Штамм гриба РеNIсILLIUм снRYSоGеNUм Тном,используемый в качестве биологического агента пулецидного действия Советский патент 1988 года по МПК C12N1/00 C12N1/00 C12R1/82 

tC

со

10

15

20

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению биологического продукта, патогенного для блох - переносчиков чумы. Целью изобретения является получе ние штамма Penicillium chrysogenum Thorn 18, обладающего повышенной вирулентностью.

Штамм Penicillium chrysogenum Thorn 18 выделен из субстрата норколо- ний большой песчанки в природном очаге чумы и селекционирован с применением метода индуцированного мутагенеза.

Штамм Penicillium chrysogenum Thorn 18 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов . (ВНИИГенетика) за номером F-341. Штамм Penicillium chrysogenum Thom ВКПМ NF-341 характеризуется следующими культурально-морфологичес- кими и физиолого-биохимическими свойствами.

Культурально -морфологическое свой-25 ства. Рост на агаризованной среде сусло.

Плоские, быстро растущие колонии салатного цвета с белым ободком и приподнятым центром, обильно споро- носящие. Достигают максимальной величины (20 мм) к 10 дню культивирования. Кисточки типично двухъярусные и асимметрические. Конидиеносцы отходят большей частью от субстрата .или от базального войлочного сплетения мицелия, обычно на расстояние 130-180x2,5-3,2 мкм, более или менее гладкие. Метули в верхушечной мутовке, по 4-5 иногда по 8, разные по длине, 12,5-18,7x2,5-3,4 мкм, несущие по 5-8 стеригм с типично острой верхушкой. Конидии эллиптической формы 2,5-3,4x2-2,6 мкм, поверхность вирулентных конидий покрыта выростами остроконечной формы. Рост на агаризованной среде Чапека. Светло-зеленые, плоские, мелкие колонии с белым ободком, диаметр 10- суточных колоний 7-10 мм.

Рост на агаризованной среде Чапека с 5% дрожевого экстракта.

Серо-зеленые колонии с белым ободком и каплями желтого пигмента. Диаметр 10-суточных колоний 15-20 мм.

Рост на агаризованной среде Чапе ка с 1% крахмала.

Ярко-зеленые мелкие колонии с кап лями желтого пигмента.

14425432

Физиолого-биохимичес.кие свойства. - Усваивает сахарозу, глюкозу, мальтозу, гидролизует. крахмал. Усваивает альбумин, казеин, аммонийный азот, нитраты. Разлагает желатину, лнпиды, Температурный оптимум 28 С, рН 5,7- 6,0.

Патогенные свойства. Вызывает 100%-ную гибель блох X.skjabini на 5-7 сутки.

Динамика повышения вирулентности гриба Penicillium chrysogenum Thom ВКПМ № F-341 в процессе селекции показана в табл. 1.

Пример 1. Штамм гриба Р.chrysogenum ВКПМ F-341 культивируют на плотной питательной среде (сус30

35

40

45

50

.- 55

на плотной питательной среде ло-агар, рН 5,7) при 28 С в течение 10 сут. Конидии гриба стерильным шпателем отделяют от поверхности питательной среды без высушивания посевов, что значительно экономит время и уменьшает трудовые затраты на получение биомассы, Заралсение блох X.skjabini конидиями гриба осу- ществлжот в биологических пробирках, куда помещают 3-5-суточных 6jfox по 100 экземпляров и вносят навеску порошковидных конидий в количестве 100 мг. Пробирки с зараженньми блохами встряхивают для равномерного распределения конидий по поверхности их кутикулы. Обработанных насекомых помещают в кщветы, после чего переносят экзгаустером по 10 экземпляров в пробирки с полосками гофрированной фильтровальной бумаги. Пробирки закрывают рыхльЕми ватно-марлевыми проб- термостат при 22- влажности 80- 90%.

В аналогичных условиях содержат контрольных незараженных насекомых. Учет гибели блох в опыте и контроле проводят ежедневно. Вирулентность штамма оценивают по 50 и 100%-ной гибели экспериментальных особей.

Результаты опытов представлены в табл. 2.

П р и м е р 2. Блох X.skjabini (по 500 экземпляров) помещают в биологические пробирки, содержаидие в стерильном речном песке различные концентрации конидий Р.chrysogenum F-341 (5; 2,5; .1.2,- 0,6; 0,3 мг/смз). Пробирки с блохами содержат в условиях, приближенных К условиям микроклимата нор грызунов (температура

ками и помещают в 23 С и относительной

0

5

Пример 1. Штамм гриба Р.chrysogenum ВКПМ F-341 культивируют на плотной питательной среде (сус0

5

0

5

0

5

на плотной питательной среде ло-агар, рН 5,7) при 28 С в течение 10 сут. Конидии гриба стерильным шпателем отделяют от поверхности питательной среды без высушивания посевов, что значительно экономит время и уменьшает трудовые затраты на получение биомассы, Заралсение блох X.skjabini конидиями гриба осу- ществлжот в биологических пробирках, куда помещают 3-5-суточных 6jfox по 100 экземпляров и вносят навеску порошковидных конидий в количестве 100 мг. Пробирки с зараженньми блохами встряхивают для равномерного распределения конидий по поверхности их кутикулы. Обработанных насекомых помещают в кщветы, после чего переносят экзгаустером по 10 экземпляров в пробирки с полосками гофрированной фильтровальной бумаги. Пробирки закрывают рыхльЕми ватно-марлевыми проб- термостат при 22- влажности 80- 90%.

В аналогичных условиях содержат контрольных незараженных насекомых. Учет гибели блох в опыте и контроле проводят ежедневно. Вирулентность штамма оценивают по 50 и 100%-ной гибели экспериментальных особей.

Результаты опытов представлены в табл. 2.

П р и м е р 2. Блох X.skjabini (по 500 экземпляров) помещают в биологические пробирки, содержаидие в стерильном речном песке различные концентрации конидий Р.chrysogenum F-341 (5; 2,5; .1.2,- 0,6; 0,3 мг/смз). Пробирки с блохами содержат в условиях, приближенных К условиям микроклимата нор грызунов (температура

ками и помещают в 23 С и относительной

1442543

воздуха 20-22 С, относительная влажность 80-90%), Контрольные блохи на-

ходятся на стерильном речном песке,

не содержащем конидий. Вирулентность Штамм

конидий оценивают процентом гибели

блох на 5 сут после заражения.

Результаты опытов приведены в табл. 3.

Таким образом, штамм P.chrysogenum ю

ВКПМ F-341 образует конидии, легко Исходньм виру- отделяющиеся от питательной среды, лентный селек- обладает высокой вирулентностью, ционированньм продуктивностью, более короткими сроками культивирования. , 15 Клон из исходной популяции

Таблица

Время гибели б сут

LT 50

1

LT 1

16

19

10

Формула изобретения

Индуцированный

Штамм гриба Penicillium chrysoge-нитрозометилnum Thorn ВКПМ № F-341 испо1 ьзуемый Q мочевиной

в качестве биологического агента штамм F-341 4 5-7 пулецидного действия.

Таблица2

Вид гриба Диаметр 10- Вес конидий Вирулентность суточньсх , в колонии, LT 100, сут колоний, мм мг

Р. chrysoge-.

num F-34119,02805-7

P.funiculosum F-15117,3 1278-9

,«.«.«......H ..«.--«..

ТаблицаЗ

Концентрация Гибель блох на 5- сут. конидий в

стерильном P.chryso- P.funiculo- речном пес- genum sum F-151 KB, мг/см F-341

Таблица 1

Время гибели блох, сут

LT 50

1

LT 100

16

19

10

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к получению биологического продукта, патогенного для блох - переносчиков чумы. Целью изобретения является штамм гриба Penicillium chrysogenum Thorn, обладающий повышенной вирулентностью, продуктивностью. Штамм гриба Penicillium chrysogenum Thorn 18 депонирован в коллекции института ВНИИге- нетика под номером F-341. Штамм получен селекцией с применением нитрозо- метилмочевины из естественной популяции штамма. Штамм культивируют на плотной питательной среде (сусло--- агар, рН 5,7) при температуре 28 С в течение 10 сут. Конидии гриба Р.chrysogenum ВКПМ F341 вызывают 100%-ную гибель блок Xenopsylla skjabini на 5-7 сут после заражения. § Высокая продуктивность, вирулентность для переносчиков чумы позволяют ис- Q/J пользовать штамм в качестве биологического агента инсектицидного действия. 3 табл.