Способ диагностики вирусного гепатита Советский патент 1983 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике вирусного гепатита.

Известен способ диагностики вирусного гепатита путем выявления вирусных а«тигенов в сыворотке крови с помощью реакции преципитации В геле, который заключается в том, что в агаре, приготовленном на буферном растворе, делают лунки центргшьную и периферические. В централ ную лунку помещают специфическую антисыворотку к HBSAg, а в- периферические лунки вносят исследуемые сыворотки больных и стандартны антиген . После заполнения лунок пластинки с гелем инкубируют во влажной камере .при комнатной температуре в течение 7 дн. Результаты учитываются по мере появления линий преципитации в первые три дня, оДнако более слабые линии могут быть вы -даны только по завершений семидневной инкубации ij .

Недостатками: этого метода являются длительное время инкубации, а так5ке обязательное наличие высокоспецифической тест-системы.

Известен также иммуноауторадиографический метод диагностики вирусного гепатита, который заключается в выявлении невидимого преципитата, образованного 5н-антигеном и кроличьими антителами с помощью меченой S ) радиоактивной антисыЕоротки к кроличьему у -глобулину Основные этапы иммунорадиографии (ИР) состоят в следующем. На предметное стекло наливают агар Дифко на буфере Prince. В остывшем агаре делают центральные и периферические лунки. В центрсШьные лунки вносят сыворотку, содержащую антитела к 5Н антигену, а в периферические лункизакапывают сыворотки больных и различные разведения 5Н-аИтигена из тест-системы. Затем стекла инкубирую во влажной камере 48-72 ч и отмывают в течение суток. После отмьшания агаровые пластинки, снятые со стекол, погружают на 1 ч в радиоактивные, ан|Титела и оставляют на ночь во влажной кЗмере. После отмывания в течение суток пластинки вновь перенос ят на стекла, фиксируют и высушивают.На высушенный агар накладывают флуорографическую пленку, заворачивают в темную бумагу и хранят в темной комнате 1-7 сут. Невидимый радиоактивный преципитат дает изображение на пленке 2 .

Недостатками этого способа являются чрезйыч айно долгая продолжительность реакции 10 - 14 сут, ее многоэтапность, а также необходимость применения специального оборудования и помещения для работы и

хранения радиоактивных меченных сывороток.

Наиболее близким к изобретению является способ диагностики вирусного гепатита путем выявления сенсибилизированных лимфоцитов с помощью реакции бласттрансформации лимфоцитов периферической крови З .

Недостатками известного метода являются большое количество крови (8 мл), необходимое для реакции и забираемое из вены, большая продолжительность (4 сут) и многоэтапность методики необходимость использования дефицитных реактивов, а также проведение работы только высококвалифицированным врачом-лаборантом.

Целью изобретения является ускорение и снижениетравматичности способа.

Поставленная цель достигается . тем, что согласно способу диагностики вирусного гепатита путем исследования сенсибилизированных лимфоцитов, кровь для исследования берут из пальца, ставят реакцию торможения миграции лейкоцитов с фетальной сывороткой, помещают пробу в капилляры, центрифугируют и по изменению расстояния миграции лейкоцитов, по сравнению с контролем диагносцируют вирусный гепатит,

. Способ осуществляют следующим образом.

У пациента берут кровь из пальца, ставят реакцию торможения миграции лейкоцитов с фетальной сывороткой на двух преда етных стеклах, опытном и контрольном. В контрольную пробу вносят 0,04 мл среды 199, в опытную пробу вносят 0,02 мл среды 199 и 0,02 мм поверхностного антигена гепатита В () с конечным титром 1:4. Смесь и контрольной и., опытной проб набирают раздельно в пятиканальные капилляры, нижний конец .капилляра заливают цементом фосфат и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин Затем запаивают открытые концы капилляров и инкубируют в течение 1824 ч при 18 - . Расстояние миграции определяют под микроскопом, учитывая пять значений по числу каналов капилляра. Вычисляют индекс миграции путем деления средней величины миграции в опыте на среднюю величину миграции в контроле. По величине индекса миграции диагностируют вирусный гепатит.

Проведено исследование на 30 больных. Установлено, что индекс миграции соответствующий вирусному гепатиту равен 0,8гО,2.

Способ поясняется следующими примерами .

П р яме р. Больной.Б-н Евгений, 8 лет, принят в состоянии средней тяжести на пятый день болезни, на шестой день болезни была взята кро на реакцию торможения миграции лейк цитов с митогеном HBSAg. Для .этого из пальца берут 0,2 мл крови в сили конированную пробирку с гепарином. Гепарин добавляют в пробирку из рас чета 2 ед. на О,1 мл.крови. Из взятой, крови отбирают по 0,06 мл на ка дое из двух предметных стекол: опыт ное и контрольное. В обе пробы добавляют по 0,015 мл феталоной телячьей сыворотки. В контрольную, пробу вносят также 0,04 МП среда 199. В опьггную пробу вносят 0,02 МП среда 199 и 0,02 мл поверхностного антигена гепатита B(HBSAg) q. конечяым . титром 1.S4. смесь из контрольной и опытной проб набирают раздельно в пятиканальные капилляры с плоскопараллельными стенками длиной 4,5 с оставляя незаполненным на; 0,5 см верхней конец копилляра. Нижний конец капилляра эапа 1вают цементе фосфат. Для затвердения цемента фосфат капилляры оставляют в возвышенном положении под углом 10 открытым концом кверху на IS мин. Затем капилляры завертывают в марлю (отдельно контрольный и опытный) и центрифугируют 5 мин при 1000 об/лш (После центрифугирования открытый конец капилляра также закрывают цементом фосфат. Капилляры помещают в чашКу Петри бывшим открытым концом вверх под углом 10°, накрывают крышкой, выдерживают при 20 22®С от 18 - 24 ч. Учитывают миграцию лейкоцитов в опытной и контроль ной пробах с помощью микроскопа, используя окуляр X 7,5 с делениями и объектив X 8. Среднюю величину миграции вычисляют .из пяти- значений соответственно числу каналов кацилляра. У данного больного значения, миграции из канала опытного капилля ра следующие: 1,0; 1,0; 0:5 О,5; 0,5 делений окуляра, среднее значение их равно 0,7. Значения миграции из канашов контрольного капилляра следующие 2,0 2,0; 2,0; 1,5,- 1,5 со средним значением 1,8 делений ок ляра. Следовательно индекс миграции (ИМ) равен SL г 0,38 ед. Учитывая, что показатели им 0,8 - 0,2 ед свидетельствуют о торможении миграции лейкоцитов, наличие у данного больного ИМ, равного 0,38 ед, означает резкое торможение миграции лейкоцит.ов под влиянием HBSAtf, свидетельст вующее о наличии у больного вирусно го гепатита. В связи с симптомами выраженной интоксикации, сохранявшимися, в тече ние двух недель больному проводи.лась дезинтоксикационная терапия, в том числе вливания гемодеза, 10%ной глюкозы, препараты АТФ, кокарбокс11лаэа, усиленная спазмолитическая и желчегонная терапия. Обратная динамика болезни отмечалась на 24 день болезни. Значительно улучшилось с๫очувствие, начала уменьшаться желтуха, исчезли петехиальные элементы. Домой выписан в удовлетворительнсял состоянии на 42 день болезни по настоянию родителей. При выписке сохранялась легкая иктеричность кожи и. склер,печень пальпировалась на 1,5 см. ниже рёберной дуги. В биохимическом анализе крови билирубин общий 3 мг %, билирубин свободный 2,25 мг %, билирубин связанный 0,75 мг %, активность фруктозомонофосфат-альдолазы снизилась до 4 ед., а аланинаминотрансферазы до 18 ед. Таким образом, у ребенка с типичной клиникой вирусного гепатита В, протекавшего в среднетяжелой форме, не был обнаружен в крови HBSAg, однако на седьмой день болезни была выявлена специфическая сенсибилизация к НВЗАЛ что позволило точно диагностировать вирусный гепатит в. ранние СРОКИ заболевания, обеспечить госпитализацию в палату по профилю (гепатит В) и назначить более энергичную дезинтоксикационную терапию. . Пример 2. Больной К-в Станислав, 4 лет. В клинику поступил на шестой день болезни и.второй день желтухи, в состоянии средней тяжести. Иктеричность была отчетливо выражена, печень чувствительная .при пайь-пации, выступала на 2 смиз подреберья. В биохимическом анализе крови на седьмой день болезни: билирубин общий 3,24 мг %, билирубин свободный .1,37 мг %, билирубин связанный . 1,87 мг %, активность фруктозомонофосфат-альдолазы была 10 ед., аланинаминотрансферазы 32 ед., тимоловая проба 30 ед. При повторных определениях доступными методами HBSAtf в крови не найден. На седьмой день болезни была проведена реакция торможения миграции лейкоцитов с HBSAg в качестве антигена. Миграция в каналах контрольного капилляра составила 5,0; 5,0; 5,0j 4,5; 4,0 со средним значением 4,7 делений окуляра. Миграция в опыте равнялась 1,0; 1,0; 1,.0; 1,0; 1,0; 1,0 со средней величиной миграции 1,0 делений окуляра. Следовательно, ИМ оказался равным -Ii2.30,21 ед. Этот показатель ИМ свидетельствовал о высокой степени сенсибилизации организма больного к поверхностному антигену (HBSAg) гепатита В. Таким образом, у ребенка при отсутствии в крови (раннее исчезновение) НВ5А была выявлена сенсибилизация к данному антигену, что позволило уточнить вид гепатита 5 JL061 (И постсшить окончательный диагноз: вирусный гепатит В. Ребенок был госпитализирован в палату по профилю гепатит В), Ребенок был выписан домой в удовлетворительном состоянии на 29 день заболевания.. При выписке5 сохранялась субиктеричность склер, печень оставалась еще уплотненной и выступала из подреберья, на 0,5 см. Положительный эффект предлагаемо-Ю го способа диагностики вирусного гепатита заключается в ускорении диагностики вирусного гепатита, в 99 возможности проведения дифференциальной диагностики вирусного гепатита В и гепатита А и, следовательно, в уменьшении риска перекрестного инфирирования вследствие ранней закладки больных в палаты по профилю (гепетит А и гепатит В) на основе ранней диагностики и дифференциальной диагностики двух видов вирусного гепатита, в связи с чем более раннем назначении адекватной терапии, в- осуцествлении этиологической диагностики хронического гепатита в доступности и простоте методики.

СПОаЭБ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНО ГО ГЕПАТИТДпутем исследования сенсибилизированных лимфоцитов, о т л ич a ю-щ и и-с я т&л, что, с целью ускоЕ ения и снижения травматичности способа, кровь для исследования берут из пальца, ставят реакцию тбрможения миграции лейкоцитов с фетальной сывороткой, псжешают пробу в капил,дяры, центрифугируют и по изменению расстояния миграции лeйкoцитов по сравнению с контролем диагносцируют вирусный гепатит. (Л с | со