Способ получения флавоноидов Советский патент 1978 года по МПК A61K35/78 

хлористом углероде флавоноиоы не- претерпевают никакого термического разложения. Размолотые семена или обезжиренная семенная кожура в соотношении к обогащевн ной семенной кожуре из расчета 1:0,5-2 г/объем, в случае размолотых семян 1О:0,5-2 г/объем, смешивают с раство рителем и затем при комнатной температ ре выдерживают 5-15 ч. За это время лекарственное растение претерпевает изменения: сначала оно вспенивается, затем становится коричневым, набухарт и под действием полярного растворителя приобретает вид стекловидной смолы Экстракцию осуществляют при комнатной температуре, например, путем перколяции или экстракции с обратным холодильником в пространстве над жидкостью. Если осуществляют перколяцию при комнатной темпера туре, на вес переведенного в растворимую форму материала применяют рассчитанное четырехкратное количество растворителя. Если экстракцию осуществляют в пространстве над жидкостью и в точке кипения, то весовое соотношение материала и растворителя составляет 1:1, При перколяции лекарственного растения при комнатной температуре применяют этил ацетат. Если к перколянту прибавляют 2- 4%нный водный раствор хлористого натрия, то образуется двухфазная тройная система растворителей (этилацетат-формамид - раствор хлористого натрия, объемное соотношение 50:25:25). Для экстракции применякур любой известный экстрактор жидкость жидкость. После частичного испарения этил ацетатной фазы светло-желтого цвета фла- воноиды непрерывно, переносят в значительно насыщенный С а С Е 2 этиленгликоль, причем при энергичном перемешивании .верх .няя фаза непрерывно насыщается неполярным углеводородом, предпочтительно петролейным эфиром. В верхней фазе скапливаются остатки жирного масла, хлорофилла и желтых красителей, в нижней фазе - флавон иоы. Нижнюю (этиленгликолевую) фазу при постоянном перемещивании диспергируют в воде (1:5 - tstO) по объему. Экстракт осаждают в виде тонкого желтого порошка, который хорошо отфильтровывается. Находящаяся сверху жидкость прозрачная. Выход составляет в зависимости от качества лекарственного растения 1-4%, т.пл. 15О160°С. Если для экстракции до истощения применяют ацетон или матанол и экстракцию осуществляют в пространстве над жидкостью при кипении, растворителя требуется меньше, затраты времени меньше, так, например, при использовании ацетона в соотнснлении 1:0,5-1:1 экстракцию осуществляют в течение 2-4 ч. Флавоноидные компоненты распределяют между двумя растворителями. Распределение осуществляют путем фракционированной экстракции в системе из этилацетата, сильно нолярного растворителя и водного раствора хлористого натрия, В качестве системы экстракции предпочтительно применяют смесь из этилацетата, формамида и 2%-ного водного раствора хлористого натрия в объемном соотношении 60:25:15. Отдельные компоненты получают в чистом виде, их физические константы совпадают с указанными в литературе. Компоненты можно отделять друг от друга при помощи колоночной хроматографии. В качестве носителя применяют силикагель, в качестве неподвижной фазы - сильно полярный растворитель и а качестве подвижной фазы - элюотропный ряд,-который состоит из приготовленных с помощью хлороформа, н-бутилацетата и этилацетата смесей растворителей различного состава. Для получения чистого силидиацина в качестве исходного вещества применяют семена SJEjbum ebuffteuw, осажденный в воде сырой продукт кристаллизуют из неболыыо-. го количества метанола. Для получения чистого силимарина в качестве исхойного вещества используют семена вариантов SiEyЪит тагШ«ит(растрропщи пятнистой), цветущие лиловым или белым цветом. Осажденный в воде сырой продукт кристаллизуют из небольшого количества метанола и при желании кристаллизуют из смеси ацетонметанол. Пр.имер 1. 6 кг тонко размолотых семян $,ebiirTteuni (26% масла, 3% флавона) суспендируют в емкости с четыреххлсеристым углеродом. Через несколько минут нижнюю, состоящую из содержащих масло и крахмал частиц семян осажденную фазу переводят в другую емкость для перегонки. Емкость для перегонки заполняют растворителем благодаря этому устанавливается объемное соотношение между ржаво-коричневого цвета осажденной фазой и растворителем, равное 1:3. Растворитель нагревают и поддерживают при слабом к-иПении ()f благодаря этому, достигается эффект смеше ния. Путем регулирования нагрева емкости для перегонки устанавливают скорость циркуляции системы 7 кг С С 2 на 1 кг семенного материала в час. После пятичасовой экстракции, когда фаза растворителя под семенной -кожурой осветляется, процесс считают законченным. Твердые фазы отфильтровывают и высушивают. Четыреххлористый углерод путем отгонки освобождшот от жирного масла и таким образом регене- рируют. Получают слеауюшие прод ;кты: обогащенная семенная кожура 3,5 кг (58,5%), флавон 5,5%, крахмал 0,94 кг (15,8%), не представляющий ценности фла- вон 0,7%, жирное масло 1,54 кг (25,7%), 3,5 кг высушенной семен.ной кожуры медленно гомогенизируют с формамидом в соотношении 1:1 в течение 15 мин и выдерживают в течение 15 ч. Полученную коричневого цвета набухщую массу помещают в устройство для перколяции с 24 л этилацетат, быстро выпускают и темно-красный прецварителы1ый экстракт отводят для гомогенизирования. Затем первый перкрлят отворят со скооостыо 2 л/ч для дальнейцей пе реработки. Затем с 14 л перколята, полу- ченных при продолжении процесса, начинают экстралмию следующей загрузки лекарственных растений (первый перколят второй загрузки). Из лекарственных. растений этилацетат регенерируют с помощью водяного пара. Первый перколят поступает в квазинепрерывный экстрактор (смеситель-отстойник). Экстрактор работает по принципу про тивотока. Первый перколят диспергируют в 3%нном водном растворе хлористого натрия. Количество флавонов в солевой жидкости затем экстрагируется в последующей второй стадии с помощью чистого этилацетата. При непрерывном процессе применяют 0,6 л раствора соли на 1 л перколята, при последующей экстракции - О,4 л этилацетата на 1 л перколята, время обработки 3,. Коричнево-красный солевой рафинат отбрасывают. Светло-желтый, не содермшщий формамид раствор этилацетата выпаривают в вакууме. Получают 250 г светло-коричневого цвета аморфного остатка. Остаток растворяют в 1 л 10%-ного метанолыюго раствора CaC&j и суспендируют в петролейном эфире до очистки жира. Нижнюю содержащую фазу при постоянном перемешивании в тече- ние 1 ч прикапывают в флавоноидная cMect) осаждается в виде осадка желтого цвета. Находящаяся сверху жидкость прозрачная и светлая. (Остаток отсасывают в вакууме, промывают путем суспендирования в воде и затем лерерабатывают. Пощсчают 130 г i(no отнощеншр к весу приме-, ненной семенной кожуры 2,2%) сырого продукта светло-желтого цвета, т.пл. 15518О С. , 13t) г содержащего 60% силидианина сы рого продукта растворяют в. 384 мл метанола. Раствор насыщают путем прикапывания 15 мл воды, затравливают: кристаллом и затем оставляют на 2-3 дня в холодильнике. Кристаллический продукт отфилкгровывают , промывают неболыивм количеством метанола и высушивают. Получают 39,2 г слабо окращенного продукта с т.пл. 165-171 С. Этот продукт pacTBopsaoT в 196 мл кипящего ацетона, раствор филыгруют и насыщают 98 мл метанола. Получают кристаллический метилат (т.пл. 172 176 С). 34 г продукта белого цвета растворяют при 50 С в смеси из 340 мл 10%-ного метанольвого раствора С.и 24О мл перегнанного формамида, раствор фил1Лруют и при перемешивании прикапывают к 6ООО мл дистиллированной воды. После Выдержки в течение 15 ч при 4 С вьщеляется снлидианин-гидрат в форме хлопь&видных игл. Выход 31,6 г, т.пл.189-191 С, 13 +2.14°(С - 0,25, 95%-«ый этанол). Продукт по сравнению с подлинным образцом не показываетникакого понижения точки плавления. Пример 2. 3кг тонко размолотых, семян 5, ПКги (масло 10,6%, флавон 2,3%) гомогенизируют в .зОи мл диметилформамиаа в течение нескольких минут и выдерживают в течение 15 ч. Переведенное в растворимую форму сырье заливают 3 л ацетона, кипял1ят в течение 4 ч. Желто-коричневого цвета двухфазный. экстракт вы- на водяной бане при температуре 50 С при пониженном давлении до тех пор, пока не останется никакого растворителя. Верхняя фаза полученной двухфазной эмульсии состоит из ЗО2 г масла, нижняя фаза из ЗЗО мл раствора флавона в диметилфор- мамиде. Нижнюю фазу отделяют и перемешивают со смесью йа 400 мл этилацетата и ЗЗО мл 2%-иого водного раствора хлористого натрия. Нижнюю, красного цвета водную фазу, которая содержит NoiC ,еще два раза встряхивают кажоьтй раз по, 20Омл этилацетата, объединенные, составляющие примерно 900 мл фазы встряхивают с 3x150: мл водного раствора хлористого натрия, т.е. диспергируют -(распределяют флавоноиды. , 9ОО мл светло-желтого этилацетатного экстракта выпаривают в вакууме при 50 С до 1/3 его объема. Концентрированный экстракт гомогенизируют с. 75 мл этиленгликоля, содержащего 5% СаСЕ. при энергичном механическом перемешивании и наеышают во время перемешивания путем прикапывания ЗОО мл петро- лейного эфира (т. кип. 30-40 С). Содержание остаточного масла в верхней фазе поставляет 5,5%. Полученные 1ОО мл этиленгликолевой фазы красно-коричневого цвета затем выливают в 1000 мл дистиллированной воды. Образовавшийся осадок хорсвио отстаивается, находящаяся над ним жидкость прозрачная. Отфильтрованный и промытый воаой осадок высушивают & вакууме. Выход 57,3 г (1,9%), т. пл. 153-159 с, 40 г сырого продукта, содержащего 50% силимарина, измельчают до состояния тонкого порошка и путем быстрого внесения растворяют в 70 мл метанола. Самопроизвольно кристаллизующийся, без фнлыгрования, красно-коричневый сироп выдерживают 4-5 дней при+4 С. Кристаллы отделяют на пентрифуге, суспендируют 2--3 раза в небольшом количестве метанола, отфилыгровывают и сушат в вакууме. Получают 14 г слабо тжрашенного продукта, который плабит ся при 158-162°С, Продукт перекристаллизуют путем растворенна при нагревании в 300 мл смеси ацетон - метанол пРИ cooiw .ношении 1:1 и выпаривании раствора до половины его объема. Получают 9,9 г ОДОдукта белого цвета. Т, пл. 163-168 С, Ij +10,8(0-0,25, этанол). Из маточного раствора путем упаривания получают далжейшую фракцию. Предлагаемый способ обеспечивает получение продукта высокой степени чистоты. Формула изобретения Способ получения Bj aoHaos из семян. растения расторопши(3«2уЬи|П таРШнит,й4Еуbum eburneu wCosselbutr) путем обработки размельченных обезжиренных семян системой органических растворителей, диспергирования с двухфазной не смешивающейся друг с другом системой растворителей, упаривания и осаждения, отличающий- с я тем, что„ с целью повышения чистоты целевого продукта, сырье кипятят с четыреххлористым углеродом, затем обрабатывают полярным растворителем, например формамидом, смесь экстрагируют ацетоном или этилацетатом с последующим добавлением водного раствора хлорида натрия, из образовавшейся при этом двухфазной системы растворителей осаждают в воде целевой продукт после повторной экстракции атиленгликолем, содержащим хлорид кальция, и в случае необходимости хроматографируют на колонке. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1,Патент Германи.и № 2017789 , кл. 30 h 2/ОЗ, 194О,,