Способ определения биологической активности препаратов инсулина Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биологии и медицине и касается определения биологической активности лекарственных препаратов. Известен способ огфеделения биологи ческой активности препаратовинсулина путем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов инсул на на биологический тест -объект 1 . Однако известный способ является сложным, а также требуется много вре мени. Цель изобретения - ускорение способа. Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа опред ения биологической активности препара-Гов инс лина путем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов инсу лина на биологический тест-объект, в ка яестве тест-объекта исйольауют миокард предсердия лягушки, а степень вызывае; мого эффекта оценивают по силе сокращения миокарда. Определение биологической активности препаратов инсулина на тест-объекте, представляющем собой изолированные предсердия лягушки Rand RidibuvidaОбездвиженную путем спинадизации лягушку укладьшают на пенопластовую подложку брюшной частью вверх. Вскрывают грудную полость, от сердца определяют венозные и артериальные сосуды. Изолированное сердце помещают в измерительную камеру с,физиологическим раствором следующего состава: /aCt НО мМ.КС 2,5 мМ, СаС 1,8мМ 0,9 мМ, NaHCOj 2,5 мМ, . глюкоза 0,1%, рН 7,8. Предсердия отделяют от желудочка и тонкими нитями привязывают в двух точках. С помощью нитей один конец объекта прикрепляют к стенке камеры, другой соединяют с датчиком силы. Для испытаний используют цинк-инсулин кристаллический для инъекций во флаконах. Раст воры различных концентраций получают путем разведения инсулина из флаконов физиологическим раствором. Для регистра ции зависимости силы сокращения от кон центрации инсулина измерительную камер наполняют растворами с различными концентрациями инсулина. Инсулин оказъюает отрицательный йнотропный эффект на сократительный миокард предсердий лягушки - сила сокращений под его влиявшем уме}1ьшается. Измеряя силу сокращений для различных концентраций инсулина, получают так называемую кривую доза - эффект для данного препарата инсулина. Пусть соотношение доза - эффект для стандартного препарата инсулина будет выражено зависимостью 1, а для исследуемого препарата - зависимостью 2 (фиг. 1). Биологическая активность исследуемого инсулина может быть либо вообие неиа вестна; либо известна ориентировочно. Поэтому для построения зависимости доза-эффект за величину биологической активности исследуемого препарата принимают либо ориентировочно известную активность, либо берут произвольное значение биологической активности, которое точно найдено в процессе определения по данному способу. Способ осуществляют следующим образом. На плоскости с зависимостью доза эффект для стандартного и исследуемого препаратов проводят прямую а , парал. лельную оси концентраций на уровне, соответствующем любой произвольно выбранной степени уменьшения силы сокращения. В точках пересечения А и Б получают два значения концентраций, вызывающих одинаковый эффект: К - концентрацию ставдартного и К - исследуемого препаратов инсулина. По сэтределению концентрации Kjj соответствует некоторое коли- . чество У| ЕД биологически активного стандартного препарата инсулина в одной едишше объема физиологического раствора, Kj - м ЕД исследуемого инсулина в единице объема. Так как биологический эффект К и К/2 одинаков, то из Уп БД исследуемого препарата активными являются тольКО VV ЕД, остальная часть неактивна. Это означает, что исходно взятый для приготовления растворов исследуемый инсулин с предлагаемой активностью N .ЕД/мл в действительности имеет активность ЕД/мл, где oL является нормировочным коэф ящиентом, определенным как отношение стандартного KQ и К исследуемого, вызывающих одинаковый эффект, oL Используя указанную выие процедуру, определяют биологичес1дгю активность инсулина. . Экспериментально находят зависимости доза - аффект для обоих препаратов. Для препарата 1 она представлена зависимостью 1, для препарата 2 - зависимое тью 2, (фиг, 2). Проводят прямую Q параллельно оси концентраций на уровне половинного эффекта, т.е. на уровне 50%-го уменьшения силы сокращения под влиянием инсулина. Получают два значения концентраций, вызывающих одинаковый эффект. Точке А пересечения соо гввтствует концентрация стандартного препарата инсулина К 2,55 ЕД/мл, точке Б пересечения - концентрация исследуемого препарата инсулина 3,75 ЕДГмл. Находят нормировочный коэффициент: :oL К /К-г 2,55/3,75 . О,68. Умножая биологическую активность исследуемого препарата 4О ЕД/мл на 1О О4 aL О,68, получают, Что истинная биологическая актинность, нормированная относительно биологической активности стандартного препарата, равна 27,2 ЦД/мл, т.е. является ниже биологической ак-пганости, указанной на флаконе. Предлагаемый способ позволяет получить точность определения биологической активности 5%. По сравнению с извест- . ным сокращается определения с 8-ЗО дней до 2 ч, обеспечивается возможность автоматизации процесса определения, что значительно ускоряет способ.

а

-СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИНСУЛИНА путем сравнения воэде твия стандартного и исследуемого препаратов инсулина на биологический тест-объект, отличающийся тем, чтро, с целью ускорения способа, в качестве тест-объекта используют миокард предсердия лягушки, а. степень вызываемого эффекта оценивают по силе сокращения миокарда.