ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ПЕПТИД ИЗ ЯИЧНОГО БЕЛКА И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2025 года по МПК C07K5/107 C07K14/77 A61K38/07 A61P29/00 A23L33/18 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0001] Настоящее изобретение относится к области активных пептидов, в частности к противовоспалительному активному пептиду из яичного белка, а также к получению и применению продукта реакции Майяра из него.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] Биоактивные пептиды получают из белков и относят к их биологически активным фрагментам. Биоактивные пептиды характеризуются уникальной биологической активностью, выходящей за рамки базовых пищевых потребностей, и привлекают все больше внимания благодаря своему вкладу в здоровье человека. Поскольку пептиды представляют собой сложные структуры, скрытые в родительском белке, довольно сложно эффективно обнаруживать их биологическую активность. После биохимических реакций, таких как гидролиз и ферментация под действием внешних протеаз, или желудочно-кишечного пищеварения могут быть реализованы разнообразные физиологические функции и положительное влияние на здоровье человека.

[0003] В последние годы многие исследования были направлены на выявление новых пептидов из белка куриного яйца, и публикация генома курицы значительно расширила возможности идентификации белков и пептидов в сложных образцах. Исследования показали возможность получения различных типов биоактивных пептидов из белка куриного яйца после ферментативного гидролиза специфическими протеазами.

[0004] Реакция Майяра - это химическая реакция между аминосоединениями, такими как белки, пептиды и аминокислоты, и карбонильными соединениями, такими как восстанавливающие сахара, альдегиды и кетоны. Контролируемая реакция Майяра позволяет получать продукты с требуемыми органолептическими свойствами, в том числе цветом и вкусом, а также влиять на биологическую активность.

[0005] В настоящее время биоактивные пептиды применяют для профилактики и лечения. Китай, как страна с развитым производством куриных яиц, занимает первое место в мире по производству и потреблению куриных яиц. Белок куриного яйца богат протеинами, содержит большое количество биологически активных веществ и выполняет такие физиологические функции, как профилактика и лечение заболеваний и иммунная регуляция. В настоящее время не существует детально проработанного способа использования белка куриных яиц, в результате чего большое количество высококачественных белковых ресурсов пропадает зря; также отсутствует глубокая переработка и использование противовоспалительных активных пептидов из белка куриных яиц. Поэтому использование белка куриного яйца в качестве сырья для создания высококачественных полипептидных продуктов из белка куриного яйца имеет хорошие перспективы и значение.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] Белок куриных яиц богат протеинами и служит важным источником биоактивных пептидов. Активность и вкус белков/пептидов можно дополнительно улучшить после реакции Майяра. Поэтому в настоящем изобретении применяют протеолиз белка куриного яйца для получения полипептидов и исследуют изменения активности и вкуса полипептидов после реакции Майяра.

[0007] Одним из технических решений, предложенных настоящим изобретением, является противовоспалительный активный пептид из белка куриного яйца. Аминокислотная последовательность противовоспалительного активного пептида выглядит следующим образом: Phe-Gly-Pro-His, в дальнейшем FGPH.

[0008] Противовоспалительный пептид FGPH может быть получен путем ферментативного разложения белка куриного яйца или путем искусственного синтеза.

[0009] Вторым техническим решением, предложенным настоящим изобретением, является применение вышеупомянутого активного пептида FGPH в противовоспалительных реакциях, особенно в приготовлении противовоспалительных лекарственных препаратов, продуктов питания или других продуктов.

[0010] Третьим техническим решением, предложенным настоящим изобретением, является FGPH-MRPs, продукт реакции Майяра, полученный из FGPH.

[0011] Далее, способ изготовления FGPH-MRPs содержит следующие этапы: навеска и подготовка FGPH в водном растворе, добавление декстрана в массовом соотношении пептида и декстрана 1,5:1, тщательное перемешивание, выполнение реакции при 80 °C и pH 9,0 в течение 10 часов, охлаждение до комнатной температуры по завершении реакции, для получения продукта реакции Майяра с FGPH, а именно FGPH-MRPs.

[0012] Четвертым техническим решением, предложенным настоящим изобретением, является применение продукта реакции Майяра с FGPH, т.е. FGPH-MRPs, раскрытого в третьем техническом решении, в частности, в противовоспалительной реакции, в частности, для изготовления противовоспалительных лекарственных препаратов, пищевых продуктов или других продуктов.

[0013] Технические результаты

[0014] Согласно настоящему изобретению противовоспалительный полипептид получают из белка куриного яйца путем ферментативного гидролиза, и полипептид FGPH, обладающий высокой противовоспалительной активностью, получают по результату ряда операций по выделению, очистке, идентификации и синтезу. Противовоспалительная активность FGPH проверена после искусственного синтеза. Обнаружено, что при концентрации 500 мкг/мл коэффициенты ингибирования FGPH относительно медиатора воспаления (NO) и факторов воспаления (TNF-α, IL-6, IL-1β) RAW264.7, индуцированных ЛПС (липополисахаридом), составляют 64,41±0,47%, 28,07±2,10%, 41,72±1,83% и 52,43±2,29% соответственно.

[0015] Далее изучали влияние реакции Майяра на активность и вкус противовоспалительного активного пептида FGPH. Продукт реакции Майяра FGPH-MRPs исследовали посредством инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье и сканирующей электронной микроскопии и установили, что структура и морфология продукта изменились по сравнению с состоянием до реакции. Изменения активности измерили до и после реакции Майяра и обнаружили, что в клетках RAW264.7, индуцированных ЛПС, коэффициент ингибирования количества продуцируемого NO увеличился с 64,41±0,47% до 68,16±0,48%, а значения EC₅₀ для ДФПГ, АБТС и уровни захвата гидроксильных радикалов снизились с 4,96±0,05 мг/мл до 4,07±0,03 мг/мл, с 0,81±0,01 мг до 0,61±0,01 мг/мл, и с 2,01±0,03 мг/мл до 1,56±0,02 мг/мл соответственно. Вкус FGPH, определенный с помощью органолептической оценки и системы электронного языка, был улучшен, а характерный запах, определенный системой электронного носа, был значительно улучшен. Показано, что реакция Майяра улучшила коэффициент ингибирования NO, антиоксидантную активность и вкус FGPH.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0016] На ФИГ. 1 изображено влияние полипептидов различной молекулярной массы (ММ) (более 10 кДа, 5-10 кДа, 3-5 кДа и менее 3 кДа) на жизнеспособность клеток.

[0017] На ФИГ. 2 изображено влияние полипептида с молекулярной массой менее 3 кДа на количество продуцируемого NO.

[0018] На ФИГ. 3 изображена суммарная ионная хроматограмма полипептидных компонентов с молекулярной массой менее 3 кДа.

[0019] На ФИГ. 4 изображена химическая структура FGPH.

[0020] На ФИГ. 5 изображена схема взаимодействия FGPH и iNOS.

[0021] На ФИГ. 6 изображено влияние FGPH на жизнеспособность клеток.

[0022] На ФИГ. 7 изображено влияние различных концентраций FGPH на секрецию NO (A), TNF-α (B), IL-6 (C) и IL-1β (D) в клетках.

[0023] На ФИГ. 8 изображена диаграмма анализа инфракрасного спектра FGPH и FGPH-MRPs.

[0024] На ФИГ. 9 приведены снимки сканирующей электронной микроскопии FGPH (A) и FGPH-MRPs (B).

[0025] На ФИГ. 10 изображено влияние FGPH и FGPH-MRPs на жизнеспособность клеток.

[0026] На ФИГ. 11 изображено влияние FGPH и FGPH-MRPs на количество продуцируемого NO в клетках.

[0027] На ФИГ. 12 изображена лепестковая диаграмма органолептической оценки FGPH и FGPH-MRPs.

[0028] На ФИГ. 13 изображена лепестковая диаграмма индекса вкуса, определенного системой электронного языка для FGPH и FGPH-MRPs.

[0029] На ФИГ. 14 изображена лепестковая диаграмма индекса запаха, определенного системой электронного носа для FGPH и FGPH-MRPs.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0030] Для уточнения цели, технических решений и преимуществ настоящего изобретения ниже будет подробно раскрыто настоящее изобретение со ссылкой на конкретные примеры. Следует понимать, что конкретные примеры, раскрытые в настоящем документе, используются только для пояснения настоящего изобретения и не ограничивают защищаемый объем настоящего изобретения.

[0031] Противовоспалительный пептид FGPH согласно настоящему изобретению может быть получен путем ферментативного разложения белка куриного яйца или путем искусственного синтеза.

[0032] Некоторые из способов испытаний, использованных в данном изобретении, раскрыты ниже:

[0033] 1. Определение противовоспалительной активности

[0034] 1.1. Культура клеток RAW264.7

[0035] Приготовили культуральную среду Игла, модифицированную по Дульбекко (DMEM), содержащую 10% фетальной бычьей сыворотки. Мышиный макрофаг RAW264.7 активировали и быстро добавили в культуральную среду. Морфологию клеток наблюдали под микроскопом, и культуральную среду перенесли в инкубатор для культивирования. Температуру в инкубаторе установили на 37 °C, а концентрацию CO₂ - на 5%. Морфологию клеток наблюдали и клетку пересевали каждые 24 часа. Клетки гидролизировали, добавляя 0,25% трипсина (содержащего 0,01% ЭДТА), промывали и центрифугировали в среде Игла, модифицированной по Дульбекко (DMEM), промывали и центрифугировали с фетальной бычьей сывороткой. Клетки инокулировали в чашки для культивирования для последующих экспериментальных операций.

[0036] 1.2. Влияние на жизнеспособность клеток RAW264.7

[0037] Жизнеспособность клеток RAW264.7 определялась способом МТТ. Клетки RAW264.7 в фазе логарифмического роста высевали в 96-луночный планшет по 100 мкл/лунку с плотностью 4×10⁴/лунку. Внешний слой 96-луночного планшета запечатывали раствором фетальной бычьей сыворотки, и 96-луночный планшет переносили в инкубатор для культивирования на 12-24 часа. Температура в инкубаторе составляла 37°C, а концентрация CO₂ - 5%. После прилипания клеток к стенке отработанный супернатант извлекали из 96-луночного планшета. Определяли контрольную группу (с добавлением 100 мкл культуральной среды), группу ЛПС (с добавлением 100 мкл ЛПС с конечной концентрацией по массе 1 мкг/мл) и группу образца (с добавлением 100 мкл пептидов с разной или одинаковой концентрацией по массе и добавлением ЛПС с конечной концентрацией по массе 1 мкг/мл через 2 часа реакции), и каждую группу обрабатывали в трёх параллельных определениях. После культивирования в течение 24 часов в каждую лунку добавляли по 20 мкл раствора МТТ в концентрации 5 мг/мл. После последующего культивирования в инкубаторе в течение 4 часов добавляли 100 мкл диметилсульфоксида (ДМСО) и осторожно встряхивали в течение 10 мин. Значение поглощения при 570 нм измеряли с помощью микропланшетного анализатора, и жизнеспособность клеток (%) рассчитывали по формуле

.

[0038] В формуле (1) V означает жизнеспособность клеток (%), A₁ - значение поглощения контрольной группы при 570 нм, A₂ - значение поглощения группы образцов при 570 нм.

[0039] 1.3. Влияние на количество продуцируемого NO в клетках RAW264.7

[0040] Количество продуцируемого NO в клетке измеряли способом Грисса. Способы группировки, обработки и культивирования аналогичны разделу 1.2. После 24 часов культивирования собирали супернатант и измеряли количество продуцируемого NO с помощью комплекта для определения NO. 50 мкл клеточного супернатанта, 50 мкл реактива Грисса I и 50 мкл реактива Грисса II смешивали и выдерживали в течение 5 минут, после чего измеряли значение поглощения при 540 нм. Согласно инструкции к комплекту NO, рассчитывали количество продуцируемого NO в каждом образце, и коэффициент ингибирования количества продуцируемого NO рассчитывали по формуле (2)

[0041] В формуле B обозначает коэффициент ингибирования NO (%), B₀ - количество продуцируемого NO в контрольной группе, B₁ - количество продуцируемого NO в группе ЛПС, и B₂ - количество продуцируемого NO в группе образцов.

[0042] 1.4 Определение цитокинов TNF-α, IL-6 и IL-1β

[0043] Клетки RAW264.7 в фазе логарифмического роста высевали в 96-луночный планшет по 100 мкл/лунку с плотностью 4 × 10⁴/лунку в трёх параллельных определениях для каждой лунки. Определяли контрольную группу (с добавлением 100 мкл культуральной среды), группу ЛПС (с добавлением 100 мкл ЛПС с конечной концентрацией по массе 1 мкг/мл) и группу образцов (с добавлением 100 мкл пептидов разной концентрации, и с конечной концентрацией по массе ЛПС 1 мкг/мл через 2 часа реакции). Три группы культивировали в инкубаторе в течение 24 часов, после чего собирали супернатанты. Согласно инструкции к комплекту ELISA, измеряли значение поглощения при 450 нм и рассчитывали количество выделяемых факторов воспаления TNF-α, IL-6 и IL-1β. Коэффициенты ингибирования трех факторов воспаления рассчитывали по формуле (3)

[0044] В формуле C означает коэффициент ингибирования (%) факторов воспаления, C₀ - количество выделяемых факторов воспаления в пустой группе, C₁ - количество выделяемых факторов воспаления в группе ЛПС, C₂ - количество выделяемых факторов воспаления в группе образца.

[0045] 2. Определение антиоксидантной активности

[0046] 2.1 Уровень захвата свободных радикалов 1,1-дифенил-2-пикрилгидразилом (ДФПГ)

[0047] Антиоксидантные свойства полипептида ДФПГ определяли в соответствии с GB/T39100-2020. Изготовление раствора ДФПГ: 5 мг ДФПГ полностью растворили в соответствующем количестве абсолютного этанола ультразвуком в темноте и довели объем до 100 мл. Раствор ДФПГ в концентрации 50 мкг/мл изготовили на месте. Изготовление раствора пептида: 10 мг пептида полностью растворили в соответствующем количестве дистиллированной воды, довели объем до 1 мл, чтобы получить раствор пептида в концентрации 10 мг/мл, и разбавили раствор пептида в определенном соотношении, чтобы получить растворы пептида различной концентрации. Реактивы добавили в три испытательные пробирки с номерами 1, 2 и 3 согласно таблице 1 и измерили значение поглощения при 517 нм. Уровень захвата свободных радикалов ДФПГ рассчитывали по формуле (4). Приняв натуральный логарифм концентрации раствора пептида за абсциссу, и уровень захвата свободных радикалов ДФПГ за ординату, получили линейное уравнение между натуральным логарифмом концентрации пептида и уровнем захвата, и рассчитали полумаксимальную эффективную концентрацию EC₅₀ для уровня захвата свободных радикалов ДФПГ.

[0048] В формуле P1 обозначает уровень захвата свободных радикалов ДФПГ (%), A_s - значение поглощения при 517 нм после смешивания раствора ДФПГ с раствором пептида, Ac - значение поглощения при 517 нм после смешивания раствора пептида с раствором этанола, A_b - значение поглощения при 517 нм после смешивания раствора ДФПГ с раствором реактива образца.

[0049] Таблица 1. Количество добавленных реактивов для эксперимента по захвату свободных радикалов ДФПГ

Образец Испытательная пробирка 1 (A_s) Испытательная пробирка 2 (A_c) Испытательная пробирка 3 (A_b) Раствор ДФПГ (мл) 3,0 - 3,0 Раствор пептида (мл) 1,0 1,0 - Образец растворителя (мл) - - 1,0 Раствор этанола (мл) - 3 -

[0050] 2.2. Уровень захвата диаммониевой солью свободных радикалов 2,2-азино-бис(3-этил-бензотиазол-6-сульфоновой кислоты) (АБТС)

[0051] Полипептидный антиоксидантный анализ АБТС проводили в соответствии с GB/T39100-2020. Изготовление раствора АБТС: 200 мг реактива АБТС и 34,4 мг персульфата калия добавили и полностью растворили в 50 мл дистиллированной воды, равномерно взболтали и хранили в темноте при комнатной температуре в течение 24 часов. Испытательный раствор АБТС изготовили путем разбавления 95% этанолом, чтобы значение поглощения при 734 нм составило 0,70±0,02. Раствор приготовили перед использованием. 10 мг полипептида полностью растворили в соответствующем количестве дистиллированной воды и довели объем до 1 мл, чтобы получить раствор полипептида с концентрацией 10 мг/мл. 95% раствор этанола использовали для разбавления раствора до различных кратных значений, чтобы получить растворы полипептидов различной концентрации. Реактивы добавили в две пробирки с номерами 1 и 2 согласно таблице 2 и измерили значение поглощения при 734 нм. Уровень захвата свободных радикалов АБТС рассчитывали по формуле (5). Способ расчета EC₅₀ аналогичен п. 2.1.

.

[0052] В формуле P2 означает уровень захвата свободных радикалов АБТС (%); A_b - значение поглощения при 734 нм после смешивания раствора АБТС с раствором реактива образца; A_s - значение поглощения при 734 нм после смешивания раствора АБТС с раствором пептида.

[0053] Таблица 2. Количество добавленных реактивов для эксперимента по захвату свободных радикалов АБТС

Образец Испытательная пробирка 1 (A_s) Испытательная пробирка 2 (A_b) Раствор АБТС (мл) 3,6 3,6 Раствор пептида (мл) 0,4 - Образец растворителя (мл) - 0,4

[0054] 2.3. Уровень захвата гидроксильных радикалов

[0055] Уровень захвата гидроксильных радикалов определяли по методу Chen et al. Изготовление реакционного раствора: соответствующие количества сульфата железа, пероксида водорода и салициловой кислоты полностью растворили в дистиллированной воде, чтобы получить раствор сульфата железа 9 ммоль/л, раствор пероксида водорода 8,8 ммоль/л и раствор салициловой кислоты 9 ммоль/л. Изготовление раствора пептида: 10 мг пептида полностью растворили в соответствующем количестве дистиллированной воды, довели объем до 1 мл, чтобы получить раствор пептида в концентрации 10 мг/мл, и разбавили раствор пептида в определенном соотношении, чтобы получить растворы пептида различной концентрации. В испытательную пробирку добавили 1 мл растворов полипептидов различной концентрации, равномерно перемешали с 1 мл сульфата железа и 1 мл салициловой кислоты, и проводили реакцию в течение 10 минут. Затем в испытательную пробирку добавили 1 мл раствора перекиси водорода и выдержали при 37°C в течение 30 минут для протекания реакции. Значение поглощения измерили при 510 нм. Вместо раствора пептида взяли 1 мл дистиллированной воды, выполнили раскрытую выше операцию и измерили значение поглощения при 510 нм. Вместо раствора пероксида водорода взяли 1 мл дистиллированной воды, выполнили описанные выше действия и измерили значение поглощения при 510 нм. Уровень захвата гидроксильных радикалов рассчитывали по формуле (6). Способ расчета EC₅₀ аналогичен п. 2.1.

[0056] В формуле P3 означает уровень захвата гидроксильных радикалов (%); A_i - значение поглощения раствора пептида при 510 нм; A_j - значение поглощения при 510 нм, когда раствор пероксида водорода был заменен дистиллированной водой; A₀ - значение поглощения при 510 нм, когда раствор пептида был заменен дистиллированной водой.

[0057] 3. Разделение и идентификация с помощью ЖХ-МС/МС

[0058] Аминокислотную последовательность и молекулярную массу полипептидных компонентов определяли с помощью ЖХ-МС/МС. Перед измерением образец сначала подвергали восстановительному алкилированию и обессоливанию. В качестве предколонки для капиллярной жидкостной хроматографии использовали аналитическую колонку Acclaim PepMap RPLC C18 размером 300 мкм × 5 мм (5 мкм, 100 Å), а в качестве аналитической колонки - аналитическую колонку Acclaim PepMap RPLC C18 размером 150 мкм × 150 мм (1,9 мкм, 100 Å). Подвижная фаза A состояла из 0,1% (об/об) раствора муравьиной кислоты и 2% (об/об) раствора ацетонитрила, а подвижная фаза B - из 0,1% (об/об) раствора муравьиной кислоты и 80% (v/v) раствора ацетонитрила. Расход составил 600 мл/мин, время анализа каждого компонента - 60 мин.

[0059] Параметры МС и МС/МС:

[0060] (1) Параметры МС: разрешение 70000; максимальное время впрыска 40 мс; диапазон сканирования 300-1400 м/з.

[0061] (2) Параметры МС/МС: разрешение 175000; максимальное время впрыска 60 мс; диапазон сканирования 300-1400 м/з; верх. N=20; НХС/смоч. НХС=27.

[0062] Оригинальный МС/МС файл проанализировали программным обеспечением Mascot для данного типа образца, выполнили поиск и сравнение с базой данных Uniprot (https://www.uniprot.org/) Gallus gallus (курицы) для определения аминокислотной последовательности пептида.

[0063] Настоящее изобретение будет более подробно раскрыто ниже со ссылкой на конкретные примеры.

[0064] Пример 1. Ферментативный гидролиз пептидов белка куриного яйца

[0065] 1. Предварительный нагрев для приготовления пептидов

[0066] Белок куриного яйца растворили в дистиллированной воде с концентрацией субстрата 4% (масс/об), поместили в водяную баню при 90 °C для предварительного приготовления на 20 минут, затем охладили до 45 °C после предварительного приготовления. Значение pH раствора белка отрегулировали до 7,5, температуру раствора белка отрегулировали до 45 °C. 3000 Ед/г комплексной протеазы (C8800, Solarbio) добавили в соответствии с массой субстрата, и выполняли ферментативный гидролиз в течение 1,5 часов; значение pH отрегулировали до 10,0, а температуру - до 40°C. 3000 Ед/г щелочной протеазы добавили в соответствии с массой субстрата, выполняли ферментативный гидролиз в течение 1,5 ч; значение pH отрегулировали до 7,5, а температуру - до 50°C. 3000 Ед/г ароматической протеазы добавили в соответствии с массой субстрата, выполняли ферментативный гидролиз в течение 1,5 ч, сразу же кипятили в течение 10 минут для разрушения фермента после ферментативного гидролиза, затем ферментативный раствор центрифугировали при 6000 об/мин в течение 20 минут для удаления остаточных белков и получения супернатанта, значение pH отрегулировали до 7,0 и лиофилизировали для последующего использования.

[0067] Для определения выхода полипептида использовали биуретовый способ, и выход составил 42,08±0,48%.

[0068] 2. Ультрафильтрационное разделение полипептидов

[0069] Ферментативный гидролизат белка куриного яйца центрифугировали при 6000 об/мин в течение 20 минут, чтобы получить супернатант. Сначала ферментативный гидролизат фильтровали через мембрану с тонкостью фильтра 0,45 мкм, а фильтрат собирали для следующего этапа. Фильтрат отделяли с помощью ультрафильтрационных мембран 10 кДа, 5 кДа и 3 кДа. Собрали полипептиды с различной молекулярной массой (>10 кДа, 5-10 кДа, 3-5 кДа и <3 кДа). Четыре раствора полипептидов разной молекулярной массы высушили в вакууме и выдержали при -80°C.

[0070] 3. Определение противовоспалительной активности

[0071] 3.1. Влияние на жизнеспособность клеток RAW264.7

[0072] За конечную концентрацию ферментативного гидролизата с молекулярной массой >10 кДа, 5-10 кДа, 3-5 кДа и <3 кДа приняли 1 мг/мл, и измерили жизнеспособность клеток в четырех образцах. Как показано на ФИГ. 1, после добавления четырех образцов жизнеспособность клеток RAW264.7, индуцированных ЛПС, оказалась выше 100%, и токсического эффекта не наблюдалось. Среди них клетки, обработанные ферментативным гидролизатом с молекулярной массой <3 кДа, имели наиболее высокую жизнеспособность, достигавшую 103,62±0,84%.

[0073] 3.2. Влияние полипептидов с молекулярной массой <3 кДа на количество продуцируемого NO

[0074] Влияние полипептидных компонентов с молекулярной массой <3 кДа в диапазоне концентраций от 250 до 1000 мкг/мл на количество продуцируемого NO в макрофагах RAW264.7, индуцированных ЛПС. Как показано на ФИГ. 2, после индуцирования ЛПС в концентрации 1 мкг/мл количество NO, продуцируемого клетками RAW264.7, значительно увеличилось (P<0,05), что примерно в 5,08 раза превышало показатели контрольной группы, что свидетельствует об успешном создании воспалительной модели макрофагов RAW264.7, индуцированных ЛПС. Когда концентрация пептидного компонента с молекулярной массой <3 кДа составляла 1000 мкг/мл, количество продуцируемого NO было наиболее низким и составляло 21,57 ± 0,47 мкМ.

[0075] 3.3. Антиоксидантная активность полипептидов с молекулярной массой <3 кДа

[0076] Значение EC₅₀ антиоксидантной способности полипептидного компонента с молекулярной массой <3 кДа представлено в таблице 3. Полипептидный компонент с молекулярной массой <3 кДа обладает способностью захватывать три свободных радикала: ДФПГ, АБТС и гидроксильные радикалы, то есть обладает определенной антиоксидантной активностью. Свободные радикалы и воспалительные реакции взаимосвязаны. Воспаление связано с избыточным производством и высвобождением активных форм кислорода, таких как гидроксильные радикалы, свободные радикалы супероксид-анионов, атомарный кислород и т.д. Полипептиды с высокой антиоксидантной активностью обычно обладают лучшим противовоспалительным потенциалом. Необходимо исследовать антиоксидантную и противовоспалительную активность биоактивных пептидов одновременно.

[0077] Таблица 3. Антиоксидантная способность полипептидных компонентов с молекулярной массой <3 кДа

Антиоксидантная активность Значение EC₅₀ (мг/мл) Захват свободного радикала ДФПГ 1,97±0,01 Захват свободного радикала АБТС 1,17±0,01 Захват гидроксильного радикала 2,84±0,01

[0078] Пример 2. Выделение и идентификация пептида белка куриного яйца

[0079] ЖХ-МС/МС анализ жидкой массы выполнили для пептидных компонентов с молекулярной массой <3 кДа. Суммарная ионная хроматограмма показана на ФИГ. 3. В результате ЖХ-МС/МС анализа, а также поиска и сравнения в базах данных было получено в общей сложности 790 пептидных последовательностей.

[0080] 2. Виртуальный скрининг и молекулярный докинг

[0081] 2.1. Виртуальный скрининг

[0082] С помощью программы ChemDraw 2D из пептидной последовательности, полученной методом ЖХ/МС-МС, получили двумерную структурную схему пептида, затем с помощью программы Chem3D Ultra 14.0 получили трехмерную структурную схему пептида, которая была установлена как структура с наименьшей энергией (формат pdbqt). Рентгеновскую кристаллическую структуру (формат PDB) индуцируемой NO-синтазы (iNOS, PDB ID: 3e6t) загрузили из базы данных RCSB Protein Data Bank, и с помощью программы Autodock tools 1.5.6 выполнили операции удаления молекул воды, гидрирования и вычисления заряда рецептора iNOS. Все пептидные фрагменты и рецепторные белки докировали отдельно с помощью программы PyRx 0.8. Как правило, энергия докинга была меньше 0. Чем меньше значение, тем плотнее докинг и выше противовоспалительный потенциал. Поэтому пептидные фрагменты отсортировали по абсолютному значению энергии докинга, и пептиды, занявшие верхние строчки рейтинга Peptide Ranker (http://distilldeep.ucd.ie/PeptideRanker/), использовали для прогнозирования возможной биологической активности.

[0083] Индуцируемая синтаза оксида азота (iNOS) - это фермент нервной системы, тесно связанный с воспалительной реакцией. При стимуляции различных воспалительных процессов экспрессия iNOS в большом количестве индуцируется ЛПС или цитокинами, после чего NO продуцируется непрерывно, что может привести к повреждению тканей в месте воспаления. Контроль iNOS является одной из важных стратегий контроля воспалительных реакций при различных патологических состояниях, и iNOS стала ключевой мишенью в лечении воспалительных заболеваний. Программное обеспечение PyRx позволяет моделировать докинг рецепторов и различных лигандов в партиях и оценивать силу их взаимодействия по энергии докинга для достижения эффекта виртуального скрининга. Оценка энергии докинга указывает на потенциал связывания рецептора и лиганда. Как правило, более низкая оценка означает более сильную связь между ними. Согласно таблице 4 пептиды, полученные посредством ЖХ-МС/МС, были смоделированы и оценены, а энергия докинга - ранжирована. Энергия докинга 6 пептидов с наивысшим рейтингом составила ≤ -8,5 ккал моль^-1, что указывает на относительно высокую способность связывания с iNOS. Шесть пептидов были сопоставлены с базой данных BIOPEP-UWM. WINPIGT и WNIP были синтезированы и проверены как антиоксидантные пептиды, а RADHPFL был синтезирован и проверен как ингибирующий ангиотензин-превращающий фермент пептид. Все шесть пептидов представляют собой биоактивные пептиды, полученные из белка куриного яйца. В частности, пептидный фрагмент фенилаланин-глицин-пролин-гистидин (FGPH) не соответствует ни одной из известных биоактивных пептидных последовательностей в базе данных BIOPEP-UWM. Среди неизученных пептидов энергия докинга оказалась наиболее низкой на уровне -9,3 ккал моль^-1, что указывает на возможное сильное ингибирующее действие FGPH на iNOS и признание его потенциально новым противовоспалительным активным пептидом.

[0084] Таблица 4. Сравнение результатов виртуального скрининга и базы данных пептидов BIOPEP-UWM

Последовательность пептидного фрагмента Энергия докинга (ккал моль^-1) База данных пептидных фрагментов BIOPEP-UWM WNIPIGT -9,4 AGWNIPIGT (антиоксидант) FGPH -9,3 нет WNIP -9,0 AGWNIPIGT (антиоксидант) RADHPFL -8,9 RADHPFL (ингибитор АПФ) FPF -8,8 FPFEVFGK (ингибитор АПФ) FGRCVSP -8,5 FFGRCVSP (ингибитор АПФ)

[0085] Возможная биологическая активность шести пептидов была ранжирована с помощью программы Peptide Ranker, а токсичность и физико-химические свойства пептидов были оценены с помощью программы ToxinPred. Результаты представлены в Таблице 5. Ни один из шести пептидов не был признан токсичным. Оценка биологической активности FGPH в Peptide Ranker составляет 0,93, что указывает на то, что FGPH может обладать высокой биологической активностью.

[0086] Таблица 5. Оценка биоактивности и прогнозирование физико-химических свойств пептидов

Пептидная последовательность Оценка Токсичность Гидрофобность Гидрофильность Стерические помехи Амфипатия WNIPIGT 0,71 № 0,16 -1,03 0,60 0,00 FGPH 0,93 № 0,07 -0,75 0,43 0,36 WNIP 0,86 № 0,10 -1,25 0,58 0,00 RADHPFL 0,84 № -0,22 0,10 0,51 0,56 FPF 0,99 № 0,38 -1,67 0,59 0,00 FAGHP 0,82 № 0,11 -0,70 0,29 0,35

[0087] Химическая структура потенциального противовоспалительного активного пептида Phe-Gly-Pro-His (FGPH) показана на ФИГ. 4.

[0088] 2.2. Молекулярный докинг

[0089] Программное обеспечение докинга - Autodock Vina. В качестве лигандов использовали пептиды в формате pdbqt, полученные с помощью Chem 3D, а в качестве рецептора - iNOS в формате PDB, загруженный из RCSB Protein Data Bank, и оба докировали полугибким образом. Для визуального анализа взаимодействия между отдельными малыми молекулами и лигандами использовали программное обеспечение Discovery studio 2.5.

[0090] Механизм противовоспалительного действия FGPH был изучен посредством молекулярного докинга, и FGPH был докирован с рецепторным белком iNOS. FGPH докировали в полость iNOS, и основными силами, действующими между пептидом и iNOS, стали водородные связи, углерод-водородные связи и катион-π взаимодействия. Результаты докинга показывают, что абсолютное значение энергии докинга FGPH и iNOS составляет 9,3 ккал моль^-1. FGPH прочно связан с рецепторными белками.

[0091] Взаимодействие между FGPH и iNOS показано на ФИГ. 5. Gln257 из iNOS образует водородную связь с карбонильным атомом кислорода Gly из FGPH, а также углерод-водородную связь с Pro. Arg260 образует водородную связь с карбоксильной группой His. Arg382 образует две водородные связи с атомом азота His и карбонильным атомом кислорода Pro. Pro344 образует π-алкильное взаимодействие с бензольным кольцом Phe. Arg375 образует два катион-π-взаимодействия с имидазольным кольцом His.

[0092] Пример 3. Синтез полипептида и искусственная верификация

[0093] Пептиды синтезировали способом твердофазного синтеза, осуществляемым компанией Nanjing Yuantai Biotechnology Co. Чистота составила ≥95%, что соответствует требованиям экспериментов, связанных с определением активности.

[0094] 1. Анализ противовоспалительной активности FGPH

[0095] 1.1. Жизнеспособность клеток

[0096] Исследовали влияние FGPH в различных концентрациях на жизнеспособность клеток. Как показано на ФИГ. 6, в диапазоне концентраций от 125 до 1000 мкг/мл влияние FGPH на жизнеспособность клеток RAW264.7, индуцированных ЛПС, сначала увеличивалось, а затем уменьшалось по мере увеличения концентрации пептида. При концентрации FGPH 125, 250 и 500 мкг/мл жизнеспособность клеток превышала 109%, что способствовало их пролиферации. При концентрации FGPH 1000 мкг/мл жизнеспособность клеток была ниже 97%, что подавляло их жизнеспособность. Таким образом, FGPH обладает определенной способностью к стимулированию пролиферации клеток. При выбранной концентрации FGPH от 125 до 500 мкг/мл определили влияние на количество продуцируемого NO и выделение факторов воспаления в клетках RAW264.7, индуцированных ЛПС.

[0097] 1.2. Противовоспалительная активность FGPH

[0098] Исследовали влияние FGPH в концентрации в диапазоне от 125 до 500 мкг/мл на количество продуцируемого NO и выделение факторов воспаления TNF-α, IL-1β и IL-6 в клетках RAW264.7, индуцированных ЛПС.

[0099] Как показано на ФИГ. 7А, после индуцирования ЛПС в концентрации 1 мкг/мл количество NO, продуцируемого клетками RAW264.7, значительно увеличилось (P<0,05), что примерно в 4,94 раза превышало показатели контрольной группы, что свидетельствует об успешном создании воспалительной модели макрофагов RAW264.7, индуцированных ЛПС. По сравнению с группой ЛПС, FGPH оказывал значительное ингибирующее действие на количество продуцируемого NO в клетках RAW264.7, индуцированных ЛПС, в концентрациях 125, 250 и 500 мкг/мл (P<0,05). Под действием этих трех концентраций FGPH количество продуцируемого NO в клетках составило 18,07±0,31, 16,23±0,31 и 13,82±0,31 мкМ соответственно. Следовательно, FGPH существенно ингибирует количество продуцируемого NO в клетках RAW264.7, индуцированных ЛПС, в зависимости от концентрации. По мере увеличения концентрации FGPH ингибирующий эффект на количество продуцируемого NO в клетках становится очевиднее. Когда концентрация FGPH составляла 500 мкг/мл, количество продуцируемого NO было наиболее низким, а коэффициент ингибирования количества продуцируемого NO - наиболее высоким, достигая 64,41±0,47%.

[00100] Как показано на ФИГ. 7B, после индуцирования ЛПС в концентрации 1 мкг/мл выделение TNF-α в клетках RAW264.7 значительно увеличилась (P<0,05), что примерно в 11,03 раза превышало показатели контрольной группы. FGPH в трех концентрациях способен существенно подавлять выделение TNF-α в клетках (P<0,05), причем показатели зависят от концентрации. Наибольший коэффициент ингибирования составил 28,07±2,10% при концентрации FGPH 500 мкг/мл.

[00101] Как показано на ФИГ. 7C, после индуцирования ЛПС в концентрации 1 мкг/мл количество IL-6, выделяемое клетками, значительно увеличилось (P<0,05), что примерно в 8,05 раза превышало показатели контрольной группы. По сравнению с группой ЛПС, FGPH оказывал значительное ингибирующее действие на выделение IL-6 макрофагами, индуцированными ЛПС, в концентрациях 125, 250 и 500 мкг/мл (P<0,05). FGPH существенно подавлял выделение IL-6 клетками RAW264.7, индуцированными ЛПС, в зависимости от концентрации, и по мере увеличения концентрации FGPH ингибирующее действие на выделение IL-6 клетками усиливалось. При концентрации FGPH 500 мкг/мл показатель достигал 41,72±1,83%.

[00102] Как показано на ФИГ. 7D, после индуцирования ЛПС в концентрации 1 мкг/мл выделение IL-1β в клетках значительно увеличилось (P<0,05), что примерно в 5,68 раза превышало показатели контрольной группы. По сравнению с группой ЛПС, FGPH оказывал значительное ингибирующее действие на выделение IL-1β клетками, индуцированными ЛПС, в концентрациях 125, 250 и 50 мкг/мл (P<0,05). FGPH существенно подавлял выделение IL-1β клетками RAW264.7, индуцированными ЛПС, в зависимости от концентрации, и по мере увеличения концентрации FGPH ингибирующее действие на выделение IL-1β клетками усиливалось. При концентрации FGPH 500 мкг/мл показатель достигал 52,43±2,29%.

[00103] 2. Анализ антиоксидантной активности FGPH

[00104] Значение EC₅₀ антиоксидантной способности FGPH представлено в таблице 6. FGPH обладает способностью захватывать три свободных радикала: ДФПГ, АБТС и гидроксильные радикалы, то есть обладает определенной антиоксидантной активностью.

[00105] Таблица 6. Антиоксидантная способность FGPH

Антиоксидантная активность Значение EC₅₀ (мг/мл) Захват свободного радикала ДФПГ 4,96±0,05 Захват свободного радикала АБТС 0,81±0,01 Захват гидроксильного радикала 2,01±0,03

[00106] Пример 4. Реакция Майяра для FGPH

[00107] 1. Способ приготовления

[00108] Определенное количество FGPH взвесили и приготовили в виде раствора 20 мг/мл. Декстран добавили в соотношении массы пептида и декстрана 1,5:1, тщательно перемешивали и проводили реакцию в течение 10 часов при температуре 80°C и значении pH 9,0. По завершении реакции выполнили охлаждение до комнатной температуры, получив продукт реакции Майяра с FGPH, то есть FGPH-MRPs.

[00109] Если принять за показатели количество промежуточных продуктов реакции Майяра, выраженное значением поглощения при 294 нм, и степень оксидирования, выраженную значением поглощения при 420 нм, значение поглощения вышеупомянутого продукта реакции Майяра FGPH-MRPs при 294 нм составило 0,736±0,010, а значение поглощения при 420 нм - 0,696±0,010.

[00110] 2. Определение физических и химических свойств

[00111] 2.1. Инфракрасный анализ с преобразованием Фурье (FTIR)

[00112] ИК-спектры с преобразованием Фурье для FGPH и FGPH-MRPs показаны на ФИГ. 8. Инфракрасную спектроскопию с преобразованием Фурье часто используют для изучения взаимодействий между белками и углеводами и для характеризации изменений в структуре белков. Белок имеет несколько характерных пиков поглощения в инфракрасном спектре, в котором полоса амида I, полоса амида II и полоса амида III имеют поглощение 1700-1600 см^-1, 1600-1500 см^-1 и 1450-1240 см^-1 соответственно. По сравнению с белками пептиды представляют собой маломолекулярные вещества, полученные из белков, в которых большинство вторичных структур белков исчезает, а пик поглощения в полосе амида II не очевиден. Белок/пептид, подвергшийся реакции Майяра, демонстрирует две характерные особенности в инфракрасном спектре. Одна из них связана с валентными колебаниями свободной гидроксильной группы, размытый пик которых появляется в инфракрасном спектре в диапазоне от 3500 до 3000 см^-1; другая связана с валентными колебаниями связи C-O, очевидный пик поглощения появляется в диапазоне от 1260 до 1000 см^-1. Как показано на ФИГ. 8, поглощение FGPH-MRPs при 3500-3000 см^-1 и 1260-1000 см^-1 выше, чем у FGPH, что указывает на протекание реакции Майяра.

[00113] Пик FGPH в полосе амида I соответствует 1668 см^-1, а пик FGPH-MRPs в полосе амида I сдвинут в сторону синего цвета до 1683 см^-1. В основном это связано с реакцией -NH с -C=O, при этом плотность карбонильного электронного облака уменьшается, что приводит к смещению положения пика в сторону синего цвета. FGPH-MRPs имеет более явный пик поглощения, чем FGPH, на полосе амида III при 1435 см^-1. Это обусловлено тем, что плоскость С-Н в структуре ароматической аминокислоты фенилаланин выгнута наружу. Вышесказанное также подтверждает возникновение реакции Майяра.

[00114] 2.2. Сканирующая электронная микроскопия (SEM)

[00115] FGPH и FGPH-MRP поместили под сканирующий электронный микроскоп с одинаковым увеличением. Изображение FGPH под SEM показано на ФИГ. 9A, изображение FGPH-MRPs под SEM - на ФИГ. 9B. Микроморфология FGPH значительно изменилась после реакции Майяра, и FGPH-MRPs демонстрировал нерегулярную чешуйчатую структуру с порами.

[00116] 2.3. Влияние на жизнеспособность клеток RAW264.7

[00117] Было исследовано влияние FGPH и FGPH-MRPs на жизнеспособность клеток в концентрации 500 мкг/мл. Как показано на ФИГ. 10, жизнеспособность клеток RAW264.7, индуцированных ЛПС, под действием двух образцов в концентрации 500 мкг/мл превышала 114%, что указывает на определенную способность клеток к пролиферации. Жизнеспособность клеток двух образцов существенно не различается (P>0,05).

[00118] 2.4. Влияние на количество продуцируемого NO в клетках RAW264.7

[00119] Как показано на ФИГ. 11, после индуцирования ЛПС в концентрации 1 мкг/мл количество NO, продуцируемого клетками RAW264.7, значительно увеличилось (P<0,05), что примерно в 4,94 раза превышало показатели контрольной группы, что свидетельствует об успешном создании воспалительной модели макрофагов RAW264.7, индуцированных ЛПС. По сравнению с группой ЛПС как FGPH, так и FGPH-MRPs существенно ингибировали количество NO, продуцируемого клетками RAW264.7, индуцированными ЛПС в концентрации 500 мкг/мл (P<0,05). После реакции Майяра коэффициент ингибирования продуцируемых NO увеличился с 64,41±0,47% до 68,16±0,48%.

[00120] 2.5. Влияние реакции Майяра на антиоксидантную активность

[00121] Антиоксидантные свойства FGPH и FGPH-MRPs представлены в таблице 7. После реакции Майяра с FGPH уменьшилось значение EC₅₀ для ДФПГ, АБТС и уровень захвата гидроксильных радикалов (P<0,05), что указывает на то, что реакция Майяра способствует повышению антиоксидантной активности FGPH.

[00122] Таблица 7. Антиоксидантная способность FGPH и FGPH-MRPs

Антиоксидантная активность Значение EC₅₀ (мг/мл) FGPH FGPH-MRPs Захват свободного радикала ДФПГ 4,96±0,05^a 4,07±0,03 Захват свободного радикала АБТС 0,81±0,01^a 0,61±0,01^b Захват гидроксильного радикала 2,01±0,03^a 1,56±0,02^b

[00123] 2.6. Изучение изменений вкуса FGPH до и после реакции Майяра с помощью органолептической оценки, системы электронного языка и системы электронного носа

[00124] Вкусовые качества FGPH и FGPH-MRPs до и после реакции Майяра проверили посредством органолептической оценки, системы электронного языка и системы электронного носа. Вкус FGPH-MRPs оказался значительно лучше, чем у FGPH, а горький, вяжущий и соленый вкус были в определенной степени замаскированы. Общее восприятие FGPH-MRPs оказалось лучше, чем у FGPH, и был получен характерный для реакции Майяра мягкий вкус, а запах был значительно изменен. Системы электронного языка и электронного носа способны однозначно отличить FGPH от FGPH-MRP.

[00125] 2.6.1. Органолептическая оценка

[00126] Органолептическая оценка занимает важное место в изучении вкусовых характеристик продуктов питания. Как показано на ФИГ. 12, два образца показали существенную разницу в баллах органолептической оценки. Показатели горького, вяжущего и соленого вкуса у FGPH-MRPs ниже, чем у FGPH. Реакция Майяра помогает замаскировать неприятный вкус. Показатели мягкости вкуса и общей приемлемости у FGPH-MRPs выше, чем у FGPH. Вкус образца значительно улучшается после реакции Майяра, и характерный для Майяра мягкий вкус становится выраженным.

[00127] 2.6.2. Оценка системой электронного языка

[00128] Система электронного языка использовалась для сравнения вкусовых показателей FGPH и FGPH-MRPs и составления лепестковой диаграммы вкуса. В обоих образцах не было обнаружено ни кислого, ни горького послевкусия. Как показано на ФИГ. 13, продукт реакции Майяра FGPH-MRPs обладает меньшей горечью, вяжущей способностью и соленостью, чем FGPH, что свидетельствует о том, что реакция Майяра в определенной степени способна маскировать неприятные вкусы. FGPH сам по себе обладает определенным вкусом умами и насыщенностью. После реакции Майяра вкус умами дополнительно усиливается, что говорит о том, что реакция Майяра помогает подчеркнуть характерный вкус пептида.

[00129] 2.6.3. Оценка системой электронного носа

[00130] Лепестковая диаграмма запаха FGPH и FGPH-MRPs в датчике системы электронного носа показана на ФИГ. 14. Запах до и после реакции Майяра значительно различается. Значения реакции для FGPH-MRPs на датчиках LY2/gCT, T30/1, P10/1, P40/1, T70/2, PA/2 и P30/1 были значительно выше, чем для FGPH. Свободная аминогруппа пептида FGPH согласно настоящему изобретению расположена на фенилаланине. Электронный нос распознал, что содержание летучих ароматических веществ в продукте реакции Майяра с фенилаланином было высоким, и был получен характерный запах Майяра.

[00131] По завершении реакции Майяра общий вкус FGPH улучшился, а запах стал более явным.

[00132] Выше приведено лишь несколько примеров осуществления настоящего изобретения, раскрытых относительно конкретно и подробно, что не должно считаться ограничением защищаемого объема настоящего изобретения. Следует отметить, что специалисты в данной области могут внести ряд модификаций, комбинаций и усовершенствований в каждый из описанных выше примеров осуществления изобретения, не отклоняясь от сущности настоящего изобретения; все они попадают в защищаемый объем настоящего изобретения. Таким образом, защищаемый объем настоящего изобретения определяется формулой изобретения.

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3"

fileName="SequenceListing.xml" softwareName="WIPO Sequence"

softwareVersion="2.2.0" productionDate="2025-02-19">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>2024118265/04(040821)</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2024-07-01</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>Hangzhou BIBAU Biotechnology Co.,

Ltd.</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>CN</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>202310811456.5</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-07-04</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">Ханчжоу БИБАУ Биотехнолоджи

Ко., Лтд.</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>Hangzhou BIBAU Biotechnology Co.,

Ltd.</ApplicantNameLatin>

<InventorName languageCode="ru">ВАН, Ацинь</InventorName>

<InventorNameLatin>WANG, Aqin</InventorNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ

ПЕПТИД ИЗ ЯИЧНОГО БЕЛКА И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ</InventionTitle>

<InventionTitle languageCode="en">EGG WHITE PROTEIN

ANTI-INFLAMMATORY PEPTIDE AND APPLICATION THEREOF</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>4</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..4</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>unidentified</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>FGPH</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Настоящее изобретение относится к области активных пептидов, в частности к противовоспалительному активному пептиду из яичного белка, который представляет собой FGPH и его применению для приготовления противовоспалительных лекарственных препаратов. 2 н.п. ф-лы, 14 ил., 7 таб., 3 пр.

1. Противовоспалительный активный пептид, который отличается тем, что противовоспалительный активный пептид представляет собой FGPH и имеет аминокислотную последовательность Phe-Gly-Pro-His.

2. Применение противовоспалительного активного пептида по п. 1 в приготовлении противовоспалительных лекарственных препаратов, отличающееся тем, что противовоспалительный активный пептид представляет собой FGPH.