ДИКАЛИЕВАЯ СОЛЬ N-(3-ХЛОРО-1,4-НАФТОХИНОНИЛ)-2-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩАЯ АНТИГИПОКСИЧЕСКУЮ, РЕДУКТАЗНУЮ, АНТИАНГИНАЛЬНУЮ И ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 1995 года по МПК C07C211/59 A61K31/135 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к биологически активным соединениям, проявляющим антигипоксическую, редуктазную, антиангинальную активность и противоишемическое действие.

Предлагаемое биологически активное соединение является новым производным 1,4-нафтохинона.

В литературе описаны производные 1,4-нафтохинона, обладающие различной биологической активностью, например 2-метионино-3-хлоро-1,4-нафтохинон (1) [1] проявляющий фунгицидные свойства.

Наиболее близким аналогом по строению и по действию к заявляемому соединению является 2,3-диметокси-5- метил-6-нонапренил-1,4-бензохинон (убинон) (II) [2]

Цель получение нового производного 1,4-нафтохинона, проявляющего антигипоксическую, редуктазную, антиангинальную активность и противоишемическое действие.

Поставленная задача решается тем, что используется дикалиевая соль N-(3-хлоро-1,4-нафтохинонил)-2-глутаминовой кислоты III

Синтез предлагаемого соединения основан на взаимодействии 2,3-дихлоро-1,4-нафтохинона с глутаминовой кислотой в присутствии гидроксида калия.

Спектроскопическое исследование заявляемого соединения (II) подтверждает наличие карбонильных групп. Поглощение карбонилов хинона обнаружено в области 1680 см^-1. В спектре проявляется также характеристическая полоса вторичной аминогруппы, сопряженной с хиноидным ядром в области 3288 см^-1 и первичной аминогруппы в области 2580 см^-1.

П р и м е р 1. Синтез.

2,27 г 2,3-Дихлоро-1,4-нафтохинона, 100 мл этилового спирта нагревали при перемешивании до 70^оС. К суспензии прибавляли предварительно приготовленный раствор 1,47 г глутаминовой кислоты, 1,68 г гидроксида калия, 5 мл этилового спирта и 10 мл воды. Перемешивали при 70^оС, 2,5 ч. Красные кристаллы отфильтровали, промыли горячим хлороформом. Добавили 2 мл соляной кислоты. Смолу промыли холодной водой и переосадили гидроксидом калия. Красные кристаллы соединения (III) кристаллизовали из метанола. Т.пл. > 250^оС, мол. м. 413,5. Выход 2,33 г (56%).

Найдено, С 43,48; Н 2,46; N 3,28; Cl 8,51; K 18,69.

С₁₅Н₁₀NK₂ClO₆.

Вычислено, С 43,53; Н 2,42; N 3.39; Cl 8,59; K 18,86.

П р и м е р 2. Изучение токсичности.

Токсичность описываемого соединения изучали на белых нелинейных мышах обоего пола массой 18-20 г при внутрибрюшинном введении. Гибель животных изучали через 24 ч. Статистическую обработку проводили методом Литчфилда и Уилкоксона в модификации Рота. Результаты исследований показали, что токсичность (ЛД₅₀) описываемого соединения составляет 406 мг/кг (267,1-616,2).

П р и м е р 3. Антигипоксическая активность.

Острую асфиксию у мышей вызывали перевязкой трахеи, а антигипоксическое действие после внутривенного введения препаратов оценивали по длительности сохранения биоэлектрической активности сердца, контролируемой при записи ЭКГ во втором стандартном отведении.

Как видно из данных, представленных в табл. 1 испытуемые соединения в дозе 0,5% ЛД₅₀ не уступают, а в дозе 2% ЛД₅₀ превосходят по эффективности такой известный антигипоксант, как оксибутират натрия.

П р и м е р 4. Гистотоксическая гипоксия.

Гистотоксическую гипоксию моделировали внутрибрюшинным введением азида натрия в дозе 20 мг/кг. В опытных сериях экспериментов за 45 мин до инъекции азида натрия энтерально вводили испытуемое соединение и препарат сравнения "Убинон", взятый в изомолярной дозе. Контрольной серии мышей препарат не вводили.

Как видим из данных, приведенных в таблице 2, испытуемое соединение оказывает выраженное антигипоксическое действие на модели гистотоксической гипоксии, значительно превосходя по эффективности препарат сравнения "Убинон", основу которого составляет убихинон.

П р и м е р 5. Гипобарическая гипоксия.

Гипобарическую гипоксию моделировали при "подъеме" в барокамере мышей до высоты 10000 м со скоростью 20 м/с. Испытуемое соединение и препарат сравнения "Убинон", взятые в изомерных дозах, вводили энтерально за 45 мин до начала эксперимента.

Как видно из данных, представленных в табл. 3, испытуемое соединение оказывает антигипоксическое действие на модели гипобарической гипоксии, не уступая по эффективности препарату сравнения "Убинону", основу которого составляет убихинон [2]
П р и м е р 6. Редуктазная активность [3]
Оценку редуктазной активности проводили на эритроцитах донорской крови человека по тесту изменения скорости восстановления феpицианида калия при добавлении в инкубационную среду (раствор Тироде) испытуемого соединения. Препаратом сравнения служил раствор метиленового синего. Скорость восстановления ферицианида калия на фоне действия веществ рассчитывали за вычетом спонтанной скорости восстановления ферицианида.

Как видно из данных, представленных в табл. 4, испытуемое соединение обладает редуктазной активностью. Достоинством испытуемого соединения по сравнению с метиленовым синим является то, что его редуктазная активность при закислении среды возрастает. Это обстоятельство может иметь важное значение, поскольку при ишемии и гипоксии наблюдается сдвиг кислотно-щелочного равновесия в сторону формирования метаболического ацидоза.

П р и м е р 7. Оценка профилактической антианиганальной активности [4]
Исследования проводили на бодрствующих кроликах породы Шиншилла массой 3,0-3,5 кг с предварительно (за 48 ч до начала эксперимента) вживленным приспособлением (окклюдером), позволяющим осуществлять медленное сужение нисходящей ветви огибающей коронарной артерии. Операцию по вживлению окклюдера проводили в условиях общей анестезии (тиопентал натрия 40 мг/кг). Регистрировали степень сужения коронарной артерии, при которой возникают электрокардиографические признаки ишемии миокарда (порог ишемии миокарда) на предкардиальной ЭКГ. Исследуемое вещество вводили внутривенно в дозе 5 мг/кг после установления стабильного порога ишемии миокарда. Всего было проведено 8 опытов на 4-х кроликах с 48-часовым промежутком времени между повторным введением вещества каждому кролику. Полученные данные показали, что вещество увеличивает порог ишемии миокарда во всех опытах. Эффект начинался сразу после введения исследуемого вещества и продолжался более 1,5 ч. Эти результаты свидетельствуют о наличии у испытуемого соединения профилактического антиангинального действия.

П р и м е р 8. Исследование противоишемического действия испытуемого соединения.

Эксперименты по изучению влияния испытуемого соединения на течение острой ишемии поставлены на собаках обоего пола массой 8-16 кг, наркотизированных этаминалом натрия (40 мг/кг внутрибрюшинно). У собак, переведенных на управляемое дыхание, вскрывали грудную клетку, перикард. Выделяли нисходящую ветвь левой коронарной артерии и после инъекции гепарина (50 ЕД/кг), катетеризировали бедренную артерию, полость левого желудочка и регионарную коронарную вену. После регистрации исходных показателей кардиогемодинамики (ЧСС, САД, dp/dt) и получения исходных проб крови, легировали коронарную артерию и определяли исходный уровень коллатерального коронарного кровотока (ККК) и ретроградное давление (РД) в дистальном участке артерии. Испытуемое соединение вводили внутривенно в дозе 5 мг/кг через 5 мин после окклюзии коронарной артерии. Препаратом сравнения служил цитохром С.

Как видно из данных, представленных в табл. 5, испытуемое соединение значительно уменьшало концентрацию лактата в крови, оттекающей из зоны ишемии в течение первых 30 мин от начала эксперимента, снижало употребление глюкозы ишемизированным миокардом.

На этом фоне наблюдалось повышение сократительной способности сердечной мышцы, стабилизация уровня артериального давления, повышалось ретроградное давление и коллатеральный коронарный кровоток. Частота сердечных сокращений по сравнению с контролем менялась не существенно (см. табл. 6).

Испытуемое соединение по выраженности и длительности кардиопротекторного эффекта существенно не отличалось от цитохрома С.

Изучение влияния испытуемого соединения на размеры зоны некроза оценивалось в экспериментах на крысах массой 250-350 г, наркотизированных этаминалом натрия (40 мг/кг внутрибрюшинно). У крыс перевязывали нисходящую ветвь левой коронарной артерии на уровне нижнего края ушка левого предсердия по общепринятой методике. Через 4 ч подопытных животных забивали и определяли размеры зоны ишемии и зоны некроза дифференциальным индикаторным методом [5]
Испытуемое соединение вводили внутривенно в дозе 1 мг/кг сразу после окклюзии коронарной артерии. Препаратом сравнения служил цитохром С.

Как видно из данных, представленных в табл. 7, испытуемое соединение в дозе 1 мг/кг достоверно (р < 0,05) уменьшало размеры зоны некроза и превосходило противоишемическое действие цитохрома С.

Полученные данные свидетельствуют о том, что испытуемое соединение обладает большой широтой терапевтического действия: проявляет высокую антигипоксическую, редуктазную, антиангинальную активность и противоишемическое действие, причем по всем перечисленным видам активности превосходит эталонные препараты убинон, оксибутират натрия, цитохром С, и может быть использовано для лечения гипоксии различных органов ишемия сердца, инфаркт миокарда и др.

Использование: в медицине, так как обладает антигипоксической, редуктазной, антиангинамной и противоишемической активностью. Сущность изобретения: продукт - дикалиевая соль N-(3-хлоро-1,4-нафтохинонил)-2-глутаминовая кислота формулы C₁₅H₁₀NK₂ClO₆ Т.пл. 250°С, вых. 56% . Реагент 1: 2,3-дихлор 1,4-нафтохинон. Реагент 2: глутаминовая кислота. Условия реакции: в присутствии КОН при нагревании. 7 табл.

Дикалиевая соль N-(3-хлор-1,4-нафтохинонил)-2-глутаминовой кислоты формулы

проявляющая антигипоксическую, редуктазную, антиангинальную и противоишемическую активность.