс,

где липидный комплекс содержит двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую комбинацию смысловой нити и антисмысловой нити,

комбинация смысловой нити и антисмысловой нити выбрана из группы, состоящей из смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 159, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 160, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 141, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 142, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 143, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 144, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 147, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 148, а также смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 153, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 154, и

pH раствора липидного комплекса составляет 5,0 или меньше или 7,5 или больше.

<2> Фармацевтическая композиция, содержащая

липидный комплекс,

где липидный комплекс содержит двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, и

pH раствора липидного комплекса составляет 5,0 или меньше или 7,5 или больше.

<3> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше.

<4> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 5,0 или меньше.

<5> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 2,0 или больше и 5,0 или меньше.

<6> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше.

<7> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше и 11,0 или меньше.

<8> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше и 10,0 или меньше.

<9> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше и 9,5 или меньше.

<10> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше и 9,0 или меньше.

<11> Фармацевтическая композиция согласно <1> или <2>, где рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше и 8,5 или меньше.

<12> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<11>, где средний размер частиц липидного комплекса составляет 100 нм или меньше.

<13> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<12>, где средний размер частиц липидного комплекса составляет 65 нм или больше и 100 нм или меньше.

<14> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<12>, где средний размер частиц липидного комплекса составляет 80 нм или больше и 100 нм или меньше.

<15> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<12>, где средний размер частиц липидного комплекса составляет 85 нм или больше и 100 нм или меньше.

<16> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 2 недель составляет 10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<17> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 2 недель составляет 8% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<18> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 2 недель составляет 5% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<19> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 1 месяца составляет 10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<20> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 1 месяца составляет 8% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<21> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 1 месяца составляет 5% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<22> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 3 месяцев составляет 10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<23> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 3 месяцев составляет 8% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<24> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<15>, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 3 месяцев составляет 5% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

<25> Фармацевтическая композиция согласно любому из <16>-<24>, где изменение среднего размера частиц представляет собой увеличение среднего размера частиц.

<26> Фармацевтическая композиция согласно любому из <16>-<25>, где условия хранения фармацевтической композиции представляют собой 2-8°С.

<27> Фармацевтическая композиция согласно любому из <16>-<25>, где условия хранения фармацевтической композиции представляют собой 25°С.

<28> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<27>, где липидный комплекс содержит

катионный липид и

по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина.

<29> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<28>, где липидный комплекс содержит катионный липид, нейтральный липид, модифицированный полиэтиленгликолем липид и стерин.

<30> Фармацевтическая композиция согласно <28> или <29>, где катионный липид выбран из группы, состоящей из 1-оксо-1-(ундекан-5-илокси)нонадекан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксононадекан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-оксо-1-(ундекан-5-илокси)гептадекан-8-ил-1-метилпиперидин 4-карбоксилата, 21-оксо-21-(ундекан-5-илокси)геникозан-10-ил-1-метилпиперидин 4-карбоксилата, 21-(октан-3-илокси)-21-оксогеникозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, (Z)-1-((2-бутилнон-3-ен-1-ил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-оксо-1-((3-пентилоктил)окси)икозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-((3,4-дипропилгептил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-((6-(бутилдисульфанил)-3-(3-(бутилдисульфанил)пропил)гексил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 2-бутилоктил-10-((4-(диметиламино)бутаноил)окси)икозаноата, 2-{9-[(2-бутилоктил)окси]-9-оксононил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 2-нонил-11-оксо-11-[(3-пентилоктил)окси]ундецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, бис(3-пентилоктил)-9-{[(1-метилпиперидин-4-карбонил)окси]метил}гептадекандиоата, ди[(Z)-2-нонен-1-ил]-9-{[(1-метилпиперидин-4-карбонил)окси]метил}гептадекандиоата, 1-(2-октилциклопропил)гептадекан-8-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, (3S)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилата и (3R)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилата.

<31> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<30>, где катионный липид выбран из группы, состоящей из 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксононадекан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, 1-(2-октилциклопропил)гептадекан-8-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, (3S)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилата и (3R)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилата.

<32> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<31>, где катионный липид представляет собой 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4- карбоксилат.

<33> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<32>, где нейтральный липид представляет собой фосфолипид или церамид.

<34> Фармацевтическая композиция согласно <33>, где фосфолипид выбран из группы, состоящей из DOPE, POPE, HSPC, SOPC, POPC, EPC, DMPC, DPPC, DSPC, DAPC, DBPC, DLPC, DOPC, DOPG, DPPG, DSPG, DOPS, DOPE-MAL и сфингомиелина.

<35> Фармацевтическая композиция согласно <33> или <34>, где фосфолипид выбран из группы, состоящей из DOPE, HSPC, DPPC, DSPC и DAPC.

<36> Фармацевтическая композиция согласно любому из <33>-<35>, где фосфолипид представляет собой DSPC.

<37> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<36>, где модифицированный полиэтиленгликолем липид выбран из группы, состоящей из PEG2000-DMG, PEG2000-DPG, PEG2000-DSG, PEG5000-DMG, PEG5000-DPG, PEG5000-DSG, PEG-cDMA, PEG-C-DOMG, PEG-DAG, PEG-DAA, PEG-фосфолипида, PEG-холестерина и PEG-церамида (Cer).

<38> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<37>, где модифицированный полиэтиленгликолем липид выбран из группы, состоящей из PEG2000-DMG, PEG2000-DPG, PEG2000-DSG, PEG-cDMA и PEG-C-DOMG.

<39> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<38>, где модифицированный полиэтиленгликолем липид представляет собой PEG2000-DMG.

<40> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<39>, где стерин выбран из группы, состоящей из холестерина, дигидрохолестерина, ланостерина, β-ситостерина, кампестерина, стигмастерина, брассикастерина, эргостерина, фукостерина и 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтил)карбамоил]холестерина (DC-Chol).

<41> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<40>, где стерин выбран из группы, состоящей из холестерина, дигидрохолестерина, ланостерина и β-ситостерина.

<42> Фармацевтическая композиция согласно любому из <28>-<41>, где стерин представляет собой холестерин.

<43> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<42>, где липидный комплекс содержит 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, DSPC, PEG2000-DMG и холестерин.

<44> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<43>, где мольное соотношение катионный липид/нейтральный липид/модифицированный полиэтиленгликолем липид/стерин в липидном комплексе составляет 30-90/0,1-20/0,01-10/0,1-70.

<45> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<43>, где мольное соотношение катионный липид/нейтральный липид/модифицированный полиэтиленгликолем липид/стерин в липидном комплексе составляет 40-70/3-15/0,1-3/15-60.

<46> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<43>, где мольное соотношение катионный липид/нейтральный липид/модифицированный полиэтиленгликолем липид/стерин в липидном комплексе составляет 60/10,5/1,5/28.

<47> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<46>, где липидный комплекс представляет собой липидную наночастицу (LNP).

<48> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<47>, где липидный комплекс инкапсулирует двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую комбинацию смысловой нити и антисмысловой нити.

<49> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<48>, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель.

<50> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<49> для лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии.

<51> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<49> для лечения атипичного гемолитико-уремического синдрома.

<52> Способ лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии, предусматривающий

введение фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<49> нуждающемуся в этом пациенту.

<53> Способ лечения атипичного гемолитико-уремического синдрома, предусматривающий

введение фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<49> нуждающемуся в этом пациенту.

<54> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<49> для применения в лечении пароксизмальной ночной гемоглобинурии.

<55> Фармацевтическая композиция согласно любому из <1>-<49> для применения в лечении атипичного гемолитико-уремического синдрома.

<56> Способ получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 5,0 или меньше или 7,5 или больше.

<57> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше.

<58> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 5,0 или меньше.

<59> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше.

<60> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше.

<61> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 11,0 или меньше.

<62> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 10,0 или меньше.

<63> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 9,5 или меньше.

<64> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 9,0 или меньше.

<65> Способ согласно <56> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 8,5 или меньше.

<66> Способ согласно любому из <56>-<65> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

смешивание органического растворителя, содержащего (I) катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, и водного раствора, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую комбинацию смысловой нити и антисмысловой нити, с получением смешанного раствора.

<67> Способ по <66> для получения фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, дополнительно предусматривающий

удаление органического растворителя из смешанного раствора.

<68> Способ стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий:

доведение pH раствора липидного комплекса до 5,0 или меньше или 7,5 или больше.

<69> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше.

<70> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 5,0 или меньше.

<71> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше.

<72> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше.

<73> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 11,0 или меньше.

<74> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 10,0 или меньше.

<75> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 9,5 или меньше.

<76> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 9,0 или меньше.

<77> Способ по <68> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 8,5 или меньше.

<78> Способ согласно любому из <68>-<77> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, предусматривающий

смешивание органического растворителя, содержащего (I) катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, и водного раствора, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую комбинацию смысловой нити и антисмысловой нити, с получением смешанного раствора.

<79> Способ по <78> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, дополнительно предусматривающий

удаление органического растворителя из смешанного раствора.

<80> Способ согласно любому из <68>-<79> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, где способ стабилизации фармацевтической композиции представляет собой способ подавления изменения среднего размера частиц липидного комплекса в фармацевтической композиции.

<81> Способ по <80> для стабилизации фармацевтической композиции согласно любому из <1>-<55>, где способ подавления изменения среднего размера частиц представляет собой способ подавления увеличения среднего размера частиц.

[Полезные эффекты изобретения]

[0010] В соответствии с настоящим изобретением может быть предусмотрена новая фармацевтическая композиция, содержащая двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, способную подавлять экспрессию компонента комплемента С5, способ получения фармацевтической композиции и способ стабилизации фармацевтической композиции.

[0011] Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может подавлять экспрессию компонента комплемента C5 с подавлением гемолиза и, следовательно, может применяться в качестве терапевтического средства при пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH) и атипичном гемолитико-уремическом синдроме (aHUS).

[Краткое описание графических материалов]

[0012]

[Фиг. 1]

На фиг. 1 показаны графики, представляющие результаты оценки остаточных уровней мРНК компонента C5 в печени после введения siRNA-008 и остаточных уровней мРНК компонента C5 в печени после введения siRNA-008-34 в примере 5.

[Фиг. 2]

На фиг. 2 показаны графики, представляющие результаты оценки остаточных уровней компонента C5 в плазме крови после введения siRNA-008 и остаточных уровней компонента C5 в плазме крови после введения siRNA-008-34 в примере 5.

[Фиг. 3]

На фиг. 3 показан график, представляющий результаты оценки активности системы комплемента после введения siRNA-008-34 в примере 8.

[Фиг. 4]

На фиг. 4 показан график, представляющий результаты оценки активности системы комплемента после введения siRNA-008-34 в примере 9.

[Фиг. 5]

На фиг. 5 показан график, представляющий результаты оценки активности системы комплемента после введения siRNA-008-34 в примере 10.

[Фиг. 6]

На фиг. 6 показан график, представляющий результаты оценки активности системы комплемента после введения siRNA-008-34 в примере 11.

[Описание вариантов осуществления]

[0013] Примеры генов, кодирующих компонент комплемента C5, на которые нацеливается двухнитевая рибонуклеиновая кислота по варианту осуществления, включают без ограничения гены компонента C5, полученные от человека, мышей и обезьян. Информация о последовательностях гена компонента C5 находится в общедоступных базах данных, включая информацию о последовательностях, занесенную в реестр, такой как GenBank, предоставляемый Национальным центром биотехнологической информации (NCBI), или она может быть получена путем разработки праймера на основе информации о нуклеотидной последовательности гена компонента C5 от близкородственного вида животных, а затем его клонирования с РНК, выделенной из требуемого вида животных. Примеры последовательности мРНК-транскрипта, соответствующего гену-мишени компонента C5 человека, включают последовательность мРНК-транскрипта компонента C5 человека, внесенную в реестр под № доступа в GenBank NM_001735.2 (GI: 38016946). Термин "ген компонента C5" в данном документе не ограничивается геном, имеющим конкретную последовательность. Например, встречающиеся в природе гены компонента C5 с однонуклеотидным полиморфизмом также могут попадать под определение данного термина.

[0014] В варианте осуществления двухнитевой рибонуклеиновой кислоты, содержащей смысловую нить и антисмысловую нить, комбинация смысловой нити и антисмысловой нити выбрана из группы, состоящей из смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 13, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 14, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 159, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 160, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 115, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 116, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 117, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 118, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 119, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 120, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 121, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 122, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 123, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 124, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 125, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 126, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 127, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 128, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 129, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 130, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 131, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 132, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 133, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 134, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 137, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 138, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 139, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 140, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 141, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 142, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 143, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 144, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 147, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 148, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 149, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 150, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 151, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 152, а также смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 153, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 154. Данные комбинации соответствуют последовательностям siRNA-008, siRNA-008-01, siRNA-008-02, siRNA-008-08, siRNA-008-09, siRNA-008-10, siRNA-008-11, siRNA-008-12, siRNA-008-13, siRNA-008-14, siRNA-008-22, siRNA-008-23, siRNA-008-30, siRNA-008-31, siRNA-008-32, siRNA-008-33, siRNA-008-34, siRNA-008-35, siRNA-008-36, siRNA-008-37 и siRNA-008-38 соответственно в настоящем описании.

[0015] В варианте осуществления двухнитевой рибонуклеиновой кислоты смысловая нить и антисмысловая нить образуют пару в виде любой из комбинаций (1) - (21):

(1) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 13, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 14;

(2) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 159, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 160;

(3) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 115, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 116;

(4) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 117, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 118;

(5) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 119, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 120;

(6) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 121, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 122;

(7) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 123, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 124;

(8) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 125, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 126;

(9) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 127, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 128;

(10) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 129, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 130;

(11) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 131, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 132;

(12) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 133, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 134;

(13) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 137, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 138;

(14) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 139, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 140;

(15) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 141, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 142;

(16) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 143, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 144;

(17) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146;

(18) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 147, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 148;

(19) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 149, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 150;

(20) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 151, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 152;

(21) смысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 153, и антисмысловая нить, состоящая из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 154.

[0016] Каждая из комбинаций (1) - (21) смысловой нити и антисмысловой нити включает участок комплементарности нитей друг другу. Например, двухнитевая рибонуклеиновая кислота, включающая комбинацию (1) смысловой нити, представленной под SEQ ID NO: 13 и антисмысловой нити, представленной под SEQ ID NO: 14, включает следующие комплементарные нити (пара dT^dT на 3'-конце не показана, более подробную информацию см. в табл. 1):

5'-uGGuAuAuGuGuuGcuGAu-3' (SEQ ID NO: 13)

3'-AcCAuAuAcAcAAcGAcUA-5' (SEQ ID NO: 14).

[0017] В варианте осуществления двухнитевой рибонуклеиновой кислоты, содержащей смысловую нить и антисмысловую нить, комбинация смысловой нити и антисмысловой нити выбрана из группы, состоящей из смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 159, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 160, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 139, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 140, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 141, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 142, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 143, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 144, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 147, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 148, а также смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 153, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 154. Комбинации соответствуют последовательностям siRNA-008-01, siRNA-008-31, siRNA-008-32, siRNA-008-33, siRNA-008-34, siRNA-008-35 и siRNA-008-38 соответственно в настоящем описании.

[0018] В варианте осуществления двухнитевой рибонуклеиновой кислоты, содержащей смысловую нить и антисмысловую нить, комбинация смысловой нити и антисмысловой нити выбрана из группы, состоящей из смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 159, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 160, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 141, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 142, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 143, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 144, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 147, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 148, а также смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 153, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 154. Комбинации соответствуют последовательностям siRNA-008-01, siRNA-008-32, siRNA-008-33, siRNA-008-34, siRNA-008-35 и siRNA-008-38 соответственно в настоящем описании.

[0019] В варианте осуществления двухнитевой рибонуклеиновой кислоты, содержащей смысловую нить и антисмысловую нить, комбинация смысловой нити и антисмысловой нити выбрана из группы, состоящей из смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 141, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 142, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 143, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 144, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 147, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 148, а также смысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 153, и антисмысловой нити, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 154. Комбинации соответствуют последовательностям siRNA-008-32, siRNA-008-33, siRNA-008-34, siRNA-008-35 и siRNA-008-38 соответственно в настоящем описании.

[0020] В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота, содержащая смысловую нить и антисмысловую нить, содержит смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 159, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 160. Комбинация соответствует последовательности siRNA-008-01 в настоящем описании.

[0021] В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота, содержащая смысловую нить и антисмысловую нить, содержит смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 141, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 142. Комбинация соответствует последовательности siRNA-008-32 в настоящем описании.

[0022] В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота, содержащая смысловую нить и антисмысловую нить, содержит смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 143, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 144. Комбинация соответствует последовательности siRNA-008-33 в настоящем описании.

[0023] В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота, содержащая смысловую нить и антисмысловую нить, содержит смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146. Комбинация соответствует последовательности siRNA-008-34 в настоящем описании.

[0024] В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота, содержащая смысловую нить и антисмысловую нить, содержит смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 147, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 148. Комбинация соответствует последовательности siRNA-008-35 в настоящем описании.

[0025] В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота, содержащая смысловую нить и антисмысловую нить, содержит смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 153, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 154. Комбинация соответствует последовательности siRNA-008-38 в настоящем описании.

[0026] В варианте осуществления антисмысловая нить по существу комплементарна по меньшей мере части мРНК-транскрипта гена компонента C5. В данном документе фраза "по существу комплементарна" включает не только случаи, когда антисмысловая нить полностью комплементарна части мРНК-транскрипта гена компонента C5, но также случаи, когда существует от одной до нескольких приемлемых ошибок спаривания между антисмысловой нитью и частью мРНК-транскрипта гена компонента C5.

[0027] В варианте осуществления смысловая нить по существу комплементарна по меньшей мере части нуклеотидной последовательности антисмысловой нити. Фраза "по существу комплементарна" включает не только случаи, когда смысловая нить полностью комплементарна части нуклеотидной последовательности антисмысловой нити, но также случаи, когда существует от одной до нескольких приемлемых ошибок спаривания между смысловой нитью и частью нуклеотидной последовательности антисмысловой нити. Фраза "полностью комплементарный" может применяться к случаям, когда олигонуклеотид более длинной смысловой нити и антисмысловой нити включает нуклеотидную последовательность, полностью комплементарную олигонуклеотиду более короткой нити.

[0028] В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота также включает модифицированный нуклеотид, как описано ниже (см. также табл. 1). Следовательно подразумевается, что используемый в данном документе термин "нуклеотид" относится не только к гуанозин-3'-фосфату, цитидин-3'-фосфату, аденозин-3'-фосфату и уридин-3'-фосфату, но также охватывает различные модифицированные нуклеотиды.

[0029] Термин "двухнитевая рибонуклеиновая кислота" или "dsRNA" в данном документе относится к молекуле рибонуклеиновой кислоты (РНК), имеющей двухнитевую структуру, включающую два антипараллельных, по существу комплементарных олигонуклеотида или их комплекс. Примеры двухнитевых рибонуклеиновых кислот в данном документе включают без ограничения siRNA (малые интерферирующие РНК). В варианте осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота содержит смысловую нить и антисмысловую нить. За счет RNAi с использованием двухнитевой рибонуклеиновой кислоты по варианту осуществления мРНК гена компонента C5 расщепляется в качестве молекулы мРНК-мишени в комплексе RISC, и в результате этого экспрессия компонента C5 подавляется. Например, подавляется экспрессия компонента C5 в клетках субъекта.

[0030] Двухнитевая рибонуклеиновая кислота по варианту осуществления может быть синтезирована, например, с использованием способа химического синтеза, известного в данной области техники (например, описанного в Nucleic Acid Research, 35(10), 3287-96 (2007)), и транскрипции под действием ферментов.

[0031] Двухнитевая рибонуклеиновая кислота по варианту осуществления включает различные модификации. Модификацию можно выполнять с использованием способа, известного в данной области техники. Примеры модификации включают модификацию сахара.

[0032] Примеры модификации сахара включают модификацию рибозного фрагмента, составляющего рибонуклеозид, в частности, замещение или добавление гидроксигруппы в 2'-положении, более конкретно, 2'-O-метил-модифицированный нуклеотид, в котором гидроксигруппа была замещена метоксигруппой. Нуклеотиды, представленные строчными буквами a, u, g и c в табл. 1, представляют собой 2'-O-метил-модифицированные нуклеотиды, и каждая из смысловой нити и антисмысловой нити двухнитевой рибонуклеиновой кислоты по варианту осуществления включает 2'-O-метил-модифицированный нуклеотид.

[0033] Двухнитевая рибонуклеиновая кислота может быть модифицирована путем вставки дополнительного нуклеотида или производного нуклеотида, который называется выступающим концом, на 3'-стороне или 5'-стороне от участка, где смысловая нить и антисмысловая нить образуют двойную нить. Двухнитевая рибонуклеиновая кислота по варианту осуществления включает смысловую нить и/или антисмысловую нить, включающие дезокситимидин (dT) на 3'-конце SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14, и смысловую нить и антисмысловую нить, включающие инвертированный дезокситимидин (idT), как в SEQ ID NO: 129. Двухнитевая рибонуклеиновая кислота по варианту осуществления также включает смысловую нить и/или антисмысловую нить, включающие U, A и т. д., добавленные в качестве последовательности выступающего конца, например, которая включает UUUU, добавленные на 3'-конце антисмысловой нити, как в SEQ ID NO: 140 и 142.

[0034] В качестве альтернативы двухнитевая рибонуклеиновая кислота может иметь модифицированный остов за счет модификации или замещения фосфодиэфирной связи. Примеры модификации или замещения фосфодиэфирной связи включают фосфотиоатную связь. Двухнитевая рибонуклеиновая кислота по варианту осуществления также включает двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, включающую соседние нуклеотиды, соединенные фосфотиоатной связью, как в SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 121.

[0035] (Липидный комплекс)

Фармацевтическая композиция по варианту осуществления настоящего изобретения содержит липидный комплекс, содержащий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту. В варианте осуществления липидный комплекс содержит (I) указанную выше двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, (II) катионный липид и (III) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида (PEG-липида) и стерина. Примеры липидного комплекса в данном документе включают без ограничения LNP (липидные наночастицы). В конкретном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит липидный комплекс, инкапсулирующий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту. Фармацевтическая композиция по другому варианту осуществления содержит липидную наночастицу, содержащую двухнитевую рибонуклеиновую кислоту.

[0036] Примеры формы липидного комплекса, образованного липидом, содержащим катионный липид, и двухнитевой рибонуклеиновой кислотой, включают комплекс двухнитевой рибонуклеиновой кислоты и мембраны, состоящей из липидного монослоя (один тип молекул) (обращенная мицелла); комплекс двухнитевой рибонуклеиновой кислоты и липосомы; а также комплекс двухнитевой рибонуклеиновой кислоты и мицеллы. В липидном комплексе по варианту осуществления настоящего изобретения двухнитевая рибонуклеиновая кислота инкапсулирована в мелкодисперсной частице, содержащей липид, содержащий катионный липид.

[0037] В варианте осуществления липидный комплекс содержит двухнитевую рибонуклеиновую кислоту в количестве, составляющем, например, от 0,01 до 50% по весу, от 0,1 до 30% по весу или от 1 до 10% по весу от общего веса липидного комплекса.

[0038] Катионный липид представляет собой амфифильную молекулу с липофильным участком, включающим одну или несколько углеводородных групп, и гидрофильным участком, включающим полярную группу, которая подвергается протонированию при определенном pH. Примеры катионного липида по варианту осуществления включают без конкретного ограничения катионные липиды, описанные в публикациях международных заявок №№ WO 2015/105131, WO 2016/104580 и WO 2017/222016, и в качестве альтернативы можно применять катионный липид с улучшенной биоразлагаемостью, описанный в публикации международной заявки № WO 2016/104580 или WO 2017/222016. Примеры катионного липида по варианту осуществления включают 1-оксо-1-(ундекан-5-илокси)нонадекан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксононадекан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-оксо-1-(ундекан-5-илокси)гептадекан-8-ил-1-метилпиперидин 4-карбоксилат, 21-оксо-21-(ундекан-5-илокси)генэйкозан-10-ил-1-метилпиперидин4-карбоксилат, 21-(октан-3-илокси)-21-оксогенэйкозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, (Z)-1-((2-бутилнон-3-ен-1-ил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-оксо-1-((3-пентилоктил)окси)икозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-((3,4-дипропилгептил)окси)-1-оксокозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-((6-(бутилдисульфанил)-3-(3-(бутилдисульфанил)пропил)гексил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 2-бутилоктил-10-((4-(диметиламино)бутаноил)окси)икозаноат, 2-{9-[(2-бутилоктил)окси]-9-оксононил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 2-нонил-11-оксо-11-[(3-пентилоктил)окси]ундецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, бис(3-пентилоктил)-9-{[(1-метилпиперидин-4-карбонил)окси]метил}гептадекандиоат, ди[(Z)-2-нонен-1-ил]-9-{[(1-метилпиперидин-4-карбонил)окси]метил}гептадекандиоат, 1-(2-октилциклопропил)гептадекан-8-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, (3S)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилат и (3R)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилат. В одном варианте осуществления катионный липид представляет собой 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксоикозан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-((2-бутилоктил)окси)-1-оксононадекан-10-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, 1-(2-октилциклопропил)гептадекан-8-ил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, (3S)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилат или (3R)-2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпирролидин-3-карбоксилат. В конкретном варианте осуществления катионный липид представляет собой 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат.

[0039] В варианте осуществления липидный комплекс содержит вышеописанный катионный липид в количестве, составляющем, например, от 10 до 100 мол. %, от 20 до 90 мол. %, от 30 до 90 мол. %, или от 40 до 70 мол. % из расчета общего количества липидов, содержащихся в липидном комплексе. Можно применять один катионный липид отдельно, а также можно применять смесь двух или более катионных липидов.

[0040] В качестве липидного компонента липидный комплекс по варианту осуществления содержит: (I) вышеописанный катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина. Липидный комплекс по варианту осуществления содержит липидный компонент в количестве, составляющем, например, от 50 до 99,99% по весу, от 70 до 99,9% по весу или от 90 до 99% по весу от общего веса липидного комплекса.

[0041] Термин "нейтральный липид" относится к липиду, присутствующему при физиологическом pH либо в незаряженной форме, либо в виде нейтрального цвиттер-иона. Примеры нейтрального липида по варианту осуществления настоящего изобретения включают фосфолипид и церамид. Примеры фосфолипида по варианту осуществления настоящему изобретению включают DOPE (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), POPE (1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), HSPC (гидрогенизированный фосфатидилхолин сои), SOPC (1-стеароил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), POPC (1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), EPC (яичный фосфатидилхолин), DMPC (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DPPC (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DSPC (1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DAPC (1,2-диарахидоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DBPC (1,2-дибегеноил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DLPC (1,2-дилауроил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DOPC (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DOPG (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DPPG (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DSPG (1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DOPS (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфо-L-серин), DOPE-MAL (N-(3-малеимид-1-оксопропил)-L-α-фосфатидилэтаноламин, диолеоил) и сфингомиелин. В варианте осуществления нейтральный липид представляет собой DOPE, HSPC, DPPC, DSPC или DAPC. В конкретном варианте осуществления нейтральный липид представляет DSPC. Можно применять один нейтральный липид отдельно, а также можно применять смесь двух или более нейтральных липидов.

[0042] В варианте осуществления липидный комплекс может содержать нейтральный липид в количестве, составляющем, например, от 0 до 50 мол. %, от 0 до 40 мол. %, от 0 до 30 мол. % или от 0 до 20 мол. % из расчета общего количества липидов, содержащихся в липидном комплексе. В другом варианте осуществления липидный комплекс может содержать нейтральный липид в количестве, составляющем, например, от 0,1 до 20 мол. %, или от 3 до 15 мол. % из расчета общего количества липидов, содержащихся в липидном комплексе.

[0043] Модифицированный полиэтиленгликолем липид (PEG-липид), относится к липиду, имеющему группу полиэтиленгликоля. В варианте осуществления примеры модифицированного полиэтиленгликолем липида (PEG-липида) включают PEG2000-DMG, PEG2000-DPG, PEG2000-DSG, PEG5000-DMG, PEG5000-DPG, PEG5000-DSG, PEG-cDMA, PEG-C-DOMG, PEG-DAG, PEG-DAA, PEG-фосфолипид, PEG-холестерин и PEG-церамид (Cer). Примеры PEG2000-DMG, PEG2000-DPG, PEG2000-DSG, PEG-cDMA и PEG-C-DOMG. В конкретном варианте осуществления модифицированный полиэтиленгликолем липид представляет собой PEG2000-DMG. PEG в настоящем описании также включает метокси-PEG (MPEG). В частности, например, MPEG2000-DMG включен в PEG2000-DMG, и MPEG2000-DPG также включен в PEG2000-DPG. Можно применять один модифицированный полиэтиленгликолем липид отдельно, а также можно применять смесь двух или более модифицированных полиэтиленгликолем липидов.

[0044] В варианте осуществления липидный комплекс может содержать модифицированный полиэтиленгликолем липид в количестве, составляющем, например, от 0 до 30 мол. %, от 0 до 20 мол. %, от 0 до 10 мол. % или от 0,5 до 2 мол. % из расчета общего количества липидов, содержащихся в липидном комплексе. В другом варианте осуществления липидный комплекс может содержать модифицированный полиэтиленгликолем липид в количестве, составляющем, например, от 0,01 до 10 мол. %, или от 0,1 до 3 мол. % из расчета общего количества липидов, содержащихся в липидном комплексе.

[0045] Стерин представляет собой спирт, имеющий стероидный остов. Примеры стерина по варианту осуществления включают холестерин, дигидрохолестерин, ланостерин, β-ситостерин, кампестерин, стигмастерин, брассикастерин, эргостерин, фукостерин и 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтил)карбамоил]холестерин (DC-Chol). В одном варианте осуществления стерин представляет собой холестерин, дигидрохолестерин, ланостерин или β-ситостерин. В конкретном варианте осуществления стерин представляет собой холестерин. Можно применять один стерин отдельно, а также можно применять смесь двух или более стеринов.

[0046] В варианте осуществления липидный комплекс может содержать стерин в количестве, составляющем, например, от 0 до 90 мол. %, от 10 до 80 мол. % или от 20 до 40 мол. % из расчета общего количества липидов, содержащихся в липидном комплексе. В другом варианте осуществления липидный комплекс может содержать стерин в количестве, составляющем, например, от 0,1 до 70 мол. %, или от 15 до 60 мол. % из расчета общего количества липидов, содержащихся в липидном комплексе.

[0047] В варианте осуществления комбинация липидных компонентов в липидном комплексе не ограничивается конкретным образом, и ее примеры включают комбинацию вышеописанных катионного липида, нейтрального липида и стерина и комбинацию вышеописанных катионного липида, нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина.

[0048] В одном варианте осуществления липидный комплекс содержит катионный липид, нейтральный липид, модифицированный полиэтиленгликолем липид и стерин. Катионный липид необходим для инкапсулирования нуклеиновой кислоты или эффективной доставки нуклеиновой кислоты к клеткам-мишеням, и сообщалось, что модифицированный полиэтиленгликолем липид необходим для предотвращения агрегации частиц (Molecular Therapy-Nucleic Acids (2012)1, e37). Более того, сообщалось, что сосуществование четырех липидов: нейтрального липида и стерина в дополнение к двум указанным липидам имеет решающее значение для инкапсулирования нуклеиновой кислоты с образованием стабильных частиц (Nanoscale. 2019 Nov 21; 11(45): 21733-21739.).

[0049] В варианте осуществления липидный комплекс может представлять собой липидный комплекс, содержащий, например, 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат и по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из DSPC, PEG2000-DMG и холестерина, или липидный комплекс, содержащий 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат, DSPC, PEG2000-DMG и холестерин.

[0050] В варианте осуществления липидный комплекс, инкапсулирующий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержит липидные компоненты, представляющие собой катионный липид/нейтральный липид/модифицированный полиэтиленгликолем липид/стерин, и при этом мольное соотношение липидов может составлять, например, от 10-99/0-50/0-10/0-50, 10-99/1-50/0,5-10/10-50, 40-70/1-20/0,5-2/20-40 или 40-70/0-20/0,5-2/20-40. В варианте осуществления мольное соотношение катионный липид/нейтральный липид/модифицированный полиэтиленгликолем липид/стерин в липидном комплексе составляет 30-90/0,1-20/0,01-10/0,1-70. В другом варианте осуществления мольное соотношение катионный липид/нейтральный липид/модифицированный полиэтиленгликолем липид/стерин в липидном комплексе составляет 40-70/3-15/0,1-3/15-60. В конкретном варианте осуществления мольное соотношение катионный липид/нейтральный липид/модифицированный полиэтиленгликолем липид/стерин в липидном комплексе составляет 60/10,5/1,5/28.

[0051] В настоящем описании "средний размер частиц" липидного комплекса относится к Z-среднему размеру частиц, и средний размер частиц измеряют методом динамического светорассеяния. Средний размер частиц (Z-среднее) липидного комплекса, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, может составлять, например, от 10 до 1000 нм, от 30 до 500 нм или от 30 до 200 нм, хотя средний размер частиц не ограничивается конкретным образом этими значениями. В варианте осуществления средний размер частиц липидного комплекса, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, составляет 100 нм или меньше. В конкретном варианте осуществления средний размер частиц липидного комплекса, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, составляет 65 нм или больше и 100 нм или меньше. В другом варианте осуществления средний размер частиц липидного комплекса, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, составляет 80 нм или больше и 100 нм или меньше, и в еще одном варианте осуществления средний размер частиц липидного комплекса, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, составляет 85 нм или больше и 100 нм или меньше.

[0052] В варианте осуществления pH раствора липидного комплекса составляет 5,0 или меньше или 7,5 или больше. В другом варианте осуществления рН раствора липидного комплекса составляет 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше. В другом варианте осуществления рН раствора липидного комплекса составляет 2,0 или больше и 5,0 или меньше, 2,5 или больше и 5,0 или меньше, 3,0 или больше и 5,0 или меньше, 3,5 или больше и 5,0 или меньше, 4,0 или больше и 5,0 или меньше, 4,5 или больше и 5,0 или меньше, 7,5 или больше и 11,0 или меньше, 7,5 или больше и 10,5 или меньше, 7,5 или больше и 10,0 или меньше, 7,5 или больше и 9,5 или меньше, 7,5 или больше и 9,0 или меньше или 7,5 или больше и 8,5 или меньше. В конкретном варианте осуществления рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше и 8,5 или меньше. Стабильность при хранении у фармацевтической композиции улучшается за счет установления рН раствора липидного комплекса в вышеуказанном диапазоне.

[0053] Стабильность при хранении у фармацевтической композиции по варианту осуществления настоящего изобретения можно определить, например, на основании степени изменения среднего размера частиц путем сравнения среднего размера частиц липидного комплекса до хранения и среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение заданного периода времени. В настоящем описании "до хранения" может означать, например, время сразу после получения фармацевтической композиции или, если значение рН доводилось, то время сразу после доведения рН. Примеры условий для хранения фармацевтической композиции по варианту осуществления настоящего изобретения включают условия, позволяющие хранить ее в прохладном месте или холодильнике (условия для хранения в холодильнике), а также нормальную температуру или комнатную температуру. В варианте осуществления условия хранения фармацевтической композиции составляют от 2 до 8°С. В другом варианте осуществления условия хранения фармацевтической композиции составляют 5°С. В еще одном варианте осуществления условия хранения фармацевтической композиции составляют 25°С.

[0054] Стабильность при хранении у фармацевтической композиции можно определить, например, на основании среднего размера частиц липидного комплекса через 2 недели после начала хранения (после хранения в течение 2 недель), или определить на основании среднего размера частиц липидного комплекса через 1 месяц после начала хранения (после хранения в течение 1 месяца), или определить на основании среднего размера частиц липидного комплекса через 2 месяца после начала хранения (после хранения в течение 2 месяцев), или определить на основании среднего размера частиц липидного комплекса через 3 месяца после начала хранения (после хранения в течение 3 месяцев). В варианте осуществления стабильность при хранении может считаться хорошей, если изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения составляет ±10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения, стабильность при хранении может считаться хорошей, если изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения составляет ±8% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения, и стабильность при хранении может считаться хорошей, если изменение среднего размер частиц липидного комплекса после хранения составляет ±5% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения. В частности, например, стабильность при хранении у фармацевтической композиции может считаться хорошей, если средний размер частиц липидного комплекса через 2 недели после начала хранения отличается на ±10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения. В другом варианте осуществления стабильность при хранении у фармацевтической композиции можно определить на основании увеличения среднего размера частиц, и, например, стабильность при хранении может считаться хорошей, если средний размер частиц липидного комплекса после хранения в течение заданного периода времени отличается на +10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения, стабильность при хранении может считаться хорошей, если средний размер частиц липидного комплекса после хранения в течение заданного периода времени отличается на +8% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения, и стабильность при хранении может считаться хорошей, если средний размер частиц липидного комплекса после хранения в течение заданного периода времени отличается на +5% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения. В частности, например, стабильность при хранении может считаться хорошей, если средний размер частиц липидного комплекса через 2 недели после начала хранения отличается на +10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

[0055] В варианте осуществления эффективность инкапсулирования siRNA для липидного комплекса, инкапсулирующего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, может быть рассчитана, например, на основе концентрации siRNA в составе, разведенном не содержащей РНКаз водой, которая принимается как концентрация siRNA во внешнем растворе LNP, и на основе концентрации siRNA в составе, разведенном с помощью 1% Triton X-100, которая принимается как общая концентрация siRNA в составе, где каждую концентрацию siRNA измеряют с использованием реактива Quant-iT RiboGreen RNA (Invitrogen, № по кат. R11491) (см. также Kewal K. Jain, Drug Delivery System, Methods in Molecular Biology, Vol. 1141: 109-120). Эффективность инкапсулирования, рассчитанная таким образом, составляет, например, более 80%, более 85% или более 90%. В варианте осуществления эффективность инкапсулирования siRNA для липидного комплекса по варианту осуществления составляет более 90%.

[0056] <Способ получения липидного комплекса>

Примеры способов инкапсуляции эффективной молекулы в липидный комплекс включают способ обращенно-фазового выпаривания, способ гидратации цвиттер-иона (NaCl), способ гидратации катионного ядра и способ с помощью этанола и кальция (см. Biomembr., 1468, 239-252 (2000)). Липидный комплекс, инкапсулирующий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, в составе фармацевтической композиции по варианту осуществления можно получить с использованием любого из этих способов, известных в данной области техники.

[0057] В варианте осуществления липидный комплекс, содержащий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, можно получить, например, путем смешивания липидного раствора, содержащего катионный липид и по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, и кислотного буфера, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту. Используя такой способ, можно получить липидный комплекс, внутреннее пространство которого заполнено ядром из двухнитевой рибонуклеиновой кислоты и липидов. Липидный комплекс по варианту осуществления, содержащий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, может содержать катионный липид и по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина.

[0058] Липидный комплекс по варианту осуществления, содержащий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, можно получить с использованием способа, включающего: стадию (a) смешивания содержащего полярный органический растворитель водного раствора, содержащего (I) катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, и водного раствора, содержащего (III) двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, с получением смешанного раствора; и стадию (b) уменьшения содержания полярного органического растворителя в смешанном растворе.

[0059] За счет электростатического взаимодействия между двухнитевой рибонуклеиновой кислотой и катионным липидом, каждое из которых является водорастворимым, и гидрофобного взаимодействия между липидами может образовываться липидный комплекс, инкапсулирующий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту в мелкодисперсную частицу, содержащую липиды. Например, липидный комплекс может быть образован путем уменьшения содержания полярного органического растворителя в смешанном растворе для изменения растворимости липидного компонента, содержащего (I) катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, в содержащем полярный органический растворитель водном растворе. Примеры полярного органического растворителя включают спирт, такой как этанол.

[0060] Сначала на стадии (a) содержащий полярный органический растворитель водный раствор, содержащий растворенные в нем (I) катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, смешивают с водным раствором, содержащим (III) двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, с получением смешанного раствора. Концентрация полярного органического растворителя в содержащем полярный органический растворитель водном растворе не ограничена конкретным образом при условии, что условия для растворения липидных молекул соблюдаются даже после смешивания с водным раствором, содержащим двухнитевую рибонуклеиновую кислоту. Концентрация полярного органического растворителя в смешанном растворе, полученном на стадии (а), может составлять от 0,1 до 60% по весу. Водный раствор, содержащий (III) двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, получают, например, путем растворения двухнитевой рибонуклеиновой кислоты в кислотном буфере.

[0061] Впоследствии, на стадии (b), содержание полярного органического растворителя снижают путем добавления воды или подобного к смешанному раствору. За счет этого может образовываться липидный комплекс. Для эффективного образования липидного комплекса предпочтительно быстрое снижение содержания полярного органического растворителя. В качестве примера концентрация полярного органического растворителя в конечном содержащем полярный органический растворитель водном растворе на стадии (b) может составлять от 0 до 5% по весу.

[0062] Смешанный раствор, полученный на стадии (a), можно подвергать диализу для удаления полярного органического растворителя и замещения растворителя фармацевтически приемлемой средой. Содержание полярного органического растворителя в растворе во время диализа уменьшается, в результате чего может образовываться липидный комплекс.

[0063] Путем применения способа получения композиции по варианту осуществления можно получать липидный комплекс, инкапсулирующий двухнитевую рибонуклеиновую кислоту во внутреннем пространстве мелкодисперсной частицы с высокой эффективностью инкапсулирования.

[0064] Примеры кислотного буфера для растворения в нем двухнитевой рибонуклеиновой кислоты включают сульфатный буфер, фосфатный буфер, фталатный буфер, тартратный буфер, цитратный буфер, формиатный буфер, оксалатный буфер и ацетатный буфер.

[0065] Примеры растворителя для растворения в нем липидов включают полярный органический растворитель, такой как спирт, и растворителем может быть, например, этанол, изопропанол, хлороформ или трет-бутанол.

[0066] Способ по варианту осуществления настоящего изобретения для получения фармацевтической композиции может дополнительно включать доведение pH раствора липидного комплекса. Доведение pH раствора, как правило, проводят после включения двухнитевой рибонуклеиновой кислоты в липидный комплекс. Стадия доведения может представлять собой, например, доведение рН раствора липидного комплекса до 5,0 или меньше или 7,5 или больше, или доведение рН раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше, или доведение рН раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше, или доведение рН раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 11,0 или меньше, или доведение рН раствора липидного комплекса до 7,5 или больше или 10,0, или доведение рН раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 9,5 или меньше, или доведение рН раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 9,0 или меньше, или доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 8,5 или меньше. В конкретном варианте осуществления стадия доведения представляет собой доведение рН раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 8,5 или меньше.

[0067] Доведение рН можно выполнять с применением известного способа и можно выполнять, например, с применением кислотного водного раствора соляной кислоты и т. п., или щелочного водного раствора гидроксида натрия и т. п., или выполнять с применением буферного раствора (буфера) фосфата, цитрата, ацетата, тартрата, бората и т. п.

[0068] Как описано выше, экспрессия компонента комплемента C5 может ингибироваться за счет RNAi при применении двухнитевой рибонуклеиновой кислоты, содержащейся в фармацевтической композиции по варианту осуществления настоящего изобретения. В варианте осуществления фармацевтическая композиция может содержать фармацевтически приемлемый носитель в дополнение к липидному комплексу, содержащему двухнитевую рибонуклеиновую кислоту.

[0069] Примеры фармацевтически приемлемого носителя включают жидкие или твердые наполнители, разбавитель, вспомогательные вещества, средства, обеспечивающие получение, и материалы, инкапсулирующие растворитель.

[0070] В варианте осуществления фармацевтическая композиция может быть представлена, например, в форме порошка, полученного путем удаления растворителя за счет сублимационной сушки и т. п., или в форме жидкости. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления представляет собой порошковую композицию, содержащую липидный комплекс по любому из вышеописанных вариантов осуществления. Порошковую композицию можно получать путем удаления растворителя из композиции в форме жидкости (дисперсии), например, за счет фильтрации или центрифугирования, или получать путем сублимационной сушки дисперсии. В случае, если фармацевтическая композиция представлена в форме порошка, фармацевтическую композицию можно суспендировать или растворить в фармацевтически приемлемой среде перед применением и применять в виде инъекционного препарата. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления представляет собой жидкую композицию, содержащую липидный комплекс по любому из вышеописанных вариантов осуществления и фармацевтически приемлемую среду. В случае, если фармацевтическая композиция представлена в форме жидкости, фармацевтическую композицию можно непосредственно применять в виде инъекционного препарата или суспендировать или растворять в фармацевтически приемлемой среде и применять в виде инъекционного препарата.

[0071] При введения субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтическая композиция по варианту осуществления настоящего изобретения может ингибировать экспрессию компонента комплемента С5 у субъекта за счет RNAi. В данном документе "субъект, нуждающийся в этом" относится к субъекту, имеющему заболевание или нарушение, ассоциированные с экспрессией или активностью гена компонента C5, или субъекту, у которого определен высокий риск их развития.

[0072] В некоторых вариантах осуществления двухнитевая рибонуклеиновая кислота, которая содержится в фармацевтической композиции по варианту осуществления настоящего изобретения, может подавлять экспрессию компонента комплемента С5, и, следовательно, фармацевтическая композиция по варианту осуществления настоящего изобретения может быть применима для лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH) и атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS). Таким образом, в других вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает способ лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии или атипичного гемолитико-уремического синдрома, причем способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по варианту осуществления.

[0073] Субъект, которому вводят фармацевтическую композицию по варианту осуществления, не ограничивается, и, например, настоящее изобретение можно применять в отношении людей или отличных от человека млекопитающих (таких как обезьяны, мыши, крысы, кролики, коровы, лошади, козы).

[0074] Способ введения субъекту фармацевтической композиции по варианту осуществления (например, путь введения, доза, частота введения в день, время введения) не ограничивается и может быть надлежащим образом определен специалистом средней квалификации в данной области техники (например, врачами) в соответствии с состоянием здоровья субъекта, стадией заболевания, типом средства, подлежащего применению в комбинации.

[0075] (Способ введения)

Способ введения фармацевтической композиции по варианту осуществления не ограничивается конкретным образом и может представлять собой парентеральное введение, примеры которого включают внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, внутрикожное введение и интратекальное введение.

[0076] Фармацевтическую композицию по варианту осуществления можно вводить в количестве, достаточном для ингибирования компонента комплемента C5 в зависимости от способа введения. Доза фармацевтической композиции по варианту осуществления может составлять, например, от 0,01 мг до 100 мг, или от 0,1 мг до 50 мг, или от 0,3 мг до 10 мг на кг массы тела субъекта.

[0077] Специалисту средней квалификации в данной области техники понятно, что настоящее изобретение может быть реализовано с помощью соответствующей комбинации любого одного или нескольких из всех вариантов осуществления, описанных в данном документе, помимо случаев, когда комбинация вызывает какое-либо техническое противоречие. Кроме того, специалисту средней квалификации в данной области техники понятно, что было бы предпочтительнее реализовать настоящее изобретение с помощью соответствующей комбинации любых из всех предпочтительных или преимущественных вариантов осуществления, описанных в данном документе, помимо случаев, когда комбинация вызывает какое-либо техническое противоречие.

[0078] Полное содержание, раскрытое в литературных источниках, упомянутых в данном документе , включено посредством ссылки во всей своей полноте, и специалист средней квалификации в данной области техники может процитировать и понять соответствующее содержание, раскрытое в литературных источниках, как часть настоящего описания в соответствии с контекстом настоящего описания, не выходя за рамки сущности и объема настоящего изобретения.

[0079] Литературные источники, процитированные в данном документе, представлены только с целью раскрытия предшествующего уровня техники до даты подачи настоящей заявки, и не должны интерпретироваться как признание того, что авторы настоящего изобретения не имеют права приоритета на раскрытия ввиду какого-либо более раннего изобретения или по любой другой причине. Все описания в литературных источниках основаны на информации, которая была доступна заявителю, и никоим образом не являются признанием того, что описанное содержание является правильным.

[0080] Используемые в данном документе термины предназначены для описания конкретных вариантов осуществления и не предусмотрены для ограничения настоящего изобретения.

[0081] Предусмотрено, что используемый в данном документе термин "содержать" указывает на присутствие упомянутого объекта (например, представителя, стадии, элемента или числа), если контекст явно не требует другого понимания, и не исключает присутствие другого объекта (например, представителя, стадии, элемента или числа). Термин "состоять из" охватывает варианты осуществления, описываемые термином(-ами) "состоять из" и/или "состоять по существу из".

[0082] Если не определено иное, все используемые в данном документе термины (включая технические термины и научные термины) имеют такое же значение, которое общеизвестно специалисту средней квалификации в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Каждый из используемых в данном документе терминов следует интерпретировать как имеющий значение, согласующееся со значением в настоящем описании и в родственных областях техники, если не указано иное, и их не следует интерпретировать в плане идеализированного или чрезмерно буквального значения.

[0083] Хотя для представления различных элементов используются такие термины, как "первый" и "второй", следует понимать, что такие элементы не должны ограничиваться этими терминами самими по себе. Эти термины используются только для того, чтобы отличить один элемент от другого элемента, и, например, в пределах объема настоящего изобретения допустимо обозначить первый элемент как "второй элемент" и аналогичным образом обозначить второй элемент как "первый элемент".

[0084] Следует понимать, что числовые значения, используемые в данном документе для обозначения содержания компонентов, числовых диапазонов и т.д., являются модифицированными с помощью термина "приблизительно", если не указано иное. Например, понятно, что "4°С" обозначает "приблизительно 4°С", если не указано иное, и, разумеется, специалист средней квалификации в данной области техники может рационально понимать допустимое отклонение в соответствии с общим знанием и контекстом настоящего описания. В данном случае под "приблизительно" понимается применение общепринятой методики округления с учетом значащих цифр каждого числового значения. В частности, "приблизительно" применяется для дополнительного включения числовых значений, округленных до ближайшего целого числа, где, например, диапазон, соответствующий "приблизительно 4", составляет от 3,5 до 4,4, и применяется для дополнительного включения числовых значений, округленных до одного десятичного знака, где, например, диапазон, соответствующий "приблизительно 4,5", составляет от 4,45 до 4,54. Аналогично понимаются случаи трех и больше знаков после запятой.

[0085] Если контекст явно не указывает иное, варианты осуществления в форме единственного числа, используемые в данном документе и в формуле изобретения, следует понимать как допускающие форму множественного числа и наоборот, при условии, что это не вызывает технического противоречия.

[0086] Далее в данном документе настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на примеры. Однако настоящее изобретение может быть реализовано в различных вариантах осуществления, и его не следует интерпретировать как ограненное примерами, описанными ниже. Специалист средней квалификации в данной области техники может реализовать настоящее изобретение с различными модификациями, добавлениями, удалениями, заменами и т. д. без изменения сущности или объема настоящего изобретения.

[Примеры]

[0087] [Пример 1. Скрининг in vitro в случае однократного введения (1)]

(Получение двухнитевых нуклеиновых кислот)

Смысловые нити и антисмысловые нити, перечисленные в табл. 2, синтезировали с использованием фосфорамидитного способа, а затем гибридизировали c синтезом двухнитевых нуклеиновых кислот (GeneDesign, Inc.). Сокращения в последовательностях являются такими, как показано в табл. 1. У каждой синтезированной двухнитевой нуклеиновой кислоты вместо фосфатной группы на каждом 3'-конце находилась гидроксигруппа.

[0088]

[Таблица 1]

Сокращение Нуклеотид A Аденозин-3'-фосфат U Уридин-3'-фосфат G Гуанозин-3'-фосфат C Цитидин-3'-фосфат a 2'-O-метиладенозин-3'-фосфат u 2'-O-метилуридин-3'-фосфат g 2'-O-метилгуанозин-3'-фосфат c 2'-O-метилцитидин-3'-фосфат dT Дезокситимидин (idT) Инвертированный дезокситимидин (инвертированный dT) ^ Фосфотиоатная связь

Отсутствие символа указывает на то, что нуклеотиды связаны друг с другом посредством фосфодиэфирной связи.

[0089]

[0090] (Скрининг in vitro)

Каждую из двухнитевых нуклеиновых кислот, перечисленных в табл. 2, в комбинации с реагентом для трансфекции Lipofectamine RNAiMax (от Invitrogen, номер по каталогу: 13778150) разводили средой Opti-MEM (от Gibco, номер по каталогу: 31985062) с получением смешанного раствора siRNA/RNAiMax с конечной концентрацией 3 нМ двухнитевой нуклеиновой кислоты и 0,3% RNAiMax. Смешанный раствор siRNA/RNAiMax вносили аликвотами по 20 мкл в лунки 96-луночного планшета для культивирования, а клетки Hep3B (полученные из АТСС), представляющие собой линии клеток, полученные из рака печени человека, высевали в каждую лунку из расчета 20000 клеток/80 мкл/лунка и культивировали в условиях 37°C и 5% CO₂ на протяжении ночи. Из культивируемых клеток получали лизат, содержащий матрицу для проведения ПЦР в режиме реального времени с использованием набора для непосредственного получения РНК для RT-PCR (в режиме реального времени) CellAmp (зарегистрированная торговая марка) (от Takara Bio Inc., номер по каталогу: 3732) и протеиназы K (от Takara Bio Inc., номер по каталогу: 9034) в соответствии с протоколом, предоставленным Takara Bio Inc. После этого получали кДНК с использованием RT-мастер-микса (Perfect Real Time) PrimeScript (зарегистрированная торговая марка) (от Takara Bio Inc., номер по каталогу: RR036A) в соответствии с протоколом, предоставленным Takara Bio Inc. Кроме того, для гена-мишени компонента C5 человека и эндогенного контрольного гена GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа) человека измеряли значения Ct с использованием универсального мастер-микса EagleTaq (ROX) (от Roche Diagnostics K.K., номер по каталогу: 07260296190) и зонда TaqMan (от Applied Biosystems, C5: Hs00156197_m1; GAPDH: Hs02758991_g1) с системой ПЦР в режиме реального времени ABI7900HT (от Applied Biosystems) в соответствии с протоколом, предоставленным Applied Biosystems. Уровень экспрессии мРНК компонента C5 в случае, когда клетки Hep3B обрабатывали только с помощью реагента для трансфекции без добавления siRNA, определяли как 100%, и остаточный уровень мРНК компонента C5 (относительное значение) рассчитывали для каждого введения siRNA с использованием метода калибровочной кривой. В качестве отрицательного контроля использовали имитационный контроль, который не пересекается ни с одним геном человека.

[0091] Результаты приведены в табл. 3.

[0092]

[0093] [Пример 2. Скрининг in vitro в случае однократного введения (2)]

(Получение двухнитевых нуклеиновых кислот)

Смысловые нити и антисмысловые нити, перечисленные в табл. 4, синтезировали с использованием фосфорамидитного метода, а затем гибридизировали c синтезом двухнитевых нуклеиновых кислот (GeneDesign, Inc.).

[0094]

[0095] (Скрининг in vitro)

Проводили тест для измерения значений Ct для гена-мишени компонента C5 человека и эндогенного контрольного гена GAPDH человека в культивируемых клетках Hep3B таким же образом, как в примере 1, за исключением того, что смешанный раствор siRNA/RNAiMax получали при конечной концентрации 1 нМ двухнитевой нуклеиновой кислоты и 0,3% RNAiMax. Как и в примере 1, уровень экспрессии мРНК компонента C5 в случае использования только реагента для липофекции определяли как 100%, и остаточный уровень мРНК компонента C5 (относительное значение) рассчитывали для каждого введения siRNA.

[0096] Результаты приведены в табл. 5. В случае всех двухнитевых нуклеиновых кислот, за исключением siRNA-008-29, обнаружили пониженные остаточные уровни мРНК компонента C5, что указывает на подавление экспрессии компонента C5.

[0097]

[0098] [Пример 3. Скрининг in vivo (поиск последовательности)]

(Получение siRNA-LNP)

Каждую siRNA, перечисленную в табл. 6, растворяли в 10 мМ цитрате натрия (pH 4,0) с получением разведенного раствора siRNA. Липидный раствор получали путем растворения 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, DSPC (NIPPON FINE CHEMICAL CO., LTD.), холестерина (NIPPON FINE CHEMICAL CO., LTD.) и MPEG2000-DMG (NOF CORPORATION) в этаноле при мольном соотношении 60/10,5/28/1,5. Липидные наночастицы (LNP) получали путем смешивания разведенного раствора siRNA и липидного раствора при скорости потока 3 мл/мин и 1 мл/мин соответственно, при весовом соотношении siRNA/липид, составляющем 0,1. Внешний раствор, представляющий собой водный раствор полученных LNP, замещали на PBS (pH 7,4) посредством диализа с применением Float-A-Lyzer G2 (SPECTRUM, отсечение по молекулярной масса 100 кДа). После диализа полученный продукт подвергали концентрированию и стерилизации фильтрованием для использования в экспериментах. Концентрацию siRNA и эффективность инкапсуляции измеряли с использованием реагента для выявления РНК Quant-iT RiboGreen (Invitrogen, № по кат. R11491). Для расчета эффективности инкапсуляции концентрацию siRNA, измеренную после разведения не содержащей РНКаз водой, принимали как концентрацию siRNA, присутствующую во внешнем растворе LNP, а концентрацию siRNA, измеренную после разведения с помощью 1% Triton X-100, принимали как общая концентрацию siRNA в составе. Средний размер частиц (Z-среднее) измеряли с использованием анализатора размера частиц (Malvern Panalytical Ltd., Zetasizer Nano ZS). Результаты оценки качества продукта для полученных LNP представлены в табл. 7.

[0099]

[0101] (Скрининг in vivo)

LNP, инкапсулирующие PBS или siRNA, перечисленные в табл. 6, вводили внутривенно мышам BALB/c (самцы возрастом 6 недель, n=3 на группу) через хвостовую вену в дозе 0,1 мг/кг siRNA, и образцы крови и ткани печени собирали под анестезией через 5 дней и 14 дней после введения. Из ткани печени, замороженной жидким азотом, общую РНК очищали с использованием мини-набора RNeasy Plus (Qiagen, № по кат. 74106) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. После этого получали кДНК с использованием RT-мастер-микса (Perfect Real Time) PrimeScript (Takara Bio Inc., № по кат. RR036A) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Кроме того, измеряли значения Ct для гена-мишени компонента C5 мыши и эндогенного контрольного гена GAPDH мыши с использованием мастер-микса для экспрессии гена TaqMan (зарегистрированная торговая марка) (Applied Biosystem, № по кат. 4369510) и зонда TaqMan (Applied Biosystems, C5: Mm01336776_g1; GAPDH: Mm99999915_g1) с системой ABI7500 Fast (Applied Biosystems) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Остаточный уровень мРНК компонента C5 в печени через 5 дней после введения у группы введения PBS определяли как 100%, и остаточный уровень мРНК компонента C5 в печени (относительное значение) рассчитывали для каждой группы введения siRNA с использованием метода сравнения Ct. Результаты приведены в табл. 8.

[0102]

[0103] Образцы крови, взятые в каждый день сбора образцов, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а затем гепаринизированную плазму крови, являющуюся супернатантом, собирали и хранили при -80°C. После этого содержание компонента C5 мыши в плазме крови определяли количественно с помощью ELISA. В частности, мышиное антитело к компоненту C5, BB5.1 (Hycult Biotech, № по кат. HM1073-FS), используемое в качестве иммобилизованного антитела, разводили с помощью PBS(-) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № 045-29795) до конечной концентрации 2 мкг/мл и вносили в аналитический планшет (Nunc, № по кат. 442404) и инкубировали при 4°C на протяжении ночи. После этого добавляли блокирующий раствор (PBS(-) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащий 1% BSA (R&D systems, Inc., № по кат. DY995)), и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Блокирующий раствор удаляли и выполняли трехкратную промывку с помощью раствора для промывки (PBS(-) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащего 0,02% Tween20). Раствор для промывки удаляли и затем добавляли образец гепаринизированной плазмы крови, разведенной блокирующим раствором, и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 5 часов. В качестве стандартного образца использовали плазму крови от группы введения PBS. Образец удаляли, а затем выполняли пятикратную промывку с помощью раствора для промывки и добавляли козье антитело к компоненту C5 человека (Quidel Corporation, № по кат. A306), разведенное в 4000 раз блокирующим раствором, и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Антитело удаляли, а затем выполняли пятикратную промывку с помощью раствора для промывки и добавляли меченное HRP ослиное антитело к IgG козы (H+L) (Jackson ImmunoResearch Inc., № по кат. 805-035-180), разведенное в 40000 раз блокирующим раствором, и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Антитело удаляли, а затем выполняли пятикратную промывку с помощью раствора для промывки. После этого равные количества субстрата для пероксидазы, TMB (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc., № по кат. 50-76-01), и раствора B субстрата для пероксидазы (Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc., № по кат. 50-65-00) смешивали вместе, с получением реагента для обнаружения, который добавляли и оставляли для проявления цвета. В качестве раствора для остановки реакции добавляли H₂SO₄ (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № по кат. 198-09595) и затем измеряли поглощение при 450 нм и 650 нм. В табл. 9 представлены относительные значения для образцов, при этом как 100% определена концентрация компонента C5 в плазме крови через 5 дней после введения для группы введения PBS.

[0104] [Пример 4. Скрининг in vitro]

Смысловые нити и антисмысловые нити, перечисленные в табл. 10, синтезировали с использованием фосфорамидитного метода, а затем гибридизировали c синтезом двухнитевых нуклеиновых кислот (GeneDesign, Inc.). Проводили тест для измерения значений Ct для гена-мишени C5 человека и эндогенного контрольного гена GAPDH человека в культивируемых клетках Hep3B таким же образом, как в примере 1, за исключением того, что смешанный раствор siRNA/RNAiMax получали при конечной концентрации 0,003-10 нМ двухнитевой нуклеиновой кислоты и 0,3% RNAiMax. Как и в примере 1, уровень экспрессии мРНК компонента C5 в случае использования только реагента для липофекции определяли как 100%, и остаточный уровень мРНК компонента C5 (относительное значение) рассчитывали для каждого введения siRNA. Результаты приведены в табл. 11.

[0105]

[0106]

[0107] [Пример 5. Скрининг in vivo (модификация в виде выступающего конца)]

(Получение siRNA-LNP)

Липидные наночастицы (LNP), инкапсулирующие в себе siRNA, получали таким же образом, как в примере 3, за исключением того, что использовали siRNA, перечисленные в табл. 12. Результаты оценки качества продукта для полученных LNP представлены в табл. 13.

[0108]

[0109]

[0110] (Скрининг in vivo)

LNP, инкапсулирующие PBS или siRNA, перечисленные в табл. 12, вводили внутривенно мышам BALB/c (самцы возрастом 6 недель, n=3 на группу) через хвостовую вену при дозе siRNA 0,3 мг/кг, и образцы крови и ткани печени собирали под анестезией через 5 дней, 14 дней и 21 день после введения. Из ткани печени, замороженной жидким азотом, общую РНК очищали с использованием мини-набора RNeasy Plus (Qiagen, № по кат. 74106) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. После этого получали кДНК с использованием RT-мастер-микса (Perfect Real Time) PrimeScript (Takara Bio Inc., № по кат. RR036A) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Кроме того, измеряли значения Ct для гена-мишени компонента C5 мыши и эндогенного контрольного гена GAPDH мыши с использованием мастер-микса для экспрессии гена TaqMan (зарегистрированная торговая марка) (Applied Biosystem, № по кат. 4369510) и зонда TaqMan (Applied Biosystems, C5: Mm01336776_g1; GAPDH: Mm99999915_g1) с системой ABI7500 Fast (Applied Biosystems) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Остаточный уровень мРНК компонента C5 в печени для каждого дня измерения у группы введения PBS определяли как 100%, и остаточные уровни мРНК компонента C5 в печени (относительные значения) рассчитывали для каждой группы введения siRNA с использованием метода сравнения Ct. Результаты приведены в табл. 14.

[0111]

[0112] Образцы крови, взятые в каждый день сбора образцов, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а затем гепаринизированную плазму крови, являющуюся супернатантом, собирали и хранили при -80°C. После этого содержание компонента C5 мыши в плазме крови определяли количественно с помощью ELISA. В частности, мышиное антитело к компоненту C5, BB5.1 (Hycult Biotech, № по кат. HM1073-FS), используемое в качестве иммобилизованного антитела, разводили с помощью PBS(-) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № 045-29795) до конечной концентрации 2 мкг/мл и вносили в аналитический планшет (Nunc, № по кат. 442404) и инкубировали при 4°C на протяжении ночи. После этого добавляли блокирующий раствор (PBS(-) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащий 1% BSA (R&D systems, Inc., № по кат. DY995)), и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Блокирующий раствор удаляли и выполняли трехкратную промывку с помощью раствора для промывки (PBS(-) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), содержащего 0,02% Tween20). Раствор для промывки удаляли и затем добавляли образец гепаринизированной плазмы крови, разведенной блокирующим раствором, и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 5 часов. В качестве стандартного образца использовали плазму крови от группы введения PBS. Образец удаляли, а затем выполняли пятикратную промывку с помощью раствора для промывки и добавляли козье антитело к компоненту C5 человека (Quidel Corporation, № по кат. A306), разведенное в 4000 раз блокирующим раствором, и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Антитело удаляли, а затем выполняли пятикратную промывку с помощью раствора для промывки и добавляли меченное HRP ослиное антитело к IgG козы (H+L) (Jackson ImmunoResearch Inc., № по кат. 805-035-180), разведенное в 40000 раз блокирующим раствором, и полученный продукт инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Антитело удаляли, а затем выполняли пятикратную промывку с помощью раствора для промывки. После этого равные количества субстрата для пероксидазы, TMB (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc., № по кат. 50-76-01), и раствора B субстрата для пероксидазы (Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc., № по кат. 50-65-00) смешивали вместе, с получением реагента для обнаружения, который добавляли и оставляли для проявления цвета. В качестве раствора для остановки реакции добавляли H₂SO₄ (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № по кат. 198-09595) и затем измеряли поглощение при 450 нм и 650 нм. В табл. 15 представлены относительные значения для образцов, при этом как 100% определена концентрация компонента C5 в плазме крови за день до введения для группы введения PBS.

[0113]

[0114] Остаточные уровни мРНК компонента C5 в печени и концентрации компонента C5 в плазме крови через 5 дней, 14 дней и 21 день после введения определяли количественно и выполняли статистический анализ (t-критерий для независимых групп) для группы введения siRNA-008-34 и группы введения siRNA-008. Результаты приведены на фиг. 1 и на фиг. 2. Группы, у которых P-значение составляет 0,05 или ниже, отмечены знаком * (звездочка), а группы, у которых P-значение составляет 0,01 или ниже, отмечены знаком **.

[0115] [Пример 6. Анализ in vitro ("прогулка" по последовательности)]

Смысловые нити и антисмысловые нити, перечисленные в табл. 16, синтезировали с использованием фосфорамидитного метода, а затем гибридизировали c синтезом двухнитевых нуклеиновых кислот (GeneDesign, Inc.). Как и в примере 1, уровень экспрессии мРНК компонента C5 в случае использования только реагента для липофекции определяли как 100%, и остаточный уровень мРНК компонента C5 (относительное значение) рассчитывали для каждого введения siRNA. Результаты приведены в табл. 17.

[0116]

[0117]

[0118] [Пример 7. Фармакологический тест (эффект подавления гемолиза)]

(Получение siRNA-LNP)

Липидные наночастицы (LNP), инкапсулирующие в себе siRNA, получали таким же образом, как в примере 3, за исключением того, что использовали siRNA, перечисленные в табл. 18. Результаты оценки качества продукта для полученных LNP представлены в табл. 19.

[0119]

[0120]

[0121] (Оценка in vivo)

LNP, инкапсулирующие PBS или siRNA, перечисленные в табл. 18, вводили внутривенно мышам BALB/c (самцы возрастом 6 недель, n=3 на группу) через хвостовую вену при дозе siRNA 1-3 мг/кг, и образцы крови собирали под анестезией через 5 дней и 9 дней после введения. Образцы крови, взятые в каждый день сбора образцов, помещали в пробирку для разделения крови, содержащую активатор свертывания (Immuno-Biological Laboratories Co, Ltd., № по кат. 31203), и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а затем собирали сыворотку крови, являющуюся супернатантом, и хранили при -80°С. После этого следующим образом количественно определяли активность системы комплемента в сыворотке крови. В частности, готовили эритроциты овцы с концентрацией 1,5 × 10⁸ клеток/мл с применением набора для определения титра комплемента в сыворотке крови CH50 (DENKA SEIKEN Co., Ltd., № по кат. 400017) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Впоследствии готовили зимозан (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № по кат. 263-01491) в дозе 20 мкг/мл с помощью среды для разведения, прилагаемой к набору для определения титра системы комплемента в сыворотке крови CH50. Образец сыворотки крови разводили в 40 раз с помощью той же среды для разведения. Смешивали эритроциты овцы, зимозан и разведенный образец сыворотки крови, каждое в объеме 50 мкл, и смесь инкубировали при 37°C на протяжении ночи. На следующий день аналитический планшет центрифугировали при 2000 об/мин при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем измеряли поглощение супернатанта при 405 нм. В табл. 20 показаны значения для образцов, при этом как 100% определена активность системы комплемента в сыворотке крови за день до введения каждому индивиду.

[0122]

[0123] [Пример 8. Фармакологический тест (эффект подавления гемолиза при однократном введении)]

(Получение siRNA-LNP)

LNP, инкапсулирующие в себе siRNA, получали таким же образом, как в примере 3, за исключением того, что использовали siRNA, перечисленные в табл. 21. Результаты оценки качества продукта для полученных LNP представлены в табл. 22.

[0124]

[0125]

[0126] (Оценка in vivo)

LNP, инкапсулирующие PBS или siRNA, перечисленные в табл. 21, приведенной в данном документе, вводили внутривенно мышам BALB/c (самцы возрастом 7 недель, n=4 на группу) через хвостовую вену при дозе siRNA 0,3, 1 и 3 мг/кг. Образцы крови собирали под анестезией за день до введения (день -1 в табл. 23) и через 7 дней, 13 дней, 20 дней и 27 дней после введения. Образцы крови, взятые в каждый день сбора образцов, помещали в пробирку для разделения крови, содержащую активатор свертывания (Immuno-Biological Laboratories Co, Ltd., № по кат. 31203), и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а затем собирали сыворотку крови, являющуюся супернатантом, и хранили при -80°С. После этого следующим образом количественно определяли активность системы комплемента в сыворотке крови. В частности, готовили эритроциты овцы с концентрацией 1,5 × 10⁸ клеток/мл с применением набора для определения титра комплемента в сыворотке крови CH50 (DENKA SEIKEN Co., Ltd., № по кат. 400017) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Впоследствии готовили зимозан (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № по кат. 263-01491) в дозе 20 мкг/мл с помощью среды для разведения, прилагаемой к набору для определения титра системы комплемента в сыворотке крови CH50. Образец сыворотки крови разводили в 40 раз с помощью той же среды для разведения. Смешивали эритроциты овцы, зимозан и разведенный образец сыворотки крови, каждое в объеме 50 мкл, и смесь инкубировали при 37°C на протяжении ночи. На следующий день аналитический планшет центрифугировали при 2000 об/мин при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем измеряли поглощение супернатанта при 405 нм. В табл. 23 показаны значения для образцов, при этом как 100% определена активность системы комплемента в сыворотке крови за день до введения каждому индивиду. Активность системы комплемента у 1 мыши в группе с дозой 1 мг/кг исключили, так как она, по-видимому, представляла собой выброс. Следовательно, значение для группы с дозой 1 мг/кг в табл. 23 показано как среднее значение для 3 мышей. Значения для группы введения PBS, группы с дозой 0,3 мг/кг и группы с дозой 3 мг/кг в табл. 23 показаны как среднее значение для 4 мышей. Результаты также представлены на фиг. 3.

[0127]

[0128] [Пример 9. Фармакологический тест (эффект подавления гемолиза при введении один раз в две недели)]

(Получение siRNA-LNP)

LNP, инкапсулирующие в себе siRNA, получали таким же образом, как в примере 8.

[0129] (Оценка in vivo)

LNP, инкапсулирующие PBS или siRNA, перечисленные в табл. 21, приведенной в примере 8, вводили внутривенно мышам BALB/c (самцы возрастом 7 недель, n=4 на группу) через хвостовую вену при дозе siRNA 0,3, 1 и 3 мг/кг один раз в две недели. Образцы крови собирали под анестезией за день до введения (день -1 в табл. 24) и через 7 дней, 13 дней, 20 дней и 27 дней после введения. Образцы крови, взятые в каждый день сбора образцов, помещали в пробирку для разделения крови, содержащую активатор свертывания (Immuno-Biological Laboratories Co, Ltd., № по кат. 31203), и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а затем собирали сыворотку крови, являющуюся супернатантом, и хранили при -80°С. После этого следующим образом количественно определяли активность системы комплемента в сыворотке крови. В частности, готовили эритроциты овцы с концентрацией 1,5 × 10⁸ клеток/мл с применением набора для определения титра комплемента в сыворотке крови CH50 (DENKA SEIKEN Co., Ltd., № по кат. 400017) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Впоследствии готовили зимозан (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № по кат. 263-01491) в дозе 20 мкг/мл с помощью среды для разведения, прилагаемой к набору для определения титра системы комплемента в сыворотке крови CH50. Образец сыворотки крови разводили в 40 раз с помощью той же среды для разведения. Смешивали эритроциты овцы, зимозан и разведенный образец сыворотки крови, каждое в объеме 50 мкл, и смесь инкубировали при 37°C на протяжении ночи. На следующий день аналитический планшет центрифугировали при 2000 об/мин при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем измеряли поглощение супернатанта при 405 нм. В табл. 24 показаны значения для образцов, при этом как 100% определена активность системы комплемента в сыворотке крови за день до введения каждому индивиду. Результаты также представлены на фиг. 4.

[0130]

[0131] [Пример 10. Фармакологический тест (эффект подавления гемолиза при введении один раз в две недели)]

(Получение siRNA-LNP)

LNP, инкапсулирующие в себе siRNA, получали таким же образом, как в примере 8.

[0132] (Оценка in vivo)

LNP, инкапсулирующие PBS или siRNA, перечисленные в табл. 21, приведенной в примере 8, вводили внутривенно мышам BALB/c (самцы возрастом 7 недель, n=4 на группу) через хвостовую вену при дозе siRNA 0,3, 1 и 3 мг/кг один раз в две недели. Образцы крови собирали под анестезией за день до введения (день -1 в табл. 25) и через 7 дней, 13 дней, 20 дней, 27 дней, 34 дня, 41 день, 48 дней и 55 дней после введения. Образцы крови, взятые в каждый день сбора образцов, помещали в пробирку для разделения крови, содержащую активатор свертывания (Immuno-Biological Laboratories Co, Ltd., № по кат. 31203), и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а затем собирали сыворотку крови, являющуюся супернатантом, и хранили при -80°С. После этого следующим образом количественно определяли активность системы комплемента в сыворотке крови. В частности, готовили эритроциты овцы с концентрацией 1,5 × 10⁸клеток/мл с применением набора для определения титра комплемента в сыворотке крови CH50 (DENKA SEIKEN Co., Ltd., № по кат. 400017) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Впоследствии готовили зимозан (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № по кат. 263-01491) в дозе 20 мкг/мл с помощью среды для разведения, прилагаемой к набору для определения титра системы комплемента в сыворотке крови CH50. Образец сыворотки крови разводили в 40 раз с помощью той же среды для разведения. Смешивали эритроциты овцы, зимозан и разведенный образец сыворотки крови, каждое в объеме 50 мкл, и смесь инкубировали при 37°C на протяжении ночи. На следующий день аналитический планшет центрифугировали при 2000 об/мин при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем измеряли поглощение супернатанта при 405 нм. В табл. 25 показаны значения для образцов, при этом как 100% определена активность системы комплемента в сыворотке крови за день до введения каждому индивиду. Результаты также представлены на фиг. 5.

[0133]

[0134] [Пример 11. Фармакологический тест (эффект подавления гемолиза при введении один раз в три недели)]

(Получение siRNA-LNP)

LNP, инкапсулирующие в себе siRNA, получали таким же образом, как в примере 8.

[0135] (Оценка in vivo)

LNP, инкапсулирующие PBS или siRNA, перечисленные в табл. 21, приведенной в примере 8, вводили внутривенно мышам BALB/c (самцы возрастом 7 недель, n=4 на группу) через хвостовую вену в дозе siRNA 0,3, 1 и 3 мг/кг один раз в три недели. Образцы крови собирали под анестезией за день до введения (день -1 в табл. 26) и через 7 дней, 13 дней, 20 дней, 27 дней, 34 дня, 41 день, 48 дней и 55 дней после введения. Образцы крови, взятые в каждый день сбора образцов, помещали в пробирку для разделения крови, содержащую активатор свертывания (Immuno-Biological Laboratories Co, Ltd., № по кат. 31203), и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, а затем собирали сыворотку крови, являющуюся супернатантом, и хранили при -80°С. После этого следующим образом количественно определяли активность системы комплемента в сыворотке крови. В частности, готовили эритроциты овцы с концентрацией 1,5 × 10⁸ клеток/мл с применением набора для определения титра комплемента в сыворотке крови CH50 (DENKA SEIKEN Co., Ltd., № по кат. 400017) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем. Впоследствии готовили зимозан (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., № по кат. 263-01491) в дозе 20 мкг/мл с помощью среды для разведения, прилагаемой к набору для определения титра системы комплемента в сыворотке крови CH50. Образец сыворотки крови разводили в 40 раз с помощью той же среды для разведения. Смешивали эритроциты овцы, зимозан и разведенный образец сыворотки крови, каждое в объеме 50 мкл, и смесь инкубировали при 37°C на протяжении ночи. На следующий день аналитический планшет центрифугировали при 2000 об/мин при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем измеряли поглощение супернатанта при 405 нм. В табл. 26 показаны значения для образцов, при этом как 100% определена активность системы комплемента в сыворотке крови за день до введения каждому индивиду. Результаты также представлены на фиг. 6.

[0136]

[0137] [Пример 12. Тест на физические свойства]

(Диаметр частиц siRNA-LNP при изменении рН раствора LNP)

siRNA-008-34, показанную в табл. 4, растворяли в 10 мМ цитрате натрия (pH 4,0) с получением разведенного раствора siRNA. Липидный раствор получали путем растворения 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, DSPC (NIPPON FINE CHEMICAL CO., LTD.), холестерина (Dishman Carbogen Amcis Limited) и MPEG2000-DMG (NOF CORPORATION) в этаноле при мольном соотношении 60/10,5/28/1,5. LNP получали путем смешивания разбавленного раствора siRNA и раствора липидов при скоростях потока 3:1. Полученный раствор LNP подвергали замене на PBS (pH 7,5) в соответствии с общепринятым методом, после чего LNP концентрировали. К концентрату LNP добавляли водный раствор соляной кислоты или гидроксида натрия для доведения рН в диапазоне от 6,0 до 8,5. После доведения рН LNP хранили в прохладном месте.

[0138] Результаты измерения размеров частиц данных LNP с использованием анализатора размера частиц (Malvern Panalytical Ltd., Zetasizer Nano ZS) показаны в табл. 27.

[0139]

[0140] [Пример 13. Тест на физические свойства]

(Диаметр частиц siRNA-LNP при изменении рН раствора LNP)

siRNA-008-34, показанную в табл. 4, растворяли в 10 мМ цитрате натрия (pH 4,0) с получением разведенного раствора siRNA. Липидный раствор получали путем растворения 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, DSPC (NIPPON FINE CHEMICAL CO., LTD.), холестерина (Dishman Carbogen Amcis Limited) и MPEG2000-DMG (NOF CORPORATION) в этаноле при мольном соотношении 60/10,5/28/1,5. LNP получали путем смешивания разбавленного раствора siRNA и раствора липидов при скоростях потока 3:1. Полученный раствор LNP подвергали замене на PBS (pH 7,5) в соответствии с общепринятым методом, после чего LNP концентрировали. К концентрату LNP добавляли водный раствор соляной кислоты или гидроксида натрия для доведения рН в диапазоне от 6,5 до 8,5. После доведения рН LNP хранили в прохладном месте (5°C).

[0141] Результаты измерения размеров частиц данных LNP с применением анализатора размера частиц (NICOMP380) показаны в табл. 28. По внешнему виду LNP при каждом рН представляли собой гомогенный раствор с характерной опалесценцией белого или желтовато-белого цвета, и никаких изменений не обнаруживали от момента сразу после доведения рН до момента хранения в течение 1 месяца.

[0142]

[0143] [Пример 14. Тест на физические свойства]

(Диаметр частиц siRNA-LNP при изменении рН раствора LNP)

siRNA-008-34, показанную в табл. 4, растворяли в 10 мМ цитрате натрия (pH 4,0) с получением разведенного раствора siRNA. Липидный раствор получали путем растворения 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, DSPC (NIPPON FINE CHEMICAL CO., LTD.), холестерина (Dishman Carbogen Amcis Limited) и MPEG2000-DMG (NOF CORPORATION) в этаноле при мольном соотношении 60/10,5/28/1,5. LNP получали путем смешивания разбавленного раствора siRNA и раствора липидов при скоростях потока 3:1. Полученный раствор LNP подвергали замене на PBS (pH 7,5) в соответствии с общепринятым методом, после чего LNP концентрировали. К концентрату LNP добавляли водный раствор соляной кислоты или гидроксида натрия для доведения рН в диапазоне от 6,5 до 8,5. После доведения рН LNP хранили в прохладном месте (5°C).

[0144] Результаты измерения размеров частиц данных LNP с применением анализатора размера частиц (NICOMP380) показаны в табл. 29.

[0145]

[0146] [Пример 15. Тест на физические свойства]

(Диаметр частиц siRNA-LNP при изменении рН раствора LNP)

siRNA-008-34, показанную в табл. 4, растворяли в 10 мМ цитрате натрия (pH 4,0) с получением разведенного раствора siRNA. Липидный раствор получали путем растворения 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, DSPC (NIPPON FINE CHEMICAL CO., LTD.), холестерина (Dishman Carbogen Amcis Limited) и MPEG2000-DMG (NOF CORPORATION) в этаноле при мольном соотношении 60/10,5/28/1,5. LNP получали путем смешивания разбавленного раствора siRNA и раствора липидов при скоростях потока 3:1. Полученный раствор LNP подвергали замене на PBS (pH 7,5) в соответствии с общепринятым методом, после чего LNP концентрировали. К концентрату LNP добавляли водный раствор соляной кислоты или гидроксида натрия для доведения рН в диапазоне от 6,5 до 8,5. После доведения рН LNP хранили при комнатной температуре (25°C).

[0147] Результаты измерения размеров частиц данных LNP с применением анализатора размера частиц (NICOMP380) показаны в табл. 30.

[0148]

[0149] [Пример 16. Тест на физические свойства]

(Диаметр частиц siRNA-LNP при изменении рН раствора LNP)

siRNA-008-34, показанную в табл. 4, растворяли в 10 мМ цитрате натрия (pH 4,0) с получением разведенного раствора siRNA. Липидный раствор получали путем растворения 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилата, DSPC (Lipoid GmbH), холестерина (Dishman Carbogen Amcis Limited) и MPEG2000-DMG (NOF CORPORATION) в этаноле при мольном соотношении 60/10,5/28/1,5. LNP получали путем смешивания разбавленного раствора siRNA и раствора липидов при скоростях потока 3:1. Полученный раствор LNP подвергали замене на PBS (pH 7,7) в соответствии с общепринятым методом, после чего LNP концентрировали. Впоследствии концентрат LNP подвергали осветлению фильтрованием и доведению концентрации с последующей стерилизацией фильтрованием. Полученный раствор LNP наносили на диализную мембрану и подвергали диализу с буферным раствором Britton-Robinson (BR) при pH 2,0/5,0/9,0/10,0/11,0 при комнатной температуре с получением растворов LNP с различными pH. После завершения диализа pH каждого раствора LNP подтверждали, и раствор LNP определяли как "сразу после доведения pH". После доведения рН растворы LNP хранили в прохладном месте (5°C).

[0150] Результаты измерения размеров частиц данных LNP с применением анализатора размера частиц (NICOMP380) показаны в табл. 31.

[0151]

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Eisai R&D Management Co., Ltd.

<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ДВУХНИТЕВУЮ РИБОНУКЛЕИНОВУЮ КИСЛОТУ, СПОСОБНУЮ К ПОДАВЛЕНИЮ ЭКСПРЕССИИ КОМПОНЕНТА КОМПЛЕМЕНТА C5

<130> FP20-0635-00

<150> JP2019-236918

<151> 2019-12-26

<160> 172

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 1

aggcaaaggu guucaaagan n 21

<210> 2

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 2

ucuuugaaca ccuuugccun n 21

<210> 3

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 3

cugucuuaac uuucauagan n 21

<210> 4

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 4

ucuaugaaag uuaagacagn n 21

<210> 5

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 5

uagcaugugc cagcuacaan n 21

<210> 6

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 6

uuguagcugg cacaugcuan n 21

<210> 7

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 7

cugugauugg aauuagaaan n 21

<210> 8

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 8

uuucuaauuc caaucacagn n 21

<210> 9

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 9

aaggcaaagg uguucaaagn n 21

<210> 10

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 10

cuuugaacac cuuugccuun n 21

<210> 11

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 11

gaaaggaacu guuuacaacn n 21

<210> 12

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 12

guuguaaaca guuccuuucn n 21

<210> 13

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 13

ugguauaugu guugcugaun n 21

<210> 14

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 14

aucagcaaca cauauaccan n 21

<210> 15

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 15

acugucuuaa cuuucauagn n 21

<210> 16

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 16

cuaugaaagu uaagacagun n 21

<210> 17

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 17

gugccagcua caagcccagn n 21

<210> 18

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 18

cugggcuugu agcuggcacn n 21

<210> 19

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 19

aaggaacugu uuacaacuan n 21

<210> 20

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 20

uaguuguaaa caguuccuun n 21

<210> 21

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 21

uccucuggaa auuggccuun n 21

<210> 22

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 22

aaggccaauu uccagaggan n 21

<210> 23

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 23

uugaaaggaa cuguuuacan n 21

<210> 24

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 24

uguaaacagu uccuuucaan n 21

<210> 25

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 25

aaaggaacug uuuacaacun n 21

<210> 26

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 26

aguuguaaac aguuccuuun n 21

<210> 27

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 27

aggaacuguu uacaacuaun n 21

<210> 28

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 28

auaguuguaa acaguuccun n 21

<210> 29

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 29

uacacugaag cauuugaugn n 21

<210> 30

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 30

caucaaaugc uucaguguan n 21

<210> 31

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 31

cacugaagca uuugaugcan n 21

<210> 32

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 32

ugcaucaaau gcuucagugn n 21

<210> 33

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 33

cugaagcauu ugaugcaacn n 21

<210> 34

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 34

guugcaucaa augcuucagn n 21

<210> 35

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 35

uucugcaacu gaauucgaun n 21

<210> 36

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 36

aucgaauuca guugcagaan n 21

<210> 37

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 37

ugaaaggaac uguuuacaan n 21

<210> 38

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 38

uuguaaacag uuccuuucan n 21

<210> 39

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 39

acugaagcau uugaugcaan n 21

<210> 40

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 40

uugcaucaaa ugcuucagun n 21

<210> 41

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 41

cauacagaca aaccuguuun n 21

<210> 42

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 42

aaacagguuu gucuguaugn n 21

<210> 43

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 43

aaacaacaag uaccuuuaun n 21

<210> 44

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 44

auaaagguac uuguuguuun n 21

<210> 45

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 45

auacagacaa accuguuuan n 21

<210> 46

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 46

uaaacagguu ugucuguaun n 21

<210> 47

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 47

gguauaugug uugcugauan n 21

<210> 48

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 48

uaucagcaac acauauaccn n 21

<210> 49

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 49

ucagaaaguc ugugaaggan n 21

<210> 50

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 50

uccuucacag acuuucugan n 21

<210> 51

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 51

ucuccaggcc aaacugugun n 21

<210> 52

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 52

acacaguuug gccuggagan n 21

<210> 53

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 53

acaacaagua ccuuuauaun n 21

<210> 54

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 54

auauaaaggu acuuguugun n 21

<210> 55

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 55

caacaaguac cuuuauauun n 21

<210> 56

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 56

aauauaaagg uacuuguugn n 21

<210> 57

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 57

auucuccagg ccaaacugun n 21

<210> 58

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 58

acaguuuggc cuggagaaun n 21

<210> 59

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 59

guggcaacca gcuccaggun n 21

<210> 60

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 60

accuggagcu gguugccacn n 21

<210> 61

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 61

aagagacauc ugacuuggan n 21

<210> 62

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 62

uccaagucag augucucuun n 21

<210> 63

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 63

auucugcaac ugaauucgan n 21

<210> 64

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 64

ucgaauucag uugcagaaun n 21

<210> 65

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 65

uuccucugga aauuggccun n 21

<210> 66

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 66

aggccaauuu ccagaggaan n 21

<210> 67

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 67

aacaacaagu accuuuauan n 21

<210> 68

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 68

uauaaaggua cuuguuguun n 21

<210> 69

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 69

aauauguccu cucucccuan n 21

<210> 70

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 70

uagggagaga ggacauauun n 21

<210> 71

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 71

acucacuaua auuacuugan n 21

<210> 72

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 72

ucaaguaauu auagugagun n 21

<210> 73

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 73

auaacucacu auaauuacun n 21

<210> 74

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 74

aguaauuaua gugaguuaun n 21

<210> 75

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 75

aaauaugucc ucucucccun n 21

<210> 76

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 76

agggagagag gacauauuun n 21

<210> 77

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 77

aagauauuuu uauaauaaan n 21

<210> 78

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 78

uuuauuauaa aaauaucuun n 21

<210> 79

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 79

aaaauaacuc acuauaauun n 21

<210> 80

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 80

aauuauagug aguuauuuun n 21

<210> 81

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 81

aaauaacuca cuauaauuan n 21

<210> 82

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 82

uaauuauagu gaguuauuun n 21

<210> 83

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 83

guguuaaaau gucugcugun n 21

<210> 84

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 84

acagcagaca uuuuaacacn n 21

<210> 85

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 85

aaaauguuuu ugucaaguan n 21

<210> 86

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 86

uacuugacaa aaacauuuun n 21

<210> 87

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 87

cuuacgcuga guacuucgan n 21

<210> 88

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 88

ucgaaguacu cagcguaagn n 21

<210> 89

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 89

aggcaaaggu guucaaagan n 21

<210> 90

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 90

ucuuugaaca ccuuugccun n 21

<210> 91

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<400> 91

aggcaaaggu guucaaaga 19

<210> 92

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<400> 92

ucuuugaaca ccuuugccu 19

<210> 93

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(21)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<400> 93

aggcaaaggu guucaaagau u 21

<210> 94

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 94

ucuuugaaca ccuuugccuu u 21

<210> 95

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(3)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 95

aggcaaaggu guucaaagau u 21

<210> 96

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(3)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 96

ucuuugaaca ccuuugccuu u 21

<210> 97

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(20)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 97

aggcaaaggu guucaaagau u 21

<210> 98

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 98

ucuuugaaca ccuuugccuu u 21

<210> 99

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<400> 99

aggcaaaggu guucaaaga 19

<210> 100

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 100

ucuuugaaca ccuuugccuu u 21

<210> 101

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<400> 101

auaggcaaag guguucaaag a 21

<210> 102

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 102

ucuuugaaca ccuuugccuu u 21

<210> 103

<400> 103

000

<210> 104

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 104

ucuuugaaca ccuuugccuu u 21

<210> 105

<400> 105

000

<210> 106

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 106

cuuugaacac cuuugccuun n 21

<210> 107

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<400> 107

aaggcaaagg uguucaaag 19

<210> 108

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<400> 108

cuuugaacac cuuugccuu 19

<210> 109

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 109

gaaaggaacu guuuacaacn n 21

<210> 110

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 110

guuguaaaca guuccuuucn n 21

<210> 111

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> cm

<400> 111

gaaaggaacu guuuacaac 19

<210> 112

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<400> 112

guuguaaaca guuccuuuc 19

<210> 113

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 113

ugguauaugu guugcugaun n 21

<210> 114

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 114

aucagcaaca cauauaccan n 21

<210> 115

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 115

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 116

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<400> 116

aucagcaaca cauauacca 19

<210> 117

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> мкм

<400> 117

ugguauaugu guugcugauu u 21

<210> 118

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 118

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 119

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(3)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> мкм

<400> 119

ugguauaugu guugcugauu u 21

<210> 120

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(3)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 120

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 121

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 121

ugguauaugu guugcugauu u 21

<210> 122

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 122

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 123

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 123

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 124

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 124

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 125

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (21)..(21)

<223> мкм

<400> 125

auugguauau guguugcuga u 21

<210> 126

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 126

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 127

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (22)..(22)

<223> мкм

<400> 127

uauugguaua uguguugcug au 22

<210> 128

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 128

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 129

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (22)..(22)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (23)..(23)

<223> n=инвертированный дезокситимидин

<400> 129

uauugguaua uguguugcug aun 23

<210> 130

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 130

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 131

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> мкм

<400> 131

ugguauaugu guugcugauu u 21

<210> 132

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 132

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 133

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> мкм

<400> 133

ugguauaugu guugcugauu u 21

<210> 134

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 134

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 135

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<400> 135

auugguauau guguugcuga 20

<210> 136

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(20)

<223> мкм

<400> 136

ucagcaacac auauaccauu 20

<210> 137

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(20)

<223> мкм

<400> 137

augguauaug uguugcugau 20

<210> 138

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(20)

<223> мкм

<400> 138

aucagcaaca cauauaccuu 20

<210> 139

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 139

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 140

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(23)

<223> мкм

<400> 140

aucagcaaca cauauaccau uuu 23

<210> 141

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 141

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 142

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(23)

<223> мкм

<400> 142

aucagcaaca cauauaccau uuu 23

<210> 143

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 143

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 144

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (22)..(23)

<223> 2'-O-метиладенозин

<400> 144

aucagcaaca cauauaccau uaa 23

<210> 145

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 145

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 146

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (21)..(23)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (22)..(23)

<223> 2'-O-метиладенозин

<400> 146

aucagcaaca cauauaccau uaa 23

<210> 147

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 147

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 148

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (22)..(23)

<223> 2'-O-метиладенозин

<400> 148

aucagcaaca cauauaccau uaa 23

<210> 149

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 149

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 150

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> 2'-O-метиладенозин

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (22)..(23)

<223> 2'-O-метиладенозин

<400> 150

aucagcaaca cauauaccau uaa 23

<210> 151

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 151

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 152

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> 2'-O-метиладенозин

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(23)

<223> мкм

<400> 152

aucagcaaca cauauaccau uuu 23

<210> 153

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(2)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 153

ugguauaugu guugcugau 19

<210> 154

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (22)..(23)

<223> 2'-O-метиладенозин

<400> 154

aucagcaaca cauauaccau uaa 23

<210> 155

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 155

auaacucacu auaauuacun n 21

<210> 156

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 156

aguaauuaua gugaguuaun n 21

<210> 157

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> мкм

<400> 157

auaacucacu auaauuacu 19

<210> 158

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<400> 158

aguaauuaua gugaguuau 19

<210> 159

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(21)

<223> мкм

<400> 159

ugguauaugu guugcugauu u 21

<210> 160

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 160

aucagcaaca cauauaccau u 21

<210> 161

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 161

aggcaaaggu guucaaagau u 21

<210> 162

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 162

ucuuugaaca ccuuugccuu u 21

<210> 163

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 163

gaaaggaacu guuuacaacu u 21

<210> 164

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> мкм

<400> 164

guuguaaaca guuccuuucu u 21

<210> 165

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 165

acugguauau guguugcugn n 21

<210> 166

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 166

cagcaacaca uauaccagun n 21

<210> 167

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 167

cugguauaug uguugcugan n 21

<210> 168

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 168

ucagcaacac auauaccagn n 21

<210> 169

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (3)..(3)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (9)..(9)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(12)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (18)..(18)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 169

gguauaugug uugcugauan n 21

<210> 170

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (1)..(1)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (7)..(7)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(10)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (12)..(12)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (16)..(16)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 170

uaucagcaac acauauaccn n 21

<210> 171

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная смысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (4)..(4)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (6)..(6)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (10)..(11)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (14)..(14)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (19)..(19)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 171

guauaugugu ugcugauacn n 21

<210> 172

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтезированная антисмысловая последовательность siRNA

<220>

<221> другой_признак

<222> (2)..(2)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (5)..(5)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (8)..(8)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (11)..(11)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (13)..(13)

<223> cm

<220>

<221> другой_признак

<222> (15)..(15)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (17)..(17)

<223> мкм

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> n=дезокситимидин

<220>

<221> другой_признак

<222> (20)..(21)

<223> фосфотиоатная связь

<400> 172

guaucagcaa cacauauacn n 21

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к фармацевтической композиции для ингибирования экспрессии компонента комплемента С5, содержащей липидный комплекс, где липидный комплекс включает двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, и pH раствора липидного комплекса составляет 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше. Также раскрыт способ получения фармацевтической композиции и способ ее стабилизации. Изобретение также относится к способу лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии и атипичного гемолитико-уремического синдрома. Изобретение позволяет эффективно подавлять экспрессию компонента комплемента С5. 7 н. и 16 з.п. ф-лы, 6 ил., 31 табл., 16 пр.

1. Фармацевтическая композиция для ингибирования экспрессии компонента комплемента С5, содержащая

липидный комплекс,

где липидный комплекс содержит двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, и

pH раствора липидного комплекса составляет 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше, и

фармацевтически приемлемый носитель.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где рН раствора липидного комплекса составляет 7,5 или больше и 10,0 или меньше.

3. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1, 2, где средний размер частиц липидного комплекса составляет 100 нм или меньше.

4. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1, 2, где средний размер частиц липидного комплекса составляет 65 нм или больше и 100 нм или меньше.

5. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1, 2, где средний размер частиц липидного комплекса составляет 80 нм или больше и 100 нм или меньше.

6. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-5, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса после хранения в течение 2 недель составляет 10% или меньше от среднего размера частиц липидного комплекса до хранения.

7. Фармацевтическая композиция по п. 6, где изменение среднего размера частиц липидного комплекса представляет собой увеличение среднего размера частиц липидного комплекса.

8. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-7, где липидный комплекс включает

катионный липид и

по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где катионный липид представляет собой 2-{9-оксо-9-[(3-пентилоктил)окси]нонил}додецил-1-метилпиперидин-4-карбоксилат.

10. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-9, где липидный комплекс представляет собой липидную наночастицу (LNP).

11. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-10, где липидный комплекс инкапсулирует двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую комбинацию смысловой нити и антисмысловой нити.

12. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-11 для применения при лечении пароксизмальной ночной гемоглобинурии.

13. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-11 для применения при лечении атипичного гемолитико-уремического синдрома.

14. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13, предусматривающий

смешивание органического растворителя, содержащего (I) катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, и водного раствора, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую комбинацию смысловой цепи, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой цепи, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, для получения раствора липидного комплекса;

доведение pH раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11 или меньше.

15. Способ по п. 14 для получения фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 10,0 или меньше.

16. Способ стабилизации фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13, предусматривающий

смешивание органического растворителя, содержащего (I) катионный липид и (II) по меньшей мере один липид, выбранный из группы, состоящей из нейтрального липида, модифицированного полиэтиленгликолем липида и стерина, и водного раствора, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую комбинацию смысловой цепи, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловой цепи, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, для получения раствора липидного комплекса;

доведение pH раствора липидного комплекса до 2,0 или больше и 5,0 или меньше или 7,5 или больше и 11,0 или меньше.

17. Способ по п. 16 для стабилизации фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13, предусматривающий

доведение pH раствора липидного комплекса до 7,5 или больше и 10,0 или меньше.

18. Способ по п. 16 или 17 для стабилизации фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13, где способ стабилизации фармацевтической композиции представляет собой способ подавления изменения среднего размера частиц липидного комплекса в фармацевтической композиции.

19. Способ по п. 18 для стабилизации фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13, где способ подавления изменения среднего размера частиц представляет собой способ подавления увеличения среднего размера частиц.

20. Способ лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-11 нуждающемуся в этом пациенту.

21. Способ лечения атипичного гемолитико-уремического синдрома, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-11 нуждающемуся в этом пациенту.

22. Применение липидного комплекса, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, в производстве лекарственного средства, содержащего фармацевтическую композицию по любому из пп. 1-11, для лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии.

23. Применение липидного комплекса, содержащего двухнитевую рибонуклеиновую кислоту, содержащую смысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 145, и антисмысловую нить, состоящую из нуклеотидной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 146, в производстве лекарственного средства, содержащего фармацевтическую композицию по любому из пп. 1-11, для лечения атипичного гемолитико-уремического синдрома.