Способ определения возраста у самцов крыс Советский патент 1983 года по МПК A61B10/00 

(Л

С

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗРАСтА У СйМЦОВ КРЫС по морфометрическим | .. пекаэателям животных, о т л и ч а й;щ и и с я тем, что, с целью повыае4 ния точности. Дополнительно проводят О11 ределение концентрации тестостерог на в плазме крови и определение актяв11ОСТИ поглощения И -тестостерона клетками кожи гепитальной области, а отношение,.этих величин используют (ДЛЯ установления возраста.

to о Изобретение относитТЬя к экспериментальной медицине и может быть использовано при проведении любых медикобиологических экспериментов. Современная экспериментальная медицина, и биология требуют четкого указания возраста или возрастного периода лабораторных животных, на которых проведен тот или иной экспе римент, так как у животных различны возрастаных групп одни и те же воздействия вызывают не толвко количественно, но и качественно неоднот ные реакции. Отсутствие в научных публикациях указаний на возраст . экспериментальных животных лишает исследователей возможности сопостав лять результаты, полученные в разны лабораториях. Наиболее точным способом определ ния возраста, а значит и возрастног периода, является их паспортизация. Однако при массовом разведении живо ных в питомниках эта работа по тем или иным причинам не проводится, и научно-исследовательские институты и лаборатории часто снабжаются непаспортизированными животными. Известен способ установления воз раста животных по весу и длине ту.ловшца 1 . Однако эти аоометрические параме ры могут служить лишь ориентировочными показателями, так как в большей мере зависят не только от возраста, условий содержания, кор ления, от индивидуальных особенноетей, линии и породы животного. Известньай способ не обеспечивает точного определения возраста, а зна. чит и возрастного периода лабораторных животных. ; I Целью изобретения является повышение точности при определении возраста, у самцов крыс. Цель достигается тем, что соглас но способу определения возраста у самцов крыс по морфометрически показателям животных, дополнительно проводят определение концентрации тестостерона в плазме крови и определение активности поглощения. Из-тестостерона клетками кожи гепитальной области, а отношение этих величин используют-1ДЛЯ установления возраста. Пример. Те.стостерон плазмы крови крыс линии вистар определяют спектрофлоуриметрическим. методом. Определение активности поглощения Нэ -Фестостерона анДрогениза висимой тканйю - кожей проводят еле дующим образом. Обездвижив животное с номсмгсью эфирного наркоза, удаляют шерстяной покров на ограниченном участке кожи мошонки. Кожу обра ©атвваадат спиртом, протирают насухо стерильным тампоном и, захватив браншами стерильного пинцета, срезают её стерильной бритвой. Захват кожи необходимо производить таким образом, чтобы после срезания выступили мелкие капли крови, что свидетельст вует о проникновении в глубокие слой кожи. Ранку зашивают 2-3 швами, а кусочек кожи, взвесив на торсионных весах, помещают во флакон.со средой Игла, содержащей .0,5 мкк И}. -тестостерона в 1 мл среды. Флаконы находятся в термостате при 31°С, На флаконах отмечают номер животного и время начала инкубации. Продолжительность инкубации биопсий - 1 ч. После этого их извлекают, промывают в 3-х порциях подогретого до раствора Хэнкса и гомогенизлруют в концентрированной муравьиной кислоте. Объем гомогената 1,5 мл. Гомогенат переносят во флаконы, заливают 15 мл диоксанового сцинтиллятора и радиоактивность проб считывают на жидкостном сцинтилляционном счетчике СБС-2 или на другом аналогичном приборе. Величину активности поглощения На -тестостерона биопсиям кожи выражают в имп/мин/мг ткани. Получив указанные величины, определяют отношение концентрации тестостерона в плазме крови у данного .животного к активности поглощения его меченого аналога кожей мошонки этого же животного( Величину отношения выражали в относительных единицах. В таблице отражены результаты, полученные при подсчете отношения . уровня тестостерона и активности ..; поглощения Нз-тестостерона кожей : генитальной области 150 крыс-самцов 1-6 дней жизни (период новорожденности или неонатальный период, 120 крыс 15-30 дней жизйи (неполовозрелый период), 80 крыс 34-45 дней жизни (период полового созрё ванияУ, 52 крыс 70-90 дней жизни подслучный период), 100 крыс (120300 дней жизни} репродуктивный период , 150 крыс 12-18 мес. зре лый возраст и 60крыс 20-24 мае период престарческих изменений). Обнаружено, что несмотря на индивидуальные колебания уровня тестостерона и активности койсной рецеп.ции его мечечного аналога величина их отношения остается постоянной, присущей тому или иному возрастному периоду, что и позволяет использовать эту величину в качестве критерия возрастного периода Сохраняющееся внутри возрастного периода постоянство отношения указанных величин связано с тем, что эти физиологические параметры составляют 2 звена.функциональной системы гормон-рецептор. Поскольку сам тестостерон принимает участие в регуляции синтеза специфических рецепторных белков в тестрстерончу ств.ительных тканях, а активность рецепции и метаболизма в тканях является одним из факторов, опреде ляющих новообразование и секрец1яо гррмонэг между гормоном и активное тью его поглощения тканями постоян но поддерживаются определенные кол чественные соотношения, характерны для того или иного этапа развития организма. В. виварий института из питомник поступила партия крыс-самцов, возраст которых неизвестен.. Партия со тоит из 120 животных, вес КОТОЕИХ 110-200 г, т.е. по весу животные могут Пр,инадлежать как к неполовозрелому, так и к репродуктивному возрастному периоду.. 12 животных (4 шт.весом 110115 г 4 - 150-170 г, и 4 - 190 200 г у Ktc еле дуют уровень тестостерОна плазмы (ту,-активность поГЛощ ния Нз -тестостерона (,AnJ) и опреде ляют отношение указанных величинДФ/ Получены следующие результаты (приведены средние величины) X группа: Т - 0,15 мкМ/л Ап - 50,0 имп/мин/мг} 2/Ап - 3,0-10 : П, группа: Т - 0,14 мкМ/л 45 ИМП/МИН/МГ, чЕ/Ап - 3,0-10-Щ. группа: Т - 0,17 мкМ/л, Ап - 53,3 имп/мин/мг} Т/Ап - 3, У всех 3-х групп животных величина отношения исследуемых параметров одинаковая, характерная Для репродуктивного периода. Сопоставление полученных результатов и данных регистрации указанной партии животныхв питомнике показало, что вывод об одинаковом возрасте крыс верен, : а разница в весе животных объясняет ся тем, что в питомнике не выдерживаются нормы -расссщки животных по клеткам. Йреимущеетво предлагаемого спо.соба заключается в том, что он на определении физиологичес1 их показателей, имеющих четкую возрастную динамику и не зависящих от условий содержания животного. Способ позволяет объективизировать процесс определения возрастных периодов крис-самцов, т.е. повасить точность проводимых Научных экспериментов, сделать сопоставимвими результаты работ, проводящихся в разных лабораториях. После установления видовых уровней названных величин способ может быть применен ля определения возрастных периоов мужского пола других |идов животных и человека.