Способ дифференциальной диагностики болезни Паркинсона и болезни диффузных телец Леви Российский патент 2025 года по МПК G01N33/68 G01N33/573 

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, а именно к лабораторным методам диагностики экстрапирамидных заболеваний, и может быть использовано для дифференциальной диагностики болезни Паркинсона (БП) и болезни диффузных телец Леви (БДТЛ).

Сложность дифференциальной диагностики БП и БДТЛ связана со схожестью клинической картины в виде синдрома паркинсонизма в дебюте заболевания, отсутствием нейровизуализационных изменений в структуре головного мозга при этих дегенеративных заболеваниях центральной нервной системы.

В настоящее время в связи с увеличением продолжительности жизни населения отмечается рост количества нейродегенеративных заболеваний, к которым относится болезнь Паркинсона и болезнь диффузных телец Леви (Катунина Е.А., Титова Н.В., Авакян Г.Н. Методы диагностики болезни Паркинсона на ранних стадиях. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2010; 110 (12): 112-118. Katunina E.A., Titova N.V., Avakian G.N. Methods of diagnosis early stage of Parkinson's disaese. S.S. Korsakov Journal of Neurology and Psychiatry. 2010; 110 (12): 112-118 (In Russ.)).

Диагностика БП и БДТЛ осложняется постепенным началом заболевания и несвоевременным обращением пациентов за медицинской помощью, а также клиническими критериями диагностики. Дифференциальный диагноз между данными заболеваниями в настоящее время основывается исключительно на клинических критериях. В первый год развития БДТЛ у 50% пациентов встречаются симптомы паркинсонизма в виде тремора, олигобрадикинезии, ригидности. Между БДТЛ и БП много общего и прежде всего сами тельца Леви. При недостаточной оценке когнитивного статуса, ошибочно диагностируется начальная стадия БП, а назначенные для коррекции паркинсонизма препараты (агонисты дофаминовых рецепторов, амантадин) нередко вызывают психотические нарушения (Левин О.С., Васенина Е.Е., Чимагомедова А.Ш., Дудченко Н.Г., Деменция с тельцами Леви. Обозрение психиатрии и медицинской психологии № 2, 2018, с. 11-21).

Среди врачей насущным является поиск дополнительных нейровизуализационных, биохимических, генетических критериев диагностики БП и БДТЛ (В.В. Юдина, О.Н. Воскресенская, Г.К. Юдина. Деменция с тельцами Леви у пациентки с оромандибулярной дистонией. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова 2020, т. 120, № 7, с. 109-112 https://doi.org/10.17116/jnevro2020120071109). Younes-Mhenni S., Frih-Ayed M., Kerkeni A. с соавт. рассматривают активность фермента супероксидисмутазы в качестве биохимического маркера оксидантного стресса при БП (Younes-Mhenni S., Frih-Ayed M., Kerkeni A. et al. Peripheral blood markers of oxidative stress in Parkinson’s disease. Eur Neurol 2007; 58: 2: 78-83). Другие авторы считают эти изменения неспецифичными, так как фермент супероксидисмутаза изменяется в остром периоде инсультов, черепно-мозговой травмы и при других нейродегенеративных заболеваниях.

Известно, что нейродегенеративные или конформационные заболевания, характеризуются накоплением неправильно свернутых белковых молекул, которые имеют как общие морфологические, так и биохимические особенности и могут локализоваться с несколькими другими белками, включая различные белки-шапероны. Накопление неправильно свернутых белков оказывает негативное влияние на нейропластичность и запускает пути апоптоза клеток. Белки-шапероны, такие как белки теплового шока 70 – heat shock proteins 70 (HSP 70), функционируют как молекулярные шапероны, способствуя рефолдингу нативных белков, тем самым стабилизируют цитоскелет клетки (Zhang X., Shi J., Tian J., Robinson A.C., Davidson Y.S., Mann D.M. Expression of one important chaperone protein, heat shock protein 27, in neurodegenerative diseases. Alzheimers Res Ther. 2014 Dec 17; 6(9):78. doi: 10.1186/s13195-014-0078-x. PMID: 25621016; PMCID: PMC4304251).

По изученным литературным и патентным источникам определено несколько исследований, имеющих своей целью провести дифференциальную диагностику между БП и БДТЛ.

Известен способ дифференциальной диагностики типа деменции при нейродегенеративных заболеваниях, в том числе БП (Патент РФ № 2228708), основанный на исследовании эндогенных вызванных потенциалов Р300 с использованием вербальных и невербальных стимулов для диагностирования деменции коркового или подкоркового типов. Данный способ является высокозатратным по времени и стоимости инструментального оборудования, не позволяет диагностировать болезнь на ранних стадиях, следовательно, не представляется возможным уточнить диагноз и своевременно начать лечение.

Известен инструментальный метод позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) головного мозга для дифференциальной диагностики БП и эссенциального тремора, при котором больному в кровь вводят радиактивный препарат [18F]-флюородопы, который метит дофаминергические терминали. При БП нейроны скорлупы на противоположной стороне от симптомов гемипаркинсонизма уменьшают захват радиолиганда более чем на 30% (Brooks D.J. Morphological and functional imaging studies on the diagnosis and progression of Parkinson’s disease. J Neurol 2000; 247: Suppl 2: II/11— II/18). Однако при ПЭТ исследовании у 44% клинически здоровых монозиготных близнецов в стриатуме отмечено снижение меченой флюородопы (Laihinen A., Ruottinen H., Rinne J.O. et al. Risk for Parkinson’ disease: twin studies for the detection of asymptomatic subjects using [l8F]6-fluorodopa PET. J Neurol 2000; 247: Suppl 2: 11: 110—113). Еще более существенным недостатком метода является дороговизна и малодоступность ПЭТ из-за технологически сложного оборудования.

Технический результат: повышение точности дифференциальной диагностики БП и БДТЛ за счет использования достоверного лабораторного критерия; объективизация и стандартизация способа; простота исполнения.

Указанный результат достигается путем определения количественного содержания белков теплового шока 70 – heat shock proteins 70 (HSP 70) в сыворотке периферической крови пациента методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).

Способ осуществляют следующим образом: у обследуемого больного из вены в стеклянную центрифужную пробирку забирают 5,0 мл крови утром натощак. Отделенную сыворотку оставляют на 2 часа при комнатной температуре до центрифугирования. Сыворотку получают центрифугированием при 1000 оборотах в течение 20 минут. Для анализа используют свежеприготовленную сыворотку или аликвотированные образцы, которые хранились при температуре -20°С или -80°С, избегая повторяющихся циклов заморозки и разморозки.

Необходимые реактивы: иммуноферментный набор ELISA для определения HSP 70 методом ИФА.

Ход определения: микропланшет в наборе сорбирован антителами специфичными к HSP 70. Стандарты или образцы добавляют в определенные лунки планшета c антителами, конъюгированными с биотином и специфичными к HSP 70. Затем авидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRP) добавляют в каждую лунку планшета и проводят инкубацию. После добавления тетраметилбензидина (ТМБ, стоп-реагент) цвет изменяется только в лунках, содержащих HSP 70, антителасбиотином и авидин с пероксидазой хрена. Ферментативную реакцию прекращают путем добавления раствора серной кислоты. Оптическую плотность (ОП) измеряют фотометрическим методом на длине волны 450±10 нм. Концентрацию HSP 70 в образцах рассчитывают в соответствии со стандартной (калибровочной) кривой.

Концентрацию антигена рассчитывают путем экстраполяции полученных данных на калибровочный график, построенный по результатам анализа с серией Стандартов, и выражают в нг/мл (Инструкция к набору ELISA для определения HSP 70 методом ИФА).

Данный способ апробирован при обследовании 56 пациентов с БП, 15 пациентов с БДТЛ и 15 здоровых лиц.

Примеры конкретного применения.

Пример №1. Больная Р., 85 года. Пенсионер. Предъявляет жалобы на видения в виде людей и животных, непостоянное дрожание рук, нарушение сна, медлительность. Данные жалобы беспокоят в течение 5 лет, вероятно, после перенесенной ковид инфекции, когда появилось непостоянное дрожание рук, затем в течение года периодически появлялись галлюцинаци. В неврологическом статусе: По ЧМН без очаговой симптоматики. Не постоянный тремор покоя 0,5-1 б, симметричный. Тонус мышц пластический симметрично 0,5 б. Проба Тевенара отрицательная. Сухожильные рефлексы симметричные. Расстройств чувствительности нет. В позе Ромберга неустойчива. Координаторные пробы выполняет удовлетворительно с обеих сторон. Шкала когнитивных оценки MOCA-24 балла, MMSE-25 баллов. Оценка уровня апатии - 22 балла. Количественное содержание HSP 70 в сыворотке крови составило 22,35 нг/мл.

Диагноз: Другие уточненные нейродегенеративные заболевания. Болезнь диффузных телец Леви. Когнитивные и психопатологические нарушения.

Пример №2. Больная Ц., 83 года. Предъявляет жалобы на скованность, медлительность, дрожание в руках, боль в плечах, слюнотечение, запоры, навязчивые движения в конечностях на фоне приема леводопы. Данные жалобы появились приблизительно в марте 2012 года. По месту жительства установлен диагноз Болезнь Паркинсона, смешанная форма, направлена для консультации в центр экстрапирамидных расстройств. В неврологическом статусе: по ЧМН без очаговой симптоматики. Гипомимия. Олигобрадикинезия. Тремор покоя 1.5 баллов в левой руке, 1б в правой руке. Тонус мышц повышен по пластическому типу, больше слева. Проба Тевенара положительная. Равномерно оживлены все сухожильные рефлексы, патологических знаков нет. Парезов нет. Чувствительных расстройств нет. Координаторные пробы выполняет удовлетворительно. Пошатывается в позе Ромберга. Шкала когнитивных оценки MOCA-26 баллов, MMSE-27 баллов. Оценка уровня апатии - 29 баллов. Количественное содержание HSP 70 в сыворотке крови составило 6,079 нг/мл.

Диагноз: Болезнь Паркинсона, смешанная форма, 4 ст. по Хен-Яру. Постуральные нарушения, падения. Вегетативная недостаточность (запоры, сиалорея).

Пример №3. Пациентка П., 68 лет. Предъявляет жалобы на дрожание головы, нижней челюсти и пальцев левой руки, усиливающееся при волнении; незначительная скованность в левых конечностях. Из анамнеза известно, что дрожание в левых конечностях, скованность, запоры с 2016 г. В неврологическом статусе: по ЧМН без очаговой симптоматики. Тремор покоя выраженный в левой руке, умеренный в левой ноге, тонус повышен по пластическому типу больше слева, пробы на гипокинезию положительные, больше слева; адиадохокинез. Проба Тевенара отрицательная. Равномерно оживлены все сухожильные рефлексы, патологических знаков нет. Парезов нет. Чувствительных расстройств нет. Координаторные пробы выполняет удовлетворительно. Пошатывается в позе Ромберга.

Шкала когнитивных оценки MOCA-26 баллов, MMSE-30 баллов. Оценка уровня апатии - 26 баллов. Количественное содержание HSP 70 в сыворотке крови составило 20,52 нг/мл.

Диагноз: Болезнь Паркинсона, смешанная форма, 2 ст. по Хен-Яру.

Пример №4. Пациент К., 65 лет. Жалоб на момент осмотра не предъявляет, дрожание и скованность, снижение памяти отрицает.

В неврологическом статусе: Тонус мышц не изменен Равномерно оживлены все сухожильные рефлексы, патологических знаков нет. Парезов нет. Чувствительных расстройств нет. Координаторные пробы выполняет удовлетворительно. В позе Ромберга устойчива.

Нейропсихологическое тестирование: проведена оценка уровня депрессии по шкале CES-D - 4 балла. Оценка реактивной тревожности по шкале Спилбергера 32 балла, личностной 37 баллов. Шкала когнитивных оценки MOCA-28 баллов, MMSE-30 баллов. Оценка уровня апатии-21 баллов. Количественное содержание HSP 70 в сыворотке крови составило 3,083 нг/мл. Опросник Вейна - 11 баллов.

Диагноз: на момент осмотра данных за экстрапирамидную патологию нет.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечит повышение точности дифференциальной диагностики БП и БДТЛ, а его использование в клинической практике врача-невролога позволит сократить срок постановки диагноза и начать проведение своевременной адекватной терапии.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, лабораторной диагностике, и может быть использовано для дифференциальной диагностики болезни Паркинсона и болезни диффузных телец Леви (БДТЛ). Осуществляют забор крови для определения лабораторных данных. У пациента в крови методом твердофазного иммуноферментного анализа определяют количественное содержание белков теплового шока 70 – heat shock proteins 70 (HSP 70), нг/мл. При значении HSP 70 менее или равно 4,9 нг/мл диагностируют отсутствие болезни Паркинсона и болезни БДТЛ. При его значении от 4,91 до 21,9 нг/мл диагностируют болезнь Паркинсона. При значении более 21,9 нг/мл – болезнь диффузных телец Леви. Способ обеспечивает возможность повышения точности дифференциальной диагностики болезни Паркинсона и БДТЛ, объективизации и стандартизации, простоты исполнения за счет использования достоверного лабораторного критерия - определения количественного содержания HSP 70 в сыворотке периферической крови пациента методом твердофазного иммуноферментного анализа. 4 пр.

Способ дифференциальной диагностики болезни Паркинсона и болезни диффузных телец Леви (БДТЛ), включающий забор крови для определения лабораторных данных, характеризующийся тем, что у пациента в крови методом твердофазного иммуноферментного анализа определяют количественное содержание белков теплового шока 70 – heat shock proteins 70 (HSP 70), нг/мл, и при значении HSP 70 менее или равно 4,9 нг/мл диагностируют отсутствие болезни Паркинсона и болезни БДТЛ, при его значении от 4,91 до 21,9 нг/мл диагностируют болезнь Паркинсона, при значении более 21,9 нг/мл – болезнь диффузных телец Леви.