Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении инсектицида боверина, используемого для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и леса.
Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего большей продуктивностью и вирулентностью, чем известные штаммы.
Штамм получен методом селекции на основе многоспорового рассева культуры В.bassiana после пассажа через колорадского жука. Исходная культура гриба вы делена-из природной популяции.
Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ - Г -399.
Штамм имеет следующую характеристику.
Морфологические признаки. При выращивании штамма на плотной агаризованной среде Сзбуро в течение 15 дней при 26 - 28°С гриб образует круглые плоские колонии, прижатые к субстрату с валиком по периферии колонии. Не имеет вторичного роста, коремий. Конидиальный слой меловой консистенции, пигментация конидиального слоя кремового цвета, нижней части - желтовато-рыжая по А.С.Бондарцеву. Размер колоний от 86 ± 0,37 до 90 ± 0,2 мм, интенсивность споруляции 1155 - 1038 млн. спор/мл среды. Воздушный мицелий разветвленный, септированный, белый. Гифы мицелия в диаметре 3.5 - 5,0 мкм. Конидие- носцы бутылевидные формируются одиночО 00 00 00
ю о
но, попарно или мутовками, конидии образуются базипетально на стеригмах. Размер конидий 2,8 - 3,5 мкм, одноклеточные, одноядерные. В гемолимфе пораженных насекомых гриб образует специфические гифаль- ные тела, блзстоспоры, которые размножаются делением. Прорастают конидии через 12 ч (на агаризованной среде при 26-28°С) 1 - 2-ростковыми трубками. Начало кониди- образования через 24 ч.
На сусло-агаре образует идентичный тип колоний.
Физиолого-биохимические признаки. Отношение к источнику углерода: усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, фруктозу, рамнозу. Не усваивает целлюлозу. Крахмал гидролизует.
Усваивает уксусную, щавелевую кислоты. Не усваивает янтарную кислоту.
Усваивает дулыдит, сорбит, глицерин. Не усваивает н-бутанол, изобутанол.
В качестве источника азота использует казеин, пептон, аммонийный азот, нитраты, Аминокислоты стимулируют массовое конидиеобразование.
Протеолитическая активность 3,42 ед/г, липазная активность 1960,6 ед./г.
По отношению к кислороду - гриб аэроб.
Гриб образует антибиотики - бовери- цин, бассианолид.
Температурный диапазон роста культуры гриба от 10 до 30°С. Оптимальная для данного штамма температура 26 - 28°С; рН 4,8 - 6, оптимальная рН 5,4 - 5,5. Фаги не выявлены. Штамм 188 стабилен до 8 генераций. Штамм хранится в пробирках на скошенном сусло-агаре при 4°С в течение 2 лет. Препарат боверин на основе гриба B.basslana не токсичен для теплокровных и человека. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,3 мг/м3, класс опасности 2.
П р и м е р 1. Сравнительная продуктивность различных штаммов B.basslana. Культуру гриба B.basslana выращивают в колбах на качалке (1-я стадия) в жидкой питательной среде, %: меласса 4; кукурузный экстракт 2; KCI0.2; КН2Р040.2. Время культивирования 48 ч при 27 - 28°С. Образуется хорошо развитый мицелий и бластоспоры (инокулят для
твердого субстрата - II стадия). Полученный инокулят смешивают со стерильным твердым субстратом в отношении 1:1. Твердым субстратом являются отходы ячменя при
производстве трихограммы. Время выращивания 120 ч, температура 27 - 28°С.
Полученные данные приведены в табл.1.
П р и м е р 2. Сравнительное определение активности различных штаммов B.bassiana на различных насекомых.
Опыт ставят в пяти поверхностях. В чашки Петри помещают по 15 особей насекомых, обработанных 1 %-ной суспензией
спор (2,5 см3 с титром (1 - 2) х 10 сп./мл). Корм помещают в чашку и меняют в течение всего периода наблюдения. Учет проводят на 7-е сутки, температура 28 ± 1°С.
В табл.2 приведена активность штаммов гриба B.basslana на различных насекомых-вредителях.
П р и м е р 3. Определение вирулентности различных штаммов B.basslana.
Для определения вирулентности штаммов гриба B.bassiana используют метод дозированного инфицирование тест-насекомых (имаго Musca donestica а).Для биологической оценки используют односуточные имаго домашней мухи (лабораторная популяция). Обработку мух производят суспензией спор 0,1; 0,01; 0,001 и 1%. каждая концентрация в трех повторностях. Обработку насекомых проводят 4 мл суспензии каждой концентрации. В стерильные банки помещают по 15 особей мух, корм ставится
в виде сахарного сиропа. Насекомых помещают в сухо-воздушный термостат при 28°С, учет гибели мух производят на 7-е сутки.
Дальнейший расчет проводится по системе пробитое (способ Пригге).
В табл.3 приведена вирулентность штаммов B.basslana.
Таким образом, штамм 188 имеет продуктивность и вирулентность выше, чем известные штаммы 124 - Р, 21 - б, 10 Е, 80№4.
Формула изобретения Штамм гриба Beauveria basslana (Bals) Vulll ВКПМ - Г - 399 для производства ин- 0 сектицидного препарата боверина.
Таблица 1
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении инсектицидного препарата боверина, используемого для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и леса. Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего большей продуктивностью и вирулентностью, чем известные штаммы. Штамм получен методом селекции на основе многоспорового рассева культуры. Beaveria bassiana после пассажа через колорадского жука. Исходная культура гриба выделена из природной популяции. Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ - Г - 399. Выход спор 83,15 г/кг субстрата против 69,38 у известного штамма 124 - Р, ЛКбо% 0,0004 против 0,001 у штамма 10 Е. 3 табл. сл
Таблица 2
Таблица 3
| Авторское свидетельство СССР Мг 923024, кл | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| Авторское свидетельство СССР № 1115262, кл | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
