Способ выделения и очистки гормонов цветения растений короткодневных видов Советский патент 1983 года по МПК C07G15/00 

Изобретение относится к способу выделения и очистки соединений, вызывающих цветение растений короткодневных видов, находящихся в неблагоприятных для этого условиях длинного дня или непрерывного ,света,

Эти соединения являются фитогормонами, регулирующими цветение растений,, которые способны зацветать в естественных условиях только после наступления короткого дня (8-10 световых часов в сутки).

Эти соединения могут быть использованы для продвижения на север субтропических и тропических растений, а.также регуляции цветения растений короткодневных сельскохозяйственнь1х культур. -,

Известен способ выделения из листьев цветущих короткодневных растений дурнишника (Xanthium pensil vanicum Xanthium strumanum) и подсолнечника (Helianthus annuus) гормонов , вызывающих закладку цветков у 50% опытных растений дурнишника, выращиваемых в условиях длинного дня (в опыте использовано 10 растений) , заключающийся в экстракции в вакууме при кипящим метанолом или другими полярными растворителями из лиофилизированных листьев цветущих растений с последукиим упариванием экстракта и смешиванием остатка с линолином ij . ..

Недостатком известного способа является незначительная биологическая активность выделенных гормонов7 поскольку лишь у 50% опытных расте- НИИ отмечены, морфологические сдвиги в дифференцировке апексов (закладка цветков).

Цель изобретения - получение препаратов высокой активности.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выделения и очистки гормонов цветущих растений короткодневных видов, лиофилизированные листья подвергают экстракции кипящим этанолом или другикш полярными растворителями при 50-70 С с последующим упариванием полученного экстракта, растворением остатка в метаноле, отделением выпавшего после добавления воды хлорофилллипидного осадка, упариванием маточного раствора, перерастворением осадка в метаноле, осаждением гликозидов путем добавления хлороформа или других полигалоидированных углеводородов , упариванием надосадочной жидкости и дальнейшей хромаграфической очисткой целевого продукта.

Причем хроматографическую очистку осуществляют на колонках с силикагелем КСК, которые э юируют хлорофор мом, содержащим увеличивающееся количество этанола, при этом целевой продукт содержимся во фракции, элюируемой смесью, содержащей 10 об.% этанола.

Кроме того, целевой продукт подвергают дополнительной очистке методом тонкослойной хроматографии на силикагеле КСК в системе хлороформметанол, содержащей 8 об.% метанола концентрируя его в зоне с Rj 0,2-0,4

Биологические испытания полученного препарата проводят на проростках и сеянцах растений короткодневного вида мари красной (.Che по podium rubrum), находящихся на непрерывном свет. Раствор активной фракции в воде с концентрацией 3 мг/мл вызывает 100%-нуюзакладку цветочных органов у проростков мари красной при нанесении в течение 3 дней 0,05 мл такого раствора на верхушечную почку каждого из 10 опытных растений, ОГЕЫТ с проростками повторялся 5 раз результаты одного ,из них приведены в таблице.. Раство активной фракции с концентрацие1$ 30 мг/мл вызывает 100%-нре зацветание сеянцев мари красной при«нанесении в течение 18 дней 0,05 мл такого раствора на верхушечную каждого растения. Контрольные растения, обработанные водой или раствором, жеще ста, деленных ио а«алогичной методике из листьев Nlcotiana tabacujn, которые вьфашивалксь в условиях длинного ЯНН, оставались на 100% в вегетирующем состоянии , Опыт с сеянца ш повторялся 9 раз (результаты од;ного из них приведены в таблице).

В таблице показано влияние активной фракции, выделенной из листье короткодневных растений ana tabacum на дифференциацию апексов проростков и зацветсшие сеянцев.

П р и м е р, В трехгорлую колбу емкостью 2 л, снабженную мехайическо.й мешалкой и обратным холодильником, загружают 75 г лиофилизирован ных листьев растений табака (Nicotiana tabacum) сорта Мамонт, выращенных в условиях короткого дня. Листья заливают 1,5 л спирта, нагревают смесь до кипения при работающей мешалке, кипятят 3 ч, а затем оставляют на ночь. Спиртовый экстрак декантируют, а листья экстрагируют в тех же условиях еще 3 ч. Полученный экстракт объединяют с первнчным спиртовым экстрактом и упаривают до постоянного веса в вакууме при t440. Остаток растворяют в 35 мл метанола и добавлением 80 мл воды высаживают основную массу хлорофилла и липидов. Водно-метанольный раствор фильтруют и экстрагируют гексаном (50 мл 3) для удаления остатков хлорофилла и липидоэ, Хлорофилл-липидньай осадок растворают в гексане и промывают водой

(ЗО мл 3J ; промывные воды присовдинягот к основному водно-метальному раствору, котогялй после этого упаривают до постоянного веса в вакууме при t . Остаток растворяют в 30 мл метанола и добавлением 220 мл хлороформа высаживают вязкий осадок гликозидов, легко сбиваихцийся в комок. Надосадочную жидкость сливают, гликоэидный осадок вновь растворяют в 25 мл метанола и высаживают гликоэиды 200 мл хлороформа. Объединенные Нсшосадочные жидкости упариВёцот до постоянного веса и получают 2,53 г смеси сухих веществ, которую объединяют с еще 5,27 г такой же смеси, полученной при аналогичной переработке 157 г лиофилизованных листьев Nicotiana tabacum и все вместе (7,8 г) хроматографируют на колонке с 240 г силикагеля КСК

{60-100 4еш., d колонны 3,5 см/ CJiOH адсорбента 68 см), очи щенного от солей елеза. Йолонну

последовательно элюируют смесями этанола с хлороформом, содержащим 0,5, 10, 15, .20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 9,0 об.% этанола, а затем этанолом. Объем фракции .каждого сос5 мл. Биотест с Chenopodium . rubruili обнаруживает активные вещества во фракции 3 вес сухого вещества в ней, 1,53 г.

o Активную фракцию хроматографируют на незакрепленном слое силикагеля КСК (100-150 меш) толщиной 5 мм на пласт.инках 20-20 см порциями по 0,25 г. Каждую пластинку разделяют

5 «а 5 paBHtix по величине Rf зон, одноименные зоны объединяют и элюируют смесью метанола с хлороформом (1:1), а затем метанол. Элюаты упаривают. Биотест обнаруживает активное вещество в элюате зоны с

0 R 0,2-0,4. Вес сухого вещества в ЭТОМ элюате 0,37 г, т.е. в 600 раз .меньше, чем вес взятых в опыт листьев.

i; СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ ГОРМОНОВ ЦВЕТЕНИЯ РАСТЕНИЙ КОРОТКОДНЁШЫХ ВИДОВ С применением спиртовой-экстра1кции из лиофилизированных листьев цветущих растений, о т л ичаю.щий с я тем, что, с целью получения препаратов высокой активкости,, экстракцию осуществляют кипящим этанолом или другими полярными растворителями при 50-70 С с последующим упариванием полученного экстракта, растворением остатка в метаноле, отделением выпавшего после добавления воды хлорофилл-липидного осадка, упариванием маточного раствора , перерастворением осадка в метаноле, осаждением гликозиЛЬв, путем добавления хлороформа или других полигалоидированных углеводородов, упариванием надосадочной жидкости и дальнейшей хроматографической очисткой целевого продукта.. 2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что хроматографическую очистку осуществляют на колонках с силикагелем КСК, которые элнжруют хлороформом, содержащим увеличивающееся количество этанола, при этом целевой продукт содержит- ся во фракции, элюируемой смесью, (П содержащей 10 об. % этанола. 3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что целевой продукт дополнительно очищают методом тонкослойной хроматографии на силикагеле о КСК в системе хлороформ-метанол, содержащей 8 об.% метанола, концентрируя его в зоне с R 0,2-0,4. :о эо DO 4 :А9