КОМБИНАЦИИ BI853520 С ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМИ ПРЕПАРАТАМИ Российский патент 2025 года по МПК A61K31/506 A61K31/337 A61K31/704 A61K33/243 A61K9/127 A61P35/00 

Настоящая заявка претендует на приоритет от Китайской патентной заявки №202010080757.1, поданной 5 февраля 2020 г., содержание которой включено сюда путем ссылки в качестве части настоящей заявки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к области фармацевтической химии. В частности, настоящее изобретение касается применения BI853520 или его фармацевтически приемлемых солей при изготовлении лекарственных средств для лечения опухолей в комбинации с химиотерапевтическими препаратами.

Уровень техники

Рак является одним из самых серьезных заболеваний, угрожающих жизни и здоровью людей. Ежегодно во всем мире от рака умирает семь миллионов человек. В настоящее время существует четыре основных метода лечения рака: хирургия, медикаментозная терапия, лучевая терапия и иммунотерапия, наряду со вспомогательной терапией. Из них медикаментозная терапия рака включает прицельную лекарственную терапию и химиотерапию. Среди современных методов лечения прицельная лекарственная терапия и химиотерапия по-прежнему занимают важное место и являются важными стандартными методами лечения рака. Например, комбинированная химиотерапия карбоплатином/паклитакселом является первоочередным режимом лечения рака яичников, а такие химиотерапевтические препараты, как паклитаксел, также незаменимы при лечении рака желудка. Однако самой большой проблемой прицельной лекарственной терапии и монотерапии химиотерапевтическими препаратами является лекарственная устойчивость, в том числе спонтанная лекарственная устойчивость и адаптивная лекарственная устойчивость, что приводит к низкой общей частоте ремиссии и ограниченной продолжительности ремиссии.

Таким образом, поиски способа повышения эффективности монотерапии при химиотерапии и дальнейшего преодоления проблемы лекарственной устойчивости являются технической проблемой, которая настоятельно требует решения при лечении рака.

Сущность изобретения

В одном аспекте настоящего изобретения предусмотрено применение BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственных средств для лечения опухоли в комбинации с химиотерапевтическими препаратами, причем BI853520 представляет собой 2-фтор-5-метокси-4-[(4-(2-метил-3-оксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-окси)-5-трифторметил-пиримидин-2-ил)амино]-N-(1-метил-пиперидин-4-ил)бензамид (см. WO 2010/058032) и имеет следующую структуру:

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, таксан или цисплатин.

Необязательно опухоль не включает опухоли с мутантным NRAS.

Необязательно опухоль представляет собой острый лимфолейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, злокачественную лимфому, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, саркому мягких тканей, остеосаркому, рабдомиосаркому, саркому Юинга, бластому, нейробластому, рак мочевого пузыря, рак щитовидной железы, рак простаты, плоскоклеточную карциному головы и шеи, рак носоглотки, рак пищевода, рак яичек, рак желудка, рак печени, рак поджелудочной железы или меланому.

Необязательно опухоль представляет собой рак простаты, рак пищевода, рак яичников, рак желудка или рак легких. Рак легких предпочтительно представляет собой плоскоклеточный рак легких.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является PLD.

Необязательно опухоль представляет собой рак яичников, в особенности устойчивый к платине рак яичников.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является таксан, в особенности доцетаксел или паклитаксел.

Необязательно опухоль представляет собой рак простаты, рак пищевода или рак желудка.

Необязательно фармацевтически приемлемой солью BI853520 является тартрат.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрено применение BI‌или его фармацевтически приемлемой соли и химиотерапевтического препарата при изготовлении лекарственных средств для лечения опухолей, причем BI853520 имеет следующую структурную формулу:

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, таксан или цисплатин.

Необязательно опухоли не включают опухоли с мутантным NRAS.

Необязательно опухоль представляет собой острый лимфолейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, злокачественную лимфому, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, саркому мягких тканей, остеосаркому, рабдомиосаркому, саркому Юинга, бластому, нейробластому, рак мочевого пузыря, рак щитовидной железы, рак простаты, плоскоклеточную карциному головы и шеи, рак носоглотки, рак пищевода, рак яичек, рак желудка, рак печени, рак поджелудочной железы или меланому.

Необязательно опухоль представляет собой рак простаты, рак пищевода, рак яичников, рак желудка или рак легких. Рак легких предпочтительно представляет собой плоскоклеточный рак легких.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является ПЛД.

Необязательно опухоль представляет собой рак яичников, в особенности устойчивый к платине рак яичников.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является таксан, в особенности доцетаксел или паклитаксел.

Необязательно опухоль представляет собой рак простаты, рак пищевода или рак желудка.

Необязательно фармацевтически приемлемой солью BI853520 является тартрат.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрены фармацевтические комбинации, включающие BI853520 или его фармацевтически приемлемую соль и химиотерапевтические препараты, причем BI853520 имеет следующую структурную формулу:

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, таксан или цисплатин.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является ПЛД.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является таксан, в особенности доцетаксел или паклитаксел. Необязательно фармацевтически приемлемой солью BI853520 является тартрат.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ лечения опухолей, который включает введение субъектам BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли и химиотерапевтического препарата, причем BI853520 имеет следующую структурную формулу:

Необязательно способ включает введение субъектам BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли и эффективного количества химиотерапевтического препарата.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, таксан или цисплатин.

Необязательно предпочтительно вводится эффективное количество BI853520 и эффективное количество ПЛД, таксана или цисплатина.

Необязательно опухоли не включают опухоли с мутантным NRAS.

Необязательно опухоль представляет собой острый лимфолейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, злокачественную лимфому, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, саркому мягких тканей, остеосаркому, рабдомиосаркому, саркому Юинга, бластому, нейробластому, рак мочевого пузыря, рак щитовидной железы, рак простаты, плоскоклеточную карциному головы и шеи, рак носоглотки, рак пищевода, рак яичек, рак желудка, рак печени, рак поджелудочной железы или меланому.

Необязательно опухоль представляет собой рак простаты, рак пищевода, рак яичников, рак желудка или рак легких. Рак легких предпочтительно представляет собой плоскоклеточный рак легких.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является ПЛД.

Необязательно опухоль представляет собой рак яичников, в особенности устойчивый к платине рак яичников.

Необязательно химиотерапевтическим препаратом является таксан, в особенности доцетаксел или паклитаксел.

Необязательно опухоль представляет собой рак простаты, рак пищевода или рак желудка.

Необязательно BI853520 или его фармацевтически приемлемая соль и химиотерапевтический препарат вводятся одновременно, поочередно или последовательно.

Необязательно фармацевтически приемлемой солью BI853520 является тартрат.

Краткое описание фигур

На фиг. 1a представлен средний объем опухолей на мышиной модели рака яичников человека (клетки линии TOV-21G) с BI 853520 и ПЛД по отдельности или в комбинации, показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: группа A (контрольная группа); группа B (группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 12,5 мг/кг); группа C (группа с введением ПЛД один раз в неделю в дозе 1 мг/кг); и группа D (группа с комбинацией BI 853520 и ПЛД, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 12,5 мг/кг, а ПЛД вводили один раз в неделю в дозе 1 мг/кг); соответственно.

На фиг. 1b представлен средний объем опухолей на мышиной модели рака яичников человека (клетки линии SKOV-3) с BI 853520 и ПЛД по отдельности или в комбинации, показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: группа A (контрольная группа); группа B (группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 50 мг/кг); группа C (группа с введением ПЛД один раз в неделю в дозе 5 мг/кг); и группа D (группа с комбинацией BI 853520 и ПЛД, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 50 мг/кг, а ПЛД вводили один раз в неделю в дозе 5 мг/кг); соответственно.

На фиг. 1c представлен средний объем опухолей на мышиной модели рака яичников человека (клетки линии A2780) с BI 853520 и ПЛД по отдельности или в комбинации, показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: группа A (контрольная группа); группа B (группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 12,5 мг/кг); группа C (группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 25 мг/кг); группа D (группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 50 мг/кг); группа E (группа с введением ПЛД один раз в неделю в дозе 5 мг/кг); и группа F (группа с комбинацией BI 853520 и ПЛД, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 50 мг/кг, а ПЛД вводили один раз в неделю в дозе 5 мг/кг); соответственно.

На фиг. 2 представлена кинетика роста опухолей на модели CTG-1166, показывающая противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: контрольная группа; группа с введением BI 853520 два раза в день в дозе 50 мг/кг; группа с введением ПЛД раз в неделю в дозе 3 мг/кг; группа с комбинацией BI 853520 и ПЛД, причем BI 853520 вводили два раза в день в дозе 50 мг/кг, а ПЛД вводили один раз в неделю в дозе 3 мг/кг; и группа с комбинацией карбоплатина и паклитаксела, причем карбоплатин вводили один раз в неделю в течение трех недель в дозе 25 мг/кг, а паклитаксел вводили один раз в неделю в течение трех недель в дозе 20 мг/кг; соответственно.

На фиг. 3 представлен объем опухолей на PDX-модели с BI853520 и доцетакселем, показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: контрольная группа 1/контрольная группа 2; группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 50 мг/кг; группа с введением доцетаксела один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; и группа с комбинацией BI 853520 и доцетаксела, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 50 мг/кг, а доцетаксел вводили один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; соответственно.

На фиг. 4 показан объем опухолей (мм³) на «голой» мышиной ксенотрансплантатной модели плоскоклеточного рака легких человека (клетки линии NCI-H520), показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: контрольная группа; группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 50 мг/кг; группа с введением цисплатина один раз в неделю в дозе 5 мг/кг; и группа с комбинацией BI 853520 и цисплатина, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 50 мг/кг, а цисплатин вводили один раз в неделю в дозе 5 мг/кг; соответственно.

На фиг. 5 показан объем опухолей (мм³) на «голой» мышиной ксенотрансплантатной модели рака пищевода человека (клетки линии KYSE-270), показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: контрольная группа; группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 50 мг/кг; группа с введением паклитаксела один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; и группа с комбинацией BI 853520 и паклитаксела, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 50 мг/кг, а паклитаксел вводили один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; соответственно.

На фиг. 6 показан объем опухолей (мм³) на «голой» мышиной ксенотрансплантатной модели рака пищевода человека (клетки линии KYSE-270), показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: контрольная группа; группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 50 мг/кг; группа с введением доцетаксела один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; и группа с комбинацией BI 853520 и доцетаксела, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 50 мг/кг, а доцетаксел вводили один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; соответственно.

На фиг. 7 показан объем опухоли (мм³) на «голой» мышиной ксенотрансплантатной модели рака предстательной железы человека (клеточная линия РС-3), демонстрирующий противоопухолевый эффект различных опытных групп. Опытные группы: контрольная группа; группе с введением BI 853520 один раз в день в дозе 25 мг/кг; группа с введением доцетаксела один раз в неделю в дозе 7,5 мг/кг; и группа с комбинацией BI 853520 и доцетаксела, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 25 мг/кг, а доцетаксел вводили один раз в неделю в дозе 7,5 мг/кг; соответственно.

На фиг. 8 показан объем опухолей (мм³) на «голой» мышиной ксенотрансплантатной модели рака желудка человека (клетки линии HS 746T), показывающий противораковое действие в различных опытных группах. Опытные группы: контрольная группа; группа с введением BI 853520 один раз в день в дозе 50 мг/кг; группа с введением доцетаксела один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; и группа с комбинацией BI 853520 и доцетаксела, причем BI 853520 вводили один раз в день в дозе 50 мг/кг, а доцетаксел вводили один раз в неделю в дозе 10 мг/кг; соответственно.

Подробное описание изобретения

Следующие примеры приводятся для дополнительной иллюстрации настоящего изобретения. Следует иметь в виду, что эти примеры служат только для иллюстрации настоящего изобретения, а не для ограничения его объема.

Экспериментальные методы без конкретных условий в следующих примерах могут выполняться при стандартных условиях для реакций этого типа или при условиях, предложенных производителями.

Экспериментальные материалы и реагенты, используемые в следующих примерах, могут быть получены из коммерческих источников, если не указано иначе.

Настоящее изобретение касается применения BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственных средств для лечения опухолей в комбинации с химиотерапевтическими препаратами. Настоящее изобретение также касается применения BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли и химиотерапевтического препарата при изготовлении лекарственного средства для лечения опухолей. Настоящее изобретение также касается способа лечения опухолей, который включает введение субъектам эффективного количества BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли и химиотерапевтического препарата.

Термин “химиотерапия” в настоящем изобретении означает системное лечение злокачественных опухолей, при котором химиотерапевтические препараты распределяются в большинство органов и тканей по всему телу через кровоток после введения химиотерапевтического препарата перорально, внутривенно или через полость тела. Химиотерапевтические препараты могут действовать на различных фазах роста и размножения опухолевых клеток, подавляя или уничтожая их. Это один из самых эффективных методов лечения злокачественных опухолей. В некоторых воплощениях химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, доцетаксел, паклитаксел или цисплатин.

В некоторых воплощениях опухоли не включают опухоли с мутантным NRAS. В некоторых воплощениях опухоли выбирают из острого лимфолейкоза, острого миелоцитарного лейкоза, злокачественной лимфомы, рака молочной железы, недифференцированной мелкоклеточной бронхолегочной карциномы, немелкоклеточной бронхолегочной карциномы, немелкоклеточного рака легких, плоскоклеточного рака легких, рака яичников, саркомы мягких тканей, остеосаркомы, рабдомиосаркомы, саркомы Юинга, бластомы, нейробластомы, рака мочевого пузыря, рака щитовидной железы, рака простаты, плоскоклеточной карциномы головы и шеи, рака носоглотки, рака пищевода, рака яичек, рака желудка, рака печени, рака поджелудочной железы и меланомы. В некоторых воплощениях опухоль представляет собой рак яичников, рак желудка или плоскоклеточный рак легких.

В другом воплощении настоящего изобретения химиотерапевтическим препаратом является ПЛД.

Термин “ПЛД” в настоящем изобретении означает пегилированный липосомальный доксорубицин, также известный как доксорубициновые липосомы.

Термины “комбинация”, “комбинированная терапия” и “комбинированное введение” в настоящем изобретении означают применение двух или нескольких препаратов для лечения одного заболевания. В некоторых воплощениях BI853520 или его фармацевтически приемлемая соль применяется в комбинации с химиотерапевтическим препаратом, что может включать и другой(ие) препарат(ы). В некоторых воплощениях BI853520 или его фармацевтически приемлемая соль и химиотерапевтический препарат вводятся одновременно, поочередно или последовательно.

Термин “NRAS” в настоящем изобретении означает онкоген, который является членом семейства онкогенов RAS, включающего еще два гена: KRAS и HRAS. Эти гены играют важную роль в делении клеток, дифференцировке клеток и апоптозе.

Термин “мутация NRAS” в настоящем изобретении означает, что когда у гена NRAS возникает патогенная мутация, то кодируемый им белок N-Ras будет находиться в состоянии непрерывной активации, приводящей к неконтролируемой пролиферации клеток и образованию опухолей.

В настоящем изобретении термин “фармацевтически приемлемый” означает нетоксичный, биологически допустимый и пригодный для введения субъектам.

В настоящем изобретении термин “фармацевтически приемлемая соль” означает такую соль, которая нетоксична, биологически допустима и пригодна для введения субъектам. Фармацевтически приемлемые соли соединений означают такие соли с кислотами, которые нетоксичны, биологически переносимы и пригодны для введения субъектам, включая, без ограничения: соли с кислотами, образованные соединениями с неорганическими кислотами, как-то гидрохлориды, гидробромиды, карбонаты, бикарбонаты, фосфаты, сульфаты, сульфиты, нитраты и др., а также соли с кислотами, образованные соединениями с органическими кислотами, как-то формиаты, ацетаты, малаты, малеаты, фумараты, тартраты, сукцинаты, цитраты, лактаты, метансульфонаты, п-толуолсульфонаты, 2-гидроксиэтансульфонаты, бензоаты, салицилаты, стеараты и соли, образованные с алкан-дикарбоновыми кислотами формулы HOOC-(CH₂)_n-COOH (где n равно 0-4) и др. Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены стандартными методами, хорошо известными в данной области, к примеру, при реакции достаточно основного соединения типа амина с подходящей кислотой, образующей физиологически приемлемый анион. В некоторых воплощениях соль представляет собой соль тартрата.

В настоящем изобретении термин “субъект” относится к млекопитающим и немлекопитающим. Млекопитающие означают любых представителей класса млекопитающих, включая, без ограничения, людей; других приматов типа шимпанзе и других человекообразных обезьян и других обезьян; сельскохозяйственных животных типа крупного рогатого скота, лошадей, овец, коз и свиней; домашних животных типа кроликов, собак и кошек; лабораторных животных, включая грызунов типа крыс, мышей и морских свинок; и т.п. Примеры немлекопитающих включают, без ограничения, птиц и т.п. Термин “субъект” не означает определенный возраст или пол. В некоторых воплощениях субъектом является человек.

Термин “лечить”, “лечащий” или “лечение” в настоящем изобретении означает получение требуемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть терапевтическим и включает частичное или существенное достижение одного или нескольких из следующего: частичное или полное снижение степени заболевания, состояния или синдрома; улучшение клинических симптомов или показателей, связанных с заболеванием; либо замедление, подавление или снижение вероятности прогрессирования заболевания, состояния или синдрома.

Термин “эффективное количество” в настоящем изобретении означает такое количество BI853520 (или его фармацевтически приемлемой соли) либо химиотерапевтического препарата (в частности ПЛД, доцетаксела или цисплатина), которое достаточно для уменьшения или ослабления тяжести, продолжительности, прогрессирования или возникновения заболевания или состояния, для замедления или прекращения прогрессирования заболевания или состояния, для нормализации заболевания или состояния или замедления рецидива или прогрессирования симптомов либо для усиления или улучшения терапевтического эффекта другой терапии. Точное количество BI853520 (или его фармацевтически приемлемой соли) и химиотерапевтического препарата (особенно ПЛД, доцетаксела или цисплатина) при введении субъектам будет зависеть от различных факторов, таких как данное средство или соединение, фармацевтический препарат, способ введения, тип заболевания, состояние, личность субъекта или лица, проходящего лечение и т.д., но обычно оно может быть установлено специалистами в данной области. Например, определение эффективного количества также будет зависеть от степени, тяжести и типа пролиферации клеток. Специалист сможет определить подходящую дозировку, исходя из этих и других факторов. При совместном введении с другими терапевтическими средствами, к примеру, при совместном введении с противораковыми средствами, “эффективное количество” любого другого терапевтического средства будет зависеть от типа используемого средства. Соответствующие дозы одобренных терапевтических средств известны и могут быть подобраны специалистами в данной области в зависимости от состояния субъекта, типа подлежащего лечению заболевания и количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли. В тех случаях, когда количество не указано явно, следует предполагать, какое количество является эффективным количеством. Эффективная доза BI853520 (или его фармацевтически приемлемой соли) может составлять от 10 мкг до 2000 мг. Этот пример не является ограничительным. Эффективные количества химиотерапевтических препаратов (в особенности ПЛД, доцетаксела или цисплатина) известны специалистам в данной области.

BI853520 (или его фармацевтически приемлемые соли) можно вводить любым подходящим способом введения. Подходящие способы включают пероральное, внутривенное, внутримышечное или подкожное введение субъектам.

Так, BI853520 (или его фармацевтически приемлемые соли) можно вводить перорально с фармацевтически приемлемым носителем типа инертного разбавителя или всасывающегося пищевого носителя. Их можно заключать в желатиновые капсулы с твердой или мягкой оболочкой, прессовать в таблетки или смешивать непосредственно с пищей пациента. Для перорального терапевтического введения соединение или его фармацевтически приемлемая соль может находиться в сочетании с одним или несколькими эксципиентами и применяться в виде таблеток для приема внутрь, буккальных таблеток, леденцов, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов или облаток. Такие препараты содержат эффективное количество BI853520 (или его фармацевтически приемлемой соли).

Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и т.п. также могут содержать: связующие вещества типа трагаканта, гуммиарабика, крахмала или желатина; наполнители типа дикальцийфосфата; разрыхлители типа кукурузного крахмала, картофельного крахмала, альгиновой кислоты и др.; смазывающие вещества типа стеарата магния; или такие подсластители, как сахароза, фруктоза, лактоза или аспартам; либо ароматизаторы.

BI853520 (или его фармацевтически приемлемые соли) также можно вводить внутривенно или внутрибрюшинно посредством инфузии или инъекции. Растворы BI853520 (или его фармацевтически приемлемых солей) и химиотерапевтических препаратов (в частности ПЛД, доцетаксела или цисплатина) можно приготовить на воде, необязательно в смеси с нетоксичным поверхностно-активным веществом.

Примеры лекарственных дозовых форм для инъекций или вливания включают: стерильные водные растворы, дисперсии или стерильные порошки, содержащие активный ингредиент и подходящие для приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций или вливания для немедленного использования. В любом случае конечная дозовая форма должна быть стерильной, жидкой и стабильной в условиях производства и хранения.

Стерильные растворы для инъекций можно приготовить путем введения требуемого количества BI853520 (или его фармацевтически приемлемой соли) в соответствующий растворитель вместе с другими желательными ингредиентами, перечисленными выше, с последующим фильтрованием и стерилизацией. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций предпочтительными методами получения могут быть методы вакуумной сушки и лиофилизации, дающие порошок активного ингредиента вместе с любыми другими желательными ингредиентами, заранее присутствующими, после стерилизации фильтрованием.

Количество BI853520 (или его фармацевтически приемлемой соли) либо химиотерапевтического препарата (в частности ПЛД, доцетаксела или цисплатина) может варьироваться не только в зависимости от выбранной конкретной соли, но также от способа введения, природы подлежащего лечению заболевания, возраста и состояния пациента, и, в конечном счете, на усмотрение лечащего врача или клинициста. Тем не менее, дозировка обычно составляет от 0,1 до 50 мг/кг массы тела в день.

Требуемая доза для удобства может быть представлена в виде разовой дозы или в виде дробных доз для введения через соответствующие интервалы.

Используемые здесь сокращения имеют следующие значения:

ATCC - Американская коллекция типовых культур,

ATV - абсолютный объем опухоли,

BID - вводится два раза в день,

BWL - потеря массы тела,

CV - коэффициент вариации,

CO₂ - двуокись углерода,

CR - полная восприимчивость,

d - дни,

ECACC - Европейская коллекция проверенных клеточных культур,

EDTA - этилендиаминтетрауксусная кислота,

FCS - фетальная телячья сыворотка,

h - час,

kg - килограмм,

IV - внутривенное введение,

IP - внутрибрюшинное введение,

0,5% Natrosol - 0,5% гидроксиэтилцеллюлоза,

mg - миллиграмм,

ml - миллилитр,

mm³ - кубический миллиметр,

MCB - сводный банк клеток,

Mean - среднее значение,

MTD - максимально допустимая доза,

MTV - средний объем опухолей,

N/n - номер образца,

PBS - фосфатно-солевой буфер,

PDX - модель на полученных от пациентов ксенотрансплантатах,

ПЛД - пегилированный липосомальный доксорубицин,

p.o. - перорально,

PR - частичная восприимчивость,

qd/QD - в день,

RPMI 1640 - среда RPMI 1640,

SEM - стандартная ошибка среднего,

TFS - выживаемость без опухолей,

TGI - подавление роста опухолей,

TV - объем опухоли,

WCB - рабочий банк клеток.

Методы противораковых исследований на типичных ксенотрансплантатных моделях

Бестимусные самки мышей BomTac. Приобретали мышей NMRI-Foxn1nu у фирмы Taconic, Дания. После прибытия в виварий мышей акклиматизировали к новой среде не менее 3 дней, прежде чем использовать для опыта. Животных содержали в стандартных условиях (температура 21,5 ± 1,5°C и влажность 55 ± 10%), обеспечивали стандартным кормом и автоклавированной водопроводной водой ad libitum. Для идентификации каждой мыши использовали транспондер Datamars T-IS 8010 FDX-B, имплантированный подкожно в область шеи, и фиксированный считыватель LabMax II. На карточке клетки указывали номер исследования, идентификационный номер животного, уровень дозы соединения, способ введения и график введения доз для животных на протяжении всего исследования.

Для прививания подкожных опухолей собирали раковые клетки человека путем трипсинизации, центрифугировали, промывали и суспендировали в подходящей среде. Затем по 100 мкл клеточной суспензии, содержащей от 5×10⁶ до 1×10⁷ клеток, вводили подкожно в правый бок «голых» мышей (1 укол на мышь). Когда опухоли вырастали до соответствующего размера, мышей случайным образом распределяли в опытную группу или контрольную группу.

BI853520 синтезировали в соответствии со способом из патента WO 2010/058032. Сухой порошок суспендировали в эквимолярном объеме 1M HCl и разбавляли соответствующим объемом 0,5% Natrosol, получая требуемые концентрации для каждого опыта.

Диаметры опухолей измеряли штангенциркулем по три раза в неделю (понедельник, среда и пятница). Объем каждой опухоли [в мм³] рассчитывали по уравнению “объем опухоли = длина × диаметр² × π/6”. Для выявления побочных эффектов обработки ежедневно проверяли мышей на наличие аномалий и измеряли у них вес тела по три раза в неделю (понедельник, среда и пятница). Под конец исследования (примерно через три недели после начала обработки) животных забивали. Во время исследования животных с некрозом опухолей или с опухолями размером более 2000 мм³ забивали досрочно по этическим соображениям.

По окончании опыта проводили статистический анализ параметров объема опухолей и веса тела. Использовали абсолютные значения объема опухолей и изменения веса тела в процентах (относительно исходного веса в 1-й день). Применяли непараметрический подход, рассчитывали количество наблюдений, медианы, минимальные и максимальные значения. Для быстрого обзора возможных эффектов обработки использовали средний объем опухолей для каждой опытной группы T и средний объем опухолей для контрольной группы C для расчета TGI с 1-го дня по день d:

В конце исследования выполняли статистическую оценку параметров объема опухоли и массы тела. Для объема опухоли использовали абсолютные значения. Был использован непараметрический подход, и были рассчитаны количество наблюдений, медианое, минимальное и максимальное значения. Для быстрого обзора возможных эффектов лечения средний объем опухоли для каждой лечебной группы T и средний объем опухоли для контрольной группы C использовали для расчета TGI с 1-го по день d:

TGI с 1-го дня по день d:

где: C₁, T₁ = средний объем опухолей в контрольной группе и опытной группе в начале опыта (день 1),

C_d, T_d = средний объем опухолей в контрольной группе и опытной группе в конце опыта (день d).

Для анализа использовали соответствующие статистические методы. Уровень значимости устанавливали на уровне α=5%. Значения p (скорректированные) менее 0,05 учитывались как статистически значимые отличия между группами, а значения 0,05 ≤ p < 0,10 учитывались как тенденции к отличиям.

Пример 1. Исследование противоракового действия BI 853520 в комбинации с ПЛД на мышиной модели рака яичников человека

Применяли методы противораковых исследований на типичных ксенотрансплантатных моделях. Мышам было примерно 6 недель. В каждой группе было по 7-10 мышей.

Клетки TOV-21G, несущие мутации генов KRAS и PIK3CA, получали из ATCC (CRL-11730). Создавали MCB и WCB по стандарту KG фирмы BI RCV GmbH & Co. Клетки инкубировали в колбах для тканевых культур T175 в среде RPMI 1640 с добавлением L-глутамина, пирувата натрия, заменимых аминокислот и 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки. Клетки инкубировали при 37°C и 5% CO₂.

Клетки A2780, несущие мутации гена PTEN, получали из ECACC (93112519). Создавали MCB и WCB по стандарту KG фирмы BI RCV GmbH & Co. Клетки инкубировали в колбах для тканевых культур T175 в среде RPMI 1640+ Glutamax с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки. Клетки инкубировали при 37°C и 5% CO₂.

Клетки SKOV-3, несущие мутации генов CDKN2, MLH1, PIK3CA и TP53, получали из ATCC (HTB-77). Создавали MCB и WCB по стандарту KG фирмы BI RCV GmbH & Co. Клетки инкубировали в колбах для тканевых культур T175 в среде IMDM с добавлением L-глутамина, заменимых аминокислот и 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки. Клетки инкубировали при 37°C и 5% CO₂.

Клетки A2780 суспендировали в ледяном PBS + 5% FCS и Matrigel со сниженным содержанием фактора роста (1:1) на уровне инокуляции клеток в 5×10⁶ клеток/мл. Клетки TOV-21G суспендировали в ледяном PBS + 5% FCS на уровне инокуляции клеток в 5×10⁶ клеток/мл. Когда появлялись опухоли и достигали 5-8 мм в диаметре, мышей случайным образом распределяли в опытную группу и контрольную группу.

Составы BI853520 имели значения pH от 3 до 4.

ПЛД (Doxil) приобретали у Johnson & Johnson и растворяли в стерильном 5% растворе глюкозы.

Обработку начинали, когда средний объем опухолей составлял от 70 до 110 мм³.

TOV-21G

В контрольной группе было 10 животных и по 7 животных в каждой опытной группе.

A: контрольная группа, 0,5% Natrosol.

B: BI 853520, 12,5 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

C: ПЛД, 1 мг/кг (один раз в неделю, вводили внутривенно болюсом).

D: комбинация B + C.

SKOV-3

В контрольной группе было 10 животных и по 7 животных в каждой опытной группе.

A: контрольная группа, 0,5% Natrosol.

B: BI 853520, 50 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

C: ПЛД, 5 мг/кг (один раз в неделю, вводили внутривенно болюсом).

D: комбинация B + C.

A2780

В контрольной группе и в каждой опытной группе было по 10 животных.

A: контрольная группа, 0,5% Natrosol

B: BI 853520, 12,5 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

C: BI 853520, 25 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

D: BI 853520, 50 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

E: ПЛД, 5 мг/кг (один раз в неделю, вводили внутривенно болюсом).

F: комбинация D + E.

Три опыта ставили по одной и той же методике, но по отдельности. По окончании опыта проводили статистический анализ параметров объема опухолей и веса тела (на 15-й или 22-й день).

В линии клеток А2780 животных 2, 6, 7 и 8 (контрольные значения: 0,5% Natrosol; 0,9% NaCl), животных 12 и 17 (12,5 мг/кг BI 853520) и животное 36 (50 мг/кг BI 853520) забивали по этическим соображениям, так как опухоли у них достигали критического объема.

Каждую дозу исследуемого соединения сравнивали с контрольной группой по одностороннему нисходящему критерию Уилкоксона, принимая снижение объема опухолей в качестве эффекта обработки и потерю веса в качестве побочного эффекта. Сравнивали значения p для объема опухолей (параметра эффективности) и проводили многократную коррекцию по Bonferroni-Holm, тогда как значения p для веса тела (параметра переносимости) не подвергались коррекции, чтобы не упустить возможные побочные эффекты.

TOV-21G

Вес тела у животных в группе A снижался на 1,5% (фиг. 3a; табл. 5), а опухоли у них достигали среднего объема 654 мм³ на 22-й день обработки (фиг. 1a; табл. 1).

В группе B не отмечалось регрессии опухолей при TGI = 67% (p = 0,0023) (фиг. 1a; табл. 1). Вес тела животных повышался на 3,1% (p = 0,9977 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе C составляло 83% (p = 0,002) без регрессии опухолей (фиг. 1a; табл. 1). Вес тела животных повышался на 1,6% (p = 0,9649 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе D составляло 106% (p = 0,0002 в сравнении с группой A; p = 0,0006 в сравнении с группой B; p = 0,0006 в сравнении с группой C), и происходила регрессия опухолей у 6 из 7 животных (фиг. 1a; табл. 1). Вес тела животных повышался на 1,4% (p = 0,9335 в сравнении с группой A; p = 0,1914 в сравнении с группой B; p = 0,5000 в сравнении с группой C) (табл. 2).

Исследование показало, что клетки линии TOV-21G очень чувствительны и к BI 853520, и к ПЛД. Так, оба препарата по отдельности проявляли хорошую эффективность в низких дозах (12,5 мг/кг; 1 мг/кг), но не вызывали регрессии опухолей. Напротив, комбинация двух препаратов приводила к регрессии опухолей у 6 из 7 животных и хорошо переносилась.

SKOV-3

Вес тела в группе A возрастал на 0,3% (табл. 5), а средний объем опухолей достигал 608 мм³ на 22-й день обработки (фиг. 1b; табл. 4).

TGI в группе B составляло 57% (p = 0,0136) без регрессии опухолей (фиг. 1b; табл. 1). Вес тела животных повышался на 5,5% (p = 0,9977 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе C составляло 66% (p = 0,0136) без регрессии опухолей (фиг. 1b; табл. 1). Вес тела животных повышался на 1,5% (p = 0,6302 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе D составляло 90% (p = 0,0003 в сравнении с группой A; p = 0,0070 в сравнении с группами B и C) с регрессией опухоли у 1 из 7 животных (фиг. 1b; табл. 1). Вес тела животных снижался на 1,4% (p = 0,1349 в сравнении с группой A; p = 0,0006 в сравнении с группой B; p = 0,1588 в сравнении с группой C) (табл. 2).

Исследование показало, что клетки линии SKOV-3 менее чувствительны к BI 853520 и к ПЛД, поэтому требовались большие дозы препаратов (50 мг/кг, 5 мг/кг). Комбинированная терапия была значительно более эффективна, чем монотерапия, и неплохо переносилась.

A2780

Вес тела в группе A возрастал на 12,3% (фиг. 1c; табл. 2), а средний объем опухолей достигал 1170 мм³ на 15-й день обработки (фиг. 1c; табл. 1).

TGI в группе B составляло 19% (p = 0,1965) без регрессии опухолей (фиг. 1c; табл. 1). Вес тела животных повышался на 10,6% (p = 0,5251 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе C составляло 83% (p = 0,0134) без регрессии опухолей (фиг. 1c; табл. 1). Вес тела животных повышался на 12,6% (p = 0,4789 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе D составляло 85% (p = 0,0185) без регрессии опухолей (фиг. 1c; табл. 1). Вес тела животных повышался на 10,1% (p = 0,2280 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе E составляло 99% (p <0,0001) с регрессией опухолей у 4 из 10 животных (фиг. 1c; табл. 4). Вес тела животных повышался на 2,7% (p = 0,0156 в сравнении с группой A) (табл. 2).

TGI в группе F составляло 100% (p <0,0001 в сравнении с группой A; p < 0,0001 в сравнении с группой B; p = 0,0376 в сравнении с группой C). Отмечалась регрессия опухолей у 6 из 10 животных (фиг. 1c; табл. 1). Вес тела животных повышался на 3,8% (p = 0,0080 в сравнении с группой A; p = 0,0021 в сравнении с группой B; p = 0,5147 в сравнении с группой C) (табл. 2).

Исследование показало, что на клетках линии A2780 наблюдалась эффективность BI 853520 при средних и высоких уровнях доз (25 мг/кг, 50 мг/кг), но не отмечалось регрессии опухолей. Высокие дозы ПЛД были очень действенны, приводя к регрессии опухолей на 40%. Комбинация BI 853520 и ПЛД приводила к повышению эффективности с регрессией на 60% и при этом хорошо переносилась.

Комбинация BI 853520 и ПЛД проявляла синергические эффекты на моделях рака яичников по всем трем линиям клеток без изменения переносимости.

Таблица 1. Средний объем опухолей

Обработка Дозировка [мг/кг] Режим введения Средний объем опухолей [мм³] Регрессия опухолей TGI [%] TOV-21G A - qd 654 0/10 B 12,5 qd 271 0/7 67 C 1 q7d 178 0/7 83 D 12,5 + 1 qd + q7d 47 6/7 106 SKOV-3 A - qd 608 0/10 B 50 qd 306 0/7 57 C 5 q7d 259 0/7 66 D 50 + 5 qd + q7d 127 1/7 90 A2780 A - qd 1170 0/10 B 12,5 qd 968 0/10 19 C 25 qd 284 0/10 83 D 50 qd 262 0/10 85 E 5 q7d 117 4/10 99 F 50 + 5 qd + q7d 100 6/10 100

Таблица 2. Изменения средней массы тела под конец опыта

Обработка Дозировка [мг/кг] Режим введения Изменение средней массы тела [%] TOV-21G A - qd -1,5 B 12,5 qd +3,1 C 1 q7d +1,6 D 12,5 + 1 qd + q7d +1,4 SKOV-3 A - qd +0,3 B 50 qd +5,5 C 5 q7d +1,5 D 50 + 5 qd + q7d -1,4 A2780 A - qd +12,5 B 12,5 qd +10,6 C 25 qd +12,6 D 50 qd +10,1 E 5 q7d +2,7 F 50 + 5 qd + q7d +3,8

Пример 2. Исследование противоракового действия BI853520 в комбинации с ПЛД на PDX-модели рака яичников Champions TumorGraft^®

Типичная методика исследования заключается в следующем.

Самки мышей BomTac. Приобретали почти 7-недельных (на момент начала обработки) мышей NMRI-Foxn1nu у фирмы Taconic, Дания. Вес тела (на момент начала обработки) составлял примерно 20 грамм. После прибытия в виварий мышей акклиматизировали к новой среде не менее 3 дней. Самок мышей с ослабленным иммунитетом содержали в вентилируемых клетках HEPA (Innocage^® IVC, Innovive, США) при 68-74°F (20-23°C) и влажности 30-70% с 12-часовым циклом освещения/темноты. Животных обеспечивали водой (обратный осмос, 2 ppm Cl₂) и стандартным кормом (Teklad 2919; 19% белка, 9% жира и 4% клетчатки) ad libitum. Животные с потерей массы тела ≥10% по сравнению с днем 0 получали DietAel 76A (ClearH₂O^®, Portland,ME) без ограничений. В каждой группе было по 3 мыши.

Мышам имплантировали раковые клетки из модели рака яичников Champions TumorGraft^®, которая была создана на основе образцов пациентов, ранее получавших терапию на основе платины. После того, как опухоли достигали 1000-1500 мм³, их собирали и имплантировали фрагменты опухолей подкожно в левый бок самок мышей перед исследованием. Каждому исследуемому животному имплантировали порцию из определенного пассажа. Для мониторинга роста опухолей измеряли их объемы штангенциркулем по два раза в неделю и рассчитывали объем опухолей (TV) по формуле (0,52 × [длина × ширина²]). Когда TV достигал примерно 250-350 мм³ (в среднем 300 мм³), животных подбирали по размеру опухолей и распределяли в контрольную или опытную группу (исследуемые мыши) и начинали введение доз в день 0. После начала обработки животных ежедневно взвешивали на цифровых весах и измеряли TV по два раза в неделю. Исследование прекращали, когда средний объем опухолей в контрольной группе достигал примерно 1500 мм³ или до 60-го дня. Для некоторых моделей исследование продлевали и после 60-го дня, и введение тоже продлевали до конца исследования. Отдельных животных исключали из исследования, если объем опухоли достигал примерно 1500 мм³. Общий план исследования противоракового эффекта представлен в табл. 3.

Таблица 3. Общий план исследования противоракового действия на PDX-модели рака яичников человека Champions TumorGraft^®

Группа n Реагент Дозировка (мг/кг) Объем дозы (мл/кг) Способ введения Режим введения Общая доза 1 3 контроль 1 10 PO BID ≥ 120 контроль 2 5 IV q7d ≥ 8 2 3 BI 853520 50 5 PO BID ≥ 120 3 3 ПЛД 3 10 IV q7d ≥ 8 4 3 BI 853520 50 10 PO BID ≥ 120 ПЛД 3 5 IV q7d ≥ 8 5 3 карбоплатин 25 10 IP q7d 3 паклитаксел 20 10 IV q7d 3

Контроль 1: 0,5% Natrosol; контроль 2: 5% стерильная глюкоза.

BI853520 синтезировали в соответствии со способом из патента WO 2010/‌и хранили при комнатной температуре в темноте.

Контрольная группа для перорального введения: 0,5% Natrosol. Контрольная группа для внутривенного введения: 5% стерильная глюкоза.

Карбоплатин: готовый исходный раствор в 10 мг/мл. ПЛД: готовый исходный раствор в 2 мг/мл. Паклитаксел: готовый исходный раствор в 6 мг/мл. Эти стандартные химиотерапевтические препараты предоставлены Champions.

Для мониторинга побочных эффектов обработки за животными наблюдали ежедневно, начиная со дня 0, и взвешивали два раза в неделю. Регистрировали данные для каждой группы, включая вес тела для каждого животного и среднюю массу тела, и рассчитывали изменение средней массы тела в процентах (% vD₀) для каждой группы относительно дня 0, а по окончании исследования строили графики % vD₀. Ежедневно отмечали гибель животных и определяли как связанную с препаратом (D), техническую (T), связанную с опухолью (B) или неизвестную (U), исходя из потери веса и визуального осмотра. Средний % vD₀ > 20% и/или смертность > 10% в группах монотерапии или комбинированной терапии считали превышением MTD при обработке в исследуемом режиме. По окончании исследования отмечали максимальные средние % vD₀ (надир массы тела) для каждой опытной группы.

Ингибирующее действие на рост опухолей определяли путем расчета TGI (100% × [1 - (конечный MTV - исходный MTV в опытной группе)/(конечный MTV - исходный MTV в контрольной группе)]). Обработку начинали в день 0. Объемы опухолей в опытной группе сравнивали с объемами опухолей в контрольной группе в день завершения исследования.

Другие конечные параметры, используемые для оценки эффективности, включали количество CR, PR и TFS. Полагали, что PR и TFS исключают CR.

PR: TV ≤ 30% от TV в день 0, при 2 последовательных измерениях.

CR: не удается измерить TV (< 4×4 мм²) при 2 последовательных измерениях.

TFS: сохраняется CR вплоть до завершения исследования.

Данные по окончании исследования использовали для статистического анализа. Проводили статистическое сравнение объемов опухолей методом однофакторного дисперсионного анализа с последующим критерием множественного сравнения Newman-Keuls для выявлений отличий между всеми группами. Выбранные конечные параметры охватывали как можно больше групп и как можно больше животных в каждой группе. Объемы опухолей у животных, удаленных досрочно из-за объема опухолей ≥1500 мм³, переносили вперед для анализа, но не более чем на 4 последовательных момента времени измерения. Проводили сравнение объема опухолей в группе с комбинацией BI 853520 + ПЛД, в группе BI 853520 и в группе ПЛД, а также суммы объемов опухолей в группе BI 853520 и в группе ПЛД.

Возьмем для примера модель CTG-1166.

В контрольной группе конечная точка достигалась на 17-й день. Обработка ПЛД и карбоплатином/паклитакселом не обладала явным противоопухолевым действием (фиг. 2, табл. 4). В продолжение эксперимента было показано, что в группе BI 853520 и в группе с комбинацией BI 853520 и ПЛД проявляется значительное ингибирующее действие на рост опухолей (фиг. 2, табл. 4). В то же время в группе с комбинацией BI 853520 и ПЛД оказалось 2 PR (фиг. 2, табл. 4). В случае резистентности к карбоплатину и паклитакселу группа с комбинацией показала хороший ингибирующий эффект. Во всех группах была хорошая переносимость и ни одно животное не погибло (табл. 5).

Таблица 4. Противораковое действие на модели CTG-1166

Группа n Реагент Дозировка (мг/кг) Режим введения Объем опухолей (день 17) Дни 0-56 среднее±SEM (мм³) % TGI #PR/CR/TFS 1 3 контроль 0 PO BID 1172 ± 289 - 0/0/0 IV q7d 2 3 BI 853520 50 PO BID 366 ± 78 89 0/0/0 3 3 ПЛД 3 IV q7d 1479 ± 302 -31 0/0/0 4 3 BI 853520 50 PO BID 219 ± 55 101 2/0/0 ПЛД 3 IV q7d 5 3 карбоплатин 25 IP q7dx3 1411 ± 400 -22 0/0/0 паклитаксел 20 IV q7dx3

Таблица 5. Масса тела животных на модели CTG-1166

Группа n Реагент Дозировка (мг/кг) Масса тела (день 17) Нижняя точка массы тела Гибель среднее±SEM (г) % vD₀ % vD_0(max) день всего день 1 3 контроль 0, PO BID 25,2 ± 0,2 5,5 - - 0 - 0, IV q7d 2 3 BI 853520 50, PO BID 26,7 ± 0,4 4,0 -0,7 13 0 - 3 3 ПЛД 3, IV q7d 27,7 ± 1,4 9,2 - - 0 - 4 3 BI 853520 50, PO BID 25,9 ± 0,4 3,0 - - 0 - ПЛД 3, IV q7d 5 3 карбоплатин 25, IP q7dx3 25,9 ± 1,0 5,4 - - 0 - паклитаксел 20, IV q7dx3

По описанной выше типичной методике исследования также тестировали ингибирующее опухоли действие на моделях CTG-0252, CTG-0257, CTG-0791, CTG-0868, CTG-0956, CTG-0958, CTG-0964, CTG-0992, CTG-1086, CTG-1180, CTG-1301, CTG-1395, CTG-1427, CTG-1433, CTG-1498, CTG-1602, CTG-1624, CTG-1627, CTG-1649, CTG-1677, CTG-1678 и CTG-1809, соответственно. Результаты показали, что на данных моделях комбинация BI 853520 и ПЛД обладает значительным синергическим действием и хорошей противораковой активностью (TGI > 70%); и на моделях, устойчивых к карбоплатину и паклитакселю (CTG-0791, CTG-0956, CTG-0964, CTG-0992, CTG-1180, CTG-1301, CTG-1433, CTG-1498 и CTG-1809), комбинация BI 853520 и ПЛД тоже обладает хорошей противораковой активностью (TGI > 70%) (табл. 6).

Таблица 6. Противораковое действие на различных PDX-моделях рака яичников

TGI (%) Модель Дни BI 853520 ПЛД BI853520+ПЛД Карбоплатин/паклитаксел CTG-0252 7 54 39 80 59 CTG-0257 30 67 54 87 106 CTG-0791 35 -21 52 74 5 CTG-0868 25 54 36 73 74 CTG-0956 67 77 56 97 20 CTG-0958 52 99 -17 113 89 CTG-0964 35 66 47 79 -9 CTG-0992 60 49 57 101 -2 CTG-1086 28 39 62 86 56 CTG-1180 42 33 4 82 23 CTG-1301 38 43 70 81 -24 CTG-1395 33 41 39 91 102 CTG-1427 42 59 57 98 115 CTG-1433 49 61 22 89 -11 CTG-1498 98 128 134
(1 PR) 145 (1 PR) 18 CTG-1602 14 -1 49 102 84 CTG-1624 38 22 100 129 142 CTG-1627 28 50 69 103 69 CTG-1649 40 71 58 119 (1 TFS) 114 CTG-1677 32 51 91 102 56 CTG-1809 36 -58 61 89 -2

Дни: количество дней до окончания опыта.

TGI > 70% (есть реакция); 30% <TGI<70% (умеренная); TGI <30% (нет реакции).

Исследование показало, что на различных PDX-моделях комбинация BI 853520 и ПЛД обеспечивает большую эффективность и при этом хорошо переносится. В особенности на моделях, устойчивых к карбоплатину и паклитакселу, она все же проявляет хорошую противораковую активность.

Пример 3. Исследование противоракового действия BI853520 в комбинации с доцетакселом на PDX-модели рака желудка

Самки мышей BomTac. Приобретали мышей NMRI-Foxn1nu у фирмы Taconic, Дания. Мышей содержали в индивидуальных вентилируемых клетках (Tecniplast Sealsafe™-IVC-System, Tecniplast, Hohenpeissenberg, Германия), а клетки типа II или III выбирали в соответствии с количеством экспериментальных животных. Клетки находились в условиях: цикл освещение-темнота 14L:10D, скорость воздухообмена (AC) 60-65 AC/ч в клетке, 25±1°C и влажность 40-70%. Животных обеспечивали водой (стерилизованной водопроводной водой, отфильтрованной и подкисленной до pH 2,5) и кормом для животных (гранулированный корм Teklad Global с 19% белка (T.2019S.12)) ad libitum. Воду и корм меняли два раза в неделю, а все материалы перед использованием автоклавировали.

В этом исследовании использовали PDX-модель GXA 3039 рака желудка. Иммунодефицитным мышам имплантировали раковые клетки из PDX-модели GXA 3039 рака желудка, а после первичной имплантации раковые клетки укоренялись и изучались (пассаж 1). Когда при пассировании раковых клеток устанавливалась стабильная картина роста, у мышей извлекали опухоли, нарезали их на сегменты (с длиной ребра 3-4 мм) и помещали в PBS, содержащий 10% пенициллин/стрептомицин. Фрагменты опухолей имплантировали подкожно в бок самкам мышей перед исследованием. Каждый день измеряли объем опухолей штангенциркулем для отслеживания их роста, а когда TV достигал 50-250 мм³ (предпочтительно 80-200 мм³), их случайным образом распределяли в контрольную или опытную группу (так, чтобы медианный и средний объем опухолей в каждой группе составлял 100-150 мм³). Животных, не прошедших рандомизацию, усыпляли. Дату рандомизации принимали за день 0 данного опыта, а введение дозы начинали в 1-й день. После начала дозирования животных наблюдали и два раза в неделю измеряли у них вес (ежедневно, если отмечалась потеря массы тела более чем на 15%) и абсолютный объем опухолей (ATV). Животных забивали досрочно, если опухоль изъязвлялась или проникала в кожу, либо объем опухоли превышал 1500 мм³ или потеря веса превышала 18%, или же возникали тяжелые состояния типа оцепенения и боли. Если выживало менее 70% от исходного числа мышей (т.е. менее 6 из 8), то всю группу уничтожали. Чтобы иметь возможность отслеживать репопуляцию опухолей по окончании дозирования, применяли статистику Каплана-Мейера (это правило не применялось к группам, в которых опухоли были в стадии ремиссии). Переносимость оценивали на группах с наибольшей медианой потери массы тела (BWL) среди групп.

Ингибирование роста опухолей определяли путем расчета TGI. TGI рассчитывали по среднему абсолютному объему опухоли (ATV) следующим образом:

ATV = a×b²×0,5,

где a означает длину, а b - вертикальный диаметр опухоли; а

где T₀ и C₀ - средние значения ATV в опытной и контрольной группе в день 0; T_x и C_x - соответствующие средние значения ATV в день X; а день X - это день после последней дозы BI 853520 (при введении QD), через одну неделю после последней дозы доцетаксела (при введении раз в неделю) или же последний день у по меньшей мере 70% животных, смотря что наступит раньше.

Значения TGI имеют следующие значения (полагая C_x > C₀):

полная восприимчивость опухолей в опытной группе: TGI > 100%,

объем опухолей в опытной группе без изменений (застой): TGI = 100%,

снижение скорости роста опухолей в сравнении с контролем: 0% < TGI < 100%,

такая же скорость роста опухолей, что и в контрольной группе: TGI = 0,

стимуляция роста опухолей по сравнению с контролем: TGI <0.

Дополнительные конечные параметры для оценки эффективности включали: время до удвоения/учетверения объема опухолей и задержку роста опухолей/время до прогрессирования опухолей/репопуляции опухолей.

Время до удвоения/учетверения объема опухолей. Время до удвоения/учетверения объема опухолей (T_d/T_q) для опытной и контрольной группы определяли как промежуток времени (в днях), необходимый для достижения в каждой группе 200%/400% от среднего значения RTV. Относительный объем отдельных опухолей в день X (RTVx [%]) получали путем деления абсолютного объема опухоли в день X (T_x) на абсолютный объем опухоли в день 0 (T₀), а затем умножения на 100, следующим образом:

Задержка роста опухолей/время до прогрессирования опухолей/репопуляции опухолей. Для оценки разницы во времени до прогрессирования опухоли/репопуляции опухоли после регрессии опухоли в период наблюдения без дозирования (задержка роста опухоли, TGD) применяли анализ методом Каплана-Мейера. В качестве конечного параметра принимали относительный объем опухоли в 400%.

Общий план исследования противоракового эффекта представлен в табл. 7.

Таблица 7. Общий план исследования противоракового действия

Группа n Реагент Дозировка (мг/кг) Способ введения Режим
введения 1 8 контроль 1 10 мл/кг PO qd контроль 2 10 мл/кг IV q7d 2 8 BI 853520 50 PO qd 3 8 доцетаксел 10 IV q7d 4 8 BI 853520 + 50 PO qd доцетаксел 10 IV q7d

Контроль 1: 0,5% Natrosol; контроль 2: 0,9% солевой раствор.

BI853520 синтезировали в соответствии со способом из патента WO 2010/‌и хранили при комнатной температуре в темноте. BI 853520 растворяли в 0,5% Natrosol, получая раствор в 5 мг/мл, и вводили в дозе 50 мг/кг. Раствор делили на две равные части, хранили при комнатной температуре в темноте и использовали в пределах одной недели.

Доцетаксел приобретали у Sanofi Aventis и хранили при 4°C. При разбавлении раствора доцетаксела 0,9% солевым раствором в день дозирования получали раствор в концентрации 1 мг/мл, который вводили в дозе 10 мг/кг.

Контрольная группа для перорального введения: 0,5% Natrosol. Контрольная группа для внутривенного введения: 0,9% солевой раствор. Каждая доза составляла 10 мл/кг. В группе с комбинацией доцетаксел вводили сразу после BI 853520.

Когда в опыте отмечалась значительная потеря веса, принимали следующие меры:

для животных со снижением массы тела более чем на 15% - прекращали дозирование;

для животных со снижением массы тела > 15% - ежедневно измеряли вес тела;

для животных со снижением массы тела более чем на 15% - делали удобным потребление корма и воды;

дозирование возобновляли, когда относительная масса тела отдельных животных достигала не менее 85%.

Данные по окончании исследования использовали для статистического анализа. Использовали односторонний непараметрический U-критерий Манна-Уитни-Уилкоксона, принимая уровень значимости α равным 0,05. Значения p, полученные по U-критерию, подвергали коррекции по методу Bonferroni-Holm.

Для оценки статистической значимости отличий по времени до прогрессирования опухолей/задержки роста опухолей (TGD) при использовании 400% RTV в качестве конечного параметра исследования применяли статистический анализ методом Каплана-Мейера в сочетании с лог-ранговым критерием Mantel-Cox для парных сравнений.

Кроме того, для оценки переносимости обработки применяли двусторонний непараметрический U-критерий Манна-Уитни-Уилкоксона с использованием массы тела, определенной по окончании периода дозирования (т.е. в день, когда рассчитывались значения TGI). Чтобы не упустить возможные отрицательные эффекты обработки, метод Bonferroni-Holm не применялся для коррекции значений p по массе тела, а потеря веса считалась значимой, если значение p было в пределах 0,05 ≥ p ≤ 0,10.

По соглашению, значения p ≤ 0,05 означают значительное ингибирование опухолей или потерю массы тела. Статистические расчеты проводились с помощью программы Bioanalysis в GraphPad Prism (версия 6.01 для Windows, GraphPad Software, San Diego, CA, США, www.graphpad.com).

Исследование показало, что в группе BI 853520 значение TGI составляло 0%, что означает отсутствие противоракового действия (табл. 8, фиг. 3). В группе доцетаксела TGI составляло 113%, причем этот показатель был статистически значимым в сравнении с контрольной группой (табл. 8, фиг. 3). В группе с комбинацией BI 853520 и доцетаксела TGI составляло 124%, и этот показатель был статистически значимым в сравнении с контрольной группой (табл. 8, фиг. 3). Наряду с проявлением лучшего эффекта ингибирования опухолей, чем в группах с отдельными препаратами, группа с этой комбинацией проявляла более заметное преимущество в замедлении повторного роста опухолей после окончании введения. Значение T_d возрастало с 7-8 дней до 138 дней, а T_q не было достигнуто до самого конца опыта (табл. 8, фиг. 3).

Во всех группах совсем или почти совсем не наблюдалось потери массы тела (BWL) со средним максимумом в 2,9%. Не отмечалось BWL ни в одной из групп BI 853520 (табл. 9). Переносимость была хорошей во всех группах.

Таблица 8. Противораковое действие (рак желудка)

Группа Реагент Дозировка (мг/кг/д) Период введения Способ введения TGI
[%] (д) T_d
[д] T_q
[д] P по
U-крит. P по Каплан-Мейер 1 контроль 1 10 1-35 PO 7,2 19,2 контроль 2 10 1,8,15,22,29 IV 2 BI 853520 50 1-35 PO 0 (36) 8,1 41,2 ns ns 3 доцетаксел 10 1,8,15,22,29 IV 113 (36) 8,5 108,0 s ns 4 BI 853520 50 1-35 PO 124 (36) 138,6 nr s s доцетаксел 10 1,8,15,22,29 IV

Все значения p - относительно контрольной группы; s означает значимое отличие; ns - не значимое; nr - не достигается (напр., среднее значение RTV в группе всегда было меньше 200%/400%).

Таблица 9. Потеря веса и показатели выживаемости

Группа Реагент Дозировка (мг/кг/д) Период введения Последний день Средний максимум BWL [%] (д) Выживаемость 1 контроль 1 10 1-35 51 1,6 (13) 4/8 контроль 2 10 1,8,15,22,29 2 BI 853520 50 1-35 51 nr 4/8 3 доцетаксел 10 1,8,15,22,29 140 2,1 (2) 2/8 4 BI 853520 50 1-35 140 2,9 (16) 6/8 доцетаксел 10 1,8,15,22,29

nr - не достигается, т.е. нет потери веса (напр., среднее значение RBW в группе всегда было больше 100%).

Комбинация BI 853520 и доцетаксела проявляла синергический эффект на PDX-модели GXA 3039 рака желудка и оказывала хорошее ингибирующее действие на репопуляцию опухолей после отмены препаратов. Переносимость в группе с этой комбинацией не изменялась.

Пример 4. Эффективность BI 853520 на мышиной модели плоскоклеточного рака легких человека (клетки линии NCI-H520)

Применяли методы противораковых исследований на типичных ксенотрансплантатных моделях. Мышам было примерно 6 недель. В каждой группе было по 5 мышей.

Клетки NCI-H520 получали из ATCC (HTB-182). Создавали MCB и WCB по стандарту KG фирмы BI RCV GmbH & Co. Клетки инкубировали в колбах T175 для тканевых культур в среде GlutaMax+F175K с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки и 1,5 г/л бикарбоната натрия. Клетки инкубировали при 37°C и 5% CO₂. Концентрацию клеток в культуре поддерживали в пределах от 8×10⁶ до 12×10⁷ клеток на 1 колбу.

Клетки NCI-H520 суспендировали в ледяном PBS + 5% FCS и по 100 мкл клеточной суспензии, содержащей 5×10⁶ клеток, вводили подкожно в правый бок «голых» мышей (1 укол на мышь). Когда сформировались опухоли и достигли среднего объема 50 мм³ (через 14 дней после инъекции клеток), мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу.

Составы BI853520 имели pH 3.

Цисплатин растворяли в 0,9% солевом растворе.

В контрольной группе было 10 животных и по 7 животных в каждой опытной группе.

A: контрольная группа, 0,5% Natrosol/0,9% солевой раствор.

B: BI 853520, 50 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

C: цисплатин, 5 мг/кг (вводили внутрибрюшинно, один раз в неделю).

D: комбинация B + C.

По окончании опыта проводили статистический анализ объема опухолей на 22-й день. Статистический анализ проводили с помощью t-критерия Стьюдента в Microsoft Excel при двустороннем распределении и одинаковой дисперсии в обеих выборках.

Вес тела у животных в группе A возрастал на 5,8% (табл. 10), а средний объем опухолей достигал 721 мм³ на 22-й день обработки (табл. 10).

TGI в группе B составляло 54% (p = 0.007) (фиг. 4, табл. 10). Средний вес тела животных повышался на 9,1% (табл. 10).

В группе C значительно ингибировался рост опухолей при TGI в 74% (p = 0,0004, табл. 10, фиг. 4). Обработка хорошо переносилась, а средний вес тела повышался на 9,6% (табл. 10).

TGI в группе D составляло 90% (p = 0,00003) и отмечалась регрессия опухолей у 2/7 (табл. 10, фиг. 4). Обработка животных приводила к минимальным изменениям веса тела (-0,1%) (табл. 10).

Исследование показало, что BI 853520 проявляет статистически значимое ингибирующее действие на опухоли (p < 0,05) при 50 мг/кг и хорошо переносится. Кроме того, при использовании BI 853520 в комбинации с цисплатином (5 мг/кг, в/б, каждые 7 дней) наблюдалось еще лучшее ингибирование опухолей при хорошей переносимости и отсутствии значительной потери веса.

BI 853520 оказался эффективным на ксенотрансплантатной модели плоскоклеточного рака легких человека NCI-H520, а его комбинация с цисплатином проявляла лучший противоопухолевый эффект, чем любой препарат по отдельности.

Таблица 10. Средний объем опухолей

Обработка Средний объем опухолей [мм³] Среднее значение TGI [%] Регрессия опухолей Изменение средней массы тела [%] A 721 0/10 +5,8 B 352 54 0/7 +9,1 C 228 74 0/7 +9,6 D 116 90 2/7 -0,1

Пример 5. Исследование противоракового действия BI 853520 в комбинации с паклитакселом на мышиной модели (клетки линии KYSE-270)

Применяли методы противораковых исследований на типичных ксенотрансплантатных моделях. Мышам было примерно 8-10 недель. В каждой группе было по 7-10 мышей.

Клетки KYSE-270 – линия клеток рака пищевода (Public Health England, кат. № 94072021). Клетки инкубировали в колбах T175 для тканевых культур в среде RPMI-1640+HAMF2 (1:1) с добавлением 2% телячьей сыворотки и 2 нМ глутамина. Клетки инкубировали при 37°C и 5% CO₂.

Клетки KYSE-270 суспендировали в PBS + 5% FCS на уровне инокуляции клеток в 5×10⁶ клеток/мл. Когда сформировались опухоли и достигали 94-252 мм³ (через 13 дней после инъекции клеток), мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу.

В контрольной группе было 10 животных и по 7 животных в каждой опытной группе.

A: контрольная группа, 0,5% Natrosol/0,9% NaCl.

B: BI 853520, 50 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

C: паклитаксел, 10 мг/кг (один раз в неделю, вводили внутривенно болюсом).

D: комбинация B + C.

По окончании опыта проводили сравнения с помощью точного критерия Уилкоксона.

В группе A средний объем опухолей достигал 1032 мм³ на 13-й день обработки (фиг. 5; табл. 11). Вес тела животных снижался на 9,1% (табл. 11), а одно животное пришлось усыпить досрочно из-за сильной потери массы тела на 9-й день.

В группе B рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 106% (p = 0,0003) (фиг. 5; табл. 11). Отмечалась регрессия опухолей у 6 из 7 животных, и все они выжили. Вес тела животных повышался на 2,8% (p = 0,9999 в сравнении с группой A) (табл. 11).

В группе C не было влияния на рост опухолей по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 2% (p = 0,3788) и без регрессии опухолей (фиг. 5; табл. 11). Вес тела животных снижался на 9,7% (p = 0.7320 в сравнении с группой A) (табл. 11).

В группе D рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 110% (p = 0,0003 в сравнении с группой A), и отмечалась регрессия опухолей у 7 из 7 животных (фиг. 5; табл. 11). Вес тела животных повышался на 3,5% (p = 1,0000 в сравнении с группой A) (табл. 11).

Исследование показало, что на подкожной модели KYSE-270 рака пищевода человека BI 853520 при 50 мг/кг в качестве единственного препарата оказывал ингибирующее действие на рост опухолей, а паклитаксел при 10 мг/кг в качестве единственного препарата не оказывал эффекта. Напротив, комбинация этих двух препаратов обладала лучшим ингибирующим действием, и отмечалась регрессия опухолей у 7 из 7 животных при хорошей переносимости. Особенно после отмены препарата размеры опухолей не повышались существенно.

Таблица 11. Средний объем опухолей

Обработка Дозировка [мг/кг] Режим введения Средний объем опухолей [мм³] Регрессия опухолей TGI [%] Изменение средней массы тела [%] A - qd/q7d 1032 -10,3 B 50 qd 126 6/7 106 2,8 C 10 q7d 1033 0/7 2 -9,7 D 50 + 10 qd + q7d 87 7/7 110 3,5

Пример 6. Исследование противоракового действия BI 853520 в комбинации с доцетакселем на мышиных моделях (клетки линий KYSE-70, PC-3 и HS 746T)

Применяли методы противораковых исследований на типичных ксенотрансплантатных моделях.

KYSE-70: мышам было примерно 8-10 недель. В каждой группе было по 7-10 мышей.

PC-3: мышам было примерно 6 недель. В каждой группе было по 7-10 мышей.

HS 746T: мышам было примерно 6 недель. В каждой группе было по 7-10 мышей.

Клетки KYSE-270 – линия клеток рака пищевода (депозит штамма HPA, кат. №94072012). Клетки PC-3 и HS 746T приобретали у ATCC. Клетки инкубировали в колбах T175 для тканевых культур в среде RPMI-1640 с добавлением 10% телячьей сыворотки. Клетки инкубировали при 37°C и 5% CO₂.

Клетки KYSE-70 суспендировали в PBS + 5% FCS на уровне инокуляции клеток в 5×10⁶ клеток/(50 мкл культуральной среды + 50 мкл Matrigel). Когда сформировались опухоли и достигали 67-93 мм³ (через 11 дней после инъекции клеток), мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу.

Клетки PC-3 суспендировали в PBS + 5% FCS на уровне инокуляции клеток в 5×10⁶ клеток/(50 мкл культуральной среды + 50 мкл Matrigel). Когда сформировались опухоли и достигали 100 мм³ (через 11 дней после инъекции клеток), мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу.

Клетки HS 746T суспендировали в PBS + 5% FCS на уровне инокуляции клеток в 1×10⁷ клеток/(50 мкл культуральной среды + 50 мкл Matrigel). Когда сформировались опухоли и достигали 117 мм³ (через 10 дней после инъекции клеток), мышей случайным образом распределяли в опытную или контрольную группу.

KYSE-70 и HS 746T: в контрольной группе было 10 животных и по 7 животных в каждой опытной группе.

A: контрольная группа, 0,5% Natrosol/5% глюкоза.

B: BI 853520, 50 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

C: доцетаксел, 10 мг/кг (один раз в неделю, вводили внутривенно болюсом).

D: комбинация B + C.

PC-3: в контрольной группе было 10 животных и по 7 животных в каждой опытной группе.

A: контрольная группа, 0,5% Natrosol/5% глюкоза.

B: BI 853520, 25 мг/кг (один раз в день, вводили гаважем).

C: доцетаксел, 7,5 мг/кг (один раз в неделю, вводили внутривенно болюсом).

D: комбинация B + C.

По окончании опыта проводили сравнения с помощью точного критерия Уилкоксона.

KYSE-70

В группе A средний объем опухолей возрастал с 76 мм³ до 798 мм³ на 42-й день (фиг. 6; табл. 12). Вес тела животных повышался на 7,0% (табл. 12).

В группе B рост опухолей не замедлялся существенно по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 42% (p = 0,1574) (фиг. 6; табл. 12). Отмечалась регрессия опухоли у 1 из 7 животных. Вес тела животных повышался на 8,8% (p = 0,7189 в сравнении с группой A) (табл. 12).

В группе C рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 100% (p = 0,0002), и отмечалась регрессия опухолей у 4 из 7 животных на 28-й день (фиг. 6; табл. 12). Вес тела животных повышался на 5,6% (p = 0,2681 в сравнении с группой A) (табл. 12).

В группе D рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 111% (p = 0,0002 в сравнении с группой A), и отмечалась регрессия опухолей у 7 из 7 животных (фиг. 6; табл. 12). Вес тела животных повышался на 2,5% (p = 0,0093 в сравнении с группой A) (табл. 12).

Исследования показали, что в случае подкожной модели KYSE-70 рака пищевода человека 50 мг/кг BI 853520 в качестве единственного препарата не оказывал ингибирующего действия на рост опухолей, а доцетаксел при 10 мг/кг в качестве единственного препарата оказывал ингибирующее действие. Напротив, комбинация этих двух препаратов обладала лучшим ингибирующим действием (отмечалась регрессия опухолей у 6 из 7 животных, а средний объем опухолей достигал 0 при хорошей переносимости).

PC-3 (с отменой на 28-й день)

В группе A средний объем опухолей возрастал с 70 мм³ до 809 мм³ на 35-й день (фиг. 7; табл. 12). Вес тела животных снижался на 3,2% (табл. 12).

В группе B рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой со значением TGI в 66% (фиг. 7; табл. 12). Вес тела животных повышался на 2,4% (табл. 12).

В группе C рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 92%, и отмечалась регрессия опухолей у 3 из 7 животных на 28-й день (фиг. 7; табл. 12). Вес тела животных снижался на 10% (табл. 12).

В группе D рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 108%, и отмечалась регрессия опухолей у 6 из 7 животных (фиг. 7; табл. 12). Вес тела животных повышался на 7,8% (табл. 12).

Исследование показало, что на подкожной модели PC-3 рака простаты человека BI 853520 при 25 мг/кг в качестве единственного препарата и доцетаксел при 7,5 мг/кг в качестве единственного препарата оказывали определенное ингибирующее действие на рост опухолей. Комбинация этих двух препаратов обладала явным синергическим действием, отмечалась регрессия опухолей у 6 из 7 животных, и рост опухолей все еще подавлялся после отмены препарата. Переносимость была хорошей.

HS 746T (с отменой на 28-й день)

В группе A средний объем опухолей возрастал со 117 мм³ до 1684 мм³ на 24-й день (фиг. 8; табл. 12). Вес тела животных повышался на 8,4% (табл. 12).

В группе B рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой со значением TGI в 93% (фиг. 8; табл. 12). Отмечалась регрессия опухоли у 1 из 8 животных. Вес тела животных повышался на 7,3% (табл. 12).

В группе C рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 108%, и отмечалась регрессия опухолей у всех 8 животных на 28-й день (фиг. 8; табл. 12). Вес тела животных повышался на 6,7% (табл. 12).

В группе D рост опухолей значительно замедлялся по сравнению с контрольной группой, со значением TGI в 108%, и отмечалась регрессия опухолей у всех 8 животных (фиг. 8; табл. 12). Вес тела животных повышался на 9,3% (табл. 12).

Исследования показали, что в случае подкожной модели HS 746T рака желудка человека 25 мг/кг BI 853520 в качестве единственного препарата или 10 мг/кг доцетаксела в качестве единственного препарата оказывали ингибирующее действие. Однако комбинация этих двух препаратов обладала лучшим ингибирующим действием (отмечалась регрессия опухолей у всех 8 животных, а рост опухолей все еще подавлялся после отмены препарата). Наблюдался более продолжительный противоопухолевый эффект, особенно в группе с комбинацией, и переносимость была хорошей.

Таблица 12. Средний объем опухолей

Линия клеток Обработка Дозировка [мг/кг] Режим введения Средний объем опухолей [мм³] Регрессия опухолей TGI [%] Изменение средней массы тела [%] KYSE-70 A - qd/q7d 798 7,0 B 50 qd 497 1/7 42 8,8 C 10 q7d 73 4/7 100 5,6 D 50 + 10 qd + q7d 0 6/7 111 2,5 PC-3 A - qd/q7d 809 0/7 -3,2 B 25 qd 316 0/7 66 2,4 C 7,5 q7d 131 3/7 92 10 D 25 + 7,5 qd + q7d 9,95 6/7 108 7,8 HS 746T A - qd/q7d 1684 0/10 8,4 B 50 qd 229 1/8 93 7,3 C 10 q7d 0 8/8 108 6,7 D 50 + 10 qd + q7d 0 8/8 108 9,3

Содержание всех ссылок (включая ссылки на литературу, выданные патенты, опубликованные патентные заявки и находящиеся на рассмотрении патентные заявки), цитируемых в данной заявке, прямо включено сюда путем ссылки во всей полноте. Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют такие же значения, как и общеизвестные специалистам в данной области.

Все признаки, раскрытые в данном описании, могут комбинироваться в любых комбинациях. Каждый признак, раскрытый в данном описании, может быть заменен на альтернативные признаки, служащие такой же, эквивалентной или аналогичной цели. Таким образом, если прямо не указано иначе, каждый раскрытый признак является лишь одним примером из ряда эквивалентных или подобных признаков.

Из вышеприведенного описания специалист в данной области может легко установить основные характеристики настоящего изобретения и внести различные изменения и модификации в изобретение, не выходящие за рамки его сущности и объема, чтобы адаптировать их к различным применениям и условиям. Соответственно, другие воплощения входят в рамки прилагаемой формулы изобретения.

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно к применению BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения опухоли в комбинации с химиотерапевтическим препаратом и к фармацевтической комбинации для лечения опухоли. Применение BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения опухоли в комбинации с химиотерапевтическим препаратом, причем BI853520 имеет следующую структурную формулу: причем этим химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, при этом опухоль представляет собой рак яичников. Фармацевтическая комбинация для лечения опухоли, включающая BI853520 или его фармацевтически приемлемую соль и химиотерапевтический препарат, причем BI853520 имеет структурную формулу, представленную ниже, химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, опухоль представляет собой рак яичников. Указанная группа изобретений позволяет повысить эффективность химиотерапии и преодолеть проблему лекарственной устойчивости. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 ил., 12 табл., 6 пр.

1. Применение BI853520 или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения опухоли в комбинации с химиотерапевтическим препаратом, причем BI853520 имеет следующую структурную формулу:

;

причем этим химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, при этом опухоль представляет собой рак яичников.

2. Применение по п. 1, в котором опухоль представляет собой устойчивый к платине рак яичников.

3. Применение по п. 1 или 2, в котором фармацевтически приемлемой солью BI853520 является тартрат.

4. Фармацевтическая комбинация для лечения опухоли, включающая:

BI853520 или его фармацевтически приемлемую соль и

химиотерапевтический препарат,

причем BI853520 имеет следующую структурную формулу:

;

причем этим химиотерапевтическим препаратом является ПЛД, при этом опухоль представляет собой рак яичников.

5. Фармацевтическая комбинация для лечения опухоли по п. 4, где опухоль представляет собой устойчивый к платине рак яичников.

6. Фармацевтическая комбинация для лечения опухоли по п. 4 или 5, где фармацевтически приемлемой солью BI853520 является тартрат.