СПОСОБ СОЗДАНИЯ ОРТОТОПИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ САРКОМЫ МЯГКИХ ТКАНЕЙ ЧЕЛОВЕКА Российский патент 2025 года по МПК A61B17/00 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии, и касается способа трансплантации фрагмента саркомы мягких тканей (СМТ) человека мышам линии Balb/c Nude для получения ортотопической пациентоподобной модели, имеющей структурные и физиологические особенности, отражающие схожую картину формирования опухолевого поражения костей у человека.

Согласно текущей классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в настоящее время существует более 50 различных подтипов сарком мягких тканей (СМТ), и наиболее распространенными агрессивными опухолями являются липосаркома, лейомиосаркома и недифференцированная плеоморфная саркома (см. Poon E., Quek R. Soft tissue sarcoma in Asia // Chin Clin Oncol. - 2018. - Т. 7, №4. - С. 46).

Изучение особенностей сарком для лучшего понимания течения заболевания является актуальным на сегодняшний день.

Из литературных источников известен способ создания модели СМТ у мышей линии BALB/c путем подкожной инъекции клеток саркомы мягких тканей мыши CCRF S-180II в спину мышам в количестве 2-4×10⁵ клеток в объеме 0,2 мл питательной среды (см. Kasama F., Tsuchie H., Nagasawa H., Hongo M., Kasukawa Y., Nozaka K., Kudo D., Shoji R., Igarashi S., Harata S., Okamoto K., Oya K., Miyakoshi N. Effects of Soft Tissue Sarcoma and Doxorubicin on Bone Metabolism in Mice. In Vivo. 2023 Jul-Aug; 37 (4): 1532-1539. doi: 10.21873/invivo.13238. PMID: 37369484; PMCID: PMC10347941). Преимуществом данного способа является получение большого количества животных-опухоленосителей. Недостатком является сайт трансплантации и опухолевые клетки, которые являются мышиными, а не человеческими, что может нести неинформативную характеристику опухоли для дальнейших клинических исследований.

Так же, известен способ создания ортотопической трансплантации остеосаркомы (ОС) человека в большеберцовую кость мышам линии Balb/c Nude (см. Inoue M. et al. Trabectedin suppresses osteosarcoma pulmonary metastasis in a mouse tumor xenograft model //Journal of Orthopaedic Research®. - 2022. - Т. 40. - №4. - С. 945-953). Для достижения поставленной цели мышам либо на правом, либо на левом бедре делали разрез кожи размер 8 мм, далее лапу сгибали в коленном суставе, для того чтобы обнажить четырехглавую мышцу и икроножную мышцу через разрез. Мышцы также были рассечены. Затем лезвием диаметром 5 мм прокалывали проксимальный отдел большеберцовой кости. После того как был сделан прокол вводили лезвие в кость на 2,5 мм, вращали в несколько оборотов для создания отверстия в кости. Таким образом, образовывалось отверстие диаметром 1 мм и далее помещали фрагмент опухоли, размером соответствующему образованному отверстию. Последним этапом проводили послойное ушитие операционной раны. Преимуществом способа является отражение более точной клинической картины модели опухоли, имитируя заболевание человека с ОС. Однако, на наш взгляд, трудоёмкий процесс трансплантации, небольшой объем опухолевого фрагмента, что может снизить процент его приживления, а вследствие этого и роста опухолевого узла, сложность определения объемов роста опухоли, являются недостатками.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является разработка способа, позволяющего создавать ортотопическую модель саркомы мягких тканей человека у мышей линии Balb/c Nude.

Технический результат изобретения достигается тем, что после удаления саркомы мягких тканей производят визуальную ревизию кровоснабжающих ее сосудов, выделяют фрагмент опухоли на сосудистой ножке, артерии и вене, отмывают фрагмент от крови, используя физиологический раствор, затем кустодиол, далее выполняют разрез кожи параллельно сосудисто-нервному пучку на внутренней поверхности бедра мыши, размером от тазобедренного сустава до коленного сустава животного, выделяют сосудисто-нервный пучок бедра на максимальном протяжении до уровня коленного сустава, пересекают бедренную кость в верхней трети, а на уровне средней трети бедра сосудистую ножку опухоли сшивают с бедренными артерией и веной животного, используя лигатуры 8.0, микрохирургический инструментарий, операционный микроскоп, укрывают пересаженную опухоль кожным лоскутом, накладывают кожные швы.

Приводим фигуры для лучшего понимания способа.

На Фиг.1 изображено состояние раны на бедре животного после разреза кожи и выделения сосудисто-нервного пучка.

На Фиг. 2 изображено сшивание бедренной артерии с культей артерии опухоли, стрелка на фигуре указывает на узел завязанного шва.

На Фиг. 3 изображено состояние тканей опухоли без признаков ишемии после наложения сосудистых швов между бедренной артерией и артерией опухоли, бедренной веной и веной опухоли.

На Фиг. 4 изображено состояние культи бедра с опухолью, пересаженной с формированием сосудистой ножки, над опухолью сшиты кожные лоскуты.

Способ осуществляется следующим образом.

Эксперимент проводится на мышах линии Balb/c Nude. Для проведения хирургической манипуляции животных вводят в наркоз. Для премедикации используют препарат ксилазин концентрацией 20 мг/кг. Наркотизируют мышей золетилом в концентрации 50 мг/кг (см. патент на изобретение RU №2712916, опубл. 03.02.2020, Бюл. №4).

После удаления саркомы мягких тканей производят визуальную ревизию кровоснабжающих ее сосудов. Выделяют фрагмент опухоли на сосудистой ножке, артерии и вене, отмывают его сосуды от крови, используя физиологический раствор и кустодиол. Одновременно выполняют разрез кожи параллельно сосудисто-нервному пучку на внутренней поверхности бедра мыши, размером от тазобедренного сустава до коленного сустава животного. Затем выделяют сосудисто-нервный пучок бедра на максимальном протяжении до уровня коленного сустава. Пересекают бедренную кость в верхней трети. Сосудисто-нервный пучок пересекают на уровне средней трети бедра. Сшивают сосудистую ножку опухоли с бедренными артерией и веной животного, артерию с артерией, вену с веной, используя лигатуры 8.0, микрохирургический инструментарий, операционный микроскоп. Укрывают пересаженную опухоль кожным лоскутом, накладывают кожные швы.

Приводим пример применения способа.

Для проведения хирургической манипуляции мышь линии Balb/c Nude вводят в наркоз. Для премедикации используют препарат ксилазин концентрацией 20 мг/кг. Наркотизируют мышь золетилом в концентрации 50 мг/кг (см. патент на изобретение RU №2712916, опубл. 03.02.2020, Бюл. №4). Удаляют саркому мягких тканей бедра мыши. После удаления саркомы мягких тканей производят визуальную ревизию кровоснабжающих ее сосудов. Выделяют фрагмент опухоли на сосудистой ножке, артерии и вене, отмывают его сосуды от крови, используя физиологический раствор и затем кустодиол. Одновременно выполняют разрез кожи параллельно сосудисто-нервному пучку на внутренней поверхности бедра мыши, размером от тазобедренного сустава до коленного сустава животного. Затем выделяют сосудисто-нервный пучок бедра на максимальном протяжении до уровня коленного сустава. Пересекают бедренную кость в верхней трети. Сосудисто-нервный пучок пересекают на уровне средней трети бедра. Сшивают сосудистую ножку опухоли с бедренными артерией и веной животного, артерию с артерией, вену с веной, используя лигатуры 8.0, микрохирургический инструментарий, операционный микроскоп. Укрывают пересаженную опухоль кожным лоскутом, накладывают кожные швы.

Данным способом была проведена трансплантация 26 мышам.

Технико-экономическая эффективность данного способа заключается в возможности создания ортотопической пациентоподобной модели СМТ человека на мышах линии Balb/c Nude для дальнейшего изучения патогенеза заболевания. Данная модель наиболее точно отражает особенности онкогенеза за счёт кровоснабжения опухоли через сосудистую ножку, а также за счет сохранения не только опухолевой ткани, но и зоны по ходу кровоснабжающих сосудов.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии. После удаления саркомы мягких тканей производят визуальную ревизию кровоснабжающих ее сосудов, выделяют фрагмент опухоли на сосудистой ножке, артерии и вене. Выполняют разрез кожи параллельно сосудисто-нервному пучку на внутренней поверхности бедра мыши размером от тазобедренного сустава до коленного сустава животного. Выделяют сосудисто-нервный пучок бедра до уровня коленного сустава, пересекают бедренную кость в верхней трети, а на уровне средней трети бедра сосудистую ножку опухоли сшивают с бедренными артерией и веной животного. Укрывают пересаженную опухоль кожным лоскутом, накладывают кожные швы. Способ позволяет создать ортотопическую пациентоподобную модель саркомы мягких тканей (СМТ) человека, имеющую структурные и физиологические особенности, отражающие схожую картину формирования опухолевого поражения костей, для дальнейшего изучения патогенеза заболевания. 4 ил., 1 пр.

Способ создания ортотопической модели саркомы мягких тканей человека, заключающийся в том, что после удаления саркомы мягких тканей производят визуальную ревизию кровоснабжающих ее сосудов, выделяют фрагмент опухоли на сосудистой ножке, артерии и вене, отмывают фрагмент от крови, используя физиологический раствор, затем кустодиол, далее выполняют разрез кожи параллельно сосудисто-нервному пучку на внутренней поверхности бедра мыши размером от тазобедренного сустава до коленного сустава животного, выделяют сосудисто-нервный пучок бедра до уровня коленного сустава, пересекают бедренную кость в верхней трети, а на уровне средней трети бедра сосудистую ножку опухоли сшивают с бедренными артерией и веной животного, используя лигатуры 8.0, микрохирургический инструментарий, операционный микроскоп, укрывают пересаженную опухоль кожным лоскутом, накладывают кожные швы.