Способ дифференциальной диагностики фибринолиза и фибриногенолиза Советский патент 1983 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относитовя к медицине, а именно гематологии, и касается способа дифференциальной диагностики фибринолиэа и фибриногенолиза. Известны способы дифференциальной диагностики фибринолиза и фибриногенолиза путем определения показателей свертывающей и противосвер тывающей системы: определение концентрации фибриногена числа и функции тромбоцитов; парциального тронбопластинового, тромбинового, протро бинового и ептилазного времени аититромбина Щ, этанолового11 протамин сульфатного теста; J, УЛ., .ХЦ и ХЦ факторов свертываний крови, степени фибринолитической активности крови/ глубины распада фибриногена и фибрина l - 5 . Однако определение перечисленных показателей недостаточно для конкрет ной дифференциальной диагностики фиб ринолиза. и фибриногенолиза. Кроме того, необходимо отметить сложность и трудоемкость выполнения требуемого комплекса исследований, которые до настоящего времени мало доступны для повседневной гематологической практи ки. . Известен способ дифференциальной диагностики фибринолиза и фибриногенолиза путем иммунохимического иссле дования сыворотки крови б. Недостатком способа является его длительность и трудоемкость. Целью изобретения является ускоре ние и упрощение способа. Указанная цель достигается тем, что согласно способу дифференциальной диагностики фибринолиза и фиб риногенолиза путем иммунохимического исследования сыворотки крови исследуемую пробусыворотки крови де лят на две части, одну из них прогре вают пр;р 55-57°С в течение 18-22 мин далее определяют в ней концентрацию D-фрагмента фибрина и при.наличии ег диагносцируют фибринолиз, во второй пробе определяют концентрацию D-фрагментов фибрина и фибриногена и при наличии D-фрагмента фйбриногена и отсутствии D-фрагмента фибрина. диагносцируют фибриногенолиз. Способ осуществляют следующим обраэрм.. Навеску агар-агара растворяют в веронал-ацетатном буфере, доводят до полного набухания на кипящей водяной бане, фильтруют и готовят пле ки агара. В застывшей пленке специальным перфоратором делают отверстия по 6 вокруг 1 центрального. В центральнью отверстия вносят моноспецифическую сыворотку к D -фрагменту фибриногена АДС). В периферические отверстия по часовой стрелке вносят разведенную в геометрической прогрессии веронал-ацетатным буфером непрогретую и прогретую сыворотку исследуемого больного. Пленки агара оставляют на 24 часа во влажной камере при комнатной температуре для образования осадка, который проявляется в виде линий преципитации. После формирования дуг преципитации на основании чувствительности используемых АДС производят подсчет-расшифровку результатов исследования и осуществ-i ляют дифференциальную диагностику. ( Пример. Больная 32 лет, обследована по поводу острого промиелоцитарного лейкоза. - В крови больной определяют содержание продуктов деградации фибрина и фибриногена, для чего 15 г агарагара растворяют в 1 л веронал-ацетат-1 ного буфера рН 8,6 ионной силой 0,5 на кипящей водяной бане. После полного набухания агара, его фильтруют и готовят пленки толщиной 11,5 мм. После полного застывания в плёнке агарового геля, специальным металлическим перфоратором делают 12 отверстий по б вокрг 2 центральных. Таким образом получается 2 звезДы, Диаметр всех отверстий и расстояние между ними равно 5 мм. В центральны отверстия 1 и 2 звезДы вносят по 0,05 мл АДС. В периферические отверстия 1 звезды вносят непрогретую сыворотку крови больной, разведенную в геометрической прогрессии вероналацетатным буфером рН 8,6, ионной силой 0,3. Соотношение исследуемого .материала и буфера следующее: 1; 1:1;. 1:2; 1:4 и т.д. В, периферические отверстия 2 звезды вносят разведенную указанным спо- собои прогретую сыворотку исследуемого больного.. Прогревание сыворот- . -.-- осуществляют 20 мин при . Через 24 ч инкубации агаровой, йленки во влажной камере при комнатной температуре в ней образуется осадок, который выявляется в виде дуг пре- . ципитации. На основании чувствительности антисыворотки, {наименьшая концентрация антигена, улавливаемая используемой АДС) производят подсчет |.(мг.%)| количества суммарной концент-. рации продуктов деградации фибриногена (фибрина) (l звезда), количество дубль-D-фрагмента фибрина (2 звезда) по формуле где А - количество исследуемого параметра, мг.% в - чувствитель ность иммунной СЫ-. воротки; р : количество линий иммунопреципитации в пленке агара (разведение). При лабораторном обследовании выявлено наличие фрагмента D -фибриногена. (12,5 мг%) при отсутствии D-фрагмента фибрина. На основании полученных данных был диагностирован фибриногенолиз. Клинически отмечалис ,единичные геморрагии на коже конечностей. В связи с лабораторными приз наками ДВС больная получала цитрстатическую терапию и гепарин, который назначали внутривенно капельно медленно в дозе 2-5 000 ед,по схеме. Контролем лечения служили данные коагулограммы и иммунохимические тес |ты которые позволили регулировать дозировку препарата и показали s кон це лечения отсутствие распада как фибриногена/ так и фибрина. Больная после лечения находилась-в состоянии ремиссии. Пример 2. Больной 46 лет поступил с диагнозом тромбоз глубоких вен левой нижней..конечности. Клинически отмечалось покраснение, отек и резкая боль в поражённой KOHe iHocти. Первичное лабораторное обследование подтвердило клинический диагноз острого тромЬоза (увеличение концентрации фибриногена до 400 мг% D-фрагменты фибрина и фибриногена от сутствовали) .Лечение проводили У1ХЭкннином Одноразово внутривенно капельно в дозе 20000 ед. с добавлением Гепарина по схеме. В процессе лечения больного с помощью иммунохимических тестрв выявлена активная фибриногенолиза (количество фибриногена 150 мг% Ь-фрагмент фибриногена 100 мг%, D-фрагмент фибрина - от. сутствует ), а в конце лечейия зарегйстрировали фибринолиз (концентрация .фибриногена - 100 мг%, В-фрагмента фибриногена - отсутствует). Состояние больного улучшилось. Примерз. Больная перенесла операцию кесарева сечения на основании следующих клинических данных: узкий Таз Т-й степени рубец на матке, пиелонефрит. До операции иммунологические исследования констатировали фибриногенолиз (концентрация фибриногена 300 мг%, D-фрагмент фибриногена - 25 мг%, D-фрагмент фибрина отсутствует) после лечения р операции отмечали фибринолиз оличество фибриногена - 300 мг%, и-фрагмента фибрина - 25 мг%/ U-фрагмент.фибриногена отсутствует). У беременных во время операции кесарева .сеч-ения нередко .возниксцот серьезные нарушения свертывания, крови, проявляющиеся в виде послеоперационных тромбозов магистральных сосудов или массивных кровотечений. С целью предотвращения этих осложнений, . Которые подтверждались иммyнoлoгичedкими тес;тами, в конце операции внутривенно одноразово введено 5 000 ед, гепарина. После пров.еденного лечения и операции у беременной по всем исследуемым показателям констатирована конечная стадия фибринолиза (концентрация фибриногена - 300 мг%, и-фрагмент фибрина - 25 мг%, D-фраГмент фибриногена отсутствовал). Кровртечения и тромбоза не наблюдали. В таблице представлены результаты исследования фибринолиза и фибриногенолиза в крови здоровых лиц и больных ра личньо4и заболеваниями.

Ы t 10

н «а ffi

X о. 4)

Э S а

71026778.8 ,

Таким образом, используя предлагав- Использование предлагаемого иссэте

йый иммуиохимический тест можно осу-довйния исклктчает из практики.лаворато.ществить одновременное исследование;РИИ комплекс длительных и трудоемких - i и с. высокой степенью достоверности;методов,что дает возможность с найменьпроводить дифференциальную диагности-шей затратой времени,материалов и аппаку медду фибринолизом и фибриногено- 5ратуры получить достоверную информацию

лизом.о фибринолизеи фибриногенолизе

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ФИБРИНОЛИЗА И ФИБРИНОГЕНО- ,. ЛИЗА путем иммунохимического исследования сыворотки крови, о-т л и ч аю щ и и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, исследуемую пробу сыворотки крови делят на две части, одну из них прогревают при 55-57°С ,в течение 18-22 мин, определяют в. ней концентрацию D-фрагмента фибрина и при наличии его диагносцируют фибринолиз, в другой части определяют концентрацию D-фрагментой фибрина и фибриногена и при. налич:ии D.-фрагмента фибриногена в отсутствие D-фрагмента фибрина диагносцируют фибриногенолиз. ю О vj 00