Штамм @ @ @ F-157, используемый для борьбы с блохами-переносчиками чумы Советский патент 1984 года по МПК C12N1/00 

СП

4;; at)

со Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии Известен штамм Beauveria bassia na (Bals) Vuill 113H-278, обладающий вирулентностью по отношению к блохам-переносчикам чумы lj. Однако известный штамм обладает длительны циклом развития и низкой продуктив ностью. Целью изобретения является новый штамм Penicillium funiculosum Thorn, обладающий более высокой про дуктивностью, вирулентностью и бол коротким циклом развития, чем известный штамм. Штамм Penicillium funiculosum выделен из субстрата н.ор малого су лика в природном очаге чумы. Штамм характеризуется следующикм культурально-морфологическими и фи зиолого-биохимическизд признаками. Культургльно-морфологические признаки. Величина конидий 5 суточной культу ры 2,5-3 2-2,8 мкм. Конидии эллип ческие, почти шаровидные. На агаризованиой среде сусло ,рН - 5,7) образует умеренно расту щие спороносящие колонии темно-оли ково-зеленого цвета, состоящие из зеленного мицелигшьного войлока, ле ко снимающегося в конидиеносной зоне. Обратная сторона колоний коричневокрасных оттенков. На агаризованной среде Сабуро (рН - 5,7) образует плоские спороно сящие колонии темно-зеленого цвета Обратная сторона колоний темнокрасного цвета. На агаризованной среде Чапека (рН - 5,7) колонии темно-оливковозеленого цвета с нечеткими краями. Споронсшение умеренное. Физиолого-биохимические признаки Хорошо усваивает сахарозу, глюкозу, мальтозу . Интенсивно гидроли зует крахмал. Хорошо усваивает альбумин, казеин. Развивается на пептоне, добавление больших концентраций (3-5%) приводит к образованию R вариантов с низ,ким спорообразованием. Хорошо усваивает аммонийный азрт (NH)S04 CNH4)2HP04, NHHH,P04 и нитраты NaNO, NaCi. Разлагает липиды. Медленно.разжижает желатину. Оптимальная температура культирования 26-28°С. Оптимальное значине РН питательных сред - 5,7. Патогенные свойства. Вызывает 100% гибель блох Ceratophyllus fasc atus на 9 сутки. Ътамм Penicillium funiculosum получен методом селекции на основе изучения вирулентности клонов культ ры гриба Penicillium funiculosum пятикратно пассированной через орга низм блох Ceratoohyllus fasciatus. Последовательное пассирование природного ц1Тс1мма Penicillium funiculosum через организм блох приводит к усилению его вирулентности, а в результате селективнрго отбора вирулентных клонов вирулентность штамма повышается в 2,2 раза (концентрация конидиоспор Penicillium funiculosum обеспечивакщая 50%-ную- гибель зараженных блох, в 6,2 раза меньше концентрации кониди- B.bassiana, вызывающей аналогичный эффект). Пример 1. Штамм гриба P.funicnlosum F 157 культивируют на плотной питательной среде (суслоагар, рН-5,7) в условиях термостата при температуре 26-28с в течение ,10 сут. Десятисуточную культуру высушивают в открытых чашках Петри при 30-3lc с применением гигроскопического вещества - плавленного хлористого кгльция до полного обезвоживания питательной среды и образования массы порошковидных конидий (3-4 суток). Подсушенные конидии снимают с поверхности питательной среды и используют для заражения блох. Заражение осуществляют в биологических пробирках, куда помещают 3-5 суточных блох Ceratophillus fasciatus по 100 экз. в пробирку и вносят навеску порсхаковидных конидий в количестве 100 мг. Пробирки с блохами и КОНИФ1ЯМИ встряхивают 2-3 раза для равномерного распределения конидиоспор по поверхности кутикулы насекомых. Обработанных конидиями блох помещают в кювету, после чего переносят экзгаустером в биологические пробирки с полосками гофрированной фильтровальной бумаги по 10 экз. Пробирки с зараженными блохами закрывают ватномарлевыми пробками и помещают в термостат при 22-23°С и относительной влажности 80-90%. В аналогичных условиях содержатся контрольные незараженные блохи. Ежедневный учет гибели экспериментальных особей в опыте и контроле и пересчет результатов по формуле Аббота позволяет определить гибель блох под влиянием конидиоспор. При заражении блох С.fasciatus конидиями гриба Р.funiculosum F-157 на 8-9 сутки происходит 100% гибель особей, в то время как гибель в контроле составляет 2% в различных сериях опыта.. Пример 2. Блох Ceratophullus fasciatus (по 500 экземпляров) помещают в биологические пробирки, содержгицне в стерильном речном песке различные концентргщии конидий i. funiculosum F-157 (1,2 мг/см, 0,3 мг/см) , Пробирки с блохами содержат в условиях, приближенных к условиям микроклимата нор грызунов (температура воздуха 20-22°С, относительная влажность 80-90%). Контрольные блохи находятся на стерильном речном песке без конидий. Гибель блох происходит под влиянием всех взятых в опыт концентраций конидий P.funiculosum Thorn F-157. . Вирулентность штамма P.funiculosum F-157 для блох Ceratophillis fasciatus представлена в таблице.

Конидии Р.funicolusom F-157, взятые в разных концентргщиях, выэывсшт гибель блох, в то время как Beauveria bassiana в минимальной концентрации {0,3 мг/см) гибели блох не вызывает.

От погибших в опыте блок выделена чист с1я культура гриба P.funiculosum Thpm F-157.

Естественная смертность в контрольных вариантах опыта не превышает 25%.

Использование -изобретения поз- . волит { сширить арсенал средств, используеьих для полевой дустации в природных очагах чумл.

0,3

13,5Гибели блох

не. вызывает

13,2 1,2

13,5

Штамм Penicillium funiculosum Thorn F-157 (коллекция института ВНИИгенетика) - используемый для борьбы с блохами - переносчиками чумы.